주의 1. 이보고서는농림축산식품부에서시행한농생명산업기술개발사업의연구보고서입니다. 2. 이보고서내용을발표하는때에는반드시농림축산식품부에서시행한농생명산업기술개 발사업의연구결과임을밝혀야합니다. 3. 국가과학기술기밀유지에필요한내용은대외적으로발표또는공개하여서는아니됩니다.

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1 발간등록번호 배발생세포공정배양및토양정밀양구를통한 튤립개화구대량생산기술개발 Mass production of tulip bulbs through the embryogenic cell technologies and refined soil cultivation 단국대학교 목포대학교 농림축산식품부

2 주의 1. 이보고서는농림축산식품부에서시행한농생명산업기술개발사업의연구보고서입니다. 2. 이보고서내용을발표하는때에는반드시농림축산식품부에서시행한농생명산업기술개 발사업의연구결과임을밝혀야합니다. 3. 국가과학기술기밀유지에필요한내용은대외적으로발표또는공개하여서는아니됩니다.

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5 보고서요약서 과제고유번호 SB010 해당단계 연구기간 ~ 단계구분 (5)/ (5) 중사업명 연구사업명 세부사업명 연구과제명 대과제명 세부과제명 배발생세포공정배양및토양정밀양구를통한튤립개화구대량생산기술개발 해당단계 참여 연구원수 총 : 7 명 내부 : 명 외부 : 명 해당단계 연구개발비 정부 :100,000 천원 민간 :25,000 천원 계 :125,000 천원 연구책임자 총연구기간 총 : 명 정부 :500,000 천원 참여 내부 : 명 총연구개발비 민간 :125,000 천원 연구원수 외부 : 명 계 :625,000 천원 연구기관명및 소속부서명 단국대학교천안캠퍼스산학협력단 목포대학교산학협력단 참여기업명 한국화훼구근산업영농조합법인 위탁연구 연구기관명 : 연구책임자 : 요약 ( 연구개발성과를중심으로개조식으로작성하되, 500 자이내 로작성합니다 ) 보고서면수 - 3 -

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8 Purpose& Contents Results Expected Contribution D-02 In vitro bulblet production methods were developed using somatic embryogenic cell culture technologies for major tulip cultivars. Embryogenic cell lines were induced and proliferated in small bioreactors, and then regenerated and cultured to form bulblets. To optimize tulip bulb production practices in Chonnam province, soil characteristics of the region were investigated. And cultivation formats for tulip bulb production were established by investigating the most effective irrigation, fertilization and cultivation protocols. Tulip bulbs multiply 2.5 times a year, the lowest rate among cultivation crops. Vegetative methods are not available and tissue culture method is hardly practiced due to its recalcitrant propagation properties. We developed in vitro techniques of embryogenic cell induction and multiplication for many cultivars of tulip. And the methods were optimized for large scale cultures using bioreactors and bulblets were produced following regeneration on solid medium. Tulip cultivations in soil were also optimized for bulb production in Chonnam province. Development of embryogenic cell culture technology for tulip bulblet production. - Embryogenic cells were induced in 15 commercial cultivars of tulip. - The cell lines were proliferated in 5-L bioreactors. - Browning problems during the liquid cultures were overcome by optimizing the cultures. - Embryogenic cells were transferred to solid media and bulblets were formed through embryogenesis. - The bulblet production procedures were optimized for mass production of major tulip cultivars. Establishment of tulip soil cultivation protocols for flower bulb production - Physicochemical characteristics of soils in Chonnam province were characterized. - Bulb planting depth, space and period were optimized. - Fertilization practices for bulb enlargement - Irrigation practices for each step of tulip cultivation Cell culture technologies would produce virus-free bulblets of tulips which were cultivated in greenhouse and soil to produce flower bulbs either in domestic or foreign area such as Da lat, Vietnam. Tulip cultivation protocols were established in Chonnam province and high quality bulbs can be produced for farmers at lower prices. The knowhow is being transferred to a corporate for industrialization. This will create new opportunities for the domestic and global utilization of tulip bulbs. Keywords Tulip embryogenesis cell culture bulblet flower bulb - 6 -

