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1 성인남성에서고려홍삼의섭취가항산화효소와지질과산화에미치는영향 김지영 1 김오연 1 이종호 1,2 연세대학교노화과학연구소 1, 연세대학교생활과학대학식품영양학과 2 The Effect of Korean Panax Red Ginseng Supplementation on Antioxidant Enzymes Activities and Lipid Peroxides in Korean Men Ji Young Kim 1, Oh Yoen Kim 1, Jong Ho Lee 1,2 Research Institute of Science for Aging 1, Department of Food and Nutrition 2, Yonsei University, Seoul, Korea Abstract This study was performed to examine the effect of Korean red ginseng on antioxidant enzyme activity and lipid peroxides. Healthy men who were not diagnosed any type of disease were included in this study and subjects were randomly assigned to Korean red ginseng or placebo group. We measured anthropometric parameters, serum lipids, antioxidant enzymes activities, and lipid peroxide concentrations before and after the 8 weeks intervention period. After supplementation, Korean red ginseng group showed significant increasement of Superoxide dismutase (P<0.05) and glutathione peroxidase (P<0.05) activities, decreased tendency of malondialdehyde (P<0.1) and oxdizied LDL (P<0.1) concentrations. In addition, net differences of glutathione peroxidase activity (P<0.05) increased and malondialdehyde (P<0.01) and oxdizied LDL (P<0.01) concentrations decreased significantly in Korean red ginseng group compared with placebo group. The result of present study demonstrated the supplementation of Korean red ginseng for 8 weeks may protect LDL cholesterol from oxidative stress and increase antioxidative enzyme activities. ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Key Words: Korean red ginseng, Antioxidant enzyme activity, Lipid peroxide, LDL oxidation 논문접수일 : , 수정논문접수일 : , 심사완료일 : 책임저자 : 김지영서울시서대문구연세로 50 연세대학교노화과학연구소 Tel: , Fax: , kjy7598@yonsei.ac.kr * This study was supported by a grant from the Korean Society of Ginseng funded by the Korea Ginseng Cooperation

