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9 2012 년도혈액검사학회ㆍ수혈검사학회연합추계학술대회일정표 일시 : 2012 년 11 월 3 일 ( 토 ) 13:30~17:40 장소 : 건국대학교병원대강당 시간순서좌장 13:30 ~ 14:00 개회식행사 - 14:00 ~ 14:30 구연 -1 ( 유전 ) 심문정교수 14:30 ~ 14:45 구연 -2 ( 수혈 ) 최범열고문 14:45 ~ 15:30 특강 -1 ( 수혈 ) 김동찬학회장 15:30 ~ 15:50 Coffee break - 15:50 ~ 16:20 특강 -2 ( 면허재신고등 ) 이귀순학회장 16:20 ~ 17:00 특강 -3 ( 혈액 ) 함천경고문 17:00 ~ 17:30 구연 -3 ( 혈액 ) 변대훈고문 17:30 ~ 17:40 폐회및기념촬영 - i -

10 학술발표안내학술발표안내 구연발표 Ⅰ( 유전 ) 좌장 : 심문정교수 FISH검사전처리자동화장비 XmatrxTM와수기법의비교평가 세브란스병원진단검사의학과 / 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성 서울아산병원진단검사의학과 / 김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 구연발표 Ⅱ( 수혈 ) 좌장 : 최범열고문 Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 / 양성식 특강 Ⅰ( 수혈 ) 좌장 : 김동찬학회장 수혈의학의현재와미래 서울의대검사의학교실, 분당서울대병원진단검사의학과 / 박경운 특강Ⅱ( 면허재신고등 ) 좌장 : 이귀순학회장 2014년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사 / 이상호 특강 Ⅲ( 혈액 ) 좌장 : 함천경고문 체액세포검사 울산의대서울아산병원 / 장성수 구연발표Ⅲ( 혈액 ) 좌장 : 변대훈고문 PFA-100의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A & B position 검사결과비교연구 고려대학교안산병원진단검사의학과 / 박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 6-color판넬을이용한형질세포암의유세포분석 세브란스병원진단검사의학과 / 류희정ㆍ양미숙ㆍ김경숙ㆍ김수정 - ii -

11 목 차 논 문 1. 제대혈무게에따른전혈구수 (complete blood count) 참고치메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 3 2. 한국의제대혈이식과보관 : 11 년간의기증제대혈은행운영현황메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 양정윤ㆍ최기훈ㆍ김희정ㆍ임소진ㆍ홍혜경ㆍ오원일 냉동보관된제대혈조혈모세포의냉동전과해동후의보관기간별검사결과분석메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 임소진ㆍ김희정ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 19 구연발표 Ⅰ( 유전 ) 1. FISH 검사전처리자동화장비 XmatrxTM 와수기법의비교평가세브란스병원진단검사의학과 / 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성서울아산병원진단검사의학과 / 김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 30 구연발표 Ⅱ( 수혈 ) 3. Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 / 양성식 33 특강 Ⅰ( 수혈 ) 1. 수혈의학의현재와미래서울의대검사의학교실, 분당서울대병원진단검사의학과 / 박경운 37 특강 Ⅱ( 면허재신고등 ) 년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사 / 이상호 51 특강 Ⅲ( 혈액 ) 3. 체액세포검사울산의대서울아산병원 / 장성수 55 - iii -

12 구연발표 Ⅲ( 혈액 ) 4. PFA-100 의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A&B position 검사결과비교연구고려대학교안산병원진단검사의학과 / 박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 color 판넬을이용한형질세포암의유세포분석세브란스병원진단검사의학과 / 류희정ㆍ양미숙ㆍ김경숙ㆍ김수정 61 포스터 ( 유전 ) 1. HLA-B51 유전자검사의양성율조사와고찰삼광의료재단 / 윤은희 IUGR( 자궁내성장지연 ) 로의뢰된염색체검사결과에대한분석및고찰삼광의료재단세포유전검사팀 / 김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 고령산모의양수염색체검사결과에대한유형분석삼광의료재단세포유전검사팀 / 김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 Premature ovarian failure 환자의염색체핵형분석 1 예의료법인삼광의료재단 / 권지현 ssmc 가발견된양수검체의부모혈액염색체결과분석의료법인삼광의료재단 / 권지현 산모들의 MTHFR C677T 유전자단일염기다형성의빈도의료법인삼광의료재단 / 진한울 자연유산으로의뢰된수태산물염색체검사결과의유형삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 Patau, Edward, Down Syndrome 에서의산모의나이유형삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 혈액종양에서관찰되는 Y 염색체소실삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 조기폐경의심환자의핵형결과 46,X,idic(X)(q27) 1 례삼광의료재단세포유전검사팀 / 김진현 PCR & Sequencing 법을이용한글리벡내성유전자변이통계조사녹십자의료재단 / 방성희ㆍ전희선ㆍ김윤경ㆍ조은해 BCR-ABL IS 정량검사소개의료법인녹십자의료재단인간유전체팀 / 전희선 습관성유산환자의증가추세와염색체이상의분포삼광의료재단 / 박영주 77 - iv -

13 14. 양수검체상태에따른검사소요일삼광의료재단 / 박영주 marker chromosome 의기원을알아본증례보고 (2 예 ) 삼광의료재단 / 박영주 선천성난청을유발하는 GJB2 유전자돌연변이빈도의료법인삼광의료재단 / 이연주 혈액질환별염색체핵형분석과임상적의의네오딘의학연구소유전체연구센터 / 임경옥ㆍ송지원ㆍ이현정ㆍ최수현ㆍ한재이ㆍ신은심 Jacobsen syndrome 을보이는환자의핵형분석과임상적특징고찰서울아산병원 / 권은미 Imatinib 에저항성이있는유전자변이의빈도서울아산병원 / 권미량ㆍ최미옥ㆍ박상혁ㆍ조영욱ㆍ지현숙 p deletion 증후군에관한증례보고서울아산병원 / 오유겸 Cytogenetic Microarray 으로확인한 15 번염색체의 Prader-willi/Angelman syndrome 1 예녹십자의료재단의학유전체연구소제 2 연구팀 / 김주연ㆍ강유선ㆍ조은해 Chromosomal microarray 로확진한말초혈액의 X 염색체단완 (Xp22.31) 의 STS 유전자결실녹십자의료재단 / 백민정ㆍ강유선ㆍ조은해 Myelodysplastic syndrome 환자의골수 chromosomal analysis 와 Cytogenetic Microarray 분석결과증례보고녹십자의료재단 / 남옥이ㆍ강유선ㆍ조은해 87 포스터 ( 혈액 ) 1. 당화혈색소 (Hb A1c) 검사의보관온도별검체안정성검사녹십자의료재단진단검사의학부혈액학팀 / 유일호 최근 3 년간 Malaria 양성율보고녹십자의료재단감염유전체팀 / 김은주ㆍ박용원ㆍ장자현ㆍ조은해 Microarray 로확인한 ALL 환자의 Bone marrow 결과 2 건녹십자의료재단 / 구선영ㆍ강유선ㆍ조은해 검체보관조건에따른 Lymphocyte Subset 검체안정성평가녹십자의료재단 / 이숙정 혈액응고검사 (PT, aptt) 시약제조시온도변화에따른결과값의영향녹십자의료재단 / 김영래 제대혈의단핵세포비율과재태연령의상관성분석메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 최정미ㆍ양정윤ㆍ김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 94 - v -

14 7. Cooling 시간에따른제대혈세포생존도의변화추이관찰메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 유옥선ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase 측정시위양성예울산의대서울아산병원진단검사의학과 / 전소현ㆍ박정숙ㆍ최미옥ㆍ지현숙 AMC 의 CBC 정도관리물질허용범위설정방법소개서울아산병원진단검사의학과 / 최미옥ㆍ김종화ㆍ김동제ㆍ박찬정 년 ISTH 에서제안된 Lupus Anticoagulant(LA) 검사방법도입서울아산병원 / 이명심ㆍ최미옥ㆍ장성수ㆍ지현숙 국내말라리아 PCR 의양성추이조사의료법인삼광의료재단 / 이연주 PFA-100 closure time 에영향을미치는요소와유용성인제대학교해운대백병원진단검사의학과 / 권형범 Mixing test 를위한 Homemade Normal Pooled Plasma 의제조및평가세브란스병원진단검사의학과 / 배가희ㆍ양미숙ㆍ김선경ㆍ김일ㆍ김수정 Stago revolution 장비를이용한 D-dimer 정량검사의유용성평가삼광의료재단 / 박홍철 Stago revolution 장비를이용한 FDP 정량검사의유용성평가삼광의료재단 / 박홍철 103 포스터 ( 수혈 ) 1. 검체보관조건이동종응집소역가에미치는영향국립암센터진단검사의학과 / 서희승ㆍ송윤경ㆍ안태규ㆍ김강림공선영 항 -E 를지닌간이식환자에게서추가동정된항 -Di a 검출사례서울아산병원혈액은행 / 김효진 제대혈의 Hematocrit 과 LRP(Leukocyte rich plasma) 의관계분석메디포스트 생명공학연구소 / 이선미ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 단일혈액원에서처음시행한헌혈혈액에대한 B 형간염핵산증폭검사경험한마음혈액원 / 윤형주ㆍ김근옥ㆍ안현기ㆍ박지훈ㆍ정희숙ㆍ황유성 NBM-200 장비를이용한헌혈자헤모글로빈의측정연세의료원세브란스병원진단검사의학과 / 노연희ㆍ이은경ㆍ김신영ㆍ김현옥 Duffy a (Fy a ) 항원음성혈액출고증례 1 예인천적십자혈액원 1 ㆍ중앙검사센터 2 ㆍ가천대중앙길병원 3 ㆍ미 8 군 121 병원 4 / 이충영ㆍ송창면 1 ㆍ김종필ㆍ김종훈 2 ㆍ김한규 3 ㆍ남필순 성분채혈혈소판제제의혈소판수 (yield) 에따른사용실태및현황한마음혈액원제제공급팀 / 김희범ㆍ김자선ㆍ김정남ㆍ이정은ㆍ이원아ㆍ김종원 vi -

