대한민국약전포럼 Korean Pharmacopoeial Forum Vol.13 No.1 June 2016 목 차 Contents 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전일반시험법개정 ( 안 ) 불용성이물시험법 아미노산시험법 7

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2 대한민국약전포럼 (Korean Pharmacopoeial Forum) 대한민국약전포럼은식품의약품안전처의의약품등안전관리연구개발사업의연 구결과를근거로마련된대한민국약전개정 ( 안 ) 과약전관련정보를국내 외에공 유하고자발행된것입니다. 이포럼은대한민국약전개정 ( 안 ) 의과학적타당성과합리성을높이기위해독자여러분의다양한의견을청취하는것을목적으로하고있으므로언제나독자여러분의의견, 학술논문또는평론을환영합니다. 여러분의다양한의견등은식품의약품안전처의대한민국약전등기준개정 ( 안 ) 에반영되어중앙약사심의위원회자문을거쳐행정예고등의행정절차에따라제 개정됩니다. 따라서이포럼의내용은법적인구속력을갖지않으며, 관련고시및규정의 제 개정에따라변경될수있습니다. 대한민국약전포럼에대한의견, 학술논문, 평론등이있을경우아래식품의약품안전평가원의약품연구과로보내주시기바랍니다. 충청북도청주시흥덕구오송읍오송생명2로 187 오송보건의료행정타운식품의약품안전평가원의료제품연구부의약품연구과 또한, 대한민국약전포럼 Vol. 13, No. 1은식품의약품안전처의연구개발사업관련규정에따라 ( 재 ) 한국보건공정서연구회에기술용역을의뢰하여발행되었으며, 개선사항, 오탈자등이있을경우아래 ( 재 ) 한국보건공정서연구회로알려주시기바랍니다. 서울특별시은평구진흥로 163 ( 재 ) 한국보건공정서연구회

3 대한민국약전포럼 Korean Pharmacopoeial Forum Vol.13 No.1 June 2016 목 차 Contents 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전일반시험법개정 ( 안 ) 불용성이물시험법 아미노산시험법 열분석법 자외가시부흡광도측정법 잔류용매시험법 적외부스펙트럼측정법 27 대한민국약전일반시험법신설 ( 안 ) 29 겉보기밀도및탭밀도측정법 29 광학현미경법 31 디메틸아닐린시험법 34 레이저회절법을이용한입자경측정법 35 미세열량측정법에의한결정형고체의특성분석및액체열량측정법 40 분체의미세한정도표시법 43 분체의입자밀도측정법 44 비표면적측정법 46 수은압입법을이용한공극률측정법 49 에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜시험법 52 에틸렌옥사이드및디옥산시험법 53 온도계 54 이산화황시험법 54 이온크로마토그래프법 55 질량분석법 58 체분급법 64 탁도시험법 67 대한민국약전일반정보신설 ( 안 ) 69 분체유동성 69 미생물의특성분석, 동정및균주분류 73 핵자기공명 (NMR) 스펙트럼측정법을이용한정량분석기법및응용 79 근적외선흡수스펙트럼측정법 ( 적외부스펙트럼측정법 ) 81 멸균과멸균보증 86 정제의경도 91 결정다형 95 라만분광법 96 위장약의 ph 시험법 104 대한민국약전의약품각조 1 부개정 ( 안 ) 105 덱스트로메토르판브롬화수소산염수화물 DextromethorpHan Hydrobromide Hydrate105 디아스타제 프로테아제 Diastase protease 106

4 디클록사실린나트륨수화물 Dicloxacillin Sodium Hydrate 108 바캄피실린염산염 Bacampicillin Hydrochloride 109 세파드록실수화물 Cefadroxil Hydrate 110 세파졸린나트륨 Cefazolin Sodium 111 세팔렉신수화물 Cefalexin Hydrate 112 세포탁심나트륨 Cefotaxime Sodium 114 세푸록심나트륨 Cefuroxime Sodium 115 아목시실린나트륨 Amoxicillin Sodium 116 아목시실린수화물 Amoxicillin Hydrate 117 암피실린나트륨 Ampicillin Sodium 119 암피실린무수물 Anhydrous Ampicillin 120 암피실린수화물 Ampicillin Hydrate 121 클록사실린나트륨수화물 Cloxacillin Sodium Hydrate 122 티카르실린나트륨 Ticarcillin Sodium 124 판크레아틴 Pancreatin 125 플루클록사실린나트륨 Flucloxacillin Sodium 126 피밤피실린 Pivampicillin 127 피브메실리남염산염 Pivmecillinam Hydrochloride 129 피페라실린나트륨 Piperacillin Sodium 130 대한민국약전의약품각조 1 부신설 ( 안 ) 132 디아스타제 프로테아제 셀룰라제 Diastase protease cellulase 132 리파제 Lipase 133 셀룰라제 Cellulase 133 프로테아제 Protease 134 대한민국약전의약품각조 1 부삭제 ( 안 ) 135 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000I Diastase protease cellulase 2000 I 135 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000III Diastase protease cellulase 2000 III 135 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000IV Diastase protease cellulase 2000 IV 136 디아스타제 프로테아제 셀룰라제700G Diastase protease cellulase 700 G 136 리파제Ⅰ Lipase Ⅰ 136 리파제Ⅱ Lipase Ⅱ 137 비오타밀라제1500 Biotamylase 셀룰라제AP3II Cellulase AP3 II 137 셀룰라제AP3III Cellulase AP3 III 138 판셀라제 Pancellase 138 판크레아틴I Pancreatin I 138 판프로신 Panprosin 139 프로나제A Pronase A 139 프로나제B Pronase B 139 헤미셀룰라제 Hemicellulase 140 대한민국약전의약품각조 2 부개정 ( 안 ) 141 감자전분 Potato Starch 141 밀전분 Wheat Starch 142 백당 Sucrose 144 쌀전분 Rice Starch 145 옥수수전분 Corn Starch 147 메틸셀룰로오스 Methylcellulose 148 무수유당 Anhydrous Lactose 151 무수인산수소칼슘 Anhydrous Dibasic Calcium Phosphate 152 미결정셀룰로오스 Microcrystalline Cellulose 153 벤질알코올 Benzyl Alcohol 155 분말셀룰로오스 Powdered Cellulose 156 유당수화물 Lactose Hydrate 158 인산수소칼슘수화물 Dibasic Calcium Phosphate Hydrate 159 카르멜로오스 Carmellose 161 카르멜로오스나트륨 Carmellose Sodium 163 카르멜로오스나트륨정 Carmellose Sodium Tablets 163 카르멜로오스칼슘 Carmellose Calcium 164

5 파라옥시벤조산메틸 Methylparaben 165 파라옥시벤조산부틸 Butylparaben 167 파라옥시벤조산에틸 Ethylparaben 170 파라옥시벤조산프로필 Propylparaben 172 의약품정보 Pharmaceutical Information 유산균제제품질확보를위한규격설정가이드라인 175 외국약전정보 Foreign Pharmacopoeial Information 외국약전동향및이슈 189 식약처표준품 MFDS Reference Standards 표준품분양목록 207

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7 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 일반시험법개정 ( 안 ) - 의견수렴용 국제조화를반영하여일반시험법중불용성이물시험법, 아미노산시험법, 열분석법, 자외가시부흡광도측 정법, 잔류용매시험법, 적외부스펙트럼측정법에대하여다음과같이개정초안을작성하였으며이에대한 많은의견을수렴하고자한다. 현행개정안 19. 불용성이물시험법 19. 불용성이물시험법 불용성이물시험법은점안제및주사제중불용성이물의유무를확인하는시험법이다. 불용성이물시험법은점안제및주사제중불용성이물의유무를확인하는시험법이다. 점안제 수용액인점안제및쓸때녹여쓰는점안제점안제 수용액인점안제및쓸때녹여쓰는점안제 의수성용제는흰색광원을써서 3000 ~ 5000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때맑으며쉽게검출되는불용성이물이없다. 의수성용제는흰색광원을써서 3000 ~ 5000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때맑으며쉽게검출되는불용성이물이없다. 주사제 제 1 법용액인주사제및쓸때녹여쓰는주사제 제 1 법용액, 현탁액또는유탁액인주사제 주사제의용제는용기의바깥쪽을깨끗이닦고흰색광원바로아래약 1000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때맑으며쉽게검출되는불용성이물이없다. 다만플라스틱제수성주사제용기를쓴이제제에서는위및아래에흰색광원을써서 8000 ~ 럭스밝기의위치에서육안으로관찰한다. 및쓸때녹여쓰는혹은쓸때현탁하여사용하는주사제의용해액등은이방법에따른다. 용기의바깥쪽을깨끗이닦고흰색광원바로아래약 1000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때쉽게검출되는불용성이물이없다. 다만플라스틱제수성주사제용기를쓴이제제에서는위및아래에흰색광원을써서 8000 ~ 럭스밝기의위치에서육안으로관찰 한다. 제 2 법쓸때녹여쓰는주사제는용기의바깥쪽을깨끗이닦고이물이들어가지않도록충분히조심하여첨부한용제또는주사용수를써서녹이고흰색광원바로아래약 1000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때맑으며분명히볼수있는불용성이물이없다. 제 2 법쓸때녹여쓰거나쓸때현탁하여사용하는주사제는이방법에따른다. 용기의바깥쪽을깨끗이닦고이물이들어가지않도록충분히조심하여첨부한용해액또는주사용수를써서용해또는현탁하여흰색광원바로아래약 1000 럭스밝기의위치에서육안으로관찰할때맑으며분명히볼수있는불용성이물이없다. 33. 아미노산시험법 33. 아미노산시험법 1. 확인시험 1) 박층크로마토그래프법 1. 확인시험 1) 박층크로마토그래프법

8 현행개정안제 1 법각각의아미노산표준품 0.1 g을달아물을넣어제 1 법각각의아미노산표준품 10 mg을달아물을넣녹여 100 ml로하여각각의표준액으로한다. 따로이어녹여 10 ml로하여각각의표준액으로한다. 따로이약일정량을가지고물을넣어녹여표준액과비슷한농약일정량을가지고물을넣어녹여표준액과비슷한농도로만들고여과한여액을검액으로한다. 이들액을가도로만들고여과한여액을검액으로한다. 이들액을가지고박층크로마토크래프법에따라시험한다. 검액및표지고박층크로마토크래프법에따라시험한다. 검액및표준액 10 μl 씩을박층크로마토그래프용실리카겔 ( 형광준액 10 μl 씩을박층크로마토그래프용실리카겔을써제첨가 ) 를써서만든박층판에점적한다. 다음에 n-부탄서만든박층판에점적한다. 다음에 n-부탄올ᆞ아세트산올ᆞ아세트산 (100)ᆞ물혼합액 (2:1:1) 을전개용매로 (100)ᆞ물혼합액 (2:1:1) 을전개용매로 10 cm 전개 10 cm 전개한후 n-부탄올ᆞ강암모니아수혼합액 (2: 한후 n-부탄올ᆞ강암모니아수혼합액 (2:1) 을전개용매 1) 을전개용매로 10 cm 전개하여, 80 에서 30 분간로 10 cm 전개하여, 80 에서 30 분간가열하고닌히가열하고닌히드린시액을뿌린다음다시 80 에서 10 드린시액을뿌린다음다시 80 에서 10 분간가열할분간가열할때, 검액및표준액은같은 R f 값에서같은때, 검액및표준액은같은 R f 값에서같은색상의반점색상의반점을나타낸다. 을나타낸다. 대상성분 L- 아스파르트산 L- 글리신 L- 세린 L- 시스틴 L- 프롤린 L- 메티오닌 L- 알라닌 L- 류신 대상성분 L- 발린 L- 페닐알라닌 L-이소류신 L-오르니틴염산염 L-티로신 타우린 L- 리신 L- 시스테인 L- 히스티딘 L- 트리프토판 L- 아르기닌 L- 리신염산염 L- 아스파라긴 L- 히스티딘염산염 L- 트레오닌 L- 아르기닌염산염 L- 글루타민산 제 2 법각각의아미노산표준품 10.0 mg을달아물을제 2 법각각의아미노산표준품 10.0 mg을달아물을넣어녹여 100 ml로하여각각의표준액으로한다. 따로넣어녹여 100 ml로하여각각의표준액으로한다. 따로이약일정량을가지고물을넣어녹여표준액과비슷한이약일정량을가지고물을넣어녹여표준액과비슷한농도로만들고여과한여액을검액으로한다. 이들액을농도로만들고여과한여액을검액으로한다. 이들액을가지고박층크로마토크래프법에따라시험한다. 검액및가지고박층크로마토크래프법에따라시험한다. 검액및표준액 10 μl 씩을박층크로마토그래프용셀룰로오스를표준액 10 μl 씩을박층크로마토그래프용셀룰로오스를써서만든박층판에점적한다. 다음에 n-부탄올아세톤 ᆞ 써서만든박층판에점적한다. 다음에 n-부탄올아세톤 ᆞ 물ᆞ디에틸아민혼합액 (30:30:15:6) 을전개용매로물ᆞ디에틸아민혼합액 (30:30:15:6) 을전개용매로 10 cm 전개한후이소프로판올ᆞ 물ᆞ포름산혼합액 (8 10 cm 전개한후이소프로판올ᆞ 물ᆞ포름산혼합액 (8 0:20:4) 또는부탄올ᆞ부탄올 ᆞ물ᆞ디시클로헥실아민 0:20:4) 또는부탄올ᆞ부탄올 ᆞ물ᆞ디시클로헥실아민혼합액 (30 : 30 : 15 : 6) 을전개용매로하여전개하고혼합액 (30 : 30 : 15 : 6) 을전개용매로하여전개하고 80 에서 30 분간가열하고이삭틴황산시액또는닌히 80 에서 30 분간가열하고이삭틴황산시액또는닌히드린시액를뿌린다음다시 80 에서 10 분간가열할드린시액를뿌린다음다시 80 에서 10 분간가열할때, 검액및표준액은같은 R f 값에서같은색상의반점때, 검액및표준액은같은 R f 값에서같은색상의반점을나타낸다. 을나타낸다.

9 현행개정안 2) 액체크로마토그래프법 ( 생략 ) 3) 자외가시부흡광도측정법 ( 생략 ) 2) 액체크로마토그래프법 ( 현행과같음 ) 3) 자외가시부흡광도측정법 ( 현행과같음 ) 2. 정량법 2. 정량법 1) L-시스테인, N-아세틸-L-시스테인, N-아세틸 1) L-시스테인, N-아세틸-L-시스테인및 N-아세틸 -L-티로신및 L-트립토판이외의아미노산성분 -L-티로신이외의아미노산성분 가. 표준액 각아미노산표준품을정밀하게달아각 성분명 농도농도성분명각의최종농도가 0.1 μmol/l가되도록하여표준액 ( μg /ml) ( μg /ml) 으로한다. L-아스파라긴산 40 L-트레오닌 35 성분명성분명 L-세린 32 L-글루타민산 44 타우린 L-류신 L-글리신 L-프롤린 L-아스파르트산 L-티로신 ( 아미노아세트산 ) L-알라닌 27 L-시스틴 10 L-트레오닌 L-페닐알라닌 L-발린 35 L-메티오닌 45 L-세린 L-오르니틴 L-이소로이신 40 L-류신 40 L-글루타민산 L-리신 L-프롤린 L-히스티딘 L-티로신 55 L-페닐알라닌 50 L-글리신 L-트리프토판 L-오르니틴 40 염산 L-오르니틴 50 L-알라닌 L-아르기닌염산-L- 리신 L-리신 L-시스틴 L-오르니틴염산염 ( 아세트산 L-리신 ) L-히스티딘 47 염산 L-히스티딘 63 L-발린 L-히스티딘염산염 L-메티오닌 L-아르기닌염산염 L-아르기닌 52 염산 L-아르기닌 63 L-이소류신 L-아스파라긴 50 아미노에틸설폰산 30 가. 표준액각아미노산표준품을정밀하게달아각각의최 종농도가아래와같이함유되도록만들어표준액으로한다. 다만, 필요하면농도를조절할수있다. 나. 검액이약을가지고표시량에따라일정량을정밀하게달아각각의아미노산의최종농도가표준액과비슷하도록 0.02 mol/l 염산을넣어흔들어섞은다음적절하게희석또는여과하여검액으로한다. 다. 조작검액및표준액을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험하여각각의피크면적 A T 및 As를측정한다. 다만, L-아스파라긴산 -L-오르니틴은각액의 L-아스파라긴산과 L-오르니틴의피크면적을합한것을피크면적으로한다. 나. 검액이약을가지고표시량에따라일정량을정밀하게달아각각의아미노산의최종농도가 0.1 μ mol/l가되도록 0.02 mol/l 염산으로희석한다. 다. 조작검액및표준액 20 μl을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험하여각각의피크면적 A T 및 As를측정한다. 다만, L-아스파라긴산 -L-오르니틴은각액의 L-아스파라긴산과 L-오르니틴의피크면적을합한것을피크면적으로한다. 조작조건 각아미노산의양 (mg) = 각아미노산표준액의최종농도 ( μg /ml) T 희석배수 S 조작조건 각아미노산의양 (mg) T = 각아미노산표준품의양 (mg) S 검출기 : 가시부흡광광도계 ( 측정파장 570 nm, 프롤린

10 현행개정안 검출기 : 가시부흡광광도계 ( 측정파장 570 nm, 다만프롤 린및아스파라긴은 440 nm) 칼럼 : 안지름약 2.6 mm, 길이약 15 cm 인스테인레 스관에아미노산분석용이온교환수지를충진한다. 칼럼온도 :53 부근의일정온도 화학반응조온도 :98 부근의일정온도 이동상 :6 종의완충액 ( 아래표와같이시트르산나트륨이 수화물을적당량의물에녹이고수산화나트륨염화나트 륨, 시트르산일수화물, 에탄올, 벤질알코올, 티오디글리콜 및 BRIJ-35- 용액을넣어흔들어섞고 ph 를맞춘다음 물을넣어 1000 ml 로한다. 미리카프릴산을넣은완충 액저장병에위의용액을여과하여넣고하룻밤방치한 다음 ph 를다시맞춘액 ) 을가지고아래표의완충액의순 서로송액한다. 용도 나트륨농도 (mol/l) 물 시트르산나트륨이수화물 수산화나트륨 완충액 1 이동상 1 완충액 2 이동상 2 완충액 3 이동상 3 완충액 4 이동상 4 완충액 5 검체희석 완충액 6 칼럼재생 ml 700 ml 700 ml 7.74 g 7.74 g g 700 ml g 700 ml 700 ml 4.9 g g 염화나트륨 7.07 g 7.07 g 2.92 g g 시트르산일수화물 에탄올 g 130 ml g 130 ml g 8.8 g g 35.0 g 벤질알코올 ml - - 티오디글리콜 5 ml 5 ml 5 ml - 5 ml - BRIJ-35 용액 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml ph 전체량 카프릴산 1000 ml 1000 ml 1000 ml 1000 ml 1000 ml 1000 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 반응시약 : 닌히드린반응시액 이동상유량 :L- 아스파라긴산의유지시간이약 10 분이 되도록 ( 약 ml/ 분 ) 조정한다. 칼럼의선정 : 표준액 50 μl 를가지고위의조건으로시 험할때아미노에틸설폰산, L- 아스파라긴산, L- 트레오 닌, L- 세린, L- 글루타민산, L- 프롤린, 아미노아세트산 (L- 글리신 ), L- 알라닌, L- 시스틴, L- 발린, L- 메티오 닌, L- 이소로이신, L- 로이신, L- 티로신, L- 페닐알라닌, 440 nm) 칼럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 6 cm 인스테인레 스관에 3 μm 의아미노산분석용이온교환수지를충진 한다. 칼럼온도 :57 부근의일정온도 화학반응조온도 :135 부근의일정온도 이동상 : 시트르산나트륨계의완충액 이동상 1 이동상 2 이동상 3 이동상 4 칼럼재생 증류수 700 ml 700 ml 700 ml 700 ml 시트르산나트륨이수화물 수산화나트륨 6.19 g 7.74 g g g 염화나트륨 5.66 g 7.07 g 3.74 g g 시트르산일수화물 g g g 6.10 g 용액 700 ml 8.00 g 에탄올 130 ml 20 ml 4 ml 100 ml 벤질알코올 티오디글리콜 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml BRIJ-35 용액 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml ph 전체량 1 L 1 L 1 L 1 L 1 L 반응시약 : 닌히드린시액, 닌히드린반응시액 유량 : 0.4 ml/ 분 반응액유량 : 0.34 ml/ 분 시스템적합성 시스템의성능 : 표준액 20 μl 를가지고위의조건 으로조작할때각아미노산들중서로근접하게검 출되는두성분의분리도는 1.2 이상이다. 시스템의재현성 : 표준액 20 μl 씩을가지고위의 조건으로시험을 6 회반복할때각아미노산피크면 적의상대표준편차는 2.0 % 이하이다.

11 현행개정안 L- 리신, L- 히스티딘및 L- 아르기닌의순서로용출하고 각각의피크가완전히분리되는것을쓴다. 2) L- 시스테인 (L- 시스테인염산염 ) ( 생략 ) 3) N-아세틸-L-시스테인이약을 N-아세틸-L-시스 3) N-아세틸-L-시스테인이약을 N-아세틸-L- 시스 테인 (C 5 H 9 NO 3 S) 으로서약 0.1 g 에해당하는양을정밀하 게달아아황산수소나트륨액 (1 2000) 을넣어녹여정 확하게 10 ml 로한다. 이액 2 ml 및내부표준액 2 ml 를취하여아황산수소나트륨액 (1 2000) 을넣어정확하 게 50 ml 로하여검액으로한다. 따로 N- 아세틸 -L- 시 스테인표준품약 0.1 g 을정밀하게달아검액과같이조작 하여표준액으로한다. 검액및표준액 5 μl 씩을가지고 다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험하고각 액의내부표준물질의피크면적에대한 N- 아세틸 -L- 시스 테인의피크면적비 Q T 및 Qs 를구한다. N- 아세틸 -L- 시스테인 (C 5 H 9 NO 3 S) 의양 (mg) T = N-아세틸-L- 시스테인표준품의양 (mg) S 내부표준액 :DL- 페닐알라닌약 0.5 g 을새로만든아 황산수소나트륨액 (1 2000) 100 ml 에녹여만든다. 2) L- 시스테인 (L- 시스테인염산염 ) ( 현행과같음 ) 테인 (C 5 H 9 NO 3 S) 으로서약 50 mg 에해당하는양을 정밀하게달아아황산수소나트륨액 (1 2000) 을넣 어녹여정확하게 10 ml 로한다. 이액 2 ml 를취하 여아황산수소나트륨액 (1 2000) 을넣어정확하게 50 ml 로하여검액으로한다. 따로 N- 아세틸 -L- 시 스테인표준품약 50 mg 을정밀하게달아검액과같이 조작하여표준액으로한다. 검액및표준액 10 μl 씩 을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따 라시험하여각액의피크면적 A T 및 As 를구한다. N- 아세틸 -L- 시스테인 (C 5 H 9 NO 3 S) 의양 (mg) T = N-아세틸-L- 시스테인표준품의양 (mg) S 내부표준액 :DL- 페닐알라닌약 0.5 g 을새로만든 아황산수소나트륨액 (1 2000) 100 ml 에녹여만든다. 조작조건 검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 214 nm) 칼럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm 인스테인레스 관에 5 10 μm 의액체크로마토그래프용옥타데실실릴 실리카겔을충전한다. 이동상 : 인산이수소칼륨액 ( ) 칼럼선정 :N- 아세틸 -L- 시스테인과내부표준물질과의분 리도 (R) 는 6 이상이고표준액을 5 회이상주입하여얻은 피크의상대표준편차는 2.0 % 이하이다. 4) N 아세틸-L-티로신이약을 N-아세틸-L- 티로신 4) N 아세틸-L-티로신이약을 N-아세틸-L- 티로신 (C 11 H 13 NO 4 ) 으로서약 25 mg 에해당하는양을정밀하게달 아물을넣어정확하게 100 ml 로하고이액 5 ml 를취하여 물을넣어정확하게 25 ml 로하여검액으로한다. 따로 N- 아세틸 -L- 티로신표준품약 25 mg 을정밀하게달아물을 넣어정확하게 100 ml 로하고이액 5 ml 를취하여물을넣 어정확하게 25 ml 로하여표준액으로한다. 검액및표준액 20 μl 씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하여각액의피크면적 A T 및 As 를측정한다. N- 아세틸 -L- 티로신 (C 11 H 13 NO 4 ) 의양 (mg) T = N-아세틸-L- 티로신표준품의양 (mg) S 조작조건 검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 214 nm) 칼럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm 인스테인레 스관에 5 10 μm 의액체크로마토그래프용옥타데실 실릴실리카겔을충전한다. 이동상 : 인산이수소칼륨액 ( ) (C 11 H 13 NO 4 ) 으로서약 25 mg 에해당하는양을정밀하 게달아물을넣어정확하게 100 ml 로하고이액 5 ml 를취하여물을넣어정확하게 25 ml 로하여검액으로 한다. 따로 N- 아세틸 -L- 티로신표준품약 25 mg 을정 밀하게달아물을넣어정확하게 100 ml 로하고이액 5 ml 를취하여물을넣어정확하게 25 ml 로하여표준액 으로한다. 검액및표준액 20 μl 씩을가지고다음조건 으로액체크로마토그래프법에따라시험하여각액의피 크면적 A T 및 As 를측정한다. N- 아세틸 -L- 티로신 (C 11 H 13 NO 4 ) 의양 (mg)

12 조작조건 현행개정안 검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 210 nm) 칼럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm 인스테인레스 관에 5~10 μm 의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실 리카겔을충전한다. 이동상 :0.02 mol/l 인산이수소칼륨액 ᆞ 메탄올혼합액 (92:8) 5) L- 트립토판이약을 L- 트립토판 (C 11 H 12 N 2 O 2 ) 으로서 약 50 mg 해당하는양을정밀하게달아물 70 ml를넣어 5) L-트리프토판이약을 L-트리프토판 (C 11 H 12 N 2 O 2 ) 녹이고내부표준액 2 ml 및물을넣어정확하게 100 ml 로하여검액으로한다. 따로 L- 트립토판표준품약 50 mg 을정밀하게달아내부표준액 2 ml 및물을넣어정확하 게 100 ml 로하여표준액으로한다. 검액및표준액 10 μl 씩을가지고다음의조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하고각액의내부표준물질의피크면적에대한 L- 트립토판의피크면적비 Q T 및 Qs 를구한다. T = N-아세틸-L- 티로신표준품의양 (mg) S 조작조건 검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 210 nm) 칼 럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm 인스테인레 스관에 5~10 μm 의액체크로마토그래프용옥타데실실 릴실리카겔을충전한다. 이동상 :0.02 mol/l 인산이수소칼륨액 ᆞ 메탄올혼합액 (92:8) 시스템적합성 시스템의성능 : 표준액 20 μl 를가지고위의조건 으로조작할때 N- 아세틸 -L- 티로신의이론단수는 단이상이다. 시스템의재현성 : 표준액 20 μl 씩을가지고위의 조건으로시험을 6 회반복할때 N- 아세틸 -L- 티로신 피크면적의상대표준편차는 2.0 % 이하이다. 으로서약 20 mg 해당하는양을정밀하게달아물을 넣어정확히 100 ml 로한다. 이액 10 ml 를정확하 게취하여물을넣어 100 ml 로하여검액으로한다. 따로 L- 트리프토판표준품약 20 mg 을정밀하게달아 검액과같이조작하여표준액으로한다. 검액및표준 액 10 μl 씩을가지고다음의조건으로액체크로마토 그래프법에따라각액의 A T 및 A S 를측정한다. L- 트립토판 (C 11 H 12 N 2 O 2 ) 의양 (mg) T = L-트립토판표준품의양 (mg) S L- 트리프토판 (C 11 H 12 N 2 O 2 ) 의양 (mg) T = L-트리프토판표준품의양 (mg) S 내부표준액 : 카페인약 100 mg을물 25 ml에녹여 내부표준액 : 카페인약 100 mg을물 25 ml에녹여만든다. 만든다. 조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 210 nm) 칼럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm인스테인레스강관에 5 10 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다. 이동상 : 메탄올ᆞ물ᆞ0.005 mol/l 1-헵탄설폰산나트륨액 (20:80:1) 조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 210 nm) 칼럼 : 안지름약 4 mm, 길이약 30 cm인스테인레스강관에 5 10 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다. 이동상 : 메탄올ᆞ물ᆞ0.005 mol/l 1-헵탄설폰산나트륨액 (20:80:1) 시스템적합성시스템의성능 : 표준액 20 μl를가지고위의조건으로조작할때 L-트리프토판의이론단수는 단이상이다.

13 현 행 개정안 시스템의재현성 : 표준액 10 μl씩을가지고위의조건으로시험을 6회반복할때 L-트리프토판피크면 시액 적의상대표준편차는 2.0 % 이하이다. 1) 이삭틴황산시액 : 이삭틴 11.4 g을달아진한황산시액 100 ml로녹인다. 1) 박층크로마토그래프용닌히드린시액 : 닌히드린 1g을 2) BRIJ-35용액 :BRIJ-35( 폴리옥시에틸렌알코올 ) 25g 을달아물 100 ml를넣어필요하면가온하여녹인다. 달아 3 % 아세트산 n-부탄올용액을넣어녹여 100 ml로한다. 3) 닌히드린시액 : 닌히드린 1g을달아 3 % 아세트산 n- 1) 이삭틴황산시액 : 이삭틴 11.4 g을달아진한황산 부탄올용액을넣어녹여 100 ml로한다. 100 ml로녹인다. 4) 닌히드린반응시액 : 무수아세트산나트륨 82g을물 2) BRIJ-35용액 :BRIJ-35( 폴리옥시에틸렌알코올 ) 25g 을 150 ml에녹이고다시아세트산 (100) 25 ml를넣어섞 달아물 100 ml를넣어필요하면가온하여녹인다. 은다음물을넣어 250 ml로한다. 여기에메틸셀로솔브 3) 닌히드린시액 : 프로필렌글리콜모노에테르 979 ml 750 ml를넣고약 20 분간질소를통하면서흔들어섞는다. 다음에닌히드린 20g을넣고약 15 분간같은방법으로조작한다. 다시염화제일주석 0.38g을넣어약 10 분간같은방법으로조작하여만든다. 5) 트리스완충액 (ph 8.0):0.2 mol/l 트리스히드록시메틸아미노메탄 100 ml에 1 mol/l 염산을넣어 ph 8.0 으로한다. 에닌히드린 39g을넣고질소하에서 5분간녹여준다음, 수소화붕소나트륨 81 mg을넣고 30분간질소하에서인준다. 4) 닌히드린반응시액 : 아세트산리튬이수화물 204 g에증류수 336 ml, 아세트산 (100) 123 ml 및프로필렌글리콜모노에테를 401 ml를넣고 10분간질소하에서녹인다. 6) 5,5'-디티오-비스-(2-니트로벤조산 ) 시액 : 5,5'- 5) 트리스완충액 (ph 8.0):0.2 mol/l 트리스히드록시메 디티오-비스-(2- 니트로벤조산 ) 39.7 mg에에탄올 10 틸아미노메탄 100 ml에 1 mol/l 염산을넣어 ph ml를넣어녹이고이액 5 ml에트리스완충액 (ph 8.0) 8.0으로한다. 을넣어 50 ml로한다. 6) 5,5'-디티오-비스-(2-니트로벤조산 ) 시액 : 5,5'- 디티오-비스-(2- 니트로벤조산 ) 39.7 mg에에탄올 10 ml를넣어녹이고이액 5 ml에트리스완충액 (ph 8.0) 을넣어 50 ml로한다. 40. 열분석법 40. 열분석법 열분석법은물질의온도를일정한온도프로그램에따라 열분석법은온도의함수로서물질의물리적성질의변 변화시키면서그물리적성질을온도또는시간의함수로화를측정하는모든분석법이다. 가장많이사용되는방 측정하는모든분석법이다. 법은시료물질의에너지변화를측정하거나, 질량변화를 여러가지물리적성질중결정등의고체와액체사이의측정하는것이다. 상전이 ( 융해, 응고 ) 또는다형전이등의상변화, 열분해 이러한방법은상변화측정, 화학조성변화측정, 순도 또는화학반응등에수반하는발열또는흡열의열적거동측정등여러가지로응용될수있다. 을 온도변화로 측정하는 방법을 시차열분석법 더욱이이방법에의한측정법중열질량측정법은건 (differential thermal analysis, DTA), 또는시차주사열조감량시험법또는수분측정법대신에사용될수있다. 량측정법 (differential scanning calorimetry, DSC) 이라다만수분측정법대신에사용되는경우, 물이외의휘발 한다. DTA는검체의열적거동을온도변화로검출하는방성분이없는것을확인할필요가있다. 법이며 DSC는열량 ( 엔탈피 ) 변화로검출하는방법이다. 또 한검체의온도변화에수반하여탈수, 흡착또는탈리, 산열질량측정법 화등에의한질량변화를측정하는방법을열질량측정법 (thermogravimetry, TG) 이라고한다. 열질량측정법 (TG : Thermogravimetry 또는 TGA : Thermogravimetric Analysis) 은제어된온도프로그

14 현 행 개정안 이방법들중열질량측정법은건조감량시험법또는수분정량법으로쓸수있다. 다만수분정량법으로쓰는경우에 램에따라온도의함수로시료물질의질량을측정하는방법이다. 는물이외에휘발성성분이없음을확인한다. 장 치열천칭의기본적인구성은일정한온도프로 제 1 법시차열분석법또는시차주사열량분석법장치시차열분석법또는시차주사열량측정법장치는보통가열로, 온도제어부, 검출부, 분위기조절부및표시 그램에따라시료를가열또는냉각하는장치, 분위기가조절되는시료홀더, 전기천칭과전기적신호를기록하는컴퓨터또는기록계이다. 기록부로구성된다. 온도교정 시료의근처에있거나접촉하고있는온도 가 ) 시차열분석법이방법은가열로속에놓은검체와 센서는 니켈과 같은 강자성물질 (Ferromagnetic 기준물질을일정한속도로가열또는냉각하는장치및검체와기준물질간에생기는온도차를열전쌍등을써서시간또는온도에대하여연속적으로측정하여기록 substances) 의큐리온도에의해교정한다. 열질량측정법과시차열분석법 (DTA : Differential Thermal Analysis) 의동시측정이가능한장치에한해서는시 하는장치로구성된기기를쓴다. 기준물질로서는보통 차주사열량측정법 (DSC : Differential Scanning 열분석용 α-알루미나를쓴다. 나 ) 시차주사열량분석법측정원리가다른다음두가지 Calorimetry) 및시차열분석법과인듐, 주석, 아연과같은동일한인증표준물질을사용한다. 가있다. 전자천칭의교정 적절한인증표준물질 ( 예, 옥살산칼 1 입력보상시차주사열량측정 ( 입력보상 DSC) 검체와기준물질을가열로속에놓고일정한속도로가열또는냉각하여검체와기준물질간에생기는온도차를백금저항온도계등으로검출하고그온도차를 0으로유지하도록보상회로를작동시킨다. 양자에가하여진단위시간당열에너지의입력차를시간또는온도에대하여연속적으로측정하여기록할수있도록한장치로되어있다. 2 열유속 ( 熱流束 ) 시차주사열량측정 ( 열유속 DSC) 검체와기준물질을가열로속에놓고일정한속도로가열할때검체와기준물질간에생기는온도차를열유속 슘수화물 ) 적당량을시료홀더에넣고질량을정밀하게단다. 기기마다지정된가열속도 ( 예, 분당 5 ) 를설정하고가열을시작한다. 가로축은왼쪽에서오른쪽으로온도또는시간이증가하도록설정하고, 세로축은아래방향으로질량감소가되도록설정한열중량곡선을기록한다. 250 부근에서온도상승을멈춘다. 질량감소에대응하는, 측정시작시간과종료시간의질량-온도, 또는질량-시간의편평한부분의차이를측정한다. 인증표준물질의이론적질량감소는라벨에기재되어있다. 의차로서검출하여 DSC 신호로서기록한다. 열유속 방 법시험한물질에대해서는각조에표시된조건 DSC에서는검체와열원간의열유속이검체와열원의온도차에비례하도록열전도체를쓴다. 또기준물질과열원간에도같은방법으로 DSC 신호를기록한다. 입력보상 DSC나열유속 DSC 모두기준물질로보통열분석용 α-알루미나를쓰지만빈용기를기준으로쓰는경우도있다. 조작법검체및기준물질을검체용기에채운다음일정한온도제어프로그램에따라가열로를가열또는냉각하 을사용한다. 얻은열중량곡선에서확인된차이로시료물질의질량감소를구할수있다. 질량감소는백불율로표시한다. 장치의사용빈도가높은경우에는온도교정을정기적으로실시한다. 또는측정전에반드시이런조작을한다. 실험조건은중요하며다음의조건들은측정할때기재한다. 압력또는유속, 기체의조성, 시료량, 가열속도, 온도범위, 처리시간을포함한시료의전처리법. 여이과정에서검체와기준물질간에발생하는온도차시차주사열량측정법 이 (DTA) 또는열량변화 (DSC) 를연속적으로측정하여기록한다. 각장치에서지시된방법과순서에따라자료를처리하고장치를취급한다. 미리융해또는다형전이등의물리적변화가일어나는온도범위를알고또한예상외의열적변화가일어나지않는것을확인하기위해넓은온도범위 ( 실온 ~ 분해시작온도 ) 를빠른가열속도 (10 ~ 20 / 분 ) 로주사하여예비시험하고측정온도범위를정한다. 이렇게정해진온도범위에서약 2 / 분의속도로가열하여시험한다. 다만유리전이등매우작은열변화만관찰되는경우에는 시차주사열량측정법 (DSC) 은물질또는물질의혼합물의가열또는냉각중에발생하는에너지현상의측정또는엔탈피나비열의변화및그런것들이일어나는온도의측정을위한방법이다. 이방법은온도의함수로서기준셀과비교하여시료의열출입 ( 온도를기준으로 ) 에서의차이를측정하기위해사용한다. 두가지타입의 DSC 장치가있으며, 하나는시료와기준물질의온도차를 0으로유지하도록하는입력보상형이고, 다른방법은일정한가온조건하에서시료와기준물질의열유속의차이로서미세한

15 현행개정안 물리적변화를관찰하는데적절한가열속도를정할수 있다. 얻어진 DTA 곡선또는 DSC 곡선의발열또는흡 열피크를해석하여융점또는다형전이등물리적변화 에따른열량의변화량및온도 ( 시작온도, 피크온도, 종 료온도등 ) 를구한다. 장치의보정가 ) 온도보정 DTA 또는 DSC 에서장치 의온도보정은순도가높은금속이나유기물질의융점 또는무기염류나산화물의결정전이점등으로보정한다. 보통열분석용인듐, 열분석용주석의융점등을쓴다. 나 ) 열량보정검체의온도변화에따른열량의출입 ( 엔 탈피변화 ) 을바르게평가하기위하여열량표준물질을 써서장치를보정하여둘필요가있다. 열량표준물질로서 는온도보정에서와마찬가지로순도가높은금속이나유 기물의융해열또는무기염류의결정전이열등으로장치 의열량을보정한다. 보통열분석용인듐, 열분석용주석의 융해열등을쓴다. 조작조건의기재사항 DTA 또는 DSC 를측정할때검 체량, 검체용기의개폐의구별, 가열또는냉각속도, 측정 온도범위및환경기체의종류와유량등의측정조건을 기록한다. 제 2 법열질량측정법 (TG) 장치 TG 장치의구성은기본적으로 DTA 또는 DSC 장치와같다. 다만검출부는보통현수형, 접시형, 수평형 등의열천칭을쓴다. 검체를열천칭의일정한위치에놓 고일정한온도제어프로그램에따라가열하면서온도또 는시간에대한질량의변화를연속적으로측정하여기 록할수있도록되어있다. 조작법검체를검체용기에채워열천칭의일정한위치 에놓은다음일정한온도제어프로그램에따라가열로를 가열하여그온도변화의과정에서생긴검체의질량변화 를연속적으로측정하여기록한다. 자료처리및장치의 취급은각장치에서지시한방법과순서에따른다. 건조감량시험법및수분정량법의별법으로 TG 를쓰는 경우실온부터측정을시작하여건조또는수분의휘산 에의한질량변화가더이상없을때까지의온도를측정 범위로한다. 보통 5 / 분을표준적인속도로하여직선 적으로가열하지만검체및측정온도범위의넓이에따라 적절히그속도를변경할수있다. 또한측정중검체로 부터발생하는물기타휘발성성분을신속히제거하고 또는검체의산화등에의한화학반응을방지하기위하 여보통건조공기또는건조질소를일정한유량으로가 열로중에흘려준다. 얻어진 TG 곡선의질량 - 온도또는 질량 - 시간곡선을해석하여건조에따른질량변화의절 대값또는채취량에대한상대값 (%) 을구한다. 산화또는분해반응에따른질량변화를구하고자하는 온도차를검출하는열유속형이다. 장치열보상형 DSC 장치는시료셀과기준셀로구 성된시료홀더를포함한가열로를가진다. 열유속형 DSC 장치는시료용기와기준용기가시료홀더에단일셀 로된가열로를가진다. 또한컴퓨터에연동된온도프로그램장치, 열검출기와 기록부분이있다. 제어된분위기에서측정이이루어진 다. 열류량 (mj/s) A 약 1 그림 1. 열다이어그램 온도 ( ) 흡열 장치의교정적절한인증물질이나기준물질을사용해 온도및엔탈피변화에대한장치교정을한다. 1) 온도교정순수한금속이나유기화합물의융점, 결 정성의무기염이나산화물의상전이온도등의고유한 열적성질을가지는인증표준물질을 이용한다. 일반 적으로인듐, 주석, 아연의융점이교정에사용된다. 2) 열량교정시료의온도변화에따른물리적변화에 의한열량변화 ( 엔탈피변화 ) 의정확한평가를위해적 절한인증표준물질을이용하여장치를교정할필요가 있다. 순수한금속이나유기화합물의융점, 결정성의 무기염의상전이온도등의물리적변화는일정한엔 탈피변화를나타내므로인증표준물질의사용에의해 온도교정과동일하게열량교정이이루어진다. 일반적 으로인듐, 주석, 아연의융해열이교정에사용된다. 조작방법시험시료의적당량을적절한용기에칭량하 고시료홀더에놓는다. 빈용기를기준홀더에놓는 다. 시작온도, 최종온도및각조에규정된조작조건에 표시된가열속도를설정한다. 가로축을온도또는시간 ( 왼쪽에서오른쪽으로증 가 ), 세로축을에너지변화 ( 어떤방향이발열인지흡 열인지정할것 ) 로하여시차주사열량측정곡선의측정 을시작하고기록한다. 현상이일어나는온도 ( 개시온도 ) 는곡선의최대기 울기 ( 변곡점 ) 에맞춘접선과기선의연장선과의교점 ( 그림 1 의 A) 에해당한다. 열적현상의종점은곡선 의피크로나타난다. 현상의엔탈피는기선과곡선의피크면적에비례한

16 현 행 개정안 경우에는반응의시작과종료후에있어서안정된기선이얻어지는온도범위를별도로정하여이하건조감량을측정하는방법과같은방법으로조작한다. 장치의보정가 ) 온도보정 TG 장치의온도보정은열분석용니켈등의큐리온도 (Curie temperature) 를써서보정을한다. 다만 DSC 또는 DTA와동시에측정할수 다. 그비례계수는동일한조작조건에서의인듐등의기지물질의융해열측정으로부터결정된다. 각각의측정결과에는다음의사항들을병기한다. 실험의모든조건, 최근의교정기록, 시료의양과내역 ( 열이력을포함 ), 용기, 분위기 ( 종별, 유속, 압력 ), 온도변화의방향과속도, 장치와기록계의감도. 있는 TG에서는제 1 법과같은온도보정을하면따로응 용 TG 장치를위한온도보정을할필요는없다. 상변화 온도의함수로서인정되는물질의상변화의 나 ) 눈금의보정과확인 TG에서는측정하고자하는질량의계량범위에따라화학천칭용또는세미마이크로화 온도, 엔탈피양, 비열변화의측정등다음표 1에나타내는상전이를관찰할수있다. 학천칭용분동을써서눈금을보정하며이것을 1 차보 정이라고한다. 이 1 차보정은상온상압에서하며장치 표 1 를설치또는정기점검할때한다. 동소체 결정다형, 탈용고체-고체전이검체를측정할때는측정상태에서의환경기체에의한부매화, 무정형 결정형 고체-액체전이융해, 유리전이력및대류등이질량측정에미치는영향을제거하기위고체-기체전이승화해옥살산칼슘일수화물표준품을써서눈금을보정하거나액체-고체전이동결, 재결정, 유리전이 확인하며이것을 2 차보정이라한다. 2 차보정에서는다음표준측정조건또는따로정한측정조건으로옥살산 액체-기체전이 승발 칼슘일수화물표준품의수분을측정할때측정값과표준화학조성의변화정해진실험조건에서의반응열, 반품의수분값 ( 보증수분값 ) 의편차가 0.3 % 미만일때장응온도의측정이가능하고구체적으로는분해반응이나치가정상적으로작동하는것으로본다. 측정값과표준품탈용매화반응의속도를측정할수있다. 의수분값의편차가 0.3 % 이상일때표준품의수분값을상다이어그램에의응용고체혼합물의상다이어그램의기준으로하여눈금을보정한다. 작성에이용할수있다. 상다이어그램의작성은프리표준측정조건포뮬레이션이나동결건조공정의최적화에중요한단계옥살산칼슘일수화물표준품의양 : 10 mg 이다. 가열속도 : 5 / 분순도의측정시료수 mg의사용에따라반복에의한온도범위 : 실온 ~ 250 정확한참값의측정이아닌 1 회의 DSC측정에의해환경기체 : 건조질소또는건조공기임의의온도에서의융해분할합과융해열의측정으로부환경기체의유량 : 현수형또는접시형천칭에서는 40 터물리적불순물함량을측정하는것이가능하다. ml/ 분, 수평형천칭에서는 100 ml/ 분이론상으로는순수결정성물질의일정압력에서의융조작조건의기재사항검체량, 가열속도, 측정온도범위, 해는융점 T 0 의극히좁은온도범위에서의융해열 Δ 환경기체의종류와유량등의측정조건을기록한다. H f 에의해특징지어진다. 융해온도범위의넓이는불순 물에대한민감한지표이다. 같은물질의 10 분의수 퍼센트정도불순물함량이차이나는시료는시각적으 로판별이가능한상이한열곡선이된다 ( 그림 2).

17 현행개정안 열류량 (mj/s) 99.10% 99.35% 약 1 그림 2. 순도의차이에의한열곡선 DSC 에의한몰순도의측정은 2 성분계에서의농도 ( 활성량이아닌 ) 에대해적용된 van t Hoff 식의적 분형수학적근사의사용에기초한다. [ln(1 - x 2 ) -x 2 및 T T 0 T 0 2 ] 불순물함량 x 2 이 1 보다극히작고, 온도 T 가융점 T 0 와근사한경우에는식은아래와같이된다. 단, 여 기서 T 와 x 2 는변수이다. T = T 0 - (RT 0 2 / ΔH f ) x 2 (1) T : 절대온도로나타낸시료의온도 T 0 : 절대온도로나타낸화학적순물질의융점 R : J K -1 mol -1 로나타낸이상기체의기체정수 ΔH f : J mol -1 로나타낸순물질의몰융해열 x 2 : 불순물의몰분율. 절대온도 T에서불순물의몰수를액상 ( 또는융해상 ) 중의전몰수로나눈값 DSC에서의순도측정은주성분물질과공융혼합물을만들고곡형적인경우로측정시료중의 2 % 미만의몰분율로존재하는불순물의측정에한한다. 이방법은다음의경우에는적용할수없다. - 무정형물질 - 실험온도범위에서불안정한다형을보이는화합물또는용매화물 - 주성분물질과고용체 ( 固容體 ) 를형성하는불순물 - 주성분물질의액상이나용해액에불용인불순물시료의가열중불순물은공융점에서완전히융해한다. 이온도이상에서고체상은순물질만을함유한다. 계속해서공융점에서순물질의융점으로온도상승을하는경우액화된순물질의양은증가하므로액체중의

18 현행개정안 불순물몰분율은감소한다. 공융점이상의온도에서는 모든시료가융해되면, F = 1, x 2 = x 2 * 가된다. x 2 = (1 / F) x 2 * (2) F = 측정시료가융해하는분할의합 x 2 * = 분석시료중불순물의몰분획 (2) 식을 (1) 식에대입하면다음식이얻어진다. T = T 0 - {(RT 0 2 / ΔH f ) (1 / F) x 2 * ) 순물질의융해열은융해피크를적분하면얻을수있다. 순물질의융점 T 0 는절대온도 T와 1/F의플롯에서추산하면얻을수있다. 필요한경우선형으로근사한기울기α는, RT 2 0 x * 2 /ΔH f 에해당하고, x * 2 를구할수있다. 몰분율 x * 2 에 100을곱하면모두같이용융하는불순물의몰분율퍼센트가얻어진다. 49. 자외가시부흡광도측정법 49. 자외가시부흡광도측정법 ( 생략 ) 장치및조정법 ( 생략 ) 조작법 ( 생략 ) 비흡광도 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 1) 표준품에의한확인 ( 생략 ) 2) 흡수파장에의한확인 ( 생략 ) 3) 흡광도비에의한확인 ( 생략 ) < 신설 > 정량법 ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 장치및조정법 ( 현행과같음 ) 조작법 ( 현행과같음 ) 비흡광도 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 1) 표준품에의한확인 ( 현행과같음 ) 2) 흡수파장에의한확인 ( 현행과같음 ) 3) 흡광도비에의한확인 ( 현행과같음 ) 4) 표준스펙트럼에의한확인검체의흡수스펙트럼과확인하고자하는물질의표준스펙트럼을비교하여양쪽모두에서같은파장에서같은강도의흡수를나타낼때검체가표준스펙트럼의물질과같은물질임을확인한다. 자외가시부흡광도측정법에의한확인시험에서이러한표준스펙트럼에의한확인방법이설정된의약품각조품목에대해비교대상이되는표준스펙트럼이 표준자외가시흡수스펙트럼 의항으로규정되어있다. 비교하는파장범위는표준스펙트럼에표시된범위로한다. 정량법 ( 현행과같음 )

19 현행개정안 50. 잔류용매시험법 50. 잔류용매시험법 ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 1. 분류 1 및분류 2 의용매 ( 생략 ) 1. 분류 1 및분류 2 의용매 ( 현행과같음 ) < 신설 > 2. 분류 2 및분류 3의용매장치기체크로마토그래프조작법가. 표준액의조제 1) 분류 2A 및분류 3A의용매표준액의조제가 ) 분류 2A의용매표준원액아세토니트릴, 클로로벤젠, 크멘, 시클로헥산, 1,2-디클로로에텐, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 메탄올, 메틸시클로헥산, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 자일렌을디메틸설폭시드에녹여아래표와같이희석하여분류 2A 의용매표준원액으로한다. 용매 조제농도 (mg/ml) 아세토니트릴 2 클로로벤젠 1.7 크멘 0.3 시클로헥산 16 1,2-디클로로에텐 9 디클로로메탄 3 1,4-디옥산 1.8 메탄올 14.5 메틸시클로헥산 5 테트라히드로푸란 3.5 톨루엔 4 자일렌 10.5 나 ) 분류 3A의용매표준원액아세톤, 아세트산에틸, 디에틸에테르, 2-프로판올, 아세트산이소부틸, 2-부탄올각 250 mg 씩정밀하게달아각각 10 ml 용량플라스크에넣고디메틸설폭시드를넣어 10 ml로한다. 다 ) 분류 2A 및분류 3A 용매표준액분류 2A의용매표준원액 1 ml를정확하게취해 100 ml 용량플라스크에넣고분류 3A의용매표준원액 1 ml를넣은다음물을넣어 100 ml로하여

20 현 행 개정안표준원액 (I) 으로한다. 이액 1 ml 및물 5 ml를각각취하여헤드스페이스용바이알에넣고골고루섞은것을표준액 (I) 로한다. 2) 분류 2B 및분류 3B의용매표준액의조제가 ) 분류 2B의용매표준원액클로로포름, 1,2-디메톡시에탄, 헥산, 메틸부틸케톤, 니트로메탄, 피리딘, 테트랄린, 1,1,2-트리크로로에텐을디메틸설폭시드에녹여아래표와같이희석하여분류 2B의용매표준원액으로한다. 용매 조제농도 (μg/ml) 클로로포름 60 1,2-디메톡시에탄 97 헥산 186 메틸부틸케톤 50 니트로메탄 49 피리딘 200 테트랄린 97 1,1,2-트리클로로에텐 78 나 ) 분류 3B의용매표준원액에탄올, 아세톤, t-부틸메틸에테르, 아세트산에틸, 1-부탄올각 50 mg 씩정밀하게달아각각 10 ml 용량플라스크에넣고디메틸설폭시드를넣어 10 ml 로한다. 다 ) 분류 2B 및분류 3B 용매표준액분류 2B의용매표준원액 1 ml를정확하게취해 100 ml 용량플라스크에넣고분류 3B의용매표준원액 1 ml를넣은다음물을넣어 100 ml로하여표준원액 (II) 로한다. 이액 5 ml 및물 1 ml를각각취하여헤드스페이스용바이알에넣고골고루섞은것을표준액 (Ⅱ) 로한다. 3) 성분별표준액시험방법중제 1 단계및제 2 단계시험결과에따라검출된성분에대하여표준원액 (I) 및표준원액 (Ⅱ) 의농도를참조하여각성분표준품을디메틸설폭시드에녹인다 ( 성분별로각각제조한다 ). 이액 1 ml 를정확하게취하여물을넣어희석하고단계별로제 1 단계및제 2 단계시험에서검액에서검출된농도와유사한농도로희석한다. 필요하면 의약품잔류용매기준지침의제한농도의 20 배까지희석한다. 이액 1 ml와물 5 ml를헤드스페이스용바이알에넣고골고루섞은것을각성분별표준액으로한다. 나. 검액의조제

21 현행개정안 1) 검액원액 : 검체약 250 mg을정밀하게달아물을넣어 25 ml로하여검액원액으로한다. 2) 검액 : 검체원액 5 ml와물 1 ml를헤드스페이스용바이알에넣고골고루섞은것을검액으로한다. 3) 표준액첨가검액 : 검체원액 5 ml과성분별표준원액 1 ml를헤드스페이스용바이알에넣고골고루섞은것을표준액첨가검액으로한다. 다. 기체크로마토그래프조작조건조작조건중에서칼럼의안지름및길이, 충전제의입자경, 고정상의농도, 칼럼온도및운반기체의유량은시스템적합성을얻을수있는범위내에서일부변경할수있다. 또한, 분할비는최적의감도를얻기위해변경할수있다. 다만헤드스페이스용검체도입장치및그조작조건은규정하는방법보다더좋은정확도와정밀도를얻을수있는범위내에서변경할수있다. 1) 제 1 법검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름 0.32 mm, 길이 30 m의용융실리카관의내면에기체크로마토그래프용 6 % 시아노프로필페닐 - 94 % 디메틸폴리실록산을 1.8 μm의두께로입힌다. 또는안지름 0.53 mm, 길이 30 m의관에기체크로마토그래프용 6 % 시아노프로필페닐 - 94 % 디메틸폴리실록산을 3.0 μm의두께로입힌다. 칼럼온도 : 30 로 20 분간유지한다음매분 10 씩 240 까지승온하고 240 로 20 분간유지한다. 검체도입부온도 : 140 검출기온도 : 250 운반기체 : 헬륨또는질소유량 : 약 20 cm/ 초분할비 : 약 1 : 5 헤드스페이스용검체도입장치조건 : 다음중한가지조건에따른다. 조건 1 조건 2 조건 3 평형온도 ( ) 평형시간 ( 분 ) 검체도입부와연결관온도 ( ) 헤드스페이스용바이알도입구온도 ( ) ~ ~ ~ 90 최소가압시간 ( 초 ) 주입량 (ml) 1 1 1

22 현행개정안 단, 잔류용매각성분의유출순서는다음과같다. 1. 분류 2A 및분류 3A 의용매 유출 순서 잔류용매비고 메탄올 (Methanol) 디에틸에테르 (Diethyl ether) 아세톤 (Acetone) 2- 프로판올 (2-Propanol) 아세토니트릴 (Acetonitrile) 디클로로메탄 ( M e t h y l e n e chloride) 1,2- 디클로로에텐 (trans-dichloroethe ne) 1,2- 디클로로에텐 (cis-dichloroethe ne) 아세트산에틸 (Ethyl acetate) 테트라히드로푸란 (Tetrahydrofuran ) 2- 부탄올 (2-Butanol) 시클로헥산 (Cyclohexane) 메틸시클로헥산 ( M e t h y l cyclohexane) 1,4- 디옥산 (1,4-Dioxane) 톨루엔 (Toluene) 아세트산이소부틸 ( I s o b u t y l acetate) 클로로벤젠 (Chlorobenzene) 에틸벤젠 (Ethyl benzene) m-, p- 자일렌 (m,p-xylene) 20 o- 자일렌 분류 2 분류 3 분류 3 분류 3 분류 2 분류 2 분류 2 1,2-Dichloroethene =trans-dichloroethene + cis-dichloroethene 분류 3 분류 2 분류 3 분류 3 분류 2 분류 2 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 자일렌 (Xylenes) = Ethyl benzene + m-xylene + p-xylene + o-xylene

23 현행개정안 21 (o-xylene) 크멘 (Cumene) 분류 2 2. 분류 2B 및분류 3B 의용매 유출 순서 1 잔류용매 ( 분류 2B + 3) 비고 에탄올 (Ethanol) 분류 아세톤 (Acetone) t- 부틸메틸에테르 ( M e t h y l tert-butylether) 헥산 (Hexane) 니트로메탄 (Nitromethane) 아세트산에틸 (Ethyl acetate) 클로로포름 (Chloroform) 1,2- 디메톡시에탄 (1,2-Dimethoxyethane) 1,1,2- 트리클로로에텐 (1,1,2-Trichloroethene ) 1- 부탄올 (1-Butanol) 피리딘 (Pyridine) 메틸부틸케톤 (Methylbutylketone) 테트랄린 (Tetralin) 분류 3 분류 3 분류 2 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 분류 2 시스템적합성검출의확인 : 시스템적합성용액에서각피크의신호대잡음비는 10 이상이다. 시스템의성능 : 시스템적합성용액을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때피크면적의상대표준편차는 10.0% 이하이고, 인접한피크와의분리도는 1.5 이상이다. 다만, 2-프로판올피크와아세토니트릴피크의분리도는 1.0이상이다. 시스템적합성용액 : 분석대상잔류용매를포함하여최소 3개이상의용매를선정하여표준액의제법과같이조제한다.