2 김지영등 : 고려홍삼의섭취가지질과산화물에미치는영향 서 론 지질과산화물농도에미치는영향에대해알아보고자하였다. 고려인삼 (Panax ginseung C.A. Meyer) 은전통적으로건강증진을위한약재로사용되어왔으며, 중국, 일본, 미국, 캐나다등에서도재배되고있으나, 우리나라인삼은그중가장약효가뛰어난것으로알려져있다. 홍삼은수삼을증숙한후건조하여제조한것으로이과정에서수삼또는백삼과는다른성분이생성되는데, 백삼에존재하는 malonyl-ginsenoside Rb1, Rb2, Rc, Rd의 malonyl 그룹이떨어져서 ginsenoside Rb1, Rb2, Rc, Rd가생성되며 ginsenoside의 C20 위치에서 glycosyl 잔기가이탈되거나 C20 위치에서수산기가이성화되어 20(S)-ginsenoside Rg3, 20(R)-ginsenoside Rg2, 20(S)-ginsenoside Rg2, 20(R)-ginsenoside Rh 으로전환된다. 이러한홍삼제조과정중의화학성분의변화가백삼과는다른홍삼의생리활성변화를유도하는것으로생각되고있다. 1-3 식품의약품안전청영양기능식품기준과에서제시한자료에의하면, 현재까지수행된인체적용시험중심으로인삼및홍삼은 피로회복, 면역력증진, 혈소판응집억제를통한혈액흐름에도움 의기능성이인정되었다. 4 이외에도혈당강하작용, 항산화작용, 상처치유효과등의약효가있는것으로알려져있다. 1 홍삼의항산화효과는주로동물실험에서연구되어져왔는데, 항산화효소인 Superoxide dismutase (SOD) 및 Glutathione peroxidase (GPx) 활성변화에대한연구가주를이루고있으며, 5-7 지질과산화물에대한연구는매우미흡하며, 특히질환이없는건강한성인을대상으로한연구는거의없다. 본연구는질환을진단받지않았고, 직장생활을하면서중등도의스트레스를받고있고, 항산화제나과일및채소섭취가부족하여항산화능이떨어져있다고판단되는 30~40세의남성을대상으로하여홍삼분말의섭취가항산화능및 연구방법 1. 연구대상자선정본연구는 20세이상 50세이하, 처음방문시측정한공복혈당농도가 125 mg/dl 이하이고, 음주및흡연하거나중등도의스트레스를받는직장인으로식사습관조사결과하루에과일 2교환단위또는야채 3교환단위미만섭취하는남성을대상으로하였다. 대상자모집시연구의기간, 목적과방법, 준수사항및기대효과등에대해충분히설명하고대상자에게자의에의한인체시험서면동의서에서명을받았다. 본연구의대상자는질환을진단받은적이없는건강한남성으로, 최근 3개월간항산화제를복용하고있거나, 공복혈당이 126 mg/dl 이상인자, 하루에과일 2교환단위, 야채 3교환단위이상섭취하는자, 신장기능, 간기능, 갑상선기능이비정상적인사람, 운동장애나통증등으로시험참여가불가능한사람은제외하였다. 본연구는연세대학교인체시험심의위원회 (Institutional review board, IRB) 의승인을받았다. 2. 연구디자인본연구는무작위배정, 이중맹검, 위약대조연구디자인 (randomized, double-blind, placebocontrolled design) 으로진행되었다. 인체시험에등록된피험자에대하여적합성평가후 48명이등록되었으며, 무작위난수표에따라무작위배정하였다. 본연구에서사용된제제는한국인삼공사에서캡슐형태로제조하였으며, 시험제제의경우 1캡슐당홍삼분말 300 mg, placebo제제의경우 1캡슐당옥수수전분 mg을함유하

3 Korean J Lipidol 2011;21: 였다. 시험군또는대조군으로배정된대상자는시험제제또는 placebo제제를아침과점심식후 6캡슐씩, 저녁식후 8캡슐을물과함께섭취하여하루에총 6.0 g을 8주간섭취하게하였으며, 연구에참여하는동안평상시식습관및과일및채소섭취량을그대로유지하도록하였다. 남등 4 이작성한용역연구개발사업보고서에서동물모델및인체시험에서의적용을근거로하루복용량을 3~6 g으로제안하고있으며, 실제로판매되는홍삼제품의홍삼섭취량은 6 g 이상이므로본연구에서의하루홍삼섭취량을 6.0 g으로설정하였다. 3. 인체계측, 식품섭취량및활동량조사인체계측으로신장과체중을측정하였고, 체중을신장의제곱으로나누어체질량지수 (body mass index, BMI) 를계산하였으며, 체지방백분율 (% body fat) 은 Inbody 3.0 (Biospace, Korea) 을이용하여측정하였다. 대상자를평평한바닥에서도록하고, 줄자를이용하여허리와엉덩이둘레를측정하였다. 혈압은 10분이상안정상태를유지시킨후자동혈압계를사용하여수축기혈압 (systolic blood pressure) 과이완기혈압 (diastolic blood pressure) 을측정하였다. 평상시음식섭취량을알아보기위해 24시간회상법에의해식품섭취량을확인하였고, 영양소섭취실태는조사된자료를기초로하여개인별 1일식품및영양소섭취량을영양평가프로그램 (CAN-Pro 2.0. Computer Aided Nutritional Analysis Program for Professionals, 한국영양학회부설영양정보센터 ) 으로분석하여산출하였다. 연구대상자에대한기초대사량 (basal metabolic rate, BMR) 은 Harris -Benedict 방정식을이용하여구하였고, 1일열량소비량 (total energy expenditure, TEE) 은 24시간활동상태를고려하여계산하였다. 