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1 대한기생충학 열대의학회제 58 회총회및학술대회 (2016 년도 ) PROGRAM AND ABSTRACTS OF THE 58 TH ANNUAL MEETING OF THE KOREAN SOCIETY FOR PARASITOLOGY AND TROPICAL MEDICINE (2016) 순서및초록 대한기생충학 열대의학회 THE KOREAN SOCIETY FOR PARASITOLOGY AND TROPICAL MEDICINE

2 대한기생충학 열대의학회 제 58 회총회및학술대회 (2016 년도 ) 회장 : 이영하교수 ( 충남의대 ) 부회장 : 이원자과장 ( 질병관리본부 ) 장소 : 충남대학교의과대학캠퍼스내간호대학대강당일자 : 2016년 10월 27일 28일 10 월 27 일목요일 12:00-13:00 등록 13:00-13:05 개회 ( 회장이영하 ) 13:05-13:10 환영사 ( 충남대학교의과대학장 ) 13:10-14:10 연제발표 1 (O1-O4) 14:10-14:20 신풍호월학술상수상 14:20-14:40 휴식 14:40-15:40 초청강연 15:40-16:25 연제발표 2 (O5-O7) 16:25-16:40 휴식 16:40-17:20 신진연구자발표 1 (YS1-YS4) 17:20-18:20 포스터 3분발표 18:20-18:30 휴식 18:30-20:30 간친회및경매 10 월 28 일금요일 09:00-10:00 교육프로그램 I 10:00-10:10 휴식 10:10-10:50 신진연구자발표 2 (YS5-YS8) 10:50-11:35 연제발표 3 (O8-O10) 11:35-12:20 총회및학술상수상, 사진촬영 12:20-13:00 점심 13:00-14:00 포스터세션 14:00-15:00 연제발표 4 (O11-O14) 15:00-15:30 교육프로그램 II 15:30-16:00 우수연제및포스터우수상발표및수상 16:00 폐회 * 이발표논문집은 2016 년도정부재원 ( 과학기술진흥기금및복권기금 ) 으로 한국과학기술단체총연합회와한국건강관리협회의지원을받아발간되었음.

3 대한기생충학 열대의학회장인사말 안녕하십니까? 이자리에참석해주신대한기생충학 열대의학회명예회원님과선후배, 동료, 그리고내외귀빈여러분께감사의인사를올립니다. 청명한하늘과알록달록한단풍으로인해깊어가는가을의아름다운시기에과학과교통의중심도시대전에있는충남대학교의과대학에서우리대한기생충학 열대의학회제58회총회및연례학술대회가개최되어대단히기쁩니다. 지난해학술대회이후 1년사이우리학회에는소소한변화가있었습니다. 우리학회의공식적인소식지 (News Letter) 창간호가발간되었습니다. 새로시작하는소식지는학회의업무를회원여러분에게알리는것뿐만아니라회원개인이나학교에서일어난기억에남을만한일을보관하는상호소통의장이될것입니다. 이번소식지에축사를기고해주신이순형명예교수님께특별히감사드립니다. 그리고 2018년대구에서개최되는제14차국제기생충학회 (ICOPA) 의준비도착실히계획대로진행되고있습니다. 학술대회대행사 (PCO) 를선정하였고, 핀란드에서개최된유럽기생충학회, 호주 ICTMM 등에조직위원들이참여하여 2018 국제기생충학회를홍보하였습니다. 우리학회의학술지인 Korean Journal of Parasitology (KJP) 은 2015년현재 Impact Factor가 1.027로꾸준히잘관리되고있어, KJP를아껴주신회원여러분들과잡지발간을맡아주신편집진의노고와헌신에학회를대표하여깊이감사드립니다. 2일간지속되는학술대회에서는초청강연, 교육프로그램, 구연및포스터발표, 연이어포럼제주등다양한학술프로그램이진행됩니다. 초청강연을수락하여주신제주의전원이근화교수님과 젠바디정점규사장님께감사드립니다. 또한교육프로그램은신진회원들의역량을강화시킬수있는절호의기회로, 교육프로그램을담당하여주신채종일명예교수님, 엄기선, 신성식교수님께도감사드립니다. 회원여러분! 추계학술대회는전체회원이한자리에모여기생충학및열대의학각분야의연구결과를발표하고토론하면서학문의발전을도모하게되는학회최고의학술행사입니다. 이번양일간의학술회의에적극적으로참여하셔서열띤토론의장을만들어주시기부탁합니다. 학술활동외에간친회에도참석하시고, 곳곳에서시간날때마다귀중한만남의장을만들어갈것을기대합니다. 또한이번학술대회에연계해서진행되는한일기생충학자세미나인포럼제주 (Forum Cheju) 에도많은참여를부탁드립니다. 끝으로이번학술대회를준비하기위해많은분들이정말고생하셨습니다. 학술프로그램을맡아작성해주신한은택학술부장님과차광호교수님, 학술대회실무를지원하여주신양현종총무부장님, 류제영선생님, 유학선기획홍보부장님을비롯한임원님들의헌신적인참여와노력에감사합니다. 또한학회장소를제공해주시고뒤에서많은지원을아끼지않으신충남의대감염생물학교실의차광호, 육재민교수님, 최인욱조교선생님을비롯한교실원들의도움에감사드립니다. 또한학술대회및포럼제주를재정적으로후원하여주신한국건강관리협회채종일회장님을비롯한임원진들에게감사드립니다 년 10 월 27 일 학회장이영하 - 1 -

4 대한기생충학 열대의학회제 58 회총회및학술대회 [1일차] 2016년 10월 27일 ( 목요일 ) 12:00 13:00 등록 13:00 13:05 개회사 ( 학회장 ) 13:05 13:10 환영사 ( 충남대학교의과대학장 ) 13:10 14:10 연제발표 1 좌장 : 홍성종교수 O1 Opisthorchis viverrini (Digenea: Opisthorchiidae) in Myanmar: The first discovery of human case and infection status of metacercariae in fish hosts 손운목, 나병국, 김정아, 김희주 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실 ) 채종일, 이건훈, 박종복, 김현승 ( 한국건강관리협회 ) TT Htoon, HH Tin ( 미얀마국립보건연구소 ) O2 Clonorchis sinensis omega-class glutathione transferase play major roles in the protection of reproductive system during maturation and the response to oxidative stress JG Kim, CS Ahn, Y Kong (Sungkyunkwan University) SH Kim, YA Bae (Gachon University) HJ Yang (Ewha Womans University) WM Sohn (Gyeongsang National University) O3 Expression patterns and antibody reactivity of Taeniidae endophilin B CS Ahn, JG Kim, Y Kong (Sungkyunkwan University) YA Bae, SH Kim (Gachon University) JR Yu (Konkuk University) HJ Yang (Ewha Womans University) K Eom (Chungbuk National University) O4 새로운 PCR-RFLP 알고리즘을이용한우즈베키스탄내단방조충유전형검사 김혜진, 유학선 ( 부산의전원기생충학교실 ) 용태순, 신명헌 ( 연세의대환경의생물학교실 ) 박갑만 ( 가톨릭관동의대환경의생물학교실 ) 이규재 ( 원주연세의대환경의생물학교실 ) U Suvonkulov, D Kovalerko (Institute of Parasitology, Uzbekistan) - 2 -

5 14:10 14:20 신풍호월학술상수상 14:20 14:40 휴식 14:40 15:40 초청강연 좌장 : 박현교수 1. Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus: phylogenetic analysis and migratory bird routes between China, South Korea, and Japan, family cluster analysis of SFTSV infection in Korea 이근화 ( 제주대학교의학전문대학원미생물학교실 ) 2. 지카바이러스표피및비구조단백질 1 에대한단클론항체를이용한항지카항체측정용신속진단키트개발 정점규, 김영은, 이지후 (( 주 ) 젠바디 ) 남호우 ( 가톨릭대학교의과대학 ) Ronaldo F. Dias ( 바히아제약 ( 살바도르, 브라질 ) 배판기 (( 재 ) 이오나노헬스가드연구단 ) 15:40 16:25 연제발표 2 좌장 : 용태순교수 O5 쿠도아충감염넙치회섭취에따른집단식중독발생현황및유전자분석 홍성희, 마다원, 조신형, 박미연, 전형일 ( 질병관리본부말라리아기생충과 ) O6 Serological and molecular detection of Coxiella burnetii in cattle reared on Ulleung Island: a population based study with 4 year follow up MG Seo, D Kwak (Kyungpook National University) IO Ouh (Animal and Plant Quarantine Agency) O7 17 세기미라의간에서폐흡충란발견 서민 ( 단국의대기생충학 ) 신동훈 ( 서울의대해부학 고병리학 ) 유동수 ( 단국의대영상의학 ) 김이석 ( 이화여대해부학 ) 16:25 16:40 휴식 16:40 17:20 신진연구자발표 1 좌장 : 손운목교수 YS1 간흡충의기원 : 후고흡충목에대한분자계통학적접근 이동민, 강석하, 박한솔, 최성준, 강예슬, 전형규, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실, 과학중심의학연구원 ) - 3 -

6 YS2 낙동강강준치에서집단발생한 Ligula interrupta 의유전학적조사 박한솔, 이동민, 최성준, 강예슬, 전형규, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실 ) 손운목 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학교실 ) YS3 남한강수계에서의자유생활아메바의분포조사및분리배양 강희경, 손혜진, 서가은, 박소리, 신호준 ( 아주대학교의과대학미생물학교실 ) 박아영, 정석률 ( 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소 ) 이상은, 박미연 ( 질병관리본부국립보건연구원말라리아기생충과 ) YS4 Inflammatory factors of prostate epithelial cells produced by stimulation of Trichomonas vaginalis promote development of prostate cancer cells----- 한익환, 김정현, 김상수, 안명희, 류재숙 ( 한양대학교의과대학환경의생물학교실 ) 17:20 18:20 포스터 3 분발표 18:20 18:30 휴식 18:30-20:30 간친회 [2 일차 ] 2016 년 10 월 28 일 ( 금요일 ) 09:00 10:00 교육프로그램 I 1. 병리조직표본에서기생충질환진단 채종일교수 ( 한국건강관리협회기생충병연구소 ) 2. 조충특강 : 분류학적연구현안과흐름 엄기선교수 ( 충북대학교의과대학기생충학교실 ) 10:00 10:10 휴식 10:10 10:50 신진연구자발표 2 좌장 : 이원자과장 YS5 Identification of a reticulocyte-specific binding domain of Plasmodium vivax reticulocyte-binding protein 1 that is homologous to the PfRh4 erythrocyte-binding domain JH Han, SK Lee, B Wang, F Muh, MH Nyunt, JH Park, MR Hoque, SH Na, ET Han (School of Medicine, Kangwon National University) T Tsuboi (Proteo-Science Center, Ehime University) - 4 -

7 YS6 Clinical and molecular surveillance of artemisinin resistance in Myanmar-- MH Nyunt, MP Kyaw, JH Han, SK Lee, JH Park, F Muh, MR Hoque, ET Han (Department of Medical Research, Myanmar, School of Medicine, Kangwon National University) YS7 톡소포자충 microneme protein 8 을표현하는바이러스유사입자백신효능 이수화, 김아라, 이동훈, 전복실 ( 경희대학교의과대학의동물학교실, 일반대학원기초의과학과 ) YS8 인천지역인천대공원의모기종조사및 Flavivirus 검사 전호종, 안성규, 황명기, 박윤규, 김동수 ( 인하대학교의과대학열대의학교실 ) 주영란 ( 질병관리본부질병매개곤충과 ) 제갈승, 공용우 ( 인천시보건환경연구원미생물과 ) 10:50 11:35 연제발표 3 좌장 : 류재숙교수 O8 톡소포자충이감염된 BV2 미세교세포에서분비된엑소좀내 microrna-21 의종양억제유전자발현조절에의한 U87 교종세포성장유도 정봉광, 송혜미, 조재은, 김민재, 신은희, 채종일 ( 서울대학교의과대학기생충학교실, 한국건강관리협회기생충연구소 ) O9 An epigenome map of Trichomonas vaginalis reveals H3K4me3 and H3K2 7ac as global epigenetic marks of active gene expression 송민지, 김미경, 최예은, 이명희, 김주리, 박순정, 용태순, 김형표 ( 연세대학교의과대학환경의생물학교실및열대의학연구소 ) O10 Macrophage NOX4 deficeincy is associated with impaired generation of macrophage MIF against Toxoplasma gondii infection JH Kim, JA Lee, SJ Bae, JM Yuk (College of Medicine, Chungnam National University) 11:35 12:20 총회및학술상수상, 사진촬영 12:20 13:00 점심 13:00 14:00 포스터세션 - 5 -

8 14:00 15:00 연제발표 4 좌장 : 최민호교수 O11 삼일열말라리아원충단백질의적혈구 ( 망상적혈구 ) 결합및감염기전 한은택, 한진희, Yang Cheng, Feng Lu, 이성균, Fauzi Muh, 박지훈 ( 강원대학교의과전문대학원환경의생물학교실 ) O12 Development of novel anti-malaria candidate SJ Yeo, D Liu, H Park (Zoonosis Research Center, Department of Infection Biology, School of Medicine, Wonkwang University) O13 Transdermal-type new antimalarial drug development research HS Kim (Faculty of Pharmaceutical Sciences, Graduate School of Medicine, Dentistry and Pharmaceutical Sciences, Okayama University, Japan) O14 Phylogeographic and population genetic evidence for two genetically distinct zoonotic Plasmodium knowlesi parasites in Malaysia MA Ahmed, R Yusof, MY Fong, R Mahmud, YL Lau (University of Malaya Faculty of Medicine, Malaysia) ET Han (School of Medicine, Kangwon National University) G Snounou (Sorbonne Universités, INSERM, France) AA Escalante (Temple University, USA) 15:00 15:30 교육프로그램 II 3. Parasitology in motion II Role of Géné s organ during the oviposition of an adult female Haemaphysalis longicornis 신성식교수 ( 전남대학교수의과대학 ) 15:30 16:00 포스터및연제우수상발표및수상 16:00 폐회 - 6 -

9 포스터발표 P1 갯장어의 Stomachicola muraenesocis 국내첫보고 강예슬, 최성준, 이동민, 박한솔, 전형규, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실 ) P2 청설모 (Sciurus vulgaris) 에서발견된 3 종의외부기생충 최성준, 이동민, 박한솔, 전형규, 이영선, 나기정, 이인용, 엄기선 ( 충북의대기생충학, 충북야생동물구조센터, 연세의대환경의생물학열대의학연구소 ) P3 First report of small hive beetle infestation at Korean apiary MS Yoo, HJ Seo, DH Han, SC Jung, YS Cho (Center for Honeybee Disease Control, Bacterial Disease Division, Animal and Plant Quarantine Agency) P4 Status of cholangiocardinoma and bile duct dilatation of Nine provinces in Lao PDR- 김주영, 임한종, 채종일, 민득영, 엄기선, 손운목, B Phommasack, B Insisiengmay, 용태순 ( 연세대학교의과대학환경의생물학교실, 열대의학연구소, 의용절지동물소재은행, 고려대학교의과대학기생충학교실, 서울대학교의과대학기생충학교실, 을지대학교의과대학미생물학면역학교실, 충북대학교의과대학기생충학교실, 경상대학교의과대학기생충학열대의학교실, Department of Hygiene and Prevention, MoPH, Lao PDR) P 년국내급성설사질환자의장관감염성원충실험실감시 마다원, 조신형, 박미연, 전형일 ( 국립보건연구원말라리아기생충과 ) P6 전남신안군압해도일부주민의참굴큰입흡충감염률추이 ( 년 ) 조재은, 송혜미, 정봉광, 신은희, 한은택, 표경호, 김민재, 채종일 ( 한국건강관리협회기생충병연구소, 서울의대기생충학교실, 강원대의학전문대학원환경의생물학교실, 연세의대암연구소 ) P7 경북위천의간흡충감염실태조사 신희은, 손운목, 박옥희, 손동철, 백선옥, 이영주, 박미연, 조신형 ( 질병관리본부국립보건연구원말라리아기생충과, 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실, 군위군보건소, 경상북도보건환경연구원 ) P8 강원도동해안석호에서채집한어류의인체감염흡충류피낭유충감염상 손운목, 김정아, 김희주, 나병국, 조신형, 박미연, 이순원, 최성봉, 허범영, 석원석 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실, 질병관리본부말라리아. 기생충과, 강원도보건환경연구원 ) P9 탐진강수계담수어의인체감염흡충류피낭유충감염상 손운목, 김정아, 김희주, 나병국, 조신형, 박미연, 윤기복, 임현철, 신성식 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실, 질병관리본부말라리아. 기생충과, 전라남도보건환경연구원, 전남대학교수의과대학수의기생충학교실 ) P10 우리나라동해안및동부일부지역담수어의인체감염장흡충류피낭유충감염양상 손운목, 김정아, 김희주, 나병국, 조신형, 박미연, 손동철, 이순원, 허범영, 석원석 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실, 질병관리본부말라리아. 기생충과, 경상북도보건환경연구원, 강원도보건환경연구원 ) P11 우리나라동해안및동부일부지역담수어의권역별간흡충피낭유충감염양상 손운목, 김정아, 김희주, 나병국, 조신형, 박미연, 손동철, 이순원, 허범영, 석원석 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실, 질병관리본부말라리아. 기생충과, 경상북도보건환경연구원, 강원도보건환경연구원 ) - 7 -

10 P12 Suppression of host infected Toxoplasma gondii proliferation by Terminalia chebula Retzius and Cynanchum atratum process PR Sun, HG Choi, FF Gao, IW Choi, JY Kwon, JM Yuk, YH Lee, GH Cha (Dept. of Medical Science, Dept of Medical Education, College of Medicine, Chungnam Univ.) P13 CREBH-mediated autophagy is crucial for resistance to Toxoplasma gondii in macrophage J Lee, JH Kim, SJ Bae, GH Cha, YH Lee, JM Yuk (Department of Medical Science & Department of Infection Biology, Chungnam National University) P14 Increased production of cytokines and chemokines in human macrophages and mast cells treated with T. gondii lysate or LPS EA Park, SC Choi, IH Han, JS Ryu, MH Ahn (Department of Environmental Biology and Medical Parasitology, Hanyang University College of Medicine) P15 Toxoplasma gondii induce autophagy and apoptosis of human umbilical cord mesenchymal stem cell via down-regulation of Mcl JQ Chu, XG, P Li, R Huang, YH Lee, YZ, JH Quan (Stem Cell Research and Cellular Therapy Center & Department of Gastroenterology, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Department of Infection Biology, Chungnam National University, Korea) P16 톡소포자충감염수지상세포의 Cytokine 생산량및 Toll-like receptor 발현량분석 이재형, 최인욱, 최희권, 육재민, 차광호, 이영하 ( 충남대학교대학원의과학과, 충남의대감염생물학교실 ) P17 FoxO1 is a major transcription factor for NOX4 expression in ARPE-19 cell FF Gao, W Zhou, IW Choi, HK Kim, JY Kwon, JM Yuk, YH Lee, GH Cha (Department of Medical Science & Department of Medical Education, Chungnam National University, Korea, Institute of Immunology, Taishan Medical College, China) P18 The effect of Nox4 deficency on Toxoplasma gondii infection in mouse HG Choi, FF Gao, PR Sun, JY Kwon, JM Yuk, YH Lee, GH Cha (Department of Medical Science & Department of Medical Education, Chungnam National University, Korea) P19 SNAP23-dependent surface translocation of BLT1 is essential for NOX2-mediated exocytotic degranulation in human mast cells induced by Trichomonas vaginalissecreted LTB A Min, MH Shin (Department of Environmental Medical Biology, Institute of Tropical Medicine, Yonsei University College of Medicine) P20 Orphan nuclear receptor small heterodimer partner is involved in suppression of host immune responses during Toxoplasma gondii infection SJ Bae, JH Kim, JN Lee, YH Lee, JM Yuk (Department of Medical Science & Department of Infection Biology, Chungnam National University School of Medicine) P21 Docosahexaenoic acid-induced autophagy is contributed to the attenuation of intracellular survival against Toxoplasma gondii infection JH Kim, JN Lee, SJ Bae, JM Yuk (Department of Infection Biology, Department of Medical Science, & Department of Medical Education, Chungnam National University School of Medicine) - 8 -

11 P22 가시아메바 profilin 에의한알러지성기도염증반응유도 송소명, 박소영, 박상균, 강신애, 최준호, 이다인, 김혜진, 박성희, 장세복, 유학선 ( 부산대학교의학전문대학원기생충학교실, 부산대학교자연과학대학분자생물학교실 ) P23 선모충재감염방어기전에서 CLDN-2 의역할 이다인, 박미경, 강신애, 최준호, 송소명, 김혜진, 박성희 ( 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 ) P24 참굴큰입흡충피낭유충에서분비된엑소좀에의한인체장상피세포와인체단핵구세포에서의단백질및사이토카인발현 송혜미, 정봉광, 조재은, 채종일 ( 한국건강관리협회기생충병연구소, 서울대학교의과대학기생충학교실 ) P25 간흡충항원단백질 6 종의 epitope mapping 을통한항원작용기결정및민감도분석 --- 김유정, 이명노, 정은주, 조신형, 박미연, 주정원 ( 국립보건연구원말라리아기생충과 ) P26 개회충증혈청진단용항원비교분석 김연, 신성화, 홍성태, 최민호 ( 동국대학교의과대학미생물학교실, 중국청도대학교미생물학교실, 서울대학교의과대학기생충학교실 ) P27 Multiplex-touchdown PCR method to simultaneously detect Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia, and Cyclospora cayetanensis as major causes of traveler s diarrhea-- 신지훈, 이상은, 김동수, 마다원, 채종일, 신은희 ( 서울대학교의과대학기생충학교실, 질병관리본부말라리아기생충과, 인하대학교의과대학열대의학교실 ) P28 CsHSP70 과항원펩타이드 (ProR, Ven2) 복합체면역에의한간흡충감염억제효과분석 --- 정은주, 김유정, 이명노, 조신형, 박미연, 주정원 ( 국립보건연구원말라리아기생충과 ) P29 람블편모충의궤양성대장염에대한염증완화효과 김현정, 이명노, 신희은, 이영주, 백선옥, 박미연, 조신형 ( 질병관리본부국립보건연구원말라리아기생충과 ) P30 돼지편충란의만성장내염증마우스모델에서염증개선효과 김혜진, 강신애, 최준호, 이다인, 송소명, 박성희, 유학선 ( 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 ) P31 Effect of some medicinal plants on in vitro motility and viability of Trichomonas vaginalis R Sun, JH Lee, IW Choi, JY Kwon, GHo Cha, JM Yuk, YH Lee (Department of Medical Science, Department of Infection Biology, Department of Medical Education, Chungnam National University School of Medicine) BI Kwon (Korea Institute of Oriental Medicine) P32 클로로퀸감수성및내성열대열말라리아원충주에서약용식물유래추출물의항말라리아효과평가 윤혜수, 양혜원, 딘주나부탐바실바투리데인, 도린반빅, 주소영, 홍연철, 정동일, 구윤경 ( 경북대학교의과대학기생충학교실, 국립낙동강생물자원관원생생물자원조사부 ) P33 비만동물모델을이용한선모충감염에의한비만억제효과 강신애, 최준호, 이다인, 송소명, 김혜진, 박성희, 유학선 ( 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 ) P34 시판중인콘택트렌즈세척액의가시아메바에대한살원충효과 손혜진, 강희경, 서가은, 박소리, 박아영, 김종현, 정석률, 신호준 ( 아주대학교의과대학미생물학교실, 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소, 경상대학교수의과대학기생충학교실 ) - 9 -

12 P35 수입산콘택트렌즈다목적용액들의가시아메바살충효과및인체각막세포독성측정 문은경, 이승은, 공현희 ( 경희대학교의과대학의동물학교실, 동아대학교의과대학기생충학교실 ) P 년국내삼일열말라리아 MSP-1 gene 의유전적다양성분석 신현일, 구보라, 조신형, 박미연, 이상은 ( 국립보건연구원말라리아기생충과 ) P37 우리나라삼일열원충유전형의역동적변화 강정미, 이진영, 조표연, 김태임, 손운목, 김동수, 나병국 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실, 경상대학교 BK21 플러스바이오항노화사업팀, 국립낙동강생물자원관원생생물자원조사부, 인하대학교의학전문대학원열대의학교실 ) P38 Analysis of genetic diversity on allelic dimorphism site of Plasmodium vivax merozoite surface antigen 1 by pyrosequencing assay SD Dinzouna-Boutamba, HS Yun, DV Bik, SY Joo, D Kwak, Y Hong, DI Chung, YK Goo (Department of Parasitology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kyungpook National University, Laboratory of Parasitology, College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University) P39 Detection and genotyping of Coxiella burnetii in pigs on Gyeongsang provinces--- MG Seo, IO Ouh, SH Lee, D Kwak (Lab. of Veterinary Parasitology, College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University, Animal and Plant Quarantine Agency, Gimcheon, Korea) P40 Bioinformatics analysis of merozoite surface protein, reticulocyte binding protein families, and Duffy binding protein of Plasmodium ovale and Plasmodium malariae--- MR Hoque, JH Han, MH Nyunt, SK Lee, F Muh, JH Park, F Lu, J Cao, ET Han (Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University) P41 설치류말라리아 Plasmodium yoelii 에서백신후보단백질유전자검색및클로닝 김선희, 배영안, 서주영, 양현종 ( 이화여자대학교의과대학기생충학교실, 이화여자대학교의과대학미생물학교실, 가천대학교의과대학미생물학교실 ) P42 전체미토콘드리아게놈분석으로밝힌타카하시흡충과요코가와흡충의유전적거리 이동민, 박한솔, 최성준, 강예슬, 전형규, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실 ) P43 한국산가시열틈새극구흡충과 (Family Echinochasmidae) 흡충의계통분류학적분석및미기록종발굴 최성준, S Georgieva, A Kostadinova, 이동민, 박한솔, 강예슬, 전형규, 김영준, 김희종, 나기정, 엄기선 ( 충북의대기생충학, 체코기생충연구소, 국립생태원, 충남야생동물구조센터, 충북야생동물구조센터 ) P44 미토콘드리아 cox1 유전자를이용한조충류종식별의유효성과한계점 강석하, 전형규, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실, 과학중심의학연구원 ) P45 인체고충증을유발하는만손열두조충과회선자궁조충의분자감별진단 전형규, 강예슬, 최성준, 이동민, 박한솔, 엄기선 ( 충북대학교의과대학기생충학교실 ) P46 Identification of novel binding protein on merozoite surface in Plasmodium knowlesi SK Lee, D Park, JH Han, MH Nyunt, F Muh, MR Hoque, JH Park, ET Han (Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, - 10-

13 School of Medicine, Kangwon National University) P47 AVEXIS: An innovative way of screening method for protein-protein interactions---- JH Park, MH Nyunt, JH Han, SK Lee, F Muh, MR Hoque (Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University) P48 Evaluation of cross-reactivity between Plasmodium vivax and Plasmodium knowlesi for cross-species vaccine candidate discovery F Muh, SK Lee, JH Han, MH Nyunt, JH Park, MR Hoque, T Tsuboi, O Kaneko, ET Han (Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Proteo-Science Center, Ehime University, Department of Protozoology, Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University, Japan) P49 Molecular and structural characteristics of multidrug resistance-associated protein 7 in Chinese liver fluke Clonorchis sinensis WG Yoo, F Dai, JY Lee, Y Lu, JH Pak, SJ Hong (Department of Medical Environmental Biology, Chung-Ang University College of Medicine, Department of Convergence Medicine, University of Ulsan College of Medicine and Asan Institute for Life Sciences, Asan Medical Center) P50 가시아메바로부터 hydrogenosome 에너지대사에관여하는효소의동정 주소영, 송민지, 구윤경, 정동일, 홍연철 ( 경북대학교의과대학기생충학열대의학교실 ) P51 숙주세포에서의질편모충 alpha-actinin 2 역할규명 이혜연, 김주리, 박순정 ( 연세대학교의과대학환경의생물학교실 ) P52 람블편모충 γ-tubulin 의기능연구 김주리, 박순정 ( 연세의대환경의생물학교실 ) P53 Production of monoclonal antibodies to the mannose-binding protein of Acanthamoeba culbertsoni 강아영, 박아영, 손혜진, 신호준, 정석률 ( 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소, 아주대학교의과대학미생물학교실 ) P54 중증열성혈소판감소증후군바이러스 Nucleocapsid 단백질에대한단클론항체의생산 서가은, 손혜진, 강희경, 박소리, 여선주, 박현, 신호준 ( 아주대학교의과대학미생물학교실, 원광대학교의과대학감염생물학 ) P55 가시아메바의철 (Fe) 이온수송에관여하는 Nramp 단백질의동정및특성규명 송수민, 송민지, 딘주나부탐바, 윤혜수, 구윤경, 정동일, 홍연철 ( 경북대학교의학전문대학원기생충학열대의학교실 ) P56 간흡충 aspartic proteases 의분자생물학적특성분석 강정미, 김태임, 이진영, 손운목, 나병국 ( 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실, 경상대학교 BK21 플러스바이오항노화사업팀 ) P57 Clonorchis sinensis antigens alter hepatic macrophages polarization in vitro and in vivo EM Kim, YS Kwak, MH Yi, JY Kim, WM Sohn, TS Yong (Department of Environmental Medical Biology and Arthropods of Medical Importance Resource Research Bank) - 11-