15 논문 혈액 ( 논문 1) 수혈 ( 논문 2 ~ 3) - 1 -

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17 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 1 제대혈무게에따른전혈구수 (complete blood count) 참고치 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Complete Blood Count Reference Values according to Weights of Cord Blood Hee Jung KimㆍHye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Korea Family cord blood banking are comprised of diverse weights of at least 40g to more than 200g. In this study, we analyzed CBC parameters of the CB to establish CBC reference values according to weight of large-scale family cord blood. We examined using cord blood divided into three groups based on difference of cord blood weight. The results, we could not assort the reference intervals of each group because each group did not have differences of differential count of WBC and platelets. Thus, we set up the reference intervals based on analysis of three groups data. Whereas hemoglobin (Hb) and white blood cell (WBC) set up in accordance with differences of cord blood weight. The reference intervals of CBC according to weight is as in the following. Group of 40-99g : Hb, g/dL; WBC, x10 3 /μl; Group of g : Hb, g/dL; WBC, x10 3 /μl; Group of more than 140g : Hb g/dL; WBC x10 3 /μl. Differential count of WBC (neutrophils, %; lymphocytes, %; monocytes, %; eosinophils, %; basophils, %); platelet, x10 3 /μl. We suggest that the established CBC reference values from this study will be useful as basic data for CBC interpretation of CB in the family cord blood bank are comprised of diverse weights. Key Words : Cord blood, Weight, Reference value, CBC Ⅰ. 서론 현대의학에서최근까지가장과학적인근거를가지고질병치료에이용되고있는분야는탯줄속의혈액을이용한제대혈분야이다. 제대혈에조혈모세포가다량포함되어있어임상에적용이가능하다는연구결과가처음발표 [1] 된이래로특히골수이식을시행할수없는백혈병환자에대한새로운치료법으로자리를잡았다. 여러난치성혈액질환이나유전성질환의 - 3 -

18 치료에제대혈이식이성공적으로이루어지고있으며, 전세계적으로제대혈은행들이활발하게설립운영되기시작하였다 [2]. 국내에서도제대혈은행들이활발하게운영되고있으며이러한제대혈은행의운영형태는두가지로나뉘어지는데, 비혈연간제대혈조혈모세포이식을목적으로하는기증제대혈은행과자가또는혈연간이식을목적으로하는가족제대혈은행이다. 기증제대혈과가족제대혈의보관적합한총유핵세포수 (total nucleated cells, TNC) 의기준은다른데, 제대혈관리및연구에관한법률시행령제 10조에의하면, 기증제대혈은보관처리전총유핵세포수가 8억개이상이고가족제대혈의경우, 총유핵세포수검사항목은위탁자의명시적인동의가있으면적합기준을다르게지정할수있다고되어있어제대혈은행마다가족제대혈의보관적합한총유핵세포수기준은차이가있다. 가족제대혈은기증제대혈에비해채취량의분포가다양하여, 채취된제대혈의무게를측정해보면최소 40g에서최대 200g 이상까지의분포를보인다. 제대혈이의료기관에서채취되어제대혈은행으로입고가되면여러검사를거친후법규에서규정한보관적합한제대혈만선별보관이가능하게된다. 법규에규정된제대혈검사로는제대혈유핵세포수및세포생존율, 미생물배양검사및감염성질환검사등이있다. 전혈구수 (complete blood count, CBC) 검사는제대혈의유핵세포수산정을위한기본검사이며, 제대혈저장여부를결정짓는첫번째요소이다. 하지만, 최근까지제대혈의전혈구수검사결과해석을중요시여기지않았다. 그리고제대혈에서전혈구수의참고치를설정한대규모연구결과가많지않아제대혈의검사결과해석과저장적합성평가에있어외국에서소규모로연구한결과 [3-5] 나말초혈액의전혈구수참고치를부분적으로참고하고있는실정이다. 이에저자들은제대혈은행에위탁보관된다양한채취량의분포를갖는가족제대혈검체를대상으로제대혈의무게에따른전혈구수에대한참고치를설정하고자하였다. Ⅱ. 대상및방법 1. 대상 2011년 8월 11일부터 12월 31일까지메디포스트 ( 주 ) 제대혈은행에위탁되어가공후보관이완료된제대혈 5,533단위를대상으로하였다. 채취된제대혈은무게에따라세개의무게군으로나뉘었고 40 99g은 2,989단위, g 은 2,171단위, 140g 이상은 373단위로분석하였다. 2. 방법 1) 무게측정제대혈은각분만병원에서항응고제 (citrate posphate dextrose adenine,cpda-1) 24.5mL 포함된채취백에채취되어져운송담당자에의해실온상태를유지하여제대혈은행으로운반된다. 운송된제대혈은먼저제대혈채취백에달려있는긴라인을 sealer (Tube sealer, SE200, Centron Technologies Corporation, Korea) 를이용하여봉합후제거한다. 라인이정리된채취백을저울 (BJ 410C, Precisa Instruments Ltd., Switzerland) 에올려무게를재고계측된값에서채취백의무게를뺀값을취한다. 본연구에서설정된제대혈무게는채취된순수제대혈량에항응고제 (citrate posphate dextrose adenine, CPDA-1) 24.5mL가포함된값이다

19 2) 검사채취백의제대혈을 10분이상잘혼합한후 1mL를채취하여전혈구수검사를시행하였다. 분석장비로는자동혈구분석기 ADVIA 2120 (Siemens, USA) 을이용하였고혈색소, 백혈구수, 백혈구감별계수 ( 호중구, 림프구, 단구, 호산구, 호염구백분율 ), 혈소판수를측정하였다. 3) 항목별참고치설정기준제대혈의측정값에서 1/3 법칙에따라, 즉최대측정값에서두번째로큰측정값을뺀절대값이최대측정값과최소측정값차이의 1/3 이상이면이때의최대측정값은이상치 (outlier) 로간주하여참고치설정에서제외하였고, 최소측정값에도같은기준을적용하였다. 항목별로제대혈측정값의평균 (Mean) 과표준편차 (SD), 2.5 및 97.5 백분위수를산출하였으며, 정규분포가확인된항목은모수법 (Mean±2SD) 으로, 정규분포가확인되지않은항목은비모수법 ( 백분위수 ) 으로참고치를설정하였다 [6, 7]. 통계분석에는 SPSS 16.0 프로그램 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 과 Excel 2007 (Micro soft Office, USA) 을사용하였다. Ⅲ. 결과 정규분포를확인한결과, 제대혈무게군 40 99g은백혈구수와혈소판수에서정규분포가정이성립되었고나머지무게군에서는혈소판수에서만정규분포가정이성립되었다. 항목별로제대혈측정값의평균 (Mean) 과표준편차 (SD), 2.5 및 97.5 백분위수를산출하여, 제대혈전혈구수의평균과표준편차는 Table 1에, 2.5 및 97.5 백분위수는 Table 2에제시하였다. 모든무게군에서정규분포를확인한혈소판수는모수법 (Mean±2SD) 에의하여하한과상한참고범위를설정하였으며, 나머지항목은정규분포가정이성립되지않아비모수법인 2.5 percentile과 97.5 percentile 각각의값을참고범위의하한과상한으로설정하였다 (Table 3). Table 1. Complete blood count values (Mean±SD) by weight groups of cord blood 40-99g g >140g Hb (g/dl) 10.1± ± ±1.3 WBC (x10 3 /μl) 8.3± ± ±3.2 Differential count (%) Neutrophil 53.9± ± ±10.0 Lymphocyte 35.1± ± ±10.5 Monocyte 7.0± ± ±1.7 Eosinophil 3.1± ± ±1.4 Basophil 1.0± ± ±0.3 Platelet (/μl ) 166.9± ± ±46.0 Abbreviation: CBC, complete blood count; WBC, white blood cell

20 Table 2. Complete blood count values ( percentile) by weight groups of cord blood 40-99g g >140g Hb (g/dl) WBC (x10 3 /μl) Differential count (%) Neutrophil Lymphocyte Monocyte Eosinophil Basophil Platelet (/μl ) Abbreviation: See Table 1. Table 3. Complete blood count reference values by weight groups of cord blood 40-99g g >140g Hb (g/dl) WBC (x10 3 /μl) Differential count (%) Neutrophil Lymphocyte Monocyte Eosinophil Basophil Platelet (/μl ) Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method ( percentile). Abbreviation: See Table 1. Table 3에서알수있듯이, 혈색소와백혈구수는무게군에따라비례적으로높아지는반면, 백혈구감별계수는무게군에따른큰차이가없음을알수있다. 혈소판수는 40-99g 무게군의하한값이다른두무게군에비해낮은편으로, 이는제대혈양이적을수록혈색소, 백혈구수가낮은요인과같은효과로볼수있다. 위결과를토대로, 혈색소와백혈구수는무게군에따라참고치를설정하였고, 백혈구감별계수와혈소판수는무게군별참고범위를구분하지않고전체제대혈값을대상으로참고범위를설정하여 Table 4에제시하였다

21 Table 4. Complete blood count reference values according to weight of cord blood 40-99g g >140g Hb (g/dl) WBC (x10 3 /μl) Differential count (%) Neutrophil Lymphocyte Monocyte Eosinophil Basophil Platelet (/μl ) Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method ( percentile). Abbreviation: See Table 1, Table 5. Comparison between CBC reference values established in this study and the study using donated CB units donated CB units This study Hb (g/dl) WBC(x10 3 / μl ) Differential count (%) Neutrophil Lymphocyte Monocyte Eosinophil Basophil Platelet (/ μl ) Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method ( percentile). Abbreviation: See Table 1; CB, cord blood. Ⅳ. 고찰 최근의학의발전으로제대혈을이용한난치병치료에많은진전을보이고있고세포치료제의중요한자원으로도활용됨으로써제대혈의활용가치는더욱더높아질것으로보인다. 최근에제대혈이조혈모세포이식에이용되어지는경우가종종생김으로써임상적인중요성이커지고있어제대혈의전혈구수에대한연구가필요하다. 참고범위의설정과해석은임상에있어매우중요한문제지만제대혈보관에있어참고범위의설정과결과해석에관한인식은매우낮은편이다. 현재사용하고있는제대혈의전혈구수 - 7 -