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11 D-03 따라성패가좌우된다고하겠음

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28 D-05 Cultivars Plant Growth Regulators Total no of explant Brown -ing Death Callus Total number of callus Callus -ing rate (%) Dynasty 2,4-D BA Golden apeldon Golden parade Hollandia Ile de france Louvre Mark Voort Callus weight (mg) 2,4-D BA Picloram BA Dicamba BA D Picloram Dicamba BA kenetin ip BA kenetin ip BA kenetin ip ,4-D BA Picroram BA Dicamba BA D Picloram Dicamba BA kenetin ip BA kenetin ip BA kenetin ip ,4-D BA Picroram BA Picroram BA ,4-D BA

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41 D-05 튤립구근 RT-PCR 진단 LSV * CMV TBV TRV ArMV LMoV 전자현미경 1 음성음성음성음성음성음성바이러스입자없음 2 음성음성음성음성음성음성바이러스입자없음

42 D-05 * LSV: Lily symptomless virus( 백합무병징바이러스 ) CMV: Cucumber mosaic virus( 오이모자이크바이러스 ) TBV: Tulip breaking virus( 튤립브레이킹바이러스 ) TRV: Tobacco rattle virus( 담배얼룩바이러스 ) ArMV: Arabis mosaic virus( 아라비스모자이크바이러스 )-검역관리바이러스 LMoV: Lily mottle virus( 백합무병징바이러스 )

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118 D-05 시료품종 : 튤립구근 Ile de France 와 Come back 품종각 3점 의뢰내용 : 국립원예특작과학원원예특작환경과에튤립구근의바이러스진단을의뢰 2) 진단결과 및 RT-PCR을이용한유전자진단결과의뢰한튤립 2품종각각 3점에서바이러스가검출되지않았음 < 튤립바이러스진단결과 > 튤립구근 RT-PCR 진단 LSV * CMV TBV TRV ArMV LMoV 전자현미경 1 음성음성음성음성음성음성바이러스입자없음 2 음성음성음성음성음성음성바이러스입자없음 * LSV: Lily symptomless virus( 백합무병징바이러스 ) CMV: Cucumber mosaic virus( 오이모자이크바이러스 ) TBV: Tulip breaking virus( 튤립브레이킹바이러스 ) TRV: Tobacco rattle virus( 담배얼룩바이러스 ) ArMV: Arabis mosaic virus( 아라비스모자이크바이러스 )-검역관리바이러스 LMoV: Lily mottle virus( 백합무병징바이러스 )

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123 D-08 코드번호 D-09 코드번호 D-10 구입기관연구시설 / 연구장비명 규격 ( 모델명 ) 수량 구입연월일 구입가격 ( 천원 ) 구입처 ( 전화번호 ) 비고 ( 설치장소 ) NTIS 장비 등록번호 코드번호 D

