대한임상병리학회지 : 제 19 권제 3 호 1999 Korean J Clin Pathol 1999; 19: 진단면역학 급성 B 세포계열백혈병에서 Membrane CD22 의임상적의의 김종우 김신규 한양대학교의과대학임상병리학교실 Clinical Signifi

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태겨 양
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1 대한임상병리학회지 : 제 19 권제 3 호 1999 Korean J Clin Pathol 1999; 19: 진단면역학 급성 B 세포계열백혈병에서 Membrane CD22 의임상적의의 김종우 김신규 한양대학교의과대학임상병리학교실 Clinical Significance of Membrane CD22 in B-lineage Acute Lymphoblastic Leukemia Jong Woo Kim, M.D. and Think-You Kim, M.D. Department of Clinical Pathology, College of Medicine, Hanyang University, Seoul, Korea Background : CD22 is a glycoprotein expressed on the surface of normal mature B cells and in the cytoplasm of normal B cell precursors. Cytoplasmic CD22 (ccd22) has been proposed as a immunologic marker for the diagnosis of B-lineage acute lymphoblastic leukemia (ALL) while membrane CD22 (mcd22) has been used as the marker for chronic lymphocytic leukemia, B-lineage lymphoma, and hairly cell leukemia, and mcd22 has not been routinely used for the diagnosis and subgrouping of ALL. The purpose of this study was to examine the expression of mcd22 in B-lineage ALL and its clinical significance. Methods : From 1992 to April, 1998, the leukemic cells of 64 patients newly diagnosed as B-lineage ALL by immunophenotyping were analyzed by the direct immunofluorescence method using monoclonal antibodies including mcd22. Results : mcd22 was positive in 53% (34/64) of all patients, 50% (21/42) of children and 59% (13/22) of adults. According to the immunologic classification, mcd22 was positive in 44% (4/9) of group II, 53% (19/36) of group III, 69% (11/16) of group IV, but negative in 3 cases of group V and VI. The complete remission rate of the mcd22 negative group in group III was significantly higher than that of the mcd22 positive group (P=0.008). There were significant differences in survival rates between the mcd22 positive group and the mcd22 negative group in group II, III and IV (P=0.046) and the above observed significant difference was seen when group III was separately tested (P=0.014). Conclusions : Our study demonstrated that the expression of mcd22 may be a poor prognostic factor in B-lineage ALL and that mcd22 shall be clinically used as a prognostic marker especially in group III, which is most common among the subgroups of B-lineage ALL. (Korean J Clin Pathol 1999; 19: ) Key words : Membrane CD22, Immunophenotying, B-lineage ALL, Prognosis 서 CD22는성숙된 B 세포의세포막과그전구세포에서는세포질에발현되는당단백이다 [1-3]. Cytoplasmic CD22 (ccd22) 는 terminal deoxynucleotidyl transferase 양성인정상골수 B 전구 접수 : 1998 년 월 28 일접수번호 : KJCP1231 수정본접수 : 1999 년 4 월 14 일교신저자 : 김신규우 서울시성동구행당동 17 한양대학교병원임상병리과전화 : , Fax : 론 세포의 80% 이상에서와급성 B 세포계열백혈병에서발현되는것으로알려져있다 [1]. Membrane CD22 (mcd22) 는정상성숙 B 세포와급성 B 세포계열백혈병의일부에서발현되며그외만성림프구성백혈병, B 계열림프종및털세포백혈병 (hairly cell leukemia) 등에대한면역표지자로도이용되어져왔다 [3, 4]. ccd22는 European Group for the Immunologic Characterization of Leukemias (EGIL) 에서급성 B 세포계열백혈병에대한면역표지자로의이용을제안한바있으나 [5] mcd22는급성 B 세포계열백혈병의진단이나아형분류에는통상적으로이용되지않았던면역표지자였다. 따라서급성 B 세포계열백혈병에 337