연구기간동안섭취한열량과소비한열량의측정을위해 8 주방문전평일 2회, 주말 1회식품섭취량과활동량을기록하도록하였다. 4. 혈청지질및혈당농도검사당일아침공복시정맥에서채혈하여혈청총콜레스테롤 (total cholesterol) 과중성지방 (triglyceride) 은 Auto Chemistry Analyzer Express Plus (Chiron Diagnostics Co., MA, USA) 를이용하여효소법으로측정하고, HDL 콜레스테롤 (high density lipoprotein: HDL) 은침전제를이용하여유미지립 (chylomicron), 저밀도지단백 (low density lipoprotein: LDL), 초저밀도지단백 (very low density lipopeotein: VLDL) 을침전시킨후상층액에있는 HDL 중에서콜레스테롤을다시효소법으로측정하였다. LDL 콜레스테롤은 Friedwald 공식 ( 총콜레스테롤 ꠏ HDL 콜레스테롤-중성지방 /5) 을이용하여구하였다. 공복혈당 (fasting blood glucose) 는산화효소법으로 Beckman glucose Analyzer (Beckman Instruments, Irvine, CA, USA) 를이용하여측정하였다. 5. 혈장항산화효소활성도혈장 GPx (glutathione peroxidase) 활성은 hydrogen peroxide를기질로이용한 coupled enzyme procedure 로 Beckman Spectrometer를이용하여 340 nm에서산화형 glutathione (GSSG) 의형성에따른 NADPH 의흡광도가감소되는속도를측정하였다. 혈장 Superoxide dismutase (SOD) 활성은전처리후 Wallac Victor 2 (PerkinElmer Life science, Turku, Filand) 를이용하여 450 nm에서측정하였다. 6. 혈장 Malondialdehyde (MDA) 및 Oxidized LDL (ox-ldl) 농도혈장 Malondialdehyde (MDA) 농도는 thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS Assay Kit, Zepto Metric Inc., USA) 를사용하여매뉴얼대로전처리후 Wallac Victor2 (PerkinElmer Lifescience, Turku, Filand) 로비색정량하고, 혈장 ox-ldl농도는 enzyme immunoassay kit (Mercodia, Uppsala, Sweden) 을이용하여 450 nm에서 Wallac Victor

4 김지영등 : 고려홍삼의섭취가지질과산화물에미치는영향 (PerkinElmer Lifescience, Turku, Filand) 로비색정량하였다. 7. 자료의통계분석연구자료는 Window용 SPSS package 12.0 (Statistical Package for the Social Science, SPSS Ins, IL, USA) 를이용하여통계처리하였고, 모든측정치들은평균 ± 표준오차 (mean±s.e.) 로표시하였다. 각군내서의제제섭취전과후의변화는 Wilcoxon signed ranks test를, 각군의초기값과제제섭취전후의변화값비교분석은 Mann- Whitney test를통해검정하였다. 모든검정시에는 P<0.05일때통계적으로유의하다고해석하였다. 군 19명대조군 21명이었다. 본연구에참여한대상자의평균연령은대조군 37.2±1.78세, 시험군 37.7±1.79세이고, 현재흡연및음주를하는대상자의비율은대조군각각 17.5% 와 50%, 시험군각각 15%, 45% 로군간차이가없었으며, 위약및시험제품섭취전후체질량지수및혈압의유의적인차이가없었다. (Table 1) 2. 식사섭취및활동량변화 8주간홍삼분말또는위약섭취후활동량및에너지섭취량분석결과두군모두유의적인차이가없었으며, 총탄수화물, 단백질, 지방의섭취비율에서도두군모두유의적인차이가없었다 (Table 2). 결 과 3. 혈청지질및혈당의변화 1. 대상자의일반적특성본인체시험에참여하기로동의하고스크리닝검사를통해등록된대상자는 48명이었으며, 중도포기및개인사정으로 5명이탈락하여총 43 명이시험을완료하였다. 이중섭취율미달 (75% 기준 ) 로유효성평가가불가능한 3명을제외한 40명을대상으로결과분석을실시하였으며, 시험 대조군과시험군모두위약및홍삼분말섭취후혈청중성지방과총콜레스테롤및 LDL 콜레스테롤, HDL 콜레스테롤, 공복혈당농도의유의적인차이가없었다 (Table 3). 