24 현행개정안 2) 제 2 법검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름 0.32 mm, 길이 30 m의용융실리카관의내면에기체크로마토그래프용폴리에틸렌글리콜화합물 ( 평균분자량약 15,000) 의을 0.25 μm의두께로입힌다. 또는안지름 0.53 mm, 길이 30 m의관에기체크로마토그래프용폴리에틸렌글리콜화합물 ( 평균분자량약 15,000) 을 0.25 μm 두께로입힌다. 칼럼온도 : 40 로 20 분간유지하고다음매분 6 씩 165 까지승온하고 165 로 20 분간유지한다. 검체도입부온도 : 140 검출기온도 : 250 운반기체 : 헬륨또는질소분할비 : 약 1 : 5 유량 : 약 20 cm/ 초헤드스페이스용검체도입장치조건 : 다음중한가지조건에따른다. 조건 1 조건 2 조건 3 평형온도 ( ) 평형시간 ( 분 ) 검체도입부와연결관온도 ( ) 헤드스페이스용바이알도입구온도 ( ) 최소가압시간 ( 초 ) 주입량 (ml) 단, 잔류용매각성분의유출순서는다음과같다. 1. 분류 2A 및분류 3A 의용매 유출순서 잔류용매 디에틸에테르 (Diethyl ether) 시클로헥산 (Cyclohexane) 메틸시클로헥산 ( M e t h y l cyclohexane) 아세톤 (Acetone) 테트라히드로푸란 (Tetrahydrofuran) 분류 2 분류 3 분류 2 분류 3 분류 2 5 1,2- 디클로로에텐분류 2 비고

25 현행개정안 유출순서 잔류용매 (trans-dichloroethe ne) 아세트산에틸 (Ethyl acetate) 메탄올 (Methanol) 디클로로메탄 (Methylene chloride) 2-프로판올 (2-Propanol) 1,2- 디클로로에텐 (cis-dichloroethene) 아세토니트릴 (Acetonitrile) 이소부틸아세테이트 (Isobutyl acetate) 톨루엔 (Toluene) 2-부탄올 (2-Butanol) 1,4-디옥산 (1,4-Dioxane) 에틸벤젠 (Ethyl benzene) p-자일렌 (p-xylene) m-자일렌 (m-xylene) 크멘 (Cumene) o- 자일렌 (o-xylene) 클로로벤젠 (Chlorobenzene) 비고 1,2-Dichloroethen e =trans-dichloroet hene + cis-dichloroethene 분류 3 분류 2 분류 2 분류 3 분류 2 1,2-Dichloroethene =trans-dichloroet hene + cis-dichloroethene 분류 2 분류 3 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 자일렌 (Xylenes) = Ethyl benzene + m-xylene + p-xylene + o-xylene 분류 2 분류 2 자일렌 (Xylenes) = Ethyl benzene + m-xylene + p-xylene + o-xylene 분류 2 2. 분류 2B 및분류 3B 의용매 유출순서 1 2 잔류용매 헥산 (Hexane) t-부틸메틸에테르 (Methyl tert-butylether) 비고 분류 2 분류 3

26 현행개정안 유출순서 잔류용매 아세톤 (Acetone) 아세트산에틸 (Ethyl acetate) 1,2-디메톡시에탄 (1,2-Dimethoxyethane) 에탄올 (Ethanol) 1,1,2-트리클로로에텐 (1,1,2-Trichloroethene) 클로로포름 (Chloroform) 메틸부틸케톤 (Methylbutylketone) 니트로메탄 (Nitromethane) 1-부탄올 (1-Butanol) 피리딘 (Pyridine) 테트랄린 (Tetralin) 비고분류 3 분류 3 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 분류 2 분류 2 분류 3 분류 2 분류 2 시스템적합성검출의확인 : 시스템적합성용액에서각피크의신호대잡음비는 10 이상이다. 시스템의성능 : 시스템적합성용액을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때피크면적의상대표준편차는 10.0% 이하이고, 인접한피크와의분리도는 1.5 이상이다. 다만, p-자일렌피크와 m-자일렌피크의분리도는 1.0이상이다. 시스템적합성용액 : 분석대상잔류용매를포함하여최소 3 개이상의용매를선정하여표준액의제법과같이조제한다. 4) 시험방법 < 제 1 단계시험 > 검액, 표준액 (I) 및표준액 (II) 를기체크로마토그래피조작조건제 1 법의조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여각크로마토그램으로부터피크면적을구한다. 검액중각성분의피크면적이표준액 (I) 및표준액 (II) 의각성분의피크면적보다작다. 제 2 단계시험 > 제 1 단계시험에서검액중각성분의피크면적이표준액 (I) 및표준액 (II) 의각성분의피크면적과같거나큰경우는기체크로마토그래프조작조건제 2 법으로다시시험한다. 제 1 법에따라시험하였을때확인된성분은제 2 법에따라시험하였을때검액중

27 현 행 개정안 그성분의피크면적은표준액중해당성분의피크면 적보다작다. < 제 3 단계시험 > 제 2 단계시험에서검액중해당성분의피크면적이 표준액중해당성분의피크면적과같거나큰경우는 검출된성분에대하여검액, 성분별표준액및표준액 첨가검액을가지고기체크로마토그래프조작조건제 1 법으로시험하여검액및표준액첨가검액에서의 피크면적 A T 및 A ST 로부터검액중잔류용매의양을 계산한다. 검액중잔류용매의양 (ppm) = T ST T C : 표준액의농도 (μg/ml) W : 검체채취량 (g) n : 표준원액에서부터의희석배수 2. 분류 3 의용매 ( 생략 ) 3. 분류 3 의용매 ( 현행과같음 ) 51. 적외부스펙트럼측정법 51. 적외부스펙트럼측정법 ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 장치및조정법 ( 생략 ) 장치및조정법 ( 현행과같음 ) 검체의조제및측정검체는따로규정이없는한의약검체의조제및측정검체는따로규정이없는한의약품각조에서건조하도록되어있을때는건조감량항의품각조에서건조하도록되어있을때는건조감량항의조건으로건조한것을쓴다. 검체는주된흡수대의투조건으로건조하여다음어느하나의방법에따라조과율이 5 ~ 80 % 가되도록다음어느하나의방법제및측정한다. 단, 검체량이나혼화물의양은예시대을써서만든다. 창판은염화나트륨, 브롬화칼륨등을로하며, 측정조건에도의존적이므로, 최종주된흡수쓴다. 대조는보통복광속형 (double beam type) 장대의투과율이 5 ~ 80 % 가되도록조정한다. 또한치에서는보상광로측에놓고검체와동시에측정하고, 의약품이염인경우첨가된브롬화칼륨이나염화칼륨단광속형 (single beam type) 장치에서는검체와같과의사이에염교환이일어날수있음을주의한다. 정은광로에놓고따로측정한다. 대조를정하는방법은제법이나확산반사법에서는염산염의경우원칙적으로검체조제법에따라다르며측정할때의바탕선흡수를염화칼륨을사용한다. 그외의염은페이스트법을시쓸수도있다. 의약품각조에서따로규정하는것외에험해보는등의대응이필요하다. 는보통검체의흡수스펙트럼은파수 4000 ~ 400 창판은염화나트륨, 브롬화칼륨등을쓴다. 대조는보통 cm -1 에서측정한다. 흡수스펙트럼의측정은장치의분복광속형 (double beam type) 장치에서는보상광로해능, 파수눈금및파수의정밀도를확인했을때와같측에놓고검체와동시에측정하고, 단광속형 (single 은조작조건으로한다. beam type) 장치에서는검체와같은광로에놓고따로측정한다. 대조를정하는방법은검체조제법에따

28 현 행 개정안 라다르며측정할때의바탕선흡수를쓸수도있다. 의약품각조에서따로규정하는것외에는보통검체의흡수스펙트럼은파수 4000 ~ 400 cm -1 에서측정한다. 흡수스펙트럼의측정은장치의분해능, 파수눈금및파수의정밀도를확인했을때와같은조작조건으로한다. 1) 브롬화칼륨정제법또는염화칼륨정제법 고체검체 1) 브롬화칼륨정제법또는염화칼륨정제법 고체검체 1 ~ 2 mg을마노약절구에넣고가루로하고여기에적외부스펙트럼용브롬화칼륨또는적외부스펙트럼용염화칼륨 0.10 ~ 0.20 g을넣어습기를흡수하지않도록조심하면서빨리잘갈아섞은다음정제성형기로압축하여정제로만든다. 보통같은방법으로대조브롬화칼륨정제또는염화칼륨정제를만든다. 다만필요하면 0.67 kpa 이하로감압하고정제의단위면적 (cm 2 ) 당 50 ~ 100 kn (5000 ~ kg) 의압력을 5 ~ 8 분간가하여투명한정제로만든다. 1 ~ 2 mg을마노약절구에넣고가루로하고여기에적외부스펙트럼용브롬화칼륨또는적외부스펙트럼용염화칼륨 0.10 ~ 0.20 g을넣어습기를흡수하지않도록조심하면서빨리잘갈아섞은다음정제성형기로압축하여정제로만든다. 검체나브롬화칼륨, 염화칼륨의양은정제의크기등에의해조정한다. 보통같은방법으로대조브롬화칼륨정제또는염화칼륨정제를만든다. 다만필요하면 0.67 kpa 이하로감압하고정제의단위면적 (cm 2 ) 당 50 ~ 100 kn (5000 ~ kg) 의압력을 5 ~ 8 분간가하여투명한 2) 용액법 ( 생략 ) 3) 페이스트법 ( 생략 ) 4) 액막법 ( 液膜法 ) ( 생략 ) 5) 박막법 ( 薄膜法 ) ( 생략 ) 6) 기체검체측정법 ( 생략 ) 7) ATR법 ( 생략 ) 8) 확산반사법 ( 생략 ) 정제로만든다. 2) 용액법 ( 현행과같음 ) 3) 페이스트법 ( 현행과같음 ) 4) 액막법 ( 液膜法 ) ( 현행과같음 ) 5) 박막법 ( 薄膜法 ) ( 현행과같음 ) 6) 기체검체측정법 ( 현행과같음 ) 7) ATR법 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 8) 확산반사법 ( 현행과같음 ) 1) 표준품에의한확인 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) < 신설 > 1) 표준품에의한확인 ( 현행과같음 ) 2) 표준스펙트럼에의한확인 검체의흡수스펙트럼과 확인하고자하는물질의표준스펙트럼을비교하여양쪽 이동일파수에서동일한강도의흡수를가지는경우 시료와확인하고자하는물질의동일성이확인된다. 또한고체시료의파수스펙트럼이표준스펙트럼과다른 경우의취급이의약품각조에규정되어있는경우에는 규정된조건으로시료를처리한후재측정한다. 의약 품각조의적외선스펙트럼측정법에의해확인시험이규 정된각품목에대해보통파수 4000 ~ 400 cm -1 에 서의표준스펙트럼을 표준적외흡수스펙트럼 의항 에나타낸다. 다만, 흡수파수에의한확인법이규정된 품목을제외한다. 2) 흡수파수에의한확인 ( 생략 ) 3) 흡수파수에의한확인 ( 현행과같음 )

29 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 일반시험법신설 ( 안 ) - 의견수렴용 일반정보항에수재되어있던겉보기밀도및탭밀도측정법을일반시험법으로이기할예정이다. 또, 일반 정보항에입도측정법으로수재되어있던광학현미경법과체분극법을나누어수재하는등총 17 개일반시 험법에대하여그초안을마련하였으며이에대한많은의견을수렴하고자한다. 겉보기밀도및탭밀도측정법 ρ B = M / V 0 겉보기밀도및탭밀도측정법은각각의분말상의약품을성기게충전한때와탭 (tap) 충전한때의겉보기밀도를측정하는방법이다. 성기게충전하는것은용기중에분체를눌러다지지않고느슨하게충전하는것이며탭충전하는것은분체를충전한용기를일정한높이에서일정한속도로반복하여낙하시켜용기중의분체의용적이거의일정하게될때까지치밀하게충전하는것이다. 겉보기밀도는단위용적당질량 (g/ml) 으로표시한다. 또한겉보기밀도는분체의충전성, 압축성, 유동성등의척도가되는특성값의하나이며충전방법과이력에의하여영향을받으므로측정조건을기재한다. 겉보기밀도겉보기밀도는용기중에분체를눌러다지지않고느슨하게충전하여얻어지는겉보기밀도이다. 겉보기밀도는메스실린더에넣은질량을알고있는분체검체의겉보기부피를측정하는방법 ( 제 1 법 ) 또는용량을알고있는용기에충전한분체의질량을측정하는방법 ( 제 2 법 ) 의어느한방법으로측정한다. 제 1 법정질량법따로규정이없는한보존중에형성된응집체를부수기위하여시험에필요한양의검체를 16 호 (1000 μm) 체를통과하여조제한다. 약 30 g의검체를정밀하게달아건조한 100 ml 유리제메스실린더 ( 눈금 : 1 ml) 에눌러다지지않고넣고필요하면분체층의윗면을눌러다지지않게고른다음눈금의최소단위까지용적을읽어다음식으로겉보기밀도 ρ B 를계산한다. ρ B : 정질량법에의한겉보기밀도 (g/ml) M : 분체의질량 (g) V 0 : 분체의겉보기부피 (ml) 측정을 3 회반복하여그평균값을구하여정질량법에의한겉보기밀도로한다. 단지검체약 30 g가과다할때는용적이 ml가되도록검체의질량을조정한다. 제 2 법정용량법따로규정이없는한보존중에형성된응집체를부수기위하여시험에필요한양의검체를 16 호 (1000 μm) 체를통과하여조제한다. 검체를용량 V, 질량 M 0 의스테인레스강제측정용용기내에넘칠때까지흘려내린다. 다음에용기의상부에퇴적된과잉량의분체를슬라이드글라스등을써서주의깊게흘려내린다. 용기의측면에부착한모든검체를솔등을써서제거한다음전체의질량 M t 을달고다음식으로겉보기밀도 ρ B 를계산한다. ρ B = ( M t - M 0 ) / V ρ B : 정용량법에의한겉보기밀도 (g/ml) M t : 분체와측정용용기의합계질량 (g) M 0 : 측정용용기의질량 (g) V : 측정용용기의용량 (ml) 측정을 3 회반복하고그평균값을구하여정용량

30 법에의한겉보기밀도로한다. 겉보기밀도및탭밀도측정용용기 ml 유리제메스실린더 ( 눈금 : 1 ml) 를써서동일하게조작한다. 탭할때탭밀도시험기의안정성이흐트러지지않도록지지대및메스실린더의질량에주의한다. 검체를충전한유리제메스실린더를탭밀도시험기에조립한다음각각의시험기에서규정한측정조건 ( 탭속도및낙하높이 ) 으로시험한다. 측정조건은반드시기록해둔다. 따로규정이없는한연속하여측정한 2 회의측정값의차가앞의측정값에대하여 2 % 미만이될때까지 50 회또는 1 분간씩탭을반복하여이때의최종용적 V f 를구하여다음식으로탭밀도 ρ T 를계산한다. ρ T = M / V f ρ T : 정질량법에의한탭밀도 (g/ml) M : 분체의질량 (g) V f : 분체의최종겉보기부피 (ml) 보조원통숫자는 mm를나타낸다. 이그림은 100 ml 용기및보조원통의한예이다. 그림 1. 정용량법에의한겉보기밀도및탭밀도측정용용기탭밀도탭밀도는분체검체를넣은측정용용기를기계적으로탭하여얻은겉보기밀도이다. 탭밀도의측정은용기에넣은질량을알고있는분체검체를탭충전했을때의용적을측정하는방법 ( 제1법 ) 또는용량을알고있는용기에탭충전한분체의질량을측정하는방법 ( 제2법 ) 의어느한방법으로측정한다. 제 1 법정질량법따로규정이없는한보존중에형성된응집체를부수기위하여시험에필요한양의검체를 16 호 (1000 μm) 또는 22 호 (710 μm) 체를통과하여조제한다. 약 100 g의검체를정밀하게달아 250 ml 유리제메스실린더 ( 눈금 : 2 ml) 에눌러다지지않고넣는다. 검체량이충분하지않을때는 100 측정을 3 회반복하여그평균값을구하여정질량법에의한탭밀도로한다. 제 2 법정용량법따로규정이없는한보존중에형성된응집체를부수기위하여시험에필요한양의검체를 16 호 (1000 μm) 체를통과하여조제한다. 질량 M 0 및용량 V를알고있는스테인레스강제측정용용기에보조원통 ( 그림1) 을장착하고그용기내에충분한양의검체를주입한다. 일정한낙하높이로한적절한탭밀도시험기에용기를조립한다음각각의시험기에서규정한탭속도및탭회수로시험한다. 다음에보조원통을꺼내고용기의상부에퇴적된과잉량의분체를슬라이드글라스등을써서주의깊게흘려내린다. 용기의측면에부착한모든검체를솔등을써서제거한다음전체의질량 M t 을달고다음식으로탭밀도 ρ T 를계산한다. ρ T = ( M t - M 0 ) / V ρ T : 정용량법에의한탭밀도 (g/ml) M t : 분체와측정용용기의합계질량 (g) M 0 : 측정용용기의질량 (g)

31 V : 측정용용기의용량 (ml) 측정은 3 회반복하여그평균값및상대표준편차를구한다. 상대표준편차가 2 % 이상일때는탭회수를변경하여시험을반복한다. 주의 : 이측정법에는감도 0.1 g의천칭을쓴다. 광학현미경법 광학현미경법은광학현미경을써서육안또는현미경사진으로직접개개입자의외관및형상을관찰하고크기를측정하는방법이다. 또한이방법으로입자경분포를구할수있다. 이방법에따르면복수의다른종류의고체입자가혼재할때도광학적으로인식이가능하면각각의고체입자의입도측정이가능하다. 또한입자경분포를구할때화상해석등에의한데이터처리도유용하다. 입자평가를위한광학현미경법은일반적으로 1 μm 보다큰입자에적용한다. 하한은현미경의해석능에달려있다. 상한은그다지명확하지않으며큰입자의입자경을평가할때의어려움에따라그영향을받는다. 광학현미경법의적용범위외의입자평가에대하여는몇개의별법이이용된다. 광학현미경법은비구형입자의평가에특히유용하다. 이방법은보다신속하고범용적인방법의교정을위한기초적방법으로서도도움이된다. 장치안정하고방진대책이되어있는현미경을쓴다. 현미경의종합배율 ( 대물렌즈배율 접안렌즈배율 기타확대부품의배율 ) 은검체중가장작은입자를적절하게평가하기에충분한크기여야한다. 대물렌즈의최대개구수는각각의배율에맞게결정한다. 편광필터를적절한분석기기나검판과조합하여쓸수있다. 비교적좁은분광투과특성을가지는유색유리필터는아크로마트대물렌즈와같이쓰이지만아포크로마트대물렌즈와같이쓰는것이더바람직하며현미경사진에서의색을나타내기위하여필요하다. 적어도구면수차를보정한콘덴서를광원과같이현미경의서브스테이지내에서써야한다. 콘덴서의개구수는사용조건에서대물렌즈의개구수와조화되어야한다. 즉개구수는콘덴서의조리개와이머션오일의존재여하에영향을받는다. 조정광학계의모든장치가정확하게조정되어있고초점이적절하게조절되어있는것이필요하다. 장치의초점조절은쓰는현미경에지정된방법에따른다. 엄밀한축조정도권장한다. 1) 조명양호한조명을위해시야전체에미치는빛의강도가균일하고조절이가능해야한다. 이를위하여쾰러 (Kohler) 조명이좋다. 착색입자에대

32 하여는입자영상의콘트라스트와상의세부를조절할수있도록필터의색을선택한다. 2) 육안에의한평가배율과렌즈의개구수는평가해야할입자의영상을적절히확인할수있도록충분히높인다. 접안마이크로미터를교정하기위하여미리교정한대물마이크로미터를써서실제의배율을결정한다. 입자상이접안마이크로미터에서적어도 10 눈금이되도록충분히높은배율이면오차를줄일수있다. 각각의대물마이크로미터는각각따로교정한다. 접안스케일을교정하기위하여대물마이크로미터의스케일과접안스케일이평행이되게한다. 이렇게하여접안용스테이지의눈금간격의길이를정확히측정할수있다. 입자경을측정할때는접안마이크로미터를접안렌즈의조리개의위치에넣은다음, 대물마이크로미터를스테이지의중앙에놓고고정한다. 접안렌즈를현미경통에장착하고대물마이크로미터의눈금에초점을맞춘다. 다음이들 2 개의마이크로미터의눈금의간격을비교하여이렌즈의조합에서의접안렌즈의 1 눈금에상당하는검체의크기를다음식으로계산한다. 접안렌즈 1 눈금에상당하는검체의크기 (μm) = 대물마이크로미터의길이 (μm) / 접안마이크로미터의눈금수대물마이크로미터를제거하고검체를스테이지에펴고초점을맞춘다음측정한접안렌즈의눈금수를가지고입자경을측정한다. 또한입자경분포폭이넓은검체를평가할때는몇개의다른배율이필요하다. 3) 사진에의한평가사진으로입자경을측정할때는필름면에피사체의초점이확실하게맞도록주의하여야한다. 충분한감도, 해상력및콘트라스트를가지는사진필름을쓰고교정된대물마이크로미터의사진을따로촬영하여실제의배율을측정한다. 검체및배율측정을위한촬영에있어서는노출과현상및인화처리는동일하게한다. 사진에서의입자의겉보기크기는현미경의해상력과마찬가지로노출, 현상및인화의영향을받는다. 검체의조제고정제는검체의물리적특성에따라선택한다. 검체가장자리의세부까지확실하게확인할 수있도록검체와고정제사이에는충분하지만과도하지않는정도의콘트라스트가필요하다. 입자를평판위에놓고개개의입자를식별하기위하여적절히분산시킨다. 또한입자는검체중의입자경분포를대표해야하며마운트의조제중에변화하지않아야한다. 고정제를선택할때는검체의용해성도고려한다. 관찰결정성의평가검체의결정성은의약품각조중에기재되어있는결정성에관한조건에적합한지의여부를결정하기위하여평가한다. 각조에따로규정이없는한깨끗한슬라이드글라스위에몇개의검체입자를광물유중에고정한다. 편광현미경을써서검체를관찰한다. 검체가결정성일때는현미경의스테이지를회전하면입자는복굴절 ( 간섭색 ) 과암시야를나타낸다. 현미경에의한입자경의한계시험적당량 ( 예를들면분체의경우 mg) 의검체를달아필요하면분산제를넣고검체가용해하지않는적절한분산매 10 ml에현탁시킨다. 입자밀도와근사하거나또는일치하는밀도를가지는분산매중에현탁시킨다음적절하게흔들어섞어입자가균일한혼탁액을얻는다. 균일한현탁액의일부를적당한계수셀에넣고, 분체일때는현미경하에서 10 μg 이상의검체에상당하는면적을주사하고정해진바의한계입자경보다큰최대길이를가지는모든입자수를센다. 한계입자경과이를초과하는입자의허용개수는의약품각조에명시되어있다. 입자경의평가입자경의측정은입자형상에따라복잡하게변화하므로평가할입자개수는측정된수치의신뢰성이통계적으로보증하는데충분한수가되도록한다. 1) 불규칙한형상의입자일때입자경에관한여러가지의정의가있다. 일반적으로불규칙한형상의입자에대하여는입자경을평가할때입자형상에관한정보와마찬가지로측정한입자경의종류에관한정보도포함되도록한다. 일반적으로입자경측정에는다음과같이정의된용어를쓴다 ( 그림 1).

33 등방상 침상 판상 박판상 주상 옆판상 그림 2. 일반적으로쓰이는입자형상의기술 그림 1. 입자경의정의 1) 페레 (Feret) 경 ( 정방향접선경 ) : 무작위로배향한입자를사이에두고각입자에대하여평형선을그어서그사이의길이 2) 마틴 (Martin) 경 ( 정방향면적등분경 ) : 정방형에서투영면적을 2 등분하는선분의길이 3) 헤이우드 (Heywood) 경 ( 투영면적원상당경 ) : 입자와동일한투영면적을가지는원의지름 4) 장축경 : 접안스케일에대하여평행으로배향한입자의가장자리에서다른한쪽의가장자리까지의최대길이 5) 단축경 : 장축경에대하여직각으로측정한입자의최대길이입자형상의평가불규칙한형상의입자에대하여는입자경의평가에입자형상에관한정보도포함되어야한다. 검체의균일성은적당한배율을써서검사한다. 아래의설명은입자의형상에관하여일반적으로쓰이고있는용어의정의이다 ( 그림2). 1) 침상 : 단축경과두께가거의같고가늘고긴침상의입자 2) 주상 : 침상입자보다긴단축경과두께를가지고길고얇은입자 3) 박판상 : 장축경과단축경이거의같고얇고편평한입자 4) 판상 : 장축경과단축경이거의같으나박판상보다두꺼운편평한입자 5) 엽편상 : 길고얇은엽편상의입자 6) 등방상 : 장축경, 단축경및두께가거의같은입자. 입방체상및구상입자를포함한다. 일반적관찰보통 1 개의입자를최소개별단위로본다. 입자는액체또는반고체상의액적, 단결정또는다결정, 비정질또는응집체라도된다. 복수의입자가응집되어있어도된다. 응집의정도는다음과같은용어로나타낸다. 1) 층상 : 판상입자가겹쳐쌓인것 2) 아그리게이트 (Aggeregate) : 부착성입자의덩어리 3) 아글로메레이트 (Agglomerate) : 융해또는고결한입자 4) 콘글로메레이트 (Conglomerate) : 2 종류이상의입자의혼합물 5) 스페룰라이트 (Spherulite) : 방사상의클러스터 6) 드루시 (Drusy) : 소립자를덮어쓴입자입자의상태는다음의용어로표시한다. 1) 각 연 : 뾰족한, 둥근, 매끄러운, 예리한, 파쇄상의 2) 색투명도 : 착색하고있는 ( 적당한색필터를쓴경우 ), 투명한, 반투명의, 불투명한 3) 입자간의얽어짐 : 맞물린 (occlusion), 포합 (inclusion) 한표면특성은다음의용어로표시한다. 1) 균열 : 부분적으로갈라진, 부서진갈라진틈이있는 2) 평활함 : 불규칙성, 요철이나돌출부가없는 3) 다공성 : 개구부와통로가있는 4) 조잡한 : 요철이있는, 평탄하지않는, 매끄럽지않은 5) 오목한 : 작은오목들어간자국이있는 1) 입자경측정, 검체량및데이터해석에관한그밖의정보는예를들어 ISO 9276에서이용할수있다.

34 디메틸아닐린시험법 제 1 법이약약 0.5 g 을정밀하게달아물 30 ml 와내부표준액 1 ml 를넣은다음용액온도를 로하여수산화나트륨용액 1 ml 를넣고완 전히녹인다음트리메틸펜탄시액 2 ml 를넣고 2 분간흔들어섞고방치하여위의맑은액을검액으로 한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아 0.1 mol/l 염산시액 4 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한다. 이액 1 ml 를정확하게취하여물을넣 어정확하게 100 ml 로한다. 이액 1 ml 를정확하 게취하여물 30 ml 를넣고, 내부표준액 1 ml, 수 산화나트륨용액 1 ml 및트리메틸펜탄시액 2 ml 를 넣고 2 분간흔들어섞고방치하여위의맑은액을 표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가 지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시 험하여검액과표준액중의내부표준물질의피크면적 에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구 한다. 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린함량 S 이약의채취량 mg 디에틸아닐린 50 mg 을정밀하게달아 0.1 mol/l 염산시액 4 ml 및물을넣어 50 ml 로 한다. 이액 1 ml 를정확하게취하여물로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼 럼 : 안지름약 0.32 mm, 길이약 25 m 인용 융실리카관의내면에 50 % 메틸 -50 % 페닐을 0.52 μm 두께로입힌다. 칼럼온도 : 처음 5 분간 150 로유지한다음매분 20 씩 275 까지승온하고 3 분간유지한다. 검체도입부온도 : 220 검출기온도 : 300 운반기체 : 헬륨 유 량 : 디메틸아닐린및디에틸아닐린의유지시간 이각각약 3.6 분및 5.0 분이되도록조정한다. 분할비 : 1 : 20 제 2 법 이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를넣은 다음 1 분동안강하게흔들어섞고필요하면원심 분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메 틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2 ml 를 넣고물을넣어 50 ml 로한다. 이액 5 ml 를정확 하게취하여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나 트륨시액 5 ml 를넣고, 내부표준액 1 ml 를넣은 다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액 으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다 음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여 검액과표준액중의내부표준물질의피크면적에대한 디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다. 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린함량 S 이약의채취량 mg 나프탈렌 50 mg 을정밀하게달아시클 로헥산을넣어녹여 50 ml 로한다. 이액 5 ml 를 정확하게취하여시클로헥산으로 100 ml 로한액을 내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기 체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크 로마토그래프용 50 % 페닐 -50 % 메틸폴리실록산 을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분

35 레이저회절법을이용한입자경측정법 입자경분포의측정에이용되는레이저회절법은입자가단색광의광속에노출될때생성되는회절패턴을분석함으로써이루어진다. 역사적으로초기레이저회절장치는작은각도로빛을산란시키는것에만사용되었다. 그러나이방법은보다넓은각도범위에걸친레이저광산란및프라운호퍼근사및이상회절외에도미 (Mie) 이론의적용을포함하는것으로확대되었다. 이방법은단일입자에의한산란과일차입자의클러스터, 즉아글로메레이트 (agglomerate, 융해또는고결입자 ) 또는아그리게이트 (aggregate, 부착성입자덩어리 ) 에의한산란을구별할수없다. 대부분의입자상검체는아글로메레이트또는아그리게이트를포함하고있다. 또한측정자는일반적으로일차입자의입자경분포에관심이있기때문에클러스터는일반적으로측정전에일차입자로분산된다. 이방법이광학모델에서구형입자라는가정하에서비구형입자에대한구상당입자경분포를구한다. 그결과얻게된입자경분포는다른물리적원리 ( 예, 침강법, 체분급법 ) 에따른방법으로구한분포와는다를수있다. 이장에서는각도에따른광산란패턴분석에의한다양한분산계 ( 예, 분말, 스프레이, 에어로졸, 현탁액, 에멀전및액체중의기포 ) 의입자경분포측정법에대한것으로특정제품의입자경을측정하기위한특정요구사항에대한것은아니다. 원리검체를적절한액체또는기체중에적정한농도로분산시키고단색광 ( 보통은레이저광 ) 빔을가로질러통과시킨다. 입자에의해다양한각도로산란된빛은여러소자를가진검출기로측정된다. 산란패턴은수치화되어다음분석을위해기록된다. 그후에이러한수치는적절한광학모델과수학적방법을이용하여불연속적인입자경구분별체적분률을구하기위해변환되고체적기준의입자경분포를구한다. 장치장치는전기적잡음, 기계적진동, 온도변화, 습도또는직사광선에의해영향을받지않는환경에설치한다. 레이저회절장치의구성예는그림 1 과같다. 다른구성의장치를사용할수있다. 1: 흡광도 (Obscuration) 검출기 7: 레이저광원 2: 산란광 8: 빔조정부 3: 직사광 9: 렌즈 4의유효거리 4: 푸리에렌즈 10: 여러소자를가진검출기 5: 렌즈 4로들어오지않는산란광 11: 렌즈 4의초점거리 6: 입자집단그림 1. 레이저회절장치의구성예장치는레이저광원, 광속처리용렌즈, 검체측정부 ( 또는셀 ), 푸리에렌즈및산란광패턴측정을위한여러소자를가진검출기로구성된다. 산란광데이터를체적기준분포와이와관련된데이터분석및기록용으로변환하기위한데이터처리기능도필요하다. 입자는 2 개의위치에서레이저빔속에둘수있다. 일반적인경우입자는집광렌즈앞이나유효거리내에있는평행빔에둔다. 이른바역변환푸리에광학계의경우, 입자는집광렌즈후방의집광빔에둔다. 일반적인장치의장점은검체의합리적인푸리에형장치에서는광로길이가매우짧지만넓은각도에서산란광을측정할수있기때문에서브미크론영역의입자가존재하는경우에유용하다. 입사광과분산된입자군은서로영향을주어다양한각도에서서로다른빛의강도를가지는산란패턴이발생한다. 직사광과산란광으로이루어지는각도의빛강도분포는 1 개의렌즈또는여러개의렌즈에의해여러소자를가진검출기에집광된다. 이러한렌즈에의해광속중에있는입자의위치에의존하지않는산란패턴이발생한다. 따라서연속적인각도의빛강도분포는연속적인검출기소자위에서이산적인공간강도분포로변환된다. 측정된입자군에대한산란패턴은임의의상대적위치에있는개별단일산란입자에서얻은산란패턴의총합과동일하다고가정한다. 여기에서극히한정된각도범위의산란광만이렌즈, 즉검출기에의해집광되는것에주의해야한다. 측정법의예비적검토레이저회절에의한입자경의측

36 정에서는이용하는장치및검체가시험조건 ( 예, 분산매, 검체분산체의조제방법 ) 의변동을제한할수있도록주의깊게관리된다면서브미크론영역에서도재현성있는데이터를얻을수있다. 레이저회절법에의한입자경측정은지금까지대략 0.1 μm 3 mm 범위에있는입자에한정되었다. 렌즈및장치설계의발전으로최신장치의측정대상은이범위이상으로확대되었다. 용도에따라적절한밸리데이션데이터로입증하여이방법을적용할수있다. 샘플링샘플링법은입자경측정에필요한용량의검체대표부분을채취하는데적절해야한다. 회전식축분법이나원추사분법과같은검체분할방법을사용할수있다. 분산법의평가입자경범위및입자형상을평가하기위해측정대상이되는검체에대해미리육안또는현미경을이용하여검사한다. 분산법은측정목적에맞게해야한다. 즉목적에따라클러스터를최대한일차입자로분산시키는것이더바람직할수도있고, 반대로클러스터를가능한그대로의상태로유지하는것이바람직할수도있다. 이런의미에서대상입자는일차입자또는클러스터중하나이다. 측정법의확립의경우, 입자가분쇄되지는않았는지반대로입자또는클러스터의분산이충분한지확인하는것이매우중요하다. 이것은일반적으로분산에너지를변화시키고입자경분포의변화를모니터하여수행할수있다. 검체가충분히분산되어있고입자를파손하기어렵거나용해되지않는경우에는측정된입자경분포의유의한변화는인정되지않는다. 또한원료의제조공정 ( 예, 결정화, 제분 ) 이변경되면측정법의적합성을현미경비교등을통해검증해야한다. 스프레이, 에어로졸, 액체중의기포는샘플링이나희석을하면일반적으로입자경분포가변화하므로이런한농도가적정하다면직접측정해야한다. 현탁액, 페이스트, 분말등다른분산계의경우, 대표검체는적절한액체로분산하여얻을수있다. 클러스터를무너뜨리고분산을안정화하기위해분산제 ( 습윤제, 안정제 ) 또는기계적인힘 ( 교반, 초음파처리 ) 이자주이용된다. 이러한액체분산계는일반적으로광학적측정셀, 교반기와초음파처리기가부속된분산통, 펌프및배관으로구성된순환시스템 이가장자주이용된다. 극히소량의검체밖에사용할수없는경우또는특수한분산액을사용하는경우에는비순환성교반셀이유용하다. 기계적인힘에의해입자를분산시키는적절한건식분말용분산기를이용하면건조분말을에어로졸로바꿀수도있다. 일반적으로분산기는압축기체의에너지또는진공과의압력차에의해입자를에어로졸에분산시킨다. 분산기중에어로졸은측정영역을통과하여일반적으로입자를포집하는진공장치의입구로수송된다. 그러나자유유동이있는조대입자 (coarser particles) 또는과립은중력효과에의해입자의적절한분산을확보할수있다. 검체의최대입자경이장치의측정범위를초과하는경우, 너무큰입자는체분급법으로제거할수있고이경우제거된입자의질량과백분율을기록해야한다. 그러나미리체분급법으로선별한후에는별도로입증할수있는방법이없다면그검체는더이상대표적이지않다는점에유의해야한다. 액체중의분산최적화분말을분산하기위해사용하는액체, 계면활성제및분산제는다음조건을충족해야한다. 1) 레이저광의파장에서투명하고기본적으로기포와입자를포함하지않아야한다. 2) 검체입자와는다른굴절률을가지고있어야한다. 3) 검체입자에대해비용매이어야한다 ( 순수한액체또는미리여과한포화용액 ). 4) 검체입자의입자경을변화시키지않아야한다 ( 예를들어용해도, 용해촉진또는재결정효과에의한 ). 5) 안정된분산계를쉽게얻을수있어야한다. 6) 장치에이용되는부품 (O-링, 가스켓, 튜브등 ) 과의적합성이좋아야한다. 7) 재순환, 교반및여과를가능하게하기위한적절한점성을가지고있어야한다. 계면활성제나분산제는입자를적시고분산을안정화하기위해종종사용된다. 검체가약산성이나약염기성물질인경우에는분산액을각각낮은 ph 또는높은 ph로완충하는것이적절한분산제선택에도움이된다. 육안또는현미경으로관찰하여분산액의특성에대해미리확인해둘수있다. 충분히혼합된저장분

37 산액에서검체를소분할수도있다. 이러한저장분산액은유리막대, 주걱또는볼텍스믹서등을이용하여혼합하면서검체에액체를부으면서조제한다. 저장분산액의제조시에는대표검체가확실하게소분될수있도록하며또한, 큰입자의침강이일어나지않도록주의해야한다. 따라서검체의페이스트를제조하거나교반하에서균일한현탁상태를유지하면서빠르게샘플링을실시한다. 기체중의분산최적화스프레이또는건조분말분산계에는기름, 물및입자상물질을포함하지않는압축기체를사용한다. 압축기체중의이러한이물질을제거하기위해필터가있는건조기를사용할수있다. 배출공기가측정을방해하지않도록흡입부는측정위치에서멀리두어야한다. 농도범위의결정검출기의 S/N 비가기준이상이되기위해서는분산체중의입자농도는최저수준이상이어야한다. 농도범위는레이저광의빔폭, 측정영역의광로길이, 입자의광학적성질및검출기소자의감도에의해영향을받는다. 위의요인을고려하여모든시료에대해적절한농도범위를결정하기위해서는몇가지다른입자농도로측정해야한다 ( 참고 : 일반적으로장치가다르면입자농도는다른스케일및명칭으로나타낸다 [ 예를들어흡광도 (obscuration), 광학농도, 전체질량에비례한수치 (proportional number of total mass)]. 측정시간의결정측정시간, 검출기의읽는시간및빈도는요구되는측정정밀성에따라실험적으로결정된다. 일반적으로 1 회측정시간내에짧은시간간격으로여러번검출기의스캔또는스윕 (sweep) 이이루어진다. 적정한광학모델의선택때로는다른근사이론이산란행렬매트릭스의계산에적용되는경우도있지만대부분의장치는프라운호퍼또는미산란이론을이용하고있다. 이론모델의선택은측정용도나검체에관한다양한가정 ( 입자경, 흡광도, 굴절률, 표면의거친정도, 결정의배향성, 혼합물의유무등 ) 에따른다. 굴절률의값 ( 사용한파장에대한실수부와허수부 ) 이정확히판명되지않은경우에는프라운호퍼의근사나굴절률의실제적인추정치를이용한미산란이론을이용할수있다. 전자는단순하며굴절률값을이용할필요가없다는장점을가지고있다. 이에비해후자는일반적으로작은입자에대해서는 편차가적은입자경분포를얻을수있다. 예를들어상당한양의투명한작은입자를포함하는검체에대해프라운호퍼모델을이용하는경우에는실제보다많은소립자가계산된다. 복소굴절률의실수부와허수부에관해가정된값의약간의차이가측정된입자경분포에유의한차이를낼수있기때문에추적가능한결과를얻기위해서는이용한굴절률값을기록해두어야한다. 굴절률의허수부의작은값 ( 약 i) 은입자표면의거친정도에따른흡광도를보정하는데자주사용된다. 일반적으로구조인자 ( 예를들어형상, 표면의거친정도, 공극률 ) 와마찬가지로검체의광학적성질은최종결과에영향을미친다는점에유의해야한다. 밸리데이션일반적으로기기분석에서어떤조작절차의타당성은그특이성, 직선성, 범위, 정확성, 정밀성및완건성을평가하여검증한다. 레이저회절에의한입자경분석에서는검체에혼입된이물질을식별할수없고현미경법에의한보완적인뒷받침이없으면분산입자와그아글로메레이트를식별할수없기때문에시험법밸리데이션에서정의되는것같은의미에서의특이성은적용할수없다 ( 농도와반응강도사이의선형관계또는내삽을위한수학적모델을찾는것은입자경분석에적용할수없다. 직선성을평가하는것보다측정결과가유의하게변화하지않는농도범위를정의하는것이오히려이방법에서는더필요하다 ). 그범위를초과하는농도에서는다중산란에의한오차가발생하는것에비해그범위를밑도는농도에서는낮은 S/N 비에의한오차가발생한다. 이범위는대부분의경우장치의하드웨어에따른다. 측정의정밀성은반복측정에의해평가되는반면정확성은장치의적절한적합성평가및현미경법과의비교를통해확인해야한다. 요구되는반복성 ( 병행정밀성 ) 은측정목적에의존하는것에비해이방법에서실제로달성할수있는반복성은주로검체특성 ( 분쇄유무, 딱딱하거나부서지기쉬운정도, 입자경분포폭등 ) 에따른다. 검체의조제법이다른경우의반복성은물질에의해변화할가능성이크기때문에여기에서는강제력이있는형태로한계를설정할수없다. 그러나분포의중앙값 ( 예를들어 x 50 ) 에대해상대표준편차 RSD (%) 10 % [n = 6] 와같은반복성에관한허용기준을정하는것이좋다. 분포의양측값 ( 예를들어 x 10

38 및 x 90 ) 은 RSD 15 % [n = 6] 와같이허용기준보다완화된다. 10 μm 이하의입자에서이러한값을 2 배로할필요가있다. 분산매및분산력의선택및최적화시에는완건성을시험해두는것도좋다. 분산에너지의변화는입자경분포의변화에의해모니터링해도무방하다. 측정측정전의주의사항 1) 레이저의직접광및반사광을절대로바로보지않는다. 2) 용매의인화또는분진폭발을방지하기위해모든장비부품은접지한다. 3) 장치의설정상황 ( 예를들어웜업 (warm-up), 필요측정범위와렌즈, 렌즈의유효거리, 검출기의위치, 직사광선이닿지않을것 ) 을점검해야한다. 4) 습식분산의경우에는기포, 액체의증발, 분산액중의슈리렌 (schlieren) 이나다른불균일한상태를피해야한다. 마찬가지로건식분산의경우에는입자분산장치에서부적절한매스플로우 (mass-flow) 나난류를피해야한다. 이러한영향은잘못된입자경분포의원인이된다. 분산검체의광산란측정장치광학계의초점및축조정을적절히실시한다음검체를측정할때와동일한방법을이용하여입자를포함하지않는분산매에대한공시험을실시해야한다. 백그라운드신호는적절한역치이하이어야한다. 검출기의데이터는시료에대해얻은데이터에서나중에그것들을빼기위해보관된다. 분산검체는개발된측정법에따라측정된다. 각검출기소자는신호의평균을계산하며경우에따라서는표준편차도구한다. 각검출기소자에서신호의크기는검출면적, 광도및양자효율에따른다. 렌즈의초점거리와함께검출기소자의좌표 ( 크기및위치 ) 에의해각소자의산란각범위가결정된다. 대부분의장치에서는산란하지않는중심부의레이저빔강도도측정하고있다. 공시험시의강도에대한분산검체의강도비는산란광의비율, 즉입자농도를나타낸다. 산란패턴의입자경분포로변환이역연산단계는어떤입자경분포에관한산란패턴의계산의역수이다. 대부분의알고리즘은구형입자에의한산란에대한수학적해석을실시하기때문에입자를구형으 로가정하는것은특히중요하다. 또한측정된데이터는항상몇가지임의오차와계통오차를포함하고있는데이것은입자경분포의가치를저하시킬수있다. 따라서시판장치에서사용할수있는몇가지수학적방법이개발되었다. 이러한방법은산란패턴의측정값과계산값사이의가중편차 ( 예를들어최소제곱법 ), 몇가지제약조건 ( 예를들어입자량은마이너스가되지않아야한다 ), 입자경분포곡선의평활화 (smoothing) 중어느것또는모두를포함한다. 이용한알고리즘은각장치의제조사및기종별로특정된다. 장치간알고리즘이다르면계산된입자경분포에차이가날수있다. 반복횟수각각의검체조제별로필요한반복측정횟수는요구되는측정정밀성에따른다. 어떤물질에대해특이적측정법이있는경우, 반복횟수를지정하는것을권장한다. 결과의기록일반적으로입자경분포의데이터는누적아래분포및 / 또는부피기준누적밀도분포로기록한다. 입자경을나타내는데기호 x를사용하고입자경은부피상당구의직경으로정의한다. Q 3 (x) 는입자경 x에서누적아래분포율을나타낸다. 그림으로표시하는경우에는 x를가로축에, 종속변수인 Q 3 (x) 를세로축으로한다. 가장일반적인특성값은입자경분포곡선에서내삽에의해계산된다. 자주사용되는것은누적아래분포에서 10 %, 50 %, 90 % 의입자경 ( 각각 x 10, x 50, x 90 으로표시 ) 이다. x 50 은중앙입자경으로알려져있다. 기호 d도입자경을나타내는데널리사용되고있기때문에 x 대신 d를사용해도무방하다. 또한검체, 검체의조제법, 분산조건, 셀종류에관한충분한정보를얻어야한다. 측정결과는장치, 데이터분석용프로그램, 이용한광학모델에따르므로상세내용을제시해야한다. 장치의성능관리장치와검체에따라장치의성능평가를적절한빈도로실시한다. 교정레이저회절시스템은이상화된입자특성을가정하고있지만레이저광산란의기본원리에근거한다. 따라서엄밀한의미에서의교정은필요하지않다. 그럼에도불구하고장치가제대로작동하고있는지확인할필요가있다. 이것은사회적으로널리사용되는인증표준물질을이용하여실시할수있다. 이

39 에의해검체의채취와분산, 측정부로수송, 측정및역연산처리를포함하여전체측정절차를확인할수있다. 또한전체절차가충분히기술되어있어야한다. 인증표준물질로는입자경분포가알려진구형입자인것이바람직하다. 인증표준물질의입자경은절대적인방법에의해질량기준입자경분포로서보증되어야한다. 또한가능하다면합의된상세한조작절차에따라이용되어야한다. 미산란이론을데이터분석에이용하는경우에는입자의복소굴절률의실수부와허수부를표시해야한다. 입자밀도가모든입자경구분에대해동일하다면체적기준입자경분포는질량기준입자경분포와동일하게표시된다. 표준물질은적어도 3 회반복측정을통해얻은 x 50 의평균값을그보증값과비교할때보증범위에서의일탈이 3 % 이하이면레이저회절장치는제대로작동하고있다고본다. 또한 x 10 과 x 90 에관한평균값은보증범위에서의일탈이 5 % 를넘지않는것으로한다. 또한 10 μm 이하의입자의경우이러한값을모두 2 배로할필요가있다. 표준물질로서구형입자를사용하는것이바람직하지만비구형입자를사용해도무방하다. 이러한입자는인증값을가지거나합의된상세한조작절차에따라레이저회절법으로부터구한대표값을가지는것이바람직하다. 레이저회절법이외의방법으로얻은참고값 ( 입자경 ) 과비교할때상당한차이가있을수있다. 이차이는입자경측정법의측정원리가다르면동일한비구형입자라도구상당지름 (sphere-equivalent diameters) 이다른것에기인한다. 인증표준물질을사용하는것이바람직하지만물리적성질이명확한다른표준물질을사용해도된다. 이것은고품질로서일정조성과입자경분포를가진물질의입자경분포는경시적인변화가없다는것이입증되었다. 측정결과는표준물질에대해미리측정한데이터와동일한정밀성으로일치해야한다. 시스템의적합성평가장치의교정뿐만아니라장치의성능평가를정기적으로또는가능한자주실시하여야한다. 이성능평가는앞에서설명한적절한표준물질을사용하여실시할수있다. 시스템의적합성평가는장치, 전자공학계, 소프트웨어및분석조작이일체화된시스템을구성하고있기 때문에시스템으로평가할필요가있다. 따라서검체의채취, 분산, 측정부에대한검체의수송, 측정과역연산단계를포함하여조작절차의전체를검증하게된다. 따라서전체의조작절차를충분히기술하는것이매우중요하다. 의약품각조중별도로규정한것외에레이저회절장치의응답은표준물질의 x 50 에대해보증범위에서의일탈이 10 % 이내이면레이저회절장치는정상적으로작동하고있는것으로간주한다. 또한분포양측의값 ( 예를들어 x 10, x 90 ) 에대해서도평가하는경우에는이러한값의보증범위에서의일탈은 15 % 를초과해서는안된다. 단, 10 μm 이하의입자의경우 2 배로생각한다. 주1 : 장치의교정에대해 교정 을통해엄격한조건을정하고있다. 주2 : 이측정법은 ISO (1999) 및 (1998) 에따른것이다.

40 미세열량측정법에의한결정형고체의특성분석및액체열량측정법 이시험법에서목적에맞추어결정성물질, 부분적결정성물질및무정형물질은고체로간주한다. 결정화도의개념예측되는격자의위치에모든분자가완벽하게정렬된결정을얻는것은매우이상적인상태로거의없다. 반대로무정형상태역시극적인경우로모든긴범위의규칙도가손실되고가까이이웃한것과겹쳐진국소규칙도로만남아있는고체가결함의최대가능농도 ( 여러차원의결함 ) 를함유하는것이다. 실제결정은이두극단의사이에존재한다. 이두극단의경계안에서규정된결정의위치정도를결정화도라고한다. 순수한상태를포함한모든실제결정은에너지 ( 일정한대기압조건에서의엔탈피 ) 증가와결정격자의결핍의 ( 엔트로피로표현 ) 증가를포함하는격자의미완성이나결함을가지고있다. 상대적으로낮은밀도의결함의결정은고결정성이라고하며높은결정화도로나타난다. 반대로상대적으로높은농도의결함을가지는입자는부분적무정형이라고하며낮은결정화도로나타난다. 이상적인경우무정형입자는결정도가 0에대응한다. 무정형입자에는약간의질서있는영역이포함될수있으며이것은결정화핵으로작용할수있다. 이러한무정형입자는저준위이지만정형화된결정화도로나타난다. 결정성이높은물질내무정형물질의양을검출하고정량하는능력은의약품제제의개발및제조과정에서매우중요하다. 실제로분말은여러가지크기와모양의입자를포함하는것과마찬가지로여러가지결정화도의입자들로이루어진다. 낮은결정화도의고체일수록엔탈피와엔트로피는커진다. 엔탈피의증가는엔트로피의증가로절대전부보상될수없으므로둘사이의균형을반영하는깁스 (Gibbs) 자유에너지가증가한다. 그러므로물질 ( 분말 ) 의낮은결정화도는결과적으로그것의무정형특성이크다는것이고겉보기고유의용해도와용해속도가크다는것이지만열역학적안정도는낮다는것이다. 이러한속성들의큰연관성때문에결정화도는중요한특성이고적절한방 법에의한측정이필요하다. 이장에서는다른방법 ( 예, 분말 X 선회절측정법 ) 이아닌미세열량측정법이나액체열량측정법과같은열량측정법을통해분말의결정화도또는무정형부분의함량을측정한다. 많은물질이결정다형으로알려져있으며하나이상의결정형태로결정화될수있다. 물이나용매가결정격자에혼입된경우결정은수화물또는용매화물로불린다. 결정패킹이나혹은분자형태와격자에너지가각각다르므로일반적으로다른물리적성질을나타낸다. 결정화도측정을위한열량측정은분석하고자하는물질에존재하는한가지형태의고체결정형으로가정한다. 이론과실험기술은결정다형간의엔탈피차이에대한적절한검토를통해쉽게결정다형시스템으로확장될수있다. 제 1 법미세열량측정법 ( 무정형함량의정량 ) 대부분의화학적, 물리적, 생물학적과정은열의교환과관련되어있다. 미세열량측정법은이러한과정중에생기는발열 ( 열생성 ) 및흡열 ( 열흡수 ) 에대해모니터링할수있는고감도의측정법이다. 이방법은속도와화학반응정도와상의변화혹은구조의변화를측정할수있다. 마이크로와트수준의열적변동은미세열량측정법을사용해야만확인할수있다. 이는 10-6 K 이하의온도차이를측정할수있다는것이다. 미세열량측정법은일반적으로열적으로규정된용기에서의열흐름 ( 열누설 ) 원리를사용하고열의발생 ( 혹은흡수 ) 에따라발생하는흐름은열적재평형상태를유지하기위해용기로부터 ( 혹은용기로 ) 움직인다. 주변상태에의한예외적인열적안정상태는주변이열흡수부나전기적으로조절된상태에서값을얻어야한다. 반응용기의활성시료에서발생하는열에너지는일반적으로 Seebeck 효과에의해열전발전기로작용하는펠티에소자들에의해채널화된다. 열에너지는열류와비례하여전압신호로전환된다. 결과는일반적으로시간의함수로서시간당생성되는열에너지 (W) 를측정한것으로한다. 장치미세열량분석기는전형적으로측정용기와참조용기의쌍으로구성되어있다. 용기는일반적으로유리나스테인레스재질로한다. 경우에따라기체, 액체혹은고체등의재질로특수하게제작된용기를사용할수있다.

41 교정미세열량분석기는교정된외부혹은내부전기열원이나적절한표준반응을이용하여열류 ( 시간당에너지단위 ) 로교정한다. 감도미세열량측정법의감도는해당방법에서의기기적기저선노이즈와의합과해당방법에의해분석된적절한표준물질을기반으로확인할수있다. 분석순서적절한용기에적당량의시료를정밀하게단다. 용매의휘발등에주의하면서조심스럽게용기를밀폐한후시료홀더에용기를넣는다. 가능한측정하기전에측정온도에서용기를온도평형할수있도록한다. 분석을개시하고가로축은시간, 세로축은열류 ( 흡열혹은발열의방향을명시 ) 로열류를기록한다. 분말중무정형함량의정량및검출무정형상태는재결정이일어나는것처럼결정상태로전이될수있다. 재결정에의한열의측정은재결정피크의면적의정량을통해무정형함량을구할수있다. 무정형표준물질로부터얻어진값과시료의측정결과와의비교를통해시료중의무정형함량을구할수있다. 개개물질에따라다르겠지만이방법을통해무정형함량의범위를포괄할수있다. 양호한경우검출한계는 1 % 이하까지가능하다. 재결정은시료를상대적으로높은습도나유기증기를포함하는대기중에놓고기다리면시작될수있다. 시료는일반적으로포화염용액, 유기용매혹은혼합용액이담긴작은시험관이포함된앰플에넣어놓는다. 재결정의열은일반적으로유리나강철용기에담긴고정된시료질량을이용하여측정된다. 시료이외의대기의포화가가능하도록포화염용액, 유기용매혹은혼합용액을포함하는시험관을선택한다. 시료질량과시료이외의증기대기압의상태에서재결정은시료의도입으로인해최초의열적상태와명확하게분리되는변화에의해확실한피크가관찰되는시점에일어나므로그것을기준으로선택한다. 무정형상에서열적으로더안정한결정형상태로의전이가일어나는조건은재결정의시점에큰영향을주게된다. 특히, 순수한무정형과결정형물질의물리적혼합물은부분적결정형물질과는다른상태를나타낸다. 이러한효과는분석법을개발할때고려해야한다. 주로무정형물질의재결정에대한전형적인반응은 그림 1 과같다. 앞부분은분말의무정형부분에수증 기가흡수되고시험관에서수증기의발생과같은여 러가지공존하는반응이동시에일어나는것을보여 준다. 이러한초기반응이후에는무정형물질의재 결정에의해발생하는급격한발열반응이나타난다. 보이지는않지만재결정된부분에서과잉수 (excess water) 가축출되는것도포함된다. 그러므로이발 열재결정반응의면적은재결정열에비례한다. 열에너지 (uw) I II 시간 (hours) 그림 1. 시간 (h) 의함수에서열에너지 (μw) 으로 나타낸전형적인미세열량측정결과 : 25, 상대습도 75 % 에서의주로무정형락토오스에 대한무정형붕괴피크 (Ⅰ) 와결정피크 (Ⅱ) 제 2 법액체열량측정법 ( 결정화도정량 ) 액체열량측 정법은액체의엔탈피를결정하는방법을규정하고 있다 ( 예. 일정대기압에서의액체의열 ). 액체의엔 탈피는액체중에녹아있는기지농도물질의엔탈피 에서원래물질의엔탈피를뺀값으로정의된다. 용 해를위한용매는다음의설명과같이반드시열량계 의응답시간과일치하는시간축안에서일정량의 고체를녹인다. 용액의엔탈피는녹은고체의양과 비례한다. 이양은몰엔탈피의 1 몰이나특정엔탈 피에대한 1 g 으로정의될수있다. 물질이 ( 필요한 정확성의정도로결정된것으로서 ) 충분한순도를갖 고있거나그분자량이알려져있는경우몰엔탈피 가바람직하다. 그렇지않으면특정엔탈피를사용해 야한다. 용액의엔탈피는온도 ( 일반적으로 25 ) 와녹은용질의최종농도의두가지측면에약간의

42 존적이다. 보통백분율로물질의결정화도 Pc를결정하는것이바람직하다. 이과정은두가지표준품이필요하다. 100 % 의결정화도로가정할수있는결정성이높은시료와그용액의엔탈피측정값 Δ S C, 0 % 결정화도로가정하는무정형시료와그용액의엔탈피측정값 Δ S. 이값들과피검시료용액의엔탈피측정값 Δ S S 로부터고체의결정화도 Pc는다음과같이계산될수있다. P C (%) = 100(Δ S S - Δ S ) / (Δ S C - Δ S ) 분명히백분율로결정화도를표현하는것은위세가지측정값에매우의존적이고용액의엔탈피는다른대응하는물리량에의해대체될수있다. 그러나시료의백분율결정화도값은두표준품의제조방법및특성뿐아니라측정되는물리량의선택에도의존적이다. 액체의엔탈피는이소페리볼 ( 동일한둘레, 예, 재킷 ) 액체열량측정법이나등온 ( 동일한온도 ) 액체열량측정법으로측정한다. 일반적으로각시료당최소 3 회측정한다. 이값들의평균값을계산한다. 정확한요구사항은장비의성능과정확도에따라달라진다. 이소페리볼액체열량측정법이소페리볼액체열량측정법에서열은용질-용매시스템 ( 예, 용액 ) 의온도변화에의해야기되는용액공정동안에변화한다. 이온도변화는온도변화에따라전기적신호를기록하는전기회로에연결된온도센서에의해측정된다. 일반적으로이러한전자적형태의열변화는정밀하게규정된시간간격으로측정되며, 온도-시간데이터를생산하고컴퓨터에의해수집, 분석및정리된다. 고체용질의첨가없이공시험을하면정상적인경우온도-시간플롯의기울기에서눈에띄는변화는나타나지않는다. 이소페리볼액체열량측정법은용기로부터의어떠한열손실이나열습득에대해반드시보정을해주어야하지만반응은매우빠르다. 그러므로용액과정이상대적으로빠른경우에이소페리볼액체열량측정법은등온액체열량측정법보다유리하다. 이소페리볼액체열량측정법을사용하는모든용액엔탈피측정은 용매의선정이매우중요하다. 용매의특성과질량, 시료의질량은분당 회전범위의일정회전속도에서격렬한교반으로 5 분안에완료되도록하여고체전체의용해에상응하는전체열변화로인정한다. 열량계셀과구성물의유효열용량은매회열량계분석에서결정한다. 이것은열량계셀의구성물의전기적가열에의해얻을수있다. 유효열용량은앰플파손후한번정량하거나앰플파손전에한번정량하고앰플파손후두번째정량하고두결과의평균을사용하는두방법중하나로결정한다. 정확도와전기적가열의유효성은앞서기술한화학적교정의정확도와유효성에의해확립된다. 등온액체열량측정법등온 ( 일정온도 ) 액체열량측정법은용액과정중의열변화가동일하지만반대의에너지변화가되도록보정되므로용매-용질시스템 ( 예, 용액 ) 의온도는기본적으로동일하게유지된다. 이러한동일하지만반대에너지변화를측정하고그신호가반전될때용액의엔탈피를제공한다. 등온열량측정법의반응은상대적으로느리지만보정과정은용기로부터의열손실이나열습득이배제된다. 그러므로등온열량측정법은이소페리볼열량계에비해상대적은용액과정이느린경우훨씬유리하다. 용액열량계교정열량계의정확성을확보하기위해화학적교정이주기적으로수행되어야한다. 흡열용액과정에서는절대온도 K (25 ) 에서의염화칼륨의용해과정중의열흡수를측정한다. 이반응에서얻은엔탈피변화는 J/g(17.56 kj/mol) 이다. 발열용액과정에서는 K (25 ) 에서 0.1 mol/l 염산용액중 5 g/l의트로메타민 [ 트리스 ( 히드록시메틸 ) 아미노메탄, THAM] 이녹는과정중에발생하는열을측정한다. 이반응에서얻은열은 J/g ( kj/mol) 이다. 시료처리고체의화학적물리적안정성은결정화도가감소함에따라감소된다. 특히무정형고체와같은낮은결정화도의고체의경우, 대기로부터수증기를흡수하여결정화를유도하고결정화도를얻고자하는경향이있다. 이러한이유로무수물의결정화도는반드시습도 0이나임계습도이하의건조제를포함하는챔버에서결정해야하며유효성을확인할수있는지표를포함하는것이바람직하다. 만일결정화도- 습도연구를수행하는경우시료는상대습도를확인

43 할수있는포화염용액이포함된밀폐챔버에보관 한다. 분체의미세한정도표시법 분체의미세한정도표시법에대해규정한다. 입도측정은체를써서측정하는방법이주로사용되며, 이방법은입자의대다수가약 75 μm 이상일때가장적합하다. 또한광회절 (Light diffraction) 을이용한측정법이광범위한입자들의크기를측정하는데널리사용되고있다. 입도측정법의체분급법이나다른방법을사용하여가루의누적분포가측정되었을때, 입자경은다음의방식으로표시된다. x 90 : 누적아래분포의 90 % 에해당하는입자경 x 50 : 중앙입자경 ( 즉, 입자의 50 % 가더작고, 입자의 50 % 가더큰것에해당하는입자경 ) x 10 : 누적아래분포의 10 % 에해당하는입자경 위입자경을표시하는기호로 d가널리사용되기도한다. 위와마찬가지로 d 90, d 50, d 10 의기호들이사용된다. 누적분포에기초하여아래파라미터들이정의되기도한다. Q r (x) : 입자경 x 이하이거나동등한크기를가진 입자들의누적분포비율. 아래첨자 r 은분포 형태를나타낸다. r 분포형태 0 개수 1 길이 2 면적 3 부피 따라서정의에의하면 : x = x 90 일때, Q r (x) = 0.90 x = x 50 일때, Q r (x) = 0.50 x = x 10 일때, Q r (x) = 0.10 다음표의용어를사용하여분체의미세한정도를정 성적으로분류할수도있다.

44 용어 x 50 (μm) 부피기준누적분포비율 Q 3 (x) 분체의입자밀도측정법 굵은 > 355 Q 3 (355) < 0.50 약간 Q 3 (180) < 0.50, 180 ~ 355 미세한 Q 3 (355) 0.50 미세한 125 ~ 180 Q 3 (125) < 0.50, Q 3 (180) 0.50 아주미세한 125 Q 3 (125) 0.50 분체의입자밀도측정법은분말상의약품또는의약품원료의입자밀도를측정하는방법으로보통기체치환형피크노미터를사용하여측정한다. 이방법은분체에의해치환되는기체의부피가질량을이미알고있는분체의부피와같다고간주하여구한다. 피크노미터법으로밀도를측정하는경우, 기체의침입이가능한열려있는구멍부위의공극부피를제외하지만닫힌공극, 기체가들어갈수없는공극은분체의체적으로평가된다. 시험용기체로는보통열려있는구멍부위가있는미세한공극에확산성이높은헬륨이사용된다. 헬륨이외의기체가사용되는경우, 분체안으로의기체침입성은열려있는구멍부위지름과기체의분자단면적에따라달라지므로헬륨을사용해얻어진밀도와는다른입자밀도가얻어지게된다. 피크노미터법으로측정되는밀도는각분체입자밀도의부피가중평균밀도이다. 보통입자밀도라고부르며고체의참밀도 (true density) 또는분체의겉보기밀도 (bulk density) 와구별된다. 고체의밀도는국제단위에서는단위부피당질량 (1 g/cm 3 = 1000 kg/m 3 ) 으로표시되는데보통 g/cm 3 로나타낸다. 장치피크노미터법에의한입자밀도측정장치의모식도는그림 1과같다. 장치는검체를넣는시험용셀, 대조셀및압력계 M으로구성된다. 부피 V c 의시험용셀은밸브 A를통해부피 V r 의대조셀에연결된다. V r A M A : 밸브 V r : 대조셀의부피 (cm 3 ) V c : 시험용셀의부피 (cm 3 ) V s : 검체부피 (cm 3 ) M : 압력계 V c V s 그림 1. 기체치환형피크노미터 ( 입자밀도측정장치 ) 의 모식도

45 보통측정용기체로는헬륨을쓰고압력계를끼워정해진압력 (P) 까지시험용셀을가압할수있는시스템을준비할필요가있다. 장치의교정시험용셀및대조셀의부피 V c, V r 는소수점이하 3 자리 (0.001 cm 3 ) 까지정확하게구할필요가있고부피측정의정확성을보증하기위하여보통부피를알고있는입자밀도측정용교정구를써서장치의교정을다음과같이한다. 먼저빈시험용셀에대하여, 다음에는입자밀도측정용교정구가들어있는시험용셀에대하여조작법에따라최종압력 P f 를측정하고, 시험용셀의부피 V c 및대조셀의부피 V r을조작법항에있는계산식으로구한다. 또한처음의조작에서는검체부피 V s = 0으로보고계산할수있다. 조작법기체치환형피크노미터법에의한입자밀도측정은 에서실시하며측정중 2 이상의온도변화가있어서는안된다. 측정에앞서분체검체안에있는휘발성불순물은헬륨기체를흘려제거한다. 필요하면휘발성불순물은감압하여제거한다. 휘발성불순물은측정중에발생하는경우도있으므로검체의최종적인질량은검체부피를측정한다음에단다. 먼저시험용셀의질량을달아기록한다. 의약품각조에규정한양의검체를달아시험용셀에넣은다음셀을밀폐한다. 시험용셀과대조셀을접속되어있는밸브 A를열어계의압력이일정하게된것을압력계 M으로확인한다음에대조압력 P r 을읽는다. 다음 2 개의셀을접속하는밸브를막은다음측정용기체를시험용셀에도입하여가압상태로하고압력계의지시가일정하다는것을확인한다음초기압력 P i 을읽는다. 이어서밸브를열어대조셀을시험용셀과접속하고압력계의지시가일정하다는것을확인한다음최종압력 P f 을읽어다음식으로검체부피 V s 를구한다. V c : 시험용셀의용적 (cm 3 ) V s : 검체부피 (cm 3 ) P i : 초기압력 (kpa) P f : 최종압력 (kpa) P r : 대조압력 (kpa) 동일검체에대하여위의측정을반복하고연속적으로측정한검체부피가 0.2 % 이내에서서로일치하는것을확인하고그평균값을검체부피 V s 로한다. 마지막에시험용셀을떼어내칭량하여빈셀의질량과의차로부터최종검체질량 m을구하여다음식으로분체의입자밀도 ρ 를계산한다. ρ = m / V s ρ : 분체의입자밀도 (g/cm 3 ) m : 최종검체질량 (g) V s : 검체부피 (cm 3 ) 피크노미터의조작법또는구성이그림 1과다를경우각피크노미터제조자의지시에따른다. 또한검체의상태에대해전처리없이그대로측정되었는지또는건조감량으로규정되는특별한조건으로건조한것인지등을측정결과와함께기록한다. s r c i r f r V r : 대조셀의용적 (cm 3 )

46 비표면적측정법 비표면적측정법은기체흡착법에의한분말상의약품 의비표면적 ( 단위질량당분체의전체표면적 ) 을산출 하는방법이다. 검체의비표면적은고체표면에서의기 체의물리흡착으로측정하며표면에서의단분자층에상 당하는흡착기체의양을구하여산출한다. 물리흡착은 흡착기체분자와분말검체표면사이의비교적약한힘 (van der Waals 힘 ) 에기인한다. 보통측정은액체 질소의비점에서하고흡착된기체량은동적유동법또 는용량법으로측정한다. 해석법 다점법분말검체에기체를물리흡착시켰을때흡착 된기체량 V a 과흡착평형상태의흡착기체의압력 P 와의사이에는상대압 (P / P 0 ) 의값이 의범위내에서는다음식과같은관계 [Brunnuer, Emmett, Teller (BET) 의흡착등온식 ] 가있다. a m m (1) P : ( 액체질소의비점 ) 에서검체표면과 평형상태인흡착기체의분압 (Pa) P 0 : 흡착기체의증기압 (Pa) V a : 표준상태 (0, Pa) 에서의흡착 기체의부피 (ml) V m : 검체표면에서겉보기단분자층을형성하는표 준상태에서의흡착기체의부피 (ml) C : 검체표면에서의흡착기체의흡착엔탈피와관계 있는정수 다점법에서는 V a 는 3 개이상의 P / P 0 에서측정한 다. 이때 1 / [V a {(P 0 / P) - 1}] 을 (1) 식에따 라 P / P 0 에대하여플롯하면보통상대압이 의범위내에서직선이된다. 직선회기의상 관계수 r 이 이상즉 r 2 이 이상으로 되는것이필요하다. 직선플롯으로부터기울기 (C - 1) / (V m C) 와절편 1 / (V m C) 를직선회 기분석으로구한다. 이들값으로부터 V m = 1 / ( 기 울기 + 절편 ), C = ( 기울기 / 절편 ) + 1을계산한다. 얻어진 V m 값으로부터비표면적 S (m 2 /g) 를다음식으로계산한다. S = (V m Na) / (m 22400) (2) N : 아보가드로수 /mol a : 흡착기체분자 1개의유효단면적 (m 2 ) (N 2 : , K r : ) m : 분말검체의질량 (g) : 표준상태인흡착기체 1 mol의체적 (ml) 적어도 3 개의측정점을필요로한다. 0.3 부근의 P / P 0 값에서비직선성이확인되는경우에는추가로측정한다. P / P 0 값이 0.05 이하인경우에는비직선성이확인될수있기때문에이범위에서는측정을권장하지않는다. 직선성검증, 데이터처리, 검체의비표면적산출은위와같이실시한다. 일점법동적유동법 ( 제 1 법 ) 또는용량법 ( 제 2 법 ) 에의한비표면적측정에서는보통적어도 3 개의다른 P / P 0 에서의 V a 의측정이필요하다. 그러나 부근의 P / P 0 ( 질소에서는 0.300, 크립톤에서는 몰분율에상응한다.) 로측정한 V a 의값으로부터다음식으로 V m 을구하여비표면적을구할수있다. V m = V a {1 - (P / P 0 )} (3) 일점법은물질과관계있는정수 C 가 1 보다훨씬큰물질의분말검체에대하여쓸수있다. 일점법이유효한조건에대해서는일련의분체검체에대해일점법으로측정된비표면적의값을다점법으로측정된값과비교하여확인할수있다. 일점법으로구한비표면적과다점법으로구한값이근사하면 1 / C 이거의 0이된다는것을나타낸다. 정수 C 값이매우큰시험물질의일련의유사검체에대해일점법은간접적으로사용할수있다. 이러한경우정수 C를검체의다점법 BET 플롯에서 C = 1 + ( 기울기 / 절편 ) 으로구하면일점법에의한오차를감소시킬수있다. 이때다음식으로 P / P 0 에대하여측정한 V a 의값으로부터 V m 을계산한다.