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126 Al-Rousan, W.M.M., R.Y. Ajo, M.M. Nagor, T. Osaili, and N.M. Bani-Hani Impact of different irrigation levels and harvesting periods on the quantity and quality of Navel oranges (Citrus sinensis) and fruit juice. J. Food Agric. Environ. 10: Armstrong, H Hydroponic tulips at second attempt. FlowerTECH 5(1):8-9. Benschop M, Van der Valk GGM The effect of defoliation on bulb production of tulip cultivar 'Apeldoorn'. Scientia Horticulturae 24: Benschop M, Van der Valk GGM The effect of defoliation on bulb production of tulip cultivar 'Apeldoorn'. Scientia Horticulturae 24: Bradford, K.J. and S.F. Yang Physiological responses of plants to waterlogging. HortScience 16: Chae SC Effect of planting density, growing medium and nutrient solution strength on growth and development of lily in box culture. Flower Res J 16: Cho DH, Heo K Effect of different fertilizer application on the dry matter production and leaf photosynthetic of yacon (Polymnia sonchifolia). Korean J Plant Res 9: Choi, J.K Special culture of flower. Hwahaksa, Seoul, Korea. Choi, S.T., W.Y. Jung, H.G. Ahn, and Y.D. Chang Effects of duration of cold treatment and planting depth on growth and flowering of Lilium spp. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 39: Choi, S.T., Y.D. Chang, I.H. Park, and H.G. Ahn Effect of planting depth and existence of tunic on growth and flowering in freesia forcing. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 37: Chung SH, Kim KJ, Suh DH, Lee KS, Choi BS (1993) Effect of organic fertilizers on growth and yield in Paeonia lactiflora. Research Report of Gyeongbuk RDA. Taegu, Korea. p Chung SH, Kim KJ, Suh DH, Lee KS, Choi BS Effect of organic fertilizers on growth and yield in Paeonia lactiflora. Research Report of Gyeongbuk RDA. Taegu, Korea. p Cui, N., T. Du, F. Li, L. Tong, and S. Kang Response of vegetative growth and fruit development to regulated deficit irrigation at different growth stages of pear-jujube tree. Agric. Water Manage. 96: De Souza, C.R., J.P. Maroc, T. Santos, M.L. Rodrigues, C. Lopes, J.S. Pereira, and M.M. Chaves Control of stomatal aperture and carbon uptake by deficit irrigation in two grapevine cultivars. Agric. Ecosys. Environ. 106: Ennahli, S. and H.J. Earl Physiological limitations to photosynthetic carbon assimilation in cotton under water stress. Crop Sci. 45: D

127 Goo DH Effect of nutriculture and soil culture on growth and bulb enlargement of the hardening lily bulblets produced by tissue culture. Flower Res J 14: Grassi, G. and F. Magnani Stomatal, mesophyll conductance and biochemical limitations to photosynthesis as affected by drought and leaf ontogeny in ash and oak trees. Plant Cell Environ. 28: growth and development of lily in box culture. Flower Res J 16: Gupta RB, Sharma JR, Panwar RD Growth, flowering and corm production of gladiolus as affected by application of nitrogen, phosphorus and potassium. Haryana J Hortic Sci 39: Hur BK, Choung NH, Kim ZH, Oh OJ, Son SG, Kang DY Effects of various composts and NPK fertilizers application to the yacon (Polymnia sonchifolia Poepp) growth. Korean J Medicinal Crop Sci 15: Hur, B.K., Z.H. Kim, and O.J. Oh Effect of soil texture and NPK fertilizer application level on growth and yield of Ostericum koreanum. J. Agriculture & Life Science 44(2):1-6. Jung, S.J., J. Moon, T.S. Kim, G.S. Hyeon, and C.S. Park Available soil water for textural class of Korean soil. J. Korean Soc. Soil Sci. Fert. 23: Jung, Y.T Soil texture. Soil & Fertilizer 12: Kawase, M Anatomical and morphological adaptation of plants to waterlogging. HortScience 16: Kim KW, Lee JW, Joo C.H. (1987) Proposal studies on bulb production of tulip in Korea. J Kor Soc Hort Sci 28: Kim MS, Choi JG, Kim HK, Chung BJ, Bang GP, Kim JK, Park MS, Ahn YS, Kim YG, Park CB Effect of organic compost on growth and yield in Scutellaria baicalensis. Korean J Medical Crop Sci 18: Kim SM, Lee CY, Kim YC, Choi IS, Min KK, Seong JD (2007) Effects of organic fertilizers on growth and yield in Liriope platyphylla Wang et Tang. Korean J Medical Crop Sci 15: Kim, G.N. and S.H. Han Effects on growth, photosynthesis and pigment contents of Liriodendron tulipifera under elevated temperature and drought. Kor. J. Agri. Forest Meteoro. 17: Kim, H.Y Effects of bulb size and planting time on the growth and flowering of Muscari armeniacum 'Early Giant'. Flower Res. J. 14(1):7-10. Kim, J.W. and J.H. Kim Comparison of adjustments to drought stress among seedlings of several oak species. J. Plant Biol. 37: Kim, J.Y Efficient irrigation practice through soil moisture sensor based automated irrigation system in ornamental plant production. Flower Res. J. 22: Kim, K.W., J.W. Lee, and C.H. Joo Proposal studies on bulb production of tulip in Korea Attaching importance to investigation of cultural conditions and mulching effect. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 28: D