2 338 김종우 김신규 서의 mcd22의임상적의의에대한연구는전세계적으로도전무한실정이다. 본연구에서저자들은 mcd22의발현양상, mcd22 양성군과음성군의치료에대한반응및생존율을조사하여급성 B 세포계열백혈병에서의 mcd22 발현의임상적의의를밝히고자하였다. 대상및방법 1. 연구대상 1992년부터 1998년 4월까지한양대학병원임상병리과에서면역표현형검사결과급성 B 세포계열백혈병으로새롭게진단된예중 64예를대상으로 mcd22 검사를시행하였다. 면역표현형검사는골수천자액이나말초혈액의백혈병아세포 (leukemic blast) 숫자가 50% 이상인경우만을대상으로하였다. 보고서와의무기록을통해진단당시의나이, 성별, 면역표현형에따른분류, 치료후완전관해여부를조사하였고, 사망여부와연구종료시점까지의추적관찰여부를확인하여생존기간을구하였다. 소아환자는 Children Cancer Study Group (CCSG) 에의해각각의임상적예후군으로나누어치료하였으며성인환자의경우는 vincristine, prednisolone, daunorubicin 및 L-asparaginase (VPDL protocol) 또는 vincristine, prednisolone, adriamycin, methotrexate, cyclophophamide (L-17M protocol) 로치료하였다. 치료 4주째골수천자를시행하여아세포가전체유핵세포에서차지하는비율이 5% 미만일때완전관해로판정하였다. 2. 방법백혈병아세포가포함된골수천자액또는말초혈액을헤파린이첨가된튜브에채취하여 Ficoll-Hypaque (Pharmacia Biothech, Sweden) 를이용한 density gradient centrifugation법으로단핵세포층을분리하여 phosphate-buffered saline (PBS) 이나 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 배지로 2회세척한후세포수를 2 7 cell/ml로맞추었다. 세포부유액 50 L에 fluorescein isothiocyanate (FITC) 나 phycoerythrine (PE) 이부착된단일클론성항체 L를튜브에넣고잘섞어 4 에서 30 분간반응시킨후 PBS나 RPMI로세척하여 300 g 에서 5분간원침시킨다음상층액을버리고남은세포부유액 1방울 ( 약 L) 을슬라이드에옮겨형광현미경으로관찰하였다. 검사시사용한단일클론성항체는 mcd22 이외에 CD19, CD, CD20, CD3, CD5, CD7, CD13, CD33, CD34, CD14, CD45 및 HLA-DR (Becton-Dickinson, USA) 에대한것이었으며 CD20이양성인경우 cytoplasmic (C ) 와 surface immunoglobulin (sig) 을추가검사하였다. 양성판정은형광현미경으로염색여부를관찰한후할로겐램프를켜고 swing-out 콘덴서를이용하여광학현미경하 의아세포형태와형광염색을비교한후양성여부를판정하였다. 3. 분류 Foon 등 [6] 이제안한방법에따라급성 B 세포계열백혈병을 HLA-DR 및 CD34가양성인경우소위 non-t-all I군, HLA- DR, CD34 및 CD19가양성이면 II군, HLA-DR, CD19, CD이양성이면 III군, HLA-DR, CD19, CD, CD20이양성이면 IV군, HLA-DR, CD19, CD, CD20과 C 가양성이면 V군, HLA- DR, CD19, CD, CD20과 sig이양성이고 C 가음성인경우 VI 군으로분류하였다. 4. 통계분석 mcd22 양성군과음성군간의치료후완전관해율비교에는 two-tailed Fisher exact test, 생존율은 Kaplan-Meier법과 log rank statistics로분석하였으며 SPSS 통계프로그램을이용하였다. 결 과 1. 환자분포및 mcd22 항원표현상 연구대상 64명중남자가 37명 (58%), 여자가 27명 (42%) 이었으며소아가 42명 (66%), 성인이 22명 (34%) 이었다. 면역표현형에따라분류해보면 I군은없었고, II군이 9명 (14%), III군이 36 명 (56%), IV군이 16명 (25%), V군 1명 (2%) 그리고 VI군이 2명 (3%) 이었다. 전체 64예중 34예 (53%) 에서 mcd22가양성이었다. 성별에따라남자의경우는 37명중 18명 (49%) 이 mcd22 양성이었으며여자는 27명중 16명 (59%) 이양성이었다 (Table 1). 연령에따라소아의경우는 42명중 21명 (50%) 이 mcd22 Table 1. Expression of mcd22 in B-lineage ALL according to sex Male Female Total mcd22 + (%) 18 (49) 16 (59) 34 (53) mcd22 - (%) 19 (51) 11 (41) 30 (47) Total 37 (0) 27 (0) 64 (0) Table 2. Expression of mcd22 in B-lineage ALL according to age Child Adult Total mcd22 +(%) 21 (50) 13 (59) 34 (53) mcd22 - (%) 21 (50) 9 (41) 30 (47) Total 42 (0) 22 (0) 64 (0)