22 참고범위는외국에서소규모로연구한결과 [3-5] 이거나말초혈액의참고치로, 제대혈에그대로적용하는것이타당한지에대한정확한검토없이참고하고있는실정이다. 제대혈에대한정확한참고범위가존재하지않아, 실무에서는자동혈구분석기를이용하여전혈구수측정시재검사를해야하거나도말표본을제작하여수기법으로확인해야하는경우가많이발생한다. 특히백혈구감별계수 ( 호중구, 림프구, 단구, 호산구, 호염구백분율 ) 는제대혈가공처리의진행및저장여부를결정하는요인에크게영향을미치지않는검사항목이면서도전혈구수검사에서재검을많이요구하는항목이기도하다. 이는현재사용하고있는참고범위의오류를보여주는것이라생각된다. 최근에국내에서자동혈구분석기를이용한제대혈전혈구수에대한대규모연구 [6] 가보고되었다. 이연구는아무런대가없이순수하게기증된제대혈을보관하는기증제대혈은행의제대혈 2,129단위를대상으로하였고, 이연구에서산정한제대혈전혈구수참고치 [6] 와비교해보면, 본연구에서제대혈의혈색소, 백혈구수그리고혈소판수가상대적으로낮았는데 (Table 5), 이러한차이는채취된제대혈의용량차이에서오는결과로생각된다. 가족제대혈이기증제대혈에비해보관적합한총유핵세포수의기준이낮기때문에보관가능한제대혈용량도비례하여적다. 제대혈의총량에따른총유핵세포수의상관관계를본연구결과를보면제대혈의용량이증가함에따라총유핵세포수 (total nuclea ted cells, TNC) 가증가하는것을볼수있었으며, 이는모두통계학적으로유의한상관관계를보였다 [8]. 본연구에서는위탁자와의계약에의해서위탁보관을하고있는가족제대혈은행을기준으로하여제대혈채취량에있어다양한분포를갖는가족제대혈검체를대상으로제대혈의무게에따른전혈구수에대한참고치를설정하였다. 본연구는대단위의가족제대혈을대상으로하였고제대혈의채취량을세개의무게그룹으로나뉘어제대혈무게에따라전혈구수참고치를설정했다는점에서의의가있다. 본연구를통해설정된참고치는제대혈무게군이다양한가족제대혈을보관하는제대혈은행에서제대혈검사결과를해석하는데유용할것이고, 더나아가제대혈이질병치료에효과적으로사용되기위해서는냉동보관되는제대혈에대한품질관리가우선되어야하는데, 그것의기본이될것이다. 참고문헌 [1] Knudtzon S. In vitro growth of granulocytic colonies from circulating cells in human cord blood. Blood. 1974;43: [2] Young-Ho Lee, M.D., Ph.D. Cord Blood-Current Status and Perspective. Korean J Hematol 2007;42: [3] Pranke P, Failace RR, Allebrandt WF, Steibel G, Schmidt F, Nardi NB. Hematologic and immunopheotypic characterization of human umbilical cord blood. Acta Haematol 2001;105:71-6 [4] Walka MM, Sonntag J, Kage A, Dudenhausen JW, Obladen M. Complete blood counts from umbilical cords of healthy term newborns by two automated cytometers. Acta Haematol 1998;100: [5] Rolfo A, Maconi M, Cardaropoli S, Biolcati M, Danise P, Todros T. Nucleated red blood cells in term fetuses: reference values using an automated analyzer. Neonatology 2007;92:

23 [6] Hye Ryun Lee, M.D., Sue Shin, M.D., Jong Hyun Yoon, M.D., Byoung Jae Kim, M.D., Kyu Ri Hwang, M.D., Jin Ju Kim, M.D., et al. Complete Blood Count Reference Values of Donated Cord Blood from Korean Neonates. Korean J Lab Med 2009;28:179-84) [7] National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline C28-A2. Wayne, PA: National Committee for Clinical Laboratory Standards, [8] Si Won Lee, M.D., Jae Hyug Yang, M.D., Jin Hoon Chung, M.D., Yeon Kyung Cho, M.D., Jung Han Kim, M.D., Dal Soo Hong, M.D., et al. Factors Affecting the Volume of Umbilical Cord Blood. Korean Journal of Fetal Medicine [9] Hee-Yeon Woo, M.D., Young Jae Kim, M.D., Hyosoon Park, M.D. Establishment of Reference Intervals of Tumor Markers in Korean Adults. Korean J lab Med 2008;28: [10] Jin Chan Lee, Soon Ki Kim, Chang Kyou Lee, Seung Gwan Lee, Hyun Sil Lee, and Kyung Jin Cho. J Lab Med Qual Assur 2006;28: [11]Oski FA and Naiman JL. Nomal blood values in the newborn period. In: Hematologic problems in the Newborn. 2nd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders, 1972;1-30. [12] Nam R, Kang MS, Han JY, Lee EY, Kim SH. Reference values of cord blood and peripheral blood of neonate. Korean J Clin Pathol 1989;9: [13] NCCLS. How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory: Approved Guidelines. NCCLS document C28-A, 1995;

24 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 2 한국의제대혈이식과보관 : 11 년간의기증제대혈은행운영현황 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 양정윤ㆍ최기훈ㆍ김희정ㆍ임소진ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Cord Blood Banking and Transplantation in Korea: A 11 Years Experience of a Single Public Bank Jung Yun YangㆍKi Hoon ChoiㆍHee Jung KimㆍSo Jin Limㆍ Hye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Republic of Korea Background: Umbilical cord blood(ucb) has successfully used for transplantation to treat wide variety of disorders. Herein, we describe the experience generated during this period(november 2000-December 2011) in a single public cord blood bank in Korea. Method: Good manufacturing practice and standard operating procedures were used to address donor selection as well as UCB collection, processing, cryopreservation and release. Total nucleated cells(tncs), cellular viability, CD34+ cells were determined, and infectious diseases screening test, sterility test, and HLA typing for UCB units were done. Results: 8,434 UCB units were cryopreserved in 11 years. The volume of UCB units was 102.2±20.2ml. The number of TNCs after processing was 8.16±2.62x ±0.16% of the TNCs were CD34+ cells. Based mainly in HLA and nucleated cell content, 419 UCB units were released for transplantation. Conclusion: A public UCB bank was successfully established in Korea; collection and processing of UCB units should be optimized in order to gain maximum volume and cell count. Key words : Umbilical cord blood, transplantation, cryopreservation I. 서론 1988년세계최초로제대혈이동종조혈모세포이식에성공적으로사용하였다. 이환자는판코니빈혈을앓고있는 5세의남아로, 환자의여동생출생시제대혈을채취및처리하여냉동보관하였으며, 환자와의주조직적합성항원이일치함을확인한뒤이식을시행하였다 [1]. 국내에서는 1999년재발된급성혼합형백혈병환자에게동생의냉동보관제대혈을이식하여처음으로성공하였으며, 그이후부터간헐적으로제대혈이식이이루어졌으나 2003년 1월부터제대혈이식이소아에서의료보험급여인정을받게되면서증가하는추세이다

25 [18,19]. 현재제대혈유래동종조혈모세포이식은백혈병, 선천성면역결핍증, 골수부전증, 대사이상증후군을포함한다양한질환에효과적인치료방법으로쓰이고있다 [2]. 제대혈은혈액 면역학적기능을가진조혈모세포와전구세포를포함하고있고, 제대혈은행에서는조혈모세포성분을분리가공후냉동상태로저장하였다가이식을필요로하는시점에서해동하여사용할수있다. 또한, 조혈모세포이식에사용하는제대혈은이식편대숙주병 (graftversus-host disease,gvhd) 의발병이낮아 HLA 1 2개가불일치해도이식이가능하며, 미리세포를분리하여조직적합항원 (Human Leukocyte antigen,hla) 검사완료후냉동상태로저장하기때문에 HLA가일치하는공여자를찾기위한시간도필요하지않다. 제대혈은행은산모로부터기증받은제대혈에서조혈모세포를보관한후저장하였다가향후조직적합성이일치하는환자의이식을위해사용하는기증은행과태어날아이의보호자에의해보관의뢰계약을하여아이본인또는아이와조직적합항원 (HLA) 이부분또는완전일치하는가족이사용하기위한가족은행의두가지형태로운영한다. 최초의기증제대혈은행은 1993년 Rubinstein 등이설립한 New York Blood Center이다 [3]. 한국에서는 2011년관련법 ( 제대혈관리및연구에관한법률 ) 의허가를받은 17개의제대혈은행이있으며, 이중가족제대혈은행만운영하는기관, 기증제대혈은행만운영하는기관, 두가지형태모두운영하는기관이있다. 2000년설립한본제대혈은행은기증은행과가족은행두가지형태의은행을모두운영하고있다. 본내용에서는기증제대혈은행에서의제대혈보관과이식에관한경험을기술하고자한다. II. 대상및방법 1. 대상 2000년 11월 6일부터 2011년 12월 31일까지메디포스트 ( 주 ) 기증제대혈은행에제대혈기증을서면으로동의한산모로부터채취한제대혈중저장에적합한제대혈 8,434단위를대상으로하였다. 2. 방법 1) 채취기증동의서에자발적으로동의및서명한산모에게서출산시분만을담당한산부인과의사가태아만출직후태반이나오기전에제대를결찰하고항응고제 CPDA(citrate-phosphatedextrose-adenin)-1을포함한채취백에채취절차에따라제대혈을채취하였으며, 채취된제대혈은운송담당자에의해온도 (4-25 ) 를유지하면서기증동의서및채취기록문서와같이제대혈은행으로운반하였다. 2) 검사기증된제대혈은일차적으로산모의의학병력기록과제대혈채취기록를검토한후제대혈은행표준업무지침 ( 보건복지부, ) 과제대혈관리및연구에관한법률 ( 보건복지부, ) 에부합한검사를시행하였다. 혈액량은채취백의무게를제외한혈액량과항응고제 (CPDA-1) 양을측정한후, 1mL를채취하여처리전세포수와세포생존도를검사하였다. 제대혈은행표준업무지침에따라처리한농축제대혈 (concentrated leukocyte rich plasma, CLRP) 0.5mL에서는처리후총유핵세포수 (total nucleated cells:tncs),cd34 양성세포