128 King M Gardening with tulips. Timber Press, Portland, USA. p.27. Ko JY, Choi KJ, Hong D, Noh HS Effect of different bulb size and culture altitude for bulb enlargement of Lilium Oriental hybrid. Flower Res J 20: Koocheki, A., S.M. Seyyedi, and M.J. Eyni Irrigation levels and dense planting affect flower yield and phosphorus concentration of saffron corms under semi-arid region of Mashhad, Northeast Iran. Sci. Hortic. 180: Lee JS, Choi MJ Effect of boron drenching on growth and development of tulip (Tulipa gesneriana cv. Apeldoorn). J Kor Soc Hort Sci 39: Lee, B.K. and Y.K. Yoo Bulb growth by treatment of soil texture, compost, and lime fertilizer in Tulipa gesneriana cultivars. J. Korean Soc. People Plants Environ. 13(6): Lee, J.S., M.J. Choi, J.S. Jung, and Y.S. Lee Physico-chemical properties of the greenhouse soil related to physiological disorder of tulip. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 42: Lee, Y.H., J.S. Cho, Y.J. Choi, G.W. Song, M.K. Kim, and H.D. Yun Characteristics of continuous culture and soil texture and their effect on growth and yield of Platycodon grandiflorus. Korean J. Environmental Agriculture 19: Menzel, C.M., J.H. Oosthuizen, D.J. Roc, and V.J. Doogan Water deficit at anthesis reduce CO 2 assimilation and yield of lychee (Litchi chinensis Sonn.) trees. Tree Physiol. 15: Nam, S.S., B.W. Kim, G.C. Chung, K.J. Choi, and I.H. Choi Effect of irrigation level on sap flow, relative water content, and photosynthetic rate during development stage of garlic plants. Hort. Environ. Biotechnol. 47: Nam, S.S., I.H. Choi, S.K. Bae, and J.K. Bang Effect of irrigation level on plant growth and bulb yield during bulb development stage of garlic plants. Kor. J. Hort. Sci. Technol. 25: Park, S.G., D.K. Kang, Y.H. Kim, S.H. Chung, and B.S. Choi Effects of soil texture on tuber characteristics and yield in Dioscorea opposita Thunb. Korean J. Medicinal Crop Sci. 8: Rees AR The growth of bulbs-applied aspects of the physiology of ornamental bulbous crop plants. Academic press, London, p.254. Roh SM, Yeam DY, Kim IJ Native bulb materials in wild and their production for the cultivation as a floriculture crop. J. Kor Soc Hort Sci 20: Ryu, Y.H., S.H. Lee, S.D. Kim, and M. Kokubun Effects of soil moisture content om leaf water potential and photosynthesis in soybean plants. Korean J. Crop Sci. 41: Schenk PC, Rhee HK The globalization of the lily bulb production and breeding in the Netherlands. Flower Res J 15: Seong JD, Park KD, Kwack YH, Kim SM, Kang JH Effects of nitrogen levels and split application ratio on growth and yield in Liriope platyphylla WANG et TANG. Korean J Medicinal Crop Sci 8(1): D