47 m a 검체의조제 (4) 비표면적을측정하기전에보존또는취 급하고있는분체검체의표면에물리적으로흡착한 기체를제거할필요가있다. 탈기조작이불충분할때 는검체표면의일부에흡착되어있는기체의영향으 로비표면적이저하하거나변동한다. 물질의표면은 반응성을가지므로분말의약품의비표면적측정에서 정밀성과정확성을얻기위해서는탈기과정의설정이 중요하다. 탈기조건의설정에있어서는 BET 플롯에 서재현성이있다는것, 검체의질량이일정하다는 것및검체의물리적화학적변화가없다는것을보 증하여야한다. 온도, 압력및시간에따라결정되는 탈기조건은분말검체원래표면이최대한재현되도 록선택한다. 탈기는진공으로하거나비반응성의건 조한기체의기류중에노출시키거나또는탈기 - 흡 착반복법을쓴다. 이모든경우에불순물이검체로 부터이탈하는속도를증가시키기위하여가열할때 가있다. 분말검체를가열할때는표면의성질과검 체상태에영향을주지않도록주의하며비표면적측 정의재현성을유지하기위하여될수있는대로낮 은온도로탈기시간을짧게한다. 가열에민감한검 체의경우에는탈기 - 흡착반복법과같은다른탈기 법을쓴다. 물리흡착의표준적인방법은액체질소비 점에서의질소의흡착이다. 비표면적이작은검체 (< 0.2 m 2 /g) 에서는증기압이낮은크립톤의흡착 을이용한다. 사용하는모든기체는수분을함유해서 는안된다. 흡착기체가질소일때는전표면적이적 어도 1 m 2, 또한크립톤일때는적어도 0.5 m 2 되도록분말검체의질량을정확하게단다. 적절한 밸리데이션을하면적은검체량도사용할수있다. 일정한압력에서흡착되는기체량은온도가저하되면 증가하는경향이있으므로흡착측정은보통저온에 서이루어진다. 측정은액체질소의비점인 에서실시된다. 기체흡착은다음중한방법으로 측정한다. 측정법 제 1 법 : 동적유동법동적유동법 ( 그림 1) 에서는 흡착기체로건조한질소또는크립톤을쓴다. 헬륨은 흡착되지않으므로희석용기체로쓴다. P / P 0 가 의범위내에서흡착기체와헬륨의혼 가 합비를변화시켜적어도 3 종류의혼합기체를조제 한다. 정해진바의온도및압력조건에서기체농도검 출기는통과하는기체의부피에거의비례하는신호 를출력하며보통검출기로서전자식적분계를내장한 열전도도검출기를쓴다. P / P 0 가 의 범위내에서적어도 3 개의데이터를측정한다. E J L L Q O A G S F K P R B M C I D T H N A : 유량제어밸브 K : 시험용셀 B : 미분류량제어계 L : 갈아맞춘연결관 C : 개폐밸브 M : 단류도안정관 D : 기류류입구 N : 검출기 E : O-링실 (seal) O : 유로선택밸브 F : 냉각트랩 P : 장류로안전관 G : 열평형관 Q : 유량계 H : 검출기 R : 탈기용부위 I : 디지털화면 S : 확산조절장치 J : 교정용격막 T : 배기구 그림 1. 동적유동법장치의개략도 질소및헬륨의혼합기체는검출기를통과한다음시 험용셀로도입되어다시검출기를통과한다. 시험용 셀을액체질소중에담그면검체는이동상에서질소 를흡착하고열전도도검출기를통하여기록계에펄스 로기록된다. 다음에시험용셀을냉각제에서제거한 다. 이렇게하여흡착피크의반대측에이것과같은 면적을가지는탈착피크가생긴다. 이탈착피크는흡 착피크보다명확하므로측정을위하여사용된다. 교 정에는탈착피크와같은크기의피크를주는양의기 체를주입하여단위피크면적과기체부피와의비례관 계를구한다. 일점법에서는질소 / 헬륨의혼합물을사

48 용하고, 다점법에서는몇가지의동일한혼합물을사용하거나 2 종류의기체를혼합하여사용한다. 계산은보통용량법과같다. 제 2 법 : 용량법용량법 ( 그림 2) 에서널리쓰이는흡착기체는질소이며이것을미리탈기한분말검체위의공간에일정한평형압력 P가되도록도입한다. 헬륨은빈부피 (dead volume) 를측정할목적으로쓴다. 이방법에서는혼합가스가아니라순수한흡착가스만을사용하기때문에열확산의간섭효과는피할수있다. 고필요한 P / P 0 가되도록충분한양의질소를도입하고흡착된기체의부피 V a 를측정한다. 다점법에서는연속적으로보다높은 P / P 0 에서 V a 의측정을반복한다. 흡착기체로질소를쓸때는 0.10, 0.20, 0.30의 P / P 0 가적절하다. 표준물질시험해야할검체와비슷한비표면적을가지는비표면적측정용 α-알루미나등을쓰고장치의가동을정기적으로확인한다. A 7 8 B F C D 1 0 E A : 진공계 D : 압력계 B : 질소류 E : 진공 / 대기 C : 헬륨류 F : 냉각트랩 / 진공펌프 그림 2. 용량법장치의개략도 검체표면의오염을방지하기위하여검체관내에건조한소량의질소를넣고검체관을떼어내어마개를한다. 그질량을달아검체의질량을구한다. 검체관을측정장치에매달고검체관내를주의깊게정해진압력 (2 10 Pa) 까지감압한다. 몇가지장치에서는정해진압력변화속도 ( 예를들어 13 Pa/30 초이하 ) 로감압하고다음단계를시작할때까지정해진시간동안이를유지한다. 필요한경우, 비흡착성기체인헬륨을써서검체관내의빈부피를측정한다. 빈부피측정은차분측정, 즉차압트랜스듀서에접속한대조관과검체관을쓰는방법을통해서도할수있다 의액체질소를넣은듀아 (Dewar) 병을검체관위정해진위치까지올리

49 수은압입법을이용한공극률측정법 일반적으로다양한형태의공극 (pore) 들이고체내부의구멍 (apertures), 통로 (channels) 또는공동 (cavities) 이나고체입자들사이의공간으로나타난다. 공극률 (porosity) 은주로고형물질의다공성을나타내는데사용되어온용어이며더정확하게는주어진양의고체물질의전체부피에대한접근가능한공극들과빈공간 (voids) 들부피의비로정의된다. 고형물질은접근가능한공극들외에바깥표면으로부터분리되어있고용액이침입할수없는닫혀진공극을가질수도있다. 이측정법은닫힌공극에대한특성은포함하지않는다. 다공성물질들은고운가루나거친가루, 컴팩트 (compacts), 압출형 (extrudates), 시트 (sheets), 또는모노리스 (monoliths) 의형태를띠기도한다. 다공성물질의특성분석은공극크기분포나총공극부피또는공극률을측정하여이루어진다. 다공성고형물질의거동 ( 강도, 반응성, 투과성또는흡착성가루 ) 이공극구조에의존적이라는건잘알려진사실이다. 대부분다공성고형물질의복합적관점에서봤을때얻어진결과들이항상일치하지않고어느하나의기술만으로공극구조를완벽하게분석할수없다는건그리놀라운일이아니다. 가장적절한방법의선택은다공성고형물질의응용대상, 화학적물리적성질, 공극크기의범위에따라좌우된다. 이측정법은수은압입법에의한공극률과공극크기분포의측정에대한지침을제공한다. 이방법은비교시험이고시료파괴적인시험으로공극이나빈공간에침투한수은의부피는공극직경과연관될수있는부하된정수압력에따라결정된다. 공극모양과상호연결성, 내부및외부표면적, 분말미립자측정법, 겉보기밀도및탭밀도와같은정보들또한부피-압력곡선으로부터유추될수있지만이러한측정값들은이규정의범위에포함되지않는다. 현재실질적으로보면최대부하절대압력은약 400 MPa 정도로제한되고, 이는대략 μm의세공직경에맞먹는최소압력에해당한다. 최대직경은검체의위로부터아래까지수은의정수헤드에서의차이때문에심각한깊이를가지는검체들로제한된다. 대부분의목적에서이한계는 400 μm로여겨진다. 입자간과입자내공극률은결정될수있지만, 이방 법은입자간과입자내공극률이공존할때이들을서로 구별하지는않는다. 이방법은대부분의다공성물질들의연구에적합하 다. 특정금속들과같이수은과합쳐지는검체들은이 방법이적절하지않을수있거나사전에금속의부동태 화처리가요구될수있다. 다른물질들은특정압력하 에서변형되거나컴팩트해질수있다. 어떤경우에는 검체압축률교정을적용하기가능할수도있고, 유용 한비교데이터가여전히얻어질수도있다. 수은공극률측정기술은대부분의다공성계의경우 이론이공극크기분포결과들의절대적인계산을가능 케하는데유용하지않기때문에상대적인결과인것으 로고려되어야한다. 따라서이기술은주로개발연구 를위해서사용되는것으로추천된다. 수은은독성이있다. 적절한주의사항들이실험자와 실험공간내의타작업자들의건강보호를위해요구된 다. 폐기물들은또한규정에따라적절한방식으로처 리되어야한다. 원리이기술의원리는부하된압력의기능으로써 다공성고체에침입한수은의부피측정에기초한다. 이방법의측정은수은이부하된압력에서침입할수 있는공극들만을포함한다. 젖지않은액체는압력아래에서만다공성시스템에 침입한다. 부하된압력은공극구멍의내부너비에 반비례한다. 원통형의공극들의경우에는공극직경 과압력간의상관성이 Washburn 식에의해구해진 다. p = 부하된압력 (Pa) d p = 공극직경 (m) σ = 수은의표면장력 (N/m) θ = 검체에대한수은의접촉각 ( ) 장치검체홀더 ( 관입시험기 (penetrometer) 또는 dilatometer 라칭함 ) 는보정된모세관을가지고있 으며, 이곳을통해검체가배출될수있고, 수은이 이곳을통해들어갈수있다. 모세관은측정용검체 가놓이는더넓은관에부착된다. 침입된수은부피

50 에서의변화가모세관에있는수은칼럼과모세관바 깥쪽주변에있는금속슬리브간의정전용량 (capacitance) 의변화에의해측정된다. 정밀한측정 이요구될때는모세관내부부피가검체의예상되는 공극과빈공간부피의 20 % 에서 90 % 범위에있 어야한다. 서로다른물질들간에는열린공극률이 넓은범위에걸쳐나타나기때문에다른직경의모세 관과검체부피를가진다수의관입시험기가요구될 수있다. 수은공극률측정장치의전형적인모식도 는그림 1 과같다. 공극률측정기는고압과저압운 용을위해분리된포트를가질수있고, 또는저압 측정이분리된단위에서이루어지기도한다. 압력범위는일반적으로저압운용시에는 4 kpa 에서 300 kpa 사이이고, 고압운용시에는 300 kpa 이상 이고, 이는특정장치의디자인과사용의도에따라 좌우된다. Oil Penetration volume indicator High-pressure chamber 방 Mercury Sample Low-pressure hydraulic fluid reservoir 2. Hydraulic pump 3. Pressure multiplier 4. Pressure transducer 5. High-pressure hydraulic fluid reservoir Vacuum pump with gauge 7. Mercury reservoir 법 그림 1. 수은공극률측정장치의예 검체제조검체는접근가능한공극률을가릴수있 는흡착물질들을제거하기위해가열 /evacuation 하 거나불활성기체를흘려주는조치를하여전처리한 다. 젖을수있거나아말감을형성할수있는고체 3 2 물질들의표면을산화물의박막을형성하거나스테아레이트로코팅하여부통태화할수도있다. 전처리된고체물질검체는무게를잰후관입시험기로옮겨진다. 이후검체의공극시스템의가스가최대잔류압력 7 Pa까지의진공에서제거된다. 관입시험기에수은충진분석시약용수은을사용해야한다. 검체는진공하에서수은으로입혀진다. 수은이보관통에서관입시험기로이동하는것을확실하게하기위해진공이요구된다. 가득채워진관입시험기에서충진압력은부하된압력과검체와접촉하는앞쪽수은에의해생성된압력을더한것이된다. 일반적인충진압력은약 4 kpa이된다. 검체이상의수은의정수압은수평위치에서관입시험기를채움으로써최소화할수있다. 저압측정원하는특정공극크기에해당하는단계에서나지속적인저속에서압력을증가시키기위해공기또는질소를조심스럽게주입한다. 모세관의수은칼럼길이에서의수반되는변화가기록된다. 최대요구압력에도달했을때압력은주위압력으로줄인다. 고압측정저압조건에서의측정후, 수은이채워진관입시험기가고압포트또는장치단위로이동되고유압유 (hydraulic fluid) 로입혀진다. 수은이유압유를거쳐공극시스템으로침입된다. 시스템의압력을저압측정에서도달했던최대압력까지증가시키고, 뒤이은침입부피가초기부피로부터계산되므로이압력에서의침입부피를기록한다. 원하는특정공극크기에해당하는단계에서나지속적인저속에서압력을증가시킨다. 수은칼럼에서의저하가최대요구압력까지측정된다. 요구된다면, 압력은단계들에서나지속적인저속에서수은구축곡선을결정하기위해감소할수있다. 수은부피, 관입시험기그리고상승된압력하에서부피검출시스템의기타요소들에서의변화를설명하기위해보정한다. 보정양은동일조건하에서공시험에의해결정될수있다. 실험적으로결정된부피-압력곡선은그림 2에서와같다.

51 (mm 3 /g) Cumulated volume Pressure (MPa) 그림 2. 부피 - 압력곡선 (mm 3 /g) 특성값들은공극크기분포로부터계산된다. 그리고검체, 검체제조, 구축조건, 사용된기기에대한충분한정보가문서화되어야한다 Cumulated volume Pore diameter (nm) Frequency (per cent) 결과보고압력판독값들은 Washburn 식이나다른모델을이용하여공극직경으로변환된다. 수은의표면장력 (σ) 은온도와물질뿐만아니라곡률반경에따라달라진다. 일반적으로 0.41 N m -1 와 0.52 N m -1 사이값들이상온에서측정된다. 값이알려져있지않은경우에는 σ = 0.48 N m -1 이이용될수있다. 대부분의경우수은의접촉각 (θ) 은 90 이상이다. 접촉각은접촉각장치를이용하여측정될수있다. 접촉각이알려져있지않은경우에는 130 가이용될수있다. 보고서에는접촉각, 표면장력, 계산에사용된모델이보고된다. 데이터의제시는여러형태의그래프로이루어질수있다. 주로그래프에서는공극직경이가로축에플롯되고이에따른침입된비부피 (specific volume) 가세로축에표시되어공극크기분포를나타낸다. 여기에서가로축의경우로그스케일이선택되는것이적절하다 ( 그림 3). 고체검체의입자들간의공간은계산상의공극들에포함된다. 공극들이빈공간 (voids) 들로부터의크기와다를경우빈공간은관계된공극크기범위를선택함으로써분리될수있다. 구축곡선 (extrusion curves) 은침입된수은의일부분이항상공극시스템에잔존하기때문에공극크기분포를계산하기위해이용되지않을수있다 ( 그림 2). 잔존율은좁은입구들을통해서만접근이가능한공극들 (ink-bottle pores) 의정성적특성분석을위해유용할수있다. 총침입된비부피 (total intruded specific volume), 평균, 중간공극직경들과같은대부분의일반적인 그림 3. 공극부피분포도기기성능조절수은공극률측정기술은비교를통한시험 (comparative test) 으로여겨지기때문에이규정에서자세하게제시되지않는다. 그러나안정한비교물질이기기보정과성능을모니터하는정상적인기준에서시험되어야한다.

52 에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜시험법 이시험법은의약품의제조과정중에톡시화과정중 에생성되는에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜및트리에 틸렌글리콜의잔류하는양을정량하는시험법이다. 조작법 이약및내부표준물질적당량을정밀하게달 아아세톤에녹여각각약 40 μg/ml 농도로하여 검액으로한다. 따로에틸렌글리콜표준품, 디에틸렌글 리콜표준품, 트리에틸렌글리콜표준품및내부표준물질 적당량을정밀하게달아아세톤에녹여각각약 25 μg/ml, 40 μg/ml, 40 μg/ml 및 40 μg/ml 농 도로하여표준액으로한다. 검액및표준액 1 μl 씩을가지고다음조건으로기 체크로마토그래프법에따라시험하여내부표준물질의 피크면적에대한에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜및 트리에틸렌글리콜의피크면적비 Q T 및 Q S 를각각구 한다. T 각글리콜의양 (μg/g) = S S T C S : 표준액중각글리콜의농도 (μg/ml) C T : 검액중각글리콜의농도 (mg/ml) F : 환산계수 (1000 mg/g) F 최종온도초기온도승온속도최종온도유지시간 ( ) ( / 분 ) ( ) ( 분 ) , 60 * * 표준액은 0 분간유지하고, 검액및공시험액은 60 분간유지한다. 검체도입부온도 : 약 270 검출기온도 : 약 290 운반기체 : 헬륨 유량 : 5.0 ml/ 분 분할비 : 2 : 1 시스템적합성 시스템의성능 : 표준액 1 μl 씩을가지고위의 조건으로조작할때에틸렌글리콜, 내부표준물질, 디 에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜순서로유출하고각 성분의분리도는 20 이상이다. 각피크의대칭계수 는 이다. 시스템의재현성 : 표준액 1 μl 씩을가지고위의 조건으로시험을 6 회반복할때내부표준물질에대 한각글리콜피크면적비의상대표준편차는 5.0 % 이 하이다. 상대유지시간 : 내부표준물질에대한에틸렌글리콜과 디에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜의상대유지시간은 각각 0.45 및 1.25, 1.70 이다. 내부표준물질부탄 -1,3- 디올 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 0.53 mm, 길이약 30 m인관에 1.0 μm의기체크로마토그래프용 50% 페닐-50% 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 40 에서매분 10 씩 60 까지승온하고 5 분간유지한다. 매분 10 로 170 까지승온한다음매분 15 씩 280 까지승온하고표준액은 0 분간, 공시험액및검액은 60 분간유지한다. 또는

53 에틸렌옥사이드및디옥산시험법 에틸렌옥사이드및디옥산시험법은기체크로마토그래프법으로물또는디메틸아세트아미드에녹는의약품중에잔류하는에틸렌옥사이드와디옥산을기체크로마토그래프법으로측정하는방법이다. 제 1 법수용성검체이약약 1 g을정밀하게달아헤드스페이스용바이알에넣고물 1 ml를넣어녹인다음밀봉하여 70 에서 45 분간가열하여검액으로한다. 이약약 1 g을정밀하게달아헤드스페이스용바이알에넣고디옥산용액 0.5 ml 및에틸렌옥사이드용액 0.5 ml 를넣어녹인다음밀봉하여 70 에서 45 분간가열하여표준액 (1) 로한다. 에틸렌옥사이드용액 0.5 ml와 10 mg/l 농도의아세트알데히드시액 0.1 ml 및디옥산용액 0.1 ml를헤드스페이스바이알에넣고디옥산용액 0.1 ml를넣고밀봉하여 70 에서 45 분간가열하여표준액 (2) 로한다. 제 2 법비수용성검체이약약 1 g을정밀하게달아헤드스페이스용바이알에넣고물 0.2 ml 및디메틸아세트아미드시액 1 ml를넣어녹인다음밀봉하여 90 에서 45 분간가열하여검액으로한다. 이약약 1 g을정밀하게달아헤드스페이스용바이알에넣고디옥산용액 0.1 ml, 에틸렌옥사이드용액 0.1 ml 및디메틸아세트아미드시액 1 ml를넣어녹인다음밀봉하여 90 에서 45 분간가열하여표준액 (1) 로한다. 에틸렌옥사이드용액 0.1 ml와 10 mg/l 농도의아세트알데히드시액 0.1 ml 및디옥산용액 0.1 ml를헤드스페이스바이알에넣고디옥산용액 0.1 ml를넣고밀봉하여 70 에서 45 분간가열하여표준액 (2) 로한다. 표준액 (1), 표준액 (2) 및검액 1 ml씩을가지고헤드스페이스용검체도입장치를써서기체크로마토그래프법에따라시험하여각액의에틸렌옥사이드및디옥산의피크면적을측정한다. M T : 검액중검체의무게 (g) M R : 표준액 A 중검액의무게 (g) C : 표준액 A 중에틸렌옥사이드의양 (ug) T R T T R D T : 검액중디옥산의피크면적 D R : 표준액 A 중디옥산의피크면적 M T : 검액중검체의무게 (g) M R : 표준액 A 중검액의무게 (g) C : 표준액 A 중디옥산의양 (ug) 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼 럼 : 안지름약 0.32 mm, 길이약 30 m 의유 리관에기체크로마토그래프용디메틸폴리실록산을 1.0μm 의두께로피복한것을충전한다. 칼럼온도 : 5 분간 50 로유지한다음 31 분까지 180 까지승온하고 32.5 분까지 230 로승온한 다음 5 분간유지한다. 검체도입부온도 : 150 검출기온도 : 250 운반기체 : 헬륨또는질소 유량 : 20 cm/ 초 분할비 : 1 : 20 헤드스페이스조건 평형온도 : 70 ( 디메틸아세트아미드용액일경 우 90 ) 평형시간 : 45 분 이송부온도 : 75 ( 디메틸아세트아미드용액일 경우 150 ) 가압시간 : 1 분 검액주입시간 : 12 초 시스템적합성 시스템의성능 : 표준액 (2) 에서아세트알데히드와 에틸렌옥사이드의분리도는 2.0 이상이다. T R T T R A T : 검액중에틸렌옥사이드의피크면적 A R : 표준액 A 중에틸렌옥사이드의피크면적

54 온도계 이산화황시험법 일반적으로침선부온도계 ( 봉상 ) 또는전몰식수은온도계 ( 봉상 ) 를기차 ( 器差 ) 시험을한다음에쓴다. 다만응고점측정법, 융점측정법 ( 제 1 법 ), 비점측정법및증류시험법에는침선부온도계 ( 봉상 ) 를쓴다 ( 표 1). 검체를산성용액에서가열증류하여얻은이산화황 (SO 2 ) 을과산화수소용액에포집하여산화되어생긴황산을수산화나트륨액으로적정하는방법이다. 장치다음그림과같은장치를쓴다. 표 1 침선부온도계 1 호 2 호 3 호 4 호 5 호 6 호 액체수은수은수은수은수은수은 액상 ( 液上 ) 에채운기체 온도범위 ( ) 최소눈금 ( ) 긴눈금의선 눈금의숫자 길이 (mm) 아래몸체의지름 (mm) 수은구의길이 (mm) 수은구하단에서최저눈금선까지의거리 (mm) 온도계상단에서최고눈금선까지의거리 (mm) 수은구하단에서침선까지의거리 (mm) 질소또는아르곤 질소또는아르곤 질소또는아르곤 질소또는아르곤 질소또는아르곤 질소또는아르곤 마다 1 마다 1 마다 1 마다 1 마다 1 마다 2 마다 2 마다 2 마다 2 마다 2 마다 2 마다 ± ± ± ± ± ± 꼭지모양환상환상환상환상환상환상 검사온도 허용오차 ( ) : : : : : : 0.5 A: 삼구형둥근플라스크 B: 원통형분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크조작법물 150 ml를삼구형둥근플라스크에넣고원통형분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를매분 100 ± 5 ml의유속으로장치에흐르게한다. 냉각기에냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 10 ml를수기시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서원통형분액깔때기를삼구형둥근플라스크로부터떼어내고검체약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서삼구형둥근플라스크에옮겨넣는다. 원통형분액깔때기의연결부바깥면에코크용윤활제를바르고원통형분액깔때기를삼구형둥근플라스크의원래자리에장착한다. 원통형분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를원통형분액깔때기에넣은다음코크를열어삼구형둥근플라스크에흘려넣고이산화황이원통형분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은삼각플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 15 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml 를넣고노란색에서청자색으로변색되어적어도 20

55 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로 적정한다. 같은방법으로공시험하여보정한다. 이온크로마토그래프법 이산화황의양 (ppm) = V / M M : 검체의취한양 (g) V : 0.1 mol/l 수산화나트륨액의소비량 (ml) 이온크로마토그래프법은액체크로마토그래프법기술로서무기음이온과양이온, 유기산, 탄수화물, 당알콜, 아미노글리코시드, 아미노산, 단백질, 당단백질및관련물질들의확인시험및정량법에사용하는방법이다. 이온크로마토그래프법은분석물질의성질에따라주성분의특성, 부형제, 분해생성물, 불순물및공정과정과같은의약품의제조와특성의모든측면에적용할수있다. 원료, 배지와배양액을포함한중간체, 대량의주성분, 희석액, 부형제, 생산설비세정액및폐기물들의분석에사용되고있다. 이방법은자외가시부파장 ( nm) 에서흡광도가없거나작은이온성물질또는이동상내에서이온화되는물질의분석에특히유용하다. 이온교환분리와펄스식전류검출법 (pulsed amperometric detection) 과같은다양한검출방법을함께사용함으로서이온크로마토그래피의적용을확대하여, 감도나특이성이필요한물질특이적인검출방법으로대비할수있다. 이러한이온크로마토그래프법의활용은기존의액체크로마토그래프법시스템에도적용할수있다. 또한, 이온배제분리와펄스식전류검출기는지방족유기산은물론비이온성물질인알코올, 당알콜, 탄수화물과아미노산까지이온크로마토그래프법의활용범위를확장시킨다. 이방법의넓은정량범위는극미량의오염물질은물론주요제품성분의정량까지도가능하게한다. 이온크로마토그래프법은일반적으로유기용매가아닌희석된산, 알칼리, 또는염용액을이동상으로사용하기때문에값비싼유기용매의구입및폐액처리등이필요없다. 배출되는폐액은필요에따라적절히중화하거나 ( 약 ph 7) 물로희석한후폐기할수있다. 이온크로마토그래프법은이온교환, 이온배제또는이온쌍방법을사용하여물질을분리한다. 전하의밀도차이를기반으로분리하는데이는결과적으로측정되는개개의이온종의원자가및크기에따른다. 또한이온들의소수성차이를기반으로도분리할수있다. 일반적으로상온에서실시한다. 다른액체크로마토그래프법과마찬가지로이온크로마토그래프법에서분리는용량인자의변화를기초로하고녹스방정식을따른다. 이온크로마토그래프법은제약분석에서일반적으로사용되는역상과순상액체크로마토그래프법및원자흡광

56 및이온결합형플라즈마 ( 플라즈마분광화학 ) 의기술에 대한상보적기술이다. 장 Eluant 치일반적인액체크로마토그래프법의장치구성 과매우비슷하다. 보통자동검체주입기, 고압펌프, 적당한양 ( 일반적으로 μl) 의시료루 프를포함하는주입밸브, 가드칼럼, 분석칼럼필요 에따라써프레서나칼럼후반응시스템, 관류검출 기및데이터처리장치로구성된다 ( 그림 1). High-pressure pump Sample Guard column Injection valve Analytical column Suppression device or post-column derivation (optional) Detector CD, UV-VIS or PAD Data station 그림 1. 전형적인이온크로마토그래프법시스템구성 모식도 CD : 전도도검출기, PAD : 펄스식전류검출기 이동상은일반적으로희석된산, 알칼리, 또는염용 액으로구성되어있기때문에이동상과시료가접촉하 는부분은일반적으로폴리에테르에테르케톤과같은 불활성재질로만들어진다. 보통액체크로마토그래프 법의경우호환가능한이동상과주입시료용액에 대한정보를제공하고있다. 극미량의금속분석을 위해서는비금속성시스템을반드시사용해야한다. 적절한전처리를거친후주입밸브를통해시료를 도입한다. 칼럼유출액에대해필요에따라화학적 이온억제 ( 써프레션 ) 또는칼럼후반응이후전기 전도도검출법, 전류검출법, 자외가시부흡광도측정법 등으로검출한다. 써프레서없이사용하기도하지만 이온성이동상을사용하기때문에경우에따라전도 도검출전단계에써프레서가필요하다. 고정상및이동상기기분석법으로서이온크로마토그래 프법이개발되고발전함에따라많은수의이온교환 물질이이온크로마토그래프용으로개발되었고고정상 의표면에서일어나는과정을이해하게되면서더욱 촉진되었다. 고전적인액체크로마토그래프법에서의 실리카기반충진칼럼과는달리이온크로마토그래프 법에서는유기고분자물질이주요한기반물질로사 용된다. 이러한물질은극단적인 ph 의변화에도매 우안정하며대개의경우유기용매도사용할수있 다. 일반적으로음이온의분리는폴리머기반음이온 교환체와이동상으로희석된염기성용액이필요하다. 그러나양이온의분리는희석된산성용액을이동상으로사용하기때문에유기중합체의넓은 ph 안정성까지는필요없다. 그러므로상당히높은크로마토그래피효율을가지는실리카계양이온교환체가양이온의분리에일반적으로사용된다. 분리모드 ( 이온교환, 이온배제, 또는이온쌍 ) 에따라다른유형의고정상이사용된다. 이온교환의경우고정상은음이온또는양이온교환체이다. 일반적으로강한양이온교환체는유기산의이온배제분리에사용되며, 이온쌍분리의경우는역상고정상이사용된다. 충진제의이온교환용량은칼럼충진의중량당량당이온교환부위의수로정의되며일반적으로충진제 g 당 meq로나타낸다. 이온교환에서물질의유지시간은충진제의이온교환용량에비례하여증가한다. 이러한효과는부분적으로높은이온강도의이동상을사용함에따라보충될수있다. 스티렌 / 디비닐벤젠공중합체, 폴리메타크릴레이트, 폴리비닐수지가폴리머기반이온교환체의제조공정에서기질물질로사용된다. 완전다공성라텍스입자가이온교환물질로서작용하는라텍스기반이온교환체를제외한, 유기고분자물질의표면을직접적으로활성화시킨다. 표면만활성화된박막층기질은전체가활성화된수지에비해훨씬높은크로마토그래피효율을보인다. 이온교환방법에서는 1 가또는 2 가이온종이단독혹은최적비율로혼합된이동상을사용한다. 특히유기산을위한이온배제방법에서는유기산이해리되지않도록하기위해무기산이이동상에포함된다. 대개피검물질의특성에따라이동상과검출법이크게좌우된다. 이온크로마토그래프법에사용되는일반적인이동상은아래검출기항목에서기술한다. 검출기전기전도도검출법은이온크로마토그래프법에서가장일반적으로사용되는검출법이다. 개발초기이온크로마토그래프법은효과적인크로마토그래피분리를위해저용량이온교환수지와화학적으로억제된이동상을이용한전도도검출법이었지만칼럼기술의진보와기기의개발로오늘날고용량이온교환도사용할수있게되었다. 억제형이온크로마토그래프법 (Suppressed IC) 에서이동상의바탕전도도는이온억제장치 ( 써프레서 ) 를통과하면서상당히감소한다. 예를들어약 10

57 50 mm로희석된수산화나트륨용액을이동상으로음이온을분석할때칼럼을통과한수산화나트륨용액은써프레서를통과하면서전도도가낮은물로전환된다. 칼럼을통과한분석대상이온종은나트륨이나다른금속성염에서높은전도성의산성형태로전환된다 ( 다른양이온에비해수소이온은당량전기전도도가높음 ). 마찬가지로산성이동상이물로변환되고분석대상양이온이높은전도성의수산화형태로바뀌는서프레션이양이온이온크로마토그래프법에서도일어난다 ( 다른음이온에비해수산화이온은당량전기전도도가높음 ). 이온억제 IC의전도도검출은바탕전도도는감소되고분석이온종의신호세기는증가되므로 S/N 비 (signal to noise ratio) 가향상되는효과를얻을수있다. 이것은기저선노이즈의감소와분석감도및재현성의향상으로나타나게된다. 일반적으로사용되는화학적써프레션장치는세가지범주로구분된다. 첫번째는화학물질이나물의전기분해에의해생성되는재생이온이이온교환막을통과하면서반응하는방법이다. 두번째는화학물질또는물의전기분해에의해생성되는재생이온이고용량의교환수지를통과하면서반응하는방법이다. 세번째는일반적이진않지만고용량교환수지를용리액의유로에혼합함으로서반응하는방법이다. 의약품분석에서이온억제전도도검출은고순도물에서의극미량이온분석에이용할수있다. 일반적으로이온억제 IC를이용한음이온의분리에서사용되는이동상은수산화이온이나중탄산혹은탄산이온을포함한다. 양이온의분석을위한일반적인이동상은무기산이나메탄설폰산을포함한다. 이온크로마토그래프법분석은화학적써프레션없이도직접칼럼용리액을전도도검출기로흘려보낼수있다. 비이온억제 IC (nonsuppressed IC) 에서사용하는전형적인용리액은음이온의경우프탈산과파라하이드록시벤조산이고양이온의경우메탄설폰산이다. 염화물, 황산염및다른일반적인음이온의당량전기전도도는용리액의음이온보다상당히크기때문에음이온이검출기를통과하면양성피크로검출된다. 마찬가지로나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘과다른일반적인양이온의당량전기전도도는용리액의양이온 (H + ) 보다월등히크기때문에, 양이온이검출기를통과하는경우는음성피크로검출된다. 비이온억제 IC가사용하기는더편리하고화학적써프레션을틍해비전도성인시안화물및황화물과같은약산의정량을위해서는유용하지만기저선노이즈가더높다. 의약품분석은정량한계가대개높은수준의 mg/l이거나낮은퍼센트수준이므로비억제모드에서수행할수있다. 써프레서를사용하는방법은반드시이목적을위해특수하게설계된장비를사용해야하지만써프레서없이기존의액체크로마토그래피용시스템에서수행할수도있다. 기존의액체크로마토그래피용시스템에서도희석된염기나산을포함하는일반적인이온크로마토그래피용용리액은충분히사용할수있기때문이다. 이러한경우, 이온크로마토그래프법분석의호환여부에대해기기업체에문의하는것이좋다. 기타검출기전기전도도검출기외에이온크로마토그래프법에서일반적으로사용되는검출기는펄스식전류검출기, 자외부흡광광도계또는칼럼후유도체화를통한자외가시부흡광광도계가있다. 펄스식전류검출기 (Pulsed amperometric detector) 펄스식전류검출기는기존의전류측정기술의특수한형태이다. 탄수화물, 당알콜, 아미노산및유기황등전기활성을가지는유기화합물의분석에일반적으로사용한다. 피검물질은유로상에위치하는전극표면에서의산화탈착과정에의해검출된다. 검출과함께정해진시간간격에따라전극표면을깨끗하게하기위한전위가순차적으로적용된다. 전극표면의오염이문제인기존의전류검출기와다르게파장의형태로빠르게반복적으로다른전위를적용함으로서전극표면의산화환원반응에의해생성물을제거할수있다. 직접및간접자외가시부흡광광도계직접자외가시부흡광검출은자외가시부발색단을가지는무기및유기이온의검출에사용한다. 유기산, 브롬화물, 요오드화물, 질산염, 아질산염, 티오황산염및시안화금속복합체가포함된다. 마찬가지로양이온의역전도측정검출의경우자외가시부흡광검출법은간접적으로수행할수있다. 이방법은간접광학크로마토그래프법 (indirect photometric chromatography) 라고한다. 광학적검출기광학적검출법은가시부파장으로검출하기전발색제를함유한칼럼용리액에서의금속이온과의킬레이션을포함한다. 전형적인예로 4-(2-

58 피리딜아조 )-레소르시놀로킬레이션된칼럼용리액으로금속이온을분리하여 nm에서분석하는경우를들수있다. 시료전처리일반적으로시료전처리는희석또는 0.45 mm 필터를이용한여과혹은둘모두를포함한다. 경우에따라시료는고정상추출 (solid-phase extraction) 기술을통해적절하지않은종의제거가필요할수있다. 예를들어고염기성시료는산성형태의양이온교환고정상추출카트리지를통과함으로써중화될수있다. 조작법전도도검출을위한이동상은고순도의물 ( 일반적으로 18 MΩ cm 이상의저항율 ) 및고순도시약을사용한다. 자외가시부흡광도검출법을사용하는이온쌍분리의경우낮은자외가시부흡광도를가지는물과이동상첨가물들을사용한다. 이온교환분석에서이온의유지시간은이동상의이온강도와원자가 ( 전하 ) 의감소에따라증가한다. 예를들면동일한몰농도의수산화나트륨또는탄산나트륨이동상에서음이온의용량인자 (k ) 는수산화나트륨을이동상으로사용한경우가탄산나트륨에비해작다. 수산화나트륨과같은일부이동상에서대기중의이산화탄소를흡수하여조성이바뀌고종종기저선방해를유발할수있다. 이러한경우수산화나트륨이동상의이산화탄소흡수를방지하기위한조치가필요하다. 이온배제분석의경우, 유기산의용량인자는이온강도또는무기산의농도증가에따라증가하지만칼럼온도의증가에따라감소한다. 투과량은일정하게유지되므로이러한영향은대개작다. 아세토니트릴과같은용매의첨가로유기산의유지력을줄일수있다. 액체크로마토그래프법의다른방법과마찬가지로이온크로마토그래프법또한내부표준법및절대검량선법을통해정량한다. 질량분석법 질량분석법 (Mass spectrometry : MS) 은분자를 이온화시키고통일원자질량단위에대한비로나타낸이 온의상대질량 (m) 을이온의전하수 (z) 로나누어얻 은무차원량의 m/z 값에따라이온을분리검출하는방 법으로물질의확인및순도시험등에쓴다. 통일원자 질량단위는기저상태의 12 C 의 12 분의 1 의질량으로 원자, 분자및이온질량을나타낼때에사용한다. 측 정결과는이온의 m/z 값을 x 축으로, 이에대응하는 신호의상대강도를 y 축으로나타낸질량스펙트럼으로 나타낸다. 검체분자를구성하는각원소의단일동위 체 ( 일반적으로천연존재비가최대인동위체 ) 만으로 이루어지는분자또는이온의정밀질량을모노아이소토 픽질량이라고말한다. 보통질량스펙트럼위에는모노 아이소토픽이온과함께그동위체이온이존재한다. 분 자량관련이온의 m/z 값으로부터검체분자의질량을 구하는것이가능하고조각이온이관측되는경우에는 조각이온의질량, 분자량관련이온과조각이온의질 량차등으로부터구조확인이나추정이가능하다. 이중 질량분석 (MS/MS) 은 m/z 값에의해선택된전구체이 온을해리시키고생성된생성물이온을질량분석에제공 하는방법이다. 관측된생성물이온의 m/z 값에의해구 조의확인이나추정이가능하다. 질량분석및이중질량 분석의개념도를그림 1 에나타낸다. Ionization Part Mass Analyzer Detector MS Ion Source Mass Separation Detection Dissociation MS/MS Mass Separation Detection Ionization Part Mass Analyzer Detector Data Processor Data Processin g Data Processin g Data Processor m/z and Relative Intensity m/z and Relative Intensity 그림 1. MS 및 MS/MS 개념도 질량분석계

59 질량분석계는일반적으로검체도입부, 이온화부 ( 이온원 ), 질량분리부, 검출부및데이터처리부로이루어진다. 또한질량분리부등을고진공으로유지하기위한배기계를갖춘다 ( 그림 1). 검체도입부이온화부에대한검체도입법으로는용액검체등을실린지펌프나캐필러리팁등을이용하여이온화부에도입하는직접주입법또는액체나고체검체를유리관등에채우고이온화부의전자선이나반응이온분위기의가장가까운부근까지도입하는직접도입법등이있다. 또한가스크로마토그래프법, 액체크로마토그래프법, 모세관전기영동등의분리분석법에의해분리한각성분을연속적으로이온화부에도입하는방법등이있다. 이온화부질량분석계에도입된검체는이온화부에서이온화되어플러스또는마이너스의전하를가지는이온을생성한다. 질량분석법에는다양한이온화법이있으며측정대상이되는검체의극성이나분자량및목적등에따라최적의이온화법을선택하는것이중요하다. 대표적인이온화법은다음과같다. 1) 전자이온화 (Electron ionization : EI) 법기화한검체분자 M이열전자의에너지 ( 일반적으로는 70 ev) 에의해이온화하고분자이온 M+ 나검체분자의구조정보를가진조각이온을생성하는이온화법이다 이하의저분자량으로휘발성검체나기체검체등의비극성분자를이온화하는데적합하다. 재현성이높은조각패턴을가진질량스펙트럼을얻을수있기때문에라이브러리를이용한화합물의동정등에쓴다. 2) 화학이온화 (Chemical ionization : CI) 법기화한검체분자가이온화실에도입한메탄이나이소부탄, 암모니아등의시약기체로부터열전자에너지에의해성서한반응이온과의이온분자반응에의해이온화하고프로톤부가분자 [M + H]+ 나탈프로톤분자 [M - H]- 또는반응이온부가분자등이생성된다. EI법에비해생성되는이온의내부에너지가작기때문에조각화가일어나기어렵다. 3) 일레트로스프레이이온화 (Electro spray ionization : ESI) 법검체용액을끝을고전압으로인가한캐필러리를통해분무하면전기를띠는안개형태의물방울이생성된다. 또한용매의증발에따른물방울의전하밀도가증대한다음에검체분자가이온화하고 [M + H]+ 나 [M - H]- 또는알칼리금 속이온부가분자등이생성된다. 비교적고극성저분자부터고분자량의검체이온화에이용되며, [M + nh]n+ 나 [M - nh]+ 등과같은다가이온을생성하기쉬운성질을이용하여펩티드나단백질, 다당등의생체고분자측정에도응용된다. 4) 대기압화학이온화 (Atmospheric pressure chemical ionization : APCI) 법검체용액을가열캐필러리를통해질소기체에의한기화및분무를실시하고고전압침전극에의한코로나방전을일으키면용매분자가이온화한다. 이용매이온과의이온분자반응에의해검체분자가이온화하고 [M + H]+ 나 [M - H]- 또는알칼리금속이온부가분자등이생성된다. 분자량 1500 정도이하의비극성에서고극성화합물의이온화에적합하다. 5) 매트릭스지원레이저탈이온화 (Matrix addisted laser desorption/ionization : MALDI) 법검체와 a-시아노-4-히드록시신남산이나시나핀산등의매트릭스를혼합한것에펄스레이저를조사하면매트릭스의전자여기에따라검체분자가순간적으로기화및이온화된다. 이때매트릭스와검체분자사이에서프로톤의교류가일어나고 [M + H]+ 나 [M - H]- 또는알칼리금속이온부가분자등이생성된다. 적절한매트릭스를선택하여수백의저분자량부터수십만의고분자량까지의화합물의이온화가가능하다. 측정에필요한검체량이미량이기때문에펩티드나단백질등의생체유래검체의이온화에이용된다. 6) 기타이온화법기타이온화법으로전계이온화 (Field ionization : FI) 법, 전계탈리 (Field desorption : FD) 법, 고속원자충격 (Fast atom bombardment : FAB) 법, 이차이온질량분석 (Secondary ion mass spectrometry : SIMS) 법, 대기압광이온화 (Atmospheric pressure photoionization : APPI) 법그리고여기한헬륨과의충돌반응에의한이온화를이용하여개방된공간에서물질표면의휘발성성분을직접이온화할수있는방법등다양한이온화법이개발되고있다. 7) 검체도입법과이온화법각이온화법은검체도입법과밀접한관련이있다. 기체크로마트그래프법질량분석의경우캐필러리칼럼으로분리한기화성분을직접고진공의이온화부에도입하고 EI법이나 CI법등으로이온화한다. 액체크로마토그래프법질량분석

60 의경우칼럼으로분리한액상속의검체성분을대기압하에서분무하고고진공질량분리부로이송하기위한인터페이스에서 ESI법이나 APCI법등에의해이온화된다. 이때이용하는이동상은칼럼분리와이온화양방에적합한조성이되도록고려할필요가있다. 또한모세관전기영동질량분석으로이용되는경우일반적으로는모세관끝으로영동액에적당한용액을혼합하여유량을조정한다음 ESI법등에의해이온화한다. 질량분리부질량분리부에서는이온화부에서생성한이온이 m/z값에따라분리된다. 그결과대상으로하는검체에서유래하는이온의질량이나상대존재량을측정할수있다. 질량분리부에는다음과같은것이있다. 1) 사중극형분리부 (Quadrupole : Q) 사중극형분리부에는병행으로배치된 4 개의봉모양의전극에고주파교류전압과전류전압이이중으로인가되어있다. 이공간에진입한이온은그 m/z값에의해진동하지만어떤특정 m/z값을가지는이온만이안정된궤도로통과된다. 인가전압을변화시켜 m/z값의다른이온이분리부를통과하여질량스펙트럼이얻어진다. 일반적으로사중극형분리부의질량분해능은낮지만비교적넓은다이나믹레인지를가지며장치가간단하고소형화가가능하기때문에범용장치로써정성및정량분석에널리이용된다. 2) 이온트랩형분리부 (Ion trap : IT) 전장이나자장을단독또는조합하여만든공간에이온을가두는장치를나타낸다. 가 ) 폴이온트랙 (Paul ion trap) 사중극이온트랩 (QIT) 와동의어이다. 원리적으로는사중극형분리부와동일하지만봉모양의전극대신에고리모양의전극과엔드캡전극을이용함으로서이온을안정적으로트랩할수있다. 트랩된이온은고주파전압을주사함으로서 m/z값에의해검출부로배출, 질량스펙트럼을얻을수있다. 하나의분리부로다단계질량분석 (MS n ) 이가능하기때문에구조해석등정성분석에범용된다. 쌍곡면을가진 4 개의전극을이용하여트랩용량을증대시키고감도나다이나믹레인지를개선시킨것을선형이온트랩 (LIT) 라고한다. 나 ) 킹돈트랩 (Kingdon trap) 킹돈트랩형분리부에서는이온이방추형전극의주위를회전하면서트랩된다. m/z값에의해진동하는이온에의해유도된 이미지전류를검출하고, 얻어진시간축에서의파형 데이터를푸리에변환으로주파수해석하여질량스펙 트럼을얻을수있다. 매우높은질량분해능및질 량진도를얻을수있기때문에구조해석등정성분석 에이용된다. 다 ) 페닝이온트랩 (Penning ion trap) 푸리에변 환이온사이클로트론공조형 (Fourier transform ion cyclotron resonance, FT-ICR) 분리부로이용 된다. 초전도자석에의한강력한자장 B 속에진입한 이온은로렌츠힘의작용에의해사이클로트론운동을 한다. 이때각주파수는아래와같은일반식으로나 타낸다. 여기에서 m 은이온의질량, q 는이온의전기량, B 는자속밀도를나타낸다. 이주파수의고주파전장을 가하면이온은와권상의궤도를그린다. 이렇게회전 하는이온군은각각의 m/z 값에따라주기적으로변 화하는전류를검출전극으로유도한다. 그러한신호 를푸리에변환하고주파수를 m/z 값으로변환함으로 서질량스펙트럼을얻을수있다. FT-ICR 분리부는 매우높은질량분해능과질량진도를가지며, 각종프 리커서이온해리법과함께상세한구조연구등에이 용된다. 3) 비행시간형분리부 (Time of flight : TOF) 비 행시간형분리부에서이온은검출부에도달할때까지 의비행시간의차에의해분리된다. 일정전압 V 에 의해가속된질량 m 의이온이거리 L 을비행하여 검출기에도달하는시간 t 는다음과같은일반식으로 나타낼수있다. 비행시간 t 는 m/z 값의평방근에비례하고질량이 작은이온일수록빨리검출기에도달한다. 전극을늘 어놓은리플렉트론에의해이온을반사시키는리플렉 터모드에서는이온이가진운동에너지의확산을막고 비행거리를배증함으로서높은질량분해능을얻을수 있다. 이론적으로측정할수있는질량범위에제한이 없기때문에 MALDI 법등과함께단백질등의고분

61 자성분의분석에사용되는한편높은질량분해능을 가지고있기때문에저분자화합물의정성분석에도널 리이용된다. 4) 자장섹터형분리부 (Magnetic sector) 자장섹 터형분리부에진입한이온은직교하는자장의로렌 츠힘에의해편향된다. 이때아래의일반식에따라 m/z 값이다른속도 V 의이온은다른곡률반경 r 로 자장중을비행한다. 이온이통과하는길에는슬릿이형성되어있고특정 m/z 값을가진이온만을통과시킨다. 여기에서자속 밀도 B 를주사하여 m/z 값이다른이온이차례로슬 릿을통과, 검출기에입사하면질량스펙트럼을얻을 수있다. 일반적으로전기장섹터를자기장섹터에 결합한이중수속형장치로이용되며높은질량분해능 과정량성을겸비하기때문에정성및정량분석에이 용된다. 검출부 질량분리부를통과한이온은일반적으로검 출부에서전자를방출시켜전기신호로기록된다. 검 출부에는다음과같은것이있다. 한편푸리에변환 형장치에서는분리부에서운동하는이온에의해유 기되는전류를검출전극을이용하여기록한다. 1) 이차전자증배관 (Secondary electron multiplier : SEM) 다이노드라고부르는전극을다단으로배 치한구조를가진다. 이온이최초의다이노드에충돌 하여방출되는이차전자는잇따라증폭된후에신호 로기록된다. 이이차전자의증배효과에의해미소한 이온검출이가능해진다. 2) 채널전자증배관 (Channel electron multiplier : CEM) 파이프모양의채널구조를가지며이온이채 널내벽에충돌하여이차전자를방출한다. 이차전자 는대항하는내벽에입사하고그과정을반복함으로 서다단계증폭이이루어진다. SEM 보다간단하여 소형화가가능하다. 3) 마이크로채널플레이트 (Micro channel plate : MCP) 미세한 CEM 을여러개로묶은구조를가진 다. 수광면이넓고매우얇게작성할수있으며이차 전자의시간적분산이작기때문에 TOF 형장치의 검출부로사용된다. 4) 페러데이컵 (Faraday cup : FC) 이온검출부에 입사한이온전하를받아전류로변환하는단순한검출기다. 방출되는이차전자를잡을수있도록컵모양의구조를하고있다. 이중질량분석계이중질량분석은 1 단계질량분리부에서프리커서이온을선택하고이온을해리시켜생성한프로덕트이온을 2 단계질량분리부로분리하여검출하는방법이다. (1) 이온구조의확인또는추정. (2) 특이적및고감도분석에이용된다. 이중질량분석은프리커서이온의선택, 이온의해리및프로덕트이온의분리를각각전단계의질량분리부, 중간영역및후단의질량분리부에서실시하는공간적이중질량분석과동일질량분리부의다른시간구분으로실시하는시간적이중질량분석으로분류된다. 전자인질량분석계로는 3연 4중극형, 4중극비행시간형, 비행시간비행시간형등이있다. 후자인질량분석계로는이온트랩형이있고프리커서이온의선택, 해리및프로덕트이온의분리를여러번반복함으로서 MS n 이가능하다. 프리커서이온의해리법 1) 충돌유도해리 (Collision-induced dissociation : CID) 가속된이온과중성의충돌가스 (He, Ar, N2 등 ) 와의충돌에의해충돌에너지의일부또는전부가이온의내부에너지로변환되어이온이여기하여해리한다. 2) 포스트소스분해 (Post source decay : PSD) MALDI법에서이온원으로생성된이온이가속영역을나와검출기에도달할때까지이온자신의과잉내부에너지및잔류가스와의충돌에의해해리한다. 리플렉트론비행시간형질량분석계를이용한 MS/MS에이용된다. 3) 기타기타해리법으로전자포획해리 (Electron capture dissociation), 전자이동해리 (Electron transfer dissociation), 적외다광자흡수해리 (Infrared multi-photon dissociation) 나표면유도해리 (Surface-induced dissociation) 등이있다. 주요이중질량분석계의구성 1) 3연4중극형 (Triple quadrupole mass spectrometer : Q-q-Q) 4중극을직렬로 3개연결한구성을가지며, 첫번째 4중극은프리커서이온선택에, 두번째 4중극은충돌실로서이온해리에, 세번째 4중극은프로덕트이온의질량분리에사용된다. 다양한스캔양식이가능하고특히정량분석에범

62 용된다. 2) 4중극비행시간형 (Quadrupole time-of-flight mass spectrometer : Q-TOF) 3연4중극의세번째사중극을비행시간 (TOF) 으로대신하는구성을가진다. 사중극으로프리커서이온을선택하고, 직교형 TOF에의해질량분리를실시한다. 고감도, 고분해능측정이가능하다. 3) 비행시간비행시간형 (Time-of-flight tome-of-flight mass spectrometer : TOF-TOF) 프리서커이온을선택하는비행시간형분리부, 충돌실및프로덕트이온의질량분리를실시하는비행시간형분리부로구성된다. MALDI-TOF-TOF로이용된다. 4) 기타두개의이중수속형장치를연결한구성을가진 4섹터형 (Four-sector mass spectrometer) 등이있다. 또한시간적질량분리부를가진 LIT-kingdon trap이나 QIT-TOF 등도있다. 측정양식질량분석일반적인질량분석측정법에는다음과같은양식이있다. 각측정양식을통해얻은데이터에대해다음과같은개요를기술한다. 1) 전이온모니터링 (Total ion monitoring : TIM) 일반적으로는풀스캔모드라고도부른다. 선택한 m/z 값범위의이온을모두검출하여기록하도록질량분석계를작동시키는방법으로, 각주사의이온량적산값을전이온전류 (Total ion current :TIC) 라고한다. 한편액체크로마토그래피질량분석이나가스크로마토그래피질량분석등에서취득한질량스펙트럼으로부터구한전이온전류를유지시간에대해플롯한크로마토그램을전이온전류크로마토그램 (Total ion current chromatogram : TICC) 이라고한다. 또한특정 m/z값에서상대강도를시간의관수로나타낸크로마토그램을추출이온크로마토그램 (Extracted ion chromatogram : EIC) 이라고한다. 2) 선택이온모니터링 (Selected ion monitoring : SIM) 질량스펙트럼을취득하는대신에특정 m/z값을가진이온신호량만을연속적으로기록하도록질량분석계를작동시키는방법이다. 액체크로마토그래피질량분석이나가스크로마토그래피질량분석등을이용한시료의정량이나고감도검출을실시하기위 해이용된다. 이중질량분석이중질량분석측정법에는다음과같은양식이있다. 각측정양식을통해얻은데이터에대해다음과같이개요를기술한다. 1) 프로덕트이온분석 (Product ion analysis) 선택한 m/z값의프리커서이온에의해생성된프로덕트이온을검출하는방법으로, 시료의정성적인정보를얻을수있다. 2) 프리커서이온스캔 (Procursor ion scan) 해리에의해특정 m/z값의프로덕트이온을생성하는프리커서이온을주사하는측정법으로, 특정의부분구조를가진시료의특이적검출에이용된다. 3) 콘스턴트뉴트랄로스스캔 (Constant neutral loss scan) 해리에의해특정질량의감소 ( 중성종의제거 ) 가일어나는프리커서이온을주사하는측정법으로, 특정부분구조를가진시료의특이적검출에이용된다. 4) 선택반응모니터링 (Selected reaction monitoring : SRM) 특정 m/z값의프리커서이온을해리시켜생성하는특정 m/z값의프로덕트이온을검출하는방법으로, 복잡한매트릭스중의미량의시료의정량검출에이용된다. 선택이온모니터링과유사한방법이지만, 프리커서이온으로부터생성된프로덕트이온검출에이용하면특이성이향상된다. 각종시험에대한적용의약품분석에서질량분석은분자의질량이나구조정보에근거한특이적검출법으로서확인및순도의시험등에이용된다. 장치의최적화질량분석에서양호한이온피크의형상, 감도, 질량정확도등을얻기위해서는이온화법이나질량범위에따라적당한표준물질을이용하여사전에장치의각구성유닛의측정파라미터를최적화할필요가있다. 1) 튜닝 (Tuning) 이온화부, 질량분리부, 검출기의가스압, 온도, 전압값등의설정파리미터를조정하고, 검출되는이온피크의형상, 감도, 상대강도를최적화한다. 이온화부의각종파라미터는생성하는이온종, 질량분리부로수송되는이온종및상대강도에영향을미친다. 질량분리부와관련된파리미터는피크폭, 질량정확도, 질량분해능, 감도등에영향을미치고, 검출기의파리미터는신호강도및시스템감

63 도에영향을미친다. 2) 캘리브레이션 (Calibration) 기지화합물 ( 표준물질 ) 의질량을기준으로하여질량분석계의질량교정을실시한다. 질량측정치의재현성은장치의전기적변동, 이온화부를비롯한각구성유닛의표면청정도및측정실온도등에의해영향을받는다. 캘리브레이션방법에는외부표준법과내부표준법이있다. 질량교정점의수는질량분석계의종류에따라다르다. 3) 질량분해능 (Mass resolving power) 근접한두개의이온피크를서로분리하는능력을질량분해능이라고한다. 질량분해능이높을수록작은질량차의피크를분리하여검출할수있다. 자장섹터형질량분석계의경우일반적으로질량분해능 R은질량 M과 M+ M 2개의피크가피크높이의 10% 높이에서겹치는경우다음식으로계산할수있다. 트이온이나프로덕트이온의검출과함께사용할수도있다. 순도시험질량분석에의한피검성분의순도시험은일반적으로시료중의혼재물의한도에대응하는농도의표준용액등을이용하여크로마토그래피등의분리분석과함께진행된다. 시험용액중의특정혼재물에서생성되는분자량관련이온또는특징적인프래그먼트이온이나프로덕트이온의피크면적또는높이를측정하고, 표준용액중의대상으로하는성분으로부터생성되는이온의피크면적또는높이와비교한다. 보다정확한값을얻기위해서는측정대상성분의안정동위체표지화합물등을내표준물질로서시험용액에첨가하는방법도가능하다. 크로마토그래피등과함께질량분석시험을실시하는경우에는크로마토그래피에따른시스템적합성을구할수있다. 사중극형질량분석계나비행시간형질량분석계등자장섹터형질량분석계이외의장치의경우, 일반적으로반값폭법에의해질량분해능을구할수있다. 질량 m의이온피크의반값폭을 m이라고하면질량분해능은 R = m / m에의해산출되며, 자장섹터형질량분석계의질량분해능과는구별된다. 확인시험질량분석에의한피검성분의확인시험은일반적으로피검성분분자의질량확인에의해이루어진다. 미리의약품각조에규정된표준용액등을이용하여측정치가의약품각조에규정된값의범위내에있거나규정된이온이검출되는것을확인한다음시험을실시한다. 장치의질량분해능및피검성분분자의질량에따라질량분석으로구한피검성분분자의질량은모노아이소토픽질량이나분자량에대응시킬수있다. 일반적으로모노아이소토픽피크에의해주동위체로만이루어지는분자의질량을구하지만분자량이크거나분해능이충분하지않아모노아이소토픽피크를확인할수없는경우에는피크의가중평균등으로부터분자의평균질량을구한다. 단백질등의분자량이큰시료를 ESI/MS로분석한경우, 다수의다가이온으로서측정되므로디콘볼루션처리에의해평균질량을구한다. 피검성부분자에서생성된특징적인부분구조정보를포함하는프래그먼

64 체분급법 체분급법은체를써서가루의약품의입자경분포를측정하는방법으로본질적으로는 2 차원의크기를평가하는측정법이다. 이방법으로측정된입자의크기는입자가통과하는최소의체눈의치수로나타낸다. 이방법은입자경분포에따른분체및과립을대상으로한분급법의하나이다. 직포체를쓸때는체분급은기본적으로는입자를체의중간적인입자경치수 ( 예를들면폭 ) 에의한분급이다. 기계적체분급법은입자의대다수가약 75 μm 이상일때가장적합하다. 비교적작은입자는무게가가벼워체분급중에입자가상호부착하거나체에부착하는결과당연히체를통과할입자가잔류하게되며부착력및응집력등의입자간력을이겨내기에는불충분하다. 이러한물질에대하여는에어제트법 (air-jet sieving) 또는소닉시프터법 (sonic sifting) 과같은진동법이더적합하다. 체분급법은측정법의타당성이확인되면 75 μm보다작은중위경인분체및과립에도적용이가능하다. 체분급법은보통비교적큰분체나과립을분급하기위한방법이다. 이방법은분체나과립을입자경만을기초로하여분급하는경우에적절한방법이며대부분의경우건조상태에서실시한다. 이방법의문제점은비교적많은검체량 ( 분체와과립의밀도및시험용체의지름에따라다르지만보통적어도 25 g 이상 ) 이필요하다는것및체눈을막을수있는유상또는기타부착성분체와과립의경우에는체분급이어렵다는것이다. 체눈으로부터의입자의통과는종종길이보다최대폭또는두께에더많이의존하므로이방법은기본적으로입자경을 2 차원적으로평가하는것이된다. 이방법은검체의전체적인입자경분포를평가하는것을목적으로하고있다. 따라서특정한 1 개또는 2 개의체를통과하는비율또는잔류하는비율을측정하는것은아니다. 각조중에따로규정이없는한건식체분급법에서기술되어있는것과같은입자경분포를평가한다. 체분급종점에도달하기어려운경우 ( 예를들면검체가체를쉽게통과하지않는경우 ) 또는보다미세한최소체분급범위 (< 75μm) 를쓸필요가있는경우에는다른입자경측정법의이용을충분히고려해야한다. 체분급은검체가흡습또는탈습하지않는조건에서한다. 체분급을할때의환경의상대습도는검체의흡습또는탈습을방지할수있도록조절한다. 반대로이러한현상이일어나지않을때는체분급법은일상환경습도에서한다. 특수한검체에적용하는특별한조건에대하여는각조중에전부상세히기재해둔다. 체분급법의원리 : 시험용체는평직으로된금속선의망목으로구성되어있으며망목개구부는거의정방형으로가정하고, 밑이없는원통형용기의아래부분에고정되어있다. 기본적인측정법은 1 개의체위에체눈이더큰체를순차적으로쌓아두고맨위단의체위에검체분체를놓는다. 한군의체를정해진시간진동하고각체위에잔류한검체질량을정확하게단다. 시험결과는각각의체지름범위내의분체의질량기준백분율 (%) 로주어진다. 단일의약품분체의입자경분포를평가하기위한체분급법은일반적으로적어도입자의 80 % 가 75μm 이상인경우에이용된다. 체분급법으로입자경분포를측정할때의입자경파라미터는입자가통과하는가장좁은체눈이다. 조작시험용체이시험에쓰는체는각조에따로규정이없는한표 1에제시된것을쓴다. 체는검체중의전체입자경범위를커버할수있도록선택한다. 체눈면적의 급수를가지는한군의체를쓰는것이좋다. 이들체는체눈이가장큰것을제일상단, 가장작은것을제일하단이되도록조립한다. 시험용체의체눈의표시에는 μm 또는 mm 를쓴다 ( 주 : 메시 (mesh) 번호는표중에서환산하는경우에만쓴다 ). 시험용체는스테인레스강제, 황동제또는기타적절한불활성망으로된것을쓴다.

65 μ μ μ μ μ μ 표 1 관계있는범위에서의표준체의체눈의길이 1) 시험용체의교정 ISO ) 에따른다. 체는사용전에현저히찌그러지거나파손되지않았는지또한특히망면과체틀의접합부에대하여도주 의하여검사한다. 체눈의평균크기와크기의변동을평가하는경우에는눈으로검사할수도있다. 또한 μm의범위안에있는시험용체의유효체눈의크기를평가할때는표준유리구를써도된 μ μ 다. 각조중에따로규정이없는한체의교정은조정된실온과환경상대습도에서한다. 2) 체의세정이상적으로는시험용체는에어제트또는액류중에서만세정할수있다. 만약검체가체눈을막았을때는최후수단으로서주의하여부드럽 μ μ μ μ μ 게솔질을할수있다. 측정용검체특정한물질에대하여각조중에검체 μ μ μ μ μ 의질량이규정되어있지않은경우에는검체의겉보기밀도에따라 g의검체를쓰고지름 μ μ μ μ μ μ μ μ μ 200 mm의체를쓴다. 지름 76 mm의체를쓰는경우에는검체량은 200 mm체일때의약 1 / 7로한다. 정확하게단여러질량의검체 ( 예를들면 25, 50, 100 g) 를체진탕기로같은시간시험적으로체분급을하여이검체에대한최적질량을결정한다. μ μ μ μ μ ( 주 : 만일시험결과가 25 g 과 50 g 검체에서비슷하지만 100 g 검체는체눈이가장작은체를통과 μ μ μ μ μ 하는질량백분율이 25 g 및 50 g 보다낮을경우 100 g은검체로서너무많다 ) g 의검체 μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ 밖에는쓸수없는경우에는동일한체리스트 ( 표 1) 에적합한지름보다작은시험용체를대신사용할수있지만이경우에는종점을다시측정하여바로잡는다. 때에따라서는더작은질량 ( 예를들면 5 g 미만 ) 에대하여측정할필요가있을때도있다. μ μ μ 겉보기밀도가작은검체또는주로지름이아주근사한입자로된검체에대하여는체눈의과다한막힘을 μ μ μ μ μ 방지하기위하여 200 mm 체로는검체의질량이 5 g 미만이어야될때도있다. 특수한체분급법의타 당성을확인할때는체눈의막힘을주의한다.

66 검체가습도변화에따라심하게흡습또는탈습하기쉬울때는적당하게습도를조절한환경에서시험한다. 마찬가지로대전하는검체의경우에는이러한대전이분석에영향을주지않는다는것을보증하기위하여주의깊게관찰한다. 이영향을최소화하기위하여경질무수규산또는산화알루미늄과같은대전방지제를 0.5 % 수준으로첨가해도된다. 위에설명한그어느영향도제거할수없으면이에대신하는다른입자경측정법을선택한다. 진탕법서로다른메커니즘을바탕으로한여러진탕장치가있으며이들모두가체분급에이용된다. 그러나시험중에개개의입자에작용하는힘의종류및크기가기종간에차이가나진탕법이달라지면체분급이나종점의결정에서다른결과가나타난다. 기계적진탕법또는전자진탕법및수직방향의진동또는수평방향의원운동을병행할수있는방법또는탭핑 (tapping) 또는탭핑과수평방향의원운동을병행하는방법등이이용된다. 기류중에서입자의비상을이용하는방법도있다. 측정결과에는사용한진탕법과진탕에관계하는파라미터 ( 이들을변화시킬수있는경우에는 ) 를기재한다. 종점의결정체분급은어느체에대하여도체위의질량변화가직전의질량에대하여 5 % ( 76 mm 체의경우에는 10 %) 또는 0.1 g 이하가될때종료한다. 정해진바의체위의잔류량이전체검체질량의 5 % 미만이되는경우에는종점은그체위의질량변화를직전의질량에대하여 20 % 이하까지끌어올린다. 각조중에따로규정이없는한어느한체위에잔류한검체양이전체검체질량의 50 % 를넘는경우에는체분급을반복한다. 이체와처음의체조합중에서이체보다큰체눈을가지는체와의중간에있는체, 즉한군의체조합으로부터삭제된 ISO 시리즈의체를추가한다. 체분급법기계적진탕법 ( 건식체분급법 ) 각각의체만의질량을 0.1 g 까지단다. 질량을정확히단검체를최상단의체위에놓고뚜껑을한다. 체조합을 5 분간진탕한다. 검체가손실되지않도록체조합으로부터각단의체를주의깊게분리한다. 체망의아래면에미분이부착되어있을때에는필요하면연한솔을써서조용히체의아래면으로부터제거하고바로아래단의체위에있는검체에합한다. 각체의질량을다 시달아체위의검체질량을측정한다. 같은방법으로받침접시내의검체질량도측정한다. 체를다시조합하여다시 5 분간진탕한다. 앞에기술한바와같이각체를분리하고질량을단다. 이조작을종점규격에적합할때까지반복한다 ( 종점결정항참조 ). 체분급을종료한다음전손실량을계산한다. 전손실량은처음검체질량의 5 % 이하이다. 새검체를써서체분급을반복하지만이때는앞에서쓴반복회수에대응하는합계시간을 1 회체분급시간으로한다. 이분급시간이종점결정을위한필요조건에적합한지를확인한다. 하나의검체에대하여이종점의타당성이확인되어있는경우에는입자경분포가정상적인변동범위내에있으면이다음의체분급은하나의고정된분급시간을써도된다. 그어느체위에잔류하는입자가단일입자가아니고응집체이며기계적건식체분급법을써도양호한재현성을기대할수없는경우에는다른입자경측정법을쓴다. 기류중비산법 ( 에어제트법및소닉시프터법 ) 기류를사용하는여러가지장치가체분급에이용되고있다. 한번의시간에한개의체를쓰는시스템이에어제트법이다. 이방법은건식체분급법에서기술한것과같이일반적인체분급법을쓰지만전형적인진탕메커니즘대신에표준화된에어제트를쓴다. 이법으로입자경분포를얻기위해서는처음에가장작은체눈의체를시작으로개개의체마다일련의분석을할필요가있다. 에어제트법에서는종종보통의건식분급법에쓰이는것보다더작은체눈의시험용체를쓴다. 이방법은체위잔류분또는체이래잔류분만을필요로할때에보다더적절하다. 소닉시프터법에서는굵은체를쓴다. 이경우검체는정해진바의펄스수 ( 회 / 분 ) 로검체를들어올린다음다시체의망목에오도록수직방향으로진동하는공기칼럼내로운반된다. 소닉시프터법을쓸때에는검체량을 5 g까지줄일필요가있다. 에어제트법및소닉시프터법은기계적체분급법으로는의미있는분석결과를얻을수없는분체및과립에서유용하다. 이들방법은기류중에분체를적절하게분산할수있는지여부에크게따른다. 입자의부착경향이보다강할때나특히대전경향이있는검체일때에는체분급범위의하한부근 (< 75 μ m) 에서이방법은양호한분산성을달성하기어렵

67 다. 위와같은이유로종점의결정은특히중요하다. 또한체위의검체가단일입자이며응집체를형성하지않는다는것을확인하는것이매우중요하다. 결과의해석개개의체위및받침접시에잔류하는검체의질량에더하여시험기록에는전체검체질량, 전체체분급시간, 정확한체분급법및변수파라미터에관한값을기재한다. 시험결과는누적질량기준분포로변환하는것이편리하다. 또한분포를누적체하질량기준으로하는것이바람직할때에는사용한체범위에전검체가통과하는체를포함시킨다. 그어느시험체에있어서체분급중에검체의응집체가체위에잔류하고있는것이확인된경우에는체분급법은의미가없다. 2) International Organization for standardization (ISO) Specification ISO ; Test sieves - Technical requirements and testing 탁도시험법 탁도시험법은순도시험의용해상태시험에서탁도 ( 탁함의정도 ) 를판정하는데쓴다. 보통의약품각조의규격은육안법을통해규정한다. 육안법이방법은흰색 ( 또는연하게착색한 ) 미립자를이용해탁함의정도를판정하는데이용한다. 착색검체에서는탁한정도가약하게인식되는경향이있어비교액도동일하게착색한것을사용하지않으면바르게비교하기어렵다. 탁도비교액포마진유탁표준액 5 ml, 10 ml, 30 ml 및 50 ml를각각정확하게취하여물을넣어정확하게 100 ml로하여각각탁도비교액Ⅰ, 탁도비교액Ⅱ, 탁도비교액Ⅲ 및탁도비교액Ⅳ로한다. 쓸때흔들어섞는다. 탁도비교액 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ 및 Ⅳ은각각 3 NTU, 6 NTU, 18 NTU 및 30 NTU에상당한다. 조작법검액, 물또는검액의조제에쓴용매및필요에따라새로조제한탁도비교액을각각안지름 mm의무색투명한바닥이평평한시험관에액체층이깊이 40 mm가되도록넣은다음산란광안에서검은색배경을써서위에서부터관찰하여비교한다. 산란광의밝기는탁도비교액Ⅰ이물과, 탁도비교액Ⅱ이탁도비교액Ⅰ과쉽게구별되도록한다. 탁도비교액측정은탁함의정도가물이나검액조제에쓴용매와차이가없으면쉽게판단할수없으므로투명성이떨어지는경우에만실시한다. 판정검액의투명성이물이나검액조제에이용한용매와같거나그탁도가탁도비교액Ⅰ 이하일때투명하다고할수있다. 검액의탁도가탁도비교액Ⅰ 보다높을경우에는다음과같이판정한다. 검액의탁도가탁도비교액Ⅰ 보다높지만탁도비교액 Ⅱ 이하인경우에는 탁도비교액Ⅱ 이하 로판정한다. 마찬가지로검액의탁도가탁도비교액Ⅱ 보다높지만탁도비교액Ⅲ 이하인경우에는 탁도비교액 Ⅲ 이하 로, 탁도비교액Ⅲ 보다높지만탁도비교액 Ⅳ 이하인경우에는 탁도비교액Ⅳ 이하 로판정한다. 탁도비교액Ⅳ 이상인경우에는 탁도비교액Ⅳ 이상 으로판정한다. 시액포마진유탁표준액 : 포마진유탁원액 3 ml

68 를정확하게취하여물을넣어정확하게 200 ml로한다. 조제한다음 24 시간이내에쓴다. 사용할때잘흔들어섞는다. 탁도는 60 NTU에상당한다. 광전광도법탁도는탁해진용액이나현탁액의서브미크론수준의광학밀도불균일성에입각하여빛의흡수와산란을기계적으로측정하여평가할수있다. 광전광도법은육안법보다객관적인판별이가능하다. 산란광이나투과광측정을기초로하여탁도를구할수있는데시험법에는측정방식과광원등을규정하고측정값을비교할때에는같은측정방식및광원을써야한다. 어떠한경우에도탁도와농도의직선관계는최소한 4 농도에서작성한검량선으로나타나야한다. 착색검체의경우에는색채에의한흡수가입사광및산란광의강도를줄여탁도가낮게계산되는경향이있기때문에주로투과산란법을쓴다. 투과광측정법탁해진용액에빛을쬐면탁한입자에산란되어투과광이감소한다. 일정한크기의입자가고르게분산되어있으면작은입자가저농도로포함될때탁도와농도는직선관계에있다. 분광광도계또는광전광도계를이용한자외가시부흡광도측정법으로탁도를측정할수있다. 고농도측정이가능하지만검체착색의영향을받기쉬우므로색의흡수에의한방해를되도록피하기위해보통 660 nm 부근의파장으로측정한다. 산란광측정법탁한액체를관찰할때탁한입자에의한빛의굴절로탁하게보인다 ( 틴들현상 ). 탁한액체에들어간빛은투과하고일부는흡수되고나머지는현탁입자에의해산란된다. 산란광측정법에서는탁도가낮은영역에서검출기의응답과산란탁도단위 (NTU) 가직선관계에있는데탁도가높아지면모든입자가입사광에노출되지않고산란광은검출기에도달하기까지방해를받게된다. 투과산란법투과산란법에서는산란광측정과동시에투과광을측정하여산란광양 / 투과광양의강도비로탁도를측정한다. 이방법에서는검체의색에따라감소하는입사광의양을보정할수있기때문에검체착색의영향을받지않는다. 적분구를써서투과산란법측정을하는경우에는특별히적분구측정법이라고부르는데탁한입자로인해생기는산란광을측정하는동시에전체투과광양을측정하여그 비율로탁도를구할수있다. 광전광도법의규격적용광전광도법을이용한검액의탁도는필요에따라탁도비교액Ⅰ Ⅳ와물또는사용된용매등탁도를이미알고있는표준용액을써서 NTU 단위로변환하여의약품각조의적부판정에쓸수있다. 자동교정이가능한장치에서는탁도를이미알고있는표준용액으로교정해직접 NTU로표시되는측정값을구한다. 구한측정값을규정된규격값과비교한다. 탁도측정법의단위로는 NTU를쓰는경우가많지만 NTU는텅스텐램프를이용해 90 ± 30 의산란광을입사광강도에대해측정하는기기를쓴경우의단위이며, 860 nm의적외선을광원으로하여 90 ± 2.5 의산란광을입사광강도에대해측정하는기기일경우에는 FNU를단위로쓴다. 값이작은영역 (40 NTU 까지 ) 에서는 NTU와등가이다. 또한포마진농도단위로정제수 1 L에포마진 1 mg을분산한것을 1 도로하는 FTU도쓴다.