26 수 ( 조혈모세포양성표지자 ) 를검사하였다. 동결보존제첨가후냉동직전소량의혈액을채취하여처리후세포생존도를검사하였다. (1) 세포생존도검사 : 0.4% Tryphan blue dye exclusion법 (Tryphan blue solution,sigm A) 으로시행하였고, 검사자간오차를줄이기위해한검체에두명이상교차확인하여평균값으로나타내었다. (2) 총유핵세포수 (Total nucleated cell, TNC): 자동혈액분석기 SYSMEX KX-21(Sys mex, Kobe, Japan) 과 ADVIA 2120(SIMENS Healthcare, USA) 를이용하여가공처리후의백혈구수를확인하였다. (3) CD34 양성세포수 (CD34+ cells) 검사 : 처리후농축제대혈의 CD34 양성세포수를유세포분석기 FACSCalibur(Becton Dickinson, USA) 를이용하여확인하였다. 검사는 ISHAG 방법에따라 FITC-CD45 단클론항체 (Becton Dickinson, USA) 로백혈구분획을 gating하고 PE-CD34 단클론항체 (Becton Dickinson, USA) 로 CD34 양성세포수를산정하였다. (4) 조직적합성항원검사 (HLA Typing): high resolution PCR-SSOP 방법으로 INNO-L ipa Kit(INNOGENETICS, Belgium) 와 Dynal Kti(Biotech, UK) 의시약과분석프로그램을사용하였다. (5) 혈액형검사 : anti-a(murine IgM monoclonal,millipore,uk), anti-b(murine IgM mon oclonal,millipore,uk), anti-d(human IgG/IgM monoclonal,uk) 로시행하였으며처리전혈액과처리후제거된농축적혈구를대상으로검사하였다. (6) 미생물배양검사 (Sterility test): 분리후제거된혈장을호기성혈액배양용기 (Thi oglycollate broth,tsb,komed, 한국 ) 와혐기성혈액배양용기 (Trypticase soy broth: THIO,KOMED, 한국 ) 에각각 2mL씩분주하여 37 배양기 (JEIOTEC, 한국 ) 에서 7일간배양후, 맹검배양 (Blind culture) 을시행하여균의유무를확인하였다. 이검사는제대혈채취시와운송, 처리과정중의혈액오염을확인하기위함이다. (7) 감염성질환검사 : 제대혈의혈장과제대혈과함께입고된산모혈액으로 C형간염검사 (anti-hcv), B형간염검사 (HBs Ag), 선천성면역결핍바이러스검사 (anti-hiv ty pe 1/2), 매독검사 (Treponemal test,tpha), 거대세포바이러스 (Cytomegalo virus,anti -CMV IgM) 검사, 인체T림프영양성바이러스 (Human T-lymphotropic virus,anti-htl V type1/2) 를시행하였다. 상기검사중 HLA Typing 검사와감염성질환검사는 랩지노믹스검사센터연구소에수탁을의뢰하여시행하였다. 3) 가공외부의오염물질혼입을방지하기위해혈액백외부를소독하고백의파손여부를확인한후, 채취량을측정하였다. 최초세포상태를확인하기위해혈액 1mL을채취하고, 채혈량 1:4의비율로혈장증량제인 hetastarch(hes,pentaspan, 제일약품, 한국 ) 를혈액백에첨가하였다. 혈장증량제와혈액을혼합한후, 원심분리장비 (Sorvall RC3C+, Kendro Laboratory Products,USA) 와분리기 (Auto volume expressor, Thermogenesis, USA) 를사용하여적혈구와혈장을제거하고조혈모세포가포함된농축제대혈층 (concentrated leukocyte rich plasma, CLRP) 20mL을동결보존제 5mL과함께냉동백 (ThermoGenesis Corporation& Pall Corporation,USA) 으로옮겼다. 혈액분리와제거작업을위한혈액의이동은 Transfer bag set(thermogenesis Corporation& Pall Corporation,USA) 를사용하여무균적으로시행하였

27 다. 50% dimethyl sulfoxide(dmso, Cryosev, Bioniche Teo., Inverin, Co.Galway, Ireland) 와 dextran 40( 대한약품공업, 한국 ) 를포함한동결보존제는가공처리한농축제대혈에실린지펌프 (Syring pump, KD Scientific,USA) 를사용하여지정한속도를주입하였고, 최종 DMSO 의농도는 10% 이었다 [3]. 냉동백은밀봉하여오염과충격을방지하기위해캐니스터에넣고자동냉각장치인 CRF(controlled-rate freezer, Thermo Scientific CryoMed Freezer, USA) 를사용하여냉각하였다. 냉각된혈액은액체질소를담은초저온냉동보관 Tank(MVE, MVE-Chart, USA) 에 -196 로장기간저장하였다. 4) 이식가공처리와검사의과정에서일탈이발생하지않고, 제대혈은행표준업무지침과제대혈관리및연구에관한법률기준을준수한제대혈의모든검사결과와정보는국내외각이식센터의전문의가조회및검색할수있도록한국조혈모세포은행협회 (Korea Marrow Donor Program,KMDP) 또는질병관리본부장기이식관리센터 (Korea Network for Organ Sharing, KONOS) 의검색프로그램에등록하였다. 이식센터에서는환자와 HLA가주조직복합체수준에서 A,B,DR이일치하거나부분일치하는제대혈을선정하여제대혈은행으로정보확인을요청하고, 제대혈은행은냉동보관중인제대혈의 segment part로확인검사를시행하였다. 이식이확정되면일정에맞춰이식센터로제대혈을온도추적장치가부착된이동용운송용기에넣어 -196 의온도를유지하여환자에게제공하였다. 2001년부터 2011년까지본제대혈은행에서제대혈이식을수행한환자를대상으로이식세포수, 질환별, HLA 일치율별, 연도별현황등을조사하였다. III. 결과 1) 가공및검사채취한혈액량은 102.2±20.2ml(range, ), 가공처리후총유핵세포수는 8.16± x10 8 /unit(range, ) 이었다. 냉동전 CD34 양성세포수는 2.24±1.84x10 6 / unit(range, ) 이고, CD34 양성세포비율은 0.28±0.16%(range, ) 이었다. 가공전세포의생존도는 96.7±2.1%(range, ), 냉동전동결보존제첨가한세포의생존도는 85.8±3. 8%(range, ) 으로나타났다 (Table 1). Table 1. 채취량과세포수, 세포생존도검사결과 Mean(Range) SD Volume collected( 70ml), ml 102.2( ) 20.2 TNCs after processing, x10 8 /unit 8.16( ) 2.62 CD34+cells, x10 6 /unit 2.24( ) 1.84 Rate of CD34+/CD45+ cells,% 0.28( ) 0.16 Cells viability before processing,% 96.7( ) 2.1 Cells viability after processing(add DMSO),% 85.8( ) 3.8 본제대혈은행에서의 HLA-A는총 17alleles, HLA-B는총 39alleles, HLA-DRB1은총 14 alleles로확인하였다. 대부분의빈도는 A*02, A*24, A*33, A*11, A*26, B*44, B*62,

28 B*51, B*61, B*58, B*35, B*54, DRB1*04, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*08, DRB1*09, DRB1*14, DRB1*12, DRB1*01, DRB1*07를보였다 (Table 2). Table 2. HLA 유전자빈도 HLA-A* % HLA-B* % HLA-DRB1* % 02:XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX :XX ;XX :XX :XX :XX :XX :XX ,053 단위의제대혈중미생물배양검사를시행하여 0.77%(70/9,053) 의세균검출률을보였다. 감염질환검사는 0.07%(6/9,053) 의양성율을나타냈다. 감염검사항목별로는 HBs Ag 양성 0%(0/9,053), anti-hcv 양성 0.02%(2/9,053), anti-hiv1/2 양성 0%(0/9,053), TPHA 양성 0.02%(2/9,053), CMV IgM 양성 0.02%(2/9,053) 이었다. 감염질환양성제대혈은산모의산전혈액에서도모두양성의결과를보였다. 2) 이식 2001년 3월 14일부터 2011년 12월 29일까지총 309명의환자에게 419단위의제대혈을이식하였다. 이중성인 51명에게제대혈 72단위, 소아 258명에게 347단위를이식하였으며, 냉동보관된제대혈중 4.97%(419/8,434) 를이식에사용하였다. 이식환자의체중은 31.7±20.12Kg(range, ) 이었고, 이식한제대혈의총유핵세포수는 10.37x10 8 ±3.70/ unit(range, ), CD34 양성세포수는 4.23X10 6 ±2.92/unit(range, ) 을나타냈다 (Table 3). 이식시주입한제대혈의총유핵세포수는평균 3.27x10 7 /Kg, CD34양성세포수는평균 1.33x10 5 /Kg를나타냈다. Table 3. 제대혈이식대상환자의체중과세포수 Mean(Range) SD 체중, Kg 31.7( ) TNCs, x10 8 /unit 10.37( ) 3.70 CD34+cells, x10 6 /unit 4.23( ) 2.92 국내이식센터에 415단위, 국외이식센터에 4단위를불출하였고국외이식센터로는미국, 스웨덴, 호주, 캐나다로각국가별이식적합절차에따라시행하였다. 제대혈조혈모세포이식대상질환은백혈병이 81.2%(251/309), Aplastic anemia를비롯한빈혈이 7.4%(23/309) 이며골수이형성증후군, 림프조직구증식증, 골석화증, Wiskott