4. 항산화효소활성도의변화 SOD 활성도는시험군에서는홍삼분말섭취후유의적으로증가하였고 (P=0.049) 대조군에서 Table 1. Anthropometric parameters and blood pressure before and after intervention Placebo (n=21) Test (n=19) 0 week 8 week 0 week 8 week P a P b Age (years) 37.2± ±1.79 current smoker, n (%) 7 (17.5) 6 (15.0) current drinker, n (%) 20 (50.0) 18 (45.0) Body mass index (kg/m 2 ) 25.1± ± ± ± Blood pressure Systolic BP (mmhg) ± ± ± ± Diastolic BP (mmhg) ± ± ± ± mean±s.e. 1Blood pressure. No significant differences in initial value between placebo and test group. P a compared with initial value in placebo group by Wilcoxon singed ranked test. P b compared with initial value in test group by Wilcoxon singed ranked test

5 Korean J Lipidol 2011;21: Table 2. Dietary food intake and total energy expenditure before and after intervention Placebo (n=21) Test (n=19) 0 week 8 week 0 week 8 week P a P b TEE (kcal) ± ± ± ± Estimates of daily nutrient intakes and energy expenditure Energy intake (kcal) ± ± ± ± Carbohydrate (%) 59.9± ± ± ± Protein (%) 16.3± ± ± ± Fat (%) 3.6± ± ± ± mean±s.e. 1 Total energy expenditure. No significant differences in initial value between placebo and test group. P a compared with initial value in placebo group by Wilcoxon singed ranked test. P b compared with initial value in test group by Wilcoxon singed ranked test. Table 3. Lipid profiles and fasting glucose levels before and after intervention Placebo (n=21) Test (n=19) 0 week 8 week 0 week 8 week P a P b Triglyceride (mg/dl) 129.3± ± ± ± Total cholesterol (mg/dl) 196.5± ± ± ± LDL cholesterol (mg/dl) 118.3± ± ± ± HDL cholesterol (mg/dl) 47.8± ± ± ± Glucose (mg/dl) 93.5± ± ± ± mean±s.e. No significant differences in initial value between placebo and test group. P a compared with initial value in placebo group tested by Wilcoxon singed ranked test. P b compared with initial value in test group tested by Wilcoxon singed ranked test. Fig. 1. Plasma antioxidant enzymes activities before and after intervention. mean±s.e. tested by Wilcoxon signed ranks test and Mann-Whitney test