3 급성 B 세포계열백혈병에서 Membrane CD22 의임상적의의 339 Table 3. Expression of mcd22 in B-lineage ALL according to immunologic classification Group II Group III Group IV Group V Group VI mcd22+(%) 4 (44) 19 (53) 11 (69) 0 (0) 0 (0) mcd22 - (%) 5 (56) 17 (47) 5 (31) 1 (0) 2 (0) Total 9 (0) 36 (0) 16 (0) 1 (0) 2 (0) Table 4. Complete remission rate according to expression of mcd22 mcd22+ mcd22- P value All patients (N=64) 71% (24/34) 83% (25/30) 55 Group II, III, IV (N=61) 71% (24/34) 89% (25/27) Group III (N=36) 63% (12/19) 0% (17/17) Fig. 1. Kaplan-Meier survival curves according to the expression of mcd22 in all non-t-all patients (P=0.167). 양성이었으며성인은 22명중 13명 (59%) 이양성이었다 (Table 2). 면역표현형분류에따라서는 II군은 9명중 4명 (44%) 이, III 군은 36명중 19명 (53%) 이, IV군은 16명중 11명 (69%) 이 mcd22 양성이었고 V와 VI군의 3명은모두음성이었다 (Table 3). 2. 치료후완전관해율과의연관성전체환자를대상으로한경우완전관해율은 mcd22 양성군이 71% (24/34) 로음성군의 83% (25/30) 에비해낮았으나통계적으로유의한차이는없었다 (P=55). II군, III군및 IV군을대상으로한경우 mcd22 양성군이 71% (24/34), 음성군이 89% (24/27) 로유의한차이를보이지않았다 (P=0.118). 그러나빈도가가장높은 III군만을대상으로한경우 mcd22 양성군이 63% (12/19), 음성군이 0% (17/17) 로통계적으로유의한차이가있었다 (P=0.008)(Table 4). 3. 생존율과의연관성 Fig. 2. Kaplan-Meier survival curves according to the expression of mcd22 in non-t-all group II, III and IV (P=0.046). 전체환자를대상으로한경우 mcd22 양성군과음성군의생존곡선을비교한결과 mcd22 양성군이음성군에비해낮은생존율을보였으나통계적유의성은없었다 (P=0.167)(Fig. 1). II 군, III군및 IV군를대상으로한경우 (P=0.046)(Fig. 2) 와 III 군만을대상으로한경우 (P=0.014)(Fig. 3) 에서는생존율에통계적으로유의한차이를보였다. 고 찰 CD22는 Ig superfamily의한종류로 7개의도메인으로구성된세포외영역, 경막분절 (transmembrane segment) 및세포질영역으로구성된 kda의당단백이다 [7]. 이는정상골수 Fig. 3. Kaplan-Meier survival curves according to the expression of mcd22 in non-t-all group III (P=0.014).

4 340 김종우 김신규 전구 B 세포의세포질에나타나기시작하여 sig이 B 세포의표면에발현된후세포막에발현되는것으로알려져있다 [1, 2]. CD22가미성숙 B 세포에서세포질에위치하는이유는잘알려져있지않다. 이에대해 1) ccd22는세포내저장고 (internal reservoir) 역할을하여특정활성신호 (activation signal) 또는분화신호 (differentiation signal) 에반응하여세포막으로의이동 (cytoplasm-to-surface transport) 이발생하는것, 2) CD22의합성속도는정상이지만이를가공 (processing) 하고세포막에삽입되는과정이늦어발생하는현상이라는등의설명이제기되고있으나 [8, 9] CD22의세포질존재와이의세포막이동조절에관한분자생물학적기전에대한계속적인연구가필요한실정이다. 급성 B 세포계열백혈병에서의 CD22 발현양상은연구자마다일치하지않는다. CD22는 precursor-b ALL의세포질과분화단계상정상성숙 B 세포에대응하는 mature-b ALL의표면에발현된다고하였으나 [1-3,, 11], Boue 등 [8] 은 HLA-DR 및 CD19 양성인 B cell precursor ALL 16예중 ccd22는모두양성, mcd22는 15예에서양성이었음을보고하였다. Hurwitz 등 [12] 은급성 B 세포계열백혈병의면역표지자표현양상을정상골수 B 세포분화과정과비교하였을때 B 세포분화초기에나타나는 CD34와분화가진행된 B 세포표지자인 CD20 또는 mcd22가많은경우에서동시에발현되는등정상골수 B 세포분화과정중에서는볼수없는면역표현양상을발견이를 asynchronous expression으로표현한바있다. 본연구에서는총 64예중 34예 (53%) 에서 mcd22가발현되었고 non-t-all의아형별로보면 II군, III군및 IV군에서고르게발현되었으나 V군및 VI군 3예에서는발현되지않아 asynchronous expression 양상의결과를보였다. 