29 Aldrich 증후군, 중증복합면역결핍증을비롯한기타질환이 11.3%(35/309) 를나타냈다 (Table 4). Table 4. 제대혈조혈모세포이식환자질환분포대상질환 환자 ( 명 ) % 급성골수성백혈병 (AML, ANLL) 급성림프구성백혈병 (ALL) 연소성골수단구성백혈병 (JMML) 만성골수성백혈병 (CML) 기타백혈병 (Infantile leukemia등 ) Anemia(aplastic, fanconi, congenital dyserythropoietic) 골수이형성증후군, 림프조직구증식증, 골석화증 Wiskott-Aldrich syndrome, Adreno-leukodystrophy 증증복합면역결핍증,ChronicEBVinfection,congenital Neutropenia, Krabbe disease, Neuroblastoma 등 Total 조혈모세포이식을시행한제대혈과환자와의 HLA 일치율의분포는완전일치 8.1%(34/419), 1개불일치 65.8%(276/419), 2개불일치 25.1%(105/419), 3개불일치 0.96%(4/419) 를보였다. 연도별제대혈이식은 2001년 13단위, 2002년 10단위, 2003년 27단위, 2004년 52단위, 2005년 58단위, 2006년 96단위, 2007년 60단위, 2008년 40단위, 2009년 33단위, 2010년 14단위, 2011년 16단위를시행하였다 (Fig. 1). Fig. 1. 제대혈연도별이식사례

30 IV. 고찰 제대혈은다양한유전, 혈액, 면역, 대사, 종양질환의치료를위한조혈모세포와전구세포를포함하고있는임상적으로유용한자원이다 [4-6]. 골수나 PBSC(Peripheral Blood Stem Cell) 에비해제대혈의가장큰장점은조혈모세포이식시제대혈은행에서제대혈을즉시공급받을수있고, 이식으로인한이식편대숙주병 (Graft-versus-host-disease,GVHD) 이상대적으로낮다는것이다 [7-8]. 이러한이유로세계의각지역에서제대혈을가공하여동결보관하는제대혈은행을운영하고있다. 우리나라는 1997년삼성서울병원과가톨릭대학교에기증제대혈은행을설립하였고, 본은행은 2000년설립하여기증자의조건을제대혈은행표준업무지침 ( 보건복지부, ) 과제대혈관리및연구에관한법률 ( 보건복지부, ) 에준수하여선정하였다 [9,18]. 본은행에보관중인총유핵세포수는 8.16±2.62x10 8 으로다른나라에비해낮은수치를보이며이는세포수득률이더높은자동분리장비를사용하기때문으로사료된다. 동결보존제를첨가한세포의생존도는 85.8±3.8% 으로이식적합한수치 ( 80%) 이며, 제대혈내세균배양검사에서의 0.77% 의오염율은외국제대혈은행의세균오염율보다훨씬낮은수치를보인다. 상기결과는본은행이분리가공에적합한시설과안정된기술로제대혈은행을운영하고있음을증명한다 [11]. 제대혈의조직적합성을분석한결과 HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 의유전자빈도는이미보고된한국인의유전자빈도와일치하였다 [16-17]. 본은행은 2010년까지국내제대혈이식의 77.8%(388/499) 를수행하였고 [15], 보관된총 8,434단위의제대혈중 419단위가환자이식을위해사용하였다. 2006년이후로본은행의제대혈이식이감소하기시작한것은이시점에설립된기증은행인서울특별시립보라매병원제대혈은행영향때문일것으로생각한다. 10년동안본은행제대혈이식사용율은 4.97% 로바르셀로나제대혈은행 (4.67%) 과비슷한수치를, 뉴욕제대혈은행 (6.59%) 과동경제대혈은행 (6.21%) 보다는낮은사용율을보인다 [12]. 소아에서 HLA가 1 2개불일치한제대혈을이식받은경우에골수이식을받은경우보다생착은느리지만대부분의환자에서완전한조혈기능을회복하게된다는보고가있었다 [20,21]. 반면, 성인에서는이식에필요한총유핵세포수의상대적부족으로인하여많은환자들에게적용되지못하고있으며, 본은행의결과도이식환자의 82.8% 가소아였으며, 대상질환은백혈병이 81.2% 를차지하였다. 그러나혈액종양질환이외의골수이형성증후군을비롯한다른대사및유전질환에제대혈이식을시행하는것으로보아대상질환의범위가확대되고있다고볼수있다. 제대혈이식의치료성적을좌우하는데는주입되는세포수가가장중요한인자이며, 세포수가많게되면 HLA 불일치를일부극복할수도있다 [18]. 많은연구자들이성공적인제대혈이식을위한최소한의주입총유핵세포수로서 3.0x10 7 /Kg, CD34 양성세포수는최소한 1x10 5 /Kg가필요하다고한다 [18,21]. 본은행의이식시주입하는총유핵세포수는 3.27x10 7 /Kg이며, CD34 양성세포수는 1.33x10 5 /Kg으로이식시충분한세포가환자에게투여되었다고사료된다. 최근의학의발전으로제대혈을이용한난치병치료에많은진전을보이고있다. 이와같은제대혈이질병치료에효과적으로사용되기위해서는냉동보관되는제대혈에대한품질관리가우선기반이되어야한다. 제대혈의품질은분리방법, 절차, 저장온도및관리에영향을받으며이에본은행에서는 closed system과적혈구와혈장의양을줄이는방법을이용하여실용성과효율성, 비용면에서도유용하게운영하고있다 [10]. 이분리, 저장방법은본제대혈은행

31 설립시국내소개된이후타제대혈은행에서도동일한방법으로처리, 보관하고있으며제대혈채취및분리방법을표준화하였다. 2011년 7월보건복지부에서는제대혈과제대혈은행의품질관리에대한법적근거를마련하기위해 제대혈관리및연구에관한법률 을제정하여시행하였다. 이는국가적인제대혈은행에대한관리와규제로인해조혈모세포이식을비롯한세포치료제로사용할수있는제대혈에대한높은수준의품질관리를요구한다. 본은행은관련법에서제시한품질관리수준이상으로현재운영하고있으며, 이로인해환자의질병치료에제대혈을효과적으로사용할수있고제대혈은행에대한높은신뢰가생길수있기를기대한다. 참고문헌 [1] Hurley CK, Raffoux C: World Marrow Donor Association:international standards for unrelated hematopoietic stem cell donor registries. Bone Marrow Transplant. 2004;34: [2] Hurley CK, Foeken L, Horowitz M,Lindberg B, McGregor M, Sacchi N, WMDA Accr editation and Regulatory Committees:Standards, regulations and accreditation for regi stries involved in the worldwide exchange of hematopoietic stem cell donors and pro ducts. Bone Marrow Transplant. 2010; [3] Rubinstein P, Dobrila L, Richard E, Rosenfield RE, Adamson JW, Migliaccio G, Migli accio AR, Taylor PE, Stevens CE:Processing and cryopreservation of placental/umbili cal cord blood for unrelated bone marrow reconstitution. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92: [4] Rocha V, Cornish J, Siecers EL, Flipovich A, Locatelli F, Peters C, Remberger M,Mi chel G, Arcese W, Dallorso S, Tiedemann K, Busca A, Chan KW, Kato S, Ortega J, Vowels M, Zander A, Souillet G, Oakill A, Woolfrey A, Pay AL, Green A, Garnier F, Ionescu I, Gluckman E: Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and u mbilical cord blood transplants in children with acute leukemia. Blood. 2001; [5] Smith FO, Thomson BG: Umbilical cord blood collection, banking, and transplantatio n:current status and issues relevant to perinatal caregivers. Birth. 2000;27: [6] Ballen KK:New trends in umbilical cord blood transplantation.blood. 2005;105: [7] Gluckman E: Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplan tation. Exp Hematol. 2000;28: [8] Wadlow RC, Porter DL: Umbilical cord blood transplantation:where do we stand? Blood Marrow Transplant. 2002;8: [9] Nakagawa R, Watanabe T, Kawano Y, Kanai S, Suzuya H, Kaneko M, Watanabe H, Okamoto Y, Kuroda Y, Nakayama T, Chugoku-Shikoku Cord Blood Bank: Analysis o f maternal and neonatal factors that influence the nucleated and CD34+ cell yield for cord blood banking. Transfusion. 2004;44: [10] Hongyou Yang, Acker JP, Abley D, McGann LE, Akabutu J: High efficiency volume

32 reduction of cord blood using pentastarch. Bone Marrow Transplant. 2001;27: [11] Jinhui L, Ji H, Shu C, Fei Q, Fang W, Gang X, Faming Z, Hangjun L, Lixing Y: C ord blood banking and transplantation in china: a ten years experience of single publ ic bank. Tranfus Med Hematherapy. 2012;39: [12] Guerra-Marquex A, Novelo-Garza B, Malagon-Martinez A, Limon-Flores A, Luna- Bautista F, Juan-Shum L, Montero-Ponce I, Sanchez-Valle E, Penaflor K, Velez-R uelas MA, Romero-Juarez Y, Mayani H: Cord blood banking and transplantation at the Mexican Institute of Social Security: the first 5 years. Transfusion. 2011;51: [13] Yang H, Loutfy MR, Mayerhofer S, Shuen P : Factors affecting banking quality of umbilical cord blood for transplantation. Transfusion. 2011;51: [14] Lauber S, Latta M Kluter H, Muller-Steinhardt M: The Mannheim Cord Blood Ban k: experiences and perspectives for the future. Transfus Med Hemother. 2010;37: [15] Y-H Lee, Y-H Kwon, K-J Hwang, H-J Jun, M-A Lee, H-I Jang, J-H Nah, H-H Koo, T-J Hwang: Analysis of stored and transplanted cord blood units from Korea CORD: reappraisal of banking guidelines and selection strategy; Transfusion May 21. doi: /j x. [16] 임영애, 곽연식 : 한국인의 HLA-DQB1 유전자빈도와 DRB1과의연관성조사. Koean J Clin Pathol. 1999;19: [17] 황상현, 오흥범, 양진혁, 권오중, 신은순 : 한국인의 HLA-A,-B,-C 대립유전자와일배체형분포. Korea J Lab Med. 2004; 24: [18] Young-Ho Lee: Cord blood- Current status and perspective. Korea J Hematol ;42: [19] Lee YH, Cho NC, Je KH, et al. Successful sibling cord blood stem cell transplantati on for relapsed acute mixed lineage leukemia. Korean J Hematol. 1999;34: [20] Michel G, Rocha V, Chevret S, et al. Unrelated cord blood transplantation for childh ood acute myeloid leukemia: a Eurocord Group analysis. Blood. 2003;102: [21] Wagner JE, Baker JN, DeFor TE, et al. Transplatation of unrelated donor umbilical cord blood in 102 patients with malignant and nonmalignant diseases:influence of C D34cell dose and HLA disparity on treatment-related mortality and survival. Blood. 2002;100:

