소개 역상크로마토그라피 (ODS, C18) 는높은이론단수, 우수한분리특성, 재현성, 사용의용이함때문에 HPLC 에서가장공통 적으로널리사용하는방법입니다. 그러나 C18 칼람에서친유성상호작용을주분리목적으로사용할때는친유성이유사 한화합물의경우분리가충분치가않습니다. 이시료의경우

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호민 전
5 years ago
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1 소개 역상크로마토그라피 (DS, C18) 는높은이론단수, 우수한분리특성, 재현성, 사용의용이함때문에 C 에서가장공통 적으로널리사용하는방법입니다. 그러나 C18 칼람에서친유성상호작용을주분리목적으로사용할때는친유성이유사 한화합물의경우분리가충분치가않습니다. 이시료의경우칼람의온도를변화시키고, 용매를바꾸거나칼람길이를연장할경우어느정도분리를개선할수가있습니다. 또한친유성상호작용을 2차작용으로분리를목적으로하는시료는충진물크기가다른역상칼람을사용할경우분리에효과적입니다. Nacalai Tesque는여려종류의 CSMSI 역상칼람용충진물을공급합니다. 표1에는충진물종류와시료가고정상에머무는구조를나터냅니다. 여려고정상에따른화합물들이머무는것은고정상과시료의상호작용의원리에의존합니다. 그러므로여려상호작용의원리를이해하면적정한칼람을선정하는데유효합니다. 표. 고정상및충진물의상호작용 충진물 C18-MS-II C18-A-II C8-MS E-MS πna YE NE BB- Cholester 실리카겔 고순도다공성구형실리카 평균입자크기 5 μm 평균세공크기 거의 120 Å 평균표면적 거의 300 m²/g 고정상 3 C C 3 오디에스그룹 오디에스그룹 3 C C 3 3 C C 3 3 C C 3 3 C C 3 C C 3 3 옥틸그룹 페닐에틸그룹 나프틸에틸그룹 피레닐에틸그룹 나이트로페닐에틸그룹 펜타브로모베질그룹 콜레스터릴그룹 본딩타입 모노머릭 폴리머릭 모노머릭 모노머릭 모노머릭 모노머릭 모노머릭 모노머릭 모노머릭 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 친유성상호작용 주상호작용 π-π 상호작용 π-π 상호작용 π-π 상호작용 π-π 상호작용분산력전하전달상호작용분산력쌍극- 쌍극상호작용 전하전달상호작용 엔드켑핑처리 거의완벽한처리 탄소함유량 거의 16% 거의 17% 거의 10% 거의 10% 거의 11% 거의 18% 거의 9% 거의 8% 거의 20% N2 3 C C 3 3 C 3 C 3 C C 3 C 칼람Ⅱ칼초람고속크로마토그라피Ⅲ분취용충Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록201Ⅰ진물7. 역상크로마토그라피에서칼람충진제의선택

2 칼람1) (selectivity, α) 202Ⅰ (α) 극성기그룹을갖는시료의는나이트로, 애니솔, 메톡시 (nitro, anisole, methoxy) 그룹을갖는벤젠, 나이트로벤젠 (benzene, nitrobenzene) 을얼마나잘분리가되는가를기초 로를평가합니다. 아래크로마토그람은세가지화합물 에대해서 C18-MS-II, E-MS, πna, YE의네가지칼람들을 이용했을때분리되는모습을보여줍니다. C18칼람에서시료용 출순서는나이토로벤젠, 애니솔, 벤젠 (nitrobenzene, anisole, benzene) 입니다. 고정상이아로마틱 (aromatic) 칼람에서시료 의용출순서는반대로입니다. C18칼람에서분리는단지친유 성상호작용을이용하는것을기초로합니다. 다시말하면세가 지칼람은아로마틱링 (aromatic ring) 을고정상으로갖고있기 5E-MS Mobile phase: Methanol / 2 = 50/50 Sample: 1; Nitrobenzene (0.13μg) 2; Anisole (1.5μg) 3; Benzene (4.0μg) N 2 C 3 Nitrobenzene Anisole Benzene 위치이성질체 (position isomers) 톨루나이트릴 (tolunitrile) 분리 한 YE 또는 NE칼람으로분리가매우잘됩니다. CSMSI Application Data Mobile phase:, 5E-MS, 5NE Methanol/ 2 = 40/60 5YE Methanol/ 2 = 60/40 Sample: o-tolunitrile (2.0μg) 5YE m-tolunitrile (2.0μg) p-tolunitrile (1.0μg) C C 3 C 3 C C 3 3 o- m- p- o- m- p- C 칼람Ⅱ초고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록기술정보 떄문에시료와고정상과 π-π상호작용에의하여시료의용출순서가뒤바뀝니다. 아래그림은극성기그룹을갖는시료의를그래프를보여줍니다. YE, NE칼람을포함하는 9개의 CSMSI칼람들은극성그룹을갖는시료의분리에가장높은값을갖습니다. π-π상호작용을이용할때용매는아세토나이트릴보다메탄올이분리에효과적입니다. NACAAI TESQUE, INC 톨루나이트릴 (tolunitrile) 은 3개의위치이성질체를갖고있습니다. 기존의 C18 또는 E-MS칼람을이용할경우 π-π 상호작용이너무약하기때문에 ortho 및 para의이성질체는분리가어렵습니다. 그러나이이성질체들은 π-π 상호작용이강 NA 5E-MS 5NE 5YE NACAAI TESQUE, INC