69 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 일반정보신설 ( 안 ) - 의견수렴용 일반정보에수재되는참고정보로서분체유동성외 8 개일반정보를신설하고자그초안을작성하였으며 이에대하여많은의견을수렴하고자한다. 분체유동성 서론분체유동성을판단하는대표적인 4가지시험법으로 (1) 안식각, (2) 압축지수또는하우스너비, (3) 구멍 (orifice) 을통과하는유출속도, 그리고 (4) 전단셀 (shear cell) 측정법을들수있다. 또한이들각각의시험방법을변형시킨다양한측정법들이존재한다. 이러한기본시험법들과이들은변형한다양한시험법수를고려할때, 가능한경우, 시험법을표준화하는것이유리한측면이있다. 이러한인식하에분체유동성을판별하기위해가장일반적으로사용하는시험법들을아래에서소개한다. 각측정법을실시할때고려해야할주요시험사항들을제시하고동시에측정법표준화를위한권고사항을담고자한다. 일반적으로분말유동성을측정하는시험법은실용성, 유용성, 재현성과민감성을갖추어야하며의미있는결과를도출할수있어야한다. 제약산업에서다루어지는다양한분체들의유동성특성을특정한한가지실험법으로합당하게그리고완전하게규명한다는것은불가능하다는사실은계속언급되고있다. 그러므로의약품과학자가요구하는분체유동성과연관된다양한측면을규명하기위해서는여러가지표준시험법들을같이사용하는것이합리적인전략일것이다. 안식각안식각은여러과학분야에서고체유동성을규명하는데활용되어져왔다. 안식각은입자간마찰또는입자들사이의이동에대한저항성과연관된특성이다. 안식각측정결과는사용한시험방법에매우크게의존한다. 시험도중원추형의더미가형성될때분체물질들의분리, 분체간의유착또는통기등으로인하여애로사항이발생하기도한다. 이러한애로사항에도불구하고, 안식각측정법은제약산업에서지속적으로활용되어지고있으며, 의약품생산시발생할수있는문제점을예측하는데안식각측정법이지니는가치를증명하는다수의문헌보고들이이루어지고있다. 안식각은아래에서소개하는다양한방법들을통해쌓아진원추형의분체더미의수평평면에대한각도를나타낸다. 안식각측정을위한기본방법문헌에서는안식각측정을위한다양한방법들이소개되어져있다. 정적안식각을측정하는가장공통적인방법은다음두가지주요한실험변수에기반하여분류된다. 1) 분체가통과하는깔대기 (funnel) 의높이는바닥면에대해고정시키거나또는분체더미가쌓아질때변동할수있다. 2) 분체더미가형성되는바닥면의직경을고정하거나또는분체로구성된원추형의더미가쌓아질때원추직경을조절할수있다. 안식각측정방법의변경위에서언급한방법이외에도의약품관련문헌에서는아래와같은다양한변형법을제시하고있다. 1) 배출안식각 (drained angle of repose) 을측정하기위하여우선일정한크기를지닌실린더용기에과량의분체를넣고용기의바닥면에존재하는구멍을통하여분체를배출시킨다. 구멍을제외한바닥면과용기기벽사이에원추형의분체더미가형성됨에따라배출안식각을측정할수있다. 2) 동적안식각은한쪽끝에투명하고편평한덮개를가진원통에분체를채우고정해진속도로회전하

70 여측정한다. 동적안식각은흐르는분체에의해생기는수평면에대한각도이다. 운동마찰의내각은분체최상층을미끄러지는입자와드럼과같이회전하는입자를분리하는면이다. 유동성의일반적인척도로서의안식각비록안식각에근거하여분체유동성을정성적으로설명할때약간의차이가존재할수있지만, 의약품관련문헌들을고찰하여볼때, 안식각을이용해분체의유동성을기술하는방법은대체로아래표1에나온바대로 Carr 분류체계를따른다. 안식각이낮으면낮을수록분체의유동성은증가하는데일반적으로 40 이하가선호된다. 하지만 40 ~ 50 정도의안식각을보여주는분체를사용하여의약품제조공정을성공적으로수행한예들도문헌에서볼수있다. 분체의안식각이 50 를초과할경우통상적으로제조공정에부적합하다. 표 1. 분체의유동특성과이에대응하는안식각유동성안식각 ( ) 가교방지대책매우양호 양호 조금양호 불필요보통 한계점가교가있음조금불량 교반과진동이필요불량 매우불량 >66 안식각측정법고려사항안식각은분체의고유한성상이아니라원추형의더미를형성하는데이용한시험법에따라큰영향을받는다. 안식각을측정할때에는아래의주요사항을고려해야한다. 1) 원추형분체더미의피크는그위에떨어지는분체의충격에의해찌그러질수있다. 그러므로원추형분체더미를주의하여쌓음으로서, 충격에의한분체더미피크의찌그러짐을최소화할수있다. 2) 원추형분체더미가형성되는바닥면의성상 ( 예, 디자인 ) 이안식각에영향을미친다. 그러므로바닥면에분체층을먼저형성시킨후 ( 이러한분체층을공통기저, 즉 common base라부름 ) 여기위에분체더미가형성되도록해주는설계를지닌바닥면을사용하는것이좋을것이다. 안식각측정을위한추천절차분말층을쌓을수있는가장자리를가진고정된바닥면에안식각이형성되게한다. 바닥면은진동이없어야한다. 대칭성원추형분말더비를쌓기위해깔대기의높이를주의하여변화시킨다. 이때깔대기를움직일때진동이생기지않도록주의한다. 낙하하는분체가형성되는분체더미의피크에미치는충격을최소화시키기위해깔때기높이를분체더미상부끝으로부터 2-4 cm 떨어진곳에위치하게끔한다. 만약분체원추형더미가성공적으로대칭성을나타내지않거나또는재현성있게형성되지않는다면이방법은적절하지않다. 분체원추형더미높이를측정하여아래공식을이용해안식각을결정한다. tan α = 높이 / (0.5 밑면직경 ) 압축지수및하우스너비최근들어압축지수및하우스너비는분체의유동성을예측할수있는간단하며신속하고또대중적인방법으로인식되고있다. 압축지수는물질의부피밀도, 크기및형상, 표면적, 수분함량, 그리고응집력등에대한정보를간접적으로얻을수있는지표로제시되고있다. 왜냐하면상기에언급한모든요인들이압축지수에영향을미치기때문이다. 압축지수와하우스너비는분체의분말용적 (bulk volume) 과탭용적 (tapped volume) 을측정하여구한다. 압축지수및하우스너비측정방법압축지수및하우스너비는다양한방법을통하여측정할수있지만, 기본적으로겉보기용적 (V 0 ) 및최종탭용적 (V f, 탭충전을계속실시하더라도더이상변화하지않는용적 ) 을측정한다. 압축지수및하우스너비는아래처럼계산한다. 압축지수 = (V 0 - V f ) / V 하우스너비 = V 0 / V f 또는, 압축지수및하우스너비는아래식처럼겉보기밀도 (ρ bulk ) 및탭밀도 (ρ tapped ) 를측정하여계산한다 : 압축지수 = (ρ tapped - ρ bulk ) / 100 하우스너비 = ρ tapped / ρ bulk

71 또다른방법으로, 탭충전도중발생하는용적변화관측대신또는용적변화관측과함께압밀속도를측정한경우도있다. 표 2는압축지수와하우스너비를근거로한분말유동성척도를나타낸다. 표2. 유동성척도압축지수 (%) 유동성하우스너비 10 매우양호 양호 조금양호 보통 조금불량 불량 > 38 매우불량 > 1.60 압축지수및하우스너비측정법고려사항압축지수및하우스너비는분체의고유한성질이아니라실험방법에많이좌우된다. 문헌에서는겉보기용적 (V 0 ), 최종탭용적 (V f ), 겉보기밀도 (ρ bulk ) 그리고탭밀도 (ρ tapped ) 를측정할때다음과같은주요사항들에대한토의를다루도있다. 1) 실린더의직경 2) 탭밀도측정하기위한탭충전횟수 3) 시험에사용된검체의중량 4) 탭충전중검체의회전압축지수와하우스너비측정을위한권장절차 250 ml 용적을지닌실린더와 100 g의검체를사용한다. 보다적은용적을지닌실린더와저용량의검체를사용할수있지만, 이경우결과와함께변경사항들을설명하도록한다. 보통 3번측정후평균값을사용하도록추천한다. 구멍유출 (Flow through an orifice) 물질유동속도는많은요인들에의해영향을받는데, 어떤요인들은입자와연관되어져있으며일부는공정과연계되어져있다. 분체가구멍을통과하는유출속도를모니터링하는것이좀더나은분체유동성측정법으로제시되고있다. 용기에있는분체가구멍을통해다빠져나감에따라발생하는유출속도변화역시관측할수있다. 구멍직경, 분체입자크기및밀도등을유츌속도와연계시킨경험적인공식들이존재한다. 하지만구멍유출속도측정법은자유롭 게연속적으로흐르는특징을지닌분체를대상으로실시할때유용하다. 구멍을통과하는유출속도는일반적으로어느일정한용기 ( 예 : 실린더, 깔대기, 호퍼 ) 로부터흐르는시간당질량값으로측정한다. 유출속도는개별적증가형태 ( 특정시간동안유출되는분체질량또는특정질량의분체가유촐되는데소요되는시간 ) 로또는연속적으로시간변화에따른유출된질량변화등으로표현할수있다. 구멍유출속도측정방법문헌에는다양한방법들이제시되어져있다. 하지만구멍유출속도를측정하는가장일반적인방법은아래 3가지중요한실험변수에기반하여분류할수있다. (1) 분체를담기위해사용된용기의종류 : 일반적으로사용되는용기는생산공정에사용되는실린더, 깔대기, 그리고호퍼이다. (2) 구멍의크기및형상 : 구멍직경과형상은분체의유출속도에결정적인영향을미친다. (3) 분체유출속도를측정하는방법 : 유출속도는기록장치 ( 스트립차트레코더, 컴퓨터 ) 가연결된전자저울을사용하여연속적으로측정할수있다. 유출속도는또한비연속적으로개별적인방식으로측정할수도있다. 예를들면 100 g의분체가구멍을통과하는데걸리는시간, 또는 10초동안구멍을통과하는분체의질량등으로유출속도를나타낸다. 구멍유출속도측정방법의변경유출속도는용량또는용적기준으로표현한다. 이두가지방법중질량유출속도는상대적으로좀더편하지만, 고밀도분체에대해편향된결과가나올수있다. 다이충진공간이용적으로표현되므로용적유출속도가더선호될수도있다. 용기로부터시작되는분체의유동성을용이하게하기위해진동기를때때로부착하기도한다. 하지만이런경우결과해석이복잡해지기도한다. 이동가능한구멍장치는로터리프레스상황을더욱잘시뮬레이션하기위해이동하는구멍장치가제시된바도있다. 분체가흐를수있는구멍의최소직경도확인되어야한다. 구멍유출속도를통한분체유동성판단척도구멍유출속도는사용하는측정방법에큰영향을받는다. 그러므로구멍유출속에근거하여분체의유동성을판단하는일반적인척도는존재하지않는다. 문

72 헌에발표된결과들을서로비교하는것은타당성이결여되어있다. 구멍유출속도측정시고려사항구멍유출속도는분체의고유한성질이아니라측정방법에따라매우큰영향을받는다. 문헌에보고된주요고려사항에는다음과같은것들이있다. 1) 구멍의직경및형상 2) 용기재료의유형 ( 금속, 유리, 플라스틱 ) 3) 분체베드의직경및높이구멍유출속도측정을위한추천절차어느정도의유동성을지닌분체만이구멍유출속도측정의대상이될수있다. 응집력큰분체에는사용하지못한다. 분체베드의높이 ( 분체의정수부분 ) 가구멍직경보다훨씬크다면, 유출속도는분체정수부분에거의의존하지않는다. 실린더재질은분체유동성에거의영향을미치지않으므로실린더를용기로사용하는것이좋다. 분체컬럼의높이가컬럼직경 2배보다작을경우분체의유출속도는증가한다. 구멍은원형이어야하고실린더는진동에노출되어서는안된다. 일반적인실린더규격에대한지침은다음과같다 : 가이드라인을따라야한다. 1) 개구부 (opening) 의직경은입자직경의 6배보다커야한다. 2) 실린더직경은개구부직경의 2배보다커야한다. 용기로호퍼를사용하는것은제조공정상황을대변하기에적합할수있다. 깔대기, 특히가늘고긴자루가있는깔대기를용기로사용하는것은바람직하지않다. 왜냐하면자루의크기및길이, 그리고자루와분체간의마찰이유출속도에영향을끼치기때문이다. 끝을자른원뿔대 (truncated cone) 사용은적합할수있지만, 분체유동성은분체-벽간마찰계수에영향받으므로합당한재질로만들어졌는가를고려하는것이중요하다. 실린더에있는구멍을열기위해서는편평한면을지닌판 (plate) 을사용한다. 이때다양한구멍직경을지닌판을준비하여실험시유연성을제공하고또한다양한분체들의유동성을조사할있도록한다. 앞서언급하였듯이유출속도측정은이산형으로, 또는연속형으로실시할수있다. 전자저울을사용하여유출속도를시간의변화에따라연속적으로측정 할수있는데이방법은순간적인유츌속도변화를탐지하는데더욱더효과적이다. 전단셀법전단셀법은의약재료연구에광범위하게이용되어왔다. 이러한방법으로부터, 전단력-전단변형관계를나타내주는항복궤적 (yield loci), 내부마찰각, 일축항복강도, 인장강도, 흐름인자및다른유동성지수등과같은파생지수들을얻을수있다. 실험적인지수들을보다정확히조절할수있기때문에유동성은압밀량, 압밀시간및다른환경조건에대한함수로결정되기도한다. 이방법은주요호퍼및빈 (bin) 지수를결정하는데에도이용한다. 전단셀측정방법전단셀을이용한측정방법은실험적으로조절이가능하다는장점이있지만, 측정시시간이많이걸리고상당한양의재료및숙련된인력이필요하다는단점을갖고있다. 1) 실린더형전단셀 : 수평방향으로분리되며, 하부고정부분과전단셀링의상부이동부분간에전단면이있다. 전단셀에분체베드를충진한후상부링을움직여분체베드를전단시키는힘을측정한다. 2) 환상형 (annular) 전단셀 : 실린더형에비해재료가적게든다는장점이있지만, 디자인때문에분체베드가균일하게전단되지않는다 ( 예를들어, 환외부물질이환내부물질보다더많이전단됨 ) 는단점이있다. 3) 판형 (plate) 전단셀 : 거친표면을가진하부고정부분과상부이동부분간의얇은분체샌드위치로구성된다. 전단셀측정추천방법현존하는많은전단셀구성및테스트는풍부한자료를제공하고분체유동성을규명시효율적으로이용되어왔다. 이는또한호퍼나빈과같은기기설계시에도도움이된다. 별다른추천방법은없고, 다만전단셀방법을이용한분체유동성결과에사용기기및방법에대한기술이포함되어있어야한다.

73 미생물의특성분석, 동정및균주분류 서론원료의약품, 부형제 (excipient), 제약용수, 제조환경, 중간물질및완제의약품에서미생물이발견되는경우해당미생물의특성을분석해야한다. 이러한작업은경우에따라동정 (identification) 및균주분류 (strain typing) 등이포함될수있다.[ 참고 : 이장의말미에는 용어해설 이수록되어있다.] 미생물의특성분석작업에는통상적으로집락형태, 세포모양 ( 막대모양, 구균, 세포군, 포자형성방식등 ), 그람염색 (Gram reaction) 또는그밖의분별염색기법, 그리고진단가능한몇몇핵심적인생화학적반응 ( 예 : 산화효소, 카탈라아제, 혈장응고효소활성등 ) 의파악이포함될수있다. 이러한수준의미생물특성분석은비무균의약품의제조및일부무균제품의제조환경에서다양한위해평가목적을위해사용하기에충분하다. 미생물에대한더욱명확한동정을위해속 (genus) 및종 (species) 수준의동정작업이이루어지고이보다높은수준에서는균주수준의동정작업이수행될수있는데, 이러한작업은미생물의기원 (origin) 을조사하는데유용할수있다. 동정작업은특히미생물이비정형적으로빠르게회수되거나그수가특정제품범주에대한권장수준을초과하는경우에흔하게사용된다. 또한미생물동정은무균공정에서유용하게활용될수있으며, 멸균시험에서양성결과가발생하거나실패한무균공정모의시험에서회수한오염원을평가할때 ( 배지충전시험 ) 필요하다. 미생물동정시스템은다양한분석방법론에기반을두며, 특정방법에내재하는한계및 / 또는데이터베이스상의한계가존재할수있다. 동정은미생물의특성 ( 유전형및 / 또는표현형 ) 과표준균주 (type strain) 등의표준 ( 기준 ) 미생물을매칭함으로써수행된다. 어떤미생물이데이터베이스에포함되어있지않다면동정되지않을것이다. 따라서제조업체는사용하고자하는동정시스템의데이터베이스폭및필요에따른적용가능성을검토해야한다. 사용자는미생물동정시스템중어떤시스템이자신의요구사항에가장효과적으로적용할수있는지를고려해야한다. 이러한한계및요구되는동정수 준 ( 종, 속, 균주등 ) 을염두에둔채사용자는통상 적인미생물동정시험에서사용해야할적절한기술 도선택해야한다. 순수배양미생물의분리 배양 범주 형태학적 생리학적 생화학적 억제 동정작업의첫번째단계는분석을위해순수배양 (pure culture) 미생물을분리하는것이다. 일반적으 로이단계에서는순수배양미생물을생성하는집락 을확보하기위한목적으로, 적절하고일반적인미생 물고체배지에서대상집락을사분역패턴으로연속 적으로선상도말 (streaking) 하는작업이수반된다. 또한이기법은계속되는동정절차를위한표현형 발현및충분한접종균증식을가능케한다. 분석자는미생물의표현형발현 ( 세포의크기와형 태, 포자형성, 세포조성, 항원성, 생화학적활성, 항균 제감수성등 ) 이분리미생물의근원, 배지의선정 및증식조건의영향을받을수있음을인식해야한다 ([ 표 1] 참조 ). 표 1 미생물분류에서사용되는표현형적특성 혈청학적 화학분류학적 생태학적 특성 집락형태, 집락의색깔과모양및크기, 색소생성 세포형태, 세포의크기와모양, 편모유형, 저장물질 (reserve material), 그람염색, 포자및항산성염색, 포자형성방식 산소내성, ph 범위, 최적온도및범위, 염분내성 탄소이용, 탄수화물산화또는발효, 효소패턴 담즙산염내성, 항생제감수성, 염료내성 응집, 형광항체 지방산프로파일, 미생물독소, 전체세포조성 미생물의근원 따라서동정을위해준비된배지및계대배양 (subculture) 의수는표현형동정방식의결과에영 향을미칠수있다. 반면미생물의유전형은일반적으로보존이잘되며 배양조건의영향을받지않는다. 따라서순수한단클 론집락의분리가보장되면가장최근의증식배지 (growth media) 또는분리미생물의생존력에신경 쓸필요없이미생물을분석할수있다. [ 표 2] 에서

74 는파악가능한유전형적특성을열거하고있다. 표 2 범주 유전형적 미생물분류에서사용될수있는유전형적 / 계통 분류학적특성 계통발생학적 특성 DNA 염기비율 (G + C 함량 ), 제한 절편패턴, DNA 탐침 (DNA Probe) DNA-DNA 혼성화, 16S 및 23S rrna 염기서열 버지의세균분류학편람 (Bergey s Manual) 1) 에 기술되어있는세균분류는유전자물질의비교분석 을통해이루어진다. 미지의미생물이지닌 DNA 와 기지의미생물이지닌 DNA 를비교할때근친도 (relatedness) 를측정할수있다. 유전형동정방식 ([ 표 2]) 은 DNA 혼성화 (hybridization), 제한절편 패턴 (restriction fragment pattern) 비교및 / 또는 DNA 탐침 (DNA probe) 을통해이루어진다. 예컨대근친도가 70 % 를초과하는 DNA-DNA 혼 성화는해당미생물들이같은종임을가리킨다. 계통 발생학적분석 ([ 표 2]) 은일반적으로세균의 16S 리보솜 RNA 유전자또는진균의 23S 리보솜 RNA 유전자부분의염기서열을비교함으로써실시된다. 중합효소연쇄반응 (PCR) 은이들유전자를증폭하는 데사용되며, 이후전기영동법또는다이디옥시연쇄 종료법 (dideoxy chain termination) 을통해증폭영 역을분리하고염기서열을분석한다. 비교작업은검 증된상용데이터베이스또는공개데이터베이스를 사용하여수행할수있다.[ 주의 : 공개데이터베이스 는검증되지않은것일수있다.] 일차선별및특성분석 원료의약품, 제조용수, 제조환경, 중간물질및완제 의약품에서추출한시료로부터공정서상의배지를통 해분리된미생물들은생리학적스트레스를받을수 있다. 해당미생물들은유해한환경조건에서의생존 에적합한대사상태에서영양학적으로훨씬풍부하고 최적의배양온도가유지되는배양조건으로이행하게 된다. 동정작업을준비하는과정에서는일차적인분리배 지에서확보된각각의대표집락에대한선상도말을 실시하여위에서설명한바와같이단클론집락을고 체배지로분리하게된다. 첫번째단계는분리된세 균의그람염색, 세균모양, 그리고일부경우에는진단학적생화학반응을측정하는것이다. 이는다수의표현형동정방식에서매우중요한단계이다. 분리된미생물에잘못된특성이부여되는경우, 후속적인시험에서잘못된미생물동정킷을사용하게됨으로써부정확한결과가도출될수있다. 지금부터는통상적으로사용되는몇가지예비적선별시험에대해설명한다. 1) 그람염색그람염색법은크리스털바이올렛 ( 일차염료 ) 처리, 아이오딘 ( 매염제 ) 처리, 알코올또는알코올-아세톤 ( 탈색제 ) 처리, 사프라닌 ( 대조염료 ) 처리등 4 단계로구성되어있다. 3 단계염색법에서는탈색및대조염색단계가통합된다. 최적의조건에서는그람양성미생물이크리스털바이올렛염료를보유하여블루바이올렛색상을띠게된다. 반면그람음성미생물은크리스털바이올렛염료를상실하기때문에대조염료인사프라닌만을보유하여적색을띠게된다. 일부세균은그람가변성 (Gram-variable) 을지니고있다. 이러한방식이지닌통상적인단점은열고정 (heat fixation) 으로인해그람양성세포가그람음성세포로염색될수있으며, 오래된집락의경우에는그람가변성반응을보일수있다는점이다. 또한탈색제를과도하게사용하면잘못된그람음성결과가도출되며, 불충분하게사용하면잘못된그람양성결과가도출될수있다. 도말시료의세균에열고정이아닌메탄올고정을적용하는것이더욱일관된그람염색결과가도출되는경우가있다. 어떤방식을사용하든그람양성및그람음성대조군을포함시킴으로써염색과정에서의오류를식별할수있어야한다. 그람염색반응은현미경으로판독해야하기때문에세포형태를동시에확인할수있다. 2) 포자염색포자염색은세균포자에대한말라카이트그린염료를사용함으로써실시할수있다. 포자염색과정에서의오류를식별하기위해양성대조군을포함시켜야한다. 3) 생화학적선별핵심적인생화학적선별시험에는 (1) 막대모양의그람음성세균을비발효세균 ( 산화효소양성 ) 및장내세균 ( 산화효소음성 ) 으로분리하기위한산화효소시험, (2) 포도상구균 ( 카탈라아제양성 ) 및연쇄상구

75 균 ( 카탈라아제음성 ) 을분리하기위한카탈라아제시험, (3) 연쇄상구균을혈장응고효소음성 ( 비병원성으로추정되는 ) 및혈장응고효소양성 ( 병원성일가능성이높은 ) 으로분리하기위한혈장응고효소시험등이포함된다. 제조환경의바이오버든 (bioburden) 에대한여러유형의조사및일상적점검에있어서이들시험은지속적인평가를하기에충분한정보를제공할수있다. 그러나더욱면밀한평가를수행해야하는상황에서는속, 종또는균주수준의동정작업을수행함으로써환경적바이오버든의성격과출처에대한중요정보를확보할수있다. 또한종및균주수준의미생물동정은미생물오염의위해평가및완화과정에서핵심적인역할을담당할수있다. 표현형방식을통한미생물동정표현형방식에서는발현된유전자산물을이용하여다양한미생물들을구별한다. 일반적으로이러한방식에서는비교적많은수의세포로이루어진순수단일클론배양을필요로한다. 미생물수의측정및동정을위한회수및증식방식은배양시간의제약을받으며, 해당환경에존재하는다수의미생물이일반적인미생물증식배지에의해회수되지않는다는사실에따른제약을받는다. 또한일차회수로부터의계대배양에의해갓분리되고스트레스상태에있는미생물은표현형적특성이완전히발현되지못하는결과를초래할수있다. 그러나기체-액체크로마토그래프법에의한지방산프로파일및 MALDI-TOF 질량분석법에의한전체세포조성과마찬가지로, 탄소이용및생화학적반응에기반을둔방식은항상구체적인동정시스템을위한접종균배양에기반을둔다. 이들시스템은동정의일관성을유지하기위해특정배양배지와배양조건에의존한다. 표현형방식을통한미생물동정은식품, 수질, 임상또는제약과관련된미생물실험실에서성공적으로활용된다. 2) 표현형방식은미생물학자들이제품위해에관한충분한정보를확보한상태에서의사결정을하고환경적미생물균총의변화를인식할수있도록하는정보를제공한다. 품질관리조사에서는표현형방식을통한동정만으로충분한경우가많으며, 연구자로하여금철저한조사를실시하고적절한시정조치를권고할수있도록한다. 유전형방식을통한미생물동정유전형방식을통한미생물동정은일반적으로핵산염기서열이대부분의미생물종에서높은수준으로보존되기때문에신뢰성이상대적으로높다. 적용가능한유전형방식으로는 DNA-DNA 혼성화, PCR, 16S 및 23S rrna 염기서열분석, MLST(multilocus sequence typing), 파이로시퀀스분석 (pyrosequencing), DNA 탐침, 분석적리보타이핑 (analytical ribotyping) 등을들수있다. 이들방식은미생물학자들에게기술적어려움을야기할수있으며, 고가의분석장비와공급물자를필요로한다. 분석작업은외주실험실, 정부실험실, 대학, 연구기관또는기업내전문실험실에서수행되는경우가많다. 따라서유전형방식의사용은제품부적합 (product failure) 조사와같이중요한미생물학적조사로국한되는것이일반적이다. 또한조사과정에서균주수준의동정이이루어지는경우, 분석자는해당방식이적절한가의여부를판단해야한다. 16S rrna 염기서열의첫 500개염기쌍에대한 DNA 염기서열분석은종수준의동정에유용하지만, 근친도가높은종들또는동일종의균주들을동정하기에는부족할수있다. 반면제한핵산내부가수분해효소다이제스트 (restriction endonuclease digest) 의서던혼성화 (Southern hybridization) 는강력한기법으로서, 두균주간의차이를입증하는데효과적일수있다. 밴드패턴 (banding pattern) 이동일하게나타난다면두미생물의해당영역에서제한핵산내부분해효소가유사한분할부위 (cleavage site) 를가지고있다는의미가된다. 두미생물이동일함을입증하는데에는둘이상의상이한제한핵산내부분해효소다이제스트가결부된다. 이들각각은해당영역에서밴드를생성하는데, 두미생물의모든밴드가동일해야한다. 미생물동정과달리핵산에기반을둔방식은특정미생물을선별하기위해사용될수있다. 구체적인실험단계로는시료수집, 핵산추출, 타깃증폭, 혼성화, 검출등을들수있다. 비생존성 (nonviable) 세균세포의 DNA 증폭과결부된문제점은역전사를이용하여 rrna( 이행적이므로생존성과관련있는 ) 를 DNA로변환함으로써 PCR 증폭을하면해결될수있다. 유전형방식과관련하여고려해야할사항으로는미생물변종 (microbial variant) 의검출, 검

76 출의한계, 매트릭스효과 (matrix effect), 양성컷오프 (positive cutoff) 의검증, 도구및시스템잔류물 (carry-over), 진단의정확도, 재현성 (reproducibility) 등이있다. 미생물동정방식의검증미생물동정시험에는혈청학적시험, 화학적시약, 표준미생물및기구조작이포함된다. 동정시험시스템의검증에는다음과같은작업중하나가포함될수있다. 3) (1) 일상적인시험에서확보한분리미생물의평행시험 (parallel test) 을위한기존시스템이용 ( 시험대상분리미생물의수는최대 50까지될수있으며, 동정상의불일치는레퍼리 (referee) 방식을통해조정가능함 ), (2) 총 50회의시험을위해통상적으로분리된상이한종들로구성되어있는기지의보존배양 (stock culture) 대표시료 12~15개에대한시험또는 (3) 15~20개의상이한종들이포함되어있는 20~50건의미생물동정이분할시료 (split sample) 에대한표준실험실시험결과와일치하는가의여부를확인하는작업이있다. 각각의경우, 공급업체와공정서에서권장하는바에따라적절한품질관리미생물을검증과정에포함시켜야한다. 동정시스템의경우, 종의동정에대한검증을평가하고일치수준을검토해야한다. 일반적으로동정시스템에적합한미생물시료를통해 90 % 를초과하는일치도를달성할수있다. 적절한경우, 동정하기까다로운미생물군 ( 예 : 비발효세균, 코리네박테리아, 혈장응고효소음성포도상구균등 ) 을검증과정에포함시킬수있지만일치도가낮아질수있다. 미생물동정오류를영향력이큰순서대로열거하자면다음과같다. (1) 속수준의오동정 (misidentification), (2) 종수준의오동정, (3) 동정불능. 오동정은부적절한시정조치와예방조치및제품폐기를야기할수있다. 미생물이데이터베이스에포함되어있지않거나시스템매개변수가미생물을동정하기에충분히포괄적이지않거나해당종들이분류학적으로기술되어있지않은경우, 미생물동정시스템은분리미생물을동정하지못할수도있다. 그러한분리미생물은미생물동정시스템의공급업체에보내추가적인연구가이루어지도록하고적절한경우데이터베이스에포함시킬수있다. 그밖에도유전형동정시험을실시하여인하우스데이터베이스 (in-house database) 에해당종을추가하는방식도있다. 오동정여부를판단하는것은상대적으로더어려운일이지만, 미생물의형태, 생리학적요구사항및분리출처측면에서미생물동정의합리성 (reasonableness) 을검토해야한다. 속수준에서만동정된미생물들은포도상구균, 코리네박테리아 ( 및기타작은다형태그람양성막대균 ) 및마이크로코커스 (Micrococcus) 에속하는수많은비병원성종에서공통적으로발견될수있다. 가장중요한검증시험은정확도및재현성시험이다. 이들측정값은다음과같이정의할수있다. 정확도 (%) =( 올바른결과의수 / 결과총계 ) 100 재현성 (%) =( 일치하는올바른결과의수 / 결과총계 ) 100 사용자는채택된방식의한계를고려하여정확도와재현성에대한허용기준 (acceptance criteria) 을설정해야한다. 그밖의측정값으로는민감도 (sensitivity), 특이성 (specificity), 양성 / 음성예측치 (positive/negative predictive value) 등이있다. 이들측정값에대해서는사례를통해설명하고자한다. 한임상미생물실험실에서 DNA 혼성화탐색자의분리빈도와성매개세균인임균에대한배양방식을비교했다. 4) 임상시료의분리빈도이력은 10 % 였다. 실험실에서는 100개의분할시료를대상으로시험을실시하여 [ 표 3] 과같은결과를도출했다. 표 3 DNA 탐색자및배양방식에대한양성및음성결과분포의비교배양결과 DNA 탐색자결과양성음성양성 9 2 음성 1 88 민감도 = [9 / (9 + 1)] 100 = 90 % 특이성 = [88 / (88 + 2)] 100 = 97.7 % 양성예측치 = [9 / (9 + 2)] 100 = 81.8 % 음성예측치 = [88 / (88 + 1)] 100 = 98.9 %

77 주목할점은양성예측치 (PPV) 가시험에내재하는 값이아니라임상시료내의미생물유병률 (prevalence) 에도의존한다는사실이다. PPV 는해 당질병이나조건의유병률과직접적인비례관계에 있다. 이사례에서만일피험자집단에감염자를더 많은비율로포함시켰다면 PPV 는더높을것이며 음성예측치 (NPV) 는더낮을것이다. 집단내모든 피험자가감염자라면 PPV 는 100 % 이고 NPV 는 0 % 가될것이다. 이러한함수관계의수학적유도과 정은 [ 표 4] 에개괄되어있다. 표 4 * PCR 배양양성음성합계 양성 음성 표준배양방식및대안적 PCR 방식 (ISO 및 에따른 ) 에관한 2 행 x 2 열분할표 * a True Positive c False Positive b False Negative d True Negative 합계 a + c b + d a + b c + d ISO : 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results-part 1: General principles and definitions 및 ISO : 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results-part 2: Basic methods for the determination of repeatability and reproducibility of standard measurement methods. 포괄성 (inclusivity, %) = [a /(a+b)] 100 배타성 (exclusivity, %) = [d /(c+d)] 100 양성예측성 (positive predictivity, %) = [a /(a+c)] 100 음성예측성 (negative predictivity, %) =[d /(b+d)] 100 분석정확도 (analytical accuracy, %) = [(a+d) / (a+b+c+d)] 100 Kappa Index = 2(ad-bc) / [(a+c) (c+d)+(a+b) (b+d)] 계통발생학적고려사항 버지의세균분류학편람제 2 판은동서적의제 1 판 및동정세균학편람 (Manual of Determinative Bacteriology) 제8판및제9판과상당히다른방식으로기술되어있다. 제2판의내용구성은표현형구조대신리보솜소단위체인 16S RNA의뉴클레오티드염기서열분석에근거한계통발생학적프레임워크를따르고있다. 계통나무 (Phylogenetic Tree) 혹은수지도 (Dendogram) 는유전적근친도가높은유기체들을제시하고있다. 이러한기법을적용함으로써분류학적인개정이이루어졌으며일부잘알려진미생물들이재명명되었다. 예컨대진균의일종인 A. niger ATCC 는 A. brasiliensis 로명칭이바뀌었다. 일반적으로근친도가 97 % 미만인유기체들은상이한속으로간주되고근친도가 99 % 이하이면상이한종으로간주되지만 5), 이러한일반화에는다수의예외사항이존재한다. 유전형및표현형상의차이가있는경우 ( 예 : 미생물들이표현형은상이하지만동일또는유사한유전형을공유하거나, 표현형은유사하지만유전형이상이하거나, 동일속또는종이라고하기에는유전형적으로너무먼관계에있는경우 ) 는상대적으로흔하지않다. 다상분류학 (polyphasic taxonomy) 6) 이라는개념은미생물의특성분석, 표현형및유전형데이터, 미생물의근원등과같은여러수준의정보를조합및사용하는방식을말하는것으로서, 미생물동정작업에성공적으로적용가능하다. 또한미생물의특성분석, 시험이력및분리기원을고려할때부적절한유전형데이터만으로결정을내리는위험을방지할수있도록한다. 용어미생물분류 (microbial classification) : 미생물들을유사성및관계에근거하여분류학적군으로배열하는것을말한다. 미생물동정 (microbial identification) : 실험실분리미생물이광범위한집단 ( 예 : 세균, 효모균또는진균 ) 에속하는가, 또는협소한집단 ( 예 : 속및 / 또는종 ) 에속하는가를판단하는것을말한다. 미생물특성분석 (microbial characterization) : 추세분석 (trending) 및조사의목적으로집락의증식, 세포형태, 차별염색및핵심적인진단특성을이용하여실험실분리미생물 ( 예 : 비병원성포도상구균 ) 의특성을분석하는것을말한다.

78 Mol %GC : 염색체 DNA에존재하는구아닌-사이토신범위의몰퍼센트를말한다.[ 참고 : %GC + %AT = 100 %] 계통발생학적종 (phylogenetic species) : 최소 70 % 의총게놈 DNA-DNA 혼성화를공유하고하이브리드의융점차이가 5 ΔTm 미만인균주유형을포함한여러균주로구성되어있는종을말한다. 다상분류학 (polyphasic taxonomy) : 미생물을분류하기위해분자학적, 생리학적, 형태학적, 혈청학적또는생태학적출처에서확보한여러수준의정보를조합하는분류학을말한다. 근친도 (relatedness) : 계통나무혹은수지도에서둘이상의유기체간에존재하는관련성또는유사성정도를말한다. rrna 염기서열 (rrna sequence) : 단백질합성에사용되는 rrna를인코딩하는 DNA 염기서열은공통된조상을가진미생물들에게서높은수준으로보존되어있다. rrna 염기서열은미생물간계통발생학적거리를파악하는데사용된다. 균주 (strain) : 순수배양을통해유지되고특성이분석되는특정분리종을말한다. 표준균주는해당종을대표하는것으로서, 공인된배양컬렉션에서의분리이력, 특성분석및침착 (deposition) 에근거하여해당종의기준을제공한다. 균주분류 (strain typing) : 균주분류는임상및공중보건미생물학분야에서실시하는역학조사의필수적인일부이다. 미생물종들이동일균주이고공통의출처에서유래했을가능성이크다는사실을입증하기위해펄스필드겔전기영동법 (pulsed-field gel electrophoresis), 리보프린팅 (riboprinting), 임의적프라이밍중합효소연쇄반응 (AP-PCR) 및전체게놈정렬제한매핑 (whole genome ordered restriction mapping) 또는광학적매핑 (optical mapping) 등의방식을사용할수있다. Hansen, J.A. Kellogg, F.J. Marsik, and R.J. Zabransky, ASM, February ) Cumitech 31. Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory. Elder, B.L., S.A. Hansen, J.A. Kellogg, F.J. Marsik, and R.J. Zabransky, ASM, February ) J.E. Clarridge III. The Impact of 16S rrna Gene Sequencing Analysis for Identification of Bacteria on Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Clin. Microbiol. Rev. 17 (2) , ) Gillis, M., P. Vandamme, P. De Vos, J. Swings and K. Kersters. Polyphasic Taxonomy. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd Edition, ) Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd Edition, ) O'Hara, C.M., M.P. Weinstein, and J.M. Miller. Manual and automated systems for detection and identification of microorganisms. ASM Manual of Clinical Microbiology, 8th Edition, ) Cumitech 31. Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory. Elder, B.L., S.A.

79 핵자기공명 (NMR) 스펙트럼측정법을이용한 정량분석기법및응용 NMR 을이용한정량분석기법의원리 용액에녹아있는물질을 1 H-NMR 을측정하여얻은 스펙트럼은다음과같은이유로물질의화학구조결정 에강력한분석법으로많이이용되어왔다. 첫째, 공 명신호는측정하고자하는물질의화학구조에따라서 로다른화학적이동을보인다. 둘째, 신호는화학결합 을통해스핀 - 스핀결합에의해갈라지며, 갈라지는정 도는주로이웃하는탄소에결합하는수소의개수에의 존한다. 셋째, 신호강도 ( 면적 ) 는같은주파수에공명 하는수소의개수에비례한다. 1 H-NMR 스펙트럼에서동일분자내에다른화학적 환경에있는수소핵들은공명주파수에따라서로다른 화학적이동을갖는분리된신호로나타난다. 따라서화 학적이동이다른두개의신호강도를비교할수있다. 신호강도 S i 는다음과같이식 (1) 로표현할수있다. sin (1) cos N i : 공명하는 1 H 핵의수 V : 시료용액의부피 m : 시료의무게 M : 분자량 p : 시료의순도 β : 여기펄스각도 T 1i : 신호를주는 1 H 핵의스핀 - 격자이완시간 T r : 반복적산할때지연시간 M 0 : 평형자화 아래첨자 i 는다른신호를나타내고이완시간은 1 H 의환경에따라다르다. NMR 은일반적으로측정감도 가좋지않기때문에신호의반복적인측정과노이즈의 평균화를통해 S/N 비 (Signal to Noise ratio) 를개선 해야한다. 만일측정대상물질중가장긴 T 1 보다충 분히더긴지연시간 T r 을이용한조건에서 NMR 측정 이이루어졌다면, 측정대상이되는화합물의모든신호 에대해 의조건이만족되고, NMR 을 이용한정량분석 ( 이하정량적 NMR) 을수행할수있 다. 한편, 구조결정을위해 NMR 을사용하는경우에는 검출감도의개선이우선되어야하며반복측정을통한 S/N 비를향상시킬수있는조건을사용해야한다. 이 러한조건에서정량성을확보하기위한지연시간이충 분히길지않기때문에측정하는분자의각 1 H 핵의개 수에대한신호강도의정확한비율을얻을수없다. 하 지만정량성을확보할수있는조건에서 NMR 이측정 되는경우에는신호강도의비율은측정하는분자의각 1 H 핵의수에대해정확히비례하게된다. 정량성을확보할수있는조건에서동일분자내의 화학적이동이다른두개의신호강도를비교할때다음 과같은식 (2) 가성립되며, 이때신호강도 S i 및 S j 는공명하는 1 H 핵의수와비례하게된다. (2) 신호강도와공명하는 1 H 수와의이러한비례관계는 서로다른분자에서오는신호에도적용할수가있다. 이경우, 시료용액을측정할때여기펄스각도와시료 용액의부피는측정물질과는독립적으로일정하게유 지되는것으로여길수있으므로얻어지는면적 S 가 측정대상의분자순도, 분자량, 무게등에만비례하여 식 (3) 을얻을수있다. (a, s, 는각각측정대상물질과 내부표준물질의신호를나타낸다.) (3) 따라서각분자는용액중에서서로반응을하지않 고, 각분자의신호는서로다른화학적이동을가져서 스펙트럼상에서서로분리되는등의조건이충족된다 면, 정량성을확보할수있는조건에서순도가알려진 표준물질을써서 1 H-NMR 측정을통해측정대상물질 의순도를평가할수있다. 즉, 정확한순도가부여된 분자량이알려진기준물질이상위표준으로준비되면 용액 1 H-NMR 을이용하여동시에측정된동일용액내 의다른화합물의순도를결정할수있다. 이때, 기준물질이국제단위계에측정소급성을확보 하고있는경우에는이를상위표준물질로서측정대상 화합물의순도를국제단위계에적합한수치로간접적으 로산출할수있다. 이경우 NMR 측정을위해측정대

80 상화합물과기준물질을같은용매에녹이므로정확한순도계산을위해두화합물의무게를각각정밀하게취하는것은실제적으로중요하다. NMR용기준물질및정량소프트웨어공급일반적으로정량적 NMR 측정을위해서유기용매를사용하는경우 1,4-비스 ( 트리메틸실릴 ) 벤젠-d 4 (1,4-bis(trimethylsilyl)benzene-d 4 (BTMSB-d 4 )) 가, 수용액인경우 3-( 트리메틸실릴 )-1-프로판설폰산 -d6-나트륨염 (3-(trimethylsilyl)-1-propanesulfonic acid-d 6 -sodium salt(dss-d 6 )) 이기준물질로사용된다. BTMSB-d 4 과 DSS-d 6 모두 1 H-NMR 스펙트럼상에서특유의화학적이동을나타내고날카로운단일신호를보이며, 또한고체이므로정밀한측량이용이하기때문에기준물질로서매우유용하다. 정량적 NMR 측정을위해서는특별한소프트웨어가필요하며일반적으로 NMR 기기의공급업체에서제공을한다. 생약의정량용지표성분및정량분석용표준품의확립생약과생약제제에대한정량값이규정되어있을때, 정량용지표성분은천연물에서유래된것들이므로일반적으로화학의약품보다표준품확립이더어렵다. 화학의약품과는달리생약과생약제제는여러가지화합물의혼합물이다. 생약과생약제제에 0.1 % 에서수 % 수준으로함유되어있는물질을이들품목의정량시험에사용될지표성분으로서선택할필요가있는데, 대부분의경우이러한물질을합성을통해제조하는것은매우어렵다. 천연물로부터충분한순도의지표성분을분리하는일또한막대한노동력과비용이소요되는일이므로이또한현실적으로쉽지않은일이다. 더구나원료와이들의추출, 분리, 정제등공정의차이때문에이러한방법으로제조된표준품에함유된불순물의조성이배치마다다를수있다. 이러한이유때문에일반적으로합성의약품의경우보다생약및생약제제를위한표준품의배치간의순도차이가더크게되므로이들물질의순도조절이매우어려울수밖에없다. 또한천연물의경우대부분가장큰비중을차지하는불순물은물인데정확한물의함량을측정하기위해서는칼피셔법을사용하여야한다. 그렇게되면중요한표준품이단지물의함량을측정하기위해소모되는일이벌어지는문제가생긴다. 이러한애로사항으로생약및생약제제각조에서표준품설정이어렵다. 대신에시판되는시약을정량시험을위한표준물질로서설정하고이시약을이용한시험방법및함량기준은생약및생약제제각조에서규정된다. 이경우, 이들지표성분의규격은시약 시액항에서규정한다. 하지만엄밀한의미에서이러한방식으로얻은정량값은측정학적으로인증되지않으므로신뢰도면에서는다소애매하다고할수있다. 생약및생약제제분석에쓰는정량분석용표준품에대한정량적 NMR의응용정량적 NMR은천연물유래시약들의순도와관련된문제를해결하는데유용할수있다. 즉, 앞서기술한원리에따라정량적 NMR을이용하여어떤시약에포함된내용물들을측정학적으로정확하게분석하면, 그측정소급성을기반으로그시약은분석용표준품으로서사용될수있다. 생약의정량적시험을위해규정된시약들의분석에현재정량적 NMR이실제로사용되고있다. 또한, HPLC 정량분석용표준품으로서사용될화합물을이용하여정량적 NMR의밸리데이션연구가수행되기도한다. 분자량이 300 부근인검체의경우 NMR 기기간의오차를감안하더라도, 약 10 mg의검체가정량적 NMR에사용되었을때유효숫자두자리의정확도를이룰수있는것으로알려져있다. 보통, 생약의정량용지표성분의함량은최소 0.1%d에서최대수 % 수준이다. 따라서생약의함량편차를고려한다면, 이들의정량분석용표준품을위해서는두자리의유효숫자의정확도정도면충분하다. 위에서논의된것들을감안한다면, 정량적 NMR에의해공인된시약을 HPLC 등에서표준품으로사용하고그시약의공인된순도를검체의정량적측정치를계산할때감안함으로써, 천연물에서유래된시약을생약의정량분석용표준품으로서사용했을때얻는분석수치의모호성을실질적으로피할수있다. 치자 ( 梔子 ) 의경우를예로든다면, 게니포시드의함량이 HPLC 분석기준으로 3.0% 이상으로규정하고있고, 치자의정량분석에사용되는게니포시드의절대순도는정량적 NMR로측정했을때약 92 % 인것이문헌에소개하고있다. 따라서이시약의순도를 100 % 로가정하고이를표준품으로사용하였을때, HPLC에의해서절대순도를고려한정량값은 3 % 가아닌 2.8 % 가되는것

81 이다. 1) T. Saito, et al., Accred. Qual. Assur. 14, (2009) 2) J. Hosoe, et al., Pharmaceutical and Medical Device Regulatory Science, 41, (2010) 3) J. Hosoe, et al., Pharmaceutical and Medical Device Regulatory Science, 43, (2012) 근적외선흡수스펙트럼측정법 ( 적외부스펙트럼측정법 ) 근적외선흡수스펙트럼측정법 (NIR) 은피검물질에의한근적외선영역에서의빛의흡수스펙트럼을측정하고분석함으로써물질의정성적또는정량적평가를실시하기위한분광학적인방법의하나이다. 근적외광은가시광과적외광의사이에있고, 보통 750 ~ 2500 nm(13333 ~ 4000 cm -1 ) 의파장 ( 주파수 ) 범위의빛을가리킨다. 근적외광의흡수는주로적외영역 (4000 ~ 400 cm -1 ) 의기준진동의배음 (over-tones) 또는결합음 (combinations) 에의한진동에의해발생하고, 특히수소원자가관여하는 O-H N-H, C-H, S-H에의한흡수가주를이룬다. 예를들어, N-H의비대칭신축진동은 3400 cm -1 부근에있지만, 그첫배음에의한흡수는 3400 cm -1 의 2배미만인 6600 cm -1 ( 파장 1515 nm) 부근에서나타난다. 근적외영역에서흡수는적외영역의기준진동에의한흡수보다훨씬약하다. 또한근적외광은가시광에비해장파장이기때문에빛이분말을포함하는고체시료중수 mm의깊이까지침투할수있다. 이과정에서흡수되는빛의스펙트럼변화 ( 투과광또는반사광 ) 를통해시료에관한물리적및화학적지식을얻을수있으므로, 이시험법은비파괴분석법으로널리활용되고있다. 근적외선흡수스펙트럼해석법으로는검량선법등의일반적인분광학적방법을적용할수있다면이것을사용하지만, 보통은케모메트릭스방법을이용하여분석을실시한다. 케모메트릭스는보통화학데이터를수량화하고정보화하기위한수학적방법및통계학적방법을가리키지만, 근적외선흡수스펙트럼측정법에서케모메트릭스로는다중회귀분석법을비롯해다양한다변량해석법이사용되며, 이를통해유효성분의정성적또는정량적평가등이실시된다. 근적외선흡수스펙트럼측정법은수분의측정또는물질의확인등을할때기존의확립된분석법을대신하여신속하고비파괴적인분석법으로사용되고있으며, 이분석법을품질평가시험법으로일상적인시험에사용하는경우, 기존의분석법을기준으로비교시험을실시하여그동등성을확인해둘필요가있다.

82 의약품분야에서근적외분광법의응용으로는원료의약품및제제중의유효성분, 첨가제또는수분에대해정성적또는정량적평가를할수있다. 또한결정형, 결정화도, 입자크기등의물리적상태의평가에이용할수도있다. 또한광섬유를이용하여장치본체에서떨어진곳에있는시료에대해샘플링을하지않고스펙트럼측정이가능하기때문에, 의약품의제조공정관리를온라인으로실시할수있는유력한수단으로도활용이가능하다. 장치근적외선분광광도계는분산형근적외선분광광도계및푸리에변환형근적외선분광광도계가있다 1). 별도로분광부에간섭필터를이용한간섭필터형근적외선분광광도계도있지만이방식의장치는의약품의품질관리분야에서이용되는경우는거의없다. 분산형근적외선분광광도계장치는광원부, 시료부, 분광부, 측광부, 신호처리부, 데이터처리부및표시, 기록, 출력부로구성된다. 광원으로는할로겐램프, 텅스텐램프, 발광다이오드등근적외광을고휘도및안정적으로방사하는것을사용한다. 시료부는시료셀및시료홀더로구성된다. 광섬유및시준기등으로구성되는광섬유부를갖는장치는분광광도계본체에서떨어진장소에설치된시료부에빛을전송하는기능을가지고있다. 일반적으로광섬유의재질로는석영을사용한다. 분광부는분산소자를이용하여필요로하는파장의빛을유도하기위한것이며, 슬릿, 미러, 분산소자로구성된다. 분산소자에는, 프리즘, 회절격자, 음향광학소자 (ATOF), 액정튜너블필터 (LCTF) 등이있다. 측광부는검출기및증폭기로구성된다. 검출기는반도체검출기 ( 실리, 황화납, 인듐 갈륨 비소, 인듐안티몬등 ) 외에도광전자증배관으로도사용된다. 반도체검출기에의한검출방법으로는일반적으로단일소자에의한검출이이루어지지만복수의소자를이용한어레이형검출기가사용되는경우도있으며, 이를통해복수파장 ( 주파수 ) 의빛을동시에검출하는것이가능하다. 신호처리부는증폭기의출력신호에서측정에필요한신호를분리하여출력한다. 데이터처리부에서는데이터변환, 스펙트럼분석등을실시한다. 표시 기록 출력부는데이터, 분석결과및데이터처리결과등을프 린터로출력한다. 푸리에변환형근적외선분광광도계장치의구성은분광측광부및신호처리부를제외하고기본적으로 1.1의분산형장치의구성과동일하다. 분광측광부는간섭계, 샘플링신호발생기, 검출기, 증폭기, A/D 변환기등으로구성된다. 간섭계는마이켈슨간섭계, 트랜셉트간섭계및편광간섭계등이있다. 신호처리부는분산장치에서요구하는기능외에도획득한간섭파형 ( 인터페로그램 ) 을푸리에변환하여흡수스펙트럼으로바꾸는기능을가지고있다. 측정법근적외선흡수스펙트럼측정법에는투과법, 확산반사법및투과반사법의 3가지측정법이있다. 측정법의선택은시료의형상및용도에따라다르다. 분말을포함한고체시료에는투과법또는확산반사법이, 액체시료에는투과법또는투과반사법이이용된다. 투과법투과법에서는광원으로부터의빛이시료를통과할때의입사광강도의감쇠정도를투과율 T(%) 또는흡광도 A로나타낸다. 시료는광원과검출기사이의광로중에배치되는데, 이배치는일반적으로분광학적측정방법의경우에모두동일하다 T = 100t t = I/I 0 = 10-αcl I 0 : 입사광의강도 I : 투과광의강도 α : 흡광계수 c : 용액의농도 l : 층길이 ( 시료두께 ) A = -logt = log(1/t ) = log(i 0 /I ) = α cl 이방법은액체또는용액시료에적용되는방법이며, 석영유리셀, 플로우셀세포등에주입하여층길이 1 ~ 5 mm 정도에서측정한다. 또한분말을포함하는고체시료에대해서도적용가능하며, 확산투과법이라고도부른다. 이경우시료의입도, 표면상태등에따라투과광강도는변화하기때문에적절한층길이의선택

83 이중요하다. t*=i/i T 확산반사법확산반사법에서는시료에서넓은입체각범위에방사하는반사광강도 I와대조되는물질표면에서의반사광강도 I r 의비를반사율 R(%) 로나타낸다. 근적외광은분말을포함하는고체시료중에수 mm의깊이까지침투하고그과정에서투과, 굴절, 반사, 산란을반복하고확산하지만, 이확산광의일부는다시시료표면에서방사되어감지기에포착된다. 보통반사율의역수의대수를파장 ( 주파수 ) 에대해플롯하여확산반사흡광도 (A r ) 의스펙트럼을얻는다. R=100r r=i/i r I : 시료에서확산반사하는반사광강도 I r : 대조되는물질표면에서의반사광강도 A r = log (1 / r) = log (I r / I) 또한확산반사스펙트럼의강도표현에는 Kubelka-Munk (K-M) 함수에의한것이있다. K-M 함수는충분한두께를가진시료라고가정하고이끌어낸것으로시료의농도, 근적외광에대한흡수계수및입자의크기, 형상, 충전의정도 ( 소밀 ) 등으로정하는광산란계수를이용하여표현한다. 이방법은분말을포함하는고체시료에적용되는방법이며, 측정시에확산반사장치가필요하다. 투과반사법투과반사법은투과법과반사법을조합한것이다. 투과반사율 T* (%) 를측정하는경우, 거울을이용하여시료를투과한빛을재반사시킨다. 광로길이는시료두께의 2배로한다. 한편, 대조광은거울면에서반사되어검출기로들어가는반사광을이용한다. 그러나이방법을현탁시료에적용하는경우, 거울대신에확장반사하는거친표면을가진금속판또는세라믹반사판등을이용한다. 이방법의투과반사흡광도 (A*) 는다음식으로구할수있다. T*=100t* I : 시료가있는경우의투과광과반사광강도 I T : 시료가없는경우의반사광강도 A*=log(1/t*) 이방법은분말을포함하는고체시료, 액체시료및현탁시료에적용되는방법이다. 고체시료에적용할경우시료두께를조절할필요가있지만, 보통은검출기의직선성과 SN비가최고가되는흡광도에서 0.1 ~ 2( 투과율에서 79 ~ 1 %) 가되도록조절한다. 또한분말시료에적용할경우, 분말의입도에따라적절한층장의셀을선택해야한다. 스펙트럼에영향을미치는요인근적외선흡수스펙트럼측정법을적용하려고할때, 특히정량적분석의경우에스펙트럼에영향을미치는요인으로다음사항을유의해야한다. (ⅰ) 시료온도 : 온도가많이다르면스펙트럼에유의한변화 ( 예를들어, 파장시프트 ) 가생길수있다. 특히시료가수용액이거나수분을포함한경우에주의할필요가있다. (ⅱ) 수분또는잔류용매 : 시료중의수분또는잔류용매및측정환경중의수분 ( 습도 ) 도근적외영역의흡수대역에상당한영향을미칠수있다. (ⅲ) 시료두께 : 시료의두께는스펙트럼변화의요인이되며, 일정한두께로관리할필요가있다. 예를들어, 확산반사법의경우에시료는충분히두꺼워야된다고생각되며, 일정한두께이하인경우고반사율의지지판위에시료를놓고투과반사법으로하는등의연구가필요하다. (ⅳ) 시료의충전상태 : 고체또는분말시료의측정에서는시료의충전상태가스펙트럼에영향을미칠수있다. 시료셀에대한충전시에는일정량을일정한순서에따라충전하도록주의할필요가있다. (ⅴ) 시료의광학특성 : 물리적, 화학적또는광학적으로균일한시료의경우에는비교적큰광속 (beam size) 을이용하거나복수시료또는동일시료의복수지점을측정하거나분쇄하는등시료의평균화를꾀할필요가있다. 또한분말시료는입자크기, 충전정도, 표면의거친정도등도

84 스펙트럼에영향을미친다. (ⅵ) 결정다형 : 결정구조의변화 ( 결정다형 ) 도스펙트럼에영향을미친다. 복수의결정형이존재하는경우, 적용하고자하는시료의특성을고려하여검량선용표준적시료도분석대상이되는시료와같은다형분포를가지도록주의해야있다. (ⅶ) 시료특성의시간적변화 : 시료샘플링후의시간경과또는보존에따른화학적, 물리적또는광학적성질로변화할수있지만, 이러한변화는스펙트럼에미묘한영향을주게된다. 예를들어동일시료라도시간경과가다르면근적외선스펙트럼으로서의특성이크게다를수있다. 따라서검량선작성시에는시험실에서의오프라인측정또는제조공정에서온라인 ( 또는인라인 ) 측정등측정까지의시간경과를충분히고려하여검량선용시료의제조를하는등의주의가필요하다. 장치성능관리파장 ( 주파수 ) 정확도장치의파장 ( 주파수 ) 의정확성은흡수피크의파장 ( 주파수 ) 이확정된물질, 예를들면, 폴리스티렌, 희토류산화물의혼합물 ( 디스프로슘 / 홀뮴 / 에르븀 (1 : 1 : 1)) 또는수증기등의흡수피크와장치의지시값과의편차를구한다. 일반적으로다음세개의피크위치부근에서의허용오차는다음과같다. 그러나적용용도에따라적절한허용오차를설정할수있다 cm -1 의수증기흡수피크를이용할수있다. 또한타당성이확인되면다른물질을기준으로사용할수도있다. 분광학적선형성다른농도에서탄소를함침시킨판상의폴리머 (Carbon-214 doped polymer standards) 등적당한표준판을이용하여분광학적직선성을평가할수있다. 그러나직선성을확인하기위해서는반사율 10 ~ 90 % 의범위내에서최소한 4농도수준의표준판을이용할필요가있다. 또한흡광도 1.0 이상에서측정이예상되는경우, 반사율 2% 또는 5% 의표준판중하나또는두개의표준판을추가할필요가있다. 이러한표준판마다파장 1200 nm, 1600 nm와 2000 nm 부근의위치에서의흡광도 (AOBS) 를측정하고, 이값 (AOBS) 을각각의표준판에부여된각파장에서의흡광도 (AREF) 에대해플롯할때, 얻을수잇는직선의기울기는일반적으로모든파장에서 1.0 ± 0.05, 세로축절편은 0 ± 0.05의범위내에있는지확인한다. 단적용용도에따라적절한허용차를설정할수있다. 측광노이즈장치의측광노이즈는백색반사성세라믹타일또는반사성열가소성수지 ( 예를들면, 폴리테트라플루오르에틸렌 ) 등적절한반사율표준판을이용하여확인할수있다 ± 1 nm(8300 ± 8 cm -1 ) 1600 ± 1 nm(6250 ± 4 cm -1 ) 2000 ± 1.5 nm(5000 ± 4 cm -1 ) 그러나기준으로이용되는물질에따라흡수피크의위치가다르기때문에위세개의피크에가장가까운파장 ( 주파수 ) 위치의흡수피크를선택하여적합성을평가한다. 예를들어, 희토류산화물의혼합물은 1261 nm, 1681 nm, 1971 nm에특징적인흡수피크를나타낸다. 또한투과법으로측정을하는경우디클로로메탄을기준으로 1155 nm, 1417 nm, 1649 nm, 2352 nm의흡수피크를이용할수있다 ( 층길이 : 1.0 mm). 주파수분해능이높은푸리에변환형분광광도계에서는 고플럭스노이즈고반사율, 예를들어반사율 99 % 를갖는표준판을이용하여측광노이즈를평가한다. 측정은시료및모든대조시료에대해표준판을이용하여실시한다 ~ 2200 nm의파장범위에대해, 100 nm( 세그먼트 ) 당노이즈의평균제곱근 (RMS) 을계산할때, 일반적으로그평균값은 이하이며, 각각의값은 을초과한다. 단, 적용하는용도에따라적절한허용오차를설정할수있다. RMS = { 1 / N Σ (A i -A m ) 2 } 1 / 2 N : 세그먼트당측정점수 A i : 세그먼트의각측정점에서의흡광도