14 P58 고래회충유충에서검색한아쿠아포린유전자의구조및발현양상분석 김선희, 배영안, 양현종 ( 이화여자대학교의과대학기생충학교실, 가천대학교의과대학미생물학교실 ) P59 가시아메바포낭형성조절인자 protein arginine methyltransferase 1 의특성규명 문은경, 공현희, 전복실 ( 경희대학교의과대학의동물학교실, 동아대학교의과대학기생충학교실 ) P60 지방세포가질편모충으로감염시킨전립선암세포의증식에미치는영향 김상수, 한익환, 김정현, 안명희, 류재숙, 정용훈 ( 한양대학교의과대학환경의생물학교실, 미생물학교실 ) P61 질편모충에의한전립선상피세포의 apoptosis 와 EMT 유도 김정현, 김상수, 한익환, 안명희, 류재숙 ( 한양대학교의과대학환경의생물학교실 ) P62 병원성자유생활아메바들의포낭형성에효과적인액체배양배지의유용성검정 손혜진, 강희경, 서가은, 박소리, 김종현, 정석률, 신호준 ( 아주대학교의과대학미생물학교실, 경상대학교수의과대학기생충학교실, 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소 ) P63 마우스장기에서 Plasmodium berghei 감염에따른혈관생성인자 Hypoxia induci ble factor -1α 및 Vascular endothelial growth factor 발현양상 조진옥, 신하림, 고은지, 백경완, 홍연철, 옥미선, 차희재 ( 고신대학교의과대학기생충학유전학교실, 경북대학교의학전문대학원기생충학열대의학교실 ) P64 이질아메바에자극에의한 Jurkat T 세포내의 Hypoxia inducible factor (HIF)-1 의발현조사 이영아, 김성훈, 신명헌 ( 연세대학교의과대학환경의생물학교실 ) P65 가시아메바각막염동물모델에서 Resolvin D1 의각막반흔형성예방효과 박성희, 이다인, 강신애, 최준호, 송소명, 김혜진, 이지은, 이종헌, 유학선 ( 부산의전원기생충학교실, 안과학교실 ) P66 깔따구에의한알러지유발가능성과집먼지진드기와의 IgE 반응상관성조사 이명희, 이한일, 김주영, 곽유신, 김정현, 한세희, 정순덕, 용태순 ( 연세의대환경의생물학, 열대의학연구소, 의용절지동물소재은행, 한국건강관리협회 ) - 12-

15 [ 초청강연 ] 1. Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus: phylogenetic analysis and migratory bird routes between China, South Korea, and Japan, family cluster analysis of SFTSV infection in Korea 이근화 제주대학교의학전문대학원미생물학교실 Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome (SFTS) is a tick-borne viral disease. The SFTS virus (SFTSV) has been detected in the Haemaphysalis longicornis, which acts as a transmission host between animals and humans and SFTSV was first confirmed in China in 2009 and has also been circulating in Japan and South Korea from However, it is not known if a genetic connection exists between the viruses in these regions and, if so, how SFTSV is transmitted across China, South Korea, and Japan. 2. Most SFTSV infections occur through Haemaphysalis longicornis. However, SFTSV infection can also occur between family members, and nosocomial transmission of SFTSV is also possible through close contact with a patient. In this study, we first analyzed clinical, epidemiological, and laboratory data for SFTS patients and family members of an index patient in Korea 3. To determine prevalence of SFTS in Korea, we examined serum samples from patients with fever and inset bite history in scrub typus-endemic areas. 1. We hypothesize that the SFTSV in South Korea share common phylogenetic origins with samples from China and Japan. Further, we postulate that migratory birds, well-known carriers of the tick H. longicornis, are a potential source of SFTSV transmission across countries. 2. We suggest that person-to-person transmission of SFTSV among family members is possible in Korea. 3. During the 2013 scrun typus season, prevalence of this syndrome among patients suspected of having scrub typus was high (23.0%), suggesting possible co-infection

16 [ 초청강연 ] 2. 지카바이러스표피및비구조단백질 1 에대한단클론항체를이용한 항지카항체측정용신속진단키트개발 정점규 ¹, 김영은 ¹, 이지후 ¹, 남호우 ², Ronaldo F. Dias³, 배판기 ⁴ ( 주 ) 젠바디 ¹, 가톨릭대학교의과대학 ², 바히아제약 ( 살바도르, 브라질 )³, ( 재 ) 바이오나노헬스가드연 구단 ⁴ 세계보건기구 (WHO) 는 2016년 2월지카바이러스와소두증확산사태에대해국제적공중보건비상사태 (PHEIC) 를선포했다. 모기를통해전파되는지카바이러스가신생아의소두증출생과길랭바레증후군유발에깊은연관성이있다고밝혔다. 따라서본연구에서는지카바이러스감염여부를현장에서장비의도움없이 20분이내에진단할수있는면역혈청학적진단키트를개발하여브라질에서임상시험을수행하였다. 지카바이러스의표피단백질 (E) 와비구조단백질1(NS1) 에대한유전자정보를분석및확보하여베큘로바이러스발현벡터 (pacgp67a) 에삽입하여재조합발현벡터를완성하였다. 이를이용하여 Sf9 세포에서이들재조합단백질을발현하고 Ni-친화컬럼을이용하여순수정제를하였다. 정제된재조합단백질 (E와 NS1) 을 Balb/c 마우스의면역화에이용하여, 단클론항체를각각제작하였다. 이렇게완성된재조합단백질 (E와 NS1) 과단클론항체를이용하여신속진단키트를개발하였다. 개발된신속진단키트를 BahiaFarma ( 브라질, Salvador) 에서제공된지카표준판넬을이용하여기존진단법과의비교시험을수행하였다. 그후, Hospital Gaffree e Guinle ( 브라질, Rio de Janeiro) 에서임상시험을수행하여진단적성능을평가하였다. 지카 E와 NS1을 Sf9에서발현하고웨스턴블럿으로확인하였으며, 순수정제하였다. 이를면역원으로이용하여지카 E와 NS1에특이적인단클론항체 J5E1과 J2G7를성공적으로제작하였다. 이들재조합단백질과단클론항체를이용하여개발된신속진단키트는지카표준판넬혈액 (Anti-Zika Mixed Titer Performance Panel) 을이용한시험에서 ELISA와 PRNT의결과와 100% 일치하였다. ELISA로확인도된지카양성혈액 450건과음성 300건을이용한시험에서민감도와특이도가지카 IgG 양성검체에대해서는 99% 와 99.3% 로, 지카 IgM 양성검체에대해서는 96.6% 와 98.6% 인결과를확보하였다. 본연구에서는지카 E와 NS1의재조합단백질과단클론항체를성공적으로제작하였으며, 이를이용한혈청학적진단키트를개발하였다. 개발된지카 IgG/IgM 신속진단키트는 ELISA 및 PRNT와높은일치도 (100%) 를보여주었으며, 임상평가에서뛰어난진단적성능을보여주었다

17 [ 교육프로그램 ] 병리조직표본에서기생충질환진단 채종일 한국건강관리협회기생충병연구소 임상환자에서검출된기생충표본은원형그대로 10% 포르말린이나 70% 알코홀에고정한후 ( 흡충류는살짝눌러서고정해야할경우가있음 ) 그형태를면밀히검토하여진단을내릴수있다. 그런데종종임상에서는기생충이완전한형태로수집되었음에도불구하고오히려충체를 4-5 µm 크기로잘게잘라절편을만들어가져와진단해줄것을요구하는경우가있다. 또한, 수술이나생검의경우조직속에기생충이들어있으면병리조직표본상에서진단을해야한다. 이연제에서는병리조직표본에서의기생충질환진단을위한기본적인절차와지견에대해소개하고자한다. 특히, 연자가직접겪은증례를중심으로증례소개를하면서감별진단의핵심이되는요점들을정리해보고자하였다. 조직표본에서기생충은크게원충 (protozoa, 원생동물 ) 과후생동물 (metazoa) 로구분할수있으며후생동물은다시선충 (nematoda), 흡충 (trematoda), 조충 (cestoda), 유선형동물 (nematomorpha-연가시), 구두충류 (acanthocephala), 오구충류 (pentastomida), 곤충류 (insecta), 거미류 (arachnida) 등으로구분할수있다. 원충은크기면에서후생동물과월등히다르므로쉽게구분된다. 그러나조직병리검사실에서는 400배이상 1,000배까지표본을관찰하는일이거의없어원충감염을의심하는경우가극히드물며, 기생충학자에게진단이의뢰되는경우는더욱드물다. 후생동물의경우에는먼저절편표본에서표피구조의파악이가장중요하다. 다음으로근육, 체강, 소화관, 생식기, 특수분비선이나특수구조물의유무등을관찰해야한다. 곤충이나거미류는키틴성각피 (cuticle) 와관절을가진다리가있는지를보아진단한다. 오구충류 ( 유충 ) 는갈고리모양의각피가있으면진단에도움이된다. 구두충류는각피에무늬 (striations) 가생겨있으며, 머리에는많은침 ( 극 ) 을갖고있다. 유선형동물 ( 연가시 ) 은각피에종종유두륜 (areoles) 이관찰된다. 선충은각피가대체로매끈하며, 간혹무늬나피극 (tegumental spine) 을가지는경우도있다. 흡충과조충은각피가아닌세포의합포체 (syncytium) 로되어있어다른것들과쉽게구별된다. 흡충은표피에피극이있으나조충은피극이없고미세융모 (microtrichs) 가있는점이뚜렷이다르다. 조충류유충이나성충의실질조직내에는칼슘과립 (calcium corpuscle 또는 calcospherule) 이관찰되어흡충류와감별할수있다. 절편표본에서종의특징적인구조까지관찰된다면종진단까지도가능하다

18 [ 교육프로그램 ] 조충특강 : 분류학적연구현안과흐름 엄기선 충북대학교의과대학기생충학교실 조충은흡충, 플라나리아와함께지구상약 2 만종으로추정되는편형동물그룹을구성하고있다. 조충강은 19 개의목 (order) 으로이루어져있으며이중사람에감염되는기생충은의엽조충목과 원엽조충목에속하여있다. 이두개목의조충은양서류, 파충류, 조류, 포유동물에공통으로넓 게존재하고, 어류에는의엽조충목의기생충만분포한다. 기생충학역사에서조충의생활사규명 은특히난해한부분의한과정이었던것으로보인다. 기원전 4 세기히포크라테스때이미의학 적으로인식되었던조충은현재약 5 천종의수가자연계에존재하는것으로알려져있다. 모든 조충은기생성이고, 생활사상무성생식기가없으며, 형태학적으로는소화관이없다는뚜렷한특 징을가지고있다. 생명체유전정보를등록하고보관하는 National Center for Biotechnology Information (NCBI) 에는조충류의유전정보도계속축적되고있으며현재약 90 만개의정보가 등록되어있다. 그중가장많은정보량을보유하고있는조충은 Diphyllobothriidae 로서약 70 만개, 그다음이 Taeniidae 로서약 10 만개로이 2 개과가전체조충유전정보량의 89% 를차지하 고있다. 지금이순간에도많은수의유정정보가차곡차곡채워지고있고, 앞으로도계속하여 정보량을늘려갈것이다. 이러한유전정보는모이고모여장차많은기생충학적난제와난해한 질문의해결요소가될것이라고믿어지지만그중요한발전은역시기생충학자의진지한연구와 통찰을바탕으로이루어지고있다 년대에조충류기생충학연구분야의많은질문이제기되었고또한해결되었다. 그러나 1900 년대말까지도해결되지않고있던중요한분류학적질문등중어떤부분은이제답을얻 었고, 어떤부분은아직답을얻지못하였다. 연자는조충류기생충을직접연구하고관찰하면 서얻게된몇몇중요사항에대하여조충학자뿐아니라기생충학자에게필요한정보의업데이 트를살피고, 학회원과공유하고자한다. Family Diphyllobothriidae Luhe, 1910 관련최근의연구는 Diphyllobothrium yonagoense 를 D. stemmacephalum 으로, D. ursi 를 D. dendriticum 으로, D. klebanovskii 를 D. nihonkaiense 로동의어화할근거를제시하고있다. 인체고충증의중요한원인충으로종래에는 Spirometra erinaceieuropaei 한가지종만관련되어있는것으로알려졌으나최근연구는두종이상이관련되어있다는증거가제시되고있다. Family Taeniidae Ludwig, 1886 관련최근의연구는 Taeniinae 내 Taenia 조충중 T. brachyacantha 와 T. mustelae 의유전자분석연구를통하여각각 Versteria brachacantha 와 V. mustelae 로, T. krepkogorski, T. parva, T. taeniaeformis 는각각 Hydatigera krepkogorski, H. parva, H. taeniaeformis 로종수준에서이동시키고, T. arctos, T. intermedia, T. pencei, T. talicei, 그리고 T. pisiformis 로오인되었던 T. lynciscapreoli 등 5 종을새로추가하여총 41 종을 valid species 로취급하고있다. Echinococcinae 내 Echinococcus 는현재많은분류학적논란을가지고있으며종구분자체의깊은통찰을필요로하고있는데현재 E. granulosus (sensu stricto) 를비롯한 E. equinus, E. ortleppi, E. canadensis-cluster 등 G1-G10 strain 과, E. felidis 가많은연구에서취급되고있으며, 각각의대상종들은 sylvatic cycle 이확립된것인지주위의 domestic cycle 로인한유입인지에관한논의가활발하다. 이상조충 2 개과의몇몇주요연구 현안과확장된인식에대하여구체적인예와함께설명하고자한다

19 O1 Opisthorchis viverrini (Digenea: Opisthorchiidae) in Myanmar: The first discovery of human case and infection status of metacercariae in fish hosts 손운목 1, 나병국 1, 김정아 1, 김희주 1, 채종일 2, 이건훈 2, 박종복 2, 김현승 2, Thi Thi Htoon 3, Htay Htay Tin 3 1 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실 ; 2 한국건강관리협회 ; 미얀마국립보건연구소 (National Health Laboratory in Yangon, Myanmar) Present study was performed to record the presence of Southeast Asian liver fluke, Opisthorchis viverrini (Digenea: Opisthorchiidae) in the Union of Myanmar (Myanmar). We examined total 2,057 stool samples of residents in 3 districts of Yangon, Myanmar by the Kato-katz method in December Small trematode eggs (STE) were detected in 14 samples. And then we tried the worm recovery from 6 STE positive residents after the administration of Praziquantel 40 mg single) and MgSO4 (25-30 g). To survey the infection sources, we also examined total 160 fishes in 10 species purchased in a local market of North Dagon in Yangon in December 2015 and August We examined total 2,057 stool samples of residents in 3 districts of Yangon, Myanmar by the Kato-katz method in December Small trematode eggs (STE) were detected in 14 samples. And then we tried the worm recovery from 6 STE positive residents after the administration of Praziquantel 40 mg single) and MgSO 4 (25-30 g). To survey the infection sources, we also examined total 160 fishes in 10 species purchased in a local market of North Dagon in Yangon in December 2015 and August By the present study, it was confirmed for the first time that Southeast Asian liver fluke, O. viverrini, is distributed in Myanmar

20 O2 Clonorchis sinensis omega-class glutathione transferase play major roles in the protection of reproductive system during maturation and the response to oxidative stress Jeong-Geun Kim¹, Chun-Seob Ahn¹, Seon-Hee Kim², Young-An Bae², Hyun-Jong Yang³, Woon-Mok Sohn⁴, Yoon Kong¹ ¹Sungkyunkwan University, Suwon; ²Gachon University, Incheon; ³Ewha Womans University, Seoul; ⁴Gyeongsang National University, Jinju. To adapt to the hostile micromilieu and to ensure its long-term survival, Clono rchis sinensis continuously produces a diverse repertoire of antioxidant enzymes (GSTs). We observed spatiotemporal expression of the C. sinensis omega GSTs (Cs GSTo1 and 2) along with the maturation of the C. sinensis worm s reproductive system. Biological roles of CsGSTos in these organs under oxidative stress were investigated. C. sinensis genome encoded 12 GST protein species. Multiple orthologs cod ed for sigma and omega GSTs were detected in the opisthorchiid, but not in other trematodes. Expression of CsGSTo transcripts and proteins increased be ginning in 2-week-old juveniles and reached their highest levels in 4-week-old adults. The proteins were exclusively expressed in the reproductive system, ie. vitelline follicle, testis, seminal receptacle, sperm and eggs. Oxidative stressors induced upregulated expression of CsGSTos in these organs. Regardless of oxidative stresses, CsGSTos continued to be highly expressed in eggs. CsGSTo overexpressed bacteria showed high resistance upon oxidative killing. CsGSTos might be critically involved in protection of the reproductive system during maturation of C. sinensis worms and in response to oxidative conditions, thereby contributing to maintenance of parasite fecundity and species pre servation

21 O3 Expression patterns and antibody reactivity of Taeniidae endophilin B1 Chun-Seob Ahn¹, Jeong-Geun Kim¹, Yoon Kong¹, Young-An Bae², Seon-Hee Kim², Jae-Ran Yu³, Hyun-Jong Yang⁴, Keeseon Eom 5 ¹Sungkyunkwan University School of Medicine, Suwon; ²Gachon University Graduate School of Medicine, Incheon; ³Konkuk University School of Medicine, Seoul; ⁴Ewha Womans University School of Medicine, Seoul; 5Chungbuk National University School of Medicine, Cheongju. Larval Taeniidae invoke chronic and fatal helminthic diseases, while the diagnosis is often challenging and is hampered in several clinical settings. We isolated proteins homologous to endophilin B1 from T. solium, T. saginata and T. asiatica. We observed their molecular properties and specific express ion patterns. We produced recombinant T. solium endophilin B1 (rtsmendob1) and analyzed the diagnostic applicability. Endophilin B1 showed a unique immunological profile and was abundantly ex pressed in the outermost tegumental syncytium of the Taeniidae parasites. Th e protein could self-multimerized in physiological conditions and might be involved in membrane sensing through its BAR domain. rtsmendob1 revealed s pecific antibody responses against patient sera from neurocysticercosis, cyst ic echinococcosis and alveolar echinococcosis (sensitivity, 79.7%; specificity, 91.7%). It especially demonstrated strong antibody recognition patterns aga inst chronically infected patient sera. Taeniidae endophilin B1 may be involved in control of membrane dynamics, thus contributing to shape and maintain tegumental coverture. rtsmendob1 may be useful for large-scale screening as well as for individual diagnosis of Taeniidae infections

22 O4 새로운 PCR-RFLP 알고리즘을이용한우즈베키스탄내단방조충 유전형검사 김혜진 1, 용태순 2, 박갑만 3, 신명헌 2, 이규재 4, 유학선 1, Uktamjon Suvonkulov 5, Dmitriy Kovalerko 5 1 부산의전원기생충학교실, 2 연세의대환경의생물학교실, 3 가톨릭관동의대환경의생물학교실 4 원주연세의대환경의생물학교실, 5 Institute of Parasitology, Samarkand, Uzbekistan 단방조충 (Echinococcus species) 은 전 세계적으로 사람이나 동물에 감염하여 포충증 (echinococcosis) 을 일으킨다. 이러한 단방조충의 유전형 (genotype) 은 일반적으로 mitochondrial DNA의 cox 1과 nad 1 염기서열분석을통하여 10개의유전형으로분류하는것 이일반적이다. 하지만 survey 결과얻어진대량 sample의유전형분석을위해모두전체염기 서열을분석하는것은비용이나시간이많이들며, 기존에보고된 PCR-RFLP 결과를가지고는 실제유전형을분석하는데는어려움이많아새로운분석법이필요하였다. 유전형분석을위해서 GenBank에서확보한 9개유전형의염기서열을컴퓨터프로그램을통한가상의 RFLP를수행하였고이를기반으로 PCR-RFLP 알고리즘을작성하였다. 이를검증하기위하여우즈벡포충증환자에서분리된 22개의포충낭에서 Genomic DNA를분리하여새로만든 PCR-RFLP 알고리즘에따라수행하여분석한후이들의전체염기서열분석결과와비교하여분석하였다. 알고리즘에따라분석한 22개의임상 sample의 PCR-RFLP 결과에서 21개는 G1 type이관찰되었고나머지한개에서 G4 유전형이관찰되었다. 전체 sequencing analysis 결과와비교하였을때이전관찰된유전형이동일하게관찰되었다. 세계처음으로사람에감염된 G4 유전형을발견할수있었고, 이번연구에사용된방법은기존 의염기서열분석을통한유전형분석의단점을개선할수있을것으로보인다

23 O5 쿠도아충감염넙치회섭취에따른집단식중독발생현황및유전자 분석 홍성희, 마다원, 조신형, 박미연, 전형일 질병관리본부말라리아기생충과 점액성포자충류에속하는쿠도아충 (Kudoa spp.) 에의한기생은세계에서 95종이상의어종에서보고되어있으며, 넙치근육조직과뇌속에기생하는쿠도아충은 5종이보고되어있으나, 그중 Kudoa septempunctata가인체에감염되어설사및구토증상을유발하며, 잠복기간은 2-22시간으로증상발현후예후는양호한것으로알려져있다. 국내식품의약품안전처에서는 13년식중독원인조사지침 검사항목으로 K. septempunctata를추가하였고, 해양수산부는내수용넙치양식장에대한 K. septempunctata 자율관리지침을마련하고발생감소를위한양식장수질관리에대한연구를수행하고있다. 이와관련하여국내넙치생선회를섭취후발생한식중독검체에대한 K. septempunctata 감염조사및유전형을분석하였다. 15~ 16년에넙치회를섭취한후발생한집단식중독검체들 ( 분변또는구토물 ) 에서 FastDNA Spin Kit를이용하여 DNA를분리하여 18S rdna와 28S rdna에대한유전자증폭실험과 cytochrome c oxidase subunit rrna(cox-1) 과 large subunit rrna(rnl-1) 유전자검사를통해유전자형을분석하였다. 15년도집단식중독으로의뢰된사례38건 ( 검체 158 건 ) 중 14건 ( 검체 30건 ) 이양성 (36.8%) 이었다. 16년에는식중독발생 65사례 (21건) 중 31건 (54건) 의사례가양성 (46.2%) 으로확인되었다. 유전자형분석결과 K. septempunctata 18S rdna(ab731754) 와 28S rdna(ab731755) 염기서열과 99%~100% 의일치를확인하였다. K. septempunctata의양성검체에서 cox-1 과 rnl-1 유전자형을확인한결과모두 ST3 형으로확인되었다. 본조사에서는, 국내에서넙치회섭취후발생하는식중독사례는매해증가하고있고, 임상검체에서 K. septempunctata에대한유전자를확인할수있었고, 유전형은모두 ST3형으로확인되었다. 향후넙치섭치후쿠도아충에대한집단식중독발생에대비하기위한지속적모니터링과병인기전의연구가필요하다

24 O6 Serological and molecular detection of Coxiella burnetii in cattle reared on Ulleung Island: a population based study with 4 year follow up Min Goo Seo¹,², In Ohk Ouh², Dongmi Kwak¹ Lab. of Veterinary Parasitology, College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University, Daegu¹; Animal and Plant Quarantine Agency, Gimcheon, Korea² Cattle movement from mainland of Korea to Ulleung Island has been strictly restricted by government. With this special epidemiologic and geographic condition, we assessed a population based Coxiella burnetii prevalence and genotypes in cattle on Ulleung Island with 4 year follow up. In this tracking study, blood samples were collected from 760 cattle from 54 farms, 597 cattle from 51 farms, 575 cattle from 49 farms, and 625 cattle from 49 farms each year during , respectively. Whole blood was used for PCR, and sera for serology. The positive rates of C. burnetii from whole cattle on Ulleung Island were % by ELISA and % by PCR during The sequences of C. burnetii 16S rrna from two samples (C UL 15 and C UL 32) showed 100% identify each other (accession nos. KU and KU291433). The nucleotide sequences determined from two samples showed high ( %) sequence identity to those of C. burnetii deposited in GenBank. These sequences clustered together with those deposited in GenBank from America, Japan, and Argentina. C. burnetii spreads among animals by inhalation of contagious airborne dust or by vector ticks. Therefore, in certain location such as Ulleung Island, continuous monitoring and control strategies for both domestic animals and humans are required for the prevention of public health and eradication of disease in Ulleung Island

25 O7 17 세기미라의간에서폐흡충란발견 서민 1, 신동훈 2, 유동수 3, 김이석 4 단국의대기생충학 1, 서울의대해부학 & 고병리학 2, 단국의대영상의학 3, 이화여대해부학 년 10월, 우리나라동남쪽에위치한청도에서남자미라가발견됐다. 관안에들어있던자료에따르면이남자는 1580년에태어나 63세때인 1642년죽었다. 환자에게다른이상소견은발견되지않았지만, 미라의 CT 검사과정에서간에서방사선불투과성의덩어리가발견됐다. 덩어리의크기는 22.75mm mm였고, 횡격막바로아래위치했다. 덩어리의정체를알아내고자일부를떼어내 0.5% trisodium phosphate 용액에서 7 일간 rehydration 시키고현미경으로관찰했다. 관찰결과폐흡충의알을다수발견할수있었으며, 조직 1g 당폐흡충알의숫자는 307.7개였다. 이밖에미라의곧창자 (rectum) 와큰창자 (colon) 에서각각회충과편충, 간흡충의알이검출됐고, 작은창자 (small intestine) 에서는간흡충의알이발견됐다. 이상의결과로보아조선시대에는폐흡충이지금보다더흔했으며, 그에따른이소기생도자주 발생했을것으로추측된다

26 O8 톡소포자충이감염된 BV2 미세교세포에서분비된엑소좀내 microrna-21 의종양억제유전자발현조절에의한 U87 교종세포성장유도 정봉광 1, 송혜미 2, 조재은 2, 김민재 1, 신은희 1, 채종일 1,2 서울대학교의과대학기생충학교실 1, 한국건강관리협회기생충연구소 2 톡소포자충은세포내기생하는원충으로감염된세포의환경을변화시킨다. 여러문헌자료를통해서뇌종양발생에톡소포자충의감염이연관되어있다는사실을확인할수있다. 하지만톡소포자충이뇌종양발생에어떠한영향을미치는지에대한연구는부족한실정이다. 이연구에서는톡소포자충의감염과뇌종양발생과의연관성을살펴보기위해 93명의뇌종양환자들을대상으로톡소포자충의양성률을확인하기위한 ELI SA혈청검사를시행하였고, 톡소포자충에감염된 BV2 미세교세포에서분비되는엑소좀과엑소좀내 mirna들을분석하여뇌종양세포의증식에어떠한영향을미치는지 in vitro와 in vivo실험을통해확인하였다. 뇌종양환자내톡소포자충의양성률은 18.3% 로일반인 (8.6%) 에비해현저하게높은것으로나타났으며, 젊은연령층 (30-49세) 에서높은감염률을나타내었다 (P < 0.05). 톡소포자충이감염된미세교세포에서분비하는엑소좀을 U87 교종세포에처리하였을때세포의증식이향상되는것을세포와동물모델실험을통해확인하였다. 이러한결과들을비추어볼때톡소포자충이감염된미세교세포가분비하는엑소좀은교아종증식에영향을미치는것으로확인되었다. 추가적으로엑소좀이미치는영향에대한기전연구를위해엑소좀을처리한 U87 교종세포내에유전자변화양상을살펴보았고그결과, 엑소좀내 mir-21이종양과관련된유전자 (FoxO1, PTEN, PDCD4, p27) 의 mrna발현을현저하게줄여주는것을확인하였다. 이를통해톡소포자충이감염된미세교세포가분비하는엑소좀내증가된 mir-21에의해종양관련인자들의발현이조절됨으로써세포성장을억제하여 U8 7 교종세포증식을유도함을확인할수있었다

27 O9 An epigenome map of Trichomonas vaginalis reveals H3K4me3 and H3K2 7ac as global epigenetic marks of active gene expression 송민지, 김미경, 최예은, 이명희, 김주리, 박순정, 용태순, 김형표 연세대학교의과대학환경의생물학교실및열대의학연구소 Trichomonas vaginalis is a parasite of the human urogenital tract, with a world wide presence and significant implications for global public health. Howeve, mechanisms of gene regulation of T. vaginalis are poorly understood. In thi s study, we investigated whether epigenetic chromatin modifications play a crucial role in the modulation of gene expression in T. vaginalis. We first explored the presence of histone modifying enzymes as well as posttranslational modifications in the histone tails which can constitute key components of an epigenetic indexing system. The availability of the complete genome sequence of T. vaginalis makes it possible to determine genome-wide gene expression and histone modification profiles and to define the relationship between epigenetic marks and gene expression in this parasite. We also examined whether altered gene expression induced by changes in iron availability are subject to epigenetic regulation. We identified in the Trichomonas genome evolutionally conserved HDACs that belong to class I HDACs, and demonstrated that exposure of T. vaginalis to t he two independent HDAC inhibitors, apicidin and TSA, increased overall levels of histone acetylation and changed global gene expression profiles. More over, we have performed the first mapping of the epigenome of T. vaginalis an d identified H3K4me3 and H3K27Ac as the global epigenetic marks for active g ene expression in the steady state as well as during dynamic transcriptional regulation in response to treatment of HDAC inhibitors or changes in iron avail ability. In the present study, we provided the first evidence that posttranslational modifications of histones play an essential role in transcriptional regulation in T. vaginalis

28 O10 Macrophage NADPH oxidase 4 Deficiency Is Associated with Impaired Generation of Macrophage Migration Inhibitory Factor against Toxoplasma gondii Infection. Ji Hye Kim 1,2, Jin-Ah Lee 1,2, Su-JinBae 1,2, and Jae-Min Yuk 1,2* Department of Infection Biology 1 and Medical Science 2, College of Medicine, Chungnam National University, Daejeon, Korea The family of NADPH oxidases (Nox) is an important catalytic enzyme to generate reactive oxygen species (ROS), which mediates the regulation of diverse cellular functions. Macrophage migration inhibitory factor (MIF) plays as a pleiotropic cytokine to be involved in protective immunity against variety of pathogens such as bacteria, parasite, and viruses. Although phagocytic Nox2/gp91phox is closely associated with the activation of host innate immune responses, the roles of Nox4 and the involvement of MIF generation during Toxoplasma gondii (T. gondii) infection are still unclear in primary macrophage and in vivo murine model. Nox4-deficient mice were infected with virulent RH strain or avirulent ME49 strain and we then evaluated the susceptibility to parasites and cyst burden in brain tissues, respectively. Moreover, we examined the precise role of Nox family proteins in innate immune control against Toxoplasma infection using primary macrophages. Here, we showed that Nox4-deficient mice had increased susceptibility to virulent RH strain infection and increased cyst burden of avirulent ME49 strain in brain tissues. In addition, Nox4 deficiency resulted in enhanced proliferation and survival of intracellular T. gondii RH strain within bone marrow-derived macrophages (BMDMs). Notably, Nox4-mediated ROS production was required for the upregulation of MIF mrna and protein via the activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) and nuclear factor (NF)-kB signaling in T. gondii-infected BMDMs. In contrast, both Nox2/gp91phox and cytosolic subunit p47phox were not involved in T. gondii-mediated MIF production and antiparasitic activity against T. gondii infection in BMDMs. Collectively, our findings indicate that Nox4-mediated ROS generation plays central roles in MIF production and the resistance to T. gondii infection