33 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 3 냉동보관된제대혈조혈모세포의냉동전과해동후의보관기간별검사결과분석 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소임소진ㆍ김희정ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Analysis of test results before freezing and after thawing hematopoietic cell from umbilical cord blood units according to cryopreserved period So Jin LimㆍHee Jung KimㆍJung Yun YangㆍHye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Korea The aim of this study was to evaluate the quality of long-term cryopreserved umbilical cord blood(ucb) units for hematopoietic cell transplantation. In this study, we used all 661 UCB samples which were cryopreserved from less than 1year to more than 10years. We compared how the test results after thawing had changed according to storage duration. The recovery of the number of total nucleated cells(tnc), hematopoietic progenitor cells(cd34+ cells), and the percentage of viable cells of UCB units cryopreserved for 10years for hematopoietic cell transplantation were examined. The mean level of the recovery rate was obtained TNC(100.3 ± 12.7 x10 8 /unit), CD34+ cells(99.3 ± x10 6 /unit) and cell viability(100.3 ± 6.8%). These results indicate that long-term cryopreservation does not affect the quality of CB units for hematopoietic cell transplantation. Key words : Umbilical cord blood, Cryopreservation, Hematopoietic cell transplantation. Ⅰ. 서론 자가재생능력과모든조직세포로분화할수있는잠재력을가진줄기세포를이용한세포치료는신경계질환, 심혈관계및내분비질환, 골및관절질환, 자가면역질환, 암, 요실금, 폐질환, 탈모등의거의모든질환에서폭넓게적용되며희귀병및만성질환치료에까지재생의학으로서의핵심으로자리잡고있다. 성체줄기세포로구분되는조혈모세포는자가복제및분화를통해백혈구, 적혈구및혈소판등의혈액세포를만들어내는세포이다. 조혈모세포의공급원으로인정되고있는제대혈조혈모세포또한국내외에서많은이식이이루어지면서주목받고있다 [1-3,5]. 국내에서는 1999년재발된급성혼합형백혈병환자에게동생의냉동보관된제대혈이식하여처음으로성공하면서 [4] 2010년까지 499단위의이식이이루어졌다

34 [5]. 제대혈의조혈모세포뿐만아니라다양한줄기세포가포함된연구 [6] 가보고되면서국내외에서제대혈보관에대한관심이높다. 현재와미래에중요한자원이되는제대혈이국내뿐만아니라세계적으로도 10년이상장기간보관되고있다. 그러므로냉동보관된제대혈의품질유지에대한보고가필요하다. 본연구에서는냉동보관기간이 1년미만인제대혈부터 10년이상까지제대혈의냉동전과해동후의검사결과를분석하였다. Ⅱ. 대상및방법 1. 대상본연구는 2011년 7월제대혈관리및연구에따른법률이시행되고보건복지부허가를받은메디포스트 제대혈은행에서실시되었다. 2000년 11월부터 2009년 11월까지메디포스트 제대혈은행에기증의뢰되어보관처리완료된제대혈 661단위를대상으로하였으며대상제대혈은기증동의서에자발적으로동의및서명한산모로부터채취되었다. 해동된제대혈의선정은이식센터에서한국조혈모세포협회 (KMDP) 또는질병관리본부장기이식센터 (KONOS) 의검색프로그램을이용하여확인검사를요청한제대혈로시행하였다. 본연구는제대혈냉동전과해동후의유핵세포수 (TNC, total nucleated cell), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells), 세포생존율검사결과를보관기간별로분류하여분석하였다. 2. 방법 1) 제대혈채취분만을담당한산부인과의사가태아와탯줄이완전히만출된이후에탯줄을절단한다음태반이만출되기이전에탯줄정맥에주사하여항응고제 (citrate phosphate dextrose adenine, CPDA-1) 가포함된채취백에제대혈을채취하였다. 2) 제대혈가공제대혈보관처리법은적혈구혈장제거법으로 Rubinstein법 [7] 에의한것이다. 제대혈에적혈구침강제인 25% hydroxyethyl starch(hes, Pentaspan, 제일약품, 한국 ) 을첨가후첫번째원심분리하였다. Transfer/Freezing bag set(thermogenesis, USA) 와연결하여적혈구를제거한다음두번째원심분리를하였다. 혈장을제거하고최종적으로 20ml의제대혈농축인유핵세포 (CLRP, concentrated leukocyte-rich plasma) 를분리하였다. 3) 제대혈동결보관및해동확인검사분리된제대혈농축유핵세포에 20% dimethylsulfoxide(dmso, Cryoserv, BionichePharma, USA) 와 dextran40( 대한약품, 한국 ) 를혼합하여만들어진 10% 동결보존제 (DMSO/dextran) 5ml를천천히주입한다. 유핵세포의최종보관량은 25ml이며초저온온도에도견딜수있는재질로된 freezing bag(thermogenesis, USA) 에보관된다. Freezing bag은외부오염이나충격노출을방지하기위해 overwrap bag에넣은후, sealer(fujiimpulse, USA) 로 sealing 후알루미늄 canister에넣는다. Canister를냉동기 (CRF, controlled rate freezing, ThermoForma, USA) 에넣고냉동프로그램으로단계적으로 -90 까지온도를낮추어준다. 동결된제대혈농축유핵세포는 -196 의액체질소탱크 (liquid nitrogen tank) 에보관한다

35 냉동된제대혈의해동확인검사는 freezing bag 에연결되어있는 segment 로시행한다. 4) 총유핵세포수검사총유핵세포수 (TNC) 는자동혈구분석기인 Sysmex KX-21(Sysmex, Japan) 와 ADVIA 2120(Siemens, USA) 를이용하였다. 해동후의세포수검사는 segment의제대혈농축유핵세포를 5배로희석하여시행하였다. 회수율 = ( 해동후 TNC/ 냉동전 TNC) x 100 5) 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 검사제대혈농축유핵세포 100μl에 Mouse IgG1 PE(phycoerythrin), CD45 FITC(fluorescein isothiocyanate), CD34 PE로표지된단클론항체 (BD Biosciences, USA) 를각각 10μl씩혼합한후상온암소에 10분방치하고, 적혈구용해액 2ml를첨가하여다시상온암소에 15분방치한후원심분리하였다. 적혈구용해가완료된후 FACSFlow(BD Biosciences, USA) 2ml로원심분리하여세척한다. 고정완충액 (1% paraformaldehyde-pbs) 1ml로고정한후부유시켜유세포분석기 (FACSCalibur, Becton Dickinson, USA) 의 Cell Quest software로분석하였다. 분석된 Gated % 로세포의수를계산하였다 (Fig. 1). CD34+ cells = (Gated %/100) x WBC 회수율 = ( 해동후 CD34+ cells/ 냉동전 CD34+ cells) x 100 Fig. 1. The characteristics of the HCB-MNCs. The CD34, CD45 and Mouse IgG maker used for the FACSCalibur data of HCB-MNCs. 6) 세포생존율검사 Trypan blue dye-exclusion 법으로 trypan blue용액 (Sigma, USA) 과제대혈농축유핵세포를 1:1 로희석후염색된세포를죽은세포와구분하여전체세포수에대한생존세포를계수하였다. 회수율 = ( 해동후세포생존율 / 냉동전세포생존율 ) x 100 7) 통계제대혈냉동전과해동후의총유핵세포수, 조혈모세포표지자양성세포수, 세포생존율검사결과는평균 ± 표준편차로나타내었다

36 Ⅲ. 결과 제대혈의냉동전과해동후총유핵세포수 (TNC), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 와세포생존율검사결과는보관기간별로각각 Table 1, Table 2와 Table 3에제시하였다. 제대혈의냉동전과해동후데이터를분석한결과총유핵세포수평균은각각 10.2 x10 8 /unit, 10.2 x10 8 /unit 이고평균회수율은 100.3% 이었다. 냉동전과해동후제대혈의 CD34+ cells 평균은각각 4.07 x10 6 /unit, 3.96 x10 6 /unit이고평균회수율은 99.3% 이었다. 냉동전과해동후제대혈의세포생존율는각각 82.6%, 82.9% 이고평균회수율은 100.3% 이었다 (Table 4). Table 1. Before freezing and after thawing TNC(x10 8 /unit) for cord blood units(mean ± SD) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year ± ± ± 12.5 < 2 year ± ± ± 15.0 < 3 year ± ± ± 15.0 < 4 year ± ± ± 11.1 < 5 year ± ± ± 9.9 < 6 year ± ± ± 10.4 < 7 year ± ± ± 12.6 < 8 year ± ± ± 10.2 < 9 year ± ± ± 15.0 < 10 year ± ± ± year ± ± ± 10.3 Table 2. Before freezing and after thawing CD34+ cells(x10 6 /unit) for cord blood units (mean±sd) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year ± ± ± < 2 year ± ± ± < 3 year ± ± ± < 4 year ± ± ± < 5 year ± ± ± < 6 year ± ± ± < 7 year ± ± ± < 8 year ± ± ± < 9 year ± ± ± < 10 year ± ± ± year ± ± ±