85 A m : 세그먼트의평균흡광도저플럭스노이즈저반사율, 예를들어반사율 10 % 를갖는표준판을이용하여광량이작을때의측광노이즈를평가한다. 이경우, 광원, 광학계, 검출기및전자회로계중어느것이소음에어떤영향을준다. 고플럭스노이즈의경우와마찬가지로, 1200 ~ 2200 nm의파장범위에대해, 100 nm당 RMS를계산할때으레그평균값은 이하이며, 각각의값은 를초과한다. 그러나적용용도에따라적절한허용오차를설정할수있다. 의동등한정밀도및정확도를얻을수있는가? (ⅳ) 확립된후의분석법의성능을유지및관리하는것이중요하며, 지속적이고계획적인유지보수작업이필요하다. 또한제조공정또는원료등의변경및장비의주요부품의교체등에따른변경관리또는재밸리데이션의실시등에관한적절한평가절차가마련되어있는가? (ⅴ) 어떤장치를이용하는것을전제로확립된분석법을다른장치로변경 (Model Transfer), 공통적으로이용하고자하는경우에변경타당성을확인할수있는적절한평가절차가마련되어있는가? 정성또는정량분석에응용근적외영역에서는적외선영역과달리주로기준진동의배음또는결합음이스펙트럼으로나타난다. 이러한흡수스펙트럼은관능기및원자단의흡수밴드가겹쳐관찰되는경우가많다. 따라서근적외선흡수스펙트럼측정법은기존의분석법과는달리정성또는정량분석에응용하기위해서는, 일반적으로다변량분석등케모메트릭스방법을이용하여모델분석법을작성, 각각의용도에맞는분석법을확립할필요가있다. 또한케모메트릭스방법을이용하여분석법을확립하려고하는경우, 근적외선흡수스펙트럼의특징을강조및스펙트럼의복잡성과흡수밴드의중복의영향을감소시키기위해스펙트럼의이차또는이차미분처리또는정규화 (Normalization) 등의수학적전처리는중요한단계중하나가된다. 또한케모메트릭스방법과데이터의수학적전처리방법은여러가지가있지만분석목적에맞는적절한방법을조합하여선택한다. 근적외선분석법의확립시에는일반적으로분석법밸리데이션에서요구되는분석능매개변수를바탕으로그타당성평가가필요하다. 단, 분석법의용도에맞게매개변수를적절하게선택할필요가있다. 또한근적외선흡수스펙트럼측정법의특성에따라다음과같은사항에유의한다. (ⅰ) 어떤분석법에서이용하려고하는파장 ( 주파수 ) 이주어진조건에서분석대상의특성에적합한가? (ⅱ) 시료의취급방법 ( 예를들면, 분말시료의충전정도, 충전압력등 ) 과구성매트릭스등의변동요인에대해충분한내구성을가지고있는가? (ⅲ) 기존의확립된기준이되는분석법과비교하여거 정성분석분석대상이되는각물질에대해허용되는범위의로트간변동을포함한리퍼런스라이브러리를만들고, 다변량분석등케모메트릭스방법을이용하여분석법을확립한후에물질의확인등질적평가를실시한다. 또한이방법으로로트간의미세한품질특성차이를추정할수있다. 또한다변량분석방법으로는파장상관, 잔차평방합, 거리평방합등의파장 ( 주파수 ) 또는흡광도등을변수로하는직접적인분석방법외에도주성분분석등의전처리를한후에적용되는인자분석법, 클러스터분석법, 판별분석법및 SIMCA(Soft independent modeling of class analogy) 등의다변량분석방법도있다. 또한근적외선흡수스펙트럼전체를하나의패턴으로간주하여다변량해석법을적용하여얻을수있는매개변수또는대상물질에특징적인파장 ( 주파수 ) 에서의피크높이를모니터링지표로하여원료의약품또는제제의제조공정관리에이용할수있다. 정량분석정량분석은시료군의스펙트럼과기존의확립된분석법에의해구한분석값과의관계로부터케모메트릭스방법을이용하여정량적모델을구하고, 환산방정식에의해측정시료중의각성분농도와물성값을산출한다. 정량모델을구하기위한케모메트릭스방법은다중회귀분석법, 주성분회귀분석법, PLS (Partial least squares) 회귀분석법등이있다. 또한시료의조성이간단한경우알려진농도의검량선

86 작성용시료를이용하여특정파장 ( 주파수 ) 의흡광도또는이에비례하는매개변수와농도와의관계를플롯하여검량선으로하고, 이를이용하여시료중의분석대상성분의농도를산출할수있다 ( 검량선법 ). 참고자료 1) 일본공업규격, 근적외선분광분석통칙 JIS K 0134 (2002) 2) European Pharmacopoeia 5.0 (2005), Near Infrared Spectrophotometry 3) US Pharmacopeia 30 (2007), 1119 Near-Infrared Spectrophotometry 멸균과멸균보증 이정보는멸균되어야하는물품의품질관리와관련된개념과원칙에대한일반적인설명을제공한다. 멸균의가장엄격한정의하에서, 표본에생존하는미생물의완전한부재시에만오직멸균된것으로간주한다. 하지만, 이러한정의는시험이전체를대표하지못하는현실적한계때문에전체로트의물품의멸균보증을위해적용될수없다. 그러므로멸균이의도된의약품의멸균이란의약품이오염되었을가능성이허용가능한수준으로희박하다는확률적용어로정의되어진다. 그러한멸균보증상태는무균시험에만의존하지않고, 적절한 GMP하에서밸리데이션된멸균공정또는무균공정을통해서만확립될수있다. 밸리데이션에대한기본적인원칙과멸균절차 1. 공정장비가요구된파라미터내에서작동능력을가지고있다는것을입증한다. 2. 중요한제어장비와계측기가공정장비를규정된파라미터내에서작동시킬수있다는것을입증한다. 3. 실제또는모의제품을사용해서장비의요구되는작동범위를나타냄을확인하는반복주기평가를수행한다. 공정이규정된프로토콜한계내에서수행되었다는것과, 최종적으로완료된반복주기평가에서미생물의생존확률이규정된한계보다크지않다는것을증명한다. 4. 통상적작동동안에밸리데이션된공정을모니터링한다. 필요시주기적으로장비를재승인하도록한다. 5. 프로토콜을완성하고위의 (1) 부터 (4) 의단계를완료하여문서화한다. 무균공정을밸리데이션하기위한프로그램의원칙과이행은멸균공정의밸리데이션보다상당히광범위하다. 무균공정에있어서, 최종제형을위한각성분은개별적으로멸균되고완제품은무균적으로제조되어진다. 멸균공정또는무균공정의적절한밸리데이션은멸균분야의수준높은지식과청정도관리기술을요구한다. 허용가능하고달성가능한멸균파라미터한계를준수하기위해서, 온도, 시간, 압력, 습도, 멸균가스농도, 그

87 리고 / 또는흡수방사선같은중요한파라미터를제어하는적절한계측기와장비를사용하는것이필수적이다. 생물학적지표의사용은멸균공정의밸리데이션프로그램에서중요하다. 밸리데이션되고검증된방법은주기적으로재밸리데이션되어야한다. 하지만, 재밸리데이션된프로그램은반드시원래의프로그램만큼광범위할필요는없다. 증기멸균과같은전형적인밸리데이션프로그램은다음의단계별로수행된다. 우선, 설치적격성단계는제어장치와계측기들이적절히디자인되고교정된것을확립하는것이다. 증기, 물그리고공기와같은유틸리티의품질을증명하는문서화가되어야한다. 운전적격성단계에서는프로토콜에규정된비어있는챔버의핵심위치에서온도파라미터가유지되는것을확증해야한다. 보통온도프로파일기록장치를사용하며, 예를들어여러위치를측정하는장치를이용하여챔버내의온도를동시적으로기록한다. 챔버의설정온도가 121 이상일때빈챔버에서의허용가능한온도범위는 ± 1 이다. 밸리데이션프로그램의확증단계는재료나물품의실제멸균이다. 이단계에서는물품의내부에삽입되어온도를측정하는장치와적절한농도의생물학적지표미생물을사용한다. 실제제품으로증기열침투와노출시간은멸균공정의치사율을결정하는중요한요인이다. 밸리데이션프로그램의마지막단계는프로그램을수행하는데서발생된데이터를문서화하는것이다. 최종적으로멸균된주사제품은 10-6 의미생물생존확률을달성해야한다. 즉, 멸균된제품이나제형에살아있는미생물이백만분에 1 이하이거나동등하다는보증에도달해야한다. 열에안정한물품의접근방식은사전멸균보다개체수 ( 전형적으로 10 6 ) 와저항성 ( 전형적으로 D121이 1 분이상 ) 이더큰미생물부하에서 10-6 의생존확률을달성하기위해임계시간 (critical time) 을초과하여설정한다. 하지만, 고온노출에손상을받는물품의경우에는, 오버킬 (over kill) 접근방식을사용하는것은불가능하다. 후자에서, 멸균주기는사전멸균된상당수의제품시험을바탕으로, 시간주기보다미생물부하의개체수와저항성에의존한다. D값은온도와같은특정한치사조건에서미생물수를 90 % ( 또는 1 log 또는 1/10의생존분율 ) 만큼감소시키는데필요로하는시간 ( 분 ) 이다. 예를들면, Geo bacillus stearothermophilus 포자는정의된조건, 즉 121 에서 D값이 1.5 분이다. 만약, 같은조건에서 12 분간처리된다면치사율입력이 8D라고볼수있다. 제품에이치사율입력을적용하는효과는초기의미생물부하에의존한다. 만약제품의미생물부하가 10 2 이라면, 2D의치사율입력은 1(10 0 ) 만큼의미생물부하를산출하고, 부가적인 6D 는 10-6 의계산된미생물생존확률을산출한다. 일반적으로, 밸리데이션된멸균주기아래에서물품이도달해야하는생존확률은생물학적지표와완전한상관성을갖기어렵다. 그러므로, 생물학적지표의저항성이멸균된물품의본래미생물의저항성보다더커야한다. 최악조건가정을만들기위하여열저항성이큰생물학적지표를처리하는것이적절하다. 위의예에서, 만약앞서의제품이 10 2 의미생물부하를가진다면 12 분주기는멸균에적합하다고볼수있다. 하지만, 만약원래의지표가 10 6 의미생물라면실제로 10-2 의생존확률이예측되어진다. 즉, 생물학적지표의 100 분의 1은양성결과를산출할지도모른다. 이러한경우는적절한생물학적지표의선택에의해회피할수있다. 밸리데이션의특정프로그램이바뀌었을때, 이러한조건에서측정되거나확인된 Geo bacillus stearothermophilus의 D값은재확립되어야한다. 특정한멸균공정을위해선호되는생물학적지표의 D값을결정하는데 fractional cycle 방식을사용할수있다. fractional cycle 방식은또한미생물부하의저항성을평가하는데사용되어질수있다. fractional cycle 은미생물수의저하나 fraction negative의달성으로연구된다. 이러한수들은생산조건에서공정중치사정도를결정하는데사용된다. 데이터는적절한멸균주기를확립하기위해적경성이확보된생산장비에사용된다. Geo bacillus stearothermophilus와같은적합한생물학적지표는또한통상적인멸균동안에도사용되어질수있다. 어떠한미생물부하에근거한멸균공정은충분한미생물의저항성과주기적인평가가필

88 요하다. 멸균방법이장에서는, 여과에의한미생물의제거와무균공정을위한가이드라인을포함하여 5 가지의최종멸균방법을기술한다. 하지만, 현대의기술적발달로인하여추가적인다른멸균방법의사용이가능해졌다. 이것은고온에서의중공성형, 포화증기외의습열멸균방식, 자외선조사, 무균공정에서의온라인연속식충전방식을포함한다. 주어진제형이나구성성분에대한적절한멸균공정의선택은멸균기술과멸균될물품에대한멸균공정의효과와관련된높은수준의지식을필요로한다. 증기멸균가압하에서포화된증기를사용하는열멸균공정은오토클레이브라고불리는챔버에서수행한다. 이것은멸균공정에서가장폭넓게사용되어진다. 작동의기본적인원칙은멸균챔버내부의공기가포화증기로완전하게대체되어지는것이다. 챔버내부로부터공기를더효과적으로대체하기위해서, 멸균주기는공기와증기배출단계를포함해야할수도있다. 주어진제품또는원료를위한멸균주기의설계나선택은열에대한불안전성, 열침투, 밸리데이션프로그램하에서의다른요소에의존한다. 멸균주기파라미터의설정이외에, 멸균대상이 121 에노출된상응시간의개념인 F 0 를활용한다. 특정온도에서 F 0 값은 121 에서제공하는치사율과동등한값을제공하는데요구되는시간이다. 현대의오토클레이브는일반적으로종래의밸브시스템보다민감한조절이가능한시스템으로작동한다. 하지만재래의장치와기기를이용한방식도그요구되는정밀성과제어수준에도달하기위해업그레이드하여활용할수있다. 이때에챔버와스팀재킷안정적사용이가능하고, 온전한열분포가이루어져야한다. 건열멸균 / 발열성제거건열멸균공정에의한유리용기등의물품의멸균은터널형이나오븐형뱃치공정에의해수행될수있다. 건열멸균 / 발열성제거시스템은, HEPA 필터로여과된가열공기가공급되고, 대류나방사에의해균 일하게분포되며, 모든중요한파라미터를감지하고모니터링하는송풍시스템을사용한다. 장치가 250 이상에서작동하고있을때, 빈챔버상태에서의허용가능온도분포범위는 ± 15 이다. 앞서의뱃치공정에비해연속식터널시스템은훨씬짧은머무름시간 (dwell time) 때문에뱃치공정을위해명시된것보다더높은온도를필요로한다. 연속식공정은보통무균충전작동전에급속한냉각단계를필요로한다. 적격성평가와밸리데이션프로그램에서, 온도의균일성을위한파라미터들과머무름시간이확립되어야한다. 건열멸균공정시스템에서의발열성제거는생물학적지표의불활성화보다어려운도전이기때문에, 발열성제거의밸리데이션이증명된다면일반적건열멸균공정을밸리데이션할때에는생물학적지표를포함할필요가없다. 건열멸균에서 3 log 이상의저하는발열성제거에적합한수준이고, 이것이성공적으로증명될때멸균역시보증이가능하다. 발열성제거테스트는전형적으로표준엔도톡신을접종하여수행한다. 그리고물품들은 LAL 어세이를이용하여엔도톡신에노출시킨후에잔류량을평가한다. 엔도톡신분석에대한추가적인정보를위해서는박테리아엔도톡신시험을참고한다. 가스멸균가스멸균은멸균되어야할물품이증기멸균이나건열멸균공정의높은온도에서견딜수없을때자주이용된다. 가장흔히사용되는가스멸균방식은에틸렌옥사이드 (ethylene oxide) 이다. 가연성, 돌연변이유발, 그리고특히염소이온을함유하는물품과함께멸균처리될때독성물질의잔류가능성은에틸렌옥사이드의단점들이다. 가스멸균공정은일반적으로증기멸균의오토클레이브와유사하게설계되지만, 추가적인압력과진공조절이가능한챔버에서수행되어진다. 이멸균기를사용하는시설들은, 적절한멸균후탈기, 미생물모니터링, 잠재적가스노출이최소화되도록장치가설계되어야한다. 에틸렌옥사이드를사용하는멸균공정의밸리데이션은앞서논의된것에따를수있다. 하지만, 이프로

89 그램은온도와더불어습도, 진공 / 양압, 그리고에틸렌옥사이드농도를적절한파라미터에의해제어해야하기때문에다른멸균방법에비해더포괄적이다. 전체주기동안챔버내모든중요한공정파라미터들이적절하다는것을증명하는것은중요하다. 에틸렌옥사이드챔버에서미생물부하의배치이전에설정하는온도에서유지시간 (holding time) 을최소화하기위해, 요구되는함습에미리이르게조정하는것이필요하다. 밸리데이션은일반적으로 Bacullus atrophaeus의포자처럼적절한생물학적지표가접종된제품을사용하여수행한다. 밸리데이션을위해서제품또는모의제품을전체챔버에적재시킨다. 수분과가스농도의모니터링은지식과경험을보유한자가담당해야그측정과작동, 유지를정교하게할수있다. 또한생물학적지표는일반적인실행들을모니터링하는데도사용된다. 생물학적지표는접종된제품이나모의제품을사용하는에틸렌옥사이드멸균주기설계에서미생물생존확률을확립하기위해서사용한다. 에틸렌옥사이드멸균의주요한제한요인들중하나는멸균을필요로하는제품의가장깊숙한부분에확산시키는능력이다. 그러므로챔버설계와챔버부하패턴은가스침투가완전하게허용되어야한다. 공정개발의완전한설명, 밸리데이션그리고에틸렌옥사이드멸균공정의일상적제어를위해 ISO 11135를참고하도록한다. 이온화방사선에의한멸균열멸균을견딜수없는의료기구의급속한확대와에틸렌옥사이드의안전에대한관심은방사선멸균의이용을증가시키게되었다. 또한이방식은약리학적활성성분과최종제형에적용될수도있다. 방사선에의한멸균의장점은낮은화학적활성, 낮은잔류물, 그리고제어할변수들이적다는것이다. 사실, 방사선멸균은정밀히측정될수있는흡수선량을제어한다는특징이있다. 밸리데이션을위해서는멸균보증이가능한수준의방사선량을설정하고그안전성을입증해야한다. 방사선은대상물품의온도를최소로증가시키지만, 플라스틱과유리재질의어떤것에도영향을줄수있다. 이온화방사선의 2가지종류는방사선동위원소의붕괴 ( 감마선 ) 와전자빔방사선에의한것이다. 멸균보증을위해산출된방사선량은최소, 최대선량설정범위내에서멸균대상의물품의변성이혀용되는수준이어야한다. 공정개발, 밸리데이션그리고이온화방사선공정의일반적제어는 ISO ,-2, 그리고 -3을참고하도록한다. 여과멸균여과에의한액체의멸균은개별적인공정으로서파괴적인메커니즘에의존하는다른멸균방식과는다르다. 여과는함유하고있는미생물의물리적제거에의하기때문에열에불안정한용액의멸균을위해자주사용된다. 필터조립체는일반적으로하우징에장착되거나고정된다공성매트릭스로구성된다. 여과재의유효성은필터포어 (pore) 의크기, 사전여과미생물의부하, 필터매트릭스내의미생물의흡착이나여과메커니즘에의존한다. 여과가메커니즘에있어서더중요한구성요소임을보이는근거가있다. 만약, 대안적여과공정을고려할때는섬유질필터와석면필터는피해야한다. 섬유질필터가요구되는경우에는, 해당공정의초기여과단계이후에비섬유질필터로대체해야한다. 필터평가는여과막의구멍크기와분포에의한것이아니라, 필터종류에따른여과막의명목상의능력을나타내는여과등급을따른다. 현재멸균여과기는 여과기는, 적절히밸리데이션될때, 유체흐름으로부터모든미생물들을제거하고멸균배수를생산할것이다. 라고정의된다. 여과등급이다른방식, 즉, 다양한크기의라텍스포어 (pore) 를보유함에의해서평가될때, 미생물의성질에기초한멸균여과기의명목상여과등급과다르다. 여과될제품의특성 ( 특히, 잠재적인생물부하를고려하여 ) 을고려하여, 특정한목적에올바른여과등급의필터를선택하는것은사용자의의무이다. 사용자가여과능력을확립하기위해여과능력시험을반복하는것은현실적으로어렵다. 미생물부하시험 (microbial challenge test) 는제조된여과막을대상으로제조조건아래에서우선적으로실시한다. 사용자는제조하는데있어서사용된여과파라미터들이미생물의여과에상당한영향을주는것인지를결

90 정해야한다. 여과공정의밸리데이션에있어서제품적합성, 약의흡착, 보존제또는다른첨가제, 그리고초기에배수된엔도톡신의함량은중요하게다루어야할사항이다. 여과공정의효율성은여과될용액의미생물부하에의해영향을받기때문에, 여과전에용액의미생물오염수준을결정하는것은여과압력, 여과속도, 그리고여과단위특성들과같은파라미터들의확립을위해중요한것들이다. 그러므로필터-보유능력 (filter-retaining capability) 을설명하는다른방식은로그저하값 (log reduction value, LRV) 의사용이다. 예를들어, 특정종을 10 7 의미생물만큼보유할수있는 0.2 μm 필터는언급된조건아래서 7 이상의 LRV을가질것이다. 선택된하우징과필터조립체 (filter assemblies) 는적합성 (compatibility) 과완전성 (integrity) 을위해우선밸리데이션되어야한다. 제조자가다른여과막을사용하여조립체를만드는것은가능하지만, 이조립체의적합성은먼저밸리데이션되어야한다. 추가적으로, 여과막의제조자에의해서만수행될수있는시험들이있다. 이들은미생물의부하시험 (challenge test) 을포함하며, 각각의여과막제조자에의한시험결과는그여과막의사용자들에게제공되어야만한다. 멸균목적을위한여과는보통 0.2 μm이나그보다작은명목상의포어 (pore) 크기등급의여과막을가지는조립체로수행한다. 막필터조립체는사용전에초기의완전성을위해시험해야하고, 그리고전체여과공정을통해완전성을유지하는지를증명하기위해서여과공정이완료된후에도시험해야한다. 전형적인완전성시험은포점시험 (bubble point test), 확산기류시험 (diffusive airflow test), 압력유지시험 (pressure hold test), 그리고전반유동시험 (forward flow test) 이다. 단일방향무균공정비록제형으로써최종충전되거나포장된제품의멸균은많은경우에미생물오염을최소화하기위하여선호되는공정이라는것에는일반적으로동의할수있다. 하지만, 최종적으로멸균되는게아니라일련의 무균공정으로제조되어야하는계열의제품이상당수있는것도사실이다. 무균공정은중간공정의대량제품또는구성성분에살아있는미생물이없음을보일수있어야하고, 살아있는미생물의유입을막을수있도록설계되어야한다. 무균공정으로생산된멸균제품과사후멸균제품사이의근본적인차이는밸리데이션이가능한단계의유무이다. 결과적으로, 무균적으로충전된무균제품은허용가능한멸균보증수준이달성되었다는것을확립하기위해위험평가시스템을사용해야한다. 현재의기술은개별적인장치시험을기초로적절한안전성평가를제공할수없다. 환경모니터링과공정시뮬레이션이오염된최종제품과직접적으로관련있다는것을보여주지못한다. 최종제품의파괴시험 ( 멸균테스트 ) 은오직많은로트의제품중매우작은비율만시험할수있어서극도로오염된로트만을감지할수있다. 무균공정의약품은앞서설명된공정중하나에의해멸균된다. 예를들어, 만약여과가능한액체라면대량제품은여과에의해멸균된다. 최종빈용기도열에의해멸균되어질것이다. 유리바이알을위해서는건열멸균이활용되고, 고무마개를위해서는오토클레이브가사용되어진다. 중요한관심사는최종제품으로생산하기위해무균충전작업동안에사전멸균된구성요소들이노출되는중간공정의환경이다. 적절히설계되고, 밸리데이션되고, 그리고유지되는충전이나다른무균공정시설을위한요구조건은, (1) 공기공급장치의효율적인유지를가능하게하는적절한설계와, 살아있거나살아있지않은입자들을적절히제어하는공기환경과직결된다. (2) 적절한가운과장비를갖춘훈련된작업원이제공되어야한다. 바람직한미생물학적품질의공기환경은높은수준의공기여과기술을활용하여달성될수있다. 그시설은일차적 ( 노출된물품부근에 ), 이차적 ( 무균공정이수행되어지는곳 ) 방어시스템을포함해야한다. 적절히설계된무균공정시설이나무균충전지역을위해, 보통의오염제거를견딜수있는벽과천장, 그

91 리고구멍이없고부드러운표면특성도고려되어야한다. 적절히설계된무균공정시설이나구역을달성하기위해서, 개인을위한적절한공간의탈의실과멸균복의저장고, 최종무균공정실의작업준비실, 필요시에어락 (air lock) 과공기샤워 (air shower) 장치들, 방사이에적절한차압유지, 무균공정실에서가장높은양압유지, 노출된제품이나구성요소의직접부근에서단일방향류를유지, 그리고거기에여과된공기노출, 적절한공기환기횟수, 적절한온도와습도제어, 문서화된위생프로그램등이고려되어야한다. 작업원의노출된피부를덮기위하여, 위생적인가운, 장갑의착용에대한교육을실시하여야한다. 무균공정과시설의증명과밸리데이션은공기여과시스템의효율성을확립하고, 미생물환경을모니터링하는방법을사용하고, 그리고시뮬레이션되는제품으로써무균배양배지를사용하여달성할수있다. 무균시설의모니터링은부유입자와미생물환경의모니터링뿐만아니라, 주기적인 HEPA필터평가와테스트를포함해야한다. 주기적인배지충전이나공정시뮬레이션시험을수행해야한다. 로트들 (Lots) 의멸균시험만약해당로트의완제품중에적은퍼센트에만오염이존재한다면, 무균시험이미생물오염을감지할수없다는것을알아야한다. 왜냐하면명시된수의시료에대한평가는상당한통계학적한계로인해전체를대변할수는없다. 하지만, 이렇게내재하는한계는, 모든완제품의미생물학적품질을확인하기위한비파괴적인대안을제공할수없고, 시료수를상당히증가시키는것은현실적으로어렵기때문에받아들여져야한다. 정제의경도 개요약물전달시스템으로서의정제 (tablet) 는신속붕해형 (rapidly disintegrating), 저속붕해형 (slowly disintegrating), 붕괴형 (eroding), 저작형 (chewable), 로젠지형 (lozenge) 등다양한형식으로제공된다. 각각의형식은결합 (bonding), 구조및압축된매트릭스의무결성 (integrity) 과관련된모종의요구사항이존재한다. 정제는제조공장, 의약품유통시스템및최종사용자 ( 환자 / 소비자 ) 단계에서의취급및운송시가혹한환경을견딜수있어야한다. 코팅, 포장, 인쇄등과같은제조공정은상당한정도의응력이결부될수있는데, 정제는그러한응력을견딜수있어야한다. 이러한이유로정제의기계적강도는상당히중요하며일상적으로측정된다. 정제의강도는제품개발기준및품질관리사양의역할을한다. 회전하는드럼에서정제를낙하시켜부스러짐및표면마모에대한내성을측정하는것은정제가기계적응력을견딜수있는능력을측정하기위해통상적으로실시되는시험중하나이다. 낙하후손실된중량의백분율은정제의마손도 (friability) 라고한다. 마손도를시험하기위한표준방식및장비는일반정보 <1216> 정제의마손도 (Tablet Friability) 에기술되어있다. 정제의기계적무결성을시험할수있는또다른측정기준은파정력 ( 破錠力 breaking force) 이다. 파정력이란특정평면에서정제를파괴시키는데필요한힘을말한다. 일반적으로정제를두압반 (platen) 사이에놓고하나의압반을이동시켜정제의파괴를일으키기에충분한힘을가한다. 일반적인원형 ( 횡단면이둥근 ) 정제의경우, 정제의지름을가로지르는하중 ( 직경하중 이라고도함 ) 이발생하며해당평면에서파괴가발생한다. 약학문헌에서는정제의파정력을통상적으로 경도 (hardness) 라고칭하지만, 이용어는의미를오도할수있다. 재료과학분야에서 경도 라는용어는어떤표면이소형탐침에의한관통또는함입 (indentation) 에견딜수있는정도를말한다. 파쇄강도 (crushing strength) 라는용어도정제의압축하중내성을기술하는데빈번하게사용된다. 이용어는 경도 보다는시험의진정한성격을더욱정확하게기술하지만, 시험

92 과정에서정제가실제로파쇄된다는의미를내포하고있다 ( 파쇄되지않는경우가많음 ). 또한 강도 (strength) 라는용어는물리학분야에서응력 ( 예 : 인장강도 ) 을기술하는데사용되는경우가많기때문에문제시될수있다. 따라서본논의에서는 파정력 이라는용어를사용하고자한다. 파정력의측정초창기의측정장치는일반적으로수동으로작동되었다. 예컨대 Monsanto( 또는 Stokes) 경도시험기는스프링게이지와나사를통해두개의조 (jaw) 사이에있는정제를압축하는방식을바탕으로한다. Pfizer 경도시험기는집게처럼생긴장치에정제를수직으로탑재하여압착하는방식이다. 한편 Strong Cobb 경도시험기는초기에수동으로작동되다가이후모터구동방식으로바뀐소형유압펌프의작용을통해파괴하중이가해지는방식이다. 이들장치가지닌문제점은작업자의하중속도가변성, 올바른설치및보정 (calibration) 상의어려움과관련되어있다. 반면현대식시험기는기계식드라이브, 파정력측정을위한변형게이지 (strain gauge) 기반형로드셀 (load cell) 및전자식신호처리장치를갖추고있기때문에선호된다. 그러나파정력의분석적측정을위해이러한현대식시험기를사용할때에는몇가지중요한사항을고려해야한다. 이제부터는해당사항들에대해다루고자한다. 압반압반들은서로평행을이루어야한다. 또한압반의표면은부드럽게연마되어있어야하며, 이동방향과수직을이루는부분이정밀연삭 (precision-ground) 되어있어야한다. 압반이동시에는수직성 (perpendicularity) 이유지되어야하며, 하중이적용되면서구부러짐이나비틀림변위 (displacement) 가없는메커니즘이어야한다. 접촉면은정제가접촉하는영역보다커야한다. 하중의속도및일관성압반의이동속도또는압축력이가해지는속도 ( 하중속도 ) 는일정해야한다. 일정한하중속도를유지하면압축하중의급속한생성을방지함으로써, 통제되지않은파쇄나전단파괴 (shear failure) 및파정력측정상의가변성증가위험을낮출수있다. 그러나일정한하중 속도의측정은정제생산의실시간모니터링에적용하기에는너무느릴수있다. 압축하중이가해지는속도는결과에상당한영향을미칠수있다. 정제의파괴에시간의존적공정이결부될수있기때문이다 (1). 정제매트릭스가하중속도의차이에어떤반응을보이는가는파괴메커니즘에따라다르다. 낮은변형속도에서는일부소재에연성파괴가발생할수있는반면, 높은변형속도에서는취성파괴가발생할가능성이크다. 연성파괴에서취성파괴로의이행은파정력의증가가수반하게된다. 단순히정제를파쇄하기만하는장치는민감도가부족하기때문에기만적으로재현성이높은데이터를생성시킬가능성이있다. 시험은일상적으로보정된장비와일관성을유지한채실시되어야한다. 설계또는제조업체가다른시험유닛으로변경할때에는변경전과변경후유닛모두에서유사한응력이유사한방식으로적용되도록하기위해데이터를비교해야한다. 현재입수할수있는장비는일정하중속도가초당 20뉴턴 (N) 이하이거나압반의일정이동속도가초당 3.5 mm 이하이다. 통제된상태에서일관성을보이는파괴는시험절차상의주요속성에해당한다. 결과의비교가능성을보장하기위해서는하중속도또는압반이동속도가동일한조건에서시험이실시되어야한다. 이러한두가지하중적용시스템마다모종의장점이존재하므로두방식모두실제로사용되고있다. 아울러특정시험상황및평가되는정제매트릭스의유형별로상이한제약조건이발생하기때문에어떤시스템이절대적으로우월하다고단언할만한근거가없다. 일반정보를다루고있는본장에서는두접근법모두를고려할것을제안한다. 시험방식별로특정정제시료에대해수치적으로상이한결과가도출될수있기때문에정해진파정력과더불어하중의적용속도또는변위속도를지정해야한다. 정제의기하학적구조와질량이파정력에미치는영향파정력의측정값은정제의크기나형태가고려되어있지않다. 같은소재이지만더두꺼운정제를상대적으로얇은정제와동일한조건하에서동일한툴링형태 (tooling shape) 와최대힘을적용하여압축하면더많은파정력이요구될것이다. 정제의배치방향 (orientation) 과파괴는해당제형의개발과정에서사

93 용된것과일관된방식으로발생해야한다. 직접적인비교를위해 ( 다시말해, 데이터의정규화없이 ) 파정력의측정은크기및기하학적구조가동일하고시험장비상에서일관된배치방향을유지하는정제들을대상으로실시해야한다. 정제의배치방향분할선이없는원형정제의지름방향압축시정제의배치방향은명확하다. 다시말해, 지름을가로질러압축이발생할수있도록정제를압반사이에배치하는것이다. 그러나형태가독특하거나복잡한정제는파정력측정을위한명확한배치방향이없을수있다. 파정력은시험기내의정제배치방향의영향을받을수있기때문에, 결과의비교가능성을보장하기위해서는표준적인방향으로배치하는것이가장바람직하며, 가급적작업자들이가장용이하게재현할수있는방향으로배치해야한다. 일반적으로정제는지름을가로지르거나가장긴축과평행인방향으로시험한다. 분할선이있는정제는두가지배치방향이가능하다. 분할선과압반의면이수직을이루도록배치하는경우, 분할선이확대되면서인장파괴가발생할가능성이높다. 이를통해매트릭스의구조에서가장취약한지점의강도에대한정보를확보할수있다. 반면분할선이압반의면과수평을이루도록배치하는경우에는매트릭스에대한더욱일반적인정보를얻을수있다. 캡슐형정제또는분할선이있는정제는 3점굽힘시험을통해가장효과적으로파괴될수있다 (2). 압반에설치되거나압반을대체하는피팅 (fitting) 이정제의양끝을지지하고, 지지되지않는정제중간지점의반대편면으로파괴하중이적용된다. 피팅은경도시험기공급업체에서입수할수있다. 단위, 분해능및보정일반적으로현대식파정력시험기는킬로폰드 (kp) 또는뉴턴 (N) 으로보정되어있다. 이러한힘의단위들간의관계는다음과같다 (3). 1 kp = 1킬로그램포스 (kgf) = 9.80 N. 시험결과는의사소통을촉진할수있도록표준적인힘의단위로표시되어야한다. 일부파정력시험기는 Strong Cobb 유닛 (SCU) 으로된측정단위를제공하기도하는데, 이는 Strong Cobb 경도시험기가통상적으로사용되던시대의유산이다. SCU 와 N 또는 kp 간의변환은주의를기울여야하는데, SCU가유압장치에서기인한것이고압력을나타내기때문이다. 일반적으로현대식파정력시험기는디지털판독시스템을갖춘전자식설계로되어있다. 또한일부유닛은프린터가통합되어있거나별도의프린터와인터페이스를구성할수있다. 파정력은 1 N 이내의단위로판독가능해야한다. 파정력시험기는정기적으로보정해야한다. 장치의기계적구조뿐만아니라힘센서 (force sensor) 도고려해야한다. 힘센서의경우, 정적방식이나동적방식을사용하여완벽한측정범위 ( 또는최소한시료측정에사용되는범위 ) 를 1 N 단위의정밀도로보정해야한다. 일반적으로정적보정은추적가능한카운터웨이트 (counterweight) 를사용하여최소 3개의지점을점검하여직선성 (linearity) 을평가한다. 동적보정은추적가능한표준로드셀을압반사이에서압축시키는방식을사용한다. 또한파정력시험장치의기능적보정에서는하중의적용속도또는변위속도및그러한속도의일관성이압반의이동범위전체에걸쳐지정된허용오차이내에있는지확인해야한다. 시료의크기평균적인파정력의측정에충분한통계적정밀도를확보하기위해서는최소 6개의정제시료를시험해야한다. 공정또는제품의품질관리목적을달성하기위해서는파정력의평균값만으로충분할수있다. 파정력이특별히중요한요소인경우에는평균값과더불어개별파정력수치도접근가능해야한다. 인장강도인장강도의측정은압축된소재의기계적강도에대한더욱근본적인측정치를제공하며정제의기하학적구조를고려한다. 정제가인장시파괴되면해당파정력은인장강도의계산에사용할수있다. 다만이방식은단순한형태의정제에만실용적이다. 납작한원형정제 ( 직원기둥형 ) 가직경압축상태에서명확하게반으로쪼개짐으로써인장시파괴가발생하면해당파정력은다음과같은등식을통한인장강도계산에사용될수있는데 (4), 이는원기둥형정제에만적용된다. σ x = 2F/πDH

94 위등식에서 σ x 는인장강도, F는파정력, D는정제의지름, 그리고 H는정제의두께를가리킨다. 인장시파괴되는정제만이고려되기때문에데이터는일관된방식으로파괴되는정제들에근거하게된다. 따라서일반적인파괴강도시험에비해데이터의재현성이향상된다. 또한등식에지름과두께가모두포함되어있기때문에데이터가정제의크기와관련하여정규화된다. 이등식의유도는표준텍스트에서발견할수있으며 (5, 6), 탄성이론 (elastic theory) 및다음과같은가정에근거한다. 1. 정제가등방성물질이다. 2. 훅의법칙 (Hooke's Law) 을따른다. 3. 압축시탄성계수와인장시탄성계수가동일하다. 4. 최적점 (ideal point) 하중이발생한다. 위의유도식을둥글고볼록한정제로확장하면다음과같은등식이유도된다. 정제의굽힘시험은정제의인장강도를측정할수있는또다른방식이다. 최적의하중조건하에서, 한쪽면의지지되지않는중간지점으로파괴하중이적용되면반대쪽면에서순수한인장응력이생성된다. 정제가직원기둥형이고 3점굽힘시험을받는경우, 인장강도는다음과같은등식을사용하여추정할수있다 (9). σ x = 3FL/2H 2 D 위등식에서 L은지지점사이의거리를가리키며다른문자들은앞서정의한바있다. 이등식에서사용된가정은직경압축을통한인장강도의계산에서사용된가정과같다. 그러나굽힘및직경압축에의해각각측정된인장강도는최적점하중이발생하지않거나시험도중전단파괴가유도될수있기때문에서로일치하지않을수있다. σ x = (10F/πD 2 ) [(2.84H/D) - (0.126H/W) + (3.15W/D) ] -1 위등식에서 σ x 는인장강도, F는파정력, D는정제의지름, H는정제의두께, 그리고 W는중앙원기둥의두께 ( 정제벽의높이 ) 를가리킨다. 현대식모터구동파정력시험기의완만하고일정한하중속도는인장파괴를촉진한다. 그러나파쇄가발생하고압반표면과의인터페이스에서전단파괴가유도되기때문에최적점하중이발생하지않을수있다. 압반에패딩 (padding) 을추가하면접촉점에서의전단을방지하고정확한인장파괴를유도할수있다. 이러한맥락에서패딩의추가는고도의정밀한측정이요구될때강력히권고되는방식이다. 패딩은정확한근원점 (point-source) 에서의힘적용이라는가정에서크게벗어나지않을정도로얇아야한다. 또한패딩은변형 (deformation) 이시험장치에의해측정되는힘의일부가되지않도록쉽게함몰 (collapse) 해야한다. 다수의시료를측정하는더욱일상적인상황에서패딩을추가하면이전시험에서사용된시료의분말이함몰성패딩매트릭스에박혀있어해당매트릭스의특성이변화함으로써부정확한측정을야기할수있다. 빈번하고일상적인패딩교체에대한규정이없는경우에는시험조건의일관성유지를위해패딩을사용하지않는것도용인가능한방식으로간주될수있다. 참고문헌 1. Davies, P.N.; Newton, J.M. In Pharmaceutical Powder Compaction Technology; Alderbom, G., Nystrom, C., Eds.; Marcel Dekker: New York, 1995; Chapter Gold, G.; Duvall, R.N.; Palermo, B.T. New instrumentation for determining flexure breaking strength of capsule-shaped tablets. J. Pharm. Sci. 1980, 69(4), Diem, K., Ed. Documenta Geigy, Scientific Tables, 6th ed.; Geigy Pharmaceuticals: Ardsley, New York, 1969; Fell, J.T.; Newton, J.M. Determination of tablet strength by the diametral-compression test. J. Pharm. Sci. 1970, 59(5), Tomoshenko, S. Theory of Elasticity; McGraw-Hill: New York, 1934; 82-85, Forcht, M.M. Photoelasticity; John Wiley & Sons: New York, 1948; 2, 32-39, Stanley, P.; Newton, J.M. The tensile fracture stress of capsule-shaped tablets. J. Pharm. Pharmacol. 1980, 32(12), Pitt, K.G.; Newton, J.M.; Stanley, P. Tensile fracture of doubly-convex cylindrical discs

95 under diametral loading. J. Mater. Sci. 1988, 23, Pitt, K.G.; Newton, J.M.; Richardson, R.; Stanley, P. The material tensile strength of convex-faced aspirin tablets. J. Pharm. Pharmacol. 1989, 41, 결정다형 결정다형은고체상태와관련된현상이다. 이것은고체상태의화합물이같은화학조성을가지면서다른결정형태로존재하려는성질이다. 비결정성고체상태로존재하는물질은무정형이라고한다. 이현상이화학원소 ( 예를들어, 황 ) 에서발생될때는, 다형성대신동소체라는용어가쓰인다. 슈도폴리모피즘 (Pseudopolymorphism) 이라는용어는용매화물 ( 수화물포함 ) 을설명하는데사용되며여기서용매는화학량론적비율로결정성매트릭스에존재한다. 슈도폴리모피즘이라는용어는용매가매트릭스안에다양한비율로갇혀있는화합물을포함하는의미로확장되어쓰일수있다. 그러나슈도폴리모피즘이란용어는서로다른상황에서사용될수있기때문에의미가모호하다. 그래서 용매화물 과 수화물 이라는용어를사용하는것이바람직하다. 이장은물질이폴리모피즘을나타낸다는것을말해주며, 이것은결정형폴리모피즘, 용매화물의생성, 동소체또는무정형형태의생성일수도있다. 동일한화학조성은모든결정형태와무정형형태의물질이용액안에서나녹을때같은화학적거동을보인다는것을의미한다. 반대로고체상태에서는그들의물리화학적그리고물리적특성 ( 용해도, 경도, 압축률, 밀도, 녹는점등 ) 때문에반응성과생체이용률이달라질수있다. 화합물이폴리모피즘을보일때, 자유엔탈피는주어진온도에서가장낮고압력은가장열역학적으로안정하다. 다른상태들은준안정상태라고한다. 상온과상압에서준안정상태형태는변하지않고현상태를유지하거나, 열역학적으로더안정한형태로변할수도있다. 여러가지결정형이존재할때이들중하나는주어진온도와압력에서열역학적으로더안정하다. 이결정은다른고체상과그리고액체, 기체상과함께평형에도달할수있는상을구성할수도있다. 만약각결정형이주어진온도범위안에서더안정하다면, 한형태에서다른형태로의변화는가역적이며에난시오트로픽 (Enantropic) 이라고한다. 하나의상에서다른상으로의변화는단일변량평형이어서주어진압력에서이상태는전이온도에의해특징지어진다.

96 그러나만약전체온도범위에서오직하나의형태만안정하다면, 그변화는비가역적이거나모노트로픽 (Monotropic) 하다. 결정화조건 ( 온도, 압력, 용매, 농도, 결정화속도, 결정화매개, 불순물의유무와농도등 ) 을달리함으로써다양한결정형들이나용매화물들이생성된다. 아래의기술들은폴리모피즘을연구하기위해사용될수있다. Ÿ 분말 X-선회절측정법 Ÿ 단일결정의 X-선회절측정법 Ÿ 열분석 ( 열량측정스캔비교, 열중량분석법, 열현미경관찰법 ) Ÿ 미세열량측정 Ÿ 수분흡수분석 Ÿ 광학현미경, 전자현미경 Ÿ 고체핵자기공명 Ÿ 적외선흡수분광법 Ÿ 라만분광분석법 Ÿ 용해도측정과고유용해속도 Ÿ 밀도측정이러한기술들은서로상호보완적이며, 그중일부는필수적으로사용되는방법이다. 분석데이터에기본적으로사용되는압력 / 온도그리고에너지 / 온도도표들은에너지관계 ( 에난시오트로피즘, 모노트로피즘 ) 와폴리모피즘화합물의개개변성들에대한열역학안정성을완전하게이해하는데유용한도구이다. 용매화합물의경우시차주사열량측정법과열중량분석법이더바람직하고, 용해도측정과고유용해속도, X-선회절측정법이사용된다. 수화물의경우수분수착과탈착등온선이상대적인안정성을보여줌으로써확인할수있다. 일반적으로수화물은무수물보다물에덜용해되고, 마찬가지로용매화물도용매화물이아닌형태에비해용매에덜용해된다. 서론 라만분광법 라만분광법은빛산란에의한분광학적측정방법의원리 를기본으로하며, 적외부및근적외부분광법과같은 분자진동분광법에연관되어있다. 라만효과자체는 주어진진동양식에서분자간결합의분극율의변동의 결과로서나타나며비탄성산란광으로서측정된다. 라만스펙트럼은보통레이저인단색광원에의해대상 시료가그가상준위로여기됨으로써생성된다. 탄성 산란광 ( 파장의변화없음 ) 은레일리그산란이라고하 며, 레이저파장의수치를표시하는것외에라만분광 법에서는이용되어지지않는다. 하지만, 초기상태와 다른진동에너지상태로이완된경우, 산란된빛에너 지는이동하게된다. 이러한이동은초기및최종진동 상태사이의에너지차이에비례한다. 이러한 " 비탄성 적산란 " 광을라만산란이라한다 개의광 자들중겨우 1개정도가라만산란을일으킨다. 따라서레이저가라만분광기에이용되는데, 라만산란광자가낮은에너지인경우에는스톡스산란이라하고, 더높은에너지의경우, 이것을안티-스톡스산란이라고지칭하는데, 거의모든라만측정방법은스톡스라만산란을이용한다. 라만스펙트럼의형태는적외부스펙트럼을흡광도로선형관계로도시한것과상당히유사하다. 강도또는라만광자의수를에너지이동값에대해도시한다. x축은일반적으로 " 라만이동 /cm 1 " 또는 " 파수 /cm 1 ". 이다, 라만이동은일반적으로파수로표현하며, 레이저의파수와피크의절대파수의차이를나타낸다. 스펙트럼은중적외부스펙트럼과동일한방식으로해석된다. 주어진진동모드에서의 ( 라만이동된 ) 파수는적외부흡수스펙트럼에상응하는흡수대의파수와동일하다. 그러나라만스펙트럼에서의강한피크는적외부스펙트럼에종종약하게나타나거나그반대이기도하기때문에두분광기술은종종상호보완적이라고할수있다. 라만분광법은시료 ( 고체, 반고체, 액체, 또는가끔기체 ) 를파괴하지않고최소한또는전혀전처리를하지않고, 신속하고정확하게측정이가능한장점을가지고있다.

97 라만스펙트럼은시료의기본진동모드에대한정보를포함하고있으며, 그신호는가시부또는근적외선부에서나타나므로광섬유와의효과적인결합이가능하다. 이것은또한레이저광에대해투명한어떤매체 ( 예를들어, 유리, 플라스틱또는수용성매체의시료 ) 에서든라만신호를얻을수있다. 더욱이라만스펙트럼이보통가시부또는근적외부방사로여기되기때문에표준적인유리 / 석영광학장치를사용할수있다. 장비측면에서보면, 현대식시스템은사용이용이하고, 빠른분석시간 ( 수분에서수초내에 ) 을제공하며, 신뢰할수있다. 그러나고출력레이저를사용하는위험이있다는것을인식하여야하는데, 특히그파장이눈에보이지않는근적외부에있을때이다. 광섬유프로브는레이저및레이저등급에대한적절한정부규정을참조해조심하여사용하여야한다. 보통의 라만분광법에덧붙여, 좀더전문적인라만기법이여러가지있다. 이에는공명라만, 표면증강라만분광법, 라만광학활성, 가간섭성안티스톡스라만분광법, 라만이득또는상쇄분광법, 하이퍼라만등이포함된다. 이러한기법은제약실험실에서는널리사용되지는않기때문에여기에서는다루지않는다. 정성적및정량적라만측정라만분광법은일반적으로두가지적용방법이있다 : 정성적및정량적정성적라만측정정성적라만측정은시료에존재하는작용기에대한분광정보를얻는것이다. 라만스펙트럼은주어진화합물에대해특이성을가지므로구조동정뿐만아니라공정서의확인시험법으로사용될수있다. 정량적라만측정광학적강도를측정하는검출기를갖춘기기 ( 예, 푸리에변환라만분광계 ) 에대하여, 정량적라만측정은주어진파수, 에서, 신호, 와분석물질의농도, 사이에아래와같은관계를이용한다. 여기서 는레이저빔의직경, 수집광학장치, 시료부피, 온도에따른상수이며, 는특정진동모드에서의라만단면이며, 은레이저의파수, 는진동모드의 파수그리고 는레이저출력이다. 라만단면, 은특정진동모드의본질적인특성이다. 시료의부피는시료에조사된레이저빔의초점의크기, 초점조절에사용되는광학및시료자체의광학적특성에의해정의된다. 시료에서의점크기는마이크로프로브의 1 보다작은것부터큰영역의시료시스템의 6 mm까지있다. 초당광자수를측정하는라만분광기 ( 예 CCD-라만분광계 ) 에해당되는식은, 위의식으로부터, 피크의시그널은시료의농도에정비례한다는것을알수있다. 이러한관계는정량적라만응용의대부분에대해그기초가된다. 정량에영향을주는요인시료요인시료요인들중에정량적라만분광법에좋지않은영향을주는것들은, 형광, 시료가열, 매질이나시료자체에의한흡수, 그리고편광효과이다. 시료의매질이형광화합물을포함하는경우, 측정된신호에는대개형광에의한기여가포함된다. 레이저의여기파장이형광화합물의흡수대와겹치는경우에만형광이관찰이된다. 형광은전형적으로라만스펙트럼영역에서넓은경사바탕선으로관찰된다. 형광은바탕선오프셋및신호대잡음비의감소를일으킬수있다. 형광의파장범위와강도는형광물질의화학적조성에의존한다. 형광은일반적으로라만산란보다훨씬더효율적인과정이기때문에, 소량의형광불순물에도라만신호의상당한저하를초래할수있다. 형광은 785 nm 또는 1064 nm와같이긴파장의여기광원을사용하여감소시킬수있다. 그러나라만신호의강도가 에비례하므로, 형광을최소화하기위해서장파장레이저를사용하는것의장점이, 라만신호의강도가줄어드는것에의한최소한의부분적상쇄라는것을알아야한다. 가장좋은신호대잡음비는형광제거, 신호의세기및검출기의반응도등의균형을통해얻어진다. 고체에서의형광은종종측정전에일정시간동안레이저광을노출시킴으로써완화될수있다. 이과정을광퇴색이라고하는데, 빛을강하게흡수하는물질을분해시킴으로써나타나는것이다. 광퇴색은시료가유동

98 성인액체나형광성물질의양이흔적량보다많으면덜효과적이다. 레이저원에의한시료가열은물리적형태변화 ( 융해 ), 결정다형전이또는시료연소등을초래할수있다. 마이크로프로브를사용할때와같이, 시료에노출되는레이저점의크기가가장작은경우에, 시료가열의가능성이가장크다. 이것은일반적으로색이있고, 빛을강하게흡수하는물질또는열의이동성이낮은매우작은입자들에서문제가된다. 시료가열효과는시간에따른라만스펙트럼의변화나, 시료의변화에대한육안검사에의해관찰된다. 레이저출력을감소시키는방법이외에도, 측정하는동안시료나레이저의이동또는열접점이있거나액체에시료를담그는방법등으로열전도율을높이는등과같은다양한방법으로레이저유도가열을감소시킬수있다. 매질또는시료자체에의해라만신호의흡수가발생할수있다. 이문제는라만신호와근적외선영역의배음흡수가겹칠수있는장파장 FT-라만시스템에서더많이발생한다. 이효과는시료제시뿐아니라시스템의광학장치에의존한다. 충전및입자크기차이의결과로서고체에서의산란의변동성이이러한효과와연관된다. 그러나이러한모든영향들이제한된침투깊이및라만분광법에서사용하는상대적으로더좁은파장영역때문에근적외선부에서보다보통덜심각하다. 마지막으로레이저방사는편광되어있으며결정성물질및다른지향성시료의라만스펙트럼은시료가장착되는방법에따라현저하게달라질수있다는것을인식해야한다. 시료에서라만분광기가선형적으로편광된방사를생성할수있다면, 일상적인시료분석을위해편광교란기가권장된다. 시료채취요인라만분광법은시료가없을경우검출기는 0 으로인식하는제로-백그라운드기술이다. 이러한상황은시료가없을경우검출기에서의신호가최대로되는흡광분광법과대조적이다. 제로-백그라운드기술은작은시료농도에도비례적으로신호를나타내기때문에본질적으로매우민감하다. 기기는측정신호수준에서의시료간변동을초래할수있는다른광원에도민감할것이다. 더욱이형광에의해발생한큰백그라운드시그널은잡음레벨 ( 광자발생잡음 ) 을증가시킬것이다. 그러므 로, 분석물질의고유한라만시그널을직접적으로얻어내는것은매우어려운일이다. 변형의다른잠재적인원인은시료의불투명도및이질성의변화, 레이저출력의변화및광학수집형상또는시료의위치변화이다. 이러한영향은대표성과반복성을갖는시료측정방법에의해최소화될수있다. 장비의주의깊은디자인은이러한효과를감소시킬수있지만완전히제거할수없다. 내부참조표준법 (Internal reference standard) 의사용은대부분절대적세기의변화에의해발생한변화를제거하는공통적이고완건한방법이다. 몇가지선택할수있는방법이있는데, 독립적인피크를나타내는내부표준물을첨가하거나, 아로마틱링과같은부분적밴드를이용하여, 시료피크에영향을주지않는라만피크를사용할수있다. 용액스펙트럼의경우, 용매는샘플과샘플간에상대적으로변하지않고남아있기때문에독립적인용매밴드를사용할수있다. 전체영역의스펙트럼은, 레이저및시료고유성의변화가똑같이스펙트럼에영향을미치는것으로가정하고, 기준으로서이용될수있다. 시료측정방법에서두번째로중요하게고려해야할것은스펙트럼오염이다. 라만산란은외부적인요인들에의해나타나지않을수있는약한현상이다. 일반적인오염의원인은샘플홀더에아티팩트 ( 용기또는기판 ) 와주위의빛이다. 일반적으로이러한문제는확인및주의깊은실험에의해해결될수있다. 장비구성요소모든현대의라만측정장비는, 레이저를시료에조사, 산란된빛수집, 레일리산란빛차단, 라만광자를구별하고, 얻어진라만스펙트럼의검출과같은과정을포함한다. 모든상업라만장비는이러한기능을수행하기위해다음과같은공통적인특징을포함한다 : a. 여기광 ( 레이저 ) (Excitation source (LASER)) b. 시료측정장치 (Sampling device) c. 레이저파장의산란된빛을여과 / 제거하는장치 (Filtering device) d. 파장처리장치 (Wavelength processing unit) e. 검출기 (Detector)

99 a. 여기광원 ( 레이저 ) 표 1 은라만분광법또는제약분야적용에사용되는공 통된레이저를소개하였다. 자외선레이저는전문응용 분야에사용하지만일반적인분석측정을위해서는제 한되는여러단점이있다. UV 레이저에대한더많은 적용을통해, 라만분광법에좀더공통적으로적용될 가능성이있다. 표 1. 제약응용에사용되는레이저 레이저, nm 근적외레이저 1064 종류 Solid state (Nd:YAG) 830 Diode 785 Diode 가시부레이저 He Ne 레이저출력 파장영역, nm ( 스톡스영역, 100 cm 1 ~ 3000 cm 1 이동 ) Up to 3 W Up to 300 mw Up to 500 mw Up to 500 mw 비고 공통적으로푸리에변환방식의장비에사용일반적으로 2000cm-1로제한됨 CCD 라만시그널검출다른레이저에비해적게적용됨. 디스펄시브방식에라만레이저로넓게사용됨 상대적으로낮은형광간섭 532 Doubled (Nd:YAG) Up to 1 W 높은형광간섭 Ar+ Up to 1 W 높은형광간섭 Ar+ Up to 1 W 높은형광간섭 b. 시료채취장치 몇가지시료채취방법은직접적인광인터페이스, 현 미경, 광섬유기반프로브그리고샘플챔버 ( 특수샘 플홀더및자동샘플교환기포함 ) 로구성되어있다. 시료측정의광학구성은종종더많은정보를얻기위한 편광의존라만으로설계될수있다. 시료측정장치의 선택은종종분석물과시료에의해결정될것이다. 그 러나, 이러한시료측정에서시료의부피, 측정속도, 레 이저안전및시료상태와재현성의고려는특정실험 에대해시료측정방법을최적화하여실험해야한다. c. 광학필터장치 레이저파장 ( 레일리 ) 산란빛의강도는라만신호보다 휠씬더크기때문에검출기에도달하기전에차단되어 야한다. 노치 (Notch) 필터는레일리산란빛을차단 하는목적으로사용되며, 우수한차단및안정성을제 공한다. 전통적인다단식단색화장치는많이사용되어지지않는다. 더욱이, 외부간섭빛 ( 전등, 레이저플라즈마라인 ) 으로부터시료의측정을원활하게하기위한다양한필터나물리적장치는빛의측정을위한독립적작동이요구된다. d. 파장처리장치파장의척도는단색화장치의스캐닝인그레이팅폴리크로로메터 (CCD 라만분광계 ) 또는두빔간섭계 (FT- 라만분광기 ) 중하나에의해코딩될수있다. FT타입과분산타입으로나누는데, 두종류의구체적인장점과단점에대한논의는이장의범위를벗어난다. 최적구성장비는정성적측정에적합해야한다. 그러나정량적측정을위한장비의선택은분산및스펙트럼의세기에대한직선성이균일하지않을수있으므로주의를기울여야한다. e. 검출기실리콘을기반으로하는 CCD는분산타입의장비에가장일반적인검출기이다. 냉각검출기는대부분 Nd:YAG(532nm) 또는헬륨-네온 (632.8nm) 과같은가시광선레이저일때라만영역이 4500에서 100 cm -1 의스펙트럼영역에서낮은노이즈의측정이가능하다. 785 nm 다이오드레이저를사용할때파장영역은 3100에서 100 cm -1 로줄어든다. 대부분많이사용되는 CCD 검출기는 nm 헬륨-네온레이저또는 785nm 다이오드레이저를사용할때파장피크의민감도가크다. 푸리어변환장비는싱글채널게르마늄또는1064 nm에서여기되는 Nd:YAG 레이저와결합된 InGaAs 검출기를사용한다. 교정라만장비의보정은 3가지사항을포함한다.: 주파장 (x 축 ), 레이저파장, 세기 (y축) a. 주파장 (x축) FT-라만의경우에, 주파장의보정은내부 He-Ne 레이저파장의가장근사치로보정및유지된다. 대부분의분산형 (Dispersive) 라만장비는주파장축보정을위한원자방출램프를사용한다. 라만의모든장비들은, 판매자가사용자들이사용할수있는 x 축보정절차를제공한다. 분산형라만기기는,

100 여러원자방출라인에기초하여보정하는것이바람직하다. 이보정방법의유효성은적합한라만이동 (shift) 표준을사용하여, 레이저파장교정이후에검증할수있다. 분산형장비스캔의경우, 교정을더자주수행해야할수도있으며, 스캔의정확성및정적동작모드에서정밀검증이필요하다. b. 레이저파장레이저파장의변화는주어진장비의광도측정 ( 신호 ) 의정밀도와파장정밀도로확인한다. 가장안정적인출력의레이저도측정파장출력이약간다를수있다. 레이저파장은 FT-라만또는분산형라만의라만이동 (shift), 위치 ( 정도 ) 가정확한지확인해야한다. ASTM E (2002) 또는적합성이입증된표준물질을이용하여보정할수있다. [ 참고-액체및고체시약을사용하여신뢰할수있게라만분광기의파수를교정하기위해서는, ASTM 표준가이드에서제공되는라만분광기의파수교정법을참고한다. 또한매우정확하고정밀한저압아크램프의빛을이용하여라만장비를교정할수있다.] 분광등급의물질은적합공급업체에서구입하실수있다. 특정장비는주광학경로와분리하여내부라만표준을사용할수있다. 외부보정장치 (External calibration devices) 는산란된빛의광학경로를정확하게나타낸다. [ 노트- 화학적표준물질을사용하는경우, 오염을방지하고, 표준물질의안정성을확인하기위해주의해야한다.] 기기가연속보정타입이아니라면, 주파장축보정은레이저파장의측정직전에, 절차에따라수행해야한다. 외부보정을위해서, 라만이동 (shift) 표준물질은적절한측정조건으로배치되어야한다. 뚜렷하고잘분리된스펙트럼밴드의피크중앙이측정되어야한다. 위치 (Position) 는수동또는적절한유효피크선발알고리즘으로평가될수있다. 공급자에의해제공된소프트웨어는레이저의파장을측정하고, 이피크가적절한위치에있도록레이저파장을조정할수있다. 만약공급자가이기능을제공하지않는경우, 레이저파장을수동으로조정해야한다. 레이저의종류는, 레 이저파장의온도, 전류및전압에따라다르다. 파장허용오차는특정적용실험에따라달라질수있다. c. 신호수준 (y축) 광도측정축의보정은정확한분석방법 ( 계량화학 ) 과장비간상호교환기술을이용하야성공적으로정량화할수있다. 푸리에변환라만과분산라만분광계는모두유사한교정절차를거친다. 주어진측정에대한허용가능한광도측정정밀도의허용은분석법개발단계에서실시해야한다. 라만장비의광도측정반응도를보정하기위해, 광대역발광광원이사용되어야한다. 두가지방법이있는데, 방법A는텅스텐백색광을사용한다. 광원의출력파워는국가계측협회의규정에따른다. 영국에서는국립물리학연구소에서보정된전구를제공한다. 다른몇몇업체들은 NIST에서기인하는교정된표준을제공한다. 이방법은표 1에열거된모든공통레이저여기파장에적용가능하다. 방법 B는 NIST SRM을사용하는것이다. 도핑유리형광표준물도사용할수있다. 방법 A 광원을레이저가꺼져있는상태에서샘플위치에놓고검출기의반응도를 ( 기기에적절한조건을사용하여 ) 측정한다. 교정에사용되는광원의출력을알고있어야한다. 실제반응도와측정된반응도의비율에의해결정되어야하고교정파일을만든다. 이장비에서획득한모든스펙트럼을보정을위해적용해야한다. 대부분의제조업체는이방법에대한적절한교정소스와소프트웨어를모두제공할것이다. 만약제조업체에서절차또는방법을제공하지않는경우, 사용자는 NIST와적절한소프트웨어로부터획득한광원을사용하여작업을수행할수있다. 제조사의방법을사용하는경우, 교정절차및광원의유효성을확인해야한다. 사용자는제조업체로부터확실한방법을위한적합한문서를취득해야한다. 방법 B- 형광표준물을샘플위치에배치해야한다. 레이저를이용하여, SRM의스펙트럼 ( 기기의적절한조건하에 ) 을얻을수있어야합니다. 교정에사용되는광원의출력을알아야하며, 실제반응도와측정된반응도의비율에의해결정되어야하고교정파일을만든다.

101 이장비에서획득한모든스펙트럼을보정을위해적용해야한다. 대부분의제조업체는이방법에대한적절한교정소스와소프트웨어를모두제공할것이다. 만약제조업체에서절차또는방법을제공하지않는경우, 사용자는 NIST와적절한소프트웨어로부터획득한광원을사용하여작업을수행할수있다. 제조사의방법을사용하는경우, 교정절차및광원의유효성을확인해야한다. 사용자는제조업체로부터적격한방법인지보증하기위한적합한서류를취득해야한다. [ 참고 방법B는일반적으로 785 nm (SRM 2241), 532 nm (SRM 2242), 그리고 nm, 488 nm (SRM 2243) 레이저여기시스템이적합하다.] NIST 는현재기타 1064 nm (SRM 2244) 그리고 nm 의특정파장에서발광하는 SRM을개발하는중이다. d. 외부교정 (External calibration) 외부기준표준품을이용한상세한기능적검정은설사내부검정방법이존재해도실험실장비로서적합한장비임을설명하기위해서수행해야한다. 외부참조표준의사용은내부품질관리과정에대한필요성과는무관하며, 특정분석이나목적을수행할수있는장비의적합성에독립적인문서를제공한다. 공정또는반응기내에위치한기기의경우외부표준이항상가능하지는않다. 외부보정방법에비해내부의상대적성능을주기적으로확인해야한다. 이시험의목적은, 내부보정방법에포함되지않을수있는것 ( 프로세스렌즈, 광섬유프로브, 등 ) 의변화를체크하는것이다, 예를들면, 광학측정기의광도보정을확인하기위한것이다. 라만분광기의적격성및검증성주어진방법에대한특정장비의적합성은, 단순실험, 주기적인장비운영적격성그리고빈번한성능검증성과같은적용의기술적합성평가에의해보장된다. 기술적합평가의목적은, 제안된기술이의도한적용에적합한것을확신하기위한것이다. 기기적격성의목적은의도된적용에도사용하는기기가정기적으로적격한지를승인하며, 오랜기간에걸쳐제대로작동하고있는지확인하는것이다. 장치가특정정성또는정량분석에사용하는경우에는, 정기적으로성능검증이이루어져야한다. 라만스펙트럼을측정하는여러가지다양한방법들이있기때문에, 장비운영적격성및성능검증은종종어느기기에서도사용할수있도록외부표준을사용한다. 여러분광장비들과같이, 라만장비는파수 (x 축및여기광원으로부터의이동 ) 와광도 ( 시그널축 ) 의정밀도모두적격할필요가있다. 성능검증은, 장비적격성안에포함된, 최적의최초스캔또는스캔들의그룹 ( 스캔을수행하지않고축적수행 ) 의방법을적용한다. 이러한분석에서는, 가장최근에수리되어잘작동하는장비에서최고의스펙트럼을나타낸다고가정한다. 동일한참조표준물을오랜시간동안측정한스펙트럼들의비교는, ( 참조표준의안정성이문제가되는경우, 원래의표준또는동일한새로운표준중하나 ) 라만측정시스템의장기안정성을평가하기위한기초적인방법이다. 시험빈도기기의적격성은지정된주기에따라또는수리나중요한광학재설정이후, 예를들면레이저, 검출기, 노치나에너지필터교체이후에이루어진다. 전체장비재-적격성평가는마이크로프로브, 샘플방또는고정된광섬유프로브와같은샘플측정방법액세서리의변경에는필요하지않다. 성능검증테스트는위와같은장치의경우에대해평가되어야한다 : 장비사양공급업체의구체적인지침을따르는경우에는충분할수있다. 시험은, 파장 (X 축및여기광원으로부터의이동 ) 와광도 ( 시그널축 ) 의정밀도를들수있다. 장비의적격성테스트는특정적용에대한허용오차가충족되어야한다. 장비성능검증수행은분석적인측정을위해구성된장비에수행하고, 장비의적격성보다더자주수행되어야한다. 장비성능검증은파장의불확실성과세기정도의정밀측정을수행되어야한다. 파장정밀도와세기정도의테스트는데이터측정전에필요할수있다. 성능은이전의기기의적격성수행동안얻어진것과현재의스펙트럼과의비교및일치하는것으로확인된다.