29 O11 삼일열말라리아원충단백질의적혈구 ( 망상적혈구 ) 결합및감염 기전 한은택, 한진희, Yang Cheng, Feng Lu, 이성균, Fauzi Muh, 박지훈 강원대학교의과전문대학원환경의생물학교실 말라리아원충은적혈구에감염시, 분열소체 (merozoite) 첨복체소기관 (apical organelle) 에서원충의단백질이분비되어적혈구수용체와특이적인결합을통해서적혈구에침입한다. 지금까지열대열원충의경우, 분열소체의첨복체소기관에서분비되는리간드단백질이적혈구수용체와각각특이적인결합을통해서적혈구세포에침입한다고알려졌다. 삼일열원충의경우, 분열소체 DBP가적혈구표면의 Duffy 항원과특이적으로결합하여침입하는것으로알려졌으나최근에는 Duffy 항원 (-) 적혈구에도감염되는것이보고되어새로운감염기전에대한연구가흥미롭다. 연자등은최근삼일열원충의적혈구결합및침입기전에중요한분열소체단백질들의특성분석및그결과를발표하고자한다. 후보단백질의유전자를클로닝하여재조합단백질을발현하고면역하여항혈청을확보하였고, 유전자를진핵세포에서발현하여적혈구및망상적혈구에대한결합능을확인하였고, 감염자혈청및항혈청을이용하여결합억제능과효소처리된적혈구결합특이도를관찰하였으며적혈구감염기에각단백질들의형태학적인분포와함께감염환자에서면역원성등을관찰하였다. PvMSP1P의경우, 적혈구및망상적혈구의농도에비례해서결합능이증가하였으며펩타이드항원이특이적으로결합을저해하였으며, PvGAMA 단백질의경우, Duffy 항원 (+,-) 적혈구에모두결합하였으며 Tr1 domain에대한항혈청은 F2(F7) domain에대한결합을저해하였으며, PvRBP 단백질의경우, 적혈구보다망상적혈구에특이적으로결합하였으며 PvRBP1a/b domain 의 N-말단에대한항체가특이적으로결합을억제하였다. 이단백질들은모두 Chymotryp 처리적혈구에결합이저해되었으며특히삼일열원충분열소체내발현소기관은 DBP와같이 apical region의 microneme임을확인하였다. 지금까지알려진 DBP이외에새로운삼일열원충의적혈구결합및감염에특이적으로관여하는단백질을동정하였고추후이들단백질에대한적혈구 ( 망상적혈구 ) 수용체를동정하여삼일열원충의적혈구감염기전을밝혀서말라리아백신및치료제를개발하여말라리아를퇴치에기여하고자한다

30 O12 Development of novel anti-malaria candidate Seon-Ju Yeo, Dongxu Liu, Hyun Park Zoonosis Research Center, Department of Infection Biology, School of Medicine, Wonkwang University, Iksan, Republic of Korea Global efforts toward malaria eradication have highlighted the need for novel antimalarial agents with activity against parasite growth due to occurrence of drug-resistant strains. Previously we reported the discovery of a novel class of antimalarial compounds in the derivatives of ALLN (N-[N-(N-Acetyl-L-leuc yl)-l-leucyl]-l-norleucine), a calpain inhibitor, showing the anti- malarial activity in a mouse model of malaria. Anti-malaria candidate to block Plasmodium growth was assessed in vitro and in vivo. ALLN is highly cytotoxic and needs to be optimized for the specificity for Pl asmodium. Consistent with the previously reported activity profile of these derivatives, a strong clinical candidate, SKM 13, was found to have anti- malarial activity with 50% inhibitory concentrations (IC50) of 170 nm which was 2-fold more effective than ALLN against Chloroquine-sensitive P. falciparum (3D7). The cytotoxicity assay showed that 50% cytotoxic concentration (CC50) of SKM13 was 10-fold less than that of ALLN and not significantly different with that of Chloroquine. IC50 of SKM13 was 370 nm against Chloroquine-resistant P. falciparum (FCR3) (IC50 Chloroquine =620 nm), indicating that SKM 13 was more effective to Chloroquine-resistance strain be cause there is only two folds difference for IC50 between Chloroquine-sensitive and against Chloroquine-resistant strain. The potent therapeutic activity of SKM 13 was assessed in a mouse model of Atovaquone resistant P. berghei (NAT) at 20 mg/kg by 4-day suppressive test and SKM 13 was completely protective as dose of 20 mg/kg/day. Hematological parameters were supportive for the efficacy of SKM13 in animal model. After pretreatment of SKM 13 against P. falciparum (FCR3), two-dimensional gel electrop horesis provided the essential targets for P. falciparum growth. Conclusively, SKM 13 was the potent anti-malaria candidate to block Plasmodium growth in vitro and in vivo

31 O13 Transdermal-type new antimalarial drug development research Hye-Sook Kim Division of International Infectious Diseases Control, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Graduate School of Medicine, Dentistry and Pharmaceutical Sciences, Okayama University, Japan In 2001, we synthesized endoperoxide, 1,2,6,7-tetraoxaspiro[7,11]nonadecane (N-89), found that it has strong antimalarial activities against Plasmodium falciparum in human erythrocytes cultured in vitro as well as against P. berghei in mice in vivo as oral treatment. In addition, we found that N-89 metabolized in the liver microsomes of rat and human rapidly and only about 50% of parent compound was remain in the experiments preliminary. That results mean that oral treatment of N-89 will be need to large amount of N-89 keeping the antimalarial activity in the human body. In the study, we want to try to make a different formulation of N-89 in mice without decrease the antimalarial activity. Materials and Methods : Transdermal type of N-89 were formulated by used as Vaseline or hydrophilic polymers mixtures with different kind of mixture ratio of polymers. The antimalarial activity of trandermal type of N-89 was evaluated by 4-day suppressive test and we decided the suitable transdermal formulation for N-89. In additon, Blood concentration of N-89 in mice was also determined in healthy mice or using in parasite-infected mice both. The cure and adverse effect of N-89 in mice were also checked during in same experiments. Different kinds of transdermal type-n-89 showed similar antimalarial activities compare to oral results, but dose of transdermal type- N-89 was same antimalarial activity for about 40% of oral dose. The data means that transdermal type-n-89 didn t metabolized by liver enzymes and finally, small amount of N-89 also showed strong antimalarial activity with cure effect both. The blood concentration of N-89 was more than 10 ng/ml in the body treat with 30 mg/kg of transdermal type-n-89. Our results indicated that transdermal type of N-89 can effective for malaria diseases and different antimalarial-resistant P. falciparum both and we have to trying more suitable formulation of N-89 as transdermal type antimalarial new agent with safety and toxicity for clinical trial

32 O14 Phylogeographic and population genetic evidence for two genetically distinct zoonotic Plasmodium knowlesi parasites in Malaysia Md Atique Ahmed¹², Ruhani Yusof¹, Mun Yik Fong¹, Rohela Mahmud¹, Georges Snounou³, Ananias A. Escalante⁴, Eun-Taek Han², Yee Ling Lau¹ University of Malaya Faculty of Medicine, Kuala Lumpur, Malaysia¹, Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea², Sorbonne Universités, INSERM, Paris, France³, Temple University, Philadelphia, PA, USA Plasmodium knowlesi is an emerging zoonotic malaria parasite infecting humans in Southeast Asian countries. This study was conducted to explore the phylogeography and population structure of this parasite from humans and macaques in two geographically separated regions of Malaysia, Peninsular Malaysia and Malaysian Borneo. Microscopically confirmed P. knowlesi blood samples were collected from 8 different states of Malaysia from 2012 to Macaque samples were collected from 3 states of Peninsular Malaysia (Pahang, Selangor and Negeri Sembilan) during the same time period. The PkA-type 18S rrna and PkCOX1 genes were PCR amplified, cloned and sequenced. Gene sequences obtained were aligned and used for phylogeographic (Network ) and population structure analysis (STRUCTURE v and ARLEQUIN v ). Diversity indices were analyzed using DNAsp v 5.1. Previously published human and macaque sequences (Malasyian Borneo) from Genbank were also included for analysis. We analyzed a total of 209 PkA-type 18S RNA sequences (105 from Peninsular Malaysia and 104 from Malaysian Borneo) and 138 PkCOX1 sequences (54 from Peninsular Malaysia and 84 from Malaysian Borneo). Molecular polymorphism indices for the revealed moderate polymorphism for PkA-type 18S RNA sequences (π = ± ) and low polymorphism for PkCOX1 sequences (π = ). Haplotype network analysis and population structure analysis for both genes showed two distinct P. knowlesi populations each originating from Peninsular Malaysia and Malaysian Borneo. These findings highlight that there are two distinct P. knowlesi types that independently became zoonotic. These types would have evolved after the sea-level rise at the end of the last ice age, which separated Malaysian Borneo from Peninsular Malaysia

33 O15 Parasitology in motion II Role of Géné s organ during the oviposition of an adult female Haemaphysalis longicornis Sung Shik Shin, Kyu-Sung Ahn Chonnam National University College of Veterinary Medicine This presentation is to help to better understand the biology and oviposition process of Haemaphysalis longicornis. During a series of clinical field trials for preventive medication against ticks, developmental stages and oviposition process of H. longicornis were recorded using light microscopes and camcorders. Géné s organ of an ixodid tick is located in the anterodorsal region of the body cavity ventrad to the scutum. The organ is a complex dermal gland which is only visible during the oviposition process. The external appendage, the horns, is an evertable balloon-like cuticular sac which receives and manipulates the eggs shortly after expulsion from the vagina. Géné s organ develops in synchrony with oogenesis and oviposition. During oviposition, the inner cuticular layer unfolds and inflates into a pair of sacs that evert through the organ external aperture to receive and manipulate each egg as it is laid, coating it with a waxy layer. Wax passes through pores in the cuticle from the internal, sub-cuticular lumen. The fine cuticular projections may have a function in gripping the eggs as they leave the vagina. This organ appears to be everted by hydrostatic pressure from the hemolymph and is retracted by muscles. The organ performs an essential function in females by coating the eggs with a waterproofing layer during oviposition, which prevents desiccation of the embryo, ensuring its viability. Along with several developmental stages of H. longicornis, this presentation shows the final moments of a female gravid tick preparing her eggs for the harsh desiccated environment before her death

34 YS1 간흡충의기원 : 후고흡충목에대한분자계통학적접근 Evolutionary Origins of Liver Flukes (Digenea, Opisthorchiidae): Phylogenetic approach within Order Opisthorchiida 이동민 ¹, 강석하 ², 박한솔 ¹, 최성준 ¹, 강예슬 ¹, 전형규 ¹, 엄기선 ¹ 충북대학교의과대학기생충학교실 ¹, 과학중심의학연구원 ² Opisthochiid흡충은대표적으로간흡충, 타이간흡충, 고양이간흡충을포함하는이생흡충아강의한그룹으로서의학적중요성으로인하여질병의진단, 치료, 예방및역학등다양한연구분야의대상이되었다. 그러나이들간흡충의기원에대해서는아직알려진바가없다. 우리는유전자분석을통해서후고흡충상과 (Opisthorchioidea) 의다양한패턴을분석하고특히 DNA 일치율및단백질의아미노산배열의유사도등을이용하여 Family 수준에서간흡충의유연관계및진화계통을확인하고자하였다. 흡충은서로다른환경과다양한숙주에적응하면서정교한생활사를완성해왔다. 그다양성과다채로운패턴때문에진화에관련한계통관계분석은난해하다. 형태와생태적특징을기초로분자계통분석을하게된다면그들의진화계통에대한가설을세울수있을것이라가정하여, 핵리보솜DNA와미토콘드리아DNA를이용한분자계통분석을진행하였으며, 분석결과는숙주및생활사를기초로하여해석하였다. 후고흡충상과는크게 3개과 ( 후고흡충과, 이형흡충과, 소식흡충과 ) 로나뉘는데, 바다나민물고기또는파충류를숙주로삼고장에기생하는소식흡충과가공통조상으로부터먼저분지가되고, 이후에갈라져나온이형흡충과와후고흡충과는주로조류나포유류를숙주로삼으며각각장과간을기생부위로한다. 결론적으로후고흡충목은처음에는바다에서시작하여민물로적응, 진화하였으며바다또는민물의잉어과를종숙주로장에기생을하다가 ( 소식흡충과, Cryptogonimidae) 포유류와조류로숙주이동에성공을하였으며 ( 이형흡충과, Heterophyidae), 간으로기생부위를옮기면서 ( 후고흡충과, Opithorchiidae) 현재와같은 3개의과로나눠졌다고추정된다

35 YS2 낙동강강준치에서집단발생한 Ligula interrupta 의유전학적조사 박한솔 ¹, 이동민 ¹, 최성준 ¹, 강예슬 ¹, 전형규 ¹, 손운목 ², 엄기선 ¹ 충북대학교의과대학기생충학교실 ¹, 경상대학교의학전문대학원기생충학교실 ² 2016년 2월에낙동강유역에서 Ligula 종유충감염으로인해강준치의집단폐사가보고되었다. Ligula 속은 Diphyllobothriidae 과에속하는조충으로아프리카및유럽, 중국, 일본등전세계적으로분포하고있지만성충의확보가어려울뿐만아니라유충의형태적유사성으로인해 L. intestinalis로통칭하여사용되고있는실정이다. 우리나라에서도아직까지 Ligula 종에대한형태및유전학적분석을통한분류학적조사가미비한실정이다. 이연구는낙동강강준치에서집단발생한 Ligula 종에대하여분류학적으로조사한결과이다. 2016년 3월부터 3차례낙동강칠곡보및합천창녕보인근에서폐사한강준치 17마리를수거하여총 43마리의유충을확보하였다. 확보한조충의형태를관찰하였으며, 성충을얻기위해감염실험을실시하였다. 유전학적인분석을위해 GeneBank에등록된 Ligula 종과비교분석하였다. 강준치부검결과 1마리당 1-8마리의 Ligula 유충이감염되어있었으며충체는 mm ( 평균 441mm) 길이로충체의세로방향으로 2열의홈이관찰되는것이특징이었다. 잡식성조류인청둥오리에 Ligula 유충을 8마리를먹여생활사를관찰하였으나성충은발견하지못하였다. 미토콘드리아DNA의 cox1 염기서열 (343 bp) 을 GenBank 데이터와비교분석한결과 Digramma interrupta (=Ligula interrupta) 와 % (0-6 bp) 의유전적차이를보였으며 L. colymbi 와 % (15-29 bp), L. intestinalis와 % (14-64 bp) 로유전적으로다양한차이를보였다. Ligula 속과 Digramma 속조충은세로방향으로관찰되는생식기관의홈의수에따라형태학적으로분류되고있으나생식기관의차이를제외하고형태적으로유사하며, 유전학적으로 Ligula 속내에 Digramma 속이위치한다는이유를들어 Kuchta 등 (2008) 은 Digramma 속을 Ligula 속의동의어로취급하기도한다. 현재형태적분류가어려운상황에서구별없이 L. intestinalis 로유전자정보를등록하여계통분석에도많은혼란과어려움이있는것이사실이다. 따라서국내외에서발견되는 Ligula 속에대한생태연구및형태와함께유전학적으로도추가적인연구가필요하다고판단된다

36 YS3 남한강수계에서의자유생활아메바의분포조사및분리배양 강희경 ¹, 손혜진 ¹, 서가은 ¹, 박소리 ¹, 박아영 ², 정석률 ², 이상은 ³, 박미연 ³, 신호준 ¹ 아주대학교의과대학미생물학교실 ¹, 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소 ², 질병관리본부 국립보건연구원말라리아기생충과 ³ 파울러자유아메바 (Naegleria fowleri) 및가시아메바종 (Acanthamoeba spp.) 은토양과담수에서자유생활을하는아메바로서각각사람과실험동물에원발성아메바성수막뇌염 (PAM) 과아메바성각막염 (Amoebic keratitis) 를유발한다. 본연구는남한강수계에서의자유생활아메바분포조사를위해 2015년 8월부터 2016년 8월까지 1년간수상레저, 뱃놀이등과같은수중활동이빈번한여주지역에서자유생활아메바를분리배양및동정하고자하였다. 남한강수계인여주지역 10군데의표면수를채취후여러단계의필터과정을거친뒤, 마지막단계의샘플을사멸된 E. coli가도포된무영양한천배지위에접종배양하여아메바가관찰되면수차례의계대배양을거쳐순수분리하였으며, 분리된아메바들을 10% FBS를포함한 Nelson 및 PYG 배지를이용하여무균배양을실시하였다. 또한 3종류의 primer들즉, P-FLA, HART-NA, ITS primer들을이용하여 PCR 검출법을시행하였으며, 증폭된 PCR 산물들을 DNA sequencing을통하여 DNA 염기서열을비교관찰하였다. 여주지역에서 1년동안채수한결과 8월과 11월표본에서만자유생활아메바들이검출되었다. PCR법으로증폭된샘플들의 DNA 염기서열을얻어 GenBank에서유사성을비교해본결과, 자유아메바종인 Naegleria gruberi, N. philippinensis, N. australiensis, N. clarki 등과가시아메바종인 Acanthamoeba polyphaga, A. lugdunensis 등으로동정되었다 (86-99% 의상동성을확인 ). 분리배양에성공하여무균배양중인아메바는 PCR 검출법과 DNA sequencing을통해 DNA 염기서열을분석해본결과 A. polyphaga 와 A. lugdunensis로확인되었다. 여주지역의남한강수계에다양한자유생활아메바가분포하고있었으며, 수온이상승하는 8월에주로아메바가검출되는것을확인할수있었다. 또한아메바성각막염을유발시키는병원성가시아메바인 A. polyphaga 및 A. lugdunensis 국내분리주를얻을수있었다. 본연구결과로확립되어진아메바분리및배양법은향후전국적인환경수계에서의자유생활아메바분포연구에유용하게사용될수있을것으로생각된다

37 YS4 Inflammatory factors of prostate epithelial cells produced by stimulation of Trichomonas vaginalis promote development of prostate cancer cells 한익환, 김정현, 김상수, 안명희, 류재숙 한양대학교의과대학환경의생물학교실 Trichomonas vaginalis (Tv) is the most common sexually transmitted parasite. It is detected in prostatic tissue of benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer (PCa). Tv has been suggested to cause chronic prostatitis. Moreover, Up to 20% of all cancer cases worldwide are associated with chronic inflammation. Here, we investigated whether the inflammatory mediators produced by human prostate epithelial cells stimulated with Tv could promote development of PCa. Cytokines produced by human prostate epithelial cell (RWPE-1) stimulated with Tv were measured by ELISA and Real-time PCR. Conditioned medium of RWPE-1 cells was prepared by stimulating without (CM) and with Tv (TCM). Promotion of PCa cells (PC3, DU145 and LNCaP) by conditioned medium of RWPE-1 cells stimulated with Tv was observed by wound healing, proliferation and invasion assay. EMT (epithelial-mesenchymal transition) induction of prostate cancer cells was determined by RT-PCR and western blot. RWPE-1 cells increased production of IL-1β, IL-6, CCL2, CXCL8, PGE2 and COX2 by stimulation of Tv. When PCa cells were reacted with TCM, proliferation, invasion and migration of PCa cells were increased by TCM. Moreover, PCa cells stimulated with TCM induced EMT by decreasing the epithelial markers (E-cadherin and ZO-1) and increasing mesenchymal markers (vimentin, N-cadherin, β-catenin, snail and MMP9). Expression of receptors such as CXCR1, CCR2, IL-6R, EP2 and EP4, and signal molecules (Akt, ERK, JAK2/STAT3, IκBα and FGF2) of PCa cells were increased by stimulation of TCM. In addition, blockade of receptor by using each antibody (CXCR1, CXCR2, CCR2, GP130, EP2 and EP4) reduced proliferation of PCa cells. Inflammatory mediators produced by prostate epithelial cell stimulated with Tv induce proliferation, migration and invasion of PCa cells via activation of receptors and signal molecules. This result suggest that Tv may be one of factors causing tumor microenvironment for development of PCa

38 YS5 Identification of a reticulocyte-specific binding domain of Plasmodium vivax reticulocyte-binding protein 1 that is homologous to the PfRh4 erythrocyte-binding domain Jin-Hee Han¹, Seong-Kyun Lee¹, Bo Wang¹, Fauzi Muh¹, Myat Htut Nyunt¹, Ji-Hoon Park¹, Mohammad Rafiul Hoque¹, Sung-hun Na², Takafumi Tsuboi³ and Eun-Taek Han¹ Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine¹ and Obstetrics and Gynecology², School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea, Division of Malaria Research, Proteo-Science Center, Ehime University, Matsuyama, Ehime, Japan³ The Plasmodium vivax reticulocyte-binding protein (RBP) family was identified based on the annotation of adhesive ligands in the P. vivax genome. Reticulocyte-specific interactions with the PvRBPs (PvRBP1 and PvRBP2) were previously reported. Plasmodium falciparum reticulocyte-binding protein homologue 4 (PfRh4, a homologue of PvRBP1) was observed to possess erythrocyte-binding activity via complement receptor 1 on the erythrocyte surface. However, the reticulocyte-binding mechanisms of P. vivax are unclear because of the large molecular mass of PvRBP1 (>326 kda) and the difficulty associated with in vitro cultivation. In the present study, 34 kda of PvRBP1a and 32 kda of PvRBP1b were selected from a 30 kda fragment of PfRh4 for reticulocyte-specific binding activity analysis. We demonstrated their exact subcellular localization in blood-stage parasites, their ability to acquire immune responses in malaria patients, and their binding activity with normocytes and reticulocytes under in vitro conditions. Both PvRBP1a and PvRBP1b were found to be localized at the microneme in the mature schizont-stage parasites. Naturally acquired immune responses against PvRBP1a-34 and PvRBP1b-32 were observed lower than PvDBP-RII. The reticulocyte-specific binding activities of PvRBP1a-34 and PvRBP1b-32 were significantly higher than normocyte binding activity and were significantly reduced by chymotrypsin treatment. PvRBP1a and PvRBP1b might play roles in specific reticulocyte binding through direct interactions between the recombinant proteins and the reticulocytes. Understanding the reticulocyte-binding antigen profile is important for elucidating the P. vivax invasion mechanisms

39 YS6 Clinical and molecular surveillance of artemisinin resistance in Myanmar Myat Htut Nyunt¹,², Myat Phone Kyaw², Jin-Hee Han¹, Seong-Kyun Lee¹, Ji-Hoon Park¹, Fauzi Muh¹, Rafiul Hoque¹ and Eun-Taek Han¹ Department of Medical Research, Yangon, Republic of the Union of Myanmar¹, Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea² Emergence of artemisinin resistance malaria in South-East Asia countries threatens the global control of Malaria. Although K13 has been used for artemisinin resistance molecular marker, most of the mutations are needed to be validated. In this study, we aimed to assess the status of artemisinin resistance by clinical and molecular analysis including K13 and recently reported markers, pfarps10, pffd, and pfmdr2. We conducted the longitudinal cohort study in 1160 uncomplicated falciparum patients after treatment with artemisinin combination therapy (ACT), in six sentinel sites in Myanmar within 2009 to Therapeutic efficacy of the ACT was assessed by longitudinal follow-ups. Molecular markers analysis was done on all available day 0 samples. Overall adequate clinical and parasitological response was 1116/1152 (96.87%) with day 3 positivity of 92/1152 (8.0%). Among them, 550 isolates were available for molecular analysis and mutations were detected in K13 (185, 33.64%), pfarps10 (270, 49.09%), pffd (322, 58.55%), and pfmdr2 (271, 49.27%). K13 mutations, V127M of pfarps10, D193Y of pffd, and T448I of pfmdr2 were significantly associated with day 3 positivity (OR: 6.48, 3.88, 2.88, and 2.52 respectively). Day 3 positive and K13 mutants were detected only in southern Myanmar while comparatively fewer mutations of pfarps10, pffd, and pfmdr2 were observed in western Myanmar. We identified day 3 positivity after ACT and high K13 kelch mutations in southern Myanmar since Apart from K13, pfarps10, pffd and pfmdr2 are also useful for molecular surveillance of artemisinin resistance especially for where K13 mutation has not been reported. Appropriate and comprehensive approaches to eliminate the drug resistance strain and molecular surveillance on artemisinin resistance should be strengthened in all endemic countries

40 YS7 톡소포자충 microneme protein 8 을표현하는바이러스유사입자 백신효능 이수화 ¹,², 김아라 ¹,², 이동훈 ¹,², 전복실 ¹ 경희대학교의과대학의동물학교실 ¹, 경희대학교일반대학원기초의과학과 ² 톡소포자충은사람을포함한포유동물의세포내에기생하는세포내기생원충이며전세계적으로분포되어있다. 톡소포자충의 microneme protein 8 (MIC8) 은톡소포자충이숙주세포내로침입하기위한필수단백질이다. 본연구에서는톡소포자충의 MIC8을포함하는바이러스유사입자를제조하여마우스모델에서의백신효과를보고자한다. 톡소포자충의 MIC8 및인플루엔자바이러스 matrix protein 1 (M1) 유전자를각각클로닝하였다. Baculovirus expression system을이용하여인플루엔자바이러스 M1 또는톡소포자충의 MIC8을표현하는각각의 Baculovirus를생성하였다. 그리하여인플루엔자바이러스 M1을 core protein으로구성하고톡소포자충 MIC8을표현하는바이러스유사입자 (virus-like particles, VLPs) 백신을제조하였다. 제조된 VLPs를전자현미경및 Western Blots으로확인하고마우스모델에흡입 (Intranasal) 또는근육내 (Intramuscular) 경로로접종하였다. 바이러스유사입자가접종된마우스에서혈청을분리하여항체생성여부를조사하였고톡소포자충을감염시킨 (Challenge infection) 후마우스의면역반응, 생존율및그에따른염증반응을조사하였다. 톡소포자충의 MIC8이스파이크 (spike) 모양으로바이러스유사입자표면에표현되는 VLPs 백신이성공적으로제조되었다. 바이러스유사입자를마우스에접종한결과마우스혈청에서 IgG, IgG1 및 IgG2a 항체가검출되었으며, 분변에서는 IgA 항체가검출되었다. 이는흡입경로를통한면역화마우스에서높은수치를보였다. 비장세포를분리하여면역세포를관찰한결과면역화된마우스에서많은수의 CD4+ T cell과 germinal center B cell이검출되었다. 톡소포자충이감염된마우스의비장에서염증사이토카인 (Inflammatory cytokine) IFN-γ의수치가유의하게감소되였으며흡입경로를통한면역접종마우스에서 100% 의생존율을보였다. 톡소포자충의 MIC8을표현하는바이러스유사입자백신은마우스에서체액성및세포성면역을일으키고, 톡소포자충감염에의한비장에서의염증반응을감소시키며마우스의생존율를유의하게높이는것으로확인된바예방백신으로서가능성이확인되었다

41 YS8 인천지역인천대공원의모기종조사및 Flavivirus 검사 전호종 ¹, 안성규 ¹, 황명기 ¹, 주영란 ², 제갈승 ³, 공용우 ³, 박윤규 ¹, 김동수 ¹ 인하대학교의과대학열대의학교실 ¹, 질병관리본부질병매개곤충과 ², 인천시보건환경연구원미생 물과 ³ 인천지역은항구와국제공항이있는도시로해외로부터뎅기, 황열, 지카등의 Flavivirus 매개모기의접근이타조시에비해용의하며, 현인천지역의모기의종의분포를파악함으로방제와주의를할수있으므로본연구를하게되었다. 2016년 3월부터 9월까지월 2회 2주간격으로 24시간씩 BG-sentinel trap 및드라이아이스를사용하여인천대공원의모기분포를조사하였으며, 채집되는종별로최대 50마리씩 pooling 하여 QIAamp Viral RNA Kit를사용하여 RNA를추출후 Real-time RT-PCR 로바이러스검사를하였다. 바이러스검사는 Flavivirus Group-specific primer를사용하여검사하였다. 인천대공원에서 5속 8종의 837개체의모기를채집하였다. 채집모기중 66.8% 인 559개체가였으며 15.4% 인 129 개체가였다. 채집된모기중 Spp. 를제외한 836개체의모기의바이러스를 51pool 조사한결과 1개의 pool에서 Flavivirus 의양성이확인되었다. 발견된 Flavivirus 는 NCBI blast 상에서기록이되지않은 Unknown Flavivirus 로실험실에서확인중이다. 인천대공원은숲이인접해있는지역으로도심환경에비해서뎅기, 황열, 지카바이러스의매개 가능성이높은의비율이높으며, 지속적인감시가이뤄져야할것이다

42 P1 갯장어의 Stomachicola muraenesocis 국내첫보고 강예슬, 최성준, 이동민, 박한솔, 전형규, 엄기선 충북대학교의과대학기생충학교실 갯장어 (Muraenesox cinereus) 는회, 숙회, 탕등의방법으로요리하여여름보양식으로주로한국과일본에서소비되는바닷물고기이다. 한국에서의물고기기생충검사는주로민물고기를중심으로선행되어왔고바닷물고기에대한검사는상대적으로적었다. 본연구에서는식용바닷물고기인갯장어를대상으로기생충검사를하였다. 2016년 7월부터 9월까지여수수산물시장에서 5마리의갯장어를구입하여기생충을조사한결과 30마리의체장이긴흡충을발견하였다. 흡충은주로위에서발견되었으며이외에도간과복강에서도발견할수있었다. 충체 14마리를 10% 포르말린에고정한후 1% 아세토카민에염색하여광학현미경으로내부의형태를관찰하였고, 2마리는 SEM 촬영하여충체외부의특징을관찰하였다. 나머지 14마리는추후연구를위하여 10% 포르말린과 70% 에탄올에각각보관하였다. 형태학적관찰을통해이흡충은긴체장과충체미단으로갈수록점차좁아지는몸체, 길고나선상의형태를보이는전립선부분, 큰저정낭과수정낭, 복흡반아래에위치한삼각형혹은계란형의고환, 콩팥모양의난소, 7개의관으로이루어진실모양의난황관, 횡행의자궁고리를특징으로하였다. 이러한형태학적인특징을기반으로 1934년 Satyu Yamaguti가갯장어의위에서발견한 S tomachicola muraenesocis와동일한것으로동정하였다. S. muraenesocis는일본, 중국, 인도에서보고된반면한국에서는한번도보고된바가없었다. 이번연구는 S. muraenesocis의국내첫보고인동시에그와관련된 Genus에서도첫보고인것으로판단된다