6 김지영등 : 고려홍삼의섭취가지질과산화물에미치는영향 는차이가없었으며, 군간변화량비교결과, 대조군과비교하여시험군에서유의적으로증가하는경향을보였다 (P=0.052). GPx 활성도는홍삼분말섭취후유의적으로증가하였고 (P=0.036), 군간변화량비교에서도대조군과비교하여시험군에서유의적으로증가하였다 (P=0.040) (Fig. 1). 5. 혈장 MDA 및 Oxidized LDL 농도변화지질과산화물인혈장 MDA농도는대조군에서는유의적으로증가하였고 (P=0.033) 시험군에서는홍삼분말섭취후유의적으로감소하는경향을보였으며 (P=0.084), 군간변화량비교결과, 대조군과비교하여시험군에서유의적으로증가하였다 (P=0.007). Oxidized LDL 농도역시대조군에서는유의적으로증가하고 (P=0.001), 시험군에서는유의적으로감소하는경향을보였으며 (P=0.070), 군간변화량비교결과, 대조군과비교하여시험군에서유의적으로감소하였다 (P=0.001) (Fig. 2). 고찰 생체내에서여러경로로발생하는활성산소와 free radical 들은생체내에서단백질의 SH기나 DNA와반응하여생체구성분자의구조적변화를일으킨다. 또한지질과산화물의함량이증가되어세포의산화적손상유발하며, 이는생리적기능을저하시켜염증, 자가면역질환, 동맥경화, 간질환및암등발생이나진전에관여하며, 지질과산화물의증가는중요한노화원인으로인식되고있다 인삼은 Panax ginseng C. A. Meyer를기원식물로한건조근을말하며, 가공방법에따라크게홍삼과백삼으로분류된다. 홍삼은수삼을수증기또는기타방법으로쪄서익혀건조한것을말하며, 백삼은수삼을햇볕 열풍또는기타방법으로익히지아니하고말린것을말한다. 2 홍삼은진후건조과정에서갈색화반응이일어나고, 홍삼의장기저장시에도비효소적갈색화반응이완만하게진행되어갈색화반응생성물이증가되는데, 이때생기는갈색화반응생성물은항산 Fig. 2. Plasma oxidized LDL and MDA concentrations before and after intervention. mean±s.e. tested by Wilcoxon signed ranks test and Mann-Whitney test

7 Korean J Lipidol 2011;21: 화활성을나타내며, 이는생체내과산화지질생성억제로노화억제효과가있다고보고되고있다. 11,12 본연구는직장생활을하면서중등도의스트레스를받고있고, 항산화제나과일및채소섭취가부족하여항산화능이떨어져있다고판단되는 20~50세의남성 43명을대상으로무작위배정, 이중맹검, 위약-대조연구디자인을통해 8주간의홍삼분말섭취가혈청지질및당질, 항산화효소활성도및지질과산화물농도에미치는영향을평가하고자하였다. 체내의활성산소에대한방어기전을담당하는항산화효소에는 SOD, GPx 등이있는데, 이중 SOD는과산화음이온의전환을촉매하고, GPx 는과산화수소를물로환원시킨후수산화과산화물을환원시키는기능을한다. 13 홍삼의항산화효과는 SOD의직접적인작용과홍삼의특정성분들이생체내에서내인성항산화물질의합성능력을강화시킴으로써산화적손상에대한방어기전을향상시킨다고알려져있다. 14 오등 5 은노화촉진쥐에인삼의항산화성분인 ginsenoside Rb2를투입한후 SOD 활성을증가시키는것으로나타났으며, 그결과활성산소에의한조직의공격을방어하는작용을가지고있다고하였다. 또한 Yamaoka 등 6 은홍삼투여시흰쥐의뇌와간에서 SOD의활성도가 30~50% 증가하였음을보고하였으며, 전등 7 은고지방식이로생육한쥐의간에서인삼추출물을투여하였을때 GPx의작용과생체내에서내인성항산화물질인 GSH의합성능력을강화시킴으로써산화적손상에대한방어기전을향상시켰다고보고하였다. 본연구결과, 시험군에서 8주후, 섭취전과비교하여 SOD 활성도가평균 2.44±1.01 U/mL 증가하였고 (P=0.049), GPx 활성도는평균 9.47±3.78 nmol/min/ml 증가하여 (P=0.043), 대조군과의변화량비교에서도유의적으로증가하는경향을보이거나, 유의적으로증가하였다 ( 각각 P=0.052, P=0.040). 이는동물실험과일관성있는결과로, 인체에서도홍삼섭취시항산화효소활성도의증가를확인할수있었다. 지질과산화는활성산소매개체가세포자체의국소적인방어작용을초과함으로써발생되는세포손상의주된형태로서, O 2-, H 2O 2, OH 등이지질과산화를유발시키며, SOD, catalase 등산소라디칼을제거하는효소활성이증가하며지질과산화가감소된다. 15 성등 14 은홍삼추출물투여가생쥐간에서지질과산화물인 MDA 의함량을유의성있게감소하였다고보고하였다. 또한 Yakozawa 등 16 은신장의국소빈혈이나 cephaloridine에의해서유도된신장질환에걸린흰쥐에진세노사이드 Rd를투여한결과 MDA 함량이유의성있게감소되었다고보고하였다. 본연구에서도홍삼분말섭취후혈장 MDA 농도가감소하는경향 (P=0.084) 을보였고, 대조군에서는유의적으로증가하여 (P=0.007) 군간변화량비교에서시험군에서유의적으로감소하는것으로나타났다 (P=0.007). 