102 기기운전적격성평가장비운영적격성과성능적격성에주어진수용사양은일반적인용도로적용할수있는것이중요하다특정장비및적용사양은사용분석목적및최종결과의원하는정확도에따라달라질수있다. ASTM 표준기준물질은, 이들물질들중하나를사용하여어떤상황 ( 특히원격온라인응용프로그램 ) 에따라보정하는것이비실용적일수있고, 다른물질이적절하게검증사용될수있다는이해와함께지정된다. 이와같은맥락으로볼때, 주어진특정적용에서분광기의노이즈, 검출한계 (LOD), 정량한계 (LOQ) 그리고허용스펙트럼의밴드폭와같은특정파라미터분석방법개발의한파트로포함되어야한다는것이중요하다. 이러한분광계의노이즈및밴드폭과같은시험에대한구체적인값은선택한장비와필요한목적에따라달라질수있다. 결과적으로, 이러한변수를측정하는특정장비의시험은이장에들어나지않는다. a. 파장 (x 축 ) 의정확도라만피크위치의정확성을유지하기위해보정을통한파장축의정확도를확인하는것이중요하다. 라만분광기의파장의교정방법은두가지로구성된다 : 주파장축과레이저파장교정, 두가지모두보정후장비파장불확실성이결정될수있다. 이것은 ASTM 시프트표준과같은라만시프트표준또는다른적절한물질을사용하여확인될수있다. 전체라만스펙트럼범위에서존재하는밴드들의표준의선택이스펙트럼내의여러위치에서장비의파장의불확도로평가될수있다. 주어진측정에필요한파장정밀도의허용오차는방법개발단계에서확인되야한다. [ 참고- 분산타입장비의스캔교정은더자주수행해야할수도있다. 그리고스캐닝및정적 ( 멈춘상태 ) 동작모드모두에서정밀검증할필요가있다.] b. 광측정정밀도두측정사이에서발생하는총방출광자의관점에서레이저변화는, 기기광도측정정밀도의변화의원인일수있다. 공교롭게도, 시료와시료에서유도된혼선방출광도의변화를함께합쳐진반응도내에서분리하는것은매우어렵다. 이것은왜절대적라만측정을강하게하지못하게하는지그리고왜광도측정의정밀도사양이상대적으로느슨하게설정되어있는지의이유중의하나이다. 광도측정정밀도의허용정도는, 방법개발단계동안에주어진측정을통해평가되어야한다. c. 성능적격성평가성능적격성평가의목적은, 광도측정축의정밀성, 민감성그리고파장의정밀성을만족하는특정범위내에서장비가실행되고있음을확인하는것이다. 장비가특정측정 ( 예를들면, 공정반응기에설치된 ) 에설정되어있는경우에는, 광도 ( 시그널 ) 의적격성기준표준을측정하는것과파장을측정하는것이더이상가능하지않거나바람직하지않을수있다. 주어진기기의작동적격성이장비가사용하기에적격하다고보여준다는조건하에, 하나의외부성능증명표준은연속된기초기능을다시확인하기위해사용될수있다. 성능검증표준은최대한현재분석샘플의포맷과일치하고유사한스펙트럼측정조건을사용한다. 외부성능검증표준스펙트럼의정량측정은파장 (x축과레이저파장 ) 과광도측정 ( 시그널 ) 의정밀성을확인해야한다. d. 파장정밀도파장의정밀도는광도측정의일관성시험에사용된것과동일한주기로선택된라만시프트표준의스펙트럼에대한데이터를수집하여측정되어야한다. 파우더시료는적절한시기에, 각측정 set 사이에다시패킹하여야한다. 관심있는스펙트럼범위의피크위치를사용하여정밀도를계산한다. 성능 (Performance) 은장비적격성평가시에측정된것과현재의피크위치와일치하는지확인하고, 스펙에명시된장비에서요구된정확도에따라조정될수있지만, ± 0.3 cm -1 이상표준편차차이가나타나지않아야한다. e. 광측정정밀도광측정정밀도는지정된시간동안적절하게검증된기준표준물질의단일스펙트럼의데이터를측정하여나

103 타낸다. 베이스라인보정후에, 관심스펙트럼범위에서밴드의개수는적절한알고리즘에의해계산되어야한다. 강한밴드의영역은 1로설정하고, 다른모든영역은강한밴드로표준화된다. 성능은이전의장비적격성평가시에측정된각영역에밴드와현재의밴드영역을매칭시킴으로써확인된다. 비록그사양은장비의요구된정확도에따라조정할수있지만그영역은 10 % 이상으로다양해야한다. f. 레이저출력정밀도및정확도이시험은자동내부레이저출력측정기가있는라만기기에적용할수있다. 레이저파워측정이없는기기는공급회사로부터보정된레이저파워미터를사용하여야한다. 레이저출력은측정분석과측정된레이저전력에따라대표성을갖는출력으로설정한다. 출력은기기적격성평가에서측정된출력에대해대조하여측정하고확인해야한다. 전력 ( 밀리와트또는와트 ) 은적격인수준에비해 25 % 이상차이가나면안된다. 만약그파워가그이상으로변화하는경우, 장비를수리해야한다. ( 그변화는아마도시스템의조정불량이나, 레이저고장의시작을나타낸다.) 자동내부레이저출력측정기가있는기기는내부전력측정기로부터생성된값의정확도를 12 개월의간격으로보정한후외부레이저전력미터와비교해야한다. 내부적으로계산된값은외부파워미터에서나온값과비교해야한다. 성능은이전의장비적격성을진행하는동안에발생한것과현재값이일치하는지확인해야한다. 제조업체는이분석을용이하게하는소프트웨어를제공할수있다. 만약기기설계가외부전력미터사용을못하게되어있으면, 공급자는상품의품질을보장하고, 상기분석은예정된서비스를진행하여달성될수있도록하며, 권장절차를제공하기위한문서를작성한다. 방법밸리데이션라만의방법밸리데이션은정확도, 정밀도등의측면에서시험방법밸리데이션에설명된것과동일한프로토콜을따를것이다. 그러나, 이들기준중몇몇은라만분광법의특정변수들에의해영향을받는다. 형광은방법의적합성에영향을줄수있는주요변수이다. 형광과같은간섭의영향은시료가매우변하기쉬워지고물질의적합성에도작은영향을미칠수있 다. 방법은이러한간섭의영향을최소화할필요가있는다른시료측정방법을제시해야한다. 검출기의선형성은시그널강도범위를확인해야한다. 형광은시그널의베이스라인, 검정에서사용된시그널, 형광이감소또는높은수준의형광이나타났을때의모든변화를포함할수있어야한다. 이것은베이스라인노이즈의증가가모든값에안좋은영향을주는것처럼방법의정량한계검출한계, 정밀도에도마찬가지로안좋은영향을준다. 형광은베이스라인시프트에의해정량에영향을미칠수있기때문에, 광퇴색의다른단계에서허용하는정량성을확인해야한다. 시료에조사되는레이저의영향도결정되어야한다. 시료에조사되는레이저전력의세기및노출시간에따른라만스펙트럼은시료의 ( 광퇴색에의해제외 ) 정성검사와육안검사를통해변형되지않는것을확인한다. 스펙트럼에서확인해야하는특정변화는피크위치의변화, 피크높이와폭의변화와바탕선의세기에서예기치않은변화이다. 방법의정밀도는시료의위치를포함해야한다. 시료의특성은고체와액체모두에중요한요소이며, 타이트한컨트롤또는보정모델에서고려되어야한다. 시료위치의민감도는종종적절한시료의준비또는시료홀더위치에의해최소화될수있지만, 여기광및수집구성에기초하여기기와기기마다다를것이다. 용어와기호의정의 Ÿ 보정모델은시료의특성이분석기기로부터의반응에관한수학적표현이다. Ÿ 기기의대역폭 ( 또는분해능 ) 은비슷한파장의빛을분리하기위한분석장치의능력의척도이다. Ÿ 운전적격성평가는기기의사양에따라수행하는것으로그의도된작업을수행할수있다고설명되는수행과정이다. 이과정은장비설치, 이전재배치, 주요수리, 등과같은중요한변화후에요구된다. Ÿ 성능적격성평가는일관된기기성능을검증하기위해하나이상의잘특성화되고안정된기준물질을사용하는프로세스이다. 적격성은차이가있는성능특성에대해동일한또는상이한기준을사용할수도있다.

104 Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ 라만스펙트럼은시료의진동에너지에비해훨씬더높은주파수의단색광에서분자진동사이의상호작용을통해시료에의해산란된빛에너지또는광자의수의척도이다. 가로축은일반적으로조사된빛과산란된빛사이에차이가나는파장의정도이다. 라만산란은분자가진동하는동안에결합간연관성이있는분극의변화에의해발생하는비탄성산란이다. 일반라만스펙트럼은샘플전자전이와공명하지않는빛에의해발생한다. 라만파수이동, 는산란방사의파수에서여기선의파수를뺀것이다. SI 단위 : m. 상용단위 : cm m 에서 는차동라만교차부로서스톡스산란에대해서는양의값이고, 안티-스톡스산란에대해서는음의값이다. 위장약의 ph 시험법은제산효과를표방하는위장약을일정량의염산 (0.1 mol/l) 에넣고일정시간섞은다음이액의 ph를구하는시험법이다. 위장약의 ph 는제제의용법및용량의 1 회복용량 (1 회복용량에차이가있는경우에는최소 1 회복용량 ) 에대응하는양을가지고다음과같은방법으로시험하여얻은 ph 값을의미한다. 검체의조제고형제제로제제총칙산제의규정에적합한것은그대로검체로한다. 단 1 회복용량씩포장한형태의것 ( 분포 ) 은 20 포이상의내용물의질량을정밀하게달아 1 회복용량당내용물의평균질량을계산하고균일하게혼합한것을검체로한다. 고형제제로제제총칙산제의규정에적합하지않은것중, 분포되어있는과립제등은 20 포이상의내용물의질량을정밀하게달아 1 회복용량당내용물의평균질량을계산한다음분말로하여검체로한다. 고형제제로제제총칙산제의규정에적합하지않은것으로, 분포되지않은과립제등은 20 회복용량이상을분말로하여검체로한다. 캡슐제, 정제등의경우, 20 회복용량이상을가지고그질량을정밀하게달아 1 회복용량당내용물의평균질량또는평균질량을계산한후에분말로만든것을검체로한다. 액상제제는잘흔들어섞은것을검체로한다. 조작법규정도계수를 1.000으로조정한 0.1 mol/l 염산 50 ml 또는이에대응하는 0.1 mol/l 염산을정확하게측정하여 100 ml의비커에넣고자력교반기및자력교반기회전자 ( 길이 35 mm, 지름 8 mm) 를이용하여 1 분간약 300 회전의비율로섞는다. 여기에검체 1 회복용량을정확하게달아넣은다음 10 분후의 ph 를 ph 측정법에의해측정한다. 단, 조작중에용액온도는 37 ± 2 로유지한다. 위장약의 ph 시험법

105 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 의약품각조제 1 부개정 ( 안 ) - 의견수렴용 일반시험법에디메틸아닐린시험법을신설함에따라의약품각조중순도시험에서디메틸아닐린을시험 하는품목에대해여다음과같이기준값을제외한시험방법을생략하도록개정 ( 안 ) 을제안하였으며효 소제각조를통합검토하여동일성분효소에대해서통합 ( 안 ) 을제안하였다. 현행개정안 덱스트로메토르판브롬화수소산염수화물 DextromethorpHan Hydrobromide Hydrate 덱스트로메토르판브롬화수소산염수화물 DextromethorpHan Hydrobromide Hydrate ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 디메틸아닐린 이약 0.50 g에물 20 ml를넣고 2) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약 0.50 g에물 수욕에서가열하여녹이고식힌다음묽은아세트산 2 ml, 아질산나트륨시액 1 ml 및물을넣어 25 ml로할때액의색은다음비교액보다진하지않다. 비교액디메틸아닐린 0.10 g에물 400 ml를넣 20 ml를넣고수욕에서가열하여녹이고식힌다음묽은아세트산 2 ml, 아질산나트륨시액 1 ml 및물을넣어 25 ml로할때액의색은다음비교액보다진하지않다. 고수욕에서가온하여녹이고식힌다음물을넣어 비교액디메틸아닐린 0.10 g에물 400 ml를넣 500 ml로한다. 이액 5 ml에물을넣어 200 ml 로한다. 이액 1.0 ml에묽은아세트산 2 ml, 아질산나트륨시액 1 ml 및물을넣어 25 ml로한다. 3) 중금속 ( 생략 ) 4) 페놀성화합물 ( 생략 ) 5) 유연물질 ( 생략 ) 고수욕에서가온하여녹이고식힌다음물을넣어 500 ml로한다. 이액 5 ml에물을넣어 200 ml 로한다. 이액 1.0 ml에묽은아세트산 2 ml, 아질산나트륨시액 1 ml 및물을넣어 25 ml로한다. 3) 중금속 ( 현행과같음 ) 4) 페놀성화합물 ( 현행과같음 ) 수 분 ( 생략 ) 5) 유연물질 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

106 현행개정안 디아스타제 프로테아제 Diastase protease 디아스타제 프로테아제 Diastase protease 이약은 Aspergillus oryzae 또는 Bacillus subtilis 를 밀기울에접종하여배양시킨다음물로침출하여여과하서만든전분소화력및단백소화력이있는복합효소제이 고에탄올로침전시켜얻은침전물을원심분리하고젤라며, 정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력단위를 틴용액으로피복하여탈수여과건조한것이다. 정량할함유한다. 때 1.0 g 은 α- 아밀라제 100,000 단위이상, β- 아밀 라제 12,000 단위이상및프로테아제 32,000 단위이 상을함유한다. 성상이약은회갈색 황백색피복한가루이다. 확인시험 정량법에따라시험할때 α- 아밀라제, β- 아 밀라제및프로테아제는양성이다. 건조감량 15.0 % 이하 (5.0 g 105, 1 시간 ). 강열잔분 30.0 % 이하 (1.0g). 정량법 1) α-아밀라제이약약 1 g을정밀하게건조감량 7.0 % 이하 (1 g, 105, 3 시간 ) 달아물또는완충용액으로녹여검액으로한다.(0.6 강열잔분 30.0 % 이하 (1.0 g) 단위 /ml). 1 % 가용성전분용액 5 ml에메클베인완정량법 충액 (ph 6.0 또는 ph 7.0) 3 ml 및 0.1% 염화칼슘 액 1 ml 를넣어 37 로가온하고검액 1 ml 를넣 어잘흔들어섞고 37 에서 30 분방치한다. 이액 0.2 ml 를취하여요오드용액 10 ml 에넣고세게흔 들어섞은다음물을대조로파장 660 nm 에서흡광 도 A a 를측정한다. 따로검액대신물을써서위와같 이조작하여흡광도 A st 를측정하고 100 에서 30 분간가열하여활성을잃은검액을위와같이조작하 여흡광도 A o 를측정한다. о 역가정의위의조건에서 30 분간 10.0 mg 의전분 을소화시켰을때 1 단위로한다. α- 아밀라제역가 ( 단위 /g) n : 검액희석배수 검체채취량 g 2) β-아밀라제이약 1.0 g을정밀하게달아물을넣어녹여검액으로한다.(0.5 단위 /ml). 0.5 % 가저장법차광한기밀용기. 용성전분용액 10 ml 를삼각플라스크에취하고 40 에서 30 분방치하고페링시액알칼리액 2 ml 를넣 어직화상에서 2 분간끊이고식힌다. 다음 30 % 요 오드화칼륨액 2 ml 및 25 % 황산 2 ml 를넣고유 리된요오드를 0.05 mol/l 티오황산나트륨으로적정 이약은 Aspergillus oryzae 또는 Bacillus subtilis 에 성상이약은흰색 황백색또는황갈색의가루 로특이한냄새가있다. 확인시험 다. 정량법에따라시험할때양성반응을나타낸 순도시험변패이약은변패한냄새가없다. 1) 전분당화력가 ) 검액이약을 0.1 % 염 화나트륨액을넣어녹여 전분당화력단위 /ml 가되도록조절하여검액으로한다. 나 ) 기질용액 미리감자전분약 1 g 을정밀하게달 아 105 에서 2 시간건조하고그감량을측정한다. 그건조물약 2.0 g 에해당하는감자전분을정밀하게 달아물 20 ml 에넣어녹이고끓는물 30 ml 에넣 어 5 분이상호화한다음식히고 ph 5.6 멕클베인 완충액 10 ml 및물을넣어정확하게 100 ml 로한 다. 쓸때만든다. 다 ) 조작법소화력시험법중전분소화력시험법 1) 전 분당화력시험법에따라조작한다. 2) 단백소화력가 ) 검액이약을 0.1 % 염화나트륨 액을넣어녹여 단백소화력단위 /ml 가되도 록조절하여검액으로한다. 나 ) 기질용액 소화력시험법의단백소화력시험법중 기질용액 2 를쓴다. 다만 ph 는 7.2 로조정한다. 다 ) 조작법소화력시험법의단백소화력시험법에따라 조작한다. 다만침전시액은트리클로로아세트산용액 A 를쓴다.

107 현행개정안한다. 따로효소액대신에물을넣어위와같이조작하여공시험을한다. о 역가정의상기조건에서 10.0 mg의포도당을생성할때 1 단위로한다. β- 아밀라제역가 ( 단위 /g) B A f n 검체채취량 g b : 공시험액의 0.05 mol/l 티오황산나트륨액소비량 (ml) a : 검액의 0.05 mol/l 티오황산나트륨액소비량 (ml) f : 0.05 mol/l 티오황산나트륨액의규정도계수 n : 검액희석배수 3) 프로테아제이약 1.0 g을정밀하게달아물또는완충액으로녹여검액으로한다 (32 단위 /ml). 0.6 % 카제인액 1 ml를시험관에넣고 37 항온수조에서 10 분간반응시킨다음 0.4 mol/l 크리클로로아세트산시액 2 ml를넣고 10 분간방치하여여과한여액 1 ml를취한다. 여기에 0.4 mol/l 탄산나트륨 5 ml 및폴린시액 (1 3) 1 ml를넣어 20 분간방치한다음물을대조로파장 660 nm에서흡광도 (E 1) 를측정한다. 따로검액 1 ml를취하여 0.4 mol/l 크리클로로아세트산시액 2 ml를넣고 0.6 % 카제인용액 1 ml를넣은다음 10 분뒤에여과한다. 여액 1 ml를취하여이와같이조작하여흡광도 (E 2 ) 를측정한다. 또티로신표준액 (50 μg/ml) 1 ml를취하여위와같이조작하여흡광도 (E S ) 를측정한다. о 역가정의위의조건에서 1분간티로신 1.0 μg에대응하는폴린정색물을생성할때 1 단위로한다. 프로테아제역가 단위 g E E S n 검체채취량 g n : 검액희석배수 о 완충액 : 0.1 mol/l 인산염완충액 (ph 6.0) 또는 0.1 mol/l 아세트산염완충액 (ph 6.0) ( 프로테아제 시험용 ) 저장법기밀용기.

108 현행개정안 디클록사실린나트륨수화물 Dicloxacillin Sodium Hydrate 디클록사실린나트륨수화물 Dicloxacillin Sodium Hydrate 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달순도시험디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액 을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정 밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어 정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게 취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하 여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액 각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그 래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준 물질의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 결정성 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와 내부표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하 여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린 약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물 을넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취 하여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분수분 ( 생략 ) 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분

109 현행개정안 무균시험 ( 생략 ) 발열성물질 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 수분 ( 현행과같음 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 발열성물질 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 바캄피실린염산염 Bacampicillin Hydrochloride 바캄피실린염산염 Bacampicillin Hydrochloride 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 3) 유리암피실린 ( 생략 ) 4) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 유리암피실린 ( 현행과같음 ) 4) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다.

110 현 행 개정안 검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 강열잔분 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 세파드록실수화물 Cefadroxil Hydrate 세파드록실수화물 Cefadroxil Hydrate ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 유연물질 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 결정성 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 유연물질 ( 현행과같음 ) 3) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 3) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ).

111 현행개정안 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 ph ( 생략 ) 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 수 분 ( 생략 ) ph ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 세파졸린나트륨 Cefazolin Sodium 세파졸린나트륨 Cefazolin Sodium ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 흡광도 ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 비소 ( 생략 ) 4) 유연물질 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 흡광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 비소 ( 현행과같음 ) 4) 유연물질 ( 현행과같음 ) 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약

112 현행개정안 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 세팔렉신수화물 Cefalexin Hydrate 세팔렉신수화물 Cefalexin Hydrate 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 )

113 3) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 현행개정안 3) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 4) 유연물질 ( 생략 ) 수분 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 3) ( 현행과같음 ) 결정성 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 4) 유연물질 ( 현행과같음 ) 수분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

114 현행개정안 세포탁심나트륨 Cefotaxime Sodium 세포탁심나트륨 Cefotaxime Sodium 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 4) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 흡광도 ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 황산염 ( 생략 ) 3) 중금속 ( 생략 ) 4) 비소 ( 생략 ) 5) 유연물질 ( 생략 ) 6) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 4) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 흡광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 황산염 ( 현행과같음 ) 3) 중금속 ( 현행과같음 ) 4) 비소 ( 현행과같음 ) 5) 유연물질 ( 현행과같음 ) 6) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기

115 현 행 개정안 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분건조감량 ( 생략 ) 무균시험 ( 생략 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분건조감량 ( 현행과같음 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 세푸록심나트륨 Cefuroxime Sodium 세푸록심나트륨 Cefuroxime Sodium ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 4) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 비소 ( 생략 ) 4) 유연물질 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 4) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 비소 ( 현행과같음 ) 4) 유연물질 ( 현행과같음 ) 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이

116 현행개정안 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 아목시실린나트륨 Amoxicillin Sodium 아목시실린나트륨 Amoxicillin Sodium ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 요오드소비성물질 ( 생략 ) 4) 염화물 ( 염화나트륨으로서 ) ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 요오드소비성물질 ( 현행과같음 ) 4) 염화물 ( 염화나트륨으로서 ) ( 현행과같음 ) 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위

117 현행개정안 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 6) 헥사노산2-에틸 ( 생략 ) 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 수 분 ( 생략 ) 6) 헥사노산2-에틸 ( 현행과같음 ) 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 아목시실린수화물 Amoxicillin Hydrate 아목시실린수화물 Amoxicillin Hydrate 성상 ( 생략 ) ( 생략 ) 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 )

118 확인시험 ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 3) 유연물질 ( 생략 ) 현행개정안 4) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 수분 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 결정성 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 유연물질 ( 현행과같음 ) 4) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 수분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

119 현행개정안 암피실린나트륨 Ampicillin Sodium 암피실린나트륨 Ampicillin Sodium 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 비소 ( 생략 ) 4) 유연물질 ( 생략 ) 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 비소 ( 현행과같음 ) 4) 유연물질 ( 현행과같음 ) 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입

120 현행개정안 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분수분 ( 생략 ) 무균시험 ( 생략 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분수분 ( 현행과같음 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 암피실린무수물 Anhydrous Ampicillin 암피실린무수물 Anhydrous Ampicillin 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 3) 유연물질 ( 생략 ) 4) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 유연물질 ( 현행과같음 ) 4) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어

121 현 행 개정안 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 암피실린수화물 Ampicillin Hydrate 암피실린수화물 Ampicillin Hydrate ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 3) 유연물질 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 유연물질 ( 현행과같음 ) 4) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 4) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내부표준액 1.0 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표

122 현행개정안 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 클록사실린나트륨수화물 Cloxacillin Sodium Hydrate 클록사실린나트륨수화물 Cloxacillin Sodium Hydrate ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 결정성 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 비소 ( 생략 ) 4) 유연물질 ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 결정성 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 비소 ( 현행과같음 ) 4) 유연물질 ( 현행과같음 )

123 현행개정안 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

124 현 행 개정안 티카르실린나트륨 Ticarcillin Sodium 티카르실린나트륨 Ticarcillin Sodium 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하순도시험 1) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준 액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위의 맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물 을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를 정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면 원심분리하여위의맑은액을표준액으로한다. 검액 및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체 크로마토그래프법에따라시험하여검액과표준액중 의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아닐린의 피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 2) 티카르실린함량 ( 생략 ) 수분 ( 생략 ) 무균시험 ( 생략 ) 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리 하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐 린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고 물을넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게 취하여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시 액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음 필요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 내부표준액 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 나프탈렌 50.0 mg 을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를취하여시클로 헥산으로 100 ml 로한액을내부표준액으로한다. 조작조건 검출기 : 불꽃이온화검출기 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m 인관에기체 크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마 토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입 힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 유량 : 30 ml/ 분 2) 티카르실린함량 ( 현행과같음 ) 수분 ( 현행과같음 )

125 현행개정안 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 판크레아틴 Pancreatin 판크레아틴 Pancreatin Pancreatin [ ] 이약은돼지 Sus scrofa Linn var. domesticus 이약은식용동물, 주로돼지의췌장으로부터만든것 Gray ( 멧돼지과 Suidae) 의췌장으로부터만든것으로 으로전분소화력, 단백소화력및지방소화력이있는효전분소화력, 단백소화력및지방소화력이있는효소제로 소제로서 1 g 당 2800 전분당화력단위이상, 단서이약은정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력 백소화력단위이상및 960 지방소화력단위이상을함유단위를함유한다. 보통적당한부형제로희석한다. 한다. 보통적당한부형제로희석한다. 성 상 이약은흰색 ~ 연한노란색의가루로특이성 상 이약은흰색 연한노란색또는연한황갈 한냄새가있다. 색의가루로특이한냄새가있다. 순도시험 1) 변패 이약은불쾌하거나변패한냄새확인시험 정량법에따라시험할때양성반응을나타낸 및맛이없다. 다. 2) 지방 이약 1.0 g에에테르 20 ml를넣어때때순도시험 1) 변패 이약은불쾌하거나변패한냄새와 로흔들어섞어 30 분간추출한다음여과하고에테르 10 ml로씻고여액및씻은액을합하여에테르를증발시켜잔류물을 105 에서 2 시간건조할때그양은 20 mg 이하이다. 맛이없다. 2) 중금속이약 1.0 g을달아제 1 법에따라시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를쓴다 (20 ppm 이하 ). 건조감량 4.0 % 이하 (1 g, 감압, 산화인 (V), 24 시 3) 비소이약 2.0 g을달아제 2 법에따라조작하 간 ). 여시험한다 (1 ppm 이하 ). 강열잔분 5.0 % 이하 (1 g). 4) 지방 이약 1.0 g에에테르 20 ml를넣어때때 미생물한도대장균, 살모넬라는검출되지않는다. 로흔들어섞어 30 분간추출한다음여과하고잔류 정량법 1) 전분소화력시험가 ) 검액이약약 0.1 물을에테르 10 ml로씻고여액및씻은액을합하 g을정밀하게달아적당량의얼음으로식힌물을넣어잘흔들어섞고다시얼음으로식힌물을넣어정확하 여에테르를증발시켜잔류물을 105 에서 2 시간건조할때그양은 20 mg이하이다. 게 100 ml로한다. 이액 10 ml를정확하게취하여건조감량 4.0 % 이하 (1 g, 감압, 산화인 (V), 24 시 얼음으로식힌물을넣어정확하게 100 ml로한다. 간 ). 나 ) 기질용액 전분소화력시험용감자전분시액을쓴강열잔분 5.0 % 이하 (1 g). 다. 다만 ph 5.0의 1 mol/l 아세트산 아세트산나트정량법 1) 전분소화력시험가 ) 검액이약을얼음으 륨완충액 10 ml 대신에판크레아틴용인산염완충액 10 ml를넣는다. 로식힌물을넣어녹여 전분당화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 다 ) 조작법 소화력시험법의전분소화력시험법중 1) 나 ) 기질용액 전분소화력시험용감자전분시액을쓴 전분당화력시험법에따라조작한다. 다. 다만 1 mol/l 아세트산 아세트산나트륨완충액 2) 단백소화력시험 가 ) 검액 이약약 0.1 g을정 (ph 5.0) 10 ml 대신에판크레아틴용인산염완충액 밀하게달아적당량의얼음으로식힌물을넣어잘흔 10 ml를넣는다. 들어섞고얼음으로식힌물을넣어정확하게 200 다 ) 조작법 소화력시험법의전분소화력시험법중 1) ml로한다. 나 ) 기질용액 소화력시험법의단백소화력시험법중 전분당화력시험법에따라조작한다. 2) 단백소화력시험가 ) 검액이약을적당량의얼음

126 현행개정안 기질용액 2를쓴다. 다만 ph는 8.5로조정한다. 다 ) 조작법소화력시험법의단백소화력시험법에따라조작한다. 다만침전시액은트리클로로아세트산시액 B 를쓴다. 3) 지방소화력시험가 ) 검액이약약 0.1 g을정밀하게달아적당량의얼음으로식힌물을넣어잘흔들어섞은다음얼음으로식힌물을넣어정확하게 100 ml로한다. 나 ) 유화액폴리비닐알코올 I 18 g 및폴리비닐알코올 Ⅱ 2 g을달아소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 다 ) 기질용액소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 라 ) 조작법소화력시험법의지방소화력시험법에따라조작한다. 다만완충액은 ph 8.0인산염완충액을쓴다. 저장법기밀용기. 30 이하에보존한다. 으로식힌물을넣어녹여 단백소화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 나 ) 기질용액소화력시험법의단백소화력시험법중기질용액 2를쓴다. 다만 ph는 8.5로조정한다. 다 ) 조작법소화력시험법의단백소화력시험법에따라조작한다. 다만침전시액은트리클로로아세트산용액 B 를쓴다. 3) 지방소화력시험가 ) 검액이약을적당량의얼음으로식힌물을넣어녹여 1 5 지방소화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 나 ) 유화액폴리비닐알코올 I 18 g 및폴리비닐알코올 Ⅱ 2 g을달아소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 다 ) 기질용액소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 라 ) 조작법소화력시험법의지방소화력시험법에따라조작한다. 다만완충액은 ph 8.0 인산염완충액을쓴다. 저장법기밀용기에넣어 30 이하에보존한다. 플루클록사실린나트륨 Flucloxacillin Sodium 플루클록사실린나트륨 Flucloxacillin Sodium ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 4) ( 생략 ) 5) ( 생략 ) 6) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 유연물질 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 4) ( 현행과같음 ) 5) ( 현행과같음 ) 6) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 유연물질 ( 현행과같음 ) 2) 디메틸아닐린이약약 1.0 g을정밀하게달아 1 2) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g을정 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml를넣고, 내 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml와내부표준액 1 ml를넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg을정밀하게달아염산 2.0 ml를넣고물을넣어 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를정확하게취하여물을넣어정확하게 250 ml로한다. 이액 1.0 ml를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액

127 현행개정안 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 3) 헥사노산2-에틸 ( 생략 ) 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 수 분 ( 생략 ) 3) 헥사노산2-에틸 ( 현행과같음 ) 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 발열성물질 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 발열성물질 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 피밤피실린 Pivampicillin 피밤피실린 Pivampicillin ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) 융점 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) 융점 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 )

128 현행개정안 2) 유연물질 ( 생략 ) 3) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 2) 유연물질 ( 현행과같음 ) 3) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로 내부표준액 나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어 헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 4) 2,2',2 -니트릴트리에탄올 ( 생략 ) 녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 수 분 ( 생략 ) 4) 2,2',2 -니트릴트리에탄올 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

129 현행개정안 피브메실리남염산염 Pivmecillinam Hydrochloride 피브메실리남염산염 Pivmecillinam Hydrochloride 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 3) 유연물질 ( 생략 ) 4) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 2) 비소 ( 현행과같음 ) 3) 유연물질 ( 현행과같음 ) 4) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소

130 현행개정안 수분 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분수분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 피페라실린나트륨 Piperacillin Sodium 피페라실린나트륨 Piperacillin Sodium 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) ph ( 생략 ) ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 3) 비소 ( 생략 ) 4) 유연물질 ( 생략 ) 5) 디메틸아닐린이약약 1.0 g 을정밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부표준액 1 ml 를 넣은다음필요하면원심분리하여위의맑은액을검 액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하 게달아염산 2.0 ml 를넣고물을넣어 50 ml 로한 다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하여물을넣어정확 하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취 하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내 부표준액 1.0 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여 위의맑은액을표준액으로한다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프 법에따라시험하여검액과표준액중의내부표준물질 의피크면적에대한디메틸아닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 중금속 ( 현행과같음 ) 3) 비소 ( 현행과같음 ) 4) 유연물질 ( 현행과같음 ) 5) 디메틸아닐린 20 ppm 이하이약약 1.0 g 을정 밀하게달아 1 mol/l 수산화나트륨시액 5 ml 와내부 표준액 1 ml 를넣은다음필요하면원심분리하여위 의맑은액을검액으로한다. 따로디메틸아닐린약 50 mg 을정밀하게달아염산 2.0 ml 를넣고물을 넣어 50 ml 로한다. 이액 5.0 ml 를정확하게취하 여물을넣어정확하게 250 ml 로한다. 이액 1.0 ml 를정확하게취하여 1 mol/l 수산화나트륨시액 5.0 ml 를넣고, 내부표준액 1.0 ml 를넣은다음필 요하면원심분리하여위의맑은액을표준액으로한 다. 검액및표준액각 1 μl 씩을가지고다음조건으 로기체크로마토그래프법에따라시험하여검액과표 준액중의내부표준물질의피크면적에대한디메틸아 닐린의피크면적비 Q T 및 Q S 를구한다 (20 ppm 이 하 ). 디메틸아닐린의함량 (ppm) = 디메틸아닐린의채취량 (mg) T 디메틸아닐린순도 S 4 이약의채취량 mg 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건검출기 : 불꽃이온화검출기 내부표준액나프탈렌 50.0 mg을시클로헥산을넣어녹여 50 ml로한다. 이액 5.0 ml를취하여시클로헥산으로 100 ml로한액을내부표준액으로한다. 조작조건

131 현 행 개정안 칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소유량 : 30 ml/ 분 검출기 : 불꽃이온화검출기칼럼 : 안지름약 2 mm, 길이약 2 m인관에기체크로마토그래프용규조토에질량의 3 % 의기체크로마토그래프용 50 % 페닐 ~ 50 % 메틸폴리실록산을입힌것을충전한다. 칼럼온도 : 120 검체도입부, 검출기온도 : 150 운반기체 : 질소 수 분 ( 생략 ) 유량 : 30 ml/ 분 무균시험 ( 생략 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 무균시험 ( 현행과같음 ) 엔도톡신 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 )

132 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 의약품각조제 1 부신설 ( 안 ) - 의견수렴용 의약품각조중효소제를정비하여다음과같이통합한효소제를신설하고자한다. 이에관한많은의 견을바란다. 디아스타제 프로테아제 셀룰라제 Diastase protease cellulase 이약은 Aspergillus속또는 T richoderma koningi 의유용한균종에서만든것으로전분소화력, 단백소화력및섬유소소화력이있는복합효소제로그밖에지방소화력이있을수있다. 이약은정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력단위를함유한다. 성상이약은연한노란색가루로특이한냄새가난다. 확인시험정량법에따라시험할때양성반응을나타낸다. 순도시험 1) 변패이약은불쾌하거나변패한냄새와맛이없다. 2) 중금속이약 1.0 g을달아제 2 법에따라조작하여시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를넣는다 (20 ppm 이하 ). 3) 비소이약 2.0 g을정밀하게달아제 3 법에따라조작하여시험한다 (1 ppm 이하 ). 건조감량 10.0 % 이하 (1.0 g, 105, 4 시간 ) 강열잔분 10.0 % 이하 (1.0 g) 정량법 1) 전분당화력가 ) 검액이약을 ph 5.0 아세트산 아세트산나트륨완충액을넣어녹여 전분당화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 나 ) 기질용액전분소화력시험용감자전분시액을쓴다. 다 ) 조작법소화력시험법중전분소화력시험법 1) 전분당화력시험법에따라조작한다. 2) 단백소화력가 ) 검액이약을 ph 6.0 아세트산완충액을넣어녹여 단백소화력단위 /ml 가되도록조절하여검액으로한다. 나 ) 기질용액소화력시험법의단백소화력시험법중기질용액 2를쓴다. 다만 ph는 6.0으로조정한다. 다 ) 조작법소화력시험법의단백소화력시험법에따 라조작한다. 다만침전시액은트리클로로아세트산용 액 A 를쓴다. 3) 섬유소당화력이약 0.1 g 을정밀하게달아물 을넣어녹여 100 ml 로하여검액으로한다. 카르 복시메틸셀룰로오스나트륨용액 4 ml 를취하여 37 ± 0.5 에서 10 분간방치하고검액 1 ml 를넣어 흔들어섞고 37 ± 0.5 에서 30 분간반응시킨다. 여기에페링시액의알칼리성구리시액 2 ml 를넣고 흔들어섞고수욕에서 30 분간가열한다음흐르는 물로식힌다. 비소몰리브덴산시액 2 ml 를넣어흔들 어섞은다음다시 0.5 mol/l 수산화나트륨액 3 ml 를넣고흔들어섞어침전을녹이고 20 분간방치한 다음 ph 4.5 아세트산 아세트산나트륨완충액을넣어 25 ml 로한다. 이액 1 ml 를취하여 ph 4.5 아세 트산 아세트산나트륨완충액 9 ml 를넣어잘흔들어 섞은다음자외가시부흡광도측정법에따라시험하여 파장 750 nm 에서흡광도 A T 를측정한다. 따로검액 1 ml 를취하여페링시액의알칼리성구리시액 2 ml 를섞은다음카르복시메틸셀룰로오스나트륨용액 4 ml 를넣고흔들어섞는다. 이하위와같이조작하여 흡광도 A B 를측정한다. A T 및 A B 에대응하는포도 당의양 (mg) G T 및 G B 를포도당표준액검량선에서 구한다. T B 섬유소소화력 ( 단위 /g) W : 검액 1 ml 중검체의양 (g) 역가정의 : 상기조건에서 1 분간에 1 μmole 의 포도당에상당하는환원력증가를가져오는효소의 양을섬유소소화력 1 단위로한다. 포도당검량선 : 포도당표준품을 105 에서 6 시 간건조하여약 50 mg 을정밀하게달아물을넣어 녹여정확하게 50 ml 로한다. 이액 1, 2, 3, 4 및 5 ml 씩을정확하게취하여물을넣어정확하게 10

133 ml로하여검량선용표준액으로한다. 물 1 ml 및검량선용표준액 1 ml씩을취하여카르복시메틸셀룰로오스나트륨용액 4 ml 및페링시액의알칼리성구리시액 2 ml를넣고흔들어섞은다음수욕에서 30 분간가열하고물로식힌다음비소몰리브덴산시액 2 ml를넣고흔들어섞는다. 다시 0.5 mol/l 수산화나트륨액 3 ml를넣어침전물을녹이고 20 분간방치한다음 ph 4.5 아세트산ᆞ아세트산나트륨완충액을넣어 25 ml로한다. 이들액 1 ml를취하여 ph 4.5 아세트산ᆞ아세트산나트륨완충액 9 ml를넣고흔들어섞은다음자외부가시부흡광도측정법에따라시험하여파장 750 nm에서의흡광도 A 0, A 1, A 2, A 3, A 4 및 A 5 를측정한다. 세로축에흡광도 A 1 - A 0, A 2 - A 0, A 3 - A 0, A 4 - A 0, A 5 - A 0 를, 가로축에포도당의양 (mg) 으로하여검량선을작성한다. 저장법기밀용기. 리파제 Lipase 이약은 Rhizopus japonicus 또는 Aspergillus 속의유용한균종에서만든지방소화력이있는효소제이며, 정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력단위을함유한다. 성상이약은흰색 회백색또는연한황갈색의가루로특이한냄새가있다. 확인시험정량법에따라시험할때양성을나타낸다. 순도시험 1) 중금속이약 1.0 g을달아제 2 법에따라시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를쓴다 (20 ppm 이하 ). 2) 비소이약 1.0 g을달아비소시험법제 3 법에따라조작하여시험한다 (1 ppm 이하 ). 건조감량 8.0 % 이하 (1 g, 105, 4 시간 ). 강열잔분 20.0 % 이하 (1 g, 항량 ). 정량법 1) 검액이약을물을넣어녹여넣어녹여 1 5 지방소화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 2) 유화액폴리비닐알코올 ( 평균중합도 1725 ± 25, 함량 95.0 ± 1.0 %) 20 g을달아소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 3) 기질용액소화력시험법의지방소화력시험법에따라만든다. 4) 조작법소화력시험법의지방소화력시험법에따 라조작한다. 다만완충액은 ph 6.0 인산염완충액을쓴다. 저장법기밀용기. 셀룰라제 Cellulase 이약은 Aspergillus 속유용한균종에서만든섬유 소소화력이있는효소제이며, 정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력단위를함유한다. 성상이약은연한노란색 연한황갈색가루로특이한냄새가있다. 확인시험정량법에따라시험할때양성반응을나타낸다. 순도시험 1) 변패이약은불쾌하거나변패한냄새와맛이없다. 2) 중금속이약 1.0 g을달아제 2 법에따라조작하여시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를넣는다 (20 ppm 이하 ). 3) 비소이약 1.0 g을달아제 3 법에따라조작하여시험한다 (1 ppm 이하 ). 건조감량 5.0 % 이하 (1 g, 105, 4 시간 ) 강열잔분 8.0 % 이하 (1 g) 정량법이약약 0.5 g을정밀하게달아물을넣어녹여정확하게 200 ml로한다. 이액 1 ml를취하여물을넣어 100 ml로하여검액으로한다. 카르복시메틸셀룰로오스나트륨용액 4 ml를취하여 37 ± 0.5 에서 10 분간방치하고검액 1 ml를넣어흔들어섞고 37 ± 0.5 에서 30 분간반응시킨다. 여기에페링시액의알칼리성구리시액 2 ml를넣고흔들어섞고수욕에서 30 분간가열한다음흐르는물로식힌다. 비소몰리브덴산시액 2 ml를넣어흔들어섞은다음다시 0.5 mol/l 수산화나트륨액 3 ml 를넣고흔들어섞어침전을녹이고 20 분간방치한다음 ph 4.5 아세트산아세트산나트륨완충액을넣어 25 ml로한다. 이액 1.0 ml를취하여 ph 4.5 아세트산아세트산나트륨완충액 9 ml를넣어잘흔들어섞은다음자외가시부흡광도측정법에따라시험하여파장 750 nm에서흡광도 A T 를측정한다. 따로검액 1 ml를취하여페링시액의알칼리성구리시액 2 ml를섞은다음카르복시메틸셀룰로오스나트륨용액 4 ml를넣고흔들어섞는다. 이하위와같이조작하여흡광도 A B 를측정한다. A T 및 A B 에대응하

134 는포도당의양 (mg) G T 및 G B 를포도당표준액검량 선에서구한다. T B 섬유소당화력 ( 단위 /g) W : 검액 1 ml 중검체의양 (g) 역가정의 : 상기조건에서 1 분간에 1 μmole 의포 도당에상당하는환원력증가를가져오는효소의양 을섬유소당화력 1 단위로한다. 포도당검량선 : 포도당표준품을 105 에서 6 시 간건조하여약 50 mg 을정밀하게달아물을넣어 녹여정확하게 50 ml 로한다. 이액 1, 2, 3, 4 및 5 ml 씩을정확하게취하여물을넣어정확하게 10 ml 로하여검량선용표준액으로한다. 물 1 ml 및 검량선용표준액 1 ml 씩을취하여카르복시메틸셀룰 로오스나트륨용액 4 ml 및페링시액의알칼리성구 리시액 2 ml 를넣고흔들어섞은다음수욕에서 30 분간가열하고물로식힌다음비소몰리브덴산시액 2 ml 를넣고흔들어섞는다. 다시 0.5 mol/l 수산 화나트륨액 3 ml 를넣어침전물을녹이고 20 분간 방치한다음 ph 4.5 아세트산 ᆞ 아세트산나트륨완충 액을넣어 25 ml 로한다. 이들액 1.0 ml 를취하 여 ph 4.5 아세트산 ᆞ 아세트산나트륨완충액 9 ml 를넣고흔들어섞은다음자외부가시부흡광도측정법 에따라시험하여파장 750 nm 에서의흡광도 A 0, A 1, A 2, A 3, A 4 및 A 5 를측정한다. 세로축에흡광도 감소한다. ph 이약 1.0 g에물 100 ml를넣어녹인액의 ph 는 이다. 순도시험 1) 변패이약은불쾌하거나변패한냄새와맛이없다. 2) 중금속이약 1.0 g을달아제 2법에따라시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를넣는다 (20 pp m 이하 ). 3) 비소이약 1.0 g을달아제 3 법에따라조작하여시험한다 (1 ppm 이하 ). 건조감량 5.0 % 이하 (1 g, 105, 2시간 ) 정량법 1) 검액이약을 ph 7.4 인산염완충액을넣어녹여 단백소화력단위 /ml가되도록조절하여검액으로한다. 2) 기질용액소화력시험법의단백소화력시험법중기질용액 2를쓴다. 다만 ph는 7.4로조정한다. 3) 조작법소화력시험법의단백소화력시험법에따라조작한다. 다만침전시액은트리클로로아세트산용액 B를쓴다. 저장법기밀용기. A 1 - A 0, A 2 - A 0, A 3 - A 0, A 4 - A 0, A 5 - A 0 를, 가로축에포도당의양 (mg) 으로하여검량선을 작성한다. 저장법기밀용기. 프로테아제 Protease 이약은 Bacillus 속, Aspegillus 속또는 Streptomy ces 속의유용한균종에서만든단백소화력이있는효소제이며, 정량할때표시량의 90.0 % 이상의소화력단위를함유한다. 성상이약은흰색 연한노란색또는연한갈색가루로특이한냄새가있다. 확인시험이약약 10 mg을달아미리 40 로가온한젤라틴용액 (2 10) 10 ml에넣어흔들어섞은다음 5 분간 40 에작용시킬때액의점도가

135 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 의약품각조제 1 부삭제 ( 안 ) - 의견수렴용 의약품각조중효소제의정비 ᆞ 통합에따라다음과같이 15 개의효소제를삭제하고자한다. 많은의 견을바란다. 현행개정안 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000I Diastase protease cellulase 2000 I ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 정량법 1) 전분당화력 ( 생략 ) 2) 전분호정화력 ( 생략 ) 3) 단백소화력 (ph 3.0) ( 생략 ) 4) 단백소화력 (ph 6.0) ( 생략 ) 5) 단백소화력 (ph 8.0) ( 생략 ) 6) 섬유소당화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000III Diastase protease cellulase 2000 III ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법 1) 전분소화력 ( 생략 ) 2) 전분당화력 ( 생략 ) 3) 전분호정화력 ( 생략 ) 4) 단백소화력 (ph 3.0, ph 6.0, ph 8.0) ( 생략 ) 5) 섬유소소화력 ( 생략 ) 6) 지방소화력 ( 생략 ) < 삭제 >

136 현행개정안 저장법 ( 생략 ) 디아스타제 프로테아제 셀룰라제2000IV Diastase protease cellulase 2000 IV ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 1) 전분당화력 (ph 4.5) ( 생략 ) 2) 전분호정화력 (ph 4.5) ( 생략 ) 3) 단백소화력 (ph 3.0) ( 생략 ) 4) 섬유소당화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 디아스타제 프로테아제 셀룰라제700G Diastase protease cellulase 700 G ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) 전분소화력 ( 생략 ) 2) 단백소화력 ( 생략 ) 3) 섬유소소화력 ( 생략 ) 4) 지방소화력 ( 생략 ) 입도시험 ( 생략 ) 정량법 1) 전분호정화력 ( 생략 ) 2) 단백소화력 ( 생략 ) 3) 섬유소당화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 리파제Ⅰ Lipase Ⅰ ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 비소 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) < 삭제 >

137 현행개정안 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 리파제Ⅱ Lipase Ⅱ ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 비오타밀라제1500 Biotamylase 1500 ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 비소 ( 생략 ) 2) 중금속 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법단백소화력 (ph 7.5) ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 셀룰라제AP 3 II Cellulase AP 3 II ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 정량법섬유소소화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 )

138 현행개정안 셀룰라제AP 3 III Cellulase AP 3 III ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법섬유소소화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 판셀라제 Pancellase ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 정량법 1) 섬유소붕해력 ( 생략 ) 2) 섬유소당화력 ( 생략 ) 3) 전분당화력 ( 생략 ) 4) 단백소화력 (ph 2.6) ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 판크레아틴I Pancreatin I ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 순도시험 ( 생략 ) 정량법 1) 전분소화력 ( 생략 ) 2) 지방소화력 ( 생략 ) 3) 단백소화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 )

139 현행개정안 판프로신 Panprosin ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) 2) 비소 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 프로나제A Pronase A ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법단백소화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 프로나제B Pronase B ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 단백소화력 ( 생략 ) < 삭제 > 저장법 ( 생략 ) 헤미셀룰라제 < 삭제 >

140 현행개정안 Hemicellulase ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 )

141 공정서개정안 Drafts for Revision 대한민국약전포럼 제 권 호 대한민국약전 의약품각조제 2 부개정 ( 안 ) - 의견수렴용 일반시험법에이산화황시험법을신설함에따라의약품각조중순도시험에서이산화황을시험하는 5 개품목에대해여다음과같이기준값을제외한시험방법을생략하도록개정 ( 안 ) 을제안하였다. 단, 대한민국약전제2부생약및생약제제에해당하는의약품각조에이산화황을시험하는경우는고려되지않았으므로추후반영여부를검토할예정이다. 또한, 첨가제중메틸셀룰로오스외 15개의약품각조에대하여개정 ( 안 ) 을작성하였다. 이중카르복시메틸셀룰로오스는카르멜로오스로, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨은카르멜로오스나트륨으로, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨정은카르멜로오스나트륨정으로, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘은카르멜로오스칼슘으로각조명을면경할예정이다. 첨가제개정 ( 안 ) 에관한많은의견을바란다. 현행개정안 감자전분 Potato Starch 감자전분 Potato Starch ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 철 ( 생략 ) 2) 산화성물질 ( 생략 ) 3) 이산화황장치다음그림과같은장치를쓴다. ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 철 ( 현행과같음 ) 2) 산화성물질 ( 현행과같음 ) 3) 이산화황 50 ppm 이하다음그림과같은장치를쓴다. A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크

142 현행개정안 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 밀전분 Wheat Starch 밀전분 Wheat Starch 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) ( 생략 ) 성상 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 )

143 현행개정안 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 철 ( 생략 ) 2) 산화성물질 ( 생략 ) 3) 이산화황장치다음그림과같은장치를쓴다. 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 철 ( 현행과같음 ) 2) 산화성물질 ( 현행과같음 ) 3) 이산화황 50 ppm 이하다음그림과같은장치를쓴다. A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으

144 현행개정안 로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이 하이다. 로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이 하이다. 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 4) 총단백질 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 4) 총단백질 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 백당 Sucrose 백당 Sucrose ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 염화물 ( 생략 ) 3) 황산염 ( 생략 ) 4) 이산화황장치다음그림과같은장치를쓴다. ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 염화물 ( 현행과같음 ) 3) 황산염 ( 현행과같음 ) 4) 이산화황 20 ppm 이하다음그림과같은장치를쓴다. A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 조작법물 150 ml 를가열플라스크에넣고분액깔때 조작법물 150 ml 를가열플라스크에넣고분액깔때

145 현행개정안 기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 20 ppm 이하이다. 기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 20 ppm 이하이다. 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 5) 칼슘 ( 생략 ) 6) 중금속 ( 생략 ) 7) 납 ( 생략 ) 7) 비소 ( 생략 ) 9) 전화당 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 5) 칼슘 ( 현행과같음 ) 6) 중금속 ( 현행과같음 ) 7) 납 ( 현행과같음 ) 7) 비소 ( 현행과같음 ) 9) 전화당 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 쌀전분 Rice Starch 쌀전분 Rice Starch ( 생략 ) ( 현행과같음 )

146 현행개정안 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 비선광도 ( 생략 ) 순도시험 1) 철 ( 생략 ) 2) 산화성물질 ( 생략 ) 3) 이산화황장치다음그림과같은장치를쓴다. 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 철 ( 현행과같음 ) 2) 산화성물질 ( 현행과같음 ) 3) 이산화황 50 ppm 이하다음그림과같은장치를쓴다. A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도

147 현행개정안 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 건조감량 ( 생략 ) 회분 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 회분 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 옥수수전분 Corn Starch 옥수수전분 Corn Starch ( 생략 ) 성상 ( 생략 ) 확인시험 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) ph ( 생략 ) 순도시험 1) 철 ( 생략 ) 2) 산화성물질 ( 생략 ) 3) 이산화황장치다음그림과같은장치를쓴다. ( 현행과같음 ) 성상 ( 현행과같음 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 철 ( 현행과같음 ) 2) 산화성물질 ( 현행과같음 ) 3) 이산화황 50 ppm 이하다음그림과같은장치를쓴다. A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크 A: 가열플라스크 B: 분액깔때기 C: 냉각기 D: 시험관 E: 코크

148 현행개정안 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 조작법물 150 ml를가열플라스크에넣고분액깔때기의코크를닫고이산화탄소를분당 100 ± 5 ml 의유량으로장치에흘린다. 냉각기의냉각액을흘리고과산화수소수산화나트륨시액 ( 물과과산화수소 9 : 1로혼합되어있는액 ( 과산화수소시액 ) 에 3 방울의브로모페놀블루시액을넣고자청색으로변색이될때까지 0.01 mol/l 수산화나트륨시액을넣는다. 쓸때만든다.) 10 ml를수기인시험관에넣는다. 15 분후이산화탄소를계속흘려주면서분액깔때기를가열플라스크로부터떼어내고이약 25 g을정밀하게달아물 100 ml를써서가열플라스크에옮겨넣는다. 분액깔때기의연결부바깥면에코크용그리스를바르고분액깔때기를가열플라스크의원래의자리에장착한다. 분액깔때기의코크를닫고 2 mol/l 염산시액 80 ml를분액깔때기에넣은다음코크를열어가열플라스크에흘려넣고이산화황이분액깔때기로날아가지않도록마지막몇 ml가남아있을때코크를닫는다. 혼합액을 1 시간가열한다. 수기인시험관을떼어내어그내용물을입구가넓은플라스크에옮긴다. 시험관을소량의물로씻고씻은액은플라스크에넣는다. 수욕에서 10 분간가열한다음식힌다. 브로모페놀블루시액 0.1 ml를넣고노란색이자청색으로변색되어적어도 20 초간지속할때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액으로적정한다. 같은방법으로공시험을하여보정한다. 다음식에따라이산화황의양을구할때 50 ppm 이하이다. 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 이산화황의양 (ppm) mol L 수산화나트륨의소비량 ml = 검체취한양 g 4) 이물 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 4) 이물 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 메틸셀룰로오스 Methylcellulose 메틸셀룰로오스 Methylcellulose ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 이약은흰색 ~ 노란색을띤흰색의가루또는성 상이약은흰색 ~ 노란색을띤흰색의가루또는 알갱이이다. 알갱이이다.

149 현 행 개정안 이약은무수에탄올에거의녹지않는다. 이약에물을넣을때팽윤하고맑거나약간혼탁한점조성이있는액으로된다. 이약은에탄올 (99.5) 에거의녹지않는다. 이약에물을넣을때팽윤하고맑거나약간혼탁한점조성이있는액으로된다. 확인시험 1) ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 4) ( 생략 ) 5) ( 생략 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 4) ( 현행과같음 ) 5) ( 현행과같음 ) 점 도 제 1 법 ( 생략 ) 점 도제 1 법 ( 현행과같음 ) 제 2 법 ( 생략 ) ph ( 생략 ) 제 2 법 ( 현행과같음 ) ph ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 염화물이약 0.5 g을비커에넣고끓는물순도시험 1) < 삭제 > 30 ml를가하여잘저어섞고뜨거울때보온깔때기로 여과한다음비커및여과지상의잔류물을끓는물 15 ml씩으로 3 회씻고씻은액을여액에합쳐물을가하 여 100 ml로하여이를 A액으로한다. A액 5 ml에 묽은질산 6 ml를가하여이를검액으로하여염화물시 험법에따라시험할때, 그양은 0.01 mol/l 염산 0.4 ml에대응하는양이하이어야한다. 2) 황산염염화물시험에서만든 A액 40 ml에묽은염 산 1 ml를가하여이를검액으로하여황산염시험법에 < 삭제 > 따라시험할때, 그양은 0.01 mol/l 황산 0.4 ml에 대응하는양이하이어야한다. 3) 중금속 ( 생략 ) 4) 수은첨가제 (a) 약 1 g을도자기제보트에고르게 펴고, 그위에이약 10 ~ 300 mg을취한다. 다시그위에첨가제 (a) 약 0.5 g 및첨가제 (b) 1 g을차례로 1) 중금속 ( 현행과같음 ) < 삭제 > 고르게펴층을이루게한다. 다만, 연소부에별도의촉 매제가장착된자동수은분석기의경우에는니켈제보트 에첨가제를가해주지않고검체만을취한다. 보트를연 소로안에넣고공기또는산소를 0.5~1 L/ 분으로흘려 주면서, 약 900 로가열하여수은을유출하고포집관 에포집한다. 포집관을약 700 로가열하여, 수은증 기를냉원자흡광분석장치에보내고흡광도를측정하여 A로한다. 따로, 도자기제보트에첨가제만으로동일하 게흡광도를측정하여 Ab로한다. 따로수은표준용액을 이용하여동일하게조작하여얻어진흡광도로부터검량 선을작성하고, A - Ab 값을검량선에대입하여검체 중수은량을산출한다 (1.0 ppm 이하 ). 조작조건 장치 : 시료의연소에서금아말감에의한포집, 냉원 자흡광광도법에의한측정까지자동화된수은측정장치 를사용한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된 수은측정장치를사용할수있다. 수은표준원액 : 염화수은 (Ⅱ) g을 %

150 현행개정안 L-시스테인용액에녹여 1000 ml로한다. 이액 1 m L는염화수은 (Ⅱ) 100 μg을함유한다. 수은표준용액 : 수은표준원액을 % L-시스테인용액으로희석하여 0 ~ 200 ng/ml로한다. 첨가제 : (a) 산화알루미늄및 (b) 수산화칼슘 탄산나트륨 (1 : 1) 을사용할때 950 에서 30 분간활성화시킨다. 5) 카드뮴이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로카드뮴표준액 5 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (1.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 카드뮴중공음극램프파장 : nm 6) 납이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로납표준액 1.0 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을 < 삭제 > < 삭제 >

151 현 행 개정안 가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때 검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (2.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기 램프 : 납중공음극램프 파장 : nm 7) 비소이약 0.5 g을달아제 3 법에따라조작하여 < 삭제 > 시험한다 (4 ppm 이하 ). 건조감량 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 무수유당 Anhydrous Lactose 무수유당 Anhydrous Lactose CH 2 OH H O OH H OH H HO CH 2 OH O O H H OH H H OH H H H OH α- 유당 : R 1 = H, R 2 = OH β- 유당 : R 1 = OH, R 2 = H α- 유당 : R 1 = H, R 2 = OH β- 유당 : R 1 = OH, R 2 = H C 12 H 22 O 11 : C 12 H 22 O 11 : (2R,3R,4S,5R,6S)-2-(Hydroxymethyl)-6-{[(2R,3S,4R,5R) β-d-galactopyranosyl-(1 4)-β-D-glucopyran -4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy}oxan ose (β-lactose) e-3,4,5-triol [ , 무수유당 ] β-d-galactopyranosyl-(1 4)-α-D-glucopyran ose (β-lactose) [ , 무수유당 ] ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 이약은흰색의결정또는가루이다. 성 상이약은흰색의결정또는가루이다. 이약은물에잘녹으며무수에탄올에는거의녹지않는다. 이약은물에잘녹으며에탄올 (99.5) 에는거의녹지않는다. 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 생략 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을열탕 10 ml에녹순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을열탕 10 ml에녹 일때액은무색또는거의무색이며맑다. 이액을가지고물을대조로하여자외가시부흡광도측정법에따라시험할때파장 400 nm에서의흡광도는 0.04 이하이 일때액은무색또는거의무색이며맑고, 비교액과비교할때진하지않다. 이액을가지고물을대조로하여자외가시부흡광도측정법에따라시험할때파장

152 현행개정안 다. 2) 산또는알칼리 ( 생략 ) 3) 중금속 ( 생략 ) 4) 단백질및광흡수물질 ( 생략 ) 이성질체비 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 수분 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 400 nm에서의흡광도는 0.04 이하이다. 비교액 : 염화철 (III) 육수화물의색의비교원액 6.0 ml, 염화코발트 (II) 육수화물의색의비교원액 2,5 ml, 황산구리 (II) 오수화물의색의비교원액 1.0 ml를각각취하여묽은염산 (1 10) 을넣어정확하게 1 L 로한다. 2) 산또는알칼리 ( 현행과같음 ) 3) 중금속 ( 현행과같음 ) 4) 단백질및광흡수물질 ( 현행과같음 ) 이성질체비 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 수분 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 무수인산수소칼슘 Anhydrous Dibasic Calcium Phosphate 무수인산수소칼슘 Anhydrous Dibasic Calcium Phosphate ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 이약은흰색의결정성가루또는알갱이이다. 성 상 이약은흰색의결정성가루또는알갱이이다. 이약은물또는에탄올에거의녹지않는다. 이약은묽은염산또는묽은질산에녹는다. 이약은물또는에탄올 (99.5) 에거의녹지않는다. 이약은묽은염산또는묽은질산에녹는다. 확인시험 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 순도시험 1) 산불용물및염화물 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 산불용물및염화물 ( 생략 ) 2) 황산염이약 0.5 g에물 5 ml 및묽은염산 5 ml를 2) 황산염이약 0.80 g을달아 인산수소칼슘수화물 의순도시험 3) 에따라시험한다 (0.200 % 이하 ). 넣어가온하여녹이고물을넣어 100 ml로하여필요하면여과한다. 여액 20 ml에묽은염산 1 ml 및물을 넣어 50 ml로한다. 이액을검액으로하여시험한다. 비교액에는 mol/l 황산 1.0 ml를넣는다. 검액 및비교액에염화바륨시액 2 ml를넣고흔들어섞는 다. 10 분간방치한다음혼탁을비교한다. 검액이나타 내는혼탁은비교액이나타내는혼탁보다진하지않다 (0.48 % 이하 ). 3) 탄산염, 중금속, 바륨, 수은, 카드뮴, 납, 비소및플루오르화물 ( 생략 ) 강열감량 ( 생략 ) 3) 탄산염, 중금속, 바륨, 수은, 카드뮴, 납, 비소및플루오르화물 ( 현행과같음 ) 강열감량 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 )

153 현 행 개정안 미결정셀룰로오스 Microcrystalline Cellulose 미결정셀룰로오스 Microcrystalline Cellulose ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성상이약은흰색의결정성가루로유동성이있다. 성상이약은흰색의결정성가루로유동성이있다. 이약은물, 에탄올또는에테르에거의녹지않는다. 이약은물, 에탄올 (99.5) 또는에테르에거의녹지않이약은수산화나트륨시액을넣어가열할때팽윤한다. 는다. 확인시험 1) ( 생략 ) 이약은수산화나트륨시액을넣어가열할때팽윤한다. 2) ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 3) ( 생략 ) 2) ( 현행과같음 ) ph ( 생략 ) 3) ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) ph ( 현행과같음 ) 2) 수은첨가제 (a) 약 1 g을도자기제보트에고르게순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 펴고, 그위에이약 10 ~ 300 mg을취한다. 액체시료 < 삭제 > 의경우에는 0.1 ~ 0.5 ml를첨가제 (a) 에완전히스며들도록한다. 다시그위에첨가제 (a) 약 0.5 g 및첨가제 (b) 1 g을차례로고르게펴층을이루게한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된자동수은분석기의경우에는니켈제보트에첨가제를가해주지않고검체만을취한다. 보트를연소로안에넣고공기또는산소를 0.5 ~ 1 L/ 분으로흘려주면서, 약 900 로가열하여수은을유출하고포집관에포집한다. 포집관을약 700 로가열하여, 수은증기를냉원자흡광분석장치에보내고흡광도를측정하여 A로한다. 따로, 도자기제보트에첨가제만으로동일하게흡광도를측정하여 Ab로한다. 따로수은표준용액을이용하여동일하게조작하여얻어진흡광도로부터검량선을작성하고, A - Ab 값을검량선에대입하여검체중수은량을산출한다 (1.0 ppm 이하 ). 조작조건장치 : 시료의연소에서금아말감에의한포집, 냉원자흡광광도법에의한측정까지자동화된수은측정장치를사용한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된수은측정장치를사용할수있다. 수은표준원액 : 염화수은 (Ⅱ) g을 % L-시스테인용액에녹여 1000 ml로한다. 이액 1 m L는염화수은 (Ⅱ) 100 μg을함유한다. 수은표준용액 : 수은표준원액을 % L-시스테인용액으로희석하여 0 ~ 200 ng/ml로한다. 첨가제 : (a) 산화알루미늄및 (b) 수산화칼슘 탄산나트륨 (1 : 1) 을사용할때 950 에서 30 분간활성화시킨다. 3) 카드뮴이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에 < 삭제 > 취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회

154 현행개정안화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로카드뮴표준액 5 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (1.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 카드뮴중공음극램프파장 : nm 4) 납 3) 의검액을사용한다. 따로납표준액 1.0 ml를 < 삭제 > 백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (2.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 납중공음극램프파장 : nm 5) 비소이약 0.5 g을달아제 3 법에따라조작하여 < 삭제 > 시험한다 (4 ppm 이하 ). 6) 물가용물 ( 생략 ) 2) 물가용물 ( 현행과같음 ) 7) 에테르가용물 ( 생략 ) 3) 에테르가용물 ( 현행과같음 ) 8) 전분이약 30 g을취하여물 270 ml를가하여 < 삭제 > 약 3,000 rpm에서 5 분간혼합하여이액 30 ml에요오드시액 2 방울을가할때, 청자 ~ 파란색을나타내지않는다. 전기전도율가 ) 염화칼륨표준액염화칼륨을가루로하전도율 ph 항에서얻은위의맑은액을검액으로하여여 500 ~ 600 에서 4 시간건조하여 g을정 25 ± 0.1 에서전도율을구한다. 같은방법으로검밀하게달아 20 ± 0.1 에서물에녹여정확하게액의조제에쓴물의전도율을구하여전도율을비교 1000 ml로한다. 이액 100 ml를정확하게취하여할때그차이는 75 μs cm -1 이하이다. 20 ± 0.1 의물을넣어정확하게 1000 ml로한다. 이염화칼륨표준액의 25 에서측정한전기전도율 χ KCl 은 μs cm -1 이다. 나 ) 장치전기전도율계를쓴다. 전기전도율계는보통검출부및지시부로이루어져있다. 검출부는전극을넣은셀로되어있다. 셀은온도보상회로가있는것을쓰

155 현행개정안는것이좋다. 셀정수가 0.01 ~ 0.1 cm -1 인셀을쓴다. 다 ) 조작법셀을물로잘씻고염화칼륨표준액으로 2 ~ 3 회씻은다음염화칼륨표준액을셀에가득채운다. 염화칼륨표준액을 25 ± 0.1 로유지하여전기전도도를측정한다. 염화칼륨표준액을바꾸어넣은다음같은방법으로조작하여반복시험하여측정치가 ± 3 % 이내에서일치할때의전기전도도 (μs) 를구한다. 측정된값으로다음식에의하여셀정수 J를구한다. J = x + x KCl H 2 O G x 0 J : 셀정수 (cm -1 ) KCl : 염화칼륨표준액의전기전도율 (μs cm -1 ) (25 ) H O : 염화칼륨표준액의조제에쓴물의전기전도율 (μs cm -1 ) (25 ) : 측정한전기전도도 (μs) ph 항에서얻은위의맑은액을검액으로한다. 셀을물로잘씻고검액으로 2 ~ 3 회씻은다음검액으로가득채워검액을 25 ± 0.1 로유지하고전기전도도 G T (μs) 를측정한다. 같은방법으로검액의조제에쓴물의전기전도도 G (μs) 를측정하여다음식에따라각각의전기전도율 T (μs cm -1 ) 및 (μ S cm -1 ) 를구할때 T - 는 75 μs cm -1 이하이다. T (μs cm -1 ) = J G T (μs cm -1 ) = J G 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 부피밀도 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 겉보기밀도 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 벤질알코올 Benzyl Alcohol 벤질알코올 Benzyl Alcohol ( 생략 ) ( 현행과같음 )