43 P2 청설모 (Sciurus vulgaris) 에서발견된 3 종의외부기생충 최성준 ¹, 이동민 ¹, 박한솔 ¹, 전형규 ¹, 이영선 ², 나기정 ², 이인용 ³, 엄기선 ¹ 충북의대기생충학 ¹, 충북야생동물구조센터 ², 연세의대환경의생물학열대의학연구소 ³ 청설모 (Sciurus vulgaris) 는우리주변에서흔히볼수있는야생설치류로, 공원, 정원또는대학캠퍼스에서도자주관찰되는편이지만그기생충은잘조사되지않은편이다. 이번연구에서는청설모에서발견된 1종의벼룩과 2종의진드기를보고하고자한다. 2011년 11월부터 2014년 5월까지총 5마리의청설모가충북대학교캠퍼스내에서발견되었다. 각사체는지퍼백에담아실험실로옮겼으며, 물이담긴그릇위에 2 시간동안메달아외부기생충을수집하였다. 수집된충체는 70% 알콜에보관하였으며동정을위해투명화를진행한후광학현미경으로관찰하였다. 5마리의청설모중 4마리에서벼룩이발견되었으며, 2011년 11월과 2014년 5월에발견된개체에서는각각털진드기와중기문진드기가발견되었다. 이들은각각형태학적특징을통해 Ceratophyllus (Monopsyllus) indages, Leptotrombidium pallidum, Hirstionyssus sciurinus로발견되었으며이중 (727) (441) 의몸체를가진 H. sciurinus 의경우국내에보고된다른 3종의 Hirstionyssus 속진드기와는암컷을기준으로, 꼬리쪽으로가늘어지는육각형의등판, 흉판의 st1의길이, coxal spur formula ( ) 를통해구분이가능하였다. 연구기간동안총 5마리의청설모를검사하여, C. (M.) indages, L. pallidum, H. sciurinus의외부기생충 3종을확보하였다. 이중 L. pallidum의경우쯔쯔가무시를유발할수있는매개체로알려져있으며, 청설모에서는처음으로발견된사례이고, H. sciurinus는국내에서처음으로보고되는종이다

44 P3 First report of small hive beetle infestation at Korean apiary Mi-Sun Yoo, Hyun-Ji Seo, Do-Hyun Han, Suk-Chan Jung, Yun Sang Cho Center for Honeybee Disease Control, Bacterial Disease Division, Animal and Plant Quarantine Agency The small hive beetle(shb), Aethina tumida Murray, is native to sub-saharan Africa in western honey bee, (Apis mellifera). SHBs were confirmed in the southeastern United States in 1998 in a commercial apiary in Florida, but previously unidentified specimens indicate its presence in the U.S. since at least It has since spread to more than 30 states as well as Egypt, Australia, Portugal, Canada, Italy, Brazil. SHBs can cause severe damage to honeybee colonies, resulting on the colony collapsing. September in 2016, SHBs were founded in a honeybee apiary located in Miryang city where almost colonies were collapsed within 20 days. It was the first confirmed case of SHBs in Korea. In the apiary, we identified only adult beetle then hatched larvae were observed by laboratory rearing. Adult SHB collected from apiary were dark broun oval-shaped, usually around 5-6 mm long and 3 mm wide. They had club shaped antenna and shortened wing case(elytra), distinctively. Also, spines on dorsum and 3 pairs of leg at the head end of the larvae were observed in laboratory. The impact of SHBs seem to different depending on quantitative behavioural differences between honeybee subspecies, different beekeeping techniques, climatic differences, etc, Until now, it was thought to be impossible that SHBs survive for overwinter in winter climate of Korean. However depending on the climate warming, it is considered that has enabled the emergence of beetle at the South Korea. SHBs have become a global threat, but our knowledge of SHBs in Korea is limited, creating demand for more research in all areas of it

45 P4 Status of cholangiocardinoma and bile duct dilatation of nine provinces in Lao PDR 김주영 ¹, 임한종 ², 채종일 ³, 민득영⁴, 엄기선 5, 손운목 6, Bounlay Phommasack 7, Bounnaloth Insisiengmay 7, 용태순 ¹ 연세대학교의과대학환경의생물학교실, 열대의학연구소, 의용절지동물소재은행 ¹, 고려대학교의과대학기생충학교실 ², 서울대학교의과대학기생충학교실 ³, 을지대학교의과대학미생물학면역학교실⁴, 충북대학교의과대학기생충학교실 5, 경상대학교의과대학기생충학열대의학교실 6, Department of Hygiene and Prevention, Ministry of Public Health, Vientiane, Lao PDR 7 Opisthorchis viverrini has been classified as the group 1 carcinogen to cause cholangiocarcinoma (CCA). Although severe opisthorchiasis endemic areas have been known along the Mekong River in Lao PDR, status of CCA in residents of the area is still under investigation. In this study, abdominal ultrasonography of 6388 residents in 9 provinces (Vientiane Municipality, Savannakhet, Phongsaly, Khammouane, Saravane, Champasak, Vientiane, XiengKhuouang and Luang Prabang) of Lao PDR performed during 2007 to 2011 was analyzed. Overall, fifty three cases (0.83%) were diagnosed as CCA by abdominal ultrasonography. CCA rate of Vientiane Municipality, Savannakhet and Khammouane province was 1.46%, 1.52%, and 1.27%, respectively. However, only 0.24% was CCA cases in the other provinces. Bile duct dilatation (Grade 2 or over) of the residents was significantly higher in the three provinces than the other provinces; Vientiane Municipality (29.52%), Savannakhet (14.56%), Khammouane (13.77%), and the other provinces (2.84%). These results correspond with the previous reports showing higher opisthorchiasis endemicity of Vientianne Municipality, Savannakhet and Khammouane Provinces

46 P 년국내급성설사질환자의장관감염성원충실험실감시 마다원, 조신형, 박미연, 전형일 국립보건연구원말라리아기생충과 흔하게일어나는급성설사질환은세균, 바이러스, 기생충등다양한원인으로발생되며, 1일이상 2주이내설사, 구토, 복통등이증상이계속되는질환이다. 급성설사질환을일으키는기생충성주요원인으로는작은와포자충, 람블편모충, 이질아메바, 원포자충이있으며, 이 4가지원충은 감염병의예방및관리에관한법률 에따라지정감염병분류되어관리되고있다. 이에국립보건연구원말라리아 기생충과에서는수인성식품매개질환법정지정감염병인 4종원충에대한감시를통해지역별, 월별, 성별국내발생양상을조사하였다. 2015년 1월부터 12월까지 13개 ( 경기, 경북, 광주, 대구, 대전, 부산, 서울, 인천, 전남, 전북, 제주, 충남, 충북 ) 보건환경연구원과연계된지역별병 의원에설사질환으로내원하는환자들의대변 1,722건을수거하여 DNA를추출한후 Nested-PCR법으로 4종의장관감염성원충양성률을조사하였다. 그결과총 0.23%(4건 ) 의양성률을확인하였다. 4종의원충별양성률은작은와포자충 0.12%(2 건 ), 람블편모충 0.06%(1건 ), 이질아메바 0.06%(1건 ), 원포자충 0%(0건 ) 순으로나타났으며, 월별양성률은 6월 1.21%(2건 ), 8월 0.65%(1건 ) 였다. 지역별로는경북 1.40%(3건 ), 부산 0.40%(1건 ) 로검출되었고, 연령별로는 51 60세 0.79%(1건 ), 60세이상 0.46%(2건 ) 이였다. 성별로는남성 0.27%(2건 ), 여자 0.25%(2건 ) 으로나타났으며성별유의차는없었다. 수인성식품매개질환장관감염법정지정감염병 4종원충은증가하는해외여행자및농산물수입으로집단감염의위험성이증가하고있다. 현재우리나라전국양성률은선진국들 ( 약 1% 전후 ) 과비교해 0.23% 은매우낮은수준이나, 국내에서 2010년과 2012년에각각전북 OO마을주민의람블편모충집단감염유행으로 7명의환자발생과서울 OO아파트주민의작은와포자충집단감염유행으로 126명의환자발생사례는오염된음용수에의한국내집단감염유행의가능성또한높음을의미한다. 이러한사례로볼때장관감염성원충에대한지속적이고모니터링이요구된다

47 P6 전남신안군압해도일부주민의참굴큰입흡충감염률추이 ( 년 ) 조재은 ¹, 송혜미 ¹, 정봉광 ², 신은희 ², 한은택 ³, 표경호 ⁴, 김민재 ², 채종일 ¹ 한국건강관리협회기생충병연구소 ¹, 서울의대기생충학교실 ², 강원대의학전문대학원환경의생물 학교실 ³, 연세의대암연구소 ⁴ 참굴큰입흡충은 1988년전남신안군출신의한여성에게서충체 910여마리가검출된후, 1993 년에신종 Gymnophalloides seoi Lee, Chai and Hong으로발표된우리나라에만분포하는토착적인인체감염기생충이다. 아직제1중간숙주는아직밝혀지지않았지만, 자연산참굴이제2 중간숙주로인체감염원역할을하며, 자연계종숙주는굴을먹는검은머리물떼새 (oystercatcher) 로알려져있다. 국내전남신안군섬일대에서유행하는것으로보고되었고, 특히 199 년에보고된결과에의하면압해면거주주민의참굴큰입흡충감염률이 49% 에달하는지역이발견되었다. 이연구에서는참굴큰입흡충의고유행지역이고제2중간숙주인참굴이서식하는갯벌인근지역인압해면신장리주민들을대상으로참굴큰입흡충충란양성률을 2000년부터 2016년까지기간을두고조사하였다. 조사첫해에는높은감염률로인해 1년에 4번조사를수행하였고, 조사후감염자들에게프라지콴텔을투약하였다. 투약을통해감염율이감소한 2차년도에는조사횟수를줄여 2번조사하였고, 2001년이후에는전체적으로감염률이낮아져 2~ 4년간격으로 1년에 1번씩조사를실시하였다. 2000년에는 1월 72.0% (77/107) 로매우높았던충란양성률이 6월 22.2% (24/109), 9월 24.8% (27/91), 12월 12.5% (13/76) 로감소하였다. 2001년 4월에는 28.6% (26/91), 11월에는 25.6% (23/91) 로 2000년에비해선다소증가하였고, 2006년 2 월에는 14.5% (11/76) 로다시감소하였다. 2009년 5월에는 44.4% (24/54) 로다시양성률이증가하였고, 2013년에는 33.3% (8/24) 로다소감소하는경향을보였다. 가장최근인 2016년 7월에는 16.6% (5/30) 로양성률이감소하였다. 참굴큰입흡충고위험지역인신안군압해도신장리주민들의충란양성률은지난 16년동안꾸준히높게유지되고있어투약뿐아니라식습관개선을위한지속적인보건교육이필수적인것으로생각된다

48 P7 경북위천의간흡충감염실태조사 신희은 ¹, 손운목 ², 박옥희 ³, 손동철 ⁴, 백선옥 ¹, 이영주 ¹, 박미연 ¹, 조신형 ¹ 질병관리본부국립보건연구원말라리아기생충과 ¹, 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학 교실 ², 군위군보건소 ³, 경상북도보건환경연구원 ⁴ 경상북도위천은낙동강수계에속하는제1지류로군위군, 의성군, 상주시를거쳐본류인낙동강으로흐른다. 본조사에서는위천을중심으로인근주민의간흡충감염률을확인하였고, 위천에서식하는민물고기를채집하여서식어종별간흡충피낭유충감염유무를확인하고자하였다. 최근 3년간 (2014년-2016년) 위천에거주하는지역주민 3,664명을비확률표본추출법으로선정하였다. 검사방법은 Formalin-Ether 침전법을적용하여, 대변검체를전처리한후현미경으로간흡충충란을확인하였다. 민물고기에서의간흡충피낭유충감염상조사는 2016년위천에서채집한피라미, 돌고기등 12종 113마리를인공소화법으로처리하여해부현미경으로동정하였다. 총 3,664건중간흡충충란양성률은 7.2%(263건 ) 로비교적높게나타났다. 위천의상류지역 (11%) 의간흡충충란양성률이중류 (6.3%), 하류 (3.8%) 보다각각 2배, 3배높은양성률을보였다. 또한, 위천에서 5 km 이내지역에거주하는주민 (8.8%, 평균 EPG:149.4) 이이외지역주민 (2.7%, 평균 EPG:13.9) 보다양성률및충란 EPG가높게검출되었다. 성별간흡충충란양성률은남자 (11.2%) 가여자 (3.6%) 에비해 3배높게감염되어있었으며, 연령별로는남성과여성모두에서 60대 ( 남 :12.2%, 여 :4.6%) 에서가장높은충란양성률을보였다. 위천에서식하는민물고기에서의간흡충피낭유충은꺽지를제외한 11종 (91.7%) 에서검출되었고, 전체어류 113마리중 85 마리 (75.2%) 가감염되었다. 어체당평균 480.8개의감염률을보였으며, 중고기, 참마자, 몰개순으로각각감염어체당평균 1,835, 1,559, 및 1,164개의높은피낭유충검출률을보였다. 낙동강의대표적인지류인위천은매년지속적인검사와투약을실시함에도불구하고, 간흡충충란양성률이타지역 ( 평균 4.1%) 보다높게유지되고있다. 위천의얕은수심과피라미, 중고기와같은국내고유종민물고기의높은서식률은인근주민들의민물고기채집, 생식습성등에영향을주는것으로보인다. 위천은피낭유충감염률조사수계지역중간흡충피낭유충이가장높게검출된지역으로지속적실태조사가필요하다

49 P8 강원도동해안석호에서채집한어류의인체감염흡충류피낭유충 감염상 손운목 1, 김정아 1, 김희주 1, 나병국 1, 조신형 2, 박미연 2, 이순원 3, 최성봉 3, 허범영 3, 석원석 3 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실 1 ; 질병관리본부말라리아. 기생충과 2 ; 강원도 보건환경연구원 년과 2015 년에강원도동해안에위치한고성군의화진포호및송지호, 강릉시의향호및경 포호등에서채집한어류에서흡충류피낭유충감염상을조사하고자하였다. 2014년에화진포호에서 7종 36마리, 경포호에서 5종 68마리, 2015년에송지호에서 4종 50마리, 향호에서 7종 71마리를각각채집하여경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실실험실로냉장운반한후각개체별로인공소화법으로조사하였다. 표주박이형흡충 (Pygidiopsis summa) 의피낭유충이화진포호 (69.2%), 송지호 (100%) 및경포호 (100%) 숭어에서감염어체당각각 672개, 147개및 419개씩검출되었다. Metagonimus spp. 의피낭유충이송지호 (7.1%), 향호 (60.0%) 및경포호 (40.0) 황어에서검출되었으며감염어체당각각 2.0개, 13.1개및 20.2개의감염량을나타내었다. 가시입이형흡충 (Centrocestus armatus) 피낭유충은향호의황어및민물검정망둑, 경포호의문절망둑등에서검출되었으며감염어체당각각 1.5개, 7.3개및 3.0개의감염량을나타내었다. 극구흡충 (Echinostome) 피낭유충이송지호의황어 1마리 (7.1%) 에서 1개가검출되었고새인두흡충 (Clinostomum complanatum) 의피낭유충이송지호의붕어 2마리 (10.0%) 에서감염어체당평균 7.5개가검출되었다. 동양담낭흡충 (Metorchis orientalis) 의피낭유충이향호의황어 1마리 (5.0%) 에서 9개가검출되었고타이완담낭흡충 (Metorchis taiwanensis) 의피낭유충이향호의황어 8마리 (40.0%) 에서감염어체당 6.3개가검출되었다. Cryptocotyle sp. 의피낭유충이송지호황어 5마리 (35.7%) 에서감염어체당 2.8개가검출되었다. 강원도동해안에위치한화진포호, 송지호, 향호및경포호등의석호에서채집한어류에표주박이형흡충을비롯하여 Metagonimus spp, 가시입이형흡충, 극구흡충류, 새인두흡충, 동양담낭흡충, 타이완담낭흡충및 Cryptocotyle sp. 등다양한흡충류피낭유충이감염되어있음을확인하였다

50 P9 탐진강수계담수어의인체감염흡충류피낭유충감염상 손운목 1, 김정아 1, 김희주 1, 나병국 1, 조신형 2, 박미연 2, 윤기복 3, 임현철 3, 신성식 4 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실 1 ; 질병관리본부말라리아. 기생충과 2 ; 전라남도 보건환경연구원 3 ; 전남대학교수의과대학수의기생충학교실 년부터 2016 년까지 3 년간전라남도강진군및장흥군의탐진강에서채집한담수어에서인 체감염흡충류피낭유충감염양상을조사하고자하였다. 전라남도강진군 (2014: 12종 110마리 ) 및장흥군 (2014: 13종 167마리 ; 2015: 15종 243마리 ; 2016: 14종 174마리 ) 의탐진강에서채집한총 694마리의어류를경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실실험실로냉장운반한후각개체별로인공소화법으로조사하였다. 탐진강수계어류에서간흡충을비롯하여 Metagonimus spp., 가시입이형흡충, 극구흡충류 (Echinostoma spp. 및 Echinochasmus spp.), 새인두흡충및동양담낭흡충등의인체감염흡충류피낭유충이검출되었다. 간흡충피낭유충은양성어종의어류총 317마리중 178마리 (56.2%) 에서감염어체당평균 70.7개가검출되었다. 조사연도별양성률은 47.3%(2014), 61.0%(2015) 및 64.2%(2016) 이었고감염밀도는감염어체당평균 59개, 42개및 120개이었다. Metagonimus spp. 피낭유충은양성어종의어류총 638마리중 442마리 (69.3%) 에서감염어체당평균 154개가검출되었다. 조사연도별양성률은각각 69.5%, 69.6% 및 68.6% 이었고감염밀도는감염어체당평균 22개, 224개및 247개이었다. 가시입이형흡충피낭유충은양성어종의어류총 215마리중 177마리 (82.3%) 에서감염어체당평균 1,769개가검출되었다. 조사연도별양성률은 85.1%, 73.6% 및 100% 이었고감염밀도는감염어체당평균 1,614개, 2,136개및 1,360개이었다., 극구흡충류피낭유충은양성어종의어류총 353마리중 109마리 (30.9%) 에서감염어체당평균 7.7개가, 새인두흡충피낭유충은 81마리중 19마리 (23.5%) 에서감염어체당평균 1.7개가, 동양담낭흡충피낭유충은 112마리중 28마리 (25.0%) 에서감염어체당평균 7.6개가각각검출되었다. 흡충류피낭유충유행도를나타내는공식 ( 어종양성률 x 양성어종의양성률 x 감염피낭유충밀도 ) 에의하면간흡충은평균 18.49( ) 이었고 Metagonimus spp. 는평균 74.62( ) 이었다. 탐진강수계어류에다양한인체감염흡충류의피낭유충이감염되어있었고간흡충의유행도는거리높지않았으나 Metagonimus spp. 가시입이형흡충및극구흡충류등장흡충류의유행도는다소높음을확인하였다

51 P10 우리나라동해안및동부일부지역담수어의인체감염장흡충류피낭 유충감염양상 손운목 1, 김정아 1, 김희주 1, 나병국 1, 조신형 2, 박미연 2, 손동철 3, 이순원 4, 허범영 4, 석원석 4 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실 1 ; 질병관리본부말라리아. 기생충과 2 ; 경상북도 보건환경연구원 3 ; 강원도보건환경연구원 4 울산광역시태화강및척과천, 경북경주시기계천 ( 제 1 권역 ), 경북군위군위천및영양군반변천 ( 제 2 권역 ), 경북영덕군오십천과울진군왕피천 ( 제 3 권역 ), 강원도삼척시오십천과양양군남대천 ( 제 4 권역 ) 등권역별어류에서장흡충류피낭유충감염상을조사하고자하였다. 울산광역시태화강 (14종 89마리 ) 및척과천 (10종 221마리 ), 경북경주시기계천 (12종 111마리 ), 경북군위군위천 (19종 245마리 ), 영양군반변천 (12종 161마리 ), 영덕군오십천 (11종 122마리 ), 울진군왕피천 (13종 239마리 ), 강원도삼척시오십천 (15종 143마리 ), 양양군남대천 (13종 140마리 ) 등에서채집한어류를실험실로냉장운반한후각개체별로인공소화법으로조사하였다. Metagonimus spp. 피낭유충은전체양성어종의어류총 1,211마리중 733마리 (60.5%) 에서감염어체당평균 140개가검출되었다. 제 1 권역은양성어종의어류총 341마리중 148마리 (43.4%) 에서감염어체당평균 74.1개가, 제 2 권역은 299마리중 163마리 (54.5%) 에서평균 3.8 개가, 제 3 권역은 332마리중 259마리 (78.0%) 에서평균 240개가, 제 4 권역은 239마리중 163 마리 (68.2%) 에서평균 178개가각각검출되었다. 가시입이형흡충피낭유충은전체양성어종의어류총 835마리중 577마리 (69.1%) 에서감염어체당평균 1,065개가검출되었다. 제 1 권역은양성어종의어류총 246마리중 181마리 (73.6%) 에서감염어체당평균 614개가, 제 2 권역은 257마리중 182마리 (70.8%) 에서평균 1,431개가, 제 3 권역은 138마리중 79마리 (57.3%) 에서평균 1,677개가, 제 4 권역은 194마리중 135마리 (69.6%) 에서감염어체당평균 821개가각각검출되었다. 극구흡충류 (Echinostoma spp. 및 Echinochasmus spp.) 피낭유충은조사지역의다양한어류에서검출되었다. Metagonimus spp. 의유행도는제 1 권역 8.03( 태화강 : 0.05; 척과천 : 42.41; 기계천 : 0.96), 제 2 권역 1.05( 위천 : 1.11; 반변천 : 1.0), 제 3 권역 90.73( 오십천 : 16.40; 왕피천 : ), 제 4 권역 70.57( 오십천 : 12.65; 남대천 : ) 등이었다. Metagonimus spp. 의피낭유충은경북및강원도동해안인제 3 및 4 권역어류에서높은유행도를나타내었고가시입이형흡충피낭유충은경북군위군위천, 울진군왕피천, 영덕군오십천, 경주시기계천, 강원도양양군남대천등의어류에서높은유행도를나타냄을확인하였다

52 P11 우리나라동해안및동부일부지역담수어의권역별간흡충피낭유충 감염양상 손운목 1, 김정아 1, 김희주 1, 나병국 1, 조신형 2, 박미연 2, 손동철 3, 이순원 4, 허범영 4, 석원석 4 경상대학교의학전문대학원기생충학. 열대의학교실 1 ; 질병관리본부말라리아. 기생충과 2 ; 경상북도 보건환경연구원 3 ; 강원도보건환경연구원 4 울산광역시태화강및척과천, 경북경주시기계천 ( 제 1 권역 ), 경북군위군위천및영양군반변천 ( 제 2 권역 ), 경북영덕군오십천과울진군왕피천 ( 제 3 권역 ), 강원도삼척시오십천과양양군남대천 ( 제 4 권역 ) 등권역별어류에서간흡충피낭유충감염상을조사하고자하였다. 울산광역시태화강 (14종 89마리 ) 및척과천 (10종 221마리 ), 경북경주시기계천 (12종 111마리 ), 경북군위군위천 (19종 245마리 ), 영양군반변천 (12종 161마리 ), 영덕군오십천 (11종 122마리 ), 울진군왕피천 (13종 239마리 ), 강원도삼척시오십천 (15종 143마리 ), 양양군남대천 (13종 140마리 ) 등에서채집한어류를실험실로냉장운반한후각개체별로인공소화법으로조사하였다. 간흡충피낭유충은제 1 및 2 권역어류에서만검출되었다. 제 1 권역은양성어종의어류총 158마리중 87마리 (55.1%) 에서감염어체당평균 15.5개가검출되었고제 2 권역은양성어종의어류총 369마리중 263마리 (71.3%) 에서감염어체당평균 526개가검출되었다. 간흡충피낭유충이태화강수계 18종 310마리의어류중돌고기, 긴몰개, 버들치, 납지리, 가시납지리, 피라미및동사리등 7종 (38.9%) 74마리 (23.9%) 에서감염어체당 17.3개가검출되었다. 형산강수계 12 종 111마리의어류중돌고기 13마리 (11.7%) 에서감염어체당 5.2개가검출되었다. 위천조사어류 19종 245마리중피라미, 갈겨니, 돌고기, 칼납자루, 줄납자루, 몰개, 긴몰개, 붕어, 납지리, 왜매치, 끄리, 참중고기, 참붕어, 모래무지, 모래주사, 납자루, 버들치및큰납지리등 18종 (94.7%) 161마리 (65.7%) 에서감염어체당 738개가검출되었다. 반변천조사어류 12종 161마리중피라미, 쉬리, 돌고기, 칼납자루, 줄납자루, 긴몰개, 왜매치, 참중고기및모래주사등 9종 (75.0%) 102마리 (63.4%) 에서감염어체당 190개가검출되었다. 흡충류피낭유충유행도를나타내는공식 ( 어종양성률 양성어종의양성률 감염피낭유충밀도 ) 에의하면제 1 권역은 1.68 ( 태화강 : 0.08; 척과천 : 6.12; 기계천 : 0.31) 이었고제 2 권역은 ( 위천 : ; 반변천 : ) 이었다. 간흡충피낭유충이경북및강원도동해안인제 3 및 4 권역어류에서는검출되지않았고동남부해안에위치한제 1 권역어류에서는낮은유행도를, 동부내륙지역인제 2 권역어류에서는매우높은유행도를나타냄을확인하였다

53 P12 Suppression of host infected Toxoplasma gondii proliferation by Terminalia chebula Retzius and Cynanchum atratum process Pu-Reum Sun¹, Hei-Gwon Choi¹, Fei-Fei Gao¹, In-Wook Choi¹,, Jae-Yul Kwon 2, Jae-Min Yuk¹, Young-Ha Lee¹, Guang-Ho Cha¹, Department. of Medical Science 1, Department of Medical Education 2, College of Medicine, Chungnam National University, Republic of Korea Terminalia chebula Retzius, commonly known as black- or chebulic myrobalan, has been widely known for antioxidant, antidiabetic, anti-inflammatory. Cynanchum atratum, is commonly called Xu Chang Qing in China, has been used as a treatment of gastroenteritis, ascites. Both of T. chebula, C. atratum are used in Chinese, India and South-East Asia as a common herbal remedy up to this time reported. This present study was performed to investigate the possibility of T. chebula and C. atratum as a drug candidate for suppression of T. gondii. In ARPE-19 cells, C. atratum treatment significantly suppressed proliferation of infected T. gondii but T. chebula cannot inhibit. To Monitor autophagic flux in ARPE-19 cell, we used Tandem fluorescent-tagged LC3 (mrfp-egfp-lc3) and checked at the level of protein by western blotting. When T. chebula and C. atratum was treated to ARPE-19 cell for 3h, the level of LC3 protein increased. Moreover, T. chebula and C. atratum increase the number of RFP-LC3, which results in misinterpreting autophagic flux increasing by change autophagosome to autolysosome fusion. Also, it is well known that autophagy is closely related to oxidative stress, we examined whether autophagy inducing intracellular ROS generation or not by using a superoxide indicator, dihydroethidium (DHE), staining. But, there are no change of host cell ROS production. It means that suppression of host-infected T. gondii proliferation is ROS-independent mechanism in ARPE-19 cells. The further of studies is that the difference between of T. chebula and C. atratum -induced autophagy in ARPE-19 cell and what kind of molecular affect, which molecular is targets in autophagy, How is the autophagy signal transmitted? These important questions should be studying our further

54 P13 CREBH-mediated autophagy is crucial for resistance to Toxoplasma gondii in macrophage Jina Lee 1,2, Ji Hye Kim 1,2, Su-Jin Bae 1,2, Guang-Ho Cha 1,2, Young-Ha Lee 1,2 Jae-Min Yuk, 1,2* Department of Medical Science, Chungnam National University Graduate School, Republic of Korea 1, Department of Infection Biology, Chungnam National University School of Medicine, Republic of Korea 2 Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan capable of manipulation at host immune response. camp responsive element-binding protein H (CREBH) as an endoplasmic reticulum (ER)-bound transcription factor control various metabolic pathway and genes expression involved in acute inflammatory response. However, the roles of CREBH in the regulation of innate immune responses against T. gondii have been largely unknown. Here we first examined whether CREBH deficiency affects the susceptibility to T. gondii infection. Here we first examined whether CREBH deficiency affects the susceptibility to T. gondii infection. CREBH deficient mice showed significant decrease of cyst burden in brain tissues. Moreover, intracellular T. gondii proliferation was more decreased in primary macrophages isolated from CREBH deficient mice than wild type (WT). To identify acting mechanism of CREBH in the regulation of T. gondii infection, we compared the autophagy activity in WT or CREBH deficient primary macrophages, respectively. Western blot analysis showed that CREBH deficiency resulted in the enhanced conversion of LC3-I to LC3-II in primary macrophages. In addition, CREBH deficiency significantly increased the frequency of autophagosome-lysosome fusion in primary macrophages infected with T. gondii. These finding brings novel function of CREBH for the regulation of autophagy activation during T. gondii infection

55 P14 Increased production of cytokines and chemokines in human macrophages and mast cells treated with T. gondii lysate or LPS EA Park, SC Choi, IH Han, JS Ryu, MH Ahn Department of Environmental Biology and Medical Parasitology, Hanyang University College of Medicine, Seoul, , Korea Introduction ; Macrophages have an important role for defense against Toxoplasma gondii (T. gondii). Activated macrophages produce inflammatory cytokines, including TNF-α. The role of mast cells in T. gondii infection is poorly known. Mast cells act as effector cells in Th1 or Th2 mediated inflammation. The aim of this experiment was to investigate the role of mast cells and interaction with macrophages in T. gondii infection. Method ; We used human macrophages (THP-1) and mast cells (HMC-1). Production of TNF-α, IL-6, IL-8, MCP-1 were measured by RT-PCR and ELISA methods. TLR4, MAPK and NF-kB signal pathways were observed by Western Blot. Results ; Pro-inflammatory cytokines such as IL-12, TNF-α were suppressed by T. gondii lysate in LPS-activated macrophages. ERK1/2, p38 and JNK MAPKs were activated by LPS alone and LPS plus T. gondii lysate co-treatment in THP-1 cell. T. gondii lysate also suppressed TLR4 expression and NO production in a human macrophage cell line. Gene expression and secretion of CXCL-8(IL-8)and MCP-1 were observed in T. gondii lysate treated HMC-1 cells. The expressions of IL-4 and TNFα mrna were up-regulated by T. gondii lysate in HMC-1 cells. Degranulation of mast cells was increased in T. gondii lysate treated HMC-1 cells. Conclusion ; Activated mast cells affected to macrophages in T. gondii infection