혈중 LDL은내피세포의 lipoxygenase, 대식세포에서생성되는 superoxide radical, 그리고식품을통하여들어온과산화지질에의하여 oxidized LDL로산화된다. 17 산화적스트레스에의해생성된 oxidized LDL은높은세포독성이있는지질과산화물을가지고있어서세포조직에확산되어독성을나타내고내피세포에염증을일으켜동맥경화를유발한다. 18 LDL의산화를억제하기위한항산화제연구가활발히진행중이며, 비타민 E, carotenoids, catechin, flavonoid 등에의한 LDL 산화억제효과가보고되었으나, 홍삼의 LDL 산화억제에대한연구는아직미미한실정이다. 본연구결과, 홍삼분말을 8주간섭취후 oxidized LDL 농도가감소하는경향 (P=0.070) 을보였으며, 대조군과변화량비교에서도유의적으로감소하는결과P=0.001) 를보였다. 이는홍삼분말의섭취가 LDL 콜레스테롤을산화적손상으로부터보호하는작용이있을것으로생각되

8 김지영등 : 고려홍삼의섭취가지질과산화물에미치는영향 며더많은수의대상자로인체에서의작용을확인할필요가있겠다. 본인체시험을통하여하루 6 g의홍삼분말을 8주간섭취시켰을때, 섭취전과비교하여항산화효소활성의증가와지질과산화물인 MDA농도및 oxidized LDL 농도의감소경향과대조군과변화량비교에서유의적인항산화효소활성의증가와 MDA농도및 oxidized LDL 농도의유의적인감소를통해홍삼분말의섭취가항산화효소활성을증가시켜산화적스트레스로인한지질과산화물및산화LDL 생성을감소시키는것으로사료된다. 인체에서의명확한결과를얻기위해서는대상자수를더확보하고, 복용기간을연장하는등의후속연구도필요할것이다. 요약 본연구는질환을진단받지않았고, 직장생활을하면서중등도의스트레스를받고있고, 항산화제나과일및채소섭취가부족하여항산화능이떨어져있다고판단되는 30~40세의남성을대상으로무작위배정, 이중맹검, 위약-대조연구디자인을통해 8주간의홍삼분말섭취가항산화능및지질과산화물농도에미치는영향평가하기위하여실시되었다. 시험군또는대조군으로배정된대상자는시험제제또는 placebo제제를하루 20캡슐씩물과함께섭취하게하였으며, 연구에참여하는동안평상시식습관및과일및채소섭취량을그대로유지하도록하였다. 본연구에서사용된시험제제에는 1캡슐당홍삼분말 300 mg을함유하였고, placebo제제에는옥수수전분 mg을함유하였다. 총 43명이시험을완료하였으며, 이중섭취율미달로유효성평가가불가능한 3명을제외한 40명을대상으로결과분석을실시하였으며, 시험군 19명대조군 21명이었다. 시험군에서 8주후, 섭취전과비교하여 SOD 활성도가평균 2.44±1.01 U/mL 증가하였고 (P=0.049), GPx 활성도는평균 9.47±3.78 nmol/min/ml 증가하여 (P=0.043), 대조군과의변화량비교에서도유의적으로증가하는경향을보이거나, 유의적으로증가하였다 ( 각각 P=0.052, P=0.040). 홍삼분말섭취후혈장 MDA 및 oxidized LDL 농도가감소하는경향 (P=0.084, P=0.070) 을보였고, 대조군에서는유의적으로증가하여군간변화량비교에서시험군에서유의적으로감소하는것으로나타났다 (P=0.007, P=0.001). 본연구결과홍삼분말을 8주간섭취시켰을때, 섭취전과비교하여항산화효소활성의증가와지질과산화물인 MDA농도및 oxidized LDL 농도의감소경향과대조군과변화량비교에서유의적인항산화효소활성의증가와 MDA농도및 oxidized LDL 농도의유의적인감소를통해홍삼분말의섭취가항산화효소활성을증가시켜산화적스트레스로인한지질과산화물및산화 LDL 생성을감소시키는것으로생각되며, 대상자수를더확보하고, 복용기간을연장하는등의후속연구도필요할것으로사료된다. 참고문헌 1. Choi KT. Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng C A Meyer Acta Pharmacol Sin 2008;29(9): Nam KY. The Comparative Understanding between Red Ginseng and White Ginsengs, Processed Ginsengs (panax ginseng C. A. Meyer). J Ginseng Res 2005;29(1): Lü JM, Yao Q, Chen C. Ginseng Compounds: An Update on their Molecular Mechanisms and Medical Applications Current Vascular

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