129 Seong, N.S., K.S. Kim, E.H. Soh, and Y.A. Chae Effect of soil textures on growth and saikosaponins content in Bupleurum falcatum L. Korean J. Medicinal Crop Sci. 2: Shao, H.B., L.Y. Chu, M.A. Shao, A.J. Cheruth, and H.M. Mi Higher plant antioxidants and redox signaling under environmental stresses. Comptes Rendus Biologies 331: Shin, K.J., C.Y. Song, J.Y. Moon, E.K. Song, and J.A. Ko Bulblet production of Lilium Asiatic hybrids depends on its discrete parts and scale conditions. Flower Res. J. 24: Sochacki D, Chojnowska E (2005) Quality evaluation of forced tulip flowers depending on bulb production environment and forcing medium. Acta Horticulturae 673: Stern, R.A., M. Meron, A. Naor, R. Wallach, B. Bravdo, and S. Gazit Effect of fall irrigation level in Mauritius and Floridian lychee on soil and plant water status, flowering intensity, and yield. J. Amer. Soc. Hort. Sci. 123: Strojny, Z., P.V. Nelson, and D.H. Willits Pot soil air composition in conditions of high soil moisture and its influence on chrysanthemum growth. Sci. Hort. 73: Vafabakhsh, J., A. Mokhtarian, H. Rahimi, and J. Ahmadian Investigation of correlations between saffron flowering pattern and climatological parameters under different levels of irrigation and planting depth. Acta Hort. 850: Van der Valk GGM, Timmer MJG Plant density in relation to tulip bulb growth. Scientia Horticulturae 2: Wraith, J.M. and C.K. Wright Soil water and root growth. HortScience 33: Yoo YK, Kang SW Effects of cultural medium and fertilizer composition on shoot growth and bulb development of micropropagated Lilium longiflorum 'Georgia' bulblet. J Korean Soc People Plants Environ 8(4): Yoo YK, Roh YS Effect of bulb size and planting distance on shoot and bulb growth in Tulipa gesneriana L. J Korean Soc People Plants Environ 17: Yoo, Y.K Effects of cultivation methods on the microtuber formation and growth in micropropagated plantlet of Zantedeschia spp. 'Florex Gold'. Kor. J. Hort. Sci. Technol. 26: 1-6. Yoo, Y.K. and B.W. Kim Effects of mulching material and planting method on bulb growth in microtuber of Zantedeschia spp. Kor. J. Hort. Sci. Technol. 24(3): Yoo, Y.K. and H.K. Kim Effects of pseudobulb size and planting depth on the growth and flowering in Bletilla striata. J. Kor. Soc. Hort. Sci. 41: Yoo, Y.K. and S.W. Kang Effects of size and planting method on the bulb development of micropropagated bulblet in Lilium longiflorum 'Georgia'. J. Korean Soc. People Plants Environ. 8(4):18-22 Yoo, Y.K. and Y.S. Roh Effect of soil texture and planting depth on shoot and bulb growth in Tulipa gesneriana L. J. Korean Soc. People Plants Environ. 16(3): Yoo, Y.K. and Y.S. Roh Bulb and shoot growth by planting time of bulblet in Tulipa gesneriana. J. Korean Soc. People Plants Environ. 17: D

130 Yoo, Y.K. and Y.S. Roh Effects of pre-planting organic and mineral fertilization on shoot and bulb growth of tulip in sandy loam soil. Flower Res. J. 23: Yoo, Y.K., S.W. Kang, and W.Y. Song Effects of low temperature and planting time on dormancy breaking and growth of bulblet in Lilium longiflorum 'Georgia' regenerated in vitro. J. Korean Soc. People Plants Environ. 7(4): Yu, S.O. and J.H. Bae The effect of fertigation setting point on the growth and fruit quality of sweet pepper (Capsicum annuum L.). J. Bio- Environ. Cont. 13: Yuk, C.S., S.D. Hong, U.J. Kim, and H.C. Jeong Changes of nutrient absorbed by tobacco plant in sandy loam and clay loam. Tobacco Research 10: Zhang, E., F. Wang, X. Pan, Z. Tian, and X. Zhao Antioxisant enzymes and photosynthetic responses to drought stress of three Canna edulis cultivars. Kor. J. Hort. Sci. Technol. 31: D

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농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 : ~ ) 과제의최종보고서로제출합니다 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 (

농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 : ~ ) 과제의최종보고서로제출합니다 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 ( 농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 :2014. 7. 29 ~ 2016. 7. 28.) 과제의최종보고서로제출합니다. 2016. 7. 28. 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 ( 인 ) 협동연구기관명 : 목원대학교산학협력단 ( 대표자 ) 고대식 ( 인 ) 협동연구기관명

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