56 P15 Toxoplasma gondii induce autophagy and apoptosis of human umbilical cord mesenchymal stem cell via down-regulation of Mcl-1 Jia-Qi Chu 1, Xiang Gao 1, Peng Li 1, Rui Huang 1, Young-Ha Lee 2, Yu Zhou 3 and Juan-Hua Quan 3 Stem Cell Research and Cellular Therapy Center, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang, China 1. Department of Infection Biology, Chungnam National University, Daejeon, Korea 2. Department of Gastroenterology, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang, China 3. Toxoplasma gondii infection acquired by pregnant women during gestation and its transmission to the fetus resulting in fetal death or in severe clinical symptoms. However, the underlying pathogenesis is still remains poorly established. This study aims to determine the effect of T. gondii infection in human umbilical cord mesenchymal stem cells (huc-mscs) and the regulatory pathway participated in cell autophagy and apoptosis. The mesenchymal stem cell associated cell surface marker configuration was confirmed by flow cytometry prior to the experimental application of all cells used throughout the experiments. huc-mscs were infected with GFP-expressing T. gondii at a MOI of 5 for the indicated time points and stained with Texas Red-X phalloidin for labeling F-Actin (red) and nuclei were stained with DAPI (blue). The number of T. gondii infected cells and the total number of cells were counted and infection rate was calculated. Western blotting was performed to detect autophagy related antibodies (LC3B and p62), T. gondii specific antibody (TP3), p-mtor, mtor and its downstream effectors S6K1 (phosphorylation at Thr-389), 4E-BP1 (phosphorylation at Thr37/46), Bcl-2 family proteins (Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1, Bim, Bax, Bid, Bak), PARP and cleaved Caspase-3. To further investigate the role of Mcl-1, we constructed a recombinant adenovirus expressing Mcl-1. After adenoviral infection with huc-mscs, the expression of Mcl-1 was confirmed by qrt-pcr and Western blot. Ultrastructural morphology of huc-mscs infected with DsRed or DsRed-Mcl-1 expressing adenovirus was examined by transmission electron microscopy. To determine whether the functional interaction between Mcl-1 and Beclin-1 participated in T. gondii-induced huc-mscs autophagy, cells were fractionated into heavy membrane (HM) containing mitochondria and light membrane (LM) containing endoplasmic reticulum (ER) and Mcl-1 was further immunoprecipitated. Beclin-1 and Mcl-1 protein levels were determined by Western blotting. The quality of the fractionation experiments was confirmed by assessing the presence of COX IV for mitochondria and Calreticulin for ER - 54-

57 T. gondii infection rate of huc-mscs was time-dependently gradually increased from 4 h to 24 h after infection. Cell autophagy hallmark protein LC3B was up-regulated and p62 was down-regulated. Bcl-2 family proteins (Bcl-2, Bcl-xL, Bim, Bax, Bid, Bak and Puma) expression levels remain unchanged, whereas the Mcl-1 levels of huc-mscs were time-dependently dramatically decreased upon infection with T. gondii. However, over-expression of Mcl-1 dramatically decreased LC3B and cleaved caspase-3 levels but significantly increased basal levels of p62 in T. gondii infected huc-mscs. In addition, T. gondii infection significantly reduced mitochondria Mcl-1 protein levels, which is absent from ER organelle. Beclin-1 co-precipitated with Mcl-1 only in the fraction containing mitochondria, indicating that the two proteins interact at the mitochondria but not the ER. T. gondii-induced autophagy of huc-mscs as early as 8 h after infection but induced apoptosis at 24 h post-infection. Mcl-1 was revealed as a key regulator in both autophagy and apoptosis during T. gondii infection. Mcl-1 regulate T. gondii-infection induced huc-mscs autophagy by interacts with Beclin-1 on the mitochondria

58 P16 톡소포자충감염수지상세포의 Cytokine 생산량및 Toll-like receptor 발현량분석 이재형 ¹², 최인욱 ², 최희권 ¹², 육재민 ¹², 차광호 ¹², 이영하 ¹² 충남대학교대학원의과학과 ¹, 충남의대감염생물학교실 ² 수지상세포 (Dendritic cells) 는전문적인항원제시세포 (APCs) 로바이러스, 세균또는기생충감염에의한획득면역반응을일으키며 NK세포및 NKT 세포의활성유도로선천면역에도중요한역할을한다. 이번연구는수지상세포에톡소포자충을감염시켰을때분비되는 cytokine을확인하고, 이들이어떠한 Toll-like receptor(tlrs) 를거치는지확인하였다. 수지상세포의일종인 DC2.4 세포에톡소포자충 (Toxoplasma gondii) 을감염시켜ELISA와 RT-PCR로 proinflammatory cytokine (IL-4, IL-10, IL-12, IFN-γ, IL-6, TNF-α) 생산량을측정하고 TLRs 발현량을 RT-PCR로조사하였다. 수지상세포에톡소포자충감염시 IL-4, IL-10, IL-12, IFN-γ 생산량은변화가없었지만 IL-6와 TNF-α 생산량은감염초기에증가하였다. IL-6 생산량은충체농도에비례하여증가하였으나, TNF-α 생산량은감소하였다. TLRs 발현량을조사한결과, TLR2와 4 발현량이대조군에비하여증가하였다. 톡소포자충감염수지상세포에서 IL-6 및 TNF-α 생산량이감염초기유의하게증가하였고 TLR2 와 TLR4 발현량이높았으며, 추후이들 cytokine 과 TLR 과의상관관계를연구하고자한다

59 P17 FoxO1 is a major Transcription Factor for NOX4 expression in ARPE-19 cell Fei-Fei Gao¹, Wei Zhou³, In-Wook Choi¹, He-Kyoung Kim¹, Jae-yul Kwon², Jae-Min Yuk¹, Young-Ha Lee¹, Guang-Ho Cha¹ Department of Medical Science¹, Department of Medical Education² College of Medicine, Chungnam national university, Daejeon , Korea, Institute of Immunology, Taishan Medical College, Tai an, Shandong, China³ To investigate FoxO1 is the major transcription factor to regulate NOX4 expression and function. The endogenous FoxO1 was knockdown by sirna transfection, and the nuclear extract was collected to perform EMSA with human NOX4 promoter FRE sequence. Immunoprecipitation of anti-foxo1, FoxO3a and FoxO4 were performed with nuclear extract, the IP products were used to do EMSA with human NOX4 promoter FRE sequence. T. gondii was infected to ARPE-19 cells with Akt inhibitor pretreated or not, The nuclear extract were used to perform EMSA with human NOX4 promoter FRE sequence. T. gondii was injured to the mice, the eyeballs were collected to do wester n blot and PCR. FoxO1 silenced-nuclear extract showed a prevention of the band size-shift, however, FoxO1 IP extract, but not FoxO3a nor FoxO4, revealed similar binding to the FRE sequences with total nuclear extract. Akt inhibitor reversed T. gondii infection induced prevention of size-shift caused by binding of FoxO1 and NOX4 promoter. FoxO1 can directly bind to human NOX4 promoter and is an essential factor for T. gondii to repress intracellular ROS production which is benefical for T. gondii survival and proliferation

60 P18 The effect of Nox4 deficency on Toxoplasma gondii infection in mouse Hei-Gwon Choi¹, Fei-Fei Gao¹, Pu-Reum Sun¹, Jae-yul Kwon², Jae-Min Yuk¹, Young-Ha Lee¹, Guang-Ho Cha¹ Department of Medical Science¹, Department of Medical Education² College of Medicine, Chungnam national university, Daejeon , Korea, NADPH oxidase 4, NOX4, has effect on infection rate or symptom development by T. gondii. Wild type and NOX4 KO mice were orally infected with certain number of T. gondii (ME49 strain) and their survivability, weight gaining, and organ size alteration were monitored for one or two month(s). We also checked the level of the infected T. gondii cyst formation in order to examine if there is any correlation with the symptom development and T. gondii proliferation. The experimental results showed that NOX4 deficiency has no major effect on infected mouse survivability, but minor oscillation in body weight and significant increase in the size of spleen after infection. To the contrary, T. gondii cyst formation in the brain was monitored to show that NOX4 KO brain has less number of cyst formation compared to wild type brain. Further investigation will be performed to understand the correlation between the mouse physiological data with infected T. gondii cyst growth data

61 P19 SNAP23-dependent surface translocation of BLT1 is essential for NOX2-mediated exocytotic degranulation in human mast cells induced by Trichomonas vaginalis-secreted LTB4 Arim Min, Myeongheon Shin Department of Environmental Medical Biology, Institute of Tropical Medicine, Yonsei University College of Medicine Trichomonas vaginalis is a sexually transmitted parasite that causes vaginitis in women and itself secretes lipid mediator LTB4. Mast cells are important effector cells of tissue inflammation during infection with parasites. Membrane-bridging SNARE (Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein (SNAP) receptors) complexes are critical for fusion during exocytosis. Although T. vaginalis-derived secretory products (TvSP) have been shown to induce exocytosis in mast cells, information regarding the signaling mechanisms between mast cell activation and TvSP is limited. We transfected BLT1 or SNAP23 sirna into HMC-1 cells. After transfection, we checked ROS generation, exocytosis and surface trafficking of BLT1 by FACS analysis. In addition, we confirmed the interaction between SNAP23 and BLT1 using co-ip assay. Herein, we found that SNAP23-dependent surface trafficking of BLT1 is required for NOX2-dependent exocytotic degranulation of mast cells induced by TvSP. First, stimulation with TvSP induced exocytotic degranulation and ROS generation in human mast cells. Next, TvSP-induced ROS generation and exocytosis were strongly inhibited by tranfection of BLT1 sirna. TvSP induced trafficking of BLT1 from the cytosol to the plasma membrane. Next, we found that knockdown of SNAP23 abrogated TvSP-induced ROS generation, exocytosis and surface trafficking of BLT1 in HMC-1 cells. Indeed, there was a physical interaction between BLT1 and SNAP23 by co-ip assay, suggesting that there may be a crosstalk between BLT1 and SNAP23 in TvSP-stimulated HMC-1 cells. Taken together, our results suggest that SNAP23-dependent surface trafficking of BLT1 is essential for exocytosis in human mast cells induced by T. vaginalis-secreted LTB4. Our data collectively demonstrate a novel regulatory mechanism for SNAP23-dependent mast cell activation to T. vaginalis-secreted LTB4 involving surface trafficking of BLT

62 P20 Orphan nuclear receptor small heterodimer partner is involved in suppression of host immune responses during Toxoplasma gondii infection. Su jin Bae 1,2, Ji Hye Kim 1,2, Ji na Lee 1,2, Young-Ha Lee 1,2, and Jae-Min Yuk 1,2* Department of Medical Science 1, Department of Infection Biology 2, Chungnam National University School of Medicine, Daejeon , S. Korea SHP (NR0B2; Mouse Genome Informatics accession code, ), is an atypical orphan nuclear receptor superfamily and mainly contributes to transcriptional regulation of divers metabolic pathways through interactions with various nuclear receptors and transcription factors. Our previous studies indicated that SHP acts as negative regulator in endotoxin-induced systemic inflammation, however, the roles of SHP in host defense mechanism against Toxoplasma gondii (T. gondii) have not been fully identified. We first examined whether SHP deficiency modulates in vivo parasitic burden in brain tissues. SHP deficiency resulted in the decreased tissue burden of T. gondii ME49 strain. We next determined serum levels of tumor necrosis factor α (TNFα) and interleukin (IL)-12p40 in T. gondii-infected wild type (WT) and SHP deficient mice. SHP deficient mice infected with T. gondii ME49 strain showed enhanced generation of TNFα and IL-12p40 than WT mice with those. Moreover, intracellular survival and proliferation of T. gondii in SHP deficient primary macrophages were significantly diminished. In consistent of in vivo finding, TNFα and IL-12p40 mrna expression were highly increased in the SHP deficient macrophages. Taken together, our finding suggested that SHP is a strong suppressor of host innate immune responses upon T. gondii infection

63 P21 Docosahexaenoic acid-induced autophagy is contributed to the attenuation of intracellular survival against Toxoplasma gondii infection. Ji Hye Kim 1,2, Ji na Lee 1,2, Su jin Bae 1,2, and Jae-Min Yuk 1,2* Department of Infection Biology 1, Department of Medical Science 2, Department of Medical Education 3, Chungnam National University School of Medicine, Daejeon , S. Korea Docosahexaenoic Acid (DHA), long omega-3 fatty acid chain existing abundantly in brain, is important for the growth and functional development of the brain in infants. Moreover, recent studies suggested that DHA is an attractive agent to mediate growth inhibition of various cancer cells through the activation of autophagic cell death. Although DHA treatment induced autophagy in various cancer cell types, however, DHA-mediated the roles of autophagy in macrophages is still unclear. Therefore, we first determined whether DAH treatment induced autophagy activation in macrophages When DHA was treated to cells, the activation of autophagy was significantly increased in a time dependent manner. We next examined the roles of DHA-mediated autophagy in T. gondii-infected macrophages. DHA treatment led to the significant inhibition of T. gondii proliferation, however, these effects were effectively attenuated by pretreatment of autophagy-specific inhibitors, such as 3-MA and wortmannin. Because FAT1 is important enzyme for synthesis of Omega 3 from Omega 6, we further investigated protective functions of Fat 1 in response to T.gondii infection. FAT-1 transgenic mouse showed substantially decreased cyst burden in infected brains. Moreover, intracellular proliferation of T. gondii was also significantly reduced in FAT-1-expressing BMDM, as compared with wild type (WT). Collectively, these results strongly suggested that DHA mediated-autophagy contributes to the activation of host protection against T. gondii - 61-

64 P22 가시아메바 profilin 에의한알러지성기도염증반응유도 송소명 ¹, 박소영 ², 박상균 ¹, 강신애 ¹, 최준호 ¹, 이다인 ¹, 김혜진 ¹, 박성희 ¹, 장세복 ², 유학선 ¹ 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 ¹, 부산대학교자연과학대학분자생물학교실 ² 이전연구에서가시아메바 (Acanthamoeba) 의마우스비강내감염이강력한 Th2 반응을일으켰으며, 알러지성호흡기염증을유발시켰다. 하지만가시아메바의어떤알러젠성분이알러지성호흡기감염을일으키는지에대하여알려진바가없다. 알러지성호흡기질환환자를대상으로한피부단자시험에서 44.6% 환자에서가시아메바의항원에양성반응을나타냈다. 특징적으로, 양성반응을보인환자는꽃가루알러젠과교차반응을모두가지고있었고, 이환자들의 IgE 항체와가시아메바의 16 kda 성분과반응한다는것을확인하였다. 꽃가루및곰팡이등에서가장강력한알러젠으로 profilin (15 ~16 kda) 이잘알려져있어서가시아메바에의 profilin도알러젠으로써의기능을확인하기위해연구를기획하였다. Genbank에서가시아메바의 profilin sequence를가져와 126 아미노산으로구성된재조합가시아메바 profilin(rac-pf; 16 kda) 을제작하여발현시켰다. 알레르기유발항원으로서의역할을알아보기위하여, C57BL/6 마우스에 2일간격으로 6회 rac-pf을반복처리해주었다. 꽃가루 profilin과같이알러지유발항원으로알려진다른 profilin들과 Multiple-alignment를하였을때, 가시아메바 profilin과매우높은유사성을가지고있었다. 또한 rac-pf을처리한그룹에서는대조군에비하여기관지상피세포의증생, 점액분비의증가, 선와세포의증가, 및높은기도저항성값을확인하였다. 기관지세척액내백혈구, 특히호산구가유의적으로증가하였고 Th2 사이토카인의농도도유의적으로높았다. 모든실험을종합해본결과, 가시아메바의 profilin 이쥐에서천식과유사한알러지성호흡기염 증을유발시킬수있음을알수있었다

65 P23 선모충재감염방어기전에서 CLDN-2 의역할 이다인, 박미경, 강신애, 최준호, 송소명, 김혜진, 박성희 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 밀착연접 (tight junction) 은세포간결합양식의일종으로, 주로상피세포와내피세포에서나타나는세포간연접장치라고알려져있다. 밀착연접에관련된유전자중하나인 Claudin은상피에서분자들간의교환을조절할수있는유전자로서, 특히 Claudin-2 (CLDN-2) 는장벽기능의강화에관여하는유전자로보고되어있고소장내외부감염에대한방어기전에매우중요한것으로알려져있다. 하지만, 선모충감염에있어서의 CLDN-2의변화및, 정확한기전에대한연구는아직미비한상태이다. 본연구에서는장내기생충중하나인선모충감염및재감염에대한방어작용에서 CLDN-2의기전을확인하기위해, 선모충을 1회감염과 7회감염 ( 반복감염 ) 을실시한후 CLDN-2의변화및 CLDN-2의변화에영향을미칠수있는기전을확인하고자하였다. 선모충의반복감염시선모충의장침입기인 1주, 2주차에서소장내 CLDN-2의발현이증가하는것을확인하였고, CLDN-2의분비에있어서중요한역할을하는 IL-9과비만세포장상피에서특이적으로증가하였다. 하지만기생충에관련된면역반응으로알려져있는 Th2 반응은반복감염에의해증가하지않았다. 급성장내염증을일으킨마우스는소장상피세포에서 CLDN-2의발현이현저히저하되었고, 이후감염을시킨선모충은그감염율이정상쥐에보다유의하게높았다. 장내기생충의반복감염시장내에서분비되는 IL-9에의하여장내비만세포를증가되고이들비만세포는 CLDN-2의발현을활성화시켜장내장벽방어기능을더욱강화시키는것으로사료된다

66 P24 참굴큰입흡충피낭유충에서분비된엑소좀에의한인체장상피세포와 인체단핵구세포에서의단백질및사이토카인발현 송혜미 ¹, 정봉광 ², 조재은 ¹, 채종일 ¹,² 한국건강관리협회기생충병연구소 ¹, 서울대학교의과대학기생충학교실 ² 참굴큰입흡충은국내에분포되어있는인체감염장흡충으로, 실험용마우스에감염시, 대부분 7 일이내에체외배출된다. 이러한참굴큰입흡충체외배출과관련된숙주내점막면역에대해알아보기위해연구를진행하였다. 참굴큰입흡충에서분비된엑소좀이숙주세포의단백질및사이토카인발현에미치는영향을관찰하기위해, 참굴에서분리한피낭유충으로부터초원심분리법을이용하여엑소좀을분리하였다. 분리한엑소좀은 SDS-PAGE와전자현미경을이용하여특성을확인하고실험에사용하였다. 숙주세포에엑소좀을처리하여공초점현미경으로세포내함입을확인하였으며, 인체장상피세포주 (HT-29) 와인체단핵구세포주 (THP-1) 에서여러 Toll-like recepors(tlrs) 와뮤신분비기전에관여하는여러인자의발현양상을관찰하였다. 그결과, 숙주세포내에함입된참굴큰입흡충의엑소좀이숙주의환경에영향을주어, 인체장상피세포주에서는 TLR2-MyD88 dependent MUC2의발현이대조군에비해증가하였음을유전자와단백질레벨에서확인하였으며, 인체단핵구세포주에서는 TLR2, IL-17, INF-γ와같이뮤신기전에영향을주는사이토카인의발현이증가한다는것을확인하였다. 이연구를통해장내참굴큰입흡충감염시, 충체에서분비된엑소좀이숙주의장내다양한세포들에영향을주어 TLRs과뮤신의발현을조절하고, 충체의체외배출에중요한역할을할것으로생각된다

67 P25 간흡충항원단백질 6 종의 epitope mapping 을통한항원작용기결정 및민감도분석 김유정, 이명노, 정은주, 조신형, 박미연, 주정원 국립보건연구원말라리아기생충과 간흡충증혈청학적신속진단법개발을위해서다양한항체에반응하는항원물질을확보하는것이필요하다. 이연구에서는간흡충항원단백질 6종 (Cstegu20.6, Cstegu20.8, Cstegu21.6, Cstegu22.8, CsVAL3, CsRNP) 에대한항원작용기를결정하고, 혈청학적진단후보물질로서가능성을분석하였다. 간흡충항원단백질 6종에대한항원작용기분석을위해아미노산서열을 11mer씩중첩되게 15mer 길이로합성하여총 375개펩타이드를 microarray에점적한후, 간흡충양성혈청 15건, 음성혈청 5건과각각반응시켰다. 항원결정기는양성혈청에반응한개별평균값이음성보다 2배높은부분을선택하였다. 총 44개의펩타이드가선택되었으며, 이중 12개를합성하여간흡충표준혈청 100건 ( 충란, 간흡충조항원 ELISA 모두양성 ), 음성혈청 24건에대한 ELISA를수행하였다. 간흡충표준혈청 100건은조항원에대한항체반응패턴에따라 5개의그룹으로나누어, 각항원후보펩타이드민감도를그룹별로분석하였다. 375개펩타이드에대한항원성확인결과 Cstegu20.6에서 14개, Cstegu20.8에서 11개, CsVAL3에서 16개, CsRNP에서 3개가항원작용기로결정되었으며 Cstegu21.6과 Cstegu22.8에서는항원결정기가확인되지않았다. 이중 12개펩타이드각각을간흡충표준혈청 100건에반응시켜확인한결과 CsVAL3pep75가 66% 로가장높은민감도를보였으며, 나머지펩타이드들은 20~47% 의민감도를나타냈다. 각펩타이드들을표준혈청의항체반응패턴에따른그룹별로확인하였을때 CsVAL3pep75는 5개그룹에대한민감도가모두 60% 이상이었으며, 그룹3 (78%, 7/9) 에대한민감도가가장높았다. 6종의재조합단백질로부터확인된항원작용기중 CsVAL3pep75만이유일하게 50% 이상의항원민감도를나타내었다. Epitope mapping을통한항원펩타이드발굴정확도를높이기위해서는특이도및민감도가높은항원부위결정기준과펩타이드합성성공을위한아미노산구성등에대한고려가필요할것이며, 추후나머지펩타이드들에대한민감도확인도필요하다. 이번연구의결과는항원단백질에서항원작용기결정을위한예측정확도향상에유의한기초자료로서활용될수있을것이다

68 P26 개회충증혈청진단용항원비교분석 김연 ¹, 신성화 ², 홍성태 ³, 최민호 ³ 동국대학교의과대학미생물학교실 ¹, 중국청도대학교미생물학교실 ², 서울대학교의과대학기생 충학교실 ³ 개회충 (Toxocara canis) 은개의소장에기생하는회충과 (family Ascariidae) 선충중의하나로써세계적으로널리분포하고있다. 사람의경우, 개회충의감염형충란이나유충을먹어서감염된다. 개회충감염으로인한유충내장이행증뿐만아니라눈과중추신경계등전신장기를침범하고수년간잠복할수있어정확한진단이필요하다. 개회충진단을위해서는보통개회충유충의조항원이나분비항원을사용하게된다. 진단용항원을실험실에서대량확보하기위하여유충조항원보다는성충항원이더확보가쉽지만성충항원의항원성평가와혈청진단에서의유용성은평가되지않아실제응용에서는사용되고있지않는실정이다. 성충항원에서특히암컷성충항원의항원성과혈청진단의유효성을비교분석할필요가있다. 이연구는기존의유충조항원 (TCLA) 과개회충암컷성충항원 ( 자궁포함 )(TCFA+U), 개회충암컷성충항원 ( 자궁미포함 )(TCFA-U), 개회충수컷항원 (TCMA) 을이용한 ELISA 결과를비교하였다. 각항원의진단효율성을평가하기위해개회충양성혈청 65개, 간흡충증 10개, 폐흡충증 10개, 유구낭미충증 10개, 고충증 10개, 간질 10개그리고음성혈청 50개를사용하여기존의개회충유충조항원 ELISA와비교평가하였다. TCLA,TCFA+U,TCFA-U,TCMA에대한평균흡광도가조항원흡광도수준에따라 군에서각각 0.273, 0.195, 0.124, 0.106이고, 흡광도 군에서각각 0.352, 0.273, 0.125, 흡광도 0.401~0.500군에서각각 0.453, 0.387, 0.168, 흡광도 이상인군에서각각 0.589, 0.518, 0.300, 0.270이었다. 즉유충조항원 (TCLA) 과암컷자궁포함성충항원 (TCFA+U) 의흡광도는서로비례하였으며, 음성혈청에대한항체가는각각 0.053, 0.062, 0.065, 0.052이었다. 총 65개의유충조항원양성혈청중암컷조항원양성자는 40(61.5%) 명이다. 그중흡광도 0.250~0.300군의경우양성률은 15%, 흡광도 0.301~0.400군은 70% 을보이고특히흡광도 0.301~0.400군과흡광도 초과군의양성률은각각 90% 과 100% 에달한다. 본연구결과개회충증의혈청진단을위한항원으로개회충암컷조항원 ( 자궁포함 ) 이기존의유 충조항원을대체할수있을것으로판단된다

69 P27 Multiplex-touchdown PCR method to simultaneously detect Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia, and Cyclospora cayetanensis as major causes of traveler s diarrhea 신지훈 1, 이상은 2, 김동수 3, 마다원 2, 채종일 1, 신은희 1,4,* 서울대학교의과대학기생충학교실 1, 질병관리본부말라리아기생충과 2, 인하대학교의과대학열 대의학교실 3 This study aimed to develop a simultaneous multiplex PCR method for detecting three species of waterborne protozoan parasites (e.g., C. parvum, G. lamblia, and C. cayetanensis) causing Travelers Diarrhea (TD) accompanied by diarrhea that persists for longer than 2 weeks. We used the genomic DNA of the parasite, as well as the gene targets; Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene for C. parvum, the glutamate dehydrogenase (gdh) gene for G. lamblia, and the 18S ribosomal RNA (18S rrna) gene for C. cayetanensis were selected by a preliminary in silico analysis. Here we report the development of a successful protocol to avoid mispriming and non-specific binding among primer pairs using a touchdown PCR method. In addition, we investigated the limit of detection (LOD) for a mixture of primers and optimized the PCR conditions for the detection of each parasite in protozoa-spiked human stool samples. The amplicon size for each parasite was 555 bp for C. parvum, 188 bp for G. lamblia, and 400 bp for C. cayetanensis. Each amplicon exhibited a 100% similarity to AB (C. parvum), KJ (G. lamblia), and AB (C. cayetanensis) in the GenBank database ( The primers did not show any cross-reactivity in the parasite-free stools or other protozoan parasites. We designed a novel multiplex PCR method for the simultaneous detection of C. parvum, G. lamblia, and C. cayetanenesis as potent pathogenic protozoa causing TD. Our protocol has convincingly demonstrated the ability to simultaneously diagnose multiple protozoa in stool samples. Although future studies are required to further evaluate the sensitivity of using clinical samples, ours is the first attempted PCR-based method for the simultaneous detection of C. parvum, G. lamblia, and C. cayetanensis

70 P28 CsHSP70 과항원펩타이드 (ProR, Ven2) 복합체면역에의한간흡충 감염억제효과분석 정은주, 김유정, 이명노, 조신형, 박미연, 주정원 국립보건연구원말라리아기생충과 국내에서감염율이가장높은기생충인간흡충은담관에기생하면서간경변이나담관암을유발할수있는것으로알려져있다. 이러한위험성에도불구하고현재까지간흡충감염에의한병리적악영향을막을수있는방법은없다. 이번연구에서는간흡충열충격단백질70 (CsHSP70) 이항원성펩타이드 (ProR와 Ven2) 와결합하여면역반응을증가시킬수있다는점에착안하여이복합체를랫트에면역한후간흡충감염억제물질로서의가능성을확인하고자하였다. CsHSP70은 BL21(DE3)-RIPL E. coli 에서발현후정제하고 endotoxin을제거하였다. 펩타이드는항원단백질에서 epitope으로확인된 ProR (29 mer) 와 Ven2 (3 0 mer) 펩타이드를사용하였다. CsHSP70과 ProR, Ven2는각각몰농도기준 1:10 0으로섞고 ADP와 MgCl2를첨가하여복합체를형성하였다. 각각의샘플은랫트에 2주간격으로총 3회복강주사하였고마지막면역 2주후, 피낭유충을 200개씩경구투여하였다. 감염 8주후, 비장세포를분리하고단백질 / 펩타이드복합체처리후 5일째, 배양액에서 5종의사이토카인을 ELISA 법으로측정하였다. 간흡충감염억제효과는충란과성충수를측정하여확인하였다. 각그룹의비장세포에 CsHSP70 및펩타이드, 단백질 / 펩타이드복합체를처리했을때, 비처리군에비하여 CsHSP70/ProR 와 CsHSP70/Ven2 복합체면역군에서 IL-2, IL-6, IFN-γ, TNFα는증가한반면 IL-10은감소하였다. 간흡충감염 5주차에분변에서의충란수를측정한결과다른그룹들에비해서 CsHSP70/ProR 와 CdHSP70/Ven2 복합체를면역한그룹에서충란의수가 19~32% 감소하였다. 감염 8주차에성충의수를확인한결과다른그룹간에는의미있는결과가보이지않았지만 CsHSP70/Ven2 복합체처리군에서 Ven2 펩타이드단독처리군보다성충의수가 27% 감소하였다. 이번실험을통하여 CsHSP70 단백질이 ProR 및 Ven2 펩타이드와결합하여항원제시세포를활성화시키는 IL-6와 TNF-α 분비를촉진하고 T 세포의증식을유도하는 IL-2의분비를증가시킨다는사실을알수있었다. 나아가이러한반응을통하여 CsHSP70/ProR 및 CsHSP70/Ven2 복합체가간흡충의충란생성및성충감염을억제시킬수있다는사실을확인하였다. 이결과를토대로하여이후보다효과적인간흡충성장억제물질을개발할수있을것으로기대한다