156 현행개정안 성상이약은무색의맑은유상의액이다. 이약은에탄올, 지방유또는정유와섞인다. 이약은물에녹는다. 비중 : ~ 확인시험 ( 생략 ) 굴절률 ( 생략 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 생략 ) 2) 산이약 10 ml 에중화에탄올 10 ml 및페놀프탈 레인시액 2 방울을넣는다. 이것에 0.1 mol/l 수산화나 트륨액 1.0 ml 를넣을때액의색은빨간색이다. 3) 벤즈알데히드및기타유연물질 ( 생략 ) 4) 과산화물가 ( 생략 ) 5) 증발잔류물 ( 생략 ) 정량법 ( 생략 ) 성상이약은무색의맑은유상의액이다. 이약은에탄올 (95), 지방유또는정유와섞인다. 이약은물에녹는다. 비중 : ~ 확인시험 ( 현행과같음 ) 굴절률 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태 ( 현행과같음 ) 2) 산이약 10 ml 에에탄올 (95) 10 ml 및페놀프 탈레인시액 2 방울을넣는다. 이것에 0.1 mol/l 수산화 나트륨액 1.0 ml 를넣을때액의색은빨간색이다. 3) 벤즈알데히드및기타유연물질 ( 현행과같음 ) 4) 과산화물가 ( 현행과같음 ) 5) 증발잔류물 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 분말셀룰로오스 Powdered Cellulose 분말셀룰로오스 Powdered Cellulose ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 이약은흰색의가루이다. 성 상 이약은흰색의가루이다. 이약은물, 에탄올또는에테르에거의녹지않는다. 이약은물, 에탄올 (95) 또는에테르에거의녹지않는 확인시험 1) ( 생략 ) 다. 2) ( 생략 ) 확인시험 1) ( 현행과같음 ) 3) ( 생략 ) ph ( 생략 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 중금속 ( 생략 ) ph ( 현행과같음 ) 2) 수은첨가제 (a) 약 1 g을도자기제보트에고르게순도시험 1) 중금속 ( 현행과같음 ) 펴고, 그위에이약 10 ~ 300 mg을취한다. 다시그 < 삭제 > 위에첨가제 (a) 약 0.5 g 및첨가제 (b) 1 g을차례로 고르게펴층을이루게한다. 다만, 연소부에별도의촉 매제가부장착된자동수은분석기의경우에는니켈제보 트에첨가제를가해주지않고검체만을취한다. 보트를 연소로안에넣고공기또는산소를 0.5~1 L/ 분으로흘 려주면서, 약 900 로가열하여수은을유출하고포집 관에포집한다. 포집관을약 700 로가열하여, 수은 증기를냉원자흡광분석장치에보내고흡광도를측정하 여 A로한다. 따로, 도자기제보트에첨가제만으로동일 하게흡광도를측정하여 Ab로한다. 따로수은표준용액 을이용하여동일하게조작하여얻어진흡광도로부터 검량선을작성하고, A - Ab 값을검량선에대입하여

157 현행개정안 검체중수은량을산출한다 (1.0 ppm 이하 ). 조작조건장치 : 시료의연소에서금아말감에의한포집, 냉원자흡광광도법에의한측정까지자동화된수은측정장치를사용한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된수은측정장치를사용할수있다. 수은표준원액 : 염화수은 (Ⅱ) g을 % L-시스테인용액에녹여 1000 ml로한다. 이액 1 m L는염화수은 (Ⅱ) 100 μg을함유한다. 수은표준용액 : 수은표준원액을 % L-시스테인용액으로희석하여 0 ~ 200 ng/ml로한다. 첨가제 : (a) 산화알루미늄및 (b) 수산화칼슘 탄산나트륨 (1 : 1) 을사용할때 950 에서 30 분간활성화시킨다. 3) 카드뮴이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로카드뮴표준액 5 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (1.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 카드뮴중공음극램프파장 : nm 4) 납 3) 의검액을사용한다. 따로납표준액 1.0 ml 를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (2.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 납중공음극램프파장 : nm < 삭제 > < 삭제 >

158 현 행 개정안 5) 비소이약 1.0 g을달아제 3 법에따라조작하여 < 삭제 > 시험한다 (2 ppm 이하 ). 6) 물가용물 ( 생략 ) 7) 에테르가용물 ( 생략 ) 8) 염화물이약약 5 g을정밀히달아 500 ml 삼각 2) 물가용물 ( 현행과같음 ) 3) 에테르가용물 ( 현행과같음 ) < 삭제 > 플라스크에취하고물 250 ml를넣어 1 시간역류시 키고여과한다. 여과물에물 200 ml를넣은다음 30 분간역류시키고여과한다. 이여액을앞의여액및잔 류물을더운물로씻어준여액에합해준다. 여기에질산 1 ml를넣고가열하여끓이고 5 % 질산은용액 5 ml 를천천히넣어서침전이응고된후유리여과기로여과 한다. 이를질산은이검출되지않을때까지질산 (1 100) 으로세척하고물로씻은다음 130 에서건조하 여무게를단다. 침전물의정확한값을구하기위하여 따로공시험을하여보정한다. 침전물 1 mg을 mg Cl로환산할때, 그양은 0.05 % 이하이어야한다. 건조감량 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 생략 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 유당수화물 Lactose Hydrate 유당수화물 Lactose Hydrate HO H CH 2 OH H OH H O H H OH O HO H OH H CH 2 OH OH OH H O H H 2 O 유당 C 12 H 22 O 11 H 2 O : (2R,3R,4S,5R,6S)-2-(Hydroxymethyl)-6-{[(2R,3S,4 유당 C 12 H 22 O 11 H 2 O : R,5R)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3- β-d-galactopyranosyl-(1 4)-α-D-glucopyranose yl]oxy}oxane-3,4,5-triol monohydrate [ , [ , α 및 β-유당일수화물의혼합물 ] α 및 β-유당일수화물의혼합물 ] ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 이약은흰색의결정, 가루또는알갱이로만성 상 이약은흰색의결정, 가루또는알갱이로만 든가루로냄새는없다. 이약은물에잘녹으며무수에탄올에는거의녹지않는다. 든가루로냄새는없다. 이약은물에잘녹으며에탄올 (99.5) 에는거의녹지않는다. 확인시험 ( 생략 )

159 현행개정안 비선광도 ( 생략 ) 순도시험 ( 생략 ) 미생물한도 ( 생략 ) 건조감량 ( 생략 ) 강열잔분 ( 생략 ) 수 분 ( 생략 ) 저장법 ( 생략 ) 인산수소칼슘수화물 Dibasic Calcium Phosphate Hydrate 확인시험 ( 현행과같음 ) 비선광도 ( 현행과같음 ) 순도시험 ( 현행과같음 ) 미생물한도 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 수 분 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 인산수소칼슘수화물 Dibasic Calcium Phosphate Hydrate ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상이약은흰색의결정성가루이다. 성 상이약은흰색의결정성가루이다. 이약은물또는에탄올에거의녹지않는다. 이약은묽은염산또는묽은질산에녹는다. 이약은물또는에탄올 (99.5) 에거의녹지않는다. 이약은묽은염산또는묽은질산에녹는다. 확인시험 1) 이약 0.l g에 2 mol/l 염산시액 10 ml를넣 확인시험 1) 이약 0.l g에희석시킨염산 (1 6) 1.0 ml 어가온하여녹이고암모니아시액 2.5 ml를흔들어섞 를넣어가온하여녹이고암모니아시액 2.5 ml를흔들어섞으면서 1 방울씩넣고옥살산암모늄시액 5 ml를넣을때흰색침전이생긴다. 으면서 1 방울씩넣고옥살산암모늄시액 5 ml를넣을때흰색침전이생긴다. 2) ( 현행과같음 ) 2) ( 생략 ) 순도시험 1) 산불용물이약 5.0 g에물 40 ml 및염 순도시험 1) 산불용물이약 5.0 g에물 40 ml 및염 산 10 ml를넣어 5 분간끓이고식힌다음불용물을 산 10 ml를넣어 5 분간끓이고식힌다음불용물을정량용여과지를써서여과하여취하고씻은액에질산은시액을넣어도혼탁하지않을때까지물로씻고잔류물을여과지와함께강열하여회화할때그양은 2.5 mg 이하이다 (0.05 % 이하 ). 2) 염화물이약 0.20 g에물 20 ml 및묽은질산 13 ml를넣어녹이고물을넣어 100 ml로하고필요하면여과한다. 이액 50 ml를검액으로하여시험한다. 비교액에는 0.01 mol/l 염산 0.70 ml를넣는다 (0.248 % 이하 ). 3) 황산염이약 1.0 g에물 5 ml 및묽은염산 5 ml를넣어가온하여녹이고물을넣어 100 ml로하여필요하면여과한다. 여액 30 ml에묽은염산 1 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이액을검액으로하여시험한다. 비교액에는 mol/l 황산 1.0 ml를넣는다 (0.160 % 이하 ). 정량용여과지를써서여과하여취하고씻은액에질산은시액을넣어도혼탁하지않을때까지물로씻고잔류물을여과지와함께 600 ± 50 에서강열하여회화할때그양은 10 mg 이하이다 (0.2 % 이하 ). 2) 염화물이약 0.20 g에물 20 ml 및묽은질산 13 ml를넣어녹이고물을넣어 100 ml로하고필요하면여과한다. 이액 50 ml를검액으로하여시험한다. 비교액에는 0.01 mol/l 염산 0.70 ml를넣는다 (0.25 % 이하 ). 3) 황산염이약 0.5 g에물 5 ml 및묽은염산 5 ml를넣어가온하여녹이고물을넣어 100 ml로하여필요하면여과한다. 여액 20 ml에묽은염산 1 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이액을검액으로하여시험한다. 비교액에는 mol/l 황산 1.0 ml를넣는다. 검액및비교액에염화바륨시액 2 ml를넣고흔들어섞는다. 10 분간방치한다음혼탁을비교한다. 검액이나타 내는혼탁은비교액이나타내는혼탁보다진하지않다 (0.48 % 이하 ). 4) 탄산염 ( 생략 ) 4) 탄산염 ( 현행과같음 )

160 현행개정안 5) 중금속 ( 생략 ) 6) 바륨 ( 생략 ) 7) 수은첨가제 (a) 약 1 g을도자기제보트에고르게펴고, 그위에이약 10 ~ 300 mg을취한다. 다시그위에첨가제 (a) 약 0.5 g 및첨가제 (b) 1 g을차례로고르게펴층을이루게한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된자동수은분석기의경우에는니켈제보트에첨가제를가해주지않고검체만을취한다. 보트를연소로안에넣고공기또는산소를 0.5 ~ 1 L/ 분으로흘려주면서, 약 900 로가열하여수은을유출하고포집관에포집한다. 포집관을약 700 로가열하여, 수은증기를냉원자흡광분석장치에보내고흡광도를측정하여 A로한다. 따로, 도자기제보트에첨가제만으로동일하게흡광도를측정하여 Ab로한다. 따로수은표준용액을이용하여동일하게조작하여얻어진흡광도로부터검량선을작성하고, A - Ab 값을검량선에대입하여검체중수은량을산출한다 (1.0 ppm 이하 ). 조작조건장치 : 시료의연소에서금아말감에의한포집, 냉원자흡광광도법에의한측정까지자동화된수은측정장치를사용한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된수은측정장치를사용할수있다. 수은표준원액 : 염화수은 (Ⅱ) g을 % L-시스테인용액에녹여 1000 ml로한다. 이액 1 ml 는염화수은 (Ⅱ) 100 μg을함유한다. 수은표준용액 : 수은표준원액을 % L-시스테인용액으로희석하여 0 ~ 200 ng/ml로한다. 첨가제 : (a) 산화알루미늄및 (b) 수산화칼슘 탄산나트륨 (1 : 1) 을사용할때 950 에서 30 분간활성화시킨다. 8) 카드뮴순도시험 9) 의검액을검액으로하고, 따로카드뮴표준액 5.0 ml를검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음의조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (1.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 카드뮴중공음극램프파장 : nm 9) 납이약 5.0 g을정밀히달아 150 ml 비커에넣고물 30 ml를가하고염산을소량씩검체가충분히녹을때까지가해준다음다시염산 1 ml를추가한다. 이를약 5 분동안끓이고식힌다음물을가하여약 100 ml가되도록하고수산화나트륨용액 (1 4) 또는염산 (1 4) 을사용하여 ph 2 ~ 4로조정한다. 5) 중금속 ( 현행과같음 ) 6) 바륨 ( 현행과같음 ) < 삭제 > < 삭제 > < 삭제 >

161 현행개정안이액을 250 ml 분액깔때기에옮긴후물을가하여약 200 ml로한다음 2 % 피롤리딘디티오카바민산암모늄 (ammonium pyrolidine dithiocarbamate) 용액 (2 100) 2 ml를가하여흔들어섞어준다. 이에클로로포름 20 ml씩으로 2 회추출하고추출액을수욕상에서증발건고한다음잔류물에질산 3 ml를가하고거의건고될때까지가열한다. 이에질산 0.5 ml 및물 10 ml를가한다음최종액이 3 ~ 5 ml가될때까지농축한후물을가하여 10 ml로한액을검액으로한다. 따로납표준액 2.0 ml를검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음의조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (4.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 납중공음극램프파장 : nm 10) 비소 ( 생략 ) 7) 비소 ( 현행과같음 ) 11) 플루오르화물 ( 생략 ) 8) 플루오르화물 ( 현행과같음 ) 강열감량 ( 생략 ) 강열감량 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 카르복시메틸셀룰로오스 Carboxymethylcellulose 카르멜로오스 Carmellose 카르복시메칠셀룰로오스카르멜로오스 CMC [ ] 이약은셀룰로오스의다가 ( 多價 ) 카르복시메틸에테르이다. 카르복시메칠셀룰로오스카르복시메틸셀룰로오스 CMC [ ] 이약은부분적으로 O-카르복시메틸화된셀룰로오스이다. 성 상 이약은흰색의가루로냄새와맛이없다. 성 상 이약은흰색의가루이다. 이약은에탄올또는에테르에거의녹지않는다. 이약에물을넣을때팽윤하여현탁액이된다. 이약에수산화나트륨시액을넣을때점조성이있는액이된다. 이약 1 g에물 100 ml를넣고흔들어섞어얻은현탁 이약은에탄올 (95) 에거의녹지않는다. 이약에물을넣을때팽윤하여현탁액이된다. 이약에수산화나트륨시액을넣을때점조성이있는액이된다. < 삭제 > 액의 ph는 3.5 ~ 5.0이다. 이약은흡습성이다. 이약은흡습성이다. 확인시험 1) 이약 0.1 g에물 10 ml를넣고잘흔들어확인시험 1) 이약및카르멜로오스표준품을적외부스 섞은다음수산화나트륨시액 2 ml를넣어흔들어섞고 펙트럼의브롬화칼륨정제법에따라측정할때같은파

162 현 행 개정안 10 분간방치하여검액으로한다. 검액 1 ml에물을넣어 5 ml로한다음그 1 방울에농크로모트로프산시액 0.5 ml를넣어수욕에서 10 분간가열할때액은 수에서같은강도의흡수를나타낸다. 2) 이약 1 g에물 100 ml를넣고흔들어섞어얻은현탁액의 ph는 이다. 자주색을나타낸다. 2) 1) 의검액 5 ml에아세톤 10 ml를넣어흔들어 < 삭제 > 섞을때흰색솜모양의침전이생긴다. 3) 1) 의검액 5 ml에염화제이철시액 1 ml를넣어 흔들어섞을때갈색솜모양의침전이생긴다. 순도시험 1) 염화물이약 0.8 g에물 50 ml를넣어잘순도시험 1) 염화물이약 0.8 g에물 50 ml를넣어잘 흔들어섞은다음수산화나트륨시액 10 ml에녹이고물을넣어 100 ml로한다. 이액 20 ml에묽은질산 10 ml를넣어수욕에서솜모양의침전이생길때까지가열하고식힌다음원심분리한다. 위의맑은액을취하여침전을물 10 ml씩으로 3 회씻고매회원심분리하여위의맑은액및씻은액을합하고물을넣어 100 ml로한다. 이액 25 ml를취하여묽은질산 6 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액에는 0.01 mol/l 염산 0.40 ml를넣는다 (0.360 % 이하 ). 흔들어섞은다음수산화나트륨시액 10 ml에녹이고물을넣어 100 ml로한다. 이액 20 ml에묽은질산 10 ml를넣어수욕에서솜모양의침전이생길때까지가열하고식힌다음원심분리한다. 위의맑은액을취하여침전을물 10 ml씩으로 3 회씻고매회원심분리하여위의맑은액및씻은액을합하고물을넣어 100 ml로한다. 이액 25 ml를취하여묽은질산 6 ml 및물을넣어 50 ml로하여검액으로한다. 따로 0.01 mol/l 염산 0.40 ml를취하여묽은질산 6 ml 및물을넣어 50 ml로하여비교액으로한다. 검액및비교 액에질산은시액 1 ml씩을넣어혼합하고차광하여 5 분간방치한다음검은색배경을써서네슬러관의상부 또는측면에서관찰하고혼탁을비교한다. 검액이나타 내는혼탁은비교액이나타내는혼탁보다진하지않다 (0.36 % 이하 ). 2) 황산염이약 0.40 g에물 25 ml를넣어잘흔들어섞은다음수산화나트륨시액 5 ml에녹이고물 20 ml를넣는다. 이액에염산 2.5 ml를넣고수욕에서면상의침전이생길때까지가열하여식힌다음원심분리한다. 위의맑은액을취하여침전을물 10 ml씩으로 3 회씻고매회원심분리하고씻은액은위의맑은액에합하여물을넣어 100 ml로한다. 이액을여과하여처음여액 5 ml를버리고다음여액 25 ml를취하여묽은염산 1 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액에는 mol/l 황산 1.5 ml를넣는다 (0.720 % 이하 ). 2) 황산염이약 0.40 g에물 25 ml를넣어잘흔들어섞은다음수산화나트륨시액 5 ml에녹이고물 20 ml를넣는다. 이액에염산 2.5 ml를넣고수욕에서솜모양의침전이생길때까지가열하여식힌다음원심분리한다. 위의맑은액을취하여침전을물 10 ml 씩으로 3 회씻고매회원심분리하고씻은액은위의맑은액에합하여물을넣어 100 ml로한다. 이액을여과하여처음여액 5 ml를버리고다음여액 25 ml 를취하여묽은염산 1 ml 및물을넣어 50 ml로하여검액으로한다. 따로 mol/l 황산 1.5 ml를취하여묽은염산 1 ml 및물을넣어 50 ml로하여비교액 으로한다. 검액및비교액에염화바륨시액 2 ml씩을 넣어혼합하고 10 분간방치한다음검은색배경을써 서네슬러관의상부또는측면에서관찰하고혼탁을 비교한다. 검액이나타내는백탁은비교액이나타내는 백탁보다진하지않다 (0.72 % 이하 ). 3) 규산염이약약 1 g을정밀하게달아백금도가니 < 삭제 > 에넣고강열회화한다음묽은염산 20 ml를넣고시 계접시를덮어 30 분간약한열로끓인다. 시계접시를 취하여공기를보내면서수욕에서가열하여증발건고한

163 현 행 개정안 다. 다시 1 시간가열을계속한다음열탕 10 ml를넣 어잘섞고정량용여과지를써서여과한다. 잔류물을열 탕으로씻고씻은액에질산은시액을넣어혼탁하지 않을때여과지와함께건조하여다시항량이될때까 지강하게가열할때그양은 0.5 % 이하이다. 4) 중금속이약 1.0 g을달아제 2 법에따라조작하 3) 중금속 ( 현행과같음 ) 여시험한다. 비교액에는납표준액 2.0 ml를넣는다 (20 ppm 이하 ). 5) 비소이약 1.0 g을달아제 3 법에따라검액으로 < 삭제 > 하여시험한다 (2 ppm 이하 ). 건조감량 8.0 % 이하 (1 g, 105, 4 시간 ). 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 1.5 % 이하 ( 건조한다음 1 g). 강열잔분 ( 현행과같음 ) 저장법기밀용기. 저장법 ( 현행과같음 ) 카르복시메틸셀룰로오스나트륨 Carboxymethylcellulose Sodium 카르멜로오스나트륨 Carmellose Sodium 카르복시메칠셀룰로오스나트륨카르멜로오스나트륨 CMC 나트륨 [ ] 이약은셀룰로오스의다가 ( 多價 ) 카르복시메틸에테르 카르복시메칠셀룰로오스나트륨카르복시메틸셀룰로오스나트륨 CMC 나트륨 [ ] 이약은부분적으로 O-카르복시메틸화된셀룰로오스 의나트륨염이다. 이약을건조한것은정량할때나트륨의나트륨염이다. 이약을건조한것은정량할때나트륨 (Na : 22.99) 6.5 ~ 8.5 % 를함유한다. (Na : 22.99) 6.5 ~ 8.5 % 를함유한다. 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) ph ( 생략 ) ph ( 현행과같음 ) 점 도 ( 생략 ) 점 도 ( 현행과같음 ) 순도시험 ( 생략 ) 순도시험 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 정량법 ( 생략 ) 정량법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 ) 카르복시메틸셀룰로오스나트륨정 Carboxymethylcellulose Sodium Tablets 카르멜로오스나트륨정 Carmellose Sodium Tablets 카르복시메칠셀룰로오스나트륨정 카르멜로오스나트륨정 CMC 나트륨정 카르복시메칠셀룰로오스나트륨정 카르복시메틸셀룰로오스나트륨정 CMC 나트륨정

164 현 행 개정안 이약은정량할때카르복시메틸셀룰로오스나트륨의표 이약은정량할때카르멜로오스나트륨의표시량에대 시량에대하여 6.5 ~ 9.5 % 에해당하는나트륨 (Na : 하여 6.5 ~ 9.5 % 에해당하는나트륨 (Na : 22.99) 을 22.99) 을함유한다. 함유한다. 제 법 이약은 카르복시메틸셀룰로오스나트륨을제 법 이약은 카르멜로오스나트륨을가지고정제 가지고정제의제법에따라만든다. 의제법에따라만든다. 확인시험 이약을가루로하여카르복시메틸셀룰로오스확인시험 이약을가루로하여카르멜로오스나트륨 1 g 나트륨 1 g에해당하는양을달아물 50 ml에녹여여과한다. 여액을가지고다음시험을한다. 1) ( 생략 ) 2) ( 생략 ) 3) ( 생략 ) 에해당하는양을달아물 50 ml에녹여여과한다. 여액을가지고다음시험을한다. 1) ( 현행과같음 ) 2) ( 현행과같음 ) 3) ( 현행과같음 ) 붕해시험 ( 생략 ) 붕해시험 ( 현행과같음 ) 제제균일성시험 ( 생략 ) 제제균일성시험 ( 현행과같음 ) 정량법 이약 20 정이상을가지고그질량을정밀하정량법 이약 20 정이상을가지고그질량을정밀하 게달아가루로하여카르복시메틸셀룰로오스나트륨으로약 0.5 g에해당하는양을정밀하게달아아세트산 (100) 80 ml를넣고수욕에서 2 시간가온한다음식히고 0.l mol/l 과염소산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을하여 게달아가루로하여카르멜로오스나트륨으로약 0.5 g 에해당하는양을정밀하게달아아세트산 (100) 80 ml를넣고수욕에서 2 시간가온한다음식히고 0.l mol/l 과염소산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을하여보정한다. 보정한다. 0.l mol/l 과염소산 1 ml = mg Na 0.l mol/l 과염소산 1 ml = mg Na 저장법 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 카르복시메틸셀룰로오스칼슘 Carboxymethylcellulose Calcium 카르멜로오스칼슘 Carmellose Calcium 카르복시메칠셀룰로오스칼슘카르멜로오스칼슘 CMC 칼슘 [ ] 이약은셀룰로오스의다가 ( 多價 ) 카르복시메틸에테르의칼슘염이다. 카르복시메칠셀룰로오스칼슘카르복시메틸셀룰로오스칼슘 CMC 칼슘 [ ] 이약은부분적으로 O-카르복시메틸화된셀룰로오스의칼슘염이다. 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 순도시험 ( 생략 ) 순도시험 ( 현행과같음 ) 건조감량 ( 생략 ) 건조감량 ( 현행과같음 ) 강열잔분 ( 생략 ) 강열잔분 ( 현행과같음 ) 저장법 ( 생략 ) 저장법 ( 현행과같음 )

165 현 행 개정안 파라옥시벤조산메틸 Methylparaben 파라옥시벤조산메틸 Methylparaben ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 융 점 ( 생략 ) 융 점 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을에탄올 (95) 10 순도시험 1) 용해상태이약의 100 mg/ml 에탄올용액 ml에녹일때액은맑고액의색은다음비교액보다진하지않다. 비교액염화코발트의색의비교원액 5.0 ml, 염화제이철의색의비교원액 12.0 ml 및황산구리 (II) 오수화물의색의비교원액 2.0 ml를취하여희석시킨묽은염산 (1 10) 을넣어 1000 ml로한다. 을검액으로한다. 따로염화제이철시액 2.4 ml, 염화코발트시액 1.0 ml, 황산구리 (Ⅱ) 오수화물 0.4 ml를넣고 0.3 mol/l 염산을넣어 10 ml로한다. 이액 5 ml를취하여 0.3 mol/l 염산을넣어 100 ml로하고비교액으로한다. 흰색을배경으로하여네슬러관의아래에서관찰한다. 이때검액은맑고액의색은비교 액또는에탄올보다진하지않다. 2) 산이약 0.20 g을에탄올 (95) 3 ml에녹이고새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린 수산화나트륨 에탄올시액 0.1 ml를넣는다. 용액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 중금속이약 l.0 g을아세톤 25 ml에녹이고묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액은납표준액 2.0 ml에아세톤 25 ml, 묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml 로한다 (20 ppm 이하 ). 4) 납이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한, 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로납표준액 1.0 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (2.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기 2) 산이약의 100 mg/ml 에탄올용액 2 ml에에탄올 3 ml 및새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린시액 0.1 ml를넣고검액으로한다. 검액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 유연물질이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산메틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml 에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml를이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검액, 표준액 (3) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험할때검액의크로마토그램에서 p-히드록시벤조산의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액의크로마토그램에서유연물질의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액에서전체유연물질의피크면적은표준액 (3) 의주피크면적의 2배보다작다 (1.0%). 다만, 표준액 (3) 의주피크면적의 0.2보다작은피크면적은무시한다 (0.1% 이하 ). 조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm)

166 현 행 개정안 램프 : 납중공음극램프파장 : nm 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실 5) 비소이약 0.5 g을달아제 3 법에따라조작하여시험한다 (4 ppm이하 ). 6) 유연물질이약 0.10 g을아세톤 10 ml에녹여검액으로한다. 이액 0.5 ml를정확하게취하여아세톤을넣어정확하게 100 ml로하여표준액으로한다. 이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다. 검액및표준액 2 μl씩을박층크로마토그래프용실리카겔 ( 형광제첨가 ) 을써서만든박층판에점적한다. 다음에메탄올 물 아세트산 (100) 혼합액 (70 : 30 : 1) 을전개용매로하여약 15 cm 전개한다음박층판을 릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 : 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산메틸의유지시간은약 2.3 분이고 p-히드록시벤조산의상대유지시간은약 0.6이다. p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸의분리도는 2.0 이상이다. 바람에말린다. 이것에자외선 ( 주파장 254 nm) 을쪼건조감량 0.5 % 이하 (1 g, 실리카겔, 5 시간 ). 일때검액에서얻은주반점이외반점은표준액에서강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 얻은반점보다진하지않다. 건조감량 0.5 % 이하 (1 g, 실리카겔, 5 시간 ). 정량법이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p- 정량법 이약약 1 g을정밀하게달아 1 mol/l 수산 히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸표준품적당량 화나트륨액 20 ml를정확하게넣어약 70 에서 1 시간가열한다음곧얼음물에식힌다. 이액을가지고과량의수산화나트륨을제 2 변곡점까지 0.5 mol/l 황산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을한다. 을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산메틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이 동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 1 mol/l 수산화나트륨액 1 ml = mg C 8 H 8 O 3 로한다. 따로검액 1 ml를이동상을넣어 20 ml로 저장법 밀폐용기. 희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검액, 표준액 (2) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 파라옥시벤조산메틸의함량 = P (r U C S )/(r S C U ) P = 파라옥시벤조산메틸표준품의명시된순도 r U = 검액중파라옥시벤조산메틸의피크면적 C S = 표죽액 (2) 중파라옥시벤조산메틸의농도 r S = 표준액 (2) 중파라옥시벤조산메틸의피크면적 C U = 검액중파라옥시벤조산메틸의농도조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 :

167 현행개정안 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산메틸의유지시간은약 2.3 분이고 p-히드록시벤조산의상대유지시간은약 0.6이다. p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸의분리도는 2.0 이상이다. 시스템의재현성 : 표준액 (1) 10 μl씩을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때상대표준편차는 0.85 % 이하이다. 저장법밀폐용기. 파라옥시벤조산부틸 Butylparaben 파라옥시벤조산부틸 Butylparaben ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 융 점 ( 현행과같음 ) 융 점 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을에탄올 (95) 10 순도시험 1) 용해상태이약 1 g을에탄올 10 ml에녹 ml에녹일때액은맑고액의색은다음비교액보다진하지않다. 비교액염화코발트의색의비교원액 5.0 ml, 염화제이철의색의비교원액 12.0 ml 및황산구리 (II) 오수화물의색의비교원액 2.0 ml를취하여희석시킨묽은염산 (1 10) 을넣어 1000 ml로한다. 2) 산이약 0.20 g을에탄올 (95) 3 ml에녹이고새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린 수산화나트륨 에탄올시액 0.1 ml를넣는다. 용액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 중금속이약 l.0 g을아세톤 25 ml에녹이고묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액은납표준액 2.0 ml에아세톤 25 ml, 묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다 (20 ppm 이하 ). 4) 유연물질이약 0.10 g을아세톤 10 ml에녹여검액으로한다. 이액 0.5 ml를정확하게취하여아세톤을넣어정확하게 100 ml로하여표준액으로한다. 이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다. 검액및표준액 2 μl씩을박층크로마토그래프용실리카겔 ( 형광제첨가 ) 을써서만든박층판에점적한다. 다음에메탄올 물 아세트산 (100) 혼합액 (70 : 30 : 인액을검액으로한다. 따로염화제이철시액 2.4 ml, 염화코발트시액 1.0 ml, 황산구리 (Ⅱ) 오수화물 0.4 ml를넣고 0.3 mol/l 염산을넣어 10 ml로한다. 이액 5 ml를취하여 0.3 mol/l 염산을넣어 100 ml로하고비교액으로한다. 흰색을배경으로하여네슬러관의아래에서관찰한다. 이때검액은맑고액의색은비교액또는에탄올보다진하지않다. 2) 산이약 1 g을에탄올 10 ml에녹인다음이액 2 ml에에탄올 (95) 3 ml, 새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린시액 0.1 ml를넣고검액으로한다. 검액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 유연물질이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필표준품및파라옥시벤조산부틸표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필및파라옥시벤조산부틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산부틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을

168 현 행 개정안 1) 을전개용매로하여약 15 cm 전개한다음박층판을바람에말린다. 이것에자외선 ( 주파장 254 nm) 을쪼일때검액에서얻은주반점이외반점은표준액에서얻은반점보다진하지않다. 표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml를이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 따로파라옥시벤조산이소부틸적당량을이동상에녹여 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 이용액 1.0 ml 당파라옥시벤조산이소부틸 50 μg 정량법 이약약 1 g을정밀하게달아 1 mol/l 수산 을함유하도록한용액을표준액 (4) 로한다. 따로표 화나트륨액 20 ml를정확하게넣어약 70 에서 1 시간가열한다음곧얼음물에식힌다. 이액을가지고과량의수산화나트륨을제 2 변곡점까지 0.5 mol/l 황산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을한다. 준액 (4) 를표준액 (2) 로희석한액 (1 100) 을표준액 (5) 로한다. 검액, 표준액 (3) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험할때검액의크로마토그램에서 p-히드록시벤조산의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적 보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액의크로마토그램에서유 1 mol/l 수산화나트륨액 1 ml = mg C 11 H 14 O 3 연물질의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액에서전체유 저장법 ( 생략 ) 연물질의피크면적은표준액 (3) 의주피크면적의 2배보다작다 (1.0 %). 다만, 표준액 (3) 의주피크면적의 0.2보다작은피크면적은무시한다 (0.1 % 이하 ). 조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (1 : 1) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 과표준액 (5) 10 μl씩을가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산부틸의유지시간은약 22 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필및파라옥시벤조산이소부틸의상대유지시간은각각 0.1, 0.5, 0.9 이다. 표준액 (1) 에서파라옥시벤조산프로필과파라옥시벤조산부틸의분리도는 2.0 이상이고, 표준액 (5) 에서파라옥시벤조산이소부틸과파라옥시벤조산부틸의분리도는 1.5 이상이다. 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 정량법이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p- 히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필표준품및파라옥시벤조산부틸표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필및파라옥시벤조산부틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산부틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고

169 현 행 개정안이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml 에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml를이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 따로파라옥시벤조산이소부틸적당량을이동상에녹여이용액 1.0 ml 당파라옥시벤조산이소부틸 50 μg을함유하도록한용액을표준액 (4) 로한다. 따로표준액 (4) 를표준액 (2) 로희석한액 (1 100) 을표준액 (5) 로한다. 검액, 표준액 (2) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다 파라옥시벤조산부틸의함량 = P (r U C S )/(r S C U ) P = 파라옥시벤조산부틸표준품의명시된순도 r U = 검액중파라옥시벤조산부틸의피크면적 C S = 표죽액 (2) 중파라옥시벤조산부틸의농도 r S = 표준액 (2) 중파라옥시벤조산부틸의피크면적 C U = 검액중파라옥시벤조산부틸의농도조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (1 : 1) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 과표준액 (5) 10 μl씩을가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산부틸의유지시간은약 22 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산프로필및파라옥시벤조산이소부틸의상대유지시간은각각 0.1, 0.5, 0.9 이다. 표준액 (1) 에서파라옥시벤조산프로필과파라옥시벤조산부틸의분리도는 2.0 이상이고, 표준액 (5) 에서파라옥시벤조산이소부틸과파라옥시벤조산부틸의분리도는 1.5 이상이다.. 시스템의재현성 : 표준액 (2) 10 μl씩을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때상대표준편차는 0.85 % 이하이다. 저장법 ( 현행과같음 )

170 현 행 개정안 파라옥시벤조산에틸 Ethylparaben 파라옥시벤조산에틸 Ethylparaben ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 융 점 ( 생략 ) 융 점 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을에탄올 (95) 10 순도시험 1) 용해상태이약의 100 mg/ml 에탄올용액 ml에녹일때액은맑고액의색은다음비교액보다진하지않다. 비교액염화코발트의색의비교원액 5.0 ml, 염화제이철의색의비교원액 12.0 ml 및황산구리 (II) 오수화물의색의비교원액 2.0 ml를취하여희석시킨묽은염산 (1 10) 을넣어 1000 ml로한다. 2) 산이약 0.20 g을에탄올 (95) 3 ml에녹이고새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린 수산화나트륨 에탄올시액 0.1 ml를넣는다. 용액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 중금속이약 l.0 g을아세톤 25 ml에녹이고묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액은납표준액 2.0 ml에아세톤 25 ml, 묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다 (20 ppm 이하 ). 4) 수은첨가제 (a) 약 1 g을도자기제보트에고르게펴고, 그위에이약 10 ~ 300 mg을취한다. 다시그위에첨가제 (a) 약 0.5 g 및첨가제 (b) 1 g을차례로고르게펴층을이루게한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된자동수은분석기의경우에는니켈제보트에첨가제를가해주지않고검체만을취한다. 보트를연소로안에넣고공기또는산소를 0.5 ~ 1 L/ 분으로흘려주면서, 약 900 로가열하여수은을유출하고포집관에포집한다. 포집관을약 700 로가열하여, 수은증기를냉원자흡광분석장치에보내고흡광도를측정하여 A로한다. 따로, 도자기제보트에첨가제만으로동일하게흡광도를측정하여 Ab로한다. 따로수은표준용액을이용하여동일하게조작하여얻어진흡광도로부터검량선을작성하고, A - Ab 값을검량선에대입하여검체중수은량을산출한다 (1.0 ppm 이하 ). 조작조건장치 : 시료의연소에서금아말감에의한포집, 냉원자흡광광도법에의한측정까지자동화된수은측정장치를사용한다. 다만, 연소부에별도의촉매제가장착된수은측정장치를사용할수있다. 수은표준원액 : 염화수은 (II) g을 % 을검액으로한다. 따로염화제이철시액 2.4 ml, 염화코발트시액 1.0 ml, 황산구리 (Ⅱ) 오수화물 0.4 ml를넣고 0.3 mol/l 염산을넣어 10 ml로한다. 이액 5 ml를취하여 0.3 mol/l 염산을넣어 100 ml로하고비교액으로한다. 흰색을배경으로하여네슬러관의아래에서관찰한다. 이때검액은맑고액의색은비교액또는에탄올보다진하지않다. 2) 산이약의 100 mg/ml 에탄올용액 2 ml에에탄올 (95) 3 ml, 새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린시액 0.1 ml를넣고검액으로한다. 검액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 유연물질이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸표준품및파라옥시벤조산에틸표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸및파라옥시벤조산에틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산에틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml에이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검액, 표준액 (3) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험할때검액의크로마토그램에서 p-히드록시벤조산의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액의크로마토그램에서유연물질의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액에서전체유연물질의피크면적은표준액 (3) 의주피크면적의 2배보다작다 (1.0 %). 다만, 표준액 (3) 의주피크면적의 0.2보다작은피크면적은무시한다 (0.1 % 이하 ). 조작조건

171 현 행 개정안 L-시스테인용액에녹여 1000 ml로한다. 이액 1 ml는염화수은 (II) 100 μg을함유한다. 수은표준용액 : 수은표준원액을 0.001% L-시스테인용액으로희석하여 0 ~ 200 ng/ml로한다. 첨가제 : (a) 산화알루미늄및 (b) 수산화칼슘 탄산나트륨 (1 : 1) 을사용할때 950 에서 30 분간활성화시킨다. 5) 납이약 5.0 g을정밀히달아백금도가니에취하여건조하고탄화시킨다음 450 ~ 550 에서회화한다. 회화가잘되지않으면일단식힌다음이에회화보조제로서질산 (1 2) 또는 50 % 질산마그네슘용액또는질산알루미늄 질산칼슘용액 ( 질산알루미늄 40 g 및질산칼슘 20 g을물 100 ml에녹인액 ) 을 2 ~ 5 ml 가하여적신다음건조하고회화를계속한다. 회화가 검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 : 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산에틸의유지시간은약 3.0 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸및파라옥시벤조산메틸의상대유지시간은각각 0.5, 1.0, 0.8 이다. 표준액 (1) 에서파라옥시벤조산메틸과파라옥시벤조산에틸의분리도는 2.0 이상이다. 충분하지않을때에는위의조작을 1 회반복하고필요강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 하면마지막으로질산 (1 2) 2 ~ 5 ml를가하여회정량법이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이 화한다. 회화가끝나면잔류물을물로적셔주고염산 2 ~ 4 ml를가하여증발건고시킨다음 0.5 mol/l 질산을가하고가온하여녹인다음불용물이있으면여과지로여과하고따로규정이없는한, 0.5 mol/l 질산을가하여 25 ml로한액을검액으로한다. 따로납표준액 1.0 ml를백금도가니에취하여이하검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조건으로원자흡광광도법에따라시험할때검액의흡광도는표준액의흡광도이하이다 (2.0 ppm 이하 ). 사용기체 : 아세틸렌또는수소 - 공기램프 : 납중공음극램프파장 : nm 6) 비소이약 0.5 g을달아제 3 법에따라조작하여시험한다 (4 ppm이하 ). 동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p- 히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸표준품및파라옥시벤조산에틸표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산메틸및파라옥시벤조산에틸을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산에틸표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml에이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검액, 표준액 (2) 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 7) 유연물질이약 0.10 g을아세톤 10 ml에녹여검 액으로한다. 이액 0.5 ml를정확하게취하여아세톤을넣어정확하게 100 ml로하여표준액으로한다. 이 파라옥시벤조산에틸의함량 = P (r U C S )/(r S C U ) 들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한 다. 검액및표준액 2 μl씩을박층크로마토그래프용실리카겔 ( 형광제첨가 ) 을써서만든박층판에점적한다. 다음에메탄올 물 아세트산 (100) 혼합액 (70 : 30 : 1) 을전개용매로하여약 15 cm 전개한다음박층판을바람에말린다. 이것에자외선 ( 주파장 254 nm) 을쪼일때검액에서얻은주반점이외반점은표준액에서얻은반점보다진하지않다. P = 파라옥시벤조산에틸표준품의명시된순도 r U = 검액중파라옥시벤조산에틸의피크면적 C S = 표죽액 (2) 중파라옥시벤조산에틸의농도 r S = 표준액 (2) 중파라옥시벤조산에틸의피크면적 C U = 검액중파라옥시벤조산에틸의농도조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 건조감량 0.5 % 이하 (1 g, 실리카겔, 5시간 ). 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실 정량법 이약약 1 g을정밀하게달아 1 mol/l 수산 릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다.

172 현행개정안 화나트륨액 20 ml를정확하게넣어약 70 에서 1 시간가열한다음곧얼음물에식힌다. 이액을가지고과량의수산화나트륨을제 2 변곡점까지 0.5 mol/l 황산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을한다. 1 mol/l 수산화나트륨액 1 ml = mg C 9 H 10 O 3 저장법 ( 생략 ) 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 : 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산에틸의유지시간은약 3.0 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸및파라옥시벤조산메틸의상대유지시간은각각 0.5, 1.0, 0.8 이다. 표준액 (1) 에서파라옥시벤조산메틸과파라옥시벤조산에틸의분리도는 2.0 이상이다. 시스템의재현성 : 표준액 (2) 10 μl씩을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때상대표준편차는 0.85 % 이하이다. 저장법 ( 현행과같음 ) 파라옥시벤조산프로필 Propylparaben 파라옥시벤조산프로필 Propylparaben ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 성 상 ( 생략 ) 성 상 ( 현행과같음 ) 확인시험 ( 생략 ) 확인시험 ( 현행과같음 ) 융 점 ( 생략 ) 융 점 ( 현행과같음 ) 순도시험 1) 용해상태이약 1.0 g을에탄올 (95) 10 순도시험 1) 용해상태이약의 100 mg/ml 에탄올용액 ml에녹일때액은맑고액의색은다음비교액보다진하지않다. 비교액염화코발트의색의비교원액 5.0 ml, 염화제이철의색의비교원액 12.0 ml 및황산구리 (II) 오수화물의색의비교원액 2.0 ml를취하여희석시킨묽은염산 (1 10) 을넣어 1000 ml로한다. 2) 산이약 0.20 g을에탄올 (95) 3 ml에녹이고새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린 수산화나트륨 에탄올시액 0.1 ml를넣는다. 용액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 중금속이약 l.0 g을아세톤 25 ml에녹이고묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다. 이것을검액으로하여시험한다. 비교액은납표준액 2.0 ml에아세톤 25 ml, 묽은아세트산 2 ml 및물을넣어 50 ml로한다 (20 ppm 이하 ). 4) 유연물질이약 0.10 g을아세톤 10 ml에녹여검액으로한다. 이액 0.5 ml를정확하게취하여아세톤을넣어정확하게 100 ml로하여표준액으로한다. 이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한 을검액으로한다. 따로염화제이철시액 2.4 ml, 염화코발트시액 1.0 ml, 황산구리 (Ⅱ) 오수화물 0.4 ml를넣고 0.3 mol/l 염산을넣어 10 ml로한다. 이액 5 ml를취하여 0.3 mol/l 염산을넣어 100 ml로하고비교액으로한다. 흰색을배경으로하여네슬러관의아래에서관찰한다. 이때검액은맑고액의색은비교액또는에탄올보다진하지않다. 2) 산이약의 100 mg/ml 에탄올용액 2 ml에에탄올 (95) 3 ml, 새로끓여식힌물 5 ml 및브로모크레솔그린시액 0.1 ml를넣고검액으로한다. 검액이파란색을나타낼때까지 0.1 mol/l 수산화나트륨액을넣을때, 그소비량은 0.1 ml 이하이다. 3) 유연물질이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸표준품및파라옥시벤조산프로필표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸및파라옥시벤조산프로필을각각 5.0 μg 을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파

173 현 행 개정안 다. 검액및표준액 2 μl씩을박층크로마토그래프용실리카겔 ( 형광제첨가 ) 을써서만든박층판에점적한다. 다음에메탄올 물 아세트산 (100) 혼합액 (70 : 30 : 1) 을전개용매로하여약 15 cm 전개한다음박층판을바람에말린다. 이것에자외선 ( 주파장 254 nm) 을쪼일때검액에서얻은주반점이외반점은표준액에서얻은반점보다진하지않다. 라옥시벤조산프로필표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml에이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검액, 표준액 (3) 10 μl씩을가지고다음조건으 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 로액체크로마토그래프법에따라시험할때검액의크 정량법 이약약 1 g을정밀하게달아 1 mol/l 수산 로마토그램에서 p-히드록시벤조산의피크면적은표 화나트륨액 20 ml를정확하게넣어약 70 에서 1 시간가열한다음곧얼음물에식힌다. 이액을가지고과량의수산화나트륨을제 2 변곡점까지 0.5 mol/l 황산으로적정한다 ( 적정종말점검출법의전위차적정법 ). 같은방법으로공시험을한다. 준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액의크로마토그램에서유연물질의피크면적은표준액 (3) 의크로마토그램에서주피크면적보다작고 (0.5 % 이하 ), 검액에서전체유연물질의피크면적은표준액 (3) 의주피크면적의 2배보다작다 (1.0 %). 다만, 표준액 (3) 의주피크면적의 0.2보다 1 mol/l 수산화나트륨액 1 ml = mg C 10 H 12 O 3 작은피크면적은무시한다 (0.1 % 이하 ). 저장법 ( 생략 ) 조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 : 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산에틸의유지시간은약 4.5 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸의상대유지시간은각각 0.3, 0.7 이다. 표준액 (1) 에서파라옥시벤조산에틸과파라옥시벤조산프로필의분리도는 3.0 이상이다. 강열잔분 0.10 % 이하 (l g). 정량법이약 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상을넣어 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어 100 ml로한액을검액으로한다. 따로 p- 히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸표준품및파라옥시벤조산프로필표준품적당량을이동상에녹여이용액 1 ml당 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸및파라옥시벤조산프로필을각각 5.0 μg을함유하도록한용액을표준액 (1) 로한다. 따로파라옥시벤조산프로필표준품 50.0 mg을메탄올 2.5 ml에녹이고이동상으로희석하여 50 ml로한다. 이용액 10 ml에이동상을넣어희석하여 100 ml로한액을표준액 (2) 로한다. 따로검액 1 ml에이동상을넣어 20 ml로희석시킨다. 이액 1 ml를취해서이동상에희석하여 10 ml로한액을표준액 (3) 으로한다. 검

174 현행개정안 액, 표준액 (2) 10 μl 씩을가지고다음조건으로액체 크로마토그래프법에따라시험한다. 파라옥시벤조산프로필의함량 = P (r U C S )/(r S C U ) P = 파라옥시벤조산프로필표준품의명시된순도 r U = 검액중파라옥시벤조산프로필의피크면적 C S = 표죽액 (2) 중파라옥시벤조산프로필의농도 r S = 표준액 (2) 중파라옥시벤조산프로필의피크면적 C U = 검액중파라옥시벤조산프로필의농도조작조건검출기 : 자외부흡광광도계 ( 측정파장 : 272 nm) 컬럼 : 안지름약 4.6 mm, 길이약 15 cm인스테인레스강관에 5 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔또는미세세라믹입자를충전한다. 유량 : 1.3 ml/ 분이동상 : 메탄올 6.8 g/l 인산이수소칼륨혼합액 (13 : 7) 시스템적합성시스템성능 : 표준액 (1) 10 μl를가지고위의조건으로조작할때파라옥시벤조산에틸의유지시간은약 4.5 분이고 p-히드록시벤조산과파라옥시벤조산에틸의상대유지시간은각각 0.3, 0.7 이다. 시스템의재현성 : 표준액 (2) 10 μl씩을가지고위의조건으로시험을 6 회반복할때상대표준편차는 0.85 % 이하이다. 저장법 ( 현행과같음 )

175 의약품정보 Pharmaceutical Information 대한민국약전포럼 제 권 호 유산균제제품질확보를위한규격설정가이드라인 유산균제제에서균종의확인및동정은제제의품질및유효성확보에매우중요한요소이나, 최근까지주로형태학적및생화학적확인시험법에한정하고있다. 따라서유산균원료및제제에서균특이적시험법으로정확한균종을확인하고현대과학기술에적합한시험법설정및관리요구에따라붙임과같이가이드라인을마련하였다. 이가이드라인에서는유산균의확인시험및유산균의동정법을현대화하기위하여유전자분석법을도입하고, 유산균의배양시사용하는배지의종류를단순화하는등시험법을정비하였다. 또한, 주요유산균종에대한유전자분석결과, 염기서열및형태학적시험결과등정보를제공함으로서합리적이고과학적인기준규격설정및심사에도움을주고자한다. Ⅰ. 서론이가이드라인은유산균원료및제제의품질확보를위하여기준규격설정에관한구체적인방법을제시하고, 균특이적확인시험법설정등유산균원료및제제의기준규격을현대화함으로써우수한의약품생산에기여하기위함을목적으로한다. 1. 배경유산균의확인및동정은유산균제제의품질및유효성확보에매우중요한요소이다. 그러나, 최근까지유산균원료및제제의확인시험은주로형태학적및생화학적시험법에한정하고있어정확한균주의확인및동정에어려움이있었다. 따라서균특이적시험법으로유산균원료및제제의정확한균종을확인하고, 현대과학기술에적합한시험법의설정및관리가요구되었다. 이가이드라인에서는유산균원료및제제에서유전자분석법에의한확인시험법을설정하고, 여러종류의유산균에공통적으로적용할수있는 확인및정량법을제시하여정확한균종확인및합리적기준규격설정을지원하고자한다. 또한시험의이해를돕고자의약품으로많이사용되는대표적유산균 5종에대하여형태학적확인및유전자분석결과예시를부록에제공하고있다. 유산균확인및정량은이가이드라인에서제시하는시험법에한정하지는않으며균특이적이고과학적인다른시험법을사용할수있다. 2. 적용범위이가이드라인은의약품으로사용되는유산균원료및제제를대상으로한다. 이가이드라인에서유산균이라함은탄수화물을이용하여젖산등을생산하고용혈성이없는유익한미생물을말한다. 이가이드라인에서제시하는기준및시험방법은예시된대표적유산균외에개발하고자하는다른유산균원료및제제에도적용할수있다. 3. 용어정의시드로트 (seed lot) 단일배양에서얻은유산균

176 등의균일한부유액을소분하고그유전적성질을충분히안정하게하는조건으로보존된것마스터시드로트 (master seed lot) 균일성및안정성을보장하고오염을방지하기위한방법으로단일벌크에서분리된균주의로트. 액체형태의마스터시드로트는일반적으로 -70 이하에서보관하며동결건조마스터시드로트는안정성이보장되는특정온도에서보관한다. 시드로트배양관리수법 (seed lot system) 보존균수의계대수를관리하기위한시스템 Ⅱ. 일반사항 1. 기본조작유산균생균의시험은검체가외부로부터의미생물오염을방지할수있도록설계된조건에서수행한다. 오염을방지하기위한예방조치는시험에서검출하고자하는유산균에대해영향을주어서는안된다. 시험에영향을줄수있는첨가제등의영향을최소화하기위하여불활성화제를쓸때는유산균에대한독성이없으며또한사용하는불활성화제와상호작용이없음을확인한다. 2. 공통준비사항가. 배지종류유산균의확인시험및정량법에사용되는배지의종류는아래와같으며, 유산균의특성에따라아래에제시된배지외에다른적합한배지를선정하여시험할수있다. MRS (de Man, Rogosa and Sharpe) 한천배지 프로테오스펩톤 10.0 g 육엑스 10.0 g 효모엑스 5.0 g 포도당 20.0 g 폴리옥시에틸렌소르비탄모노올레이트 1.0 g 시트르산암모늄 2.0 g 아세트산나트륨 5.0 g 황산마그네슘 0.1 g 황산망간 0.05 g 인산일수소칼륨 2.0 g 이상을달아정제수를넣어 1000 ml로하고 ph 6.2 가되도록조정하고 121 에서 15 ~ 20 분간고압증기멸균을한다. BHI(Brain Heart Infusion Agar) 배지 카제인제펩톤 16.0 g 한천 13.5 g Brain heart, solid from infusion 8.0 g Peptic digest of animal tissue 5.0 g 염화나트륨 5.0 g 포도당 2.0 g 인산일수소나트륨 2.5 g 이상을달아정제수를넣어 1000 ml로하고 ph 7.2 ~ 7.6 이되도록조정하고 121 에서 15 ~ 20 분간고압증기멸균을한다. 브로모크레솔퍼플 (BCP) 한천배지 효모엑스 5.0 g 포도당 10.0 g 펩 톤 5.0 g 한 천 15.0 g 이상을달아정제수를넣어 1000 ml로하고 ph 6.8 ~ 7.0 이되도록조정한다음브로모크 레솔퍼플 60 mg을넣어혼합하고 121 에서 15 ~ 20 분간고압증기멸균을한다.

177 효모엑스 5.0 g 염화나트륨 0.01 g 펩톤 5.0 g 황산망간 0.01 g 포도당 2.0 g 황산제일철 g 인산이수소칼륨 0.5 g 황산구리 g 인산일수소칼륨 0.5 g 황산코발트 g 황산마그네슘 0.01 g 황산아염 g PGY (Peptone-Glucose-Yeast extract) 액체배지이상을달아정제수를넣어 1000 ml로하고 3 mol/l 수산화나트륨용액으로 ph 6.8 가되도록조정한다음 121 에서 15 ~ 20 분간고압증기멸균한다. 나. 배지성능, 측정법의적합성, 음성대조 (1) 유산균의조제유산균은표준화된안정한현탁액을사용하거나시험에적합한방법으로조제한다. 시험에쓰는유산균은최초의마스터시드로트 (master seed lot) 로부터계대수 5회를넘지않도록시드로트배양관리수법 (seed lot system) 으로관리한다. (2) 배지성능시판배지는배치마다시험한다. 건조분말배지또는기술한각성분을써서조제한배지는조제한배치마다시험한다. 유산균의소량 (10 2 CFU 이하 ) 을시험에사용할배지의평판에접종한다. 균주마다별개로액체배지또는한천평판배지를써서적합한조건으로각각배양한다. 한천배지에서는접종균의출현집락수가표준화된균액의측정값의 1/2 ~ 2배이내이어야한다. 신선한배양균을써서시험하는경우에는유효성이확인된배지배치에서이전에얻은증식과동등한증식이인정되어야한다. 액체배지에서도유효성이확인된배지배치로미리시험하여얻은증식과동등한증식이인정되어야한다. (3) 측정법의적합성검체존재하의설정한시 험법에대한유산균검출능력을확인한다. 그리고 시험결과에영향을주는시험법의변경이나검체 의처방변경이있는경우에는다시적합성을확 인한다. (4) 음성대조시험조건을확인하기위해검액대 신사용한희석액을써서음성대조시험을한다. 미생물이증식해서는안된다. 음성대조는검체 를이용한시험시에도실시한다. Ⅲ. 유산균원료의기준및시험방법 유산균원료의확인시험 ( 형태학적확인, 생화학 적반응, 16S rdna 의확인 ) 및정량법은다음 의제시된시험방법에따라설정한다. 다만, 타당 성이입증된경우미설정할수있다. 또한, 제시 된확인시험외에균특성에따른확인시험 ( 항생 제내성, 카탈라제시험등 ) 을설정할수있다. 확인시험및정량법외기준및시험방법은 의 약품의품목허가 신고 심사규정 ( 식약처고 시 ) 제 31 조, 제 32 조, 제 33 조및 [ 별표 10] 을따 라품목의특성을고려하여설정하되, 유산균의 기원및제조방법을기재하고, 성상, 순도시험, 건 조감량, 기타시험 ( 원료의입자도시험등필요한 항목 ), 표준균주및시약 시액등품목의특성에 따라필요한시험항목을설정하여작성한다. 1. 확인시험 1) 가. 그람염색 이약을슬라이드글라스에고정시켜건조시키고 크리스탈바이올렛시액으로염색시킨뒤루골액 으로착색하고에탄올을이용하여탈색시키고세 척후사프라닌으로염색하고건조하여현미경으 1) 유산균특성에따라필요한경우적합한배양조건으로배양후얻은집락으로다음의확인시험을수행할수있다.

178 로관찰할때그람양성균은보라색을나타낸다. 을수행하는경우에는생략할수있다. 나. 포자형성이약을 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라선정된배지에 2 일간배양한다음배양액을뮬러염색법을이용하여확인할때포자는적색으로염색된다. 뮬러 (Moeller) 염색법 5 % 삼산화크롬시액으로 3 5 분간처리하여포자막의지방을충분히제거한다음물로씻고, 페놀푹신 (fuchsin) 용액으로가온염색한다. 5 분후에물로잘씻고, 에탄올로빨간색의흔적이완전히없어질때까지탈색하고, 로플러 (Loffler) 의메틸렌블루로 1 2 분간염색하고, 물로씻고, 건조하여현미경으로관찰한다. 다. 편모의유무이약을 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라선정된배지에 2 일간배양한다음배양액을슬라이드글라스위에고정시키고커버글라스를덮고슬라이드글라스와커버글라스틈사이로레이프손염색시액으로편모를염색하여광학현미경으로관찰한다. 편모는흑색으로염색된다. 라. 락트산생산이약을브로모크레솔퍼플한천배지에접종하고 1 ~ 2 일간배양하여락트산의생산을확인한다. 황색을나타내면양성이다. 마. 당이용능이약에 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라선정된배지에서 24 시간동안 37 에서배양한균체를다음의 20 여가지이상의당을첨가한 PGY 배지에접종하고 24시간및 48시간배양하고각시점에서당이용성을확인한다. 또는시판당이용성키트를이용할수있다. 당이용능에의한확인시험은 16S rdna의확인 당종류 : 글루코오스, 갈락토오스. 락토오스, 프룩토오스, 만노오스, 말토오스, 트레할로오스, 아미그달린, 셀로비오스, 셀리신, 수크로오스, 멜리비오스, 라피노오스, 글리코겐, 아도니톨, 에스쿨린, 아라비노스, 둘시톨, 에리트리톨, 글리세롤, 이노시톨, 이눌린, 만니톨, 멜레지토오스, 람노오스, 소르비톨, 소르보오스, 전분, 자일로스, 젤라틴, 리보오스, 글루코네이트바. 16S rdna의확인유산균원료는 (1) 16s rdna 염기순서확인방법을적용하는것을원칙으로하고, 추가로 (2) 프라이머를이용한방법을설정할수있다. (1) 16S rdna 염기순서확인방법 ( 상동성분석 ) 이약으로부터 DNA를추출하고 ( 필요시배양후추출한다.) 이를 universal primer ( 예, 27F- AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG, 1392R - ACG GGC GGT GTG TRC, 1492R - TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T) 로 16S rdna 염기순서를분석한다. 표준균주의 16S rdna 염기순서와상동성을비교할때판정기준은 98% 이상으로한다. 필요시표준균주의 16S rdna 염기순서선정사유를제출한다. (2) 프라이머를이용한방법 (bp 크기분석 ) 시험하고자하는유산균의프라이머 ( 표1. 참조 ) 를이용하여 PCR을하고전기영동하여그크기를분석한다. 2. 정량법가. 생균의정량법이약약 1 g을정밀하게달아생리식염주사액 90 ml를넣어잘흔들어섞은다음 100 ml로

179 한다. 이액 1.0 ml를취하여생리식염주사액으로 100 ml로하여검액으로한다. 배양시집락수의계수가가능하도록희석배수를조정할수있다. II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라배지를선정하고검액 0.1 ml씩을배지가있는멸균페트리접시 3 개에각각이식하고시험균의특성을고려하여적절한배양조건을설정하여배양한다음집락수를세어평균값으로하고희석배수를계산하여검체 1 그람당균수를구한다. 나. 사균의정량법이약약 1 g을정밀하게달아시트르산수화물 펩톤용액을넣어천천히교반하고 100 ml로하여검액으로한다. 계수가가능한농도까지적절히희석할수있다. 따로미리에탄올로깨끗이씻어말린세균수측정용셀및커버글라스를완전히밀착시킨다음검액을모세관피펫을사용하여세균수측정용셀에모세관현상을이용하여주입하고, 5 ~ 10 분간방치한다음현미경으로사균체를관찰하여표 2. 세균수측정용셀 (Haemocytometer) 을가지고대구획 6개 ( 소구획으로 96개 ) 중소구획상의평균균수 (n) 를산출한다. 1 g 중균수 = 소구획당용량 표 2. 세균수측정용셀의규격 안높이대구획수대구획당수구획수 수고획당면적 소구획당용량 희석배수 0.04mm 16개 16개 mm mm 3 세균수측정용셀의규격 에따라부피를환산하여 계산할수있다. Ⅳ. 유산균제제의기준및시험방법 유산균제제의확인시험 ( 형태학적확인, 생화학 적반응, 16S rdna 의확인 ) 및함량시험법은 다음의제시된시험방법에따라설정한다. 다만, 타당성이입증된경우미설정할수있다. 또한, 제시된확인시험외에균특성에따른확인시험 ( 항생제내성, 카탈라제시험등 ) 을설정할수있 다. 확인시험및함량시험법외의기준및시험방법 은 의약품의품목허가 신고 심사규정 ( 식약 표 1. 유산균확인 PCR 프라이머 Primer 락토바실루스아시도필루스 Lactobacillus acidophilus 엔테로코쿠스페칼리스 Enterococcus faecalis 엔테로코쿠스페슘 Enterococcus faecium 바실루스코아큘런스 Bacillus coagulans 비피도박테리움비피덤 Bifidobacterium bifidum forward 5 -GATCGCATGATCAGCTTATA-3 5 -TGCATTAGCTAGTTGGTG-3 5 -TGCTCCACCGGAAAAAGA-3 5 -GCGGCTCTCTGGTCTGTAAC-3 5 -GTCAGGTGGGTGTCCCGCGT-3 reverse 5 -AGTCTCTCAACTCGGCTATG-3 5 -AGTTACTAACGTCCTTGTTC-3 5 -TTAAGAAACCGCCTGCGC-3 5 -CCTTTGAGTTTCAGCCTTGC-3 5 -ATGCCGACGATCTCGACCGG-3

180 처고시 ) 제31조, 제32조, 제34조, [ 별표 10] 및 [ 별표 13] 을따라품목의특성을고려하여설정하되, 성상, 제제학적시험, 순도시험 ( 대장균 2) ) 등품목의특성에따라필요한시험항목을설정하여작성한다. 음배양액을슬라이드글라스위에고정시키고커버글라스를덮고슬라이드글라스와커버글라스틈사이로레이프손염색시액으로편모를염색하여광학현미경으로관찰한다. 편모는흑색으로염색된다. 1. 확인시험 3) 가. 그람염색이약을슬라이드글라스에고정시켜건조시키고크리스탈바이올렛시액으로염색시킨뒤루골액으로착색하고에탄올을이용하여탈색시키고세척후사프라닌으로염색하고건조하여현미경으로관찰할때그람양성균은보라색을나타낸다. 나. 포자형성이약을 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라선정된배지에 2 일간배양한다음배양액을뮬러염색법을이용하여확인할때포자는적색으로염색된다. 뮬러 (Moeller) 염색법 5 % 삼산화크롬시액으로 3 5 분간처리하여포자막의지방을충분히제거한다음물로씻고, 페놀푹신 (fuchsin) 용액으로가온염색한다. 5 분후에물로잘씻고, 에탄올로빨간색의흔적이완전히없어질때까지탈색하고, 로플러 (Loffler) 의메틸렌블루로 1 2 분간염색하고, 물로씻고, 건조하여현미경으로관찰한다. 라. 락트산생산이약을브로모크레솔퍼플한천배지에접종하고 1 ~ 2 일간배양하여락트산의생산을확인한다. 황색을나타내면양성이다. 마. 당이용능이약에 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라선정된배지에서 24 시간동안 37 에서배양한균체를다음의 20 여가지이상의당을첨가한 PGY 배지에접종하고 24시간및 48시간배양하고각시점에서당이용성을확인한다. 또는시판당이용성키트를이용할수있다. 당이용능에의한확인시험은 16S rdna의확인을수행하는경우에는생략할수있다. 당종류 : 글루코오스, 갈락토오스. 락토오스, 프룩토오스, 만노오스, 말토오스, 트레할로오스, 아미그달린, 셀로비오스, 셀리신, 수크로오스, 멜리비오스, 라피노오스, 글리코겐, 아도니톨, 에스쿨린, 아라비노스, 둘시톨, 에리트리톨, 글리세롤, 이노시톨, 이눌린, 만니톨, 멜레지토오스, 람노오스, 소르비톨, 소르보오스, 전분, 자일로스, 젤라틴, 리보오스, 글루코네이트 다. 편모의유무 이약을 II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배 지종류에따라선정된배지에 2 일간배양한다 바. 16S rdna 의확인 유산균제제는다음 (1) 과 (2) 중적합한시험 법을한가지이상수행한다. 2) 대장균시험을설정할경우대한민국약전일반시험법미생물한도시험법에따라배지는 EMB (eowin methylene blue) 배지를사용하여시험하고기준은불검출이어야한다. 3) 유산균의특성에따라필요한경우적합한배양조건으로배양후얻은집락으로다음의확인시험을수행할수있다. (1) 프라이머를이용한방법 (bp 크기분석 ) 시험하고자하는유산균의프라이머 ( 표1. 참조 ) 를이용하여 PCR을하고전기영동하여그크기를분석한다.

181 (2) 16S rdna 염기순서확인방법 ( 상동성분석 ) 이약으로부터 DNA를추출하고 ( 필요시배양후추출한다.) 이를 universal primer (27F- AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG, 1392R - ACG GGC GGT GTG TRC, 1492R - TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T) 로 16S rdna 염기순서를분석한다. 표준균주의 16S rdna 염기순서와상동성을비교할때판정기준은 98% 이상으로한다. 필요시표준균주의 16S rdna 염기순서선정사유를제출한다. 2. 함량시험가. 생균의함량시험이약약 1 g을정밀하게달아생리식염주사액 90 ml를넣어잘흔들어섞은다음 100 ml로한다. 이액 1.0 ml를취하여생리식염주사액으로 100 ml로하여검액으로한다. 배양시집락수의계수가가능하도록희석배수를조정할수있다. II. 일반사항중 2. 공통준비사항가. 배지종류에따라배지를선정하고검액 0.1 ml씩을배지가있는멸균페트리접시 3 개에각각이식하고시험균의특성을고려하여적절한배양조건을설정하여배양한다음집락수를세어평균값으로하고희석배수를계산하여검체 1 그람당균수를구한다. 나. 사균의함량시험이약약 1 g을정밀하게달아시트르산수화물 펩톤용액을넣어천천히교반하고 100 ml로하여검액으로한다. 계수가가능한농도까지적절히희석할수있다. 따로미리에탄올로깨끗이씻어말린세균수측정용셀및커버글라스를완전히밀착시킨다음검액을모세관피펫을사용하여세균수측정용셀에모세관현상을이용하여주입하고, 5 ~ 10 분간방치한다음현미경으로사 균체를관찰하여표 2. 세균수측정용셀 (Haemocytometer) 를가지고대구획 6 개 ( 소구 획으로 96 개 ) 중소구획상의평균균수 (n) 를산 출한다. 1 g 중균수 = 소구획당용량 Ⅴ. 시약시액 희석배수 레이프손염색시액 (Leifson stain solution) 염화 나트륨 1.5g 을물 100mL 에녹여시약 A 로한 다. 탄닌산 3.0 g 을물 100 ml 에녹여시약 B 로한다. 푹신 1.2 g 을 95 % 에탄올 100mL 에 녹여시약 C 로한다. 시약 A 와시약 B 를 1 ; 1 로혼합하고그혼합액과시약 C 를 2 : 1 로혼합 한다. 로플러 (Loffler) 의메틸렌블루메틸렌블루 (90 %) 0.3 g 이용해된에탄올 (95 %) 30 ml 과 0.01 % 수산화칼륨 100 ml 을혼합한다. 루골액 (Lugol's iodine solution) 요오드화칼륨 2g 을생리식염주사액 5 ml 에녹인다음, 요오드 1g 을넣어녹이고생리식염주사액을넣어 300 ml 로한다. 차광하여저장한다. 사프라닌 C 20 H 19 ClN 4 시트르산수화물 펩톤용액 : 펩톤 1g, 염화나트 륨 8.5g 및시트르산나트륨 20 mg 을달아증류 수에넣어녹여 1000 ml 로한다. 대한민국약전 및공정서에수재되지아니한 시약 시액을사용하는경우는조제법을상세하 게기재한다.