이러한현상의원인에대해 1) 이는정상 B 세포분화과정중의한단계에서정지되어백혈병이발생 (leukemogenesis) 되는것이라는종전의견해와는달리정상 B 세포분화초기단계에서백혈병이발생되고또한백혈병아세포도분화과정을거치게되는데이과정이정상 B 세포와달라 asynchronous expression 양상을보이는것이라는의견 [12], 2) 정상골수 B 전구세포중 mcd22 양성인경우가소수에서발견되는데백혈병아세포가여기서기원했을가능성 [8], 3) anti-ig 또는 protein A 로활성화시킨성숙된정상 B 세포와 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) 로활성화시킨악성 B 세포에서 mcd22 발현이증가하는데이와같은방식으로어떤알려져있지않은원인에의하여 ccd22가세포막으로이동되어발현되는것에대한가능성 [8] 등이제기되어있다. CD22는 carcinoembryonic antigen, myelin-associated glycoprotein, neural cell adhesion molecule 및 CD33 등의 adhesion molecule과구조적상동성이있음이밝혀져있다 [13, 14]. 따라서시험관내에서 sialic acid를매개로 B 세포, T 세포, 단핵구, 중성구및적혈구등과결합함으로써세포간상호작용에관여하는것으로보고되고있다 [13-16]. 그러나생체내에서의생리적으로중요한 ligand에대해서는현재밝혀져있지않다 [7]. CD22는 세포내로의신호전달에도관여하는것으로알려져있다. 또한 B cell receptor (BCR) 복합체의 coreceptor로서 BCR 복합체를통한신호전달을조절하여 B 세포의성장, 분화및증식에관여하는것으로보고되고있다 [7, 17]. mcd22 음성인미성숙 B 세포가골수에위치하고또한골수가형질세포의주요저장소라는점, CD22 결핍생쥐에서말초혈액내 B 세포의수가유의하게감소된다는점에서 mcd22 발현이 B 세포의생체내분포와도관련이있는것으로도생각되고있다 [7, 18]. 이상에서와같이정상 B 세포에서의 mcd22의기능에대한연구결과는아직도미흡한실정이며더욱이급성 B 세포계열백혈병에서의 mcd22 발현이병태생리와예후에미치는영향에대해서는현재까지보고된바없다. 본연구에서전체환자를대상으로한경우 mcd22 양성군과음성군간에완전관해율이유의한차이가없었으나 III군만대상으로한경우유의한차이가있었고 (P=0.008) 생존율또한전체대상에서는유의한차이가없었으나 II군, III군과 IV군을대상으로한경우에서유의한차이가있었고 (P=0.046), III군만대상으로한경우에서도유의한차이를보였다 (P=0.014). 이러한연구결과는 mcd22 양성군이음성군에비해분화가진행된군으로생각해볼때 non-t-all의아형중분화가된군에서예후가좋지않다는점과도일치하는것으로사료된다. 따라서급성 B 세포계열백혈병에서 mcd22 발현여부는중요한예후추정인자가될수있을것으로생각되며특히아형중가장흔한 III군에서임상적으로적용될수있을것으로사료된다. 요약배경 : CD22는성숙된 B 세포의세포막과그전구세포에서는세포질에발현되는당단백이다. ccd22는급성 B 세포계열백혈병에대한면역표지자로제안한바있으나 mcd22는만성림프구성백혈병, B 계열임파종및털세포백혈병등에대한면역표지자로이용되었고급성림프구성백혈병의진단이나아형분류에통상적으로이용되지않았던면역표지자였다. 본연구에서저자들은급성 B 세포계열백혈병에서의 mcd22 발현양상과그임상적의의를밝히고자하였다. 방법 : 1992년부터 1998년 4월까지면역표현형검사결과급성 B 세포계열백혈병으로새롭게진단된예중 64예를대상으로 mcd22 검사를시행하였다. 면역표현형분석은각각의단일클론성항체를이용한직접면역형광법으로시행하였다. 결과 : 전체대상 64예중 53% (34/64) 에서 mcd22가양성이었다. 소아에서는 50% (21/42), 성인은 59% (13/22) 에서양성이었다. 면역표현형중 II군은 44% (4/9), III군은 53% (19/36), IV군은 69% (11/16) 에서양성이었고 V군의 1예와 VI군의 2예는모두음성이었다. 완전관해율은 III 군에서 mcd22 양성군이 63% (12/19), 음성군이 0% (17/17) 로통계적으로유의한차

5 급성 B 세포계열백혈병에서 Membrane CD22 의임상적의의 341 이가있었다 (P=0.008). 생존율은 II군, III군및 IV군을대상으로한경우 (P=0.046) 와 III군만을대상으로한경우 (P=0.014) 에서 mcd22 양성군이음성군에비해유의하게낮았다. 결론 : 급성 B 세포계열백혈병에서 mcd22 발현여부는중요한예후추정인자가될수있을것으로생각되며특히아형중가장흔한 III군에서임상적으로적용될수있으리라사료된다. 참고문헌 1. Campana D, Janossy G, Bofill M, Trejdosiewicz LK, Ma D, Hoffbrand VH, et al. Human B cell development: I. Phenotypic differences of B lymphocytes in the bone marrow and peripheral lymphoid tissue. J Immunol 1985; 134: Bofill M, Janossy G, Janossa M, Burford GD, Seymour GJ, Wernet P, et al. Human B cell development. II. Subpopulations in the human fetus. J Immunol 1985; 134: Dorken B, Moldenhauer G, Pezzutto A, Schwartz R, Feller A, Kiesel S, et al. HD39 (B3), a B lineage-restricted antigen