71 P29 람블편모충의궤양성대장염에대한염증완화효과 김현정, 이명노, 신희은, 이영주, 백선옥, 박미연, 조신형 질병관리본부국립보건연구원말라리아기생충과 염증성장질환은소장및대장부위의만성적인자가면역질환으로크론병과궤양성대장염으로구분된다. 통계청자료에따르면, 최근우리나라에서서구화된식생활, 스트레스등의다양한원인에의해염증성장질환으로병원치료를받은횟수가 2004년에비해 2012년에 2배이상이증가하였다. 임상연구를통해규명된돼지편충란을이용한염증성장질환에효과적인치료법과더불어다양한기생충을이용한연구가진행되고있다. 본연구에서는람블편모충 (Giardia lamblia) 감염을통해염증성장질환의염증완화효과를확인하였다. 마우스의장염유발은 3% Dextran Sulfate Sodium (DSS) 을투여하는방법을이용하였다. 실험군은군당 5마리씩정상대조군, DSS 투여군, 람블편모충감염군및 DSS 투여후람블편모충감염으로나누어실험을진행하였다. 또한, 람블편모충의감염농도에따른염증완화효과를확인하였다. 실험진행기간은 (2016년 5월부터 6월까지수행 ) 3% DSS 용액을 7일간복용시켰으며, 정상대조군과람블편모충감염군은동량의멸균한수돗물을섭취시켰다. 마우스의체중변화는 DSS 투여시점으로부터종료일까지측정하였다. 대장의길이분석을위해마우스를희생시키고개복한후대장을적출하여맹장에서항문까지의길이를측정하였다. 확보한대장을 3등분하여사이토카인 mrna 정량분석및 MPO (Myeloperoxidase) 측정을실시하였다. 체중변화를측정한결과람블편모충감염군과 DSS 투여군은체중변화에큰차이를보이지않았지만, 7일이후부터는양성대조군에비해체중이회복되었다. 사후검정결과인대장의길이는람블편모충이감염된마우스가 DSS 투여군에비해증가되었다. 장조직내에서염증성사이토카인인 TNF-α, IL-1β, INF-γ의발현이 DSS 투여군에비해각각약 30% 억제되었다. 또한, 장조직내호중구수치를나타내는 MPO 측정결과 DSS 투여군에비해람블편모충감염군에서 MPO 수치가약 10% 감소하였다. 마우스의장염유발에대해체중변화, 대장길이변화, 사이토카인분석결과를통해람블편모충의감염이돼지편충과같은궤양성대장염의치료가능성을확인하였으며, 람블편모충유래물질개발을통한염증성장질환치료가능성을제시하였다

72 P30 돼지편충란의만성장내염증마우스모델에서염증개선효과 김혜진, 강신애, 최준호, 이다인, 송소명, 박성희, 유학선 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 크론병과궤양성대장염과같은만성염증성장질환은면역반응조절이상으로발생하는대표적인자가면역질환이다. 이러한만성자가면역질환에서기생충감염이염증개선효과가있다고알려져있지만, 대부분의실험이동물급성모델을기반으로하고있어실제임상소견을충분히반영하지못하는것으로보인다. Dextran sulfate sodium (DSS) 을이용한새로운만성장내염증마우스모델을개발하여돼지편충란 (Trichuris suis ova) 의만성장내염증에미치는영향을확인하고자하였다. 만성장내염증유발을위해서 2% DSS 용액을 7일간음용시킨후정제수를 7일간음용시켰다. 이과정을 2번반복하여실험을진행하였고, 실험중 15일째에 100개의돼지편충란을투여하였다. 돼지편충란투여후만성장내염증반응의변화를관찰하기위해마우스의체중변화및변의굳기, 혈변유무를관찰하여 disease activity index (DAI) 를측정하였다. 대장의길이를측정후병리조직학적분석을수행하였다. 또한비장, 장관막림프절, 그리고장관액으로부터사이토카인수치를확인하였다. 만성장내염증이유도된마우스에서는체중과장길이의감소, 높은 DAI 수치를보여주었다. 비록만성장내염증유도후돼지편충란을투여한마우스에서유의적인장길이차이를보이지않았지만, 체중이회복되었고 DAI 수치도완화되었다. 조직학적분석에서도염증성장질환유도마우스에비해돼지편충란을투여하였을때염증세포의조직내침윤, 장벽에부종및음와 (crypt) 손상정도가감소하였다. 비장과장관막림프절에서는유의적인사이토카인의변화가없었지만장관액에서는 IL-10과 TGF-β와같은항염증사이토카인의농도가유의적으로높게나타났다. 돼지편충란투여시인위적으로유도한장내의만성염증반응이개선되는것을확인하였다

73 P31 Effect of some medicinal plants on in vitro motility and viability of Trichomonas vaginalis Rubing Sun 1,2, Jae-Hyung Lee 1,2, In-Wook Choi 1,2, Jaeyul Kwon 3, Bo-In Kwon 4, Guang-Ho Cha 1,2, Jae-Min Yuk 1,2, Young-Ha Lee 1,2 Department of Medical Science, Chungnam National University Graduate School, Korea 1, Department of Infection Biology 2, Department of Medical Education 3, Chungnam National University School of Medicine, Korea 2, Korea Institute of Oriental Medicine, Daejeon, Korea 4 Trichomonas vaginalis, a flagellate protozoan, is the causative agent of trichomonosis, the most common nonviral sexually transmitted disease worldwide. The emerging resistance against the current standard therapy with metronidazole is pushing the search for alternative drugs. The purpose of this study was to determine the in vitro viability of some medicinal plants on T. vaginalis. Seven medicinal plants (Bapleurum faluctum-s, B. faluctum-j, B. faluctum-t, B. faluctum-e, Brassica juncea-black, B. juncea-yellow, B. juncea-white) were extracted using organic solution (10% DMSO/PBS). The effect of different concentrations of plant extracts (12.5, 25, 50, 100, 200 and 400 μg/ml) was determined on viability and motility of TYM strain of T. vaginalis at different time points (after 6, 12, 24, 36, and 48 h) in comparison to metronidazole at the same different time points. in vitro motility and viability was assessed the ratios of motile and immotile parasites among 200 parasites and trypan blue exclusion dye test by using microscope, respectively. T. vaginalis was completely inhibited the motility from 25 to 100 µg/ml after 6 h of incubation, and to 12.5 µg/ml of metronidazole after 12 h of incubation. The 50% lethal concentration of metronidazole was ~ 1.5 µg/ml after 36 h of incubation. Among 7 medicinal plants, B. faluctum-s, B. faluctum-j and B. faluctum-t showed effect lethal effects against T. vaginalis. B. faluctum-s had completely inhibited the motility of trophozoites with concentration of 400 μg/ml after 6 h, 200 μg/ml after 36 h of incubation. The 50% lethal concentration of B. faluctum-j was 400 μg/ml after 24 h. The 50% lethal concentration of B. faluctum-t was 400 μg/ml after 24 h, and 200 μg/ml after 36 h after incubation. However, B. faluctum-e, B. juncea-black, B. juncea-yellow and B. juncea-white were not shown any lethal effects against T. vaginalis using in vitro viability test. Our results show for the first time the potential activity of oriental medicinal plants in Korea against T. vaginalis. This study suggests that B. faluctum-s, B. faluctum-j and B. faluctum-to may be a promising phytotherapeutic agent for trichomoniasis

74 P32 클로로퀸감수성및내성열대열말라리아원충주에서약용식물유래 추출물의항말라리아효과평가 윤혜수 ¹, 양혜원 ², 딘주나부탐바실바투리데인 ¹, 도린반빅 ¹, 주소영 ¹, 홍연철 ¹, 정동일 ¹, 구윤경 ¹ 경북대학교의과대학기생충학교실 ¹, 국립낙동강생물자원관원생생물자원조사부 ² 열대열말라리아는열대열말라리아원충 (Plasmodium falciparum) 에의한감염병으로매년전세계적으로약 2억명의환자가발생하며, 그중약 44만명이사망하는치사율이매우높은질병이다. 이에열대열말라리아치료를위하여키나피나무 (Cinchona bark) 유래의클로로퀸이말라리아치료제로사용되고있으나, 기존치료제에대한내성을갖는말라리아원충의출현으로말라리아치료에난항을겪게되었다. 이후, 개똥쑥 (Artemisia annua) 에서분리한아르테미시닌 (artemisinin) 이개발되었으며, 아르테미시닌은속효성이고지속성이짧아단일요법으로효과를볼수없는단점이있어아르테미시닌기반복합치료법 (artemisinin-based combination therapies, ACTs) 으로처방되고있다. 그러나, 최근아르테미시닌에대한내성열대열말라리아의보고가이어지면서, 새로운항말라리아약물개발의필요성이대두되고있는실정이다. 따라서, 본연구에서는안전하고유효한말라리아약물개발을위하여, 약물효과를보이는식물유래추출물들을선별하여열대열말라리아배양에서항말라리아효과를평가하였다. 클로로퀸감수성열대열말라리아원충주 (Pf3D7 strain) 에서 6종의식물유래추출물의항말라리아효과를분석하고, 그중효과가좋은 2종 (Phellinus baumii와 Petasites japonicus) 을선별하여, Pf3D7 strain과클로로퀸내성원충주 (PfDd2) 에서항말라리아효과를평가하였다. Pf3D7strain을이용한실험에서는아무것도처리하지않은원충의원충율이 1.33% 인데비해, P. baumii, P. japonicus 추출물그리고클로로퀸처리군은각각 0.29%, 0.12%, 0.06% 의원충율을보였다. PfDd2 strain에서는, 처리하지않은원충의원충율이 2.87% 인것과비교하여 P. baumii, P. japonicus 추출물, 클로로퀸, 아르테미시닌은각각 0.91%, 0.19%, 0.60%, 0.11% 의원충율을나타냈다. 특히 P. japonicus 추출물이아르테미시닌과유사한원충성장억제효과를보였다. 현재사용되고있는항말라리아약물과비교하여, P. japonicus 추출물이클로로퀸감수성 (Pf3D7) 및클로로퀸내성 (PfDd2) 원충주에서유효한말라리아성장억제효과를보였다. P. japonicus 추출물의항말라리아효과를확인하기위하여, 쥐말라리아실험모델이나 SCID 마우스에사람적혈구를주입한동물실험모델을이용한 in vivo 실험이요구된다

75 P33 비만동물모델을이용한선모충감염에의한비만억제효과 강신애, 최준호, 이다인, 송소명, 김혜진, 박성희, 유학선 부산대학교의학전문대학원기생충학교실 비만은서구화된식생활, 운동부족, 장내기생충감염의감소등다양한원인으로증가하고있다. 면역학의발달로인하여비만이다양한면역반응이관여하는만성염증과밀접한관련이있음을밝혀냈다. 기생충감염에의하여유도되어지는다양한염증억제반응이비만에어떠한영향이있는지알아보기위한연구가필요하고, 선모충감염을이용하여실험을진행하였다. 선모충 1기유충 250개를 6주령 C57BL/6 마우스에감염시키고, 선모충이근육유충으로근육내에피포형성이대부분완성되는감염 4주후부터, 6주간고지방식이를하여비만을유도한후, 비감염비만유도군과비만지표및면역반응을비교하였다. 비감염 + 고지방식군의평균최종체중은비감염 + 저지방식군에비해유의적으로높아고지방식으로인한비만이유도되었음을확인하였으며, 감염 + 고지방식군에서는평균최종체중이유의적으로비감염 + 고지방식군보다낮았다. 간과생식샘의지방조직의중량도비감염 + 고지방식군에서비감염 + 저지방식군에비해유의적으로높았지만, 감염 + 고지방식군의간과생식샘의지방조직의중량이비감염 + 고지방식군에비해유의하게낮았다. 비만유도시, 증가되는 pro-inflammatory 대식세포의비율은감염 + 고지방식군에서비감염 + 고지방식군에비해유의하게낮았다. 모든군에서 1일사료섭이량은비슷하나, 식이섭취효율 [ 체중증가량 (g)/ 식이섭취량 (g)] 은감염 + 고지방식군의경우비감염 + 고지방식군에비해유의하게낮았다. 선모충에감염된마우스는비만유도를억제하였고, 초기염증에관여하는대식세포비율이유의 적으로낮아져서이와관련된자세한기전연구가필요하다

76 P34 시판중인콘택트렌즈세척액의가시아메바에대한살원충효과 손혜진 ¹, 강희경 ¹, 서가은 ¹, 박소리 ¹, 박아영 ², 김종현 ³, 정석률 ², 신호준 ¹ 아주대학교의과대학미생물학교실 ¹, 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소 ², 경상대학교수 의과대학기생충학교실 ³ 가시아메바성각막염 (Acanthamoebic keratitis) 은주로콘택트렌즈착용자에서 Acanthamoeba castellanii, A. polyphaga의감염에의해발생되며, 심한경우실명에이르게한다. 특히, 콘택트렌즈착용이보편화됨에따라가시아메바성각막염이종종보고되고있는데, 본연구는시판중인콘택트렌즈세척액 4종에대한가시아메바의살원충효과를알아보고자하였다. 시판중인 4종의콘택트렌즈세척액을각각원액 (100%) 과희석액 ( 원액을증류수에 50, 20, 10% 로희석 ) 을 A. castellanii와 A. polyphaga ( cells/ml) 에 6-24시간처리하여가시아메바의형태학적변화를관찰하였다. 또한, 이들용액을 HCE( 인체유래각막세포 ), CHO, BV2( 마우스유래뇌세포 ) 및 U87MG cells( 인체유래뇌세포 ) 등에처리하여 LDH assay와 MTT assay를통해세포독성및세포활성을측정하였다. 각 10, 20% 로희석된 4종의세척액을처리한 A. castellanii와 A. polyphaga는시간별 (6-24시간 ) 로뚜렷한변화가관찰되지않았다. 50% 희석된세척액과원액을 6시간처리한경우, 둥근포낭전기의형태를보였고, 24시간이지남에따라사멸된형태의아메바들이종종관찰되었다. 또한, 4종의세척액을각시간별로처리한가시아메바들을다시 PYG배지에서재배양하였을때, 모든실험군에서활동성있는아메바로바뀌는양상을관찰하였다. 한편, 4종의세척액을네종류의세포주 (HCE, CHO, BV2 및 U87MG cells) 에처리하여 in vitro 세포독성 (LDH assay) 및세포활성 (MTT assay) 측정결과, 세척액의농도가낮아짐에따라세포독성이줄어들고세포활성이늘어나는양상을보였다. 4종의세척액의원액을처리한경우, 세척액A(60-90%), 세척액 B(55-80%), 세척액C(40-80%) 및세척액D(70-95%) 모두높은세포독성을보였고, 10% 미만의낮은세포활성을보였다. 그중에서도세척액D는다른세척액에비해비교적효과적인살원충 ( 형태학적인관찰 ) 작용을보였으나, 95% 의높은 in vitro 세포독성과약 7% 의낮은세포활성을나타냄으로써인체에유해가능성을보여주었다. 시판중인 4종의콘택트렌즈용액은높은 in vitro 세포독성을갖고있었으며, 뚜렷한살원충효과도보여주지못하였다. 따라서가시아메바의살원충효과를가지며, 인체에무해한콘택트렌즈세척보존용액의개발이요구된다

77 P35 수입산콘택트렌즈다목적용액들의가시아메바살충효과및인체각막 세포독성측정 문은경 1, 이승은 2, 공현희 2 경희대학교의과대학의동물학교실 1, 동아대학교의과대학기생충학교실 2 콘택트렌즈착용자에서자주발생하는가시아메바각막염은콘택트렌즈의소독및보관과밀접한연관이있다. 콘택트렌즈착용자들은렌즈의세척, 헹굼, 소독및보존을동시에할수있는편리한다목적용액을주로사용하는데, 국내에서생산되는소독액또는다목적용액은대부분이가시아메바에대한살충효과가완벽하지않은것으로보고되어있다. 본연구에서는국내에서시판되는수입산콘텍트렌즈다목적용액 5 종류 (P~T) 에대해가시아메바살충력및인체각막세포의독성을확인하였다. 다목적용액의가시아메바영양형및포낭에대한살충효과는 MPN (most probable number) 법으로측정하였고, 이용액들의인체세포에대한독성은각막상피세포에다목적용액을농도별로처리한후, 생존세포를 Giemsa 염색하여흡광도로추정하였다. 대부분의수입산다목적용액들은가시아메바영양형에대해 8시간반응시에는약한살충효과를보였으나 24시간반응시에는높은살충효과를보였다. 그러나포낭에대해서는 4시간반응시거의효과가없었고, 8시간반응시에약간의살충효과를보였다가 24시간반응시에는유의한정도의살충효과를보였다. 이중다목적용액 P, Q, 및 T에대해인체각막세포에대한독성을측정한결과, P와 T 용액은 70% 농도에서 4시간반응시켰을때 55.9% 및 58.5% 의세포독성을나타내었고, Q 용액은 40% 의낮은농도에서도 4시간반응시켰을때 61.1% 의강한세포독성을나타내었다. 국내에서시판되는대부분의수입산다목적용액들은가시아메바에대한살충효과가어느정도있으나완벽하지는않았고, 가시아메바에대해살충효과를가지는용액들은인체각막세포에도독성을나타낸다는것을알수있었다. 따라서, 다목적용액에의한렌즈소독및세척으로가시아메바각막염을예방하기위해서는가시아메바에대한살충효과는뛰어나고인체에는무해한새로운다목적용액의개발이시급하다고생각된다

78 P 년국내삼일열말라리아 MSP-1 gene 의유전적다양성분석 신현일, 구보라, 조신형, 박미연, 이상은 국립보건연구원말라리아기생충과 국내삼일열말라리아원충의 MSP-1 유전형분석은 1993년부터시작되었다. 국내의유전적변이는 1993년부터 2002년까지 Recombinant 유전형만존재하다가, 2003년에 Sal-1(Sal-a, Sal-b) 과 Belem 유전형이추가적으로나타나면서 2015년까지 3가지유형이모두나타나고있다. 본연구에서는 2015년삼일열말라리아환자로신고보고된사례 654명중확보된삼일열원충 MSP-1 유전자형을분석하여우리나라삼일열원충의유전적변이및새로운유형출현여부를확인하고자하였다. 2015년본과에서확보한삼일열말라리아혈액검체 339건으로부터 gdna를추출하여삼일열원충의 MSP-1의유전적변이가다양하게나타나는 Interspecies conserved block(icb) 5와 ICB 6를포함하는시발체를이용하여 PCR과염기서열분석을하였다. MSP-1의유전형은 2015년과최근 3년 ( 12~ 14) 간연도별비교, 지역별, 대상군별로는 2015년에대해서유전자및아미노산변이를비교하였다. 2015년의 MSP-1 유전자의다양성은 Belem-1/Recombinant/Sal-I이각각 28/33/39% 의패턴으로나타났다. 이는최근 3년 ( 12~ 14) 간 20/40/40% 로나타난것과달리 Belem-1이 8% 증가하였고 Recombinant가 7% 감소한결과를보였다. 지역별로분석한결과, 강화, 파주, 철원에서는 Recombinant가각각 36, 38, 57% 로 Belem-1( 각각 23, 24, 14%) 보다높게나타났으며, 인천과김포의경우 Recombinant가각각 10과 20% 로 Belem-1( 각각 46, 39%) 보다낮게나타났다. 대상군별로는민간인의경우, 30/31/39% 의비율로나타났으며, 군인에서는 20/36/43% 의비율을보였다. 2015년국내삼일열말라리아의유전적다양성을분석한결과, Belem-1, Recombinant, Sal-1 3종의유전형이혼재되어나타나고있으며, Belme-1과 Recombinant간의증감이매해반복되어나타남을확인하였다. 안타깝게도북한말라리아에대한정확한유전형이보고되지는않았지만, 강화, 파주, 철원의 Recombinant의비율이인천, 김포의경우보다높게나타났으며, 또한해당지역군인에서도 Recombinant의비율이민간인에비해높게나타나는것으로보아북한으로부터의유입가능성을조심스럽게추정해볼수있을것으로사료된다. 향후북한삼일열말라리아의연관관계분석을위해서강화, 파주, 철원지역에대한군인검체와북한삼일열원충의유전자분석이추가적으로필요할것이다

79 P37 우리나라삼일열원충유전형의역동적변화 강정미 ¹, ², 이진영 ¹, 조표연 ³, 김태임 ¹, 손운목 ¹, 김동수 ⁴, 나병국 ¹, ² 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실 ¹, 경상대학교 BK21 플러스바이오항노화사업팀 ², 국립낙동강생물자원관원생생물자원조사부 ³, 인하대학교의학전문대학원열대의학교실 ⁴ 우리나라에삼일열말라리아가재출현한이후유행이장기화됨에따라토착화양상이나타나고있으며이에따른삼일열원충의유전형다변화가진행되고있는것으로생각된다. 따라서우리나라에서유행하는삼일열원충의분자역학적특성을이해하기위해서는삼일열원충유전형변화의체계적인분석이필요하다. 이연구에서는삼일열말라리아재출현이후인 1998년부터 2013년까지장기간에걸쳐수집한우리나라삼일열원충에서 Merozoite surface protein-1(msp-1) 과 MSP-3ɑ 유전자의다형성을분석함으로써우리나라삼일열원충의유전적특성및분자역학적특성을분석하고자하였다. 1998년부터 2013년까지우리나라삼일열말라리아환자에서분리한 255개의삼일열원충분리주에서 genomic DNA를분리하였다. 분리한 genomic DNA를주형으로삼일열원충 MSP-1(block 5~6) 과 MSP-3ɑ(block Ι~ΙΙ) 유전자부위를증폭하여클로닝하고, 염기서열을분석하여유전형변이추세와진화적자연선택을분석하였다. 우리나라삼일열원충 MSP-1의경우 7종의 subtypes (subtypes A-G) 가관찰되었다. 2000년이전에분리된삼일열원충에서는 subtype D가우세하게나타났으나, 그이후로는유전형다변화가나타나기시작하여다양한 subtypes가혼재하여나타났다. MSP-3ɑ의경우도 7종의 subtypes (subtypes 1-7) 가존재하였으며 2000년이전에주로존재하던 subtypes 3와 7는 2001년을기점으로사라지면서새로운 subtypes로점차적으로대체되었다. MSP-1과 MSP-3ɑ의유전적다형성을복합적으로분석한결과, 우리나라삼일열원충의유전적다형성은크게증가하고있는것으로관찰되었다. MSP-1과 MSP-3ɑ의자연선택분석결과 positive natural selection이작용하고있었으며, 유전자재조합도높은빈도로나타났다. 우리나라삼일열말라리아환자의발생이감소하고있음에도불구하고삼일열원충의유전적특성은역동적으로변화하고있으며유전적다형성이증가하고있다. 우리나라삼일열원충유전형의변화원인은현재까지명확하게규명되지않았으나우리나라에서유행하고있는삼일열원충의집단이유전적재조합이가능할정도로충분하게유지되고있음을알수있다

80 P38 Analysis of genetic diversity on allelic dimorphism site of Plasmodium vivax merozoite surface antigen 1 by pyrosequencing assay Sylvatrie-Danne Dinzouna-Boutamba¹, Hae Soo Yun¹, Dorene Van Bik¹, So-Young Joo¹, Dongmi Kwak², Yeonchul Hong¹, Dong-Il Chung¹, Youn-Kyoung Goo¹ Department of Parasitology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kyungpook National University¹, Laboratory of Parasitology, College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University² Vivax malaria remains a great challenge to develop vaccine, especially due to the emergence of Plasmodium vivax parasites with single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the antigenic genes. These mutations, contributing to the genetic diversity of the parasite, enhance the possibility of multiple-clone infections. Pyrosequencing assays accurately quantify each alternative nucleotide proportion at each SNP in several sites at once. Plasmodium vivax merozoite surface protein-1 (PvMSP-1), a promising vaccine candidate, despite its high polymorphism, has shown a great antigenicity. Therefore, we aim to determine the multiple-clone infections and predominant haplotype in vivax malaria-infected patients by analyzing the dimorphic allele frequency of PvMSP-1 using pyrosequencing. In total, 156 samples were collected in the vivax malaria endemic regions of the Republic of Korea, from 2011 to Diagnosis was done by rapid diagnostic tests, microscopy examination, and PCR. Then, pyrosequencing was performed to analyze the dimorphic allele locating within the 42-kDa fragment of PvMSP-1. Out of 156 samples, 97 (62.18%) output pyrograms showing mainly 2 types of peaks patterns of the dimorphic allele for threonine and alanine amino acids (T1476A) were obtained. Most of the samples studied (88.66%) carried multiple-clone infections (wild and mutant types), while 11.34% of the same population carried 100% of mutant type (A1476). Additionally, the 2 sets of nucleotide combinations of each allele showed high frequency of G base substitute at both first and third positions of the coding site (13.93% vs % and 18.87% vs %). The pyrosequencing of 42-kDa fragment of PvMSP-1 showed the existence of heterozygous parasites population while the mutant type was widely dominant over the wild type. Being aware of the genetic diversity and multiple-clone infection rates could help to plan vivax malaria prevention and control strategic plan

81 P39 Detection and genotyping of Coxiella burnetii in pigs on Gyeongsang provinces Min Goo Seo¹, ², In Ohk Ouh², Seung Hun Lee¹, ², Dongmi Kwak¹ Lab. of Veterinary Parasitology, College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University, Daegu¹; Animal and Plant Quarantine Agency, Gimcheon, Korea² Coxiella burnetii is the causative agent of the zoonotic Q fever, and the reservoirs of C. burnetii include ticks and livestock (cattle, goats, and sheep) which are key sources of transmission to humans; however, epidemiologic data on C. burnetii in pigs are limited. Overall 1,124 pig samples (1,030 blood and 94 tissue samples) were collected from 209 pig farms on Gyeongsang provinces between 2014 and Whole blood was used for PCR, and the serum was separated for serology. ELISA and IFA were performed using commercial kits. Nested PCR (npcr) was done to amplify the 16S rrna of Coxiella. Next, the npcr amplicons were sequenced and phylogenetic analysis was done. Among 1,030 blood samples of pigs, 70 (6.8%) and 53 (5.2%) samples tested positive for antibodies against C. burnetii using ELISA and IFA, respectively. Of the 1,124 pig samples assessed for amplification of C. burnetii 16S rrna using npcr, three (two blood and one tissue samples; overall 0.3%) were positive. The three amplified 16S rrna fragments showed high ( %) sequence identity to the C. burnetii sequences deposited in GenBank. We assessed C. burnetii prevalence and genotypes in pigs in Korea during Prevalence was low among 1,030 samples tested by ELISA and IFA and 1,124 samples tested by npcr. Despite this finding, possible transmission of C. burnetii from pigs to humans cannot be excluded. Additional investigations of the infection prevalence in other animals are necessary to understand the epidemiology of C. burnetii

82 P40 Bioinformatics analysis of merozoite surface protein, reticulocyte binding protein families, and Duffy binding protein of Plasmodium ovale and Plasmodium malariae Mohammad Rafiul Hoque¹, Jin-Hee Han¹, Myat Htut Nyunt¹, Seong-Kyun Lee¹, Fauzi Muh¹, Ji-Hoon Park¹, Feng Lu², Jun Cao², Eun-Taek Han¹ Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea¹, Jiangsu Institute of Parasitic Diseases, Wuxi, China² Two Plasmodium ovale spp., P. ovale curtisi (Poc) and P. ovale wallikeri (Pow) infection reports increased substantially in several areas of the world within few years. Indeed a little entity of Poc and Pow parasite biology is known to date. Therefore, it is urgently needed to address this neglected malaria parasite. In this study, we aimed to analyze the merozoite surface protein (MSP), reticulocyte binding protein (RBP) families and Duffy binding protein (DBP) of P. ovale and P. malariae. The MSP, RBP families and DBP gene sequences of Poc, Pow and P. malariae were retrieved from NCBI. Furthermore, we compared P. ovale and P. malariae gene sequences with orthologs of P. vivax and P. falciparum available from PlasmoDB. Almost identical gene family number of MSP among the studied Plasmodium spp.: Poc, Pow, P. vivax and P. falciparum, were found. Likewise P. vivax and P. falciparum, sequence and structure analysis reveals C-terminal regions of Poc, Pow and P. malariae are highly conserved in most of the MSP genes. MSP8 (61%, 41% & 61% respectively) and MSP1 (52%, 41%, 52% respectively) of P. ovale shows the highest sequence similarity with that of P. vivax, P. falciparum and P. malariae. The highest number RBP family genes are observed in P. ovale followed by P. vivax and P. malariae. N-terminal region of the RBP family members are relatively conserved in P. ovale compared to P. vivax. Moreover, there are DBPs such as DBP and EBP present in P. vivax, P. ovale spp. and P. malariae. Compared to P. vivax, DBP of Poc and Pow shows higher sequence similarity than that of P. malariae (36%, 36%, 22% respectively). DBP domain regions were conserved among Plasmodium spp.. We found the conserved sequence regions of MSP, RBP and DBP genes in Poc, Pow and P. malariae compared with other Plasmodium spp.. These findings suggest that the genes may have similar functional roles in Poc, Pow and P. malariae as in orthologs of P. vivax and P. falciparum

83 P41 설치류말라리아 Plasmodium yoelii 에서백신후보단백질유전자 검색및클로닝 김선희 1, 배영안 2, 서주영 3, 양현종 1 이화여자대학교의과대학기생충학교실 1, 가천대학교의과대학미생물학교실 2, 과대학미생물학교실 3 이화여자대학교의 모기가운반하는말라리아원충에의해발병하는말라리아는전세계적으로매년 30억명이상이감염위험에노출되고 60만명이상이사망하는중요기생충질환이다. 말라리아의조기진단과치료는질병발생과이에따른사망률을감소시키고말라리아의전파를차단하는데중요하다. 지금까지말라리아에효과적인치료제가지속적으로개발되었지만, 최근 chloroquine이나 artemisinin 등의예에서보듯이약제내성변이주가빠르게출현하여치료효율이감소하는문제가발생하였다. 이들연구에의해 Plasmodium falciparum과 Plasmodium vivax에서다양한백신후보물질들이개발되었지만, 사람을대상으로말라리아억제능을조사하는데많은한계가있었다. 본연구는설치류말라리아인 Plasmodium yoelii에서백신후보물질을발굴하고, 감염생쥐에서이들의효능을검정하는시스템을확립하기위해계획되었다. 1차후보단백질로 P. falciparum 에서일부효능이확인된 merozoite surface protein 1 (MSP1), circumsporozoite protein (CSP), liver stage antigen 1 (LSA1) 그리고 var 2 chondroitin sulphate A (VAR2CSA) 를선택하고, BLAST 프로그램을이용하여 PlasmoDB의 P. yoelii 유전체정보에서상동유전자를검색하였다. P. yoelii msp1은 5319 bp (1772 amino acid) 로된 single-exonic gene이었다. Recombinant protein 제조를위해 P. yoelii genomic DNA에서 PCR에의해약 1770 bp로이루어진 N-terminal, middle- 그리고 C-terminal region에해당하는유전자조각을증폭하고클로닝하였다. csp 유전자의경우, 유전자내부에 repeat region이존재하는데, P. yoelii 데이터베이스에서동일한유전체상에 mapping 되는두가지서로다른유전자정보 (1284 bp, 1251 bp) 를확인하였다. 이는분리주에따라 csp 유전자가상당한길이다형성을보임을의미한다. 그리고 Plasmodium reichenowi와 P. falciparum 외 Plasmodium 종에서 lsa1 상동유전자가발견되지않았다. 한편으로생쥐에서 non-lethal P. yoelii 감염시스템을확립하는과정에서재감염시감염율이크게감소하는현상도관찰하였다. 현재제조합 MSP1 및 CSP 단백질을제조하는실험진행중이며, 향후에는 1차감염에의해이들단백질에대한항체가생성되는지를조사하고이를 lethal strain을이용한감염실험결과와비교분석할계획이다