3 쌍극 (dipole) 구조를갖는시료의는시료 1,5-dinitronaphthalene 과 1,8-dinitronaphthalene 의분리를기초로평가 합니다. Dinitronaphthalenes ( 피크 1 과 2) 는 dimethylnaphthalenes과같이 π-π상호작용이크므로 YE 과 NE 칼람에서강하게시료가머뭅니다. 1,8-dinitronaphthalene ( 피크 1) 는 NE 칼람에더오래머물고 1,5-dinitronaphthalene ( 피크 2) 는 YE 칼람에선택적으로오래머물기때문에이두칼람은차이가있습니다. NE 칼람이강한쌍극쌍극상호작용 (dipole-dipole interaction) 을표시합니다. 1,8-dinitronaphthalene에서 2개의나이트로그룹쌍극은 1,5-dinitronaphthalene 보다 nitrophenyl 그룹으로본딩한 NE칼람에서더큰쌍극결합이일렬로이루어집니다. Mobile phase: C 18 -MS-II Methanol / 2 = 80/20 NE Methanol / 2 = 70/30 YE Methanol / 2 = 90/10 Sample: 1; 1,8-Dinitronaphthalene(1,8-DNN) (0.21μg) 2; 1,5-Dinitronaphthalene(1,5-DNN) (0.11μg) 3; Naphthalene (0.25μg) 4; 1-Methylnaphthalene (0.35μg) 5; 1,5-Dimethylnaphthalene (0.42μg) N 2 N 2 N 2 N 2 C C 18- MS-II 프탈로나이트릴 (phthalonitrile) 위치이성질체분리 C 3 C 3 NACAAI TESQUE, INC 프탈로나이트릴은 3개의위치이상질체를갖습니다. NE 또는 YE 칼람은 π-π상호작용으로 3가지위치이성질체를완벽하게분리합니다. 더구나 NE 칼람은쌍극쌍극상호작용 (dipole-dipole interaction) 에의해 o-phthalonitrile가강하게칼람에머뭅니다. CSMSI Application Data Mobile phase: Methanol/ 2 = 30/70 5NE Methanol/ 2 = 40/60 5YE Methanol/ 2 = 80/20 Sample: o-; hthalonitrile (0.3μg) m-; Isophthalonitrile (3.0μg) p-; Terephthalonitrile (0.15μg) o- m- p- 5NE 5YE 5NE 5YE NACAAI TESQUE, INC 2) 쌍극 (dipole) 구조를갖는시료의 C 칼람Ⅱ칼초람고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진물Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록203Ⅰ

4 칼람204Ⅰ C 칼람Ⅱ초고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진물Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록기술정보 3) 폴리아로마틱 (polyaromatic) 화합물의 폴리아로마틱화합물의는벤젠, 나프탈렌, 안트라센의분리을기초로를평가합니다. 시료의용출순서는모든칼람이같습니다 ( 벤젠-나프탈렌-안트라센 ). 모든칼람에서아로마틱링의수의증가에따라시료의머무는시간이결정됩니다. 그러나 BB- 및 YE과같은칼람은분산력상호작용으로인해폴리아로마틱화합물은강하게칼람에머무는것을보여줍니다. Mobile phase: Methanol/ 2 = 90/10 5BB- Methanol/ 2 = 90/10 5YE Methanol/ 2 = 80/20 Sample: 1; Benzene (1.67μg) 2; Naphthalene (0.11μg) 3; Anthracene (0.0063μg) Benzene Naphthalene Anthracene dibenzosuberone 과 dibenzosuberenone 의분리 NACAAI TESQUE, INC C18은 dibenzosuberenone ( 피크 2) 보다 dibenzosuberone ( 피크 1) 오래칼람에머뭅니다. 다시말하면 BB- 및 YE 칼람은 π-전자시스템을갖는 dibenzosuberenone ( 피크 2) 이 dibenzosuberone ( 피크 1) 보다오래머뭅니다. CSMSI Application Data Mobile phase: Methanol/ 2 = 80/20 5BB- Methanol 5YE Methanol/ 2 = 90/10 Sample: 1; Dibenzosuberone (0.1μg) 2; Dibenzosuberenone (0.025μg) 1 2 5BB- 5BB- 5YE 5YE NACAAI TESQUE, INC