37 Table 3. Before freezing and after thawing cell viability(%) for cord blood units(mean ± SD) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year ± ± ± 5.4 < 2 year ± ± ± 8.2 < 3 year ± ± ± 6.2 < 4 year ± ± ± 6.8 < 5 year ± ± ± 7.4 < 6 year ± ± ± 5.8 < 7 year ± ± ± 6.3 < 8 year ± ± ± 5.1 < 9 year ± ± ± 3.7 < 10 year ± ± ± year ± ± ± 5.4 Table 4. Before freezing and after thawing data for cord blood units(mean ± SD) Before freezing After thawing Recovery(%) TNC(x10 8 /unit) 10.2 ± ± ± 12.7 CD34+ cells(x10 6 /unit) 4.07 ± ± ± Cell viability(%) 82.6 ± ± ± 6.8 Abbreviations: TNC, total nucleated cell Ⅳ. 고찰 제대혈에줄기세포가풍부하다는연구가보고되면서전세계적으로도제대혈에대한관심이높다. 1988년최초의제대혈이식이 [8] 이루어지면서골수이식을대체할조혈모세포공급원으로제대혈조혈모세포이식이활발히시행되고있다. 제대혈조혈모세포이식은제대혈을쉽게얻을수있으며공여자검색이신속히이루어질수있고이식편대숙주병이적게발생한다는장점 [9,10] 으로계속증가하고있다. 세계적으로도많은제대혈은행에서제대혈이보관되고있는데세계기증제대혈은행의네트워크인 NetCORD에 2010년 2월기준 200,000단위이상이보관된것으로등록되어있다 [5]. 국내에서는 2011년 6월기준기증제대혈 25,000단위이상이등록되어있다 [5]. 이와같이최초이식보고이후많은제대혈이 10년이상장기간보관되어지고있다. 따라서보관된제대혈의이식이시행될때는보관기간이오래된제대혈도사용되어진다. 제대혈이식적합여부를결정할때는총유핵세포수 (TNC), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells), 세포생존율등이중요한인자가된다 [5]. 본연구에서는제대혈보관기간 1년미만부터 10년이상까지를분류하여총유핵세포수, 조혈모세포표지자양성세포수및세포생존율의결과를제대혈냉동전과해동후로비교분석해보았다. 제대혈이식의치료성적을좌우하는데는총유핵세포수가가장중요한인자이며총유핵세포수가많으면조직적합성항원의불일치도극복할수있다 [6]. 제대혈의냉동전과해동후의총유핵세포수결과를비교했을때냉동후의감소된결과도있지만평균회수율은

38 냉동전총유핵세포수를유지하고있음을보여준다. 이러한결과는제대혈냉동전과해동후의총유핵세포수결과를보고한연구들과일치하는소견을보인것이다 [11-13 ]. 반면해동후의결과가높게나타난것은세포수검사를시행하는검사시료인 segment의검체량이적은점과희석배수가영향을미쳤을것으로사료된다. 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 또한제대혈이식에중요한지표로된다 [1 ]. CD34 세포표면항원은 BFU-E, CFU-GM, CFU-Meg, CFU-GEMM, CFU-Blast 등의전구세포표면에서표현되며, 미성숙원시세포에서최고로표현되고성숙함에따라점차감소한다 [15]. 제대혈내 CD34+ cells의빈도는성인의골수와비슷하며 [16] 이식후생착및예후에중요한영향을미치므로 CD34+ cells이충분해야한다 [17]. 본연구에서는제대혈의해동후에감소된결과도있지만평균회수율은냉동전과같이유지되고있음을확인할수있다. 그러나해동후의 CD34+ cells 결과가높게나타난것은 CD34+ cells의결과를계산할때세포수가반영되므로세포수에따른것이라고할수있겠다. CD34+ cells 또한세포수와같이해동확인검사를시행하는 segment의검사시료량이적어오차가발생할수있기때문으로사료된다. 연구보고에는본연구와비슷한결과인해동후 97% 가있다 [18]. 제대혈의세포생존율측정은냉동된제대혈의보관상태를잘반영하는요인이된다. 제대혈이장기간보관되면해동후세포생존율이감소된다고예상할수있겠지만 -196 의액체질소에완전히담겨져최적의조건으로보관된본연구의제대혈은평균세포생존율냉동전과비슷하게유지되었음을알수있다. 해동후결과가높게측정된값이있는것은 Trypan blue 염색법이신속하게측정되는장점이있으나수기로판독하므로검사자에따른주관적판독이라는점과해동후에는적혈구깨져백혈구가더잘보일수있다는점이있기때문으로생각된다. 이상의결과를종합하면제대혈보관기간이제대혈보관품질유지에영향을미치지않는것으로확인된다. 또한제대혈이식후자료분석에따르면평균 2.49년의냉동보관기간을기준으로무질병생존율의차이가없다는연구보고도있다 [19]. 냉동전과해동후의검사결과를발표한연구 [11-14,18,20] 는많지만본연구가다른점은보관기간별로분류하여분석한점과대단위를대상으로연구되었다는것이다. 보건복지부업무지침에의거하여제대혈품질관리가유지되고있음을증명하였으며향후 10년이상부터 20년, 30년된제대혈의연구발표도지속적으로이루어져야한다. 제대혈이식의치료성적에영향을줄수있는냉동된제대혈의품질유지로질병에효과적으로사용되어더욱제대혈이식이시행되기를기대한다. 참고문헌 [1] Wagner JE, Barker JN, DeFor TE, Baker KS, Blazar BR, Eide C, et al. Transplantation of unrelated donor umbilical cord blood in 102 patients with malignant and nonmalignant diseases: influence of CD34 cell dose and HLA disparity on treatment-related mortality and survival. Blood. 2002;100: [2] Laughlin MJ, Eapen M, Rubinstein P, Wagner JE, Zhang MJ, Champlin RE, et al. Outcomes after transplantation of cord blood or bone marrow from unrelated donors in adults with leukemia. N Engl J Med. 2004;351: [3] Rocha V, Labopin M, Sanz G, Arcese W, Schwerdtfeger R, Bosi A, et al. Transplants

39 of umbilical-cord blood or bone marrow from unrelated donors in adults with acute leukemia. N Engl J Med. 2004;351: [4] Lee YH, Cho NC, Je KH, et al. Successful sibling cord blood stem cell transplantation for relapsed acute mixed lineage leukemia. Korean J Hematol 1999;34: [5] Lee YH, Kwon YH, Hwang KJ, Jun HJ, Lee MA, Jang HI, et al. Analysis of stored and transplanted cord blood units from and KoreaCORD: reappraisal of banking guidelines and selection strategy. Transfusion 2012 May 21. [6] Young Ho Lee. Cord Blood-Current Status and Perspective. Korean J Hematol 2007;42: [7] Rubinstein P, Dobria L, Rosenfield RE, Adamson JW, Migliaccio G, Migliaccio AR, et al. Processing and cryopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92: [8] Gluckman E, Broxmeyer HA, Auerbach AD, et al. Hematopoetic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical cord blood from an HLA-identical sibling. N Engl J Med 1989;321: [9] Bradley MB, Cairo MS. Cord blood immunology and stem cell transplantation. Hum Immunol 2005;66; [10] Gluckman E, Rocha V. Cord blood transplant: strategy of alternative donor search. Semin Immun 2004;26: [11] Harris DT, Schumacher MJ, Rychlik S, Booth A, Acevedo A, Rubinstein P, et al. Collection, separation and cryopreservation of umbilical cord blood for use in transplantation. Bone Marrow Transplant. 1994;13: [12] Broxmeyer HE, Cooper S. High-efficiency recovery of immature haematopoietic progenitor cells with extensive proliferative capacity from human cord blood cryopreserved for 10 years. Clin Exp Immunol. 1997;107: [13] Kobylka P, Ivanyi P, Breur-Vriesendorp BS. Preservation of immunological and colony-forming capacities of long-term(15 years) cryopreserved cord blood cells. Transplantation. 1998;65: [14] Yamamoto S, Ikeda H, Toyama D, Hayashi M, Akiyama K, Suzuki M, Tanaka Y, Watanabe T, Fujimoto Y, Hosaki I, Nishihira H, Isoyama K. Quality of long-term cryopreserved umbilical cord blood units for hematopoietic cell transplantation. Int J Hematol ;93: [15] Mi Jung Lee. Bone marrow stem celltransplantation. Korean J Pediatr Hematol Oncol.1995;2: [16] Wagner JE. Umbilical cord blood stem cell transplantation. Am J Pediat Hemato onco. 1993;15: [17] David DF, Dianne EV, James CB. Donor marrow progenitors(cfu-mix,bfu-e and CFUGM) and haemopoietic engraftment following HLA matched sibling bone marrow transplantation. Luekemia Reserch. 1987;11: [18] Laroche V, McKenna DH, Moroff G, Schierman T, Kadidlo D, McCullough J. Cell loss and recovery in umbilical cord blood processing: a comparison of postthaw and

40 postwash samples. Transfusion. 2005;45: [19] Rocha V, Gluckman E on behalf of the Eurocord-Netcord registry. Analysis of risk factors affecting survival after UCBT in children and adults with haematological malignancy. The Proceedings of the 5th Annual International Umbilical Cord Blood Transplantation Symposium [20] Meyer TP, Hofmann B, Zaisserer J, Jacobs VR, Fuchs B, Rapp S, et al. Analysis and cryopreservation of hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood. Cytotherapy. 2006;8:

41 구연발표 Ⅰ 유전 ( 구연 1 ~ 2) 좌장 : 심문정교수

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43 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 유전 ) 1 FISH 검사전처리자동화장비 Xmatrx TM 와수기법의비교평가 세브란스병원진단검사의학과 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 배경 (Background) : 형광동소보합법 (fluorecence in situ hybridization, FISH) 은형광표지된 probe DNA 를표적 DNA와 hybridization을시행한후형광 signal로특정염색체및표적유전자의결실및위치를신속하게진단할수있는검사이다. 본원에서는 2008년 MetaSystem (Zeiss, Germany) 도입이후로 FISH image를자동으로 capture하고이를분석하여검사의자동화와표준화를시작하였다. 이후 FISH검사의전처리과정을자동화로수행하기위한일련의과정들이 ThermoBrite TM, VP 2000 등의반자동화장비를통하여시도되었다. 2011년 11월 Xmatrx TM (Abott, U.S.A) 를도입함으로 FISH 과정의 Pre hybridization step, Probe apply, Post hybridization step, Counter stain을전자동으로수행하고있고현재검사실에서유용하게사용하고있다. 이에 Xmatrx TM 를이용한 FISH 검사결과를수기법과비교평가하였다. 방법 (Methods) : 세브란스병원에 2011년11월에도입되어 2012년 10월현재까지사용하고있는 Xmatrx TM 의전반적인소개와유용성등을소개하고자한다. 2011년 11월부터 2012년 10월까지주로사용하는 20 probe (LSI probe, Abott, U.S.A) 별로최적화조건을설정하였고재현성검사를시행하였다. 또한수기법과 Xmatrx TM 의 Parallel test를시행해검사의상관성을평가하였다. 판정기준은 % CV값으로비교하였고허용 % CV는 5% 이내일때적합한것으로판정하였다. 결과 (Results) : 대부분의 probe에서최적화조건을설정하였고좋은재현성을보였다. Parallel test에서 % CV값은 5% 이내에들어적합하였다. 하지만 TP53 probe는 % CV값 5% 이상을보였고, RB1은 % CV값 5% 이내였으나재현성이떨어졌고, IGH/MAF는 split out 현상을보여더최적화의노력이요구된다. 고찰 (Discussion) : Xmatrx TM 는수기법과비교시좋은재현성과상관성을보였으나몇몇의 probe는최적화된조건을더설정할필요가있었다. Xmatrx TM 는현재검사실에서유용하게사용되고있으며 hands on time을줄여 throughput을증가시켰고결과에대한질향상과재현성의향상을가져왔다. Xmatrx TM 의사용은검사방법을표준화하고수기전처리과정에소요되는업무부담과기술적오류를감소시킬것으로판단되므로유용한검사장비로생각된다. 또한 slide마다각기다른조건을적용할수있으므로 solid tumor의조직이나양수같은다양한검체에도적용할수있으리라생각되며, m FISH나 FICTION등의다른기법에도다양하게적용할수있으리라기대한다

44 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 유전 ) 2 Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성 (The prognostic value of Acute leukemia profile test (Hemavision ) with leukemia patient) 서울아산병원진단검사의학과김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 배경 (Background) : Hemavision 은백혈병의특별한 subtype들을결정짓게하는 28개의다른 translocation이나 80개이상의 breakpoint나 splice variant들을포함한 chromosome rearrangement를 detect하기위한 Reverse trasnscription polymerase chain reaction(rt PCR) Test이다. 이에본연구는최근 2년간검사한환자들에한해서검출빈도와분포및임상적특성을분석하고자하였다. 방법 (Methods) : 2010년 7월부터 2012년 8월까지 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 로의뢰된 419명의 Bone Marrow 또는 Peripheral blood 533개를대상으로 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 를시행하였다. Acute leukemia profile test (Hemavision ) 검사방법은 RNA를추출하여 cdna합성을하여 Screening PCR을한다음, 2% Agarose gel로전기영동하여 band 확인후양성또는음성으로결과를내었다. Screening PCR에서음성이나온검체는음성으로최종결과를보고하였고, Screening PCR에서양성이나온검체는다시 Splitout PCR을시행하여동정하여보고하였다. 그리고이들의결과를분석해보았다. 결과 (Results) : 성별은남성이302예, 여성이 231예였고, 연령층은 6개월부터 91세까지였다. 진단명은 ALL이 130예, AML 이 396 예, MPAL 이 7예였다. ALL에서의양성빈도는 54.6% 로 BCR ABL재배열이가장많았고그중 25.0% 가 b3a2 또는 b2a2의 major재배열이었으며 minor 재배열이 72.0% 이었고 2예에서 major및 minor 재배열이공존함을보여주었다. 반면혼합형급성백혈병에서는 42.9% 에서 BCR ABL 재배열이관찰되었다. 급성골수성백혈병에서는의뢰된 396예중 127예에서양성반응을보였는데 (32.1%) 그중가장높은빈도를보이는유전형은 PML RARA재배열이었고 DEK NUP214, AML ETO 의순서이었다. 또한 MLL 재배열이 38예 (26.0%) 에서관찰되어불량한예후를보이는환자군에서의적극적인치료가가능하게되었다. MLL재배열은 MLL AF9이가장많았고 MLL AF6,MLL AF10,MLL ELL,MLL MLLT1의순서로나타났다. 고찰 (Discussion) : Acute leukemia profile test (Hemavision ) 는 multiplex RT PCR assay 로써골수진단시보다정확하고빠르게유전자재배열정보를제공하여환자의치료에적극적으로임할수있는중요한검사로사료되며빈도가높은재배열의경우정량 PCR로서최소잔존질병의추적검사로이용할수있겠다

45 구연발표 Ⅱ 수혈 ( 구연 3) 좌장 : 최범열고문

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47 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 수혈 ) 3 Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 양성식 배경 (Background) : 최근장기이식이필요한환자수에비하여이식할장기가절대적으로부족하여 ABO 부적합장기이식이적극시행되고있다. 특히최근면역억제약물의발달로인해수술후예후도좋아짐에따라과거에비해그시행빈도가늘어나고있는추세이다. 하지만, 수술후 ABO부적합장기이식의부작용으로면역기전에의한용혈성빈혈이생기기도하는데이를 Passenger Lymphocyte Syndrome( 이하 PLS) 이라한다. 본원에서이형간장기이식후 PLS증례가 2례가있어보고하는바이다. 방법 (Methods) : 환자의헤마토크리트, 혈색소, 빌리루빈검사등을하였으며, 환자의적혈구에서 Elution을통해공여자의혈액형항체를검출해냈다. 결과 (Results) : IgG, IgM, Complemet등이감작되어있었으며, 이형간장기이식 14일후 Hb 및 Hct가최저로떨어져전형적인 PLS증상을보였다. Donor의혈액형항체가검출되어환자의혈액형이아닌 O+RBC로교차시험을시행하여수혈하였으며, Therapeutic pheresis를통해공여자의 lymphocyte로부터만들어진혈액형항체의 titer를낮춰주어환자의상태가호전된것을확인하였다. 고찰 (Discussion) : ABO 불일치장기이식일경우지속적인용혈성빈혈에대한검사와직접항글로불린검사를시행하여야하며, 수술전공여자의비예기항체에대한검사도시행되어야할것이다. ABO 불일치장기이식후 7 14일후혈색소나헤마토크리트가감소하고, 빌리루빈이증가한다면 PLS를의심해봐야하며, 세밀한주의와검사가필요할것이다

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49 특강 Ⅰ 수혈연자 : 박경운 ( 서울의대검사의학교실 ) 좌장 : 김동찬학회장

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51 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

52 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

53 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

54 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

55 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

56 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

57 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

58 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

59 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

60 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

61 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

62 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 )

63 특강 Ⅱ 면허재신고등연자 : 이상호 ( 대한임상병리사협회총무이사 ) 좌장 : 이귀순학회장

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65 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 면허재신고등 ) 년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사이상호 급변하는의료환경변화와보건복지부의방침에따라우리협회도많은변화와개선이불가피한상황입니다. 2014년부터면허재신고제가의료기사전체로확대실시되고, 기사단체연합회를중심으로의료기사교육인증평가제도의정착및발전, 의료기사국가시험의수준향상, 전문의료기사자격시험및교육기관질관리등의료기사의질향상등의요구에부응하기위하여의료기사평가원 ( 의기평 ) 이설립인가를준비하고있고, 이의기평의산하기구로임상병리전문직의자율조정기구로의역할을수행하기위한임상병리사평가원설립을준비하고있습니다. 그동안큰변화없이정착화되어있던우리협회의보수교육규정도보건복지부지침에따라기본틀부터시작하여다방면의개정이실시될것이며또한사이버보수교육의강화로회원들에게보수교육의편리성과접근성뿐만아니라교육의내실을기하기위한노력이진행될예정입니다. 2013년한해는여러가지과도기적혼란과불편이예상되지만, 협회의노력과회원들의이해와적극적협조로변화에따른어려움들을함께극복해나갈수있으리라생각됩니다. 그동안회원들에게팽배되어있는불만과고충을해소하면서변화와혁신을이뤄내기위해서는현재의편안함에서벗어나혼란과불편을감수하지않고는변화할수없고, 해산의고통끝에출산의기쁨이오듯우리의노력과협력으로회원들이만족할수있는제도와규정으로자리잡을수있으리라확신합니다. 변화와혁신은큰그림을다시그리는것이아니라작은것부터, 나부터, 지금부터라는생각을하는것에서부터시작된다고할수있습니다. 그시작점에서있는제24대협회집행부에게힘과지혜와아낌없는격려를부탁드립니다

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67 특강 Ⅲ 혈액연자 : 장성수 ( 울산의대서울아산병원 ) 좌장 : 함천경고문

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69 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 혈액 ) 3 체액세포검사 울산의대서울아산병원 장성수 임상검사실에서체액의세포검사를시행하는체액의종류는주로뇌척수액, 체강액 ( 흉막액, 복막액, 심낭액 ), 활액등이다. 이러한체액은뇌척수액과활액등을제외하고는정상적으로아주소량의체액만이존재하게되며, 체액의증가는다양한병적인소견을나타낸다. 체액의화학검사뿐아니라세포수계산과감별계수는임상적으로매우중요하며, 체액내존재하는암세포등을구별하는것은매우어렵고, 중요한과정이다. 그중에서도체강액의경우임상검사실에가장많이의뢰되고다양한세포들이존재하기때문에세포의감별계수를정확히하는데어려움이있다. 여기서는주로체강액을중심으로정상소견과병적인소견, 감별해야할점을중심으로살펴보고자한다. 1. 체강의해부학체강내의기관들은장막 (serous membrane, serosa) 라고불리는얇은막으로둘러싸여있다. 기관쪽을둘러싸는막을장측막 (visceral layer), 체강의반대편을둘러싸는막을벽측막 (parietal layer) 이라고하며, 이양쪽의막은서로연결이되어있어서외부와는통하지않는폐쇄된공간을형성한다 ( 그림3 1). 흉강 (pleura, 폐 ), 복강 (peritoneum, 내장 ), 심낭 (pericardium, 심장 ) 은태생학적으로동일한기원 (mesenchymal embryonal layer) 을가지고있기때문에유사한해부학적구조를보인다. 장막은중피세포 (mesothelial cell) 라는납작