84 P42 전체미토콘드리아게놈분석으로밝힌타카하시흡충과요코가와흡충의 유전적거리 이동민, 박한솔, 최성준, 강예슬, 전형규, 엄기선 충북대학교의과대학기생충학교실 한국인에널리유행하는 Metagonimus속흡충류는 3종 (M. yokogawai, M. miyatai, M. takahashii) 이보고되어있다. 이들종간의형태적유사성때문에분류학적위치에대한여러연구가선행되어왔다. 미야타흡충은숙주특이성의차이로구별이가능하지만요코가와흡충과타카하시흡충은모두은어에서숙주특이성이있을뿐만아니라형태적인유사성때문에서로구별하기가쉽지않다. 이연구에서는타카하시흡충의전체미토콘드리아게놈을분석하고 Metagonimus속흡충류의분류학적문제점들을검토하고자하였다. 기생생물자원은행에서분양받은 M. takahashii gdna(prb ) 를 MALBAC Single Cell WGA kit로증폭하였고, Illumine HiSeq 플랫폼으로차세대염기서열분석 (NGS) 을이용하였다. 분석결과로얻은염기서열은 Geneious 9.1.6을사용하여미토콘드리아유전자지도를작성하였다. M. takahashii의미토콘드리아크기는 15,248bp로서 12개의단백질암호화유전자, 23개의 R NA, 2개의리보솜RNA조합으로이루어져있었다. 미토코드리아전체유전자의배열순서및단백질아미노산암호 3,409개를모두해독하였다. Serine을제외한나머지 21개의전령RNA 는전형적인클로버구조로접혀있었으며, 유전자코딩염기서열을재조합하여요코가와흡충과비교한결과, 핵산은 84.2% 의유사성을가지고있었고, 단백질로변환하여비교하였을때 89. 9% 의일치율을나타내었다. 미토콘드리아게놈서열분석결과타카하시흡충은요코가와흡충과핵산서열의일치율은 84. 2% 로양자간에뚜렷한차이가났다. 이들두종을통해확인된후고이형흡충속의독특한특징은전령 RNA가다른흡충들보다 1개가많은 23개라는점이었다. 이들종은동지역에서같은중간숙주와종숙주를공유함에도불구하고종분화에성공한사례로서그원인과유래에대한추가적인연구가필요할것으로판단되었다

85 P43 한국산가시열틈새극구흡충과 (Family Echinochasmidae) 흡충의계 통분류학적분석및미기록종발굴 최성준 ¹, Simona Georgieva², Aneta Kostadinova², 이동민 ¹, 박한솔 ¹, 강예슬 ¹, 전형규 ¹, 김영준 ³, 김희종⁴, 나기정 5, 엄기선 ¹ 충북의대기생충학 ¹, 체코기생충연구소 ², 국립생태원 ³, 충남야생동물구조센터⁴, 충북야생동물구조센터 5 가시열틈새극구흡충과는 2016년 Tkach 등에의하여극구흡충과로부터벗어나온과로국내에는그중 Echiochasmus japonicus, E. perfoliatus, Saakotrema metatestis, Stephanoprora denticulata 의 4종이분포하는것으로알려져있다. 이번연구에서는한국의다양한야생동물로부터확보한가시열틈새극구흡충과흡충염기서열의계통분류학적인분석을통해 Tka ch 등의연구결과를보완하고, 국내에기록되지않았던종들을보고하고자한다. 2015년 12월부터 2016년 8월까지 8종의야생동물로부터확보된충체를선정하여연구에사용하였다. 확보한충체는 Semichon s acetocarmine 염색을거친후광학현미경으로관찰하여형태학적분류를거친후, DNA를추출하여미토콘드리아의 nad1과핵 DNA의 28S 부위의염기서열을얻었다. 확보된염기서열은 GenBan k의염기서열들과 Neighbor Joining 및 MrBayes의방법으로계통수를그려비교하였다. 형태및분자생물학적동정결과연구에사용된충체는총 9종이었으며, 그중 E. japonicus, E. perfoliatus, S. metatestis의 3종만이기존에보고된종이었다. 계통수와염기서열을통해각종이독립된종임을확인할수있었으며, Tkach 등의기존연구를지지하는결과로나타났다. 그중가시열틈새극구흡충속 (genus Echinochasmus) 흡충은다계통으로판단되며, 일부의경우새로운속으로정리할필요가있을것으로보이며, 충체의체형이중요한구분기준이될것으로보인다. 기존에 E. japonicus로알려져있었던백로류의흡충은모두 E. beleocephalus로동정되었다. 야생동물의부검을통해확보된충체를선정, 분석하였으며형태및분자생물학적인분석결과 9종으로나누어구분할수있을것으로판단된다. 이중 6종은국내에처음으로보고되는종이며, E. japonicus를제외한 8종의염기서열은처음으로분석되는결과이다. 이번연구를통해다양한종의가시열틈새극구흡충과흡충이국내에분포한다는사실을밝혀내었으며, 추후이들의생활사, 인체감염여부등의연구가필요할것으로보인다

86 P44 미토콘드리아 cox1 유전자를이용한조충류종식별의유효성과 한계점 강석하 1,2, 전형규 1, 엄기선 1 충북대학교의과대학기생충학교실 1, 과학중심의학연구원 2 미토콘드리아의 cox1(cytochrome c oxidase subunit 1) 유전자는종감별을위한분자마커로가장많이사용된다. 이런 DNA 바코드기법은형태학적동정이어려운기생충에특히유용할수있으나, 그실효성에대해서는해당분류군에대한면밀한검토가선행되어야한다. NCBI Genbank에서조충에속하는종의전체길이의 cox1 유전자를가진염기서열을이용해종내변이율과같은속내의다른종간의변이율을비교했다. 계통분석을통해서 cox1 유전자계통이단계통을이루어종식별이가능한종들과그렇지않은종들을확인했다. 약 5천여종이기재된조충강내에서 Genbank에 cox1 전체염기서열이공개된종들은전체의 2% 미만인 70여종에지나지않았으며, 정확한종표기가없이속명만기재된경우들도있었다. 공개된 cox1 유전자중에서서로다른두종사이의변이율이가장작은종들은 Taenia asiatica와 T. saginata로최소 3.89% 차이가있었다. 그럼에도불구하고, 두종은뚜렷한단계통을형성하여진화적으로서로독립된종이라는사실이명확했다. 그다음으로는 Echinococcus ortleppi와 E. canadensis가최소 4.10% 로가까웠다. Caryophyllaeus laticeps 는최대 4.25% 로가장큰종내변이율을보였다. 그러나한개체만유독변이가컸으며, 해당유전자를발표한논문에서형태학적동정에대한언급이없었기때문에동정오류의가능성도배제할수없다. 그다음으로는 E. canadensis가 3.61% 의높은종내변이율을보였다. 또한독립된단계통군을형성하지만두종의이름이뒤섞여있는경우, 다른이름의종으로기록되어있지만유전자상에서는하나의집단으로나타나는경우도있었다. cox1 유전자를이용한 DNA 바코드종동정은유용할수있지만, 조충류내에서는종내변이율이종간의변이율보다큰경우도있고, 유전자계통과종기재가서로맞지않는경우도있기때문에유전자만을가지고종을식별하는데에는주의가필요하다. 특히유전적계통과종기재가맞지않는분류군에대해서는다른유전자및형태학적연구등을통해분류체계를정비해야한다. cox1 유전자는대체로종을대표할수있는것으로나타났으나신뢰성을확보하기위해서는추가적인연구가필요하며, cox1 전체염기서열이밝혀져있지않은 98% 이상의조충에대한적극적인유전자데이터확보가필요하다

87 P45 인체고충증을유발하는만손열두조충과회선자궁조충의분자감별진단 전형규, 강예슬, 최성준, 이동민, 박한솔, 엄기선 충북대학교의과대학기생충학교실 인체고충증을유발하는만손열두조충속조충으로는만손열두조충 (Spirometra erinaceieuropaei) 과회선자궁조충 (S. decipiens) 이알려져있다. 이들두인체감염조충의정확한종동정과감별진단을위해미토콘드리아유전자염기서열로부터종특이진단용 multiplex PCR 프라이머를제작하여인체고충증을유발하는만손열두조충과회선자궁조충의종동정및감별진단을하였다 인체고충증 50례와개와고양이로부터실험감염하여회수한성충 2마리를사용하였다. 만손열두조충과회선자궁조충의전체미토콘드리아유전체로부터총 4개의유전자부위의일부를증폭할수있는 6개의 multiplex PCR용프라이머를제작하였다. 회선자궁조충과만손열두조충의감별특이프라이머위치로는미토콘드리아 cob 유전자 1,800번위치에서 nad4l 유전자 2,039 위치까지 239 bp 크기와 nad4 유전자 2,338번위치까지 538 bp 크기로제작하였으며, 만손열두조충과회선자궁조충의감별특이프라이머위치로는 cox1 유전자 7,963번위치에서 cox1 유전자 8,344번위치까지 401 bp 크기와 ribosomal DNA 8,584번위치까지 644 bp 크기로제작하여 multiplex PCR에사용하였다. 인체감염고충증 50례에대하여 multiplex PCR과 DNA 염기서열을분석한결과만손열두조충과회선자궁조충은각각종특이 PCR 밴드로구분되었으며종특이 PCR 밴드의 DNA 염기서열은두종에대하여각각 100% 일치하는결과를보였다. 이상의분석결과 35례가 S. erinaceieuropaei, 15례는 S. decipiens로종동정되었으며감별진단되었다. MultiplexPCR을사용하여인체고충증을유발하는만손열두조충과회선자궁조충의종동정및감별진단을할수있었으며이분자진단방법은인체고충증의감별진단및감염역학조사에유용하게사용할수있을것으로판단된다

88 P46 Identification of novel binding protein on merozoite surface in Plasmodium knowlesi Seong-Kyun Lee, Dahye Park, Jin-Hee Han, Myat Htut Nyunt, Fauzi Muh, Mohammad Rafiul Hoque, Ji-Hoon Park, Eun-Taek Han Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Gangwon-do, Republic of Korea. Plasmodium knowlesi is causing a serious public health concern in Southeast Asia. The Plasmodium MSP1P is a newly identified protein in Plasmodium spp. However, there is no report in P. knowlesi. Hence, functional study of PkMSP1P was carried out firstly herein. The recombinant PkMSP1P-19 was expressed and used for immunization of mice to gain polyclonal antibody that was used for IFA as well as protein binding inhibition assay by FACS with cynomolgus macaque erythrocytes. The recombinant PkMSP1P-19 was successfully expressed, and the purity was evaluated in SDS-PAGE. The polyclonal antibody against PkMSP1P-19 recognized the recombinant protein as well as parasite in which PkMSP1P-19 was completely co-localized with PkMSP1-19. In the protein binding assay, PkMSP1P-19 as well as PkMSP1P-33 was able to bind to cynomolgus macaque erythrocytes, but not human erythrocytes. And also the polyclonal antibody against PkMSP1P-19 inhibited the erythrocyte binding. The protein binding was significantly reduced by treatment of erythrocytes with trypsin and chymotrypsin but relatively not neuraminidase. Even though PkMSP1P-19 was identified as binding protein, further study to define the possibility involved in merozoite invasion process, is required

89 P47 AVEXIS: An innovative way of screening method for protein-protein interactions Ji-Hoon Park, Myat Htut Nyunt, Jin-Hee Han, Seong-kyun Lee, Fauzi Muh, Mohammad Rafiul Hoque Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea In the malaria parasite survival, extracelluar protein-protein interactions are important for invasion into RBC and sequestration of parasitized RBC on endothelial cell. Therefore, we established AVEXIS (Avidity-based Extracelluar Interaction Screen) that enables the detection of very weak protein interactions (t 1/2 < 0.1 sec) with a low false positive rate for screening the receptor-ligand interaction. We prepared the target-inserted bait and prey plasmid vectors and transfected into HEK 293F cell for 9days in the protein and serum-free media. Then,we also normalized the bait and prey proteins from the HEK293F cell culture supernatant and developed the color by ELISA. We successfully expressed the bait and prey proteins of control, CD200 ligand and CD200 receptor. From day 3 after transfection, bait proteins from the supernatant of the cell culture were detected by western blotting and the amount of proteins has been increased until day 9 even though the cell viability was decreased until 20%. The proteins harvested at day 9 were used to detect the interaction by ELISA. There was no interaction between bait and prey proteins of CD200 ligand or receptor itself. However, strong protein-protein interaction was detected between CD200 ligand and CD200 receptor as proof-of-concept. By using AVEXIS method, we can easily explore a high throughput screening of interactions between malaria ligand and human cell receptors

90 P48 Evaluation of cross-reactivity between Plasmodium vivax and Plasmodium knowlesi for cross-species vaccine candidate discovery Fauzi Muh¹, Seong-Kyun Lee¹, Jin-Hee Han¹, Myat Htut Nyunt¹, Ji-Hoon Park¹, Mohammad Rafiul Hoque¹, Takafumi Tsuboi², Osamu Kaneko³ and Eun-Taek Han¹ Department of Medical Environmental Biology and Tropical Medicine, School of Medicine, Kangwon National University, Chuncheon, Republic of Korea¹, Proteo-Science Center, Ehime University, Matsuyama, Ehime, Japan², Department of Protozoology, Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University, Japan³ The development of vaccine that could be able to induce protection against Plasmodium species would have enormous advantages. Cross-species immunity in vaccine development had been considered few decades ago, but so far no remarkable progress. Plasmodial proteins that share a high degree of homology can be able to induce cross-reactive immune response. This research aims to find out novel vaccine candidates by bioinformatics tools to assess the genetic similarity between two species and to find important target proteins from the functional assay of invasion inhibition of P. knowlesi by P. vivax antibodies. The well-known and highly conserved domains from P. vivax merozoite surface, rhoptry and microneme proteins were selected for recombinant protein expression and production of immune serum. Cross-recognition of P. knowlesi parasite antigens was analysed from P. vivax antigen specific polyclonal antibodies using IFA and western blot. Cross-reactivity in human patients was analysed using P. vivax and P. knowlesi-infected patients by protein microarray. The bioinformatics analysis of P. vivax and P. knowlesi proteins showed ~80% homology for MSP1P19, P41, GAMA_Tr1, AMA1; ~70% for P12, RON2N, DBP, RAMA; and ~60% for MSP1-19. P. vivax antigen specific polyclonal antibodies were highly reacted by western blot and similarly localized on the merozoite in blood-stage parasites by confocal microscopy. All P. vivax antigens showed high cross-reactivity in P. knowlesi-infected patients as compared to healthy individuals. High genetic sequence similarity and high cross-reactivity of parasite antigens and patient serum samples were observed. In cross-reactivity analysis of human patient samples, merozoite surface proteins showed higher antibody responses than rhoptry and microneme proteins. Therefore, functional analysis of those candidates in invasion inhibition by different antibody and different parasite needed to be evaluated

91 P49 Molecular and structural characteristics of multidrug resistance- associated protein 7 in Chinese liver fluke Clonorchis sinensis Won Gi Yoo¹, Fuhong Dai¹, Ji-Yun Lee¹, Yanyan Lu¹, Jhang Ho Pak², Sung-Jong Hong¹ Department of Medical Environmental Biology, Chung-Ang University College of Medicine¹, Department of Convergence Medicine, University of Ulsan College of Medicine and Asan Institute for Life Sciences, Asan Medical Center² Multidrug resistance-associated protein 7 (MRP7, ABCC10) is a member of subfamily C in the superfamily ATP-binding cassette (ABC). MRP7 i s a lipophilic anion transporter that pumps endogenous and xenobiotic substrates from the cytoplasm to the extracellular milieu. CsMRP7 was identified and characterized as a novel ABC transporter from Clonorchis sinensis. The cdna was cloned and the recombinant protein was purified. Using specific mouse immune serum, CsMRP7 was localized immunohistochemically in tissue sections of adult worm. Developmental gene expression of CsMRP7 was determined by quantitative real-time PCR. Tertiary structures of the N-terminal region and core region of CsMRP7 were generated by homology modeling using glucagon receptor and P-glycoprotein as templates. CsMRP7 cdna encoded 1,636 amino acids (aa) and phylogenetically belonged to the ABCC subfamily. Two nucleotide-binding domains 1 and 2 (NBD1, 2) were conserved, which work as the sites of ATP binding and hydrolysis. Like typical long MRPs, CsMRP7 had an additional membrane-spanning domain 0 (MSD0) and cytoplasmic loop, and consisted of a common structural fold MSD1-NBD1-MSD2-NBD2. MSD0, MSD1 and MSD2 consisted of transmembrane domains (TMs) 1-7, TMs 8-13 and TMs 14-19, respectively. CsMRP7 transcript was abundant in the metacercariae than in the adult worms. CsMRP7 was localized in the apical side of the intestinal epithelium, sperm in the testes and seminal receptacle, receptacle membrane, and mesenchymal tissue around intestine in the adult worm. These results provide molecular information and insights into the structural and functional characteristics of CsMRP7 and into the homologue s of the flukes

92 P50 가시아메바로부터 hydrogenosome 에너지대사에관여하는효소의 동정 주소영, 송민지, 구윤경, 정동일, 홍연철 경북대학교의과대학기생충학열대의학교실 가시아메바는자유생활아메바로다양한산소조건에서도성장할수있는것으로알려져있다. 본연구는최근가시아메바유전체분석을통해일부혐기성생물에서알려진 hydrogenosome 에너지대사경로에관여하는효소들의존재가보고된바있어가시아메바에서 hydrogenosome-like energy metabolism에관여하는효소들을동정하고세포내발현양상을확인하는한편가시아메바의성장및포낭형성에있어서의역할을규명하고자하였다. 가시아메바유전체데이터베이스로부터 hydrogenosome-like energy metabolism에관여하는단백질의유전자를탐색한후클로닝하였다. 가시아메바영양형과포낭형에서각관련효소의발현양상을확인하는한편 GFP가들어있는가시아메바발현벡터를이용해이들의세포내발현위치를확인하였다. 포낭형성관련성을확인하기위해가시아메바에서 [FeFe]-Hydrogenase와 Hydrogenase maturase들의발현변화를유도한후포낭형성률을측정하였다. 가시아메바유전체데이터베이스로부터 hydrogenosome-like energy metabolism에관여하는것으로알려진 4종류효소의전체유전자를확보하였으며영양형과포낭형에서발현양상의변화를확인한결과포낭형에서 [FeFe]-Hydrogenase와 Hydrogenase maturase들의발현이증가하는것을확인하였다. 가시아메바발현벡터를이용하여세포내발현양상을확인한결과영양형의경우이들단백질의발현은미토콘드리아및리소좀과일치하지않았으나포낭유도후 Hydrogenase maturase중 HydE, HydG가미토톤드리아와일치하는것으로나타났다. 한편가시아메바에서 hydrogenase maturase HydG를과발현시켰을때포낭형성이 2배이상빨라지는것을확인할수있었다. 본연구를통해가시아메바로부터 hydrogenosome 에너지대사경로에관여하는효소를처음으로동정하였다. 이중 [FeFe]-Hydrogenase와 Hydrogenase maturase가가시아메바의포낭형성과밀접한관련이있을것으로여겨진다

93 P51 숙주세포에서의질편모충 alpha-actinin 2 역할규명 이혜연, 김주리, 박순정 연세대학교의과대학환경의생물학교실 성병을일으키는것으로알려진질편모충은병원성원생생물로써숙주세포에감염시켰을때다양한면역반응을유도하는것으로알려져있다. 그중질편모충의 alpha-actinin 2 는환자를진단하는데사용되어왔다. 따라서본연구를통해 alpha-actinin 2 가항원성물질로서면역반응을유도하는지보고자하였다. 면역형광현미경법을사용하여질편모충의 alpha-actinin 2가숙주세포인질상피세포와전립선상피세포에부착되었을때어느부분에존재하는지확인하여보았고 alpha-actinin 2에대한항체를제작하여질편모충의 a-acinin 2 기능을억제하였을때나타나는숙주세포에서의반응도관찰하였다. 유동세포계측법과리간드결합면역반응실험을통해서 alpha-actinin 2가숙주세포와결합하는지에대한여부를확인하였다. 또한, 효소면역분석법을사용하여 alpha-actinin 2 를처리한질상피세포와전립선상피세포에서의싸이토카인의종류를확인하였고alpha-actinin 2 에의해유도되는마우스수지상세포의면역반응과 T 세포와의면역상호작용도보았다. 질편모충의 alpha-actinin 2가상피세포에부착되었을때편모충표면에존재한다는것을알게되었으며 alpha-actinin 2에대한항체로전처리한질편모충을숙주세포에적용시켜보면세포부착능이나세포독성의반응이모두감소되는것을확인할수있었다. 리간드결합반응실험을통해서 alpha-actinin 2의 N-terminal 부분이숙주세포와의결합에서중요한역할을하는것으로확인되었다. 질편모충이나질편모충의 alpha-actinin 2 모두숙주세포에서의면역반응을유도하는것을볼수있었으며특히, 이면역반응에서면역억제싸이토카인으로알려진 IL-10의분비도확인할수있었다. 이러한반응은 alpha-actinin 2에의해유도된면역원성수지상세포와 T 조절세포간상호작용에서도볼수있었다. alpha-actinn2는세포결합단백질로써작용하며또한질편모충의병원성기작에있어서면역억제를유도하는것으로보인다. 표면단백질로써숙주세포와접촉하였을때 T 조절세포의 IL-10 분비를유도하여면역반응을억제한다. 따라서질편모충증에서일어나는극도의면역반응을억제시키는조절자로 a-actinin 2가역할을할것으로기대해본다

94 P52 람블편모충 γ-tubulin 의기능연구 김주리, 박순정 연세의대환경의생물학교실 설사병을유발하는감염원인람블편모충영양형의세포골격계는주로 microtubule (MT) 로구성되어있다. 특징적인세포골격계구조로는 8개의편모, 흡반, median body, funis 등을들수있다. 하지만이들이만들어지는 MT organization center (MTOC) 에대한람블편모충에서의연구는미미하다. 본연구에서는람블편모충의 MT 결합단백질인 end-binding protein 1 (EB1) 과결합하는단백질로 γ-tubulin을찾았고, 이단백질의기능을살펴보고자하였다. EB1단백질과 γ-tubulin 단백질의결합을확인하기위해 co-immunoprecipitation 방법과 GST-pull down assay를수행하였다. 람블편모충 γ-tubulin의발현위치를알아보기위해 heamagglutinin (HA)-tagged γ-tubulin 단백질이발현되는 transgenic 람블편모충을제작하였다. γ-tubulin 기능분석을위해 γ-tubulin 단백질의합성을저해하는 nucleic acid analogs 인 γ-tubulin 특이적 morpholino를제작하여람블편모충에처리하였다. Co-immunoprecipitation과 GST-pull down assay를통해람블편모충 EB1과 γ-tubulin의결합을확인하였다. HA-tagged γ-tubulin이발현되는람블편모충에서 γ-tubulin이영양형과분열하는과정에서 basal body에위치하는것을확인하였고, 이들의발현위치는 basal body 표지항체인 centrin 항체를이용해확인하였다. γ-tubulin 특이적 morpholino를처리한람블편모충에서 γ-tubulin 단백질발현이감소하는것을확인하였고, 이들람블편모충을 DAPI로핵을염색하여 mitotic index를측정한결과세포분열에이상이생긴람블편모충의수가증가하였다. 본연구를통해람블편모충 r-tubulin 은영양형과세포분열동안 basal body 에위치하며, 이단 백질의발현이저해되면람블편모충의세포분열에이상이생긴다는것을알수있었다

95 P53 Production of monoclonal antibodies to the mannose-binding protein of Acanthamoeba culbertsoni 강아영 ¹, 박아영 ¹, 손혜진 ², 신호준 ², 정석률 ¹ 남서울대학교임상병리학과분자진단연구소 ¹, 아주대학교의과대학미생물학교실 ² Acanthamoebae are the causative agents of Acanthamoeba keratitis and granulomatous amoebic encephalitis (GAE), a condition that predominantly occurs in immunocompromised individuals. Considering the pathogenicity and a fast destruction of the amoeba, it is reported that, throughout the whole process of occurrence of encephalomeningitis, mannose has the most important interaction with host cell among the polysaccharides, and some proteins are reported to be important for the infection and immunity of the amoeba. The purpose of this research was to produce monoclonal antibodies against a mannose-binding protein (MBP) using a cell fusion technique. Monoclonal antibodies has been produced using a cell fusion technique. We have applied to confirm the effect of the antibodies by gel purification, ELISA, western blot, immnofluorescence assay and cytotoxicity assay. MBP gene has not been reported yet and thus MBP was only purified using a column. As a result, the purified MBP was observed with a band of approximate 83 kda MW. DG11 of a monoclonal antibody to MBP was finally produced by the cell fusion. As a result, when the amoeba moved forward, the MBP was concentrated in the direction of its movement. To understand whether DG11 had specificity, an immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed with several protozoa, e.g., A. castellanii, A. polyphaga, Naegleria fowleri, the fluorescence intensity was weak. With regarding the protective effect of an monoclonal antibody on the cytotoxicity of A. culbertsoni, chines hamster ovary (CHO) cells grown with A. culbertsoni trophozoites. The results of an LDH release assay showed that CHO+A. culbertsoni exhibited 52.5% cytotoxicity and CHO+A. culbertsoni+antibody exhibited 15.7% cytotoxicity. Thus, protective effect of 36.8% was observed by the monoclonal antibody. The mnoclonal antibody to MBP will be applied for cell signalling and diagnosis in biomedical areas

96 P54 중증열성혈소판감소증후군바이러스 Nucleocapsid 단백질에대한단 클론항체의생산 서가은 ¹, 손혜진 ¹, 강희경 ¹, 박소리 ¹, 여선주 ², 박현 ², 신호준 ¹ 아주대학교의과대학미생물학교실 ¹, 원광대학교의과대학감염생물학 ² 중증열성혈소판감소증후군 (Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS) 은작은소참진드기에매개되는감염성질환으로 2011년중국에서처음보고되었다. 이질환의원인병원체는 SFTS 바이러스로주요임상증상은발열, 구토, 복통, 위장관출혈, 혈소판및백혈구감소증을보이며, 중증환자의경우다발성장기부전증에의해사망 ( 치사율 6-30%) 에이른다. 현재효과적인항바이러스제나백신은개발중에있으며, 국내에서발병하는유사질환 ( 아나플라스마증, 신증후군출혈열 ) 과의감별이중요하다. 따라서본연구는 SFTS의신속한현장진단에사용하기위해 SFTS 바이러스의 neucleocapsid 단백질 (NP) 에대한단클론항체를제작하였다. SFTS바이러스 NP 항원을마우스에 2주간격으로 3회면역시키고, 면역한마우스혈청을 ELISA 를통해항체가를측정하였다. 면역된마우스의비장을적출하여분리한비장세포와 myeloma cell line인 F/0세포를세포융합기술 (cell fusion) 을시행하여잡종세포 (hybridoma cell) 를얻었다. 항체가가높은클론을선택하여제한개수희석법 (limiting dilution method) 으로단클론세포주 (monoclone) 를얻었다. 단클론항체의대량생산을위해선택된단클론세포주를마우스복강내로주입하여복수를얻었고정제하였다. SFTS바이러스 NP에대한단클론항체를분비하는 9개의단클론세포주즉, 1A9(1.150), 1E10(0.798), 1C3(0.891), 1G5(1.307), 1C11(0.510), 1G7(0.682), 2F11(0.553), 4C5(0.994) 및 4A8(0.643) 을얻었다 ( 괄호안은 ELISA OD값 ) (PBS, 0.078; 1:200으로희석된 normal serum, 0.160). 이중항체가가높은단클론세포주 (1A9, 4C5) 를마우스복강내로주입하여얻어진복수 (ascites) 로부터단클론항체를생산및정제하였는데, SDS-PAGE을시행한결과중쇄 (heavy chain) 및경쇄 (light chain) 의뚜렷한항체양상을확인하였다. 또한, western blotting을통해각각의항체는 SFTS 바이러스 NP의 27kDa 항원대에서강하게반응하는것을확인하였다. 본연구결과에서 SFTS 바이러스의 NP 에대한단클론항체 (1A9, 4C5) 를제작하였고, 생산된단 클론항체는 SFTS 의신속진단이가능한항원 - 항체진단키트에사용될것으로기대된다

97 P55 가시아메바의철 (Fe) 이온수송에관여하는 Nramp 단백질의동정및 특성규명 송수민, 송민지, 딘주나부탐바, 윤혜수, 구윤경, 정동일, 홍연철 경북대학교의학전문대학원기생충학열대의학교실 메탈이온은거의모든생물체의성장에필수적이며가시아메바의성장과분화에있어서도중요한역할을하는것으로알려져있지만가시아메바에서이에관여하는인자및조절기작에대해알려진바없다. 본연구는가시아메바와여러특성을공유하는대식세포의메탈조절단백질을근거로가시아메바의메탈수송및결합과관련된인자들을동정하고세포생물학적특성을규명하고자하였다. 메탈이온이가시아메바의증식및포낭형성에미치는영향을살펴보았으며특히철 (Fe) 이온의수송및결합과관련된단백질을유전체정보분석을통해가시아메바에서동정하였다. 이중철이온의수송에관여하는 Nramp (natural resistance-associated macrophage protein) 이철이온의유무및포낭형성과정동안발현양상을살펴보았다. GFP 결합단백질을이용하여세포내발현위치를확인하는한편가시아메바 Nramp의 sirna를이용하여포낭형성저해효과를확인하였다. 메탈킬레이트의첨가에의해가시아메바의증식및포낭형성이억제되었으며특히철이온이없는경우 72 시간후에가시아메바영양형의증식이약 50% 저해되는것을확인하였다. 대식세포의철이온조절단백질가운데 Nramp, ferroportin, ferritin, aconitase의 homologues를가시아메바에서클로닝하였다. 이중가시아메바 Nramp (AcNramp) 는 12 개의 transmembrane domain을가진막단백질로가시아메바의영양형과포낭형에서각각 phagosome의 membrane, autophagosome에위치하는것을확인하였다. 철이온의농도변화에의한 AcNramp의발현양상을확인한결과철이온이없을때 96 시간경과후약 12배의발현증가를확인하였다. 특히가시아메바의포낭형성과정동안 AcNramp의급격한발현증가가관찰되어 sirna를이용하여 AcNramp의발현을억제한결과포낭형성유도후 72 시간이경과했을때 62% 포낭형성저해를확인하였다. 가시아메바의성장및증식에있어서철이온이필수적임을확인하였다. 가시아메바의 phagosome의 membrane에있는 Nramp 단백질은철이온이없는환경에서급격한발현증가가관찰되어세포질내의철이온농도를일정하게유지하는데관여하는한편포낭형성에있어서도중요한역할을할것으로생각된다