5 분자구조에따른는 chrysene 와 benz[a]anthracene분리를기초로평가합니다. 4개의벤젠링 (benzene rings) 의구조로된두개의폴리아로마틱하이드로카본 (polyaromatic hydrocarbons) 의이성질체는비슷한친유성과방향족성질를갖기때문에분리가어렵습니다. 그러나 YE 와 Cholester 칼람은 chrysene 과 benz[a]anthracene 같이특이한분자구조의화합물을잘분리할수있기떄문에폴리아로마틱하이드로카본이성질체도잘분리할수있습니다. Mobile phase:, 5YE Methanol / 2 = 90/10 Cholester Methanol 5E-MS Methanol / 2 = 80/20 Sample: 1; Benz[a]anthracene (0.04μg) 2; Chrysene (0.04μg) 1; Benz[a]anthracene 2; Chrysene 부분입체이성질체 (diastereomers)threo와 erythro의분리 5E-MS NACAAI TESQUE, INC C18 칼람은 threo와 erythro와같은부분입체이성질체는분리가어렵습니다. YE 칼람은 threo구조보다 2차원구조의 erythro가칼람에오래머뭅니다. CSMSI Application Data Mobile phase: Methanol / 2 = 80/20 Sample: 1; Threo form 2; Erythro form 1. Threo form 2. Erythro form 5YE Cholester 5YE NACAAI TESQUE, INC 4) 분자구조에따른 C 칼람Ⅱ칼초람고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진물Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록205Ⅰ

6 칼람206Ⅰ C 칼람Ⅱ초고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진물Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록기술정보 5) 할로겐화합물의 활로겐화합물의는클로로벤젠 (chlorobenzene) 과브로모벤젠 (bromobenzene) 시료의분리를기초로평가합니다. BB- 칼람은 5개의브로마인 (bromine) 원자가분산력힘에의한선택도지수가가장높은것을보여줍니다. Mobile phase: Methanol/ 2 = 60/40 Sample: 1; Toluene (3.3μg) 2; Chlorobenzene (3.3μg) 3; omobenzene (3.3μg) C 3 Cl Toluene Chlorobenzene omobenzene 할로겐교환반응물질 (halogen exchange reaction products) 의 NACAAI TESQUE, INC YE 와 BB- 칼람은브로마인 (bromine) 원자보다분산된요오드원자가더길기때문에칼람에머뭅니다. 그래서 YE 와 BB- 칼람은구조가복잡한브로마인과요오드화합물를잘분리할수있지만 C18칼람은분리를할수없습니다. CSMSI Application Data Mobile phase: Methanol/ 2 = 90/10 BB- Methanol Sample: =I or Sample courtesy of Dr..Yamamoto,IKEN 5BB- BB- 5YE NACAAI TESQUE, INC A-1029

7 친유성화합물의는알킬벤젠의분리를기초로를평가합니다. C18과 Cholester 칼람은친유성화합물의가유사한것을보여줍니다. 다른칼람들은 C18보다친유성이높은화합물의가낮은것을보여줍니다. Mobile phase: Methanol/ 2 = 80/20 Sample: 1; Benzene (1.67μg) 2; Toluene (1.67μg) 3; Ethylbenzene (1.67μg) 4; ropylbenzene (1.67μg) 5; Butylbenzene (1.67μg) 6; Amylbenzene (1.67μg) (C 2) n- n=0-5 Cholester 5BB- 5YE 5NE NACAAI TESQUE, INC 역상칼람에서이동상의유기용매농도가낮을수록시료가오래머뭅니다. NE칼람의경우메탄올농도를 60% 로줄였을때와 C18칼람에 80% 농도로했을때시료의머무름시간과비슷하게증가합니다. 5NE Mobile phase: Sample: 1; Benzene (1.67μg) 2; Toluene (1.67μg) 3; Ethylbenzene (1.67μg) 4; ropylbenzene (1.67μg) 5; Butylbenzene (1.67μg) 6; Amylbenzene (1.67μg) (C 2) n- n=0-5 Methanol/ 2 = 80/20 Methanol/ 2 = 60/40 NACAAI TESQUE, INC 6) 친유성화합물의 C 칼람Ⅱ칼초람고속크로마토그라피Ⅲ분취용충진물Ⅳ관련제품ⅤⅥ기술노- 트Ⅶ목록207Ⅰ

생화학 3 강인터넷학습자료 3. 방향족화합물 18세기중엽에벤젠 (benzene) 의분자식이 C 6H 6 이라는것을알았으며, 모든방향족화합물의모체가되고있다. 벤젠및벤젠과유사한많은화합물들 ( 벤젠고리를가지고있는것들 ) 은대부분이냄새가좋기때문에방향족화합물 (aromatic

생화학 3 강인터넷학습자료 3. 방향족화합물 18세기중엽에벤젠 (benzene) 의분자식이 C 6H 6 이라는것을알았으며, 모든방향족화합물의모체가되고있다. 벤젠및벤젠과유사한많은화합물들 ( 벤젠고리를가지고있는것들 ) 은대부분이냄새가좋기때문에방향족화합물 (aromatic compound) 이라고부른다. 벤젠은아세틸렌과같은실험식 (CH) 을가지는불포화화합물이지만,