182 Ⅵ. 참고사항 1. 대표적유산균의형태학적시험예시 가. 단순염색 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 바실러스코아귤런스 비피도박테리움비피덤 나. 그람염색 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 바실러스코아귤런스 비피도박테리움비피덤

183 다. 포자염색 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 바실루스코아귤런스 비피도박테리움비피덤 라. 편모염색 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 바실루스코아귤런스 비피도박테리움비피덤

184 2. 대표적유산균의유전자분석시험예시 가. 16S DNA 의염기크기분석조건 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 175 bp Primer forward reverse 5 -GGAGGTTTCCGCCTC-3 5 -GGATTGCACTAGATG-3 reaction mixture for PCR (total 25 μl) Taq Polymerase μl 10X Ex Taq Buffer 2.5 μl dntp Mixture 2 μl Template 100 ng Primer1 0.4 μm Primer2 0.4 μm Sterilized distilled water up to 25 μl PCR conditions sec sec 30 ~ 40 cycles sec 253 bp Primer forward reverse 5 -CACTCTAGAGATAGAG-3 5 -CAACTCGTTGTACTTC-3 reaction mixture for PCR(total 25 μl) Taq Polymerase μl 10X Ex Taq Buffer 2.5 μl dntp Mixture 2 μl Template 100 ng Primer1 0.4 μm Primer2 0.4 μm Sterilized distilled water up to 25 μl PCR conditions sec sec 30 ~ 40 cycles sec 253bp Primer forward reverse 5 -CACTCTAGAGATAGAG-3 5 -CAACTCGTTGTACTTC-3 reaction mixture for PCR(total 25 μl) Taq Polymerase μl 10X Ex Taq Buffer 2.5 μl dntp Mixture 2 μl Template 100 ng Primer1 0.4 μm Primer2 0.4 μm Sterilized distilled water up to 25 μl PCR conditions 98 10sec 48 30sec 30 ~ 40 cycles 72 30sec 바실루스 코아귤런스 396 bp Primer forward 5 -GGATAGTTTTTTCCTC-3 reverse 5 -GCCCTGTTCGAACGG-3 reaction mixture for PCR (total 25 μl)

185 Taq Polymerase 10X Ex Taq Buffer dntp Mixture Template Primer1 Primer2 Sterilized distilled water sec sec sec μl 2.5 μl 2 μl 100 ng 0.4 μm 0.4 μm up to 25 μl PCR conditions 30 ~ 40 cycles 비피도박테리움 비피덤 382 bp Primer forward reverse 5 -GTCAGGTGGGTGTCCCGCGT-3 5 -ATGCCGACGATCTCGACCGG-3 reaction mixture for PCR (total 25 μl) Taq Polymerase μl 10X Ex Taq Buffer 2.5 μl dntp Mixture 2 μl Template 100 ng Primer1 0.4 μm Primer2 0.4 μm Sterilized distilled water up to 25 μl PCR conditions sec sec 30 ~ 40 cycles sec 나. 16s rdna 의염기크기분석예시 락토바실루스아시도필루스엔테로코쿠스페칼리스엔테로코쿠스페슘 바실러스코아귤런스 비피도박테리움비피덤

186 다. 16s rdna 염기순서 Lactobacillus acidophilus gene for 16s rrna gene, strain: JCM 7711 AGTCGAGCGAGCTGAACCAACAGATTCACTTCGGTGATGACGTTGGGAACGCGAGCGGCG GATGGGTGAGTAACACGTGGGGAACCTGCCCCATAGTCTGGGATACCACTTGGAAACAGGT GCTAATACCGGATAAGAAAGCAGATCGCATGATCAGCTTATAAAAGGCGGCGTAAGCTGTC GCTATGGGATGGCCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAGGGTAACGGCCTACCAAGGCAA TGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACT CCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGC CGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTGGTGAAGAAGGATAGAGG TAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCA GGCGGAAGAATAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAACTGCATCGGAAACT GTTTTTCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGAT ATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCG AAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGC TAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGG GGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGG AGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTAGTGCAAT CCGTAGAGATACGGAGTTCCCTTCGGGGACACTAAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCA GCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGC CAGCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGAT GACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGTACAA CGAGGAGCAAGCCTGCGAAGGCAAGCGAATCTCTTAAAGCTGTTCTCAGTTCGGACTGCAG TCTGCAACTCGACTGCACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGT GAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTCTGCAATGCCCAA AGCCGGTGGCCTAACCTTCG Enterococcus faecalis DENG1 CTTTCCTCCCGAGTGCTTGCACTCAATTGGAAAGAGGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACG TGGGTAACCTACCCATCAGAGGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGCATAACA GTTTATGCCGCATGGCATAAGAGTGAAAGGCGCTTTCGGGTGTCGCTGATGGATGGACCCG CGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCT GAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAA GGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGACGTTAGTAACTGAACGTCC CCTGACGTTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGT AGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTC TGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGC AGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACC AGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGC AAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGG TGTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGC AAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAT TCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGC TTTCCCTTCGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGAT GTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCA

187 CTCTAGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATG CCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGAAGTACAACGAGTCGCTAGACCGC GAGGTCATGCAAATCTCTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCA TGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCC TTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCT Enterococcus faecium strain IMAU s rrna gene TTTTCCACCGGAGCTTGCTCCACCGGAAAAAGAGGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGT GGGTAACCTGCCCATCAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGTATAACAAT CAAAACCGCATGGTTTTGATTTGAAAGGCGCTTTCGGGTGTCGCTGATGGATGGACCCGCG GTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCTGAG AGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA GGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTT TTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGATGAGAGTAACTGTTCATCCCTTGA CGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTG GCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATG TGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAG AGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGG CGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAG GATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGTTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGC CCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAACCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCCCAAGGTTGA AACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCCCAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTGGAAGC AACGCGAAGACCCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTCCCCT TCGGGGGCAAAGTGCCAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGG TTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGCCACTCTACC AAGACTGCCGGTGCCAACCCGGAGGAAGGTGGGGAGGACGTCAAATCATCATGCCCCTTA TGCCCTGGGCTCCCCACGTGTTCCAATGGGAAGTCCAACGAGTTGGGAAGTCGCGAGGTT AAGCTAATTTCTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTCCAGGCTGCAACTCCCCTCCAGGAAGC CGGAATCGTTAGTAATCGCGGATCACCACGCCGCGGGGAATACGTTCCCGGCCCTTG Bacillus coagulans S rrna gene GGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATCAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCT AATACCGTATAACAATCGAAACCGCATGGTTTTGATTTGAAAGGCGCTTTCGGGTGTCGCTG ATGGATGGACCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCACGAT GCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCT ACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCG CGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGATGAGAG TAACTGTTCATCCCTTGTCGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCC GCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGC GGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGG AGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAT GGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAG CGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAG TGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAG TACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCAT GTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTA

188 GAGATAGAGCTTCCCCTTCGGGGGCAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCG TGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCAT TTAGTTGGGCACTCTAGCAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTC AAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGAAGTACAACGAGTT GCGAAGTCGCGAGGCTAAGCTAATCTTTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAA CTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGC Bifidobacterium bifidum strain C152 16s rrna gene AGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCGACCTGCCCCATGCTCCGGAATAGCTCCTGG AAACGGGTGGTAATGCCGGATGTTCCACATGATCGCATGTGATTGTGGGAAAGATTCTATCG GCGTGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCTTC GACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGAC TCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACG CCGCGTGAGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTGTTTGGGAGCAAGCCTTCGG GTGAGTGTACCTTTCGAATAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTA GGGCGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGCTCGTCGCGTC CGGTGTGAAAGTCCATCGCTTAACGGTGGATCTGCGCCGGGTACGGGCGGGCTGGAGTG CGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACA CCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTCACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGA GCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGACGCTGGATGTGGGG CACGTTCCACGTGTTCCGTGTCGGAGCTAACGCGTTAAGCGTCCCGCCTGGGGAGTACGG CCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGG ATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTTCCCGACGACGCCAGA GATGGCGTTTCCCTTCGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTC GTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCCGTGTTGCCAGCACGT TATGGTGGGAACTCACGGGGGACCGCCGGGGTTAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGT CAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAGCGGG ATGCGACATGGCGACATGGAGCGGATCCCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGGAGCCT GCAACCCGGCTCCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGTGGATCAGCAACGCCGCGGTGAATGCGTT CCCGT 3. 유산균의 DNA 염기순서참고사이트 NCBI (National Center for Biotechnology Information) VII. 참고문헌 유산균제제기준규격개선연구 [Study on Improvement of the Standard ahd Specification of Lactic acid Bacteria Preparations (13172 의약안 229)]

189 외국약전정보 Foreign Pharmacopoeial Information 대한민국약전포럼 제 권 호 외국약전동향및이슈 국제조화 (The International Council for Harmonization) 최근미국약전, 유럽약전및일본약전간의국제조화에따라 Pharmacopoeial Discussion Group 에서협의되어 Offidial Inquiry Stage 4에도달한항목으로용액의색을확인하는데에기기적인방법을도입할것이제안되었다. 이항목은유럽이조정을담당한것으로일본약전과유럽약전의의견이반영되어그안을각국포럼에수재하고외부의의견을모집하였다. USP PF에서는 <1061> Color-Instrumental Measurement로소개하고있으며 PharmEuropa 에서는 DEGREE OF COLORATION OF LIQUIDS, JPF에서는용액의색의기기측정법 ( 溶液の色の機器測定法 ) 으로소개하고있다. 미국약전포럼 (U.S.PHARMACOPEIAL FORUM) 포장에관한사항 670 AUXILIARY PACKAGING COMPONENTS 포장중건조제는다른포장에도많이쓰이는데일반적인상용건조제는벤토나이트, 염화칼슘, 산화칼슘, 실리카겔, 몰레귤러시브등이있다. <197> Spectrophotometric Identification Tests의 ATR<197A> 에교차참조하도록제안되었으며 IR 섹션에필요한유연성을추가하였다. 참조스펙트럼에비슷하게얻어질때에는 ATR<197A> 테크닉에관해대체방법을사용할수있도록하였다. 미생물학적제제에관한사항 210 Monosaccharide Analysis 새로운 general chapter로서생물의약품에대해 Monosaccharide의분석에대한시험방법을제안하였다. 이챕터에서는제품의적부기준을제공하지는않지만특이적 Monographs에기재된다. 이챕터는치료법상의 glycoprotein에서발견되는 [N-acetylneuraminic acid (Neu5Ac) and N-glycolylneuraminic acid (Neu5Gc)] 와같은시알산 (Sialic Acid) 을정량하는데 4개의분석방법과수행기준을제공한다. 시알산정량에대한시험은미지시료에대하여 HPAEC-PAD를통해표지되지않은시알산을구분하는것과, RP-HPLC를통해 DMA-표지된시알산 (1,2-diamino-4,5-methylenoxybenzene (DMB)-labeled sialic acids) 을구분하는데활용하였다. 포럼에자세한시험조건이기재되었다. 순도에관한사항 232 Elemental Impurities Limits 그동안수집한의견과 ICH Q3D에맞추어개정되었다. USP의전문가패널은 ICH Q3D step 4 문서에따라개정안을제안하였으며개정안에는추가적인원소들을포함하고각각의특이적한도를제안하였다. 이챕터가적용되지않는항목은다음과같다. Ÿ Radiopharmaceuticals( 방사성의약품 ) Ÿ Articles intended only for veterinary use( 수의학용도로만쓰이는경우 ) Ÿ Vaccines( 백신 ) Ÿ Cell metabolites( 세포대사 ) Ÿ DNA products(dna 제품 )

190 Ÿ Allergenic extracts( 알레르기추출물 ) Ÿ Ÿ Cells, whole blood, cellular blood components, or blood derivatives, including plasma and plasma derivatives( 플라즈마와플라즈마유도체를포함하는 세포, 전혈세포, 세포의혈액성분, 혈액제제 ) Products based on genes (gene therapy)( 유전자 기반제품 ( 유전자치료제 )) Ÿ Cells (cell therapy)( 세포 ( 세포치료제 )) Ÿ Tissue (tissue engineering)(( 조직 ( 조직공학 )) Ÿ Dialysate solutions not intended for systemic circulation( 순환계가아닌투석액 ) Ÿ Total parenteral nutritions (TPNs)( 비경구영양제 ) Ÿ Elements that are intentionally included in the Ÿ drug product for therapeutic benefit( 치료를위해 의도적으로넣은경우 ) Dietary supplements and their ingredients, which are addressed in Elemental Contaminants in Dietary Supplements 2232(<2232> 식이보충제 에서의원소오염에따른식이보충제및그성분 ) Element Table 1: Permitted Daily Exposures for Class Elemental Impurities Oral PDE (µg/day) Parenteral PDE (µg/day) Inhalation PDE (µg/day) Cd Pb As Hg Co 2A V 2A Ni 2A Tl 2B Au 2B Pd 2B Ir 2B Os 2B Rh 2B Ru 2B Se 2B Ag 2B Pt 2B Li Sb Ba Mo Cu Sn Cr Table 2: Elements to be Considered in the Risk Assessment If Intentionally Element Class Added (All Routes) If Not Intentionally Added Oral Parenteral Inhalation Cd 1 yes yes yes yes Pb 1 yes yes yes yes As 1 yes yes yes yes Hg 1 yes yes yes yes Co 2A yes yes yes yes V 2A yes yes yes yes Ni 2A yes yes yes yes Tl 2B yes no no no Au 2B yes no no no Pd 2B yes no no no Ir 2B yes no no no Os 2B yes no no no Rh 2B yes no no no Ru 2B yes no no no Se 2B yes no no no Ag 2B yes no no no Pt 2B yes no no no Li 3 yes no yes yes Sb 3 yes no yes yes Ba 3 yes no no yes Mo 3 yes no no yes Cu 3 yes no yes yes Sn 3 yes no no yes Cr 3 yes no no yes 개정된 general chapter에서는의약품제품제조 자는최종제품에서이규정에적합하다는증명 으로서의약품원료공급자또는첨가제공급자 가제공하는시험데이터나위험평가를사용할 수있도록하였다. 원료공급자나첨가제공급자 가위험평가를실시하는경우위의 table2의기 준에적합하여야한다. 일부자연으로부터들어올 수있는원소들의경우위험평가에서반드시고 려되어야한다. <1171> Phase-Soluvility Analysis 현대에는화합물의순도를증명하는데에더 좋은특이성과정밀성을제공하는기술과방법의 활용이가능하므로 Phase-Soluvility Analysis 의삭제를검토하였다.

191 Spectoscopy관련 최근소형기기나휴대용기기에대한가이던스 의요청이많아지는실정이나이에대해서는충 분한검토가필요한사항이어서아직적용되지 않고있다. 856 Near-Infrared Spectroscopy, <858> Raman Spectroscopy에서 spectroscopy의관계 자들은단변량적접근 (univariate approach) 에 초점을 둔 이후 다변량 검교정 (multivariate calibrations) 에대해서도가이던스를요청하고 있다. 지난 USP PF 41(6) 에서새로운챕터로서 <1039>Chemometrics를제안하였으나이챕터 는아직참조로연결되지는않았지만공식적으로 사용할수는있다. 기존의 <1120> Raman Spectroscopy가 <1858> Raman Spectroscopy Theory and Practice로변경되었으며마찬가지로아직적용 되지는않았으나, 소형기기나휴대용기기에관한 가이던스나 specialized techniques 섹션에추가 적인기술의추가를검토중에있다 Validation of Compendial Procedures 이챕터에서는분석과정의주기에관한섹션 (Lifecycle Management of Analytical Procedures) 을통합하는것으로개정을제안하 고 있다. 최근 이슈화된 FDA의 Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics의밸리데이션컨셉에맞추 어 정리를 시도하였으며 Data Elements Required for Validation에 <1092> The Dissolution Procedure: Development and Validation가참조로서추가되었다. 기타참고정보 그외 Stimuli to the Revision Process로서 The Advisability and Feasibility of Developing USP Standards for Medical Cannabis에서의료용대마에대한현재규정과과학적범위에대해논의하고품질기준의부족과관련된이슈를정의하였으며품질기준개발에대한잠재된의견을탐색하였으며 Evaluation of USP Melting Point Standards by Differential Scanning Calorimetry에서는 USP MPS(Melting point Standards) 를사용하여 DSC에관한시스템적합성에서실험적조건을제안하고자하였다. Fitness for Use: Decision Rules and Target Measurement Uncertainty에서판정규칙과그것들이어떻게개발되는지, 표적측정불확도가어떻게결정되는지에대해자세히언급하였으며 Need for Clear Regulation of Pesticide Residue Limits for Articles of Botanical Origin을통해미국내에서각경우에따라식품과같은레벨에서관리하던살충제 ( 농약 ) 한도에대하여식물유래의품목에대한세척규정의필요성을제안하고있다. 유럽약전포럼 (PHARMEUROPA) General chapter중 gas detector tubes에대한개정을제안하였다. 비소와인에대해사용되는기체검지관 (gas detector tubes) 의서술을추가하도록업데이트되었으며, 황산에사용하는기체검지관에나타내는최소값의변경을제안하였다. 이변경사항은새로운모노그래프인 Acetylene intermix (1 per cent) in nitrogen (2903) 의제안에따라변경된것이다. 또한, 의약품공정서조화과정 (Ph.Eur., JP, USP) 에서 Stage 4에도달한것으로액체의색비교에관한 general chapter( Degree of Coloration of Liquids) 를싣고있다. 이챕터의조정을담당한것은 Ph.Eur. 로약전토론그룹 (PDG, Pharmacopoeial Discussion Group) 에제출한원안을약전조화섹션에수재하였다. Ph.Eur.8개정에실려있던시각적인방법에추가로액체의색측정기기에대한방법의서술을제안하였다.

192 X-ray fluorescence spectrometry은개정작업을수행중이며, X-ray fluorescence 기술 (XRF technique) 의현대적장치와현재활용되는방향을소개하면서완전히다시쓰였다. 기기성능에대한매개변수 (parameter) 가추가되었다. EDQM의발간스케줄에따르면 Ph.Eur. 9.0의출간이 2016년 7월로계획되어있으며 4개의새로운 general chapter, 27개의새로운 Monograph이실린다. 개정된 general chapter 는 6개, monographs는 847개이며국제조화된 5 품목이실린다. 그외 Ampicillin, anhydrous 와같이무수물로표기되었던 25개 Monographs의제목이 Ampicillin 등으로바뀌어실릴것으로보인다. 일본약전포럼 (JAPANESE PHARMACOPOEIAL FORUM) 일본약전제 17개정이 2016년 3월 7일일본후생성에서공지되었다. 일본약전제 17개정에는일본약전 16개정제2추보에대하여 76종이신규수재되었고 10종이삭제되어총 1962품목이등재되었다. 일본약전제17개정은고시, 목차, 서문, 통칙, 생약총칙, 제제총칙, 일반시험법, 의약품각조의순으로기재되며각조참고자료로서 UV 참조스펙트럼, IR 참조스펙트럼, 참고정보, 부록 ( 원자량표등 ), 색인의순으로정리되었다. 17개정에서는각조에 제조요구사항 란을마련하여중간체및제조공정관리등제조과정에서유의해야할사항을기재하도록하였으며, 의도적혼입유해물질 란을마련하여의도적으로혼입된유해물질을관리할수있도록하였다. 일본약전에서도국제조화되지않은부분은 로표시하고있는데일본약전에서만요구되는고유기재사항에대해서는 를표시하도록하였다. 지난포럼에여러번실렸던바와같이 [2] 제제포장통칙을마련하여제제총칙중용기 포장의용어정의및규정정비를위해제제포장에대한기본적인요구사항을기재하도록하였다. 그외 5 개일반시험법이추가되었으며 18개시험법이개정되었다. 76종의의약품각조가신규수재되었으며의약품각조는 472종이개정, 10 종이삭제되었다. 일본약전 17개정발간이후개정사항으로, 제제총칙 [3] 제제각조에 1.8. 구강용필름제 (Films for Oral Administration) 및 구강내붕해필름제 (Orally Disintegrating Films / Orodispersible Films) 을추가할것을제안하였다. 필름제는경구투여하는필름형태의제제로정의하였으며, 구강내붕해필름제는구강내에서신속하게용해또는붕괴시켜복용하는필름제로각각정의하고있다. 그외본래참고정보에수록되어있던 레이저회절법에의한입자경측정법 (3.06 レザ 回折 散乱法による粒子径測定法 ) 이국제조화에따라일반시험법으로이동되었으며 제제균일성시험 (6.02 製剤均一性試験法 ) 을국제조화에따라개정하고조화되지않는부분은 또는 로표시하였다. 잔류용매 (2.46 残留溶媒 ) 에서는분류2 및분류3에해당하는용매관리에관한규정에대해그적용사항을별도로정하던규정을삭제하는것을제안하였다. 새로운참고정보로서는 ELISA를비롯한면역탐지방법을소개하는 효소면역측정법 ( 酵素免疫測定法 ) 과제제포장과관련하여 고형제제의블리스터포장의수증기투과성시험법 ( 固形製剤のブリスタ 包装の水蒸気透過性試験法 ) 을소개하고있다.

193 U.S.Pharmacopeial Forum Table of Contents U.S.Pharmacopeial Forum Vol.42 No.1 Jan.-Feb PROPOSED IRA Proposed Interim Revision Announcements USP MONOGRAPHS Ceftriaxone Sodium (1-Jul-2016) Ceftriaxone for Injection (1-Jul-2016) Cisatracurium Besylate (1-Jul-2016) Corticotropin Injection (1-Jul-2016) Corticotropin for Injection (1-Jul-2016) Repository Corticotropin Injection (1-Jul-2016) Protamine Sulfate (1-Jul-2016) Protamine Sulfate Injection (1-Jul-2016) NF MONOGRAPHS Glyceryl Tristearate (1-Jul-2016) IN-PROCESS REVISION In-Process Revision Introduction GENERAL NOTICES AND REQUIREMENTS General Notices and Requirements (USP39-NF34) 1. Title and Revision (USP39-NF34) 2. Official Status and Legal Recognition (USP39-NF34) 3. Conformance To Standards (USP39-NF34) 4. Monographs and General Chapters (USP39-NF34) 5. Monograph Components (USP39-NF34) 6. Testing Practices and Procedures (USP39-NF34) 7. Test Results (USP39-NF34) 8. Terms and Definitions (USP39-NF34) 9. Prescribing and Dispensing (USP39-NF34) 10. Preservation, Packaging, Storage, and Labeling (USP39-NF34) GENERAL CHAPTERS <670> AUXILIARY PACKAGING COMPONENTS (USP40-NF35) REAGENTS, INDICATORS, AND SOLUTIONS Reagent Specifications Butylated Hydroxytoluene [NEW] (USP40-NF35) Deschloroclotrimazole [NEW] (USP40-NF35) Paired Ion Chromatography Reagent [NEW] (USP40-NF35) 0.06 M Phosphoric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) Polysorbate 80 [NEW] (USP40-NF35) Tetrabutylammonium Hydroxide 30-Hydrate (USP40-NF35) Cupric Nitrate Hydrate (USP40-NF35) Test Solutions 0.01 M Edetate Disodium TS [NEW] (USP40-NF35) 0.01 N Hydrochloric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) N Hydrochloric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) 20% Phosphoric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) 0.05 M Phosphoric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) 45% Potassium Hydroxide TS [NEW] (USP40-NF35) 0.2 M Dibasic Potassium Phosphate TS [NEW] (USP40-NF35) 0.02 N Sodium Hydroxide TS [NEW] (USP40-NF35) 1 M Sulfuric Acid TS [NEW] (USP40-NF35) 0.02 M Tetrabutylammonium Hydrogen Sulfate TS [NEW] (USP40-NF35) Volumetric Solutions 0.1 N Potassium Thiocyanate VS

194 (USP40-NF35) 0.1 N Perchloric Acid in Dioxane VS (USP40-NF35) 0.1 Potassium Arsenite VS (USP40-NF35) 0.1 N Potassium Bromate VS (USP40-NF35) 0.1 N Potassium Bromide Bromate VS (USP40-NF35) Potassium Dichromate, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Potassium Ferricyanide, Twentieth-Molar (0.05 M) (USP40-NF35) Potassium Hydroxide, Alcoholic, Half Normal (0.5 N) (USP40-NF35) Potassium Hydroxide, Alcoholic, Tenth-Molar (0.1 M) (USP40-NF35) Potassium Hydroxide, Methanolic, Tenth Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Potassium Hydroxide, Normal (1 N) (USP40-NF35) Potassium Iodate, Twentieth-Molar (0.05 M) (USP40-NF35) Potassium Permanganate, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Silver Nitrate, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) N Silver Nitrate in Isopropyl Alcohol VS [NEW] (USP40-NF35) Sodium Arsenite, Twentieth-Molar (0.05 M) (USP40-NF35) Sodium Hydroxide, Normal (1 N) (USP40-NF35) Sodium Hydroxide, Alcoholic, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Sodium Methoxide, Half-Normal (0.5 N) in Methanol (USP40-NF35) Sodium Methoxide, Tenth-Normal (0.1 N) in Toluene (USP40-NF35) Sodium Nitrite, Tenth-Molar (0.1 M) (USP40-NF35) Sodium Tetraphenylboron, Fiftieth-Molar (0.02 M) (USP40-NF35) Sodium Thiosulfate, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Sulfuric Acid, Normal (1 N) (USP40-NF35) Sulfuric Acid, Half-Normal (0.5 N) in Alcohol (USP40-NF35) Tetrabutylammonium Hydroxide, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Tetrabutylammonium Hydroxide in Methanol/Isopropyl Alcohol, 0.1 N (USP40-NF35) Tetramethylammonium Bromide, Tenth-Molar (0.1 M) (USP40-NF35) Tetramethylammonium Chloride, Tenth-Molar (0.1 M) (USP40-NF35) Titanium Trichloride, Tenth-Normal (0.1 N) (USP40-NF35) Zinc Sulfate, Twentieth-Molar (0.05 M) (USP40-NF35) Chromatographic Columns L56 (USP40-NF35) REFERENCE TABLES Container Specifications Container Specifications [NEW] (USP40-NF35) Description and Solubility Description and Solubility - D Description and Solubility - I Description and Solubility - M Description and Solubility - P USP MONOGRAPHS Acebutolol Hydrochloride Capsules (USP40-NF35) Acetaminophen, Chlorpheniramine Maleate, and Dextromethorphan Hydrobromide Tablets (USP40-NF35) Acetaminophen, Dextromethorphan Hydrobromide, Doxylamine Succinate, and Pseudoephedrine Hydrochloride Oral Solution (USP40-NF35) Acetaminophen and Diphenhydramine Citrate Tablets (USP40-NF35) Acetaminophen, Diphenhydramine Hydrochloride, and Pseudoephedrine Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Acetaminophen and Pseudoephedrine Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Acetaminophen and Tramadol Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Aminophylline (USP40-NF35) Amlodipine and Atorvastatin Tablets [NEW] (USP40-NF35) Atazanavir Sulfate [NEW] (USP40-NF35)

195 Atazanavir Capsules [NEW] (USP40-NF35) Atorvastatin Calcium Tablets (USP40-NF35) Biperiden (USP40-NF35) Biperiden Hydrochloride (USP40-NF35) Biperiden Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Biperiden Lactate Injection (USP40-NF35) Cidofovir [NEW] (USP40-NF35) Cidofovir Injection [NEW] (USP40-NF35) Ciprofloxacin Tablets (USP40-NF35) Cromolyn Sodium (USP40-NF35) Cysteine Hydrochloride (USP40-NF35) Dalfampridine [NEW] (USP40-NF35) Demeclocycline Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Desipramine Hydrochloride Tablets (USP40-NF35) Desoximetasone (USP40-NF35) Desoximetasone Cream (USP40-NF35) Desoximetasone Gel (USP40-NF35) Desoximetasone Ointment (USP40-NF35) Doxercalciferol [NEW] (USP40-NF35) Hydroxyzine Hydrochloride (USP40-NF35) Hydroxyzine Hydrochloride Oral Solution (USP40-NF35) Hydroxyzine Pamoate (USP40-NF35) Hydroxyzine Pamoate Capsules (USP40-NF35) Ibuprofen Oral Suspension (USP40-NF35) Iloperidone [NEW] (USP40-NF35) Indomethacin Oral Suspension (USP40-NF35) Isoflurane (USP40-NF35) Methylene Blue Injection (USP40-NF35) Metoprolol Tartrate Injection (USP40-NF35) Moxifloxacin Hydrochloride (USP40-NF35) Moxifloxacin Tablets [NEW] (USP40-NF35) Nicotine Polacrilex (USP40-NF35) Norethindrone (USP40-NF35) Norethindrone Tablets (USP40-NF35) Norethindrone Acetate (USP40-NF35) Norethindrone Acetate Tablets (USP40-NF35) Olopatadine Hydrochloride (USP40-NF35) Olopatadine Hydrochloride Ophthalmic Solution (USP40-NF35) Pimobendan [NEW] (USP40-NF35) Polymyxin B Sulfate (USP40-NF35) Potassium Citrate Extended-Release Tablets (USP40-NF35) Prochlorperazine Maleate (USP40-NF35) Sodium Hypochlorite Solution (USP40-NF35) Spironolactone (USP40-NF35) Silver Sulfadiazine Cream (USP40-NF35) Tissue Human Amnion Chorion Membrane Dehydrated [NEW] (USP40-NF35) Tranexamic Acid Injection [NEW] (USP40-NF35) Tramadol Hydrochloride and Acetaminophen Tablets (USP40-NF35) Tretinoin Gel (USP40-NF35) Ziprasidone Hydrochloride (USP40-NF35) DIETARY SUPPLEMENT MONOGRAPHS Cinnamomum cassia Twig [NEW] (USP40-NF35) Cinnamomum cassia Twig Powder [NEW] (USP40-NF35) Crypthecodinium cohnii Oil (USP40-NF35) St. John's Wort Flowering Tops (USP40-NF35) St. John's Wort Flowering Tops Dry Extract Capsules [NEW] (USP40-NF35) St. John's Wort Flowering Tops Dry Extract Tablets [NEW] (USP40-NF35) St. John's Wort Flowering Tops Powder (USP40-NF35) St. John's Wort Flowering Tops Dry Extract (USP40-NF35) Salix Species Bark [NEW] (USP40-NF35) Salix Species Bark Dry Extract [NEW] (USP40-NF35) Salix Species Bark Powder [NEW] (USP40-NF35) STAGE 4 HARMONIZATION Stage 4 Harmonization GENERAL CHAPTERS <1061> COLOR INSTRUMENTAL MEASUREMENT STIMULI TO THE REVISION PROCESS STIMULI TO THE REVISION PROCESS The Advisability and Feasibility of Developing USP Standards for Medical Cannabis

196 Table of Contents U.S.Pharmacopeial Forum Vol.42 No.2 Mar.-Apr PROPOSED IRA Proposed Interim Revision Announcements USP MONOGRAPHS Aspartic Acid (1-Sep-2016) Levothyroxine Sodium Tablets (1-Sep-2016) Liothyronine Sodium (1-Sep-2016) Tamsulosin Hydrochloride (1-Sep-2016) IN-PROCESS REVISION In-Process Revisions GENERAL CHAPTERS <210> MONOSACCHARIDE ANALYSIS [NEW] (USP40-NF35 1S) <232> ELEMENTAL IMPURITIES LIMITS (USP40-NF35 1S) <856> NEAR-INFRARED SPECTROSCOPY [NEW] (USP40-NF35 1S) <858> RAMAN SPECTROSCOPY [NEW] (USP40-NF35 1S) <1120> RAMAN SPECTROSCOPY (USP40-NF35 1S) <1171> PHASE-SOLUBILITY ANALYSIS (USP40-NF35 1S) <1225> VALIDATION OF COMPENDIAL PROCEDURES (USP40-NF35 1S) REAGENTS, INDICATORS, AND SOLUTIONS Reagent Specifications Bacterial Alkaline Protease Preparation (USP40-NF35 1S) (S)-Binol [NEW] (USP40-NF35 1S) 2,6-Dichloroquinone-chlorimide (USP40-NF35 1S) Ether, Peroxide-Free (USP40-NF35 1S) Filter Paper, Quantitative (USP40-NF35 1S) Guaifenesin [NEW] (USP40-NF35 1S) 5-Hydroxymethylfurfural [NEW] (USP40-NF35 1S) Montelukast Sodium Hydrate [NEW] (USP40-NF35 1S) Pepsin (USP40-NF35 1S) Propylparaben [NEW] (USP40-NF35 1S) Silicotungstic Acid, n-hydrate (USP40-NF35 1S) Sodium 1-Hexanesulfonate Monohydrate (USP40-NF35 1S) Tosylchloramide Sodium [NEW] (USP40-NF35 1S) Xylometazoline Hydrochloride [NEW] (USP40-NF35 1S) Volumetric Solutions 0.1 N Hydrochloric Acid VS (USP40-NF35 1S) Chromatographic Columns L91 (USP40-NF35 1S) L99 [NEW] (USP40-NF35 1S) REFERENCE TABLES Container Specifications Container Specifications [NEW] (USP40-NF35 1S) Description and Solubility Description and Solubility [NEW] (USP40-NF35 1S) Description and Solubility - C Description and Solubility - D Description and Solubility - E Description and Solubility - N Description and Solubility - S USP MONOGRAPHS Acetaminophen Tablets (USP40-NF35 1S) Aloe (USP40-NF35 1S) Belladonna Leaf (USP40-NF35 1S) Cabergoline Tablets (USP40-NF35 1S) Carbinoxamine Maleate (USP40-NF35 1S) Carbinoxamine Maleate Tablets (USP40-NF35 1S) Ciprofloxacin for Oral Suspension [NEW] (USP40-NF35 1S)

197 Clonazepam Orally Disintegrating Tablets (USP40-NF35 1S) Darifenacin Hydrobromide [NEW] (USP40-NF35 1S) Dexamethasone Topical Aerosol (USP40-NF35 1S) Dexamethasone Gel (USP40-NF35 1S) Digitalis (USP40-NF35 1S) Doxycycline (USP40-NF35 1S) Doxycycline Capsules (USP40-NF35 1S) Doxycycline Tablets (USP40-NF35 1S) Doxycycline Hyclate (USP40-NF35 1S) Esomeprazole Strontium [NEW] (USP40-NF35 1S) Estradiol Valerate (USP40-NF35 1S) Flecainide Acetate (USP40-NF35 1S) Flecainide Acetate Tablets (USP40-NF35 1S) Indomethacin for Injection (USP40-NF35 1S) Ipecac (USP40-NF35 1S) Leuprolide Acetate (USP40-NF35 1S) Loratadine Oral Solution (USP40-NF35 1S) Loratadine Tablets (USP40-NF35 1S) Methionine (USP40-NF35 1S) Methyldopa (USP40-NF35 1S) Myrrh (USP40-NF35 1S) Nicotine Transdermal System (USP40-NF35 1S) Nilutamide [NEW] (USP40-NF35 1S) Nitrofurazone (USP40-NF35 1S) Paricalcitol Capsules [NEW] (USP40-NF35 1S) Plantago Seed (USP40-NF35 1S) Podophyllum (USP40-NF35 1S) Prednisone (USP40-NF35 1S) Promethazine Hydrochloride Suppositories (USP40-NF35 1S) Rauwolfia Serpentina (USP40-NF35 1S) Senna Leaf (USP40-NF35 1S) Senna Pods (USP40-NF35 1S) Storax (USP40-NF35 1S) Theophylline Extended-Release Capsules (USP40-NF35 1S) Timolol Maleate (USP40-NF35 1S) Tizanidine Tablets (USP40-NF35 1S) Tobramycin (USP40-NF35 1S) Tripelennamine Hydrochloride (USP40-NF35 1S) Witch Hazel (USP40-NF35 1S) Zaleplon Capsules (USP40-NF35 1S) Zolpidem Tartrate (USP40-NF35 1S) DIETARY SUPPLEMENT MONOGRAPHS Ashwagandha Root (USP40-NF35 1S) Powdered Ashwagandha Root (USP40-NF35 1S) Powdered Ashwagandha Root Extract (USP40-NF35 1S) Cascara Sagrada (USP40-NF35 1S) Chia Seed Oil [NEW] (USP40-NF35 1S) Coffee Fruit Dry Extract [NEW] (USP40-NF35 1S) Eleuthero Root and Rhizome Powder Capsules [NEW] (USP40-NF35 1S) Lactobacillus paracasei LPC-37 [NEW] (USP40-NF35 1S) Lactobacillus rhamnosus HN001 [NEW] (USP40-NF35 1S) Lactobacillus acidophilus La-14 [NEW] (USP40-NF35 1S) Lactobacillus acidophilus NCFM [NEW] (USP40-NF35 1S) Plant Stanol Esters [NEW] (USP40-NF35 1S) EXCIPIENTS USP and NF Excipients, Listed By Category (USP40-NF35 1S) Briefing Introduction Emollient Emulsifying Agent NF MONOGRAPHS Caraway (USP40-NF35 1S) Cardamom Seed (USP40-NF35 1S) Chocolate (USP40-NF35 1S) Cholesterol (USP40-NF35 1S) Sodium Lauroyl Sarcosinate [NEW] (USP40-NF35 1S) Vanilla (USP40-NF35 1S) White Wax (USP40-NF35 1S) Yellow Wax (USP40-NF35 1S) STAGE 4 HARMONIZATION Stage 4 Harmonization STIMULI TO THE REVISION PROCESS

198 STIMULI TO THE REVISION PROCESS Evaluation of USP Melting Point Standards by Differential Scanning Calorimetry Fitness for Use: Decision Rules and Target Measurement Uncertainty Need for Clear Regulation of Pesticide Residue Limits for Articles of Botanical Origin

199 Table of Contents U.S.Pharmacopeial Forum Vol.42 No.3 May-June PROPOSED IRA Proposed Interim Revision Announcements USP MONOGRAPHS Insulin Glargine (1-Nov-2016) Insulin Glargine Injection (1-Nov-2016) Pimozide (1-Nov-2016) Pimozide Tablets (1-Nov-2016) IN-PROCESS REVISION In-Process Revisions GENERAL CHAPTERS <126> SOMATROPIN BIOIDENTITY TESTS (USP40-NF35 1S) <371> COBALAMIN RADIOTRACER ASSAY (USP40-NF35 1S) <621> CHROMATOGRAPHY (USP40-NF35 1S) <661.3> PLASTIC COMPONENTS AND SYSTEMS USED IN PHARMACEUTICAL MANUFACTURING [NEW] (USP40-NF35 1S) <1058> ANALYTICAL INSTRUMENT QUALIFICATION [NEW] (USP40-NF35 1S) <1661> EVALUATION OF PLASTIC PACKAGING SYSTEMS AND THEIR MATERIALS OF CONSTRUCTION WITH RESPECT TO THEIR USER SAFETY IMPACT (USP40-NF35 1S) REAGENTS, INDICATORS, AND SOLUTIONS Reagent Specifications Acetaldehyde Ammonia Trimer Trihydrate [NEW] (USP40-NF35 1S) 2-Chlorobenzophenone [NEW] (USP40-NF35 1S) 1-Chloro-4-nitrobenzene [NEW] (USP40-NF35 1S) Ethylparaben [NEW] (USP40-NF35 1S) Lactic Acid [NEW] (USP40-NF35 1S) L-Methionine Sulfoxide [NEW] (USP40-NF35 1S) 1-Methylimidazole [NEW] (USP40-NF35 1S) 2-Methylimidazole [NEW] (USP40-NF35 1S) 1-Naphthol (USP40-NF35 1S) Resorcinol [NEW] (USP40-NF35 1S) Tyrosol [NEW] (USP40-NF35 1S) Test Solutions 0.01% Phosphoric Acid TS [NEW] (USP40-NF35 1S) 0.02 M Phosphoric Acid TS [NEW] (USP40-NF35 1S) Volumetric Solutions 0.05 N Sulfuric Acid VS [NEW] (USP40-NF35 1S) REFERENCE TABLES Container Specifications Containers for Dispensing Capsules and Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) Description and Solubility Description and Solubility (USP40-NF35 1S) Description and Solubility - A USP MONOGRAPHS Acetaminophen Tablets (USP40-NF35 1S) Acetaminophen and Codeine Phosphate Capsules (USP40-NF35 1S) Acetaminophen and Codeine Phosphate Tablets (USP40-NF35 1S) Acetohexamide (USP40-NF35 1S) Acetohexamide Tablets (USP40-NF35 1S) Amoxicillin (USP40-NF35 1S) Benzocaine, Butamben, and Tetracaine Hydrochloride Topical Aerosol (USP40-NF35 1S) Benzocaine, Butamben, and Tetracaine Hydrochloride Gel (USP40-NF35 1S) Benzocaine, Butamben, and Tetracaine Hydrochloride Topical Solution (USP40-NF35 1S)

200 Buprenorphine and Naloxone Sublingual Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) Butamben (USP40-NF35 1S) Carisoprodol Tablets (USP40-NF35 1S) Clavulanate Potassium (USP40-NF35 1S) Clomipramine Hydrochloride (USP40-NF35 1S) Clomipramine Hydrochloride Capsules (USP40-NF35 1S) Clotrimazole (USP40-NF35 1S) Clotrimazole Cream (USP40-NF35 1S) Cyproheptadine Hydrochloride (USP40-NF35 1S) Cyproheptadine Hydrochloride Oral Solution (USP40-NF35 1S) Cyproheptadine Hydrochloride Tablets (USP40-NF35 1S) Doxycycline for Injection (USP40-NF35 1S) Doxylamine Succinate (USP40-NF35 1S) Doxylamine Succinate Tablets (USP40-NF35 1S) Eprosartan Mesylate [NEW] (USP40-NF35 1S) Esmolol Hydrochloride (USP40-NF35 1S) Etidronate Disodium (USP40-NF35 1S) Etidronate Disodium Tablets (USP40-NF35 1S) Etomidate (USP40-NF35 1S) Etomidate Injection (USP40-NF35 1S) Ezetimibe Tablets (USP40-NF35 1S) Flumazenil Injection (USP40-NF35 1S) Gluconolactone (USP40-NF35 1S) Goserelin Implants [NEW] (USP40-NF35 1S) Idarubicin Hydrochloride Injection (USP40-NF35 1S) Indomethacin Sodium (USP40-NF35 1S) Lindane (USP40-NF35 1S) Lindane Lotion (USP40-NF35 1S) Lindane Shampoo (USP40-NF35 1S) Lorazepam Oral Concentrate (USP40-NF35 1S) Metoprolol Tartrate Tablets (USP40-NF35 1S) Naloxone Hydrochloride Injection (USP40-NF35 1S) Nevirapine Extended-Release Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) Olmesartan Medoxomil Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) Ondansetron Orally Disintegrating Tablets (USP40-NF35 1S) Pentazocine Hydrochloride (USP40-NF35 1S) Potassium Chloride Extended-Release Tablets (USP40-NF35 1S) Ramipril Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) Salmeterol Xinafoate (USP40-NF35 1S) Scopolamine Hydrobromide (USP40-NF35 1S) Theophylline in Dextrose Injection (USP40-NF35 1S) Venlafaxine Tablets (USP40-NF35 1S) DIETARY SUPPLEMENT MONOGRAPHS Annatto Seed Tocotrienols Extract [NEW] (USP40-NF35 1S) Bifidobacterium animalis ssp. lactis [NEW] (USP40-NF35 1S) Cobamamide [NEW] (USP40-NF35 1S) Echinacea Species Dry Extract Capsules [NEW] (USP40-NF35 1S) Echinacea Species Dry Extract Tablets [NEW] (USP40-NF35 1S) NF MONOGRAPHS Neotame (USP40-NF35 1S) Palmitic Acid (USP40-NF35 1S) STAGE 4 HARMONIZATION Stage 4 Harmonization NF MONOGRAPHS Microcrystalline Cellulose Copovidone STIMULI TO THE REVISION PROCESS STIMULI TO THE REVISION PROCESS Factors to Consider in Setting Adequate Overages of Vitamins and Minerals in Dietary Supplements

201 Pharmeuropa 28.1 January Pharmeuropa archives Texts for comment Gas detector tubes Degree of coloration of liquids X-ray fluorescence spectrometry Acetylcysteine (0967) Acetylene intermix (1 per cent) in nitrogen (2903) Aluminium magnesium silicate (1388) Betamethasone dipropionate (0809) Carbon monoxide intermix (5 per cent) in nitrogen (2904) Choline (N- 11 C 1 ) injection (2462) Diazoxide (0550) Heparin calcium (0332) Heparin sodium (0333) Human coagulation factor IX (rdna) powder for solution for injection (2994) Ibandronate sodium monohydrate (2771) Methane intermix (2 per cent) in nitrogen (2905) Paracetamol (0049) Phytomenadione, racemic (3011) Rupatadine fumarate (2888)...81 Toxicodendron quercifolium for homoeopathic preparations (2519) Vinorelbine tartrate (2107)... 88

202 日本薬局方フォーラム Japanese Pharmacopoeial Forum Vol. 25 No. 1 March 2016 目次 Contents 改正案 Revision Drafts 第十七改正日本薬局方第一追補に収載予定の改正案 ( 意見募集 ) 1. 製剤総則 1 2. 一般試験法 (1) 新収載 3.06 レーザー回折 散乱法による粒子径測定法 1 3. 医薬品各条 ( 化学薬品等 ) (1) 新収載ゾニサミド 5 パズフロキサシンメシル酸塩 6 ペントバルビタールカルシウム錠 7 レボホリナートカルシウム水和物 8 (2) 既収載エパルレスタット 9 セフチゾキシムナトリウム 9 バソプレシン注射液 10 ヒドロコルチゾン酪酸エステル 12 ペントバルビタールカルシウム 13 ポリミキシン B 硫酸塩 医薬品各条 ( 生薬等 ) (1) 既収載インチンコウ 参照紫外可視吸収スペクトルゾニサミド 14 パズフロキサシンメシル酸塩 14 レボホリナートカルシウム水和物 参照赤外吸収スペクトルゾニサミド 15 パズフロキサシンメシル酸塩 15 レボホリナートカルシウム水和物 参考情報 (1) 新収載酵素免疫測定法 17 固形製剤のブリスター包装の水蒸気透過性試験法 19 (2) 削除レーザー回折法による粒子径測定法 20 薬局方関連通知など Authority Announcements 1. 第十七改正日本薬局方英文版原案作成要項 カラム情報の開示 ( 医薬品各条生薬等 ) について 85 国際調和 Pharmacopoeial Harmonization 1.Stage 4 案 (Official Inquiry Stage Draft) (1) 試験法 1) 新規 1Instrumental Measurement of Coloration of Liquids 104 溶液の色の機器測定法 108 2Conductivity of Solutions 111 溶液の導電率測定法 114 海外薬局方情報 Foreign Pharmacopoeial Information 1. トピック ( 翻訳情報 ) (1) USP <905> 含量均一性試験の無差別領域の評価 117 (2) バイオ医薬品保存時間試験の分析対象物としてのエンドトキシン 127 標準品のご案内 Useful Information 日本薬局方等標準品の頒布のご案内 137 アメリカ薬局方標準品の取次販売のご案内 150 LGC Standards 社不純物標準物質等および EP 標準品の取次販売のご案内 152

203 ii ~~~~~~~~~~~~~~~ Contents in English Revision Drafts Revision Drafts for First Supplement to JP General Rules for Preparations Official Monographs (1) Addition Calcium Levofolinate Hydrate 157 Pazufloxacin Mesilate 159 Pentobarbital Calcium Tablets 161 Zonisamide 162 (2) Revision Ceftizoxime Sodium 163 Epalrestat 164 Hydrocortisone Butyrate 164 Pentobarbital Calcium 165 Polymixin B Sulfate 165 Vasopressin Injection Official Monographs-Crude Drugs (1) Revision Artemisia Capillaris Flower Infrared Reference Spectra Calcium Levofolinate Hydrate 169 Pazufloxacin Mesilate 170 Zonisamide Ultraviolet-visible Reference Spectra Calcium Levofolinate Hydrate 171 Pazufloxacin Mesilate 171 Zonisamide 171 Drafts for JP General Rules for Preparations 172 Additional Revision of the Revision Drafts for JP General Tests, Process and Apparatus (1) Addition 6.13 Release Test for Preparations for Cutaneous Application 174 Pharmacopoeial Harmonization 1.Official Inquiry Stage Draft (1) General Tests 1)Addition 1 Instrumental Measurement of Coloration of Liquids 104 2Conductivity of Solutions 111 Useful Information PMRJ Reference Standards Ordering Information for Foreign Users 175 次号 (25 巻 2 号 ) 出版月 :2016 年 6 月 Publishing Schedule (Vol.25, No.2): June 2016

204 日本薬局方フォーラム Japanese Pharmacopoeial Forum Vol. 25 No. 2 June 2016 目次 Contents 改正案 Revision Drafts 第十七改正日本薬局方第一追補に収載予定の溶出性等に関する改正案 ( 意見募集 ) 1. 医薬品各条 ( 化学薬品等 ) (1) 新収載アデノシン三リン酸二ナトリウム腸溶顆粒 191 イトプリド塩酸塩錠 191 イルベサルタン アムロジピンベシル酸塩錠 192 クロペラスチンフェンジゾ酸塩錠 193 モンテルカストナトリウム顆粒 193 第十七改正日本薬局方第一追補に収載予定の改正案 ( 意見募集 ) 1. 製剤総則 一般試験法 (1) 既収載 2.46 残留溶媒 製剤均一性試験法 試薬 試液 医薬品各条 ( 化学薬品等 ) (1) 新収載アゾセミド 204 アゾセミド錠 204 イルベサルタン アムロジピンベシル酸塩錠 206 イソフェンインスリンヒト ( 遺伝子組換え ) 水性懸濁注射液 208 二相性イソフェンインスリンヒト ( 遺伝子組換え ) 水性懸濁注射液 209 精製ブドウ糖 211 ブドウ糖水和物 212 注射用ボリコナゾール 213 メトトレキサート錠 214 モンテルカストナトリウム顆粒 215 (2) 既収載アンピシリン水和物 217 クロキサシリンナトリウム水和物 217 クロラムフェニコールコハク酸エステルナトリウム 218 スルバクタムナトリウム 218 ドキシサイクリン塩酸塩水和物 218 無水乳糖 219 低置換度ヒドロキシプロピルセルロース 220 ヒプロメロース 221 ブドウ糖注射液 222 ベラパミル塩酸塩 222 ベラパミル塩酸塩錠 222 ベンジルペニシリンカリウム 223 メチルセルロース 224 ラウリル硫酸ナトリウム 医薬品各条 ( 生薬等 ) (1) 既収載黄連解毒湯エキス 226 乙字湯エキス 227 加味帰脾湯エキス 228 カンゾウエキス 228 カンゾウ粗エキス 228 コウブシ 229 コウブシ末 229 ゴオウ 229 牛車腎気丸エキス 230 柴胡桂枝湯エキス 231 柴朴湯エキス 232 柴苓湯エキス 233 薬甘草湯エキス 234 十全大補湯エキス 234 小柴胡湯エキス 236 小青竜湯エキス 237 真武湯エキス 238 大黄甘草湯エキス 239 無コウイ大建中湯エキス 239 桃核承気湯エキス 239 当帰薬散エキス 240

205 ii 麦門冬湯エキス 240 八味地黄丸エキス 241 半夏厚朴湯エキス 242 防已黄耆湯エキス 242 ボウフウ 243 防風通聖散エキス 243 補中益気湯エキス 244 麻黄湯エキス 245 抑肝散エキス 246 六君子湯エキス 246 苓桂朮甘湯エキス 参照紫外可視吸収スペクトルアゾセミド 248 ドキシサイクリン塩酸塩水和物 参照赤外吸収スペクトルアゾセミド 249 低置換度ヒドロキシプロピルセルロース 249 第十七改正日本薬局方第一追補改正案の追加改定 ( 意見募集 ) 1. 医薬品各条 ( 化学薬品等 ) (1) 新収載レボホリナートカルシウム水和物 250 (2) 既収載アモキシシリン水和物 250 第十七改正日本薬局方第一追補において削除予定の医薬品各条等に関する改正案 ( 意見募集 ) 1. 一般試験法 9.01 標準品 試薬 試液 医薬品各条 ( 化学薬品等 ) (1) 削除品目アセグルタミドアルミニウム 253 グラミシジン 253 ジギトキシン 253 ジギトキシン錠 253 ジクロフェナミド 253 ジクロフェナミド錠 253 ジノスタチンスチマラマー 253 セラペプターゼ 253 トラザミド 253 フルオキシメステロン 253 ラナトシド C 253 ラナトシド C 錠 253 ロキタマイシン 253 ロキタマイシン錠 医薬品各条 ( 生薬等 ) (1) 削除品目ロートエキス パパベリン アネスタミン散 参照紫外可視吸収スペクトルグラミシジン 253 ジクロフェナミド 253 トラザミド 253 フルオキシメステロン 253 ロキタマイシン 参照赤外吸収スペクトルジクロフェナミド 253 トラザミド 253 フルオキシメステロン 253 ロキタマイシン 253 薬局方関連通知など Authority Announcements 1. 第十七改正日本薬局方第一追補の原案作成スケジュールについて 第十七改正日本薬局方の制定等について 第十七改正日本薬局方の制定に伴う医薬品製造販売承認申請等の取扱いについて 日本薬局方の医薬品各条における製剤の試験方法の取扱いについて 第十七改正日本薬局方収載標準品の供給開始時期について 日本薬局方医薬品各条原案に係るカラムの情報の公開について ( 平成 28 年 3 月 1 日 ) 日本薬局方医薬品各条原案に係るカラムの情報の公開について ( 平成 28 年 6 月 1 日 ) 276 国際調和 Pharmacopoeial Harmonization 1.Stage 4 案 (Official Inquiry Stage Draft) (1) 各条 1) 新規 1Copovidone 277 コポビドン 281 2) 改正 1Calcium Disodium Edetate 284 エデト酸カルシウムナトリウム水和物 286 海外薬局方情報 Foreign Pharmacopoeial Information 1. トピック ( 翻訳情報 ) (1) 示差熱分析法による USP 融点標準品の評価 288 (2) カスケードインパクターの適正実施基準 (GCIP) 環境における装置計測の合理的なアプローチ 296 (3) カスケードインパクター適正実施基準環境における装置計測の合理的なアプローチ ((2) に対するコメントに基づく改訂 ) 299 標準品のご案内 Useful Information 日本薬局方等標準品の頒布のご案内 304 アメリカ薬局方標準品の取次販売のご案内 317 LGC Standards 社不純物標準物質等および EP 標準品の取次販売のご案内 319

206 iii ~~~~~~~~~~~~~~~ Contents in English Revision Drafts Revision Drafts on Dissolution for First Supplement to JP Official Monographs (1) Addition Adenosine Triphosphate Disodium Delayedrelease Granules 326 Cloperastine Fendizoate Tablets 326 Irbesartan and Amlodipine Besilate Tablets 327 Itopride Hydrochloride Tablets 328 Montelukast Sodium Granules 329 Revision Drafts for First Supplement to JP General Rules for Preparations General Tests, Processes and Apparatus (1) Addition 3.06 Laser Diffraction Measurement of Particle Size 331 (2) Revision 9.41 Reagents, Test solution Official Monographs (1) Addition Azosemide 335 Azosemide Tablets 336 Glucose Hydrate 338 Purified Glucose 339 Irbesartan and Amlodipine Besilate Tablets 341 Isophane Insulin Human (Genetical Recombination) Injectable Aqueous Suspension 344 Biphasic Isophane Insulin Human (Genetical Recombination) Injectable Aqueous Suspension 346 Methotrexate Tablets 348 Montelukast Sodium Granules 349 Voriconazole for Injection 351 (2) Revision Ampicillin Hydrate 353 Benzylpenicillin Potassium 353 Chloramphenicol Sodium Succinate 354 Cloxacillin Sodium Hydrate 354 Doxycycline Hydrochloride Hydrate 355 Glucose Injection 356 Low Substituted Hydroxypropylcellulose 356 Hypromellose 357 Anhydrous Lactose 359 Sodium Lauryl Sulfate 359 Methylcellulose 361 Sulbactam Sodium 362 Verapamil Hydrochloride 363 Verapamil Hydrochloride Tablets Official Monographs-Crude Drugs (1) Revision Cyperus Rhizome 364 Powdered Cyperus Rhizome 365 Glycyrrhiza Extract 365 Crude Glycyrrhiza Extract 365 Oriental Bezoar 366 Saposhnikovia Root and Rhizome Infrared Reference Spectra Azosemide 367 Low Substituted Hydroxypropylcellulose Ultraviolet-visible Reference Spectra Azosemide 368 Doxycycline Hydrochloride Hydrate General Information (1) Addition Moisture Permeability Test for Blister Packaging of Solid Preparations 369 (2) Deletion Laser Diffraction Measurement of Particle Size 370 Additional Revision of the Revision Drafts for First Supplement to JP Official Monographs (1) Addition Amoxicillin Hydrate 371 Pharmacopoeial Harmonization 1.Official Inquiry Stage Draft (1)Monographs 1)Addition 1Copovidone 277 2)Revision 1Calcium Disodium Edetate 284 Useful Information PMRJ Reference Standards Ordering Information for Foreign Users 372

207 식약처표준품 MFDS Reference Standards 대한민국약전포럼 제 권 호 의약품표준품의분양 식품의약품안전처에서는시험검사등에필요한표준품의안정적인공급을통하여제약업계등의의료제품품질관리에도움이되도록표준품을제조 확립하고있으며, 현재화학의약품표준품 ( 마약류표준품포함 ), 생물의약품표준품, 생약표준품 ( 표준생약, 지표성분 ), 체외진단용의료기기표준품을분양하고있다. 구체적인정보는 2016 식약처표준품종합안내서 에서확인할수있으며, 식품의약품안전처홈페이지 ( 알림 표준품에서도찾아볼수있다. 식약처의표준품분양과관련하여문의사항및개선사항등의의견을받고자한다. 1. 의약품표준품신규분양목록 연번품명 ( 한글명 ) 관리번호구분포장단위함량단가 ( 원 ) 아데포비어디피복실 Adefovir Dipivoxil 구연산알베린 Alverine Citrate 아라키드산 Arachidic Acid 베헨산 Behenic Acid 케노데옥시콜산 Chenodeoxycholic Acid 실니디핀 Cilnidipine 시티콜린 Citicoline 도데칸산 Dodecanoic Acid 게피티니브 Gefitinib 헵타데칸산 Heptadecanoic Acid L- 시스테인 L-Cysteine 레르카니디핀염산염 Lercanidipine HCl L- 히스티딘 L-Histidine 리토콜산 Lithocholic Acid 록소프로펜 Loxoprofen MFDS 일반 200 mg/vial 98.2 (as is) 200,000 MFDS 일반 200 mg/vial 98.6 (as is) 100,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.8 (as is) 60,000 MFDS 일반 200 mg/vial 90.3 (as is) 80,000 MFDS 일반 200 mg/vial 98.3 (as is) 100,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.9 (as is) 200,000 MFDS 일반 200 mg/vial 90.9 (as is) 50,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.5 (as is) 90,000 MFDS 일반 200 mg/vial 97.4 (as is) 50,000 MFDS 일반 200 mg/vial 98.3 (as is) 60,000 MFDS 일반 200 mg/vial 98.8 (as is) 290,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.9 (as is) 200,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.9 (as is) 300,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.9 (as is) 100,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.9 (as is) 300,000

208 연번품명 ( 한글명 ) 관리번호구분포장단위함량단가 ( 원 ) L- 피로글루탐산 L-Pyroglutamic Acid 염화리소짐 Lysozyme Chloride 마데카신산 Madecassic Acid p- 아미노페놀 p-aminophenol 프레가발린 Pregabalin 프로피베린염산염 Propiverine HCl 레바미피드 Rebamipide 솔리페나신숙신산염 Solifenacin Succinate 알릴이소프로필아세틸우레아 Allylisopropylacetylurea 부프레노르핀염산염 Buprenorphine HCl 펜타닐시트르산염 Fentanyl Citrate 플루디아제팜 Fludiazepam 로르메타제팜 Lormetazepam 진피 ( 陳皮 ) Citrus reticulatablanco 진피 ( 陳皮 ) Citrus unshiumarkovich MFDS 일반 200 mg/vial 98.9 (as is) 50,000 MFDS 일반 200 mg/vial 93.6 (as is) 90,000 MFDS 일반 200 mg/vial 85.7 (as is) 50,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.5 (as is) 300,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.7 (as is) 130,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.6 (as is) 70,000 MFDS 일반 200 mg/vial 98.5 (as is) 90,000 MFDS 일반 200 mg/vial 99.8 (as is) 100,000 MFDS 향정 200 mg/vial 98.1 (as is) 50,000 MFDS 향정 100 mg/vial 99.9 (as is) 2,200,000 MFDS 마약 100 mg/vial 99.9 (as is) 1,200,000 MFDS 향정 100 mg/vial 99.6 (as is) 1,400,000 MFDS 향정 100 mg/vial 99.5 (as is) 1,200,000 진피CIRE 생약 3 g/vial 11,200 진피CIUN 생약 3 g/vial 11,200

209 2. 의약품표준품분양절차 1) 표준품분양신청처리절차도 2) 처리절차안내 가. 분양신청 고객지원담당관실방문, 우편또는팩스신청 충북청주시흥덕구오송읍오송생명 2 로 187 오송보건의료행정타운식품의약품안전처고객지원담당관 전화 , 팩스 인터넷신청 : 전자민원창구 ( > 로그인 > 민원신청 나. 분양신청처리결과알림 표준품운영부서 ( 의약품연구과, 생약연구과 ) 에서접수된분양신청서를검토한후분양신청처리결 과 ( 분양품목, 포장단위, 수수료등 ) 를고객지원담당관실을통해신청인에게회신 ( 우편발송 ) 다. 표준품의양도 양수 분양신청처리결과를안내받은신청인은담당자와양도 양수일정확인후방문 구비서류 분양인수증 수입인지 - 우표형 : 우체국또는오송생명과학단지내우리은행에서현금결제 - 전자 : 전용구매사이트 ( 에서계좌이체또는카드결제 신분증

210 3. 마약류의약품표준품분양절차 1) 표준품분양신청처리절차도 2) 처리절차안내 가. 분양신청 고객지원담당관실방문, 우편또는팩스신청 충북청주시흥덕구오송읍오송생명 2 로 187 오송보건의료행정타운식품의약품안전처고객지원담당관 전화 , 팩스 인터넷신청 : 전자민원창구 ( > 로그인 > 민원신청 구비서류 필요서류 1) 마약류취급자허가증 사본 - 허가종별 : 제조업자, 수출입업자, 학술연구자등 2) 마약류취급자의예외적인마약류취급승인 [ 관련서식3] 공문서사본 - 학술연구자의경우해당사항없음 * 상기문서들은식품의약품안전처마약정책과에서받음 ( ) 3) 분양계약서 [ 관련서식4] 사본 - 원료물질과마약 향정 대마를함께분양신청하는경우, 계약서는따로작성

211 나. 분양신청처리결과알림표준품운영부서 ( 의약품연구과, 생약연구과 ) 에서접수된분양신청서를검토하여관할지방청 ( 대전지방식품의약품안전청의료제품안전과 ) 으로양도승인을신청하고, 대전지방청은승인요청서류를검토후분양신청처리결과 ( 분양품목, 포장단위, 수수료등 ) 를고객지원담당관실을통해신청인에게회신 ( 우편발송 ) 다. 표준품의양도 양수분양신청처리결과를안내받은신청인은담당자와양도 양수일정확인후방문 구비서류 준비할서류등 1) 통보서에명시된금액의수입인지 2) 분양인수증 [ 관련서식7] 3) 분양신청인이서명한계약서원본 [ 관련서식4] 4) 마약구입서 마약판매서 [ 관련서식8, 마약에한함 ] 5) 마약류운반을위한잠금장치가부착된운반기구 3) 찾아오시는길 1 방문증수령 ( 오송생명과학단지지원센터 1 층안내데스크 ) 2 표준품수령 ( 의약품연구과또는생약연구과 )

212 3. 관련서식 1) 분양신청서 [ 의약품등의표준품관리규정별지제 1 호서식 ] 의약품등의표준품분양신청서 처리기간 7 일 ( 마약류표준품 : 14 일 ) 1 기관명 2 성명 대표자 : 신청인 : 신청인 3 전화번호 4 팩스 5 주소 표준품 구분 화학의약품표준품 마약류표준품 ( 원료물질포함 ) 생물의약품표준품 생약표준품 화장품표준품 의약외품표준품 체외진단용의료기기표준품 일련번호관리번호표준품명포장단위수량사용목적 의약품등의표준품관리규정 에따라위와같이표준품분양을신청합니다. 년월일 신청인 ( 서명또는인 )

213 2) 국제분양신청서

214 3) 분양인수증 [ 의약품등의표준품관리규정별지제 2 호서식 ] 분양인수증 표준품 구분 화학의약품표준품 마약류표준품 ( 원료물질포함 ) 생물의약품표준품 생약표준품 화장품표준품 의약외품표준품 체외진단용의료기기표준품 일련번호 관리번호표준품명포장단위단가수량분양가격 의약품등의표준품관리규정 에따라위와같이표준품의분양물량을 인수합니다. 기관명 : 주 소 : 연락처 : 인수일 : 년 월 일 인수자 : ( 인 )

215

216 216 청렴하고 깨끗한 식약처 우리함께 만들어가요! 1. 우리는! 청렴한 식약처를 위해 7대 수칙을 지키도록 하겠습니다. 2. 여러분! 부조리 신고 및 공익신고를 통해 부당한 업무처리나 금품요구 등 부조리 사례가 있을 경우 신고하여 주십시오 공직자 부조리 및 공익신고안내 ** 신고자 및 신고내용은 보호됩니다. 부조리 신고 : 식약처 홈페이지 국민신문고 > 공직자 부조리 신고 코너 공익 신고 : 식약처 홈페이지 "국민소통 > 신고센터 > 부패 공익신고 상담 코너 KP Forum Vol.13 No.1 (2016)