98 P56 간흡충 aspartic proteases 의분자생물학적특성분석 강정미 ¹,², 김태임 ¹, 이진영 ¹, 손운목 ¹, 나병국 ¹,² 경상대학교의학전문대학원기생충학 열대의학교실 ¹, 경상대학교 BK21 플러스바이오항노화사업팀 ² Aspartic protease(ap:ec3.4.23) 는활성부위에 aspartic acid 잔기를가지는단백질분해효소이다. 주혈흡충및타이간흡충등일부흡충의 APs는숙주단백질분해와숙주조직이행에관여하며효과적인백신또는치료제개발을위한표적단백질중하나로인식되고있다. 이연구에서는간흡충에서 2종류의 APs(CsAP1과 CsAP2) 의분자생물학적특성을분석하였다. 간흡충성충에서 total RNA를추출하고 RACE방법을이용하여두종류의 CsAPs 전체유전자를확보하였으며재조합단백질과특이항체를생산하였다. 간흡충의발육단계별 CsAPs의발현여부는 RT-PCR로분석하였다. CsAP2의발현위치분석은면역형광염색법으로수행하였으며항원성분석은간흡충을인공감염시킨 rat에서주기별로채혈한혈액을이용하여면역블럿으로수행하였다. 간흡충에서 2종류의 APs(CsAP1과 CsAP2) 유전자를확보하였다. CsAPs는신호펩티드와활성부위 DTG motif를가지고있었으며다른흡충류에서보고된 APs와 52.1~89.9% 의상동성을나타냈다. Genomic DNA 분석결과 CsAP1은인트론을가지고있지않았으나 CsAP2는하나의인트론을가지고있었다. CsAPs는피낭유충에서성충에이르는다양한발육단계의간흡충에서발현되었으며충란과장에서주로발현되었다. CsAP2는항원성을나타내었으며간흡충감염 4주후부터 CsAP2에대한특이항체가형성되었다. CsAPs는간흡충의충란과장에서주로발현되는단백질분해효소이다. CsAPs는간흡충의장에서발현되는다른종류의단백질분해효소들과함께간흡충의영양대사에서중요한기능을수행하는것으로생각된다. 또한 CsAPs는간흡충증특이혈청학적진단법개발을위한특이항원으로서활용가능할것이다

99 P57 Clonorchis sinensis antigens alter hepatic macrophages polarization in vitro and in vivo Eun-Min Kim 1, You Shine Kwak 1, Myung-Hee Yi 1, Ju Yeong Kim 1, Woon-Mok Sohn 2, and Tai-Soon Yong 1 Department of Environmental Medical Biology and Arthropods of Medical Importance Resource Research Bank 1, Gyeongsang National University 2 Clonorchis sinensis infection elicits hepatic inflammation, which can lead to cholangitis, periductal hepatic fibrosis, and liver cirrhosis, as well as potentially inducing cholangiocarcinoma in the host. Hepatic macrophages represent an essential component of both innate and acquired immunity. The aim of this study was to determine the dynamics of hepatic macrophage polarization during C. sinensis infection, as well as the possible factors that regulate this phenomenon Phenotypic markers of classically and alternatively activated macrophages (M1 and M2, respectively) were investigated in hepatic macrophages from mice infected with C. sinensis at indicated time points using flow cytometry (FCM) and real-time PCR. Additionally, to investigate macrophage polarization in response to excretory/secretory products (ESP) of C. sinensis, M1- and M2-phenotypic marker expression was determined in hepatic macrophages obtained from normal uninfected mice and treated with ESP of C. sinensis. ESP of C. sinensis preferentially generated M1-like hepatic macrophages in vitro, whereas the hepatic macrophages from uninfected mice produced IL-6, IL-10, and IL-13 in response to ESP stimulation and exhibited cellular morphological changes. During the acute stage of C. sinensis infection, hepatic macrophages were preferentially differentiated into M1; however, both M1 and M2 were significantly increased during the C. sinensis egg emission stage. At high M1/M2 ratio, worms began to be expulsed from the bile ducts. M2 count was increased after the worms cleared and were markedly up-regulated during the chronic stage of infection. These findings not only reveal the parasite antigen-driven dynamic changes in macrophage polarization, but also suggest that the manipulation of hepatic macrophage polarization may be of therapeutic benefit in controlling C. sinensis expulsion and excessive hepatic fibrosis

100 P58 고래회충유충에서검색한아쿠아포린유전자의구조및발현양상분석 김선희 1, 배영안 2, 양현종 1 이화여자대학교의과대학기생충학교실 1 가천대학교의과대학미생물학교실 2 해산어류및두족류에기생하는고래회충 (Anisakis simplex) 의유충은사람의위점막이나소장에침입하여심한통증을동반하는고래회중유충증 (anisakiasis) 를일으킨다. 어류나두족류체내에서와달리이기생충이사람조직내에서생존하기위해서는온도상승및염도저하와같은환경변화에적응하여야한다. 대부분의생물체가발현하는아쿠아포린은막채널단백질로, 세포막을통한물과비전하저분자물질의이동을조절함으로써온도와삼투압변화에세포가대응할수있게한다. 고래회충유충이숙주조직환경에적응하는데아쿠아포린단백질이주요한역할을수행할것으로보인다. 본연구에서는고래회충에서아쿠아포린유전자를검색하고이들의구조및환경변화와발달에따른발현양상을분석하였다. 사람과 Caenorhabditis elegans에서보고된아쿠아포린단백질의아미노산서열정보를이용하여, 최근완성된고래회충유충의유전체초안정보를검색하여 17종류의서로다른아쿠아포린유전자를분리하고계통분류학적으로분석하였다. 17개의고래회충유충의아쿠아포린단백질중 8개는아쿠아포린과높은구조적유사성을보였지만, 나머지 9개단백질은물분자외에작은비전하물질의운반에도관여하는아쿠아글리세로포린과가까운유연관계를보였다. 실험실에서 3기고래회충유충을 4기유충으로변태시키고 quantitative real time PCR (qpcr) 에의해아쿠아포린유전자발현양상을비교하였다. 7종의유전자는 3기에비해 4기에서발현이증가하지만나머지유전자는감소하였다. 그리고 3기유충을서로다른온도조건 (4, 24, 37도 ) 에서배양후발현양변화를관찰하면, 4기유충에서발현이증가한유전자들이 37도환경에서도발현이열배넘게증가함을알수있었다. 반면 3기유충에서높게발현되는유전자들은낮은온도에서더높은전사활성을보였다. 각온도조건에서, 배지내 NaCl 농도를변화시켜삼투자극을유도, 각유전자에특이적인발현양상변화가관찰되었다 이상의결과를종합하면, 고래회충유충은환경과발달단계에따라서로다르게기능하는다양한아쿠아포린유전자를발현하며, 이들단백질이특정온도나염도조건에서물과비전하저분자물질의이동을적절하게조절함으로써세포항상성을유지하는데중요한역할을수행함을알수있었다

101 P59 가시아메바포낭형성조절인자 protein arginine methyltransferase 1 의 특성규명 문은경 1, 공현희 2, 전복실 1 경희대학교의과대학의동물학교실 1, 동아대학교의과대학기생충학교실 2 가시아메바의포낭형성은열악한환경에서의생존및약제처리에대한저항성을나타내기위해필수적인분화과정이라할수있다. 가시아메바가영양형에서포낭으로전환될때포낭형성에관련된다양한유전자들의발현변화가있는데, 현재까지포낭형성에관여하는유전자들의특성규명에대한연구는어느정도진행이되어왔으나, 포낭형성관련유전자들의발현조절기작에대한연구는거의이루어지지않은상태이다. 본연구에서는가시아메바의포낭형성조절인자인 protein arginine methyltransferase 1 (AcPRMT1) 의특성을규명하였다. Realtime PCR을통해포낭형성과정중 AcPRMT1의발현양상을확인하였고, 그기능을알아보기위해형질전환기법을통하여영양형및포낭상태에서의세포내위치를확인하였다. 또한 sirna 기법을사용하여 AcPRMT1의발현이억제되었을때가시아메바의포낭형성에미치는영향을확인하였다. 가시아메바의 PRMT1은포낭형성이진행되는동안높은발현증가를보였고, sirna를통해 AcPRMT1의발현을억제시켰을때포낭형성은 38.2% 가저해되었다. AcPRMT1의세포내위치를확인한결과, 영양형상태에서는세포막주위및핵내에위치하는것으로확인되었고, 포낭상태에서는주로핵내에위치하는것으로확인되었다. TypeI에속하는 AcPRMT1은핵에서포낭형성에필요한유전자들의발현을증가시키는것으로추측된다. 후성유전학적측면에서가시아메바의포낭형성기작의이해는향후포낭을형성하는병원성원충의포낭형성조절기작의이해및새로운약제개발에중요한정보를제공할것으로생각된다 - 99-

102 P60 지방세포가질편모충으로감염시킨전립선암세포의증식에미치는 영향 김상수 ¹, 한익환 ¹, 김정현 ¹, 안명희 ¹, 류재숙 ¹, 정용훈 ² 한양대학교의과대학환경의생물학교실 ¹, 미생물학교실 ² 질편모충은전립선염, 전립선비대증뿐만아니라전립선암조직에서도검출되어전립선암의발달에영향을줄것으로생각된다. 지방세포가암세포의증식및발달에영향을준다는보고는많이있다. 또한비만은전립선암발병율을증가시킨다고보고되었다. 이번연구에서는질편모충으로감염된전립선암세포가지방세포와의상호작용에의하여암세포의증식및발달에영향을주는지알아보고자하였다. 마우스전립선암세포주는 TRAMP-C1을, 마우스지방세포주는 3T3-L1을사용하였다. 질편모충을 TRAMP-C1과반응시킨 Tricho-conditioned medium (TC M) 을지방세포와반응시켜, adipocyte-tcm (ATCM) 을만든다. ATCM이 TRAMP-C1의증식및침습을증가시키는지측정하였다. mrna는 Real time PCR을이용해측정하였으며, cytokine은 ELISA로측정하였다. TRAMP cell에서 R OS의생산은 spectrofluorometer로측정하였다. wound healing assay, CCK 로증식을측정하였고, matrigel assay로침습을측정하였다. TRAMP cell에질편모충을감염시켰을때 ROS 및 cytokine (CCL2, CXCL-1) 이증가하였고, TCM은 pre-adipocyte의이동을증가시켰다. 분화된지방세포 (3T3-L1) 를 TCM으로자극하였을때 IL-6, CCL-2, TNF가증가하였고, mrna의발현도증가하였다. ATCM으로 TRAMP cell 을다시자극하였을때, TCM에비해서증식과침습을증가시켰다. 질편모충에감염된마우스전립선암세포는지방세포의 migration을유도하였으며, 이동한지방세포는마우스전립선암세포와상호작용을통해서 cytokine 의생산을증가시키며, 전립선암세포의증식및침습을증가시켰으므로지방세포는전립선암발달을촉진시킨다고생각한다

103 P61 질편모충에의한전립선상피세포의 apoptosis 와 EMT 유도 김정현, 김상수, 한익환, 안명희, 류재숙 한양대학교의과대학환경의생물학교실 질편모충 (Trichomonas vaginalis) 은주로성적접촉에의해사람의비뇨생식계에감염되는기생원충으로남성에서전립선염, 요도염또는불임등을일으킨다. 질편모충이전립선상피세포의염증반응을일으키며, 만성염증은전립선비대와전립선암을일으키는데중요한역할을할것으로보인다. 질편모충에감염된남성은무증상을보여치료가늦어짐으로써, 질편모충이전립선에장기간머물것으로추측된다. Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT) 은태아발육과정에중요한역할을하며, 성인에서는상피세포의항상성이깨지는상황에서활성화되어상처치유와조직복원에관여하며또한암세포의침습, 전이에도중요한역할을한다고알려져있다. 이연구에서는전립선상피세포에적은수의질편모충을반응시켰을때, 상피세포의변화와 EMT를일으키는지알아보았다. 전립선상피세포주 (RWPE-1) 와질편모충 (T016) 을사용하였다. 질편모충은 Cell Tracker Orange probe로염색후형광강도를측정하여부착을확인하였으며, 세포의생존율은 CCK-8 assay를사용하여측정하였다. apoptosis를확인하기위해 Flow cytometry를이용하였으며, EMT를확인하기위해 RT-PCR, western blot, immunofluorescence assay를사용하였다. 전립선상피세포에질편모충을 1:0.4로감염시켰을때, 질편모충의부착은시간에따라 24시간까지계속증가하였으며, 이후감소하였다. 세포자멸사는 24시간에는 29.8%, 48시간에는 40.2% 이었으며, 세포생존율도각각 85.0%, 78.6% 이었다. 반응이지속됨에따라상피세포가길쭉해지면서서로연결되어 48시간에는 tube formation이관찰되었다. 세포형태가길쭉해졌으므로 EMT 가일어났는지알아보았는데 epithelial marker인 E-cadherin이감소하고 mesenchymal marker인 vimentin, snail의증가로 EMT가확인되었다 이상의결과로질편모충은전립선상피세포에부착하면서상피세포의자멸사를일으키고, 세포의 형태를변화시키면서 typeⅡ EMT 를일으켜서상처치유를유도하는것으로생각된다

104 P62 병원성자유생활아메바들의포낭형성에효과적인액체배양배지의유 용성검정 손혜진 ¹, 강희경 ¹, 서가은 ¹, 박소리 ¹, 김종현 ², 정석률 ³, 신호준 ¹ 아주대학교의과대학미생물학교실 ¹, 경상대학교수의과대학기생충학교실 ², 남서울대학교임상병 리학과분자진단연구소 ³ 병원성파울러자유아메바 (Naegleria fowleri) 및가시아메바종 (Acanthamoeba spp.) 들은자연환경에널리분포하고있으며, 포낭형성과정 (encystation) 과탈낭형성과정 (excystation) 은아메바의중요한삶과죽음의생활사뿐만아니라숙주의병리생리학적현상에관여된다. 포낭형성유도하는방법으로는연구자에따라무영양한천배지 (non-nutrient media) 를이용하거나조성이개발된몇몇액체배지들을이용하고있다. 본연구는무균액체형포낭형성배지를이용하여 N. fowleri의포낭형성을유도하는방법을구축하고자하였고, 또한현재사용되고있는가시아메바포낭형성배지의유용성을비교관찰하였다. N. fowleri는 10% FBS가포함된 Nelson배지에서, A. castellanii 및 A. polyphaga는 PYG배지에배양하였다. 아메바영양형 (2x10 6 cells/ml) 을 buffer1 (ph 6.8; 120mM NaCl, 0.02mM MgCl 4, 0.001mM Na 2 HPO 4, 0.001mM KH 2 PO 4, 0.03mM CaCl 2, 0.02mM FeCl 2 ), buffer2 (ph 9.0; 95mM NaCl, 5mM KCl, 8mM MgSO 4, 0.4mM CaCl 2, 1mM NaHCO 3, 20mM Tris-HCl) 및 buffer3 (ph 7.6; 0.1M KCl, 8mM MgSO 4, 0.4mM CaCl 2, 30mM 2-amino-2-methlyl-1,3- propanediol) 로배양하면서포낭형성을유도하였고, 포낭형성후영양형으로의 recovery 여부를관찰하였다. 또한, 형성된포낭형에서 nfa1, actin 및 atg8 유전자의발현여부를 RT-PCR로확인하였다. N. fowleri는 buffer1을사용한배양에서 6시간부터전포낭 (precyst) 들이관찰되었으며, 48시간후에는많은수의전포낭및포낭들이관찰되어가장유용한배지였고, 형성된포낭들에서 nfa1 및 actin 유전자가적은양으로발현되었다. A. castellanii 및 A. polyphaga는 buffer2에서 24 시간부터전포낭들이관찰되었으며, 48, 72시간후에많은수의포낭들이관찰되어가장유용한배지였고, actin 유전자는영양형에서그리고 atg8 유전자는포낭형에서많은양이발현되었다. 이전실험들은사멸된 E. coli를무영양한천배지에도포하여 N. fowleri의포낭을유도하였는데, 본연구결과포낭형성과정을무균의액체배지로대체할수있었다. 이런포낭형성유도액체배지는아메바의생존과사멸및숙주에서의병인기전연구등에유용하게사용될것으로생각된다

105 P63 마우스장기에서 Plasmodium berghei 감염에따른혈관생성인자 Hypoxia induci ble factor -1α 및 Vascular endothelial growth factor 발현양상 조진옥 ¹, 신하림 ¹, 고은지 ¹, 백경완 ¹, 홍연철 ², 옥미선 ¹, 차희재 ¹ 고신대학교의과대학기생충학유전학교실 ¹, 경북대학교의학전문대학원기생충학열대의학교실 ² 말라리아감염은저산소증을유발하는것으로알려져있으며열대열원충감염의주된병변도저산소증이한원인일것으로추정되고있다. HIF-1α (hypoxia-inducible factor 1α) 는저산소증의주된표식자로서 VEGF (vascular endothelial gro wth factor) 를비롯한여러혈관생성인자의발현을조절한다. 이에말라리아감염정도에따른중요장기별 HIF-1α와 VEGF 발현정도및조직의저산소증정도를알아보고자하였다 Balb/C마우스복강내에 1 x 10 7 Plasmodium berghei감염적혈구를주사하여기생충혈증 10% 및 30% 에서주요장기 ( 폐, 신장, 근육, 뇌, 간 ) 를적출하여 Western blot과면역형광법으로 HIF-1a 및 VEGF 발현정도를조사하였다. 조직의저산소증정도는 Hypoxia detection kit (Hypoxyprobe Gemini Kit) 로확인하였다 HIF-1α및 VEGF 발현은기생충혈증 10% 에서는비감염마우스와비교하여차이가없었으나 30% 에서는혈청을비롯한조사한모든장기에서유의하게증가하였으며특히혈청, 폐, 뇌, 신장에서크게증가하였다. 조직의저산소증정도는신장과폐에서는 10% - 30% 에서, 간과뇌에서는 30% 에서강한시그널을볼수있었다. 이러한결과는말라리아기생충혈증 30% 이상에서혈청및중요장기조직에저산소증이광범 위하게발생하며이는 HIF-1α 및 VEGF 에의해유도되는것으로추정할수있었다

106 P64 이질아메바에자극에의한 Jurkat T 세포내의 Hypoxia inducible factor (HIF)-1 의발현조사 이영아, 김성훈, 신명헌 연세대학교의과대학환경의생물학교실 조직침범기생원충인이질아메바의숙주세포사멸능력은면역회피및조직병리기전과매우밀접한관련이있다. Hypoxia inducible factor (HIF-1) 은저산소환경에대한다양한세포반응을조절하는 HIF-1α와 HIF-1β로구성된이형이량체전사조절인자이다. HIF-1α는산소농도의존적으로발현이조절되는데정상산소농도에서는 HIF-1α는 ubiquitin-proteasome pathway를통해빠르게분해된다고알려져있다. 몇몇감염병질환모델에서 HIF-1α의발현변화가나타남이보고되었으나이질아메바에의한숙주세포내 HIF-1α의발현에대한연구는전혀이루어지지않았다. 따라서본연구에서는이질아메바의자극에의해변화하는숙주세포내의 HIF-1α의발현을조사하였다. 이질아메바 (HM-1:IMSS) 주를사용하였고숙주세포로는 Jurkat T 세포를사용하였다. 아메바와숙주세포의비율을 5:1 또는 10:1의비율로 5-30분동안각각반응시킨후숙주세포내의 HIF-1 의발현을 western blot과 FACS를통해조사하였다. 이질아메바에자극에의해 Jurkat 세포의 HIF-1α의발현이아메바농도의존적으로감소함이관찰되었다. 그러나이러한아메바에의한 HIF-1α의감소는아메바의 lysate와 ESP를각각숙주세포에처리했을때에는전혀나타나지않았다. 또한, 포름말린용액으로고정시킨이질아메바를숙주세포에처리했을때에도아메바에의한숙주세포의 HIF-1α의발현감소는관찰되지않았다. 이는살아있는이질아메바의접촉에의해서만 Jurkat 세포내의 HIF-1α의발현이감소됨을알수있었다. 이질아메바는접촉을통해 Jurkat 세포내의 HIF-1α 의발현을감소시킴이관찰되었고이에대한 상세한세포내기전연구가필요할것으로생각된다

107 P65 가시아메바각막염동물모델에서 Resolvin D1 의각막반흔형성예방 효과 박성희 ¹, 이다인 ¹, 강신애 ¹, 최준호 ¹, 송소명 ¹, 김혜진 ¹, 이지은 ², 이종헌 ², 유학선 ¹ 부산의전원기생충학교실 ¹, 안과학교실 ² 최근에시력교정및미용적인목적으로인해콘텍트렌즈사용량이늘고있으며렌즈세척액, 보존액관리미흡으로인한가시아메바각막염의발병이지속적으로발생하고있다. 콘텍트렌즈를착용하는사람의경우각막에과도한자극, 산소차단, 눈물기저층의약화로인해가시아메바각막염에쉽게걸릴수있다. 가시아메바각막염은예방약이현재없으며, 치료약도 PHMB (Polyhexamethylene Biguanide), Chlorohexidine 등으로종류가제한적이며각막독성이있어치료이후에각막혼탁, 반흔형성과같은후유증을유발하는것으로알려져있다. 따라서본연구에서염증완화와항히스타민효과가있는 Resolvin D1에의한가시아메바각막염의예방효과를 in vivo상에서조직학적변화로확인하고자하였다. 6주령 C57BL/6 마우스의각막중심부에인위적으로찰과상을낸후가시아메바를 5 104개를 2일마다감염시켜가시아메바각막염을유도하였으며, 이를 6회반복하였다. 실험군은찰과상을낸직후 16 nm Resolvin D1을 2.5 μl 씩매회감염전처리하였다. 각막침윤및혼탁정도를전안부사진및빛간섭단층촬영기를이용하여측정하였다. 적출된쥐의안구를이용하여각막에침윤된호중구를 H&E staining으로확인하였다. ResolvinD1 전처치후각막염유도군에서전안부사진확인결과각막혼탁과각막의가시아메바침윤, 가시아메바감염으로인한반흔형성의정도가감소하였으나, 빛간섭단층촬영기에서각막의두께변화는유의적으로차이가있지않았다. 하지만가시아메바각막염에서증가했던호중구의침윤정도가 Resolvin D1 전처치군에서유의적으로감소하는것을확인하였다. 가시아메바각막염마우스모델에서 Resolvin D1은염증반응을억제하고, 각막혼탁과각막침윤및반흔이감소됨을확인할수있었으며, 이는향후가시아메바각막염의새로운예방치료제개발에기여할수있을것으로사료된다

108 P66 깔따구에의한알러지유발가능성과집먼지진드기와의 IgE 반응 상관성조사 이명희 ¹, 이한일 ¹, 김주영 ¹, 곽유신 ¹, 김정현 ², 한세희 ², 정순덕 ², 용태순 ¹ 연세의대환경의생물학, 열대의학연구소, 의용절지동물소재은행 ¹, 한국건강관리협회 ² 깔따구는강, 호수, 물웅덩이뿐아니라인위적으로만들어진둑이나보에서대량발생하는불쾌곤충이다. 깔따구의성충은수명이짧고몸체가연약하여죽은깔따구의사체는부스러져먼지나공기중에섞여호흡시비강이나기관지로들어와알러지를유발할수있다고알려졌다. 따라서본연구에서는깔따구와주알러지유발항원인집먼지진드기와의 IgE 반응상관성을조사하고깔따구항원이알러지유발에관련하여주민건강에영향을줄수있는지파악하고자하였다. 한국건강관리협회의협조를받아건강검진을위해채혈된혈액을확보하여혈청내깔따구류와 집먼지진드기항원에대한 IgE 수치를 ELISA 와 ImmunoCAP 을이용하여측정하였다. 조사된지역 ( 충남, 경북, 춘천 ) 주민의 10% 이상이집먼지진드기항원에양성반응을보였고깔따구의종류에따라 IgE 양성반응에차이를보였다. 특히두흰마디아기깔따구항원에대한 IgE 양성반응률은호수주변에사는주민에서높게나타났으며 ELISA와 ImmunoCAP으로측정한특이 IgE 수치모두호수주변에사는주민에서높게측정되었다. 항원에반응하는 IgE 수치를이용하여각깔따구와집먼지진드기와의 IgE 반응상관성을분석하였을때각항원에대한 IgE 반응은서로연관성이없음을확인하였다. 이러한결과를통해호수주변의주민은그외지역에사는사람보다깔따구에 더많이감작되었을것으로추측되며집먼지진드기알러젠과는다른성질을가진깔따구항원이 특이 IgE 반응을보인것으로판단된다

109 대한기생충학 열대의학회제 58 회총회식순 1. 개회 2. 국민의례 3. 학회장인사말 4. 전회의록낭독 5. 회무보고 1) 부서별보고 2) 2016년도결산안보고 3) 감사보고 6. 안건심의 1) 2016년도결산 2) 2017년도예산 7. 학술상수여 8. 평의원및임원개선 9. 기타토의 10. 폐회

110 대한기생충학 열대의학회결산 (2015 년 10 월 7 일 ~ 2016 년 10 월 6 일 ) 세입세출 세입항목 2016 년예산 2016 년결산세출항목 2016 년예산 2016 년결산 1. 회비 21,300,000 27,305, 총회및학술대회 13,500,000 11,069,640 입회비 100, ,000 총회및학술대회 9,000,000 6,912,440 회원회비 3,700,000 6,855,000 기초의학심포지움 2,000,000 2,651,000 평의원회비 10,000,000 11,750,000 집담회회의비 2,500,000 1,506,200 등록비 7,500,000 8,555, 초록집발간비 2,100,000 1,100, 잡지게재료 46,500,000 50,682,187 학술대회 2,100,000 1,100,000 53권5호 7,500,000 7,897,599 53권6호 7,500,000 8,566, 잡지발간비 69,100,000 60,519,339 54권1호 7,500,000 9,556,266 53권4호 4,500,000 5,046,200 54권2호 7,500,000 7,992,000 53권5호 4,500,000 4,993,180 54권3호 7,500,000 8,757,946 53권6호 4,500,000 4,707,990 54권4호 7,500,000 5,211,737 54권1호 4,500,000 4,406,390 미납게재료 1,500,000 2,700,000 54권2호 4,500,000 4,677,420 54권3호 4,500,000 4,796, 학술활동보조금 44,650,000 46,900,000 54권4호 4,500,000 5,585,200 건강관리협회 14,000,000 14,000,000 편집위사무비 5,000,000 5,402,500 과학기술단체총연합회 25,150,000 26,100,000 편집보조원인건비 11,600,000 1,000,500 대한의학회 4,000,000 4,000,000 PMC 구축및관련작업비 7,000,000 6,436,000 기초의학협의회 1,500,000 2,800,000 전자투고시스템유지비 13,000,000 13,467,959 기타 ( 잡지발간관련 ) 1,000, 학회학술상 4,000,000 3,000,000 프론티어학술상금 1,000, 회의비 8,000,000 4,878,260 건협우수논문상 3,000,000 3,000,000 평의원회의비 1,500,000 2,650,460 임원회의비 800, , ICOPA 지원금 각위원회회의비 5,000,000 1,079,700 건강관리협회 ICOPA 20,000,000 60,000,000 명예회원회의비 700, , 기타수입 5,250,000 4,354, 학회사무비 4,900,000 4,146,400 경매 1,200,000 3,840,000 총무사무보조비 2,500,000 2,504,260 이자 50,000 41,759 학술, 사업사무보조비 2,100,000 1,605,000 기타 4,000, ,345 복사및우편배송비 300,000 37, 전기이월금 70,336,101 70,336, 학술상 8,000,000 6,922,000 학술상상금및메달 4,000,000 2,921,000 프론티어학술상상금 1,000,000 1,000,500 건협우수논문상금 3,000,000 3,000, 단체회비 4,000,000 2,879, 광고홍보비 300, 전산정보화처리비 3,000,000 2,997, ICOPA 개최지원금 55,000,000 95,002, KJP 저자보조금보조금 5,000,000 2,801, 기타지출 5,000, , 예비비 9,000, 차기이월금 25,136,101 69,583,913 합계 212,036, ,577,392 합계 212,036, ,577,392 감사를필함 년 10 월 7 일 심서보 박 현

111 기금잔고 : 144,151,743 원 ( 기준) 신규일 만기일 내 역 기금 1 (1.55%) 135,477,006 원 기금 2 (1.45%) 8,674,737 원 합 계 <기금 1> 금 액 144,151,743 원 <기금 2>

112 대한기생충학 열대의학회 2016 년도감사보고 본학회의회칙제 11 조와제 14 조에의거 2016 년도 ( ~ ) 의본학회사무와재정전반에대하여 2016 년 10 월 7 일자로 일반적인감사기준에따라감사하였다. 1. 각종서류보관상태와 2016년도수입과지출의각항목내역이잘정리되어있고예산항목에맞추어적절히집행되었습니다. 2. 회원의회비납부와 ICOPA 지원금이원활히진행되고있습니다. 3. 학술집담회등의학술활동과각위원회의활동이더활발히진행되어야합니다. 4. 학회사무비의현실에맞춘적절한증액이필요합니다 년 10 월 7 일 대한기생충학 열대의학회 감사심서보 감사박 현