whose cell surface expression is limited to resting and activated human B lymphocytes. J Immunol 1986; 136: Schwarting R, Stein H, Wang CY. The monoclonal antibodies S-HCL 1 ( Leu-14) and S-HCL 3 ( Leu-M5) allow the diagnosis of hairly cell leukemia. Blood 1985; 65: Bene MC, Castoldi G, Knapp W, Ludwig WD, Matutes E, Orfao A, et al. Proposals for the immunological classification of acute leukemias. Leukemia 1995; 9: Foon KA and Todd RF III. Immunologic classification of leukemia and lymphoma. Blood 1986; 68: Tedder TF, Tuscano J, Sato S, Kehrl JH. CD22, a B lymphocyte-specific adhesion molecule that regulates antigen receptor signaling. Ann Rev Immunol 1997; 15: Boue DR and LeBien TW. Expression and structure of CD22 in acute leukemia. Blood 1988; 71: Boue DR and LeBien TW. Structural characterization of the human B lymphocyte-restricted differentiation antigen CD22. Comparison with CD21 (complement receptor type2/epstein Barr virus receptor). J Immunol 1988; 140: Janossy G, Coustan-Smith E, Campana D. The reliability of cytoplamic CD3 and CD22 antigen expression in the immunodiagnosis of acute leukemia: A study of 500 cases. Leukemia 1989; 3: Mason DY, Stein H, Gerdes J, Pulford KAF, Ralfkiaer E, Falini B, et al. Value of monoclonal anti-cd22 (p135) antibodies for the detection of normal and neoplastic B lymphoid cells. Blood 1987; 69: Hurwitz CA, Loken MR, Graham ML, Karp JE, Borowitz MJ, Pullen DJ, et al. Asynchronous antigen expression in B lineage acute lymphoblastic leukemia. Blood 1988; 72: Stamenkovic I and Seed B. The B-cell antigen CD22 mediates monocyte and erythrocyte adhesion. Nature 1990; 345: Wilson GL, Fox CH, Fauci AS, Kehrl JH. cdna cloning of the B cell membrane protein CD22: a mediator of B-B cell interactions. J Exp Med 1991; 173: Engel P, Nojima Y, Rothstein D, Zhou LJ, Wilson GL, Kehrl JH, et al. The same epitope on CD22 of B lymphocytes mediates the adhesion of erythrocytes, T and B lymphocytes, neutrophils, and monocytes. J Immunol 1993; 150: Engel P, Wagner N, Miller AS, Tedder TF. Identification of the ligandbinding domains of CD22, a member of the immunoglobulin superfamily that uniquely binds a sialic acid-dependent ligand. J Exp Med 1995; 185: Cambier JC, Pleiman CM, Clark MR. Signal transduction by the B cell antigen receptor and its coreceptors. Ann Rev Immunol 1994;12: Erickson LD, Tygrett LT, Bhatia SK, Grabstein KH, Waltschmidt TJ. Differential expression of CD22 (Lyb8) on murine B cells. Intern Immunol 1996; 8:

Jkbcs016(92-97).hwp

Jkbcs016(92-97).hwp Expression of bcl-2 and Apoptosis and Its Relationship to Clinicopathological Prognostic Factors in Breast Cancer - A Study with Long Term Follow-up correlated with the survival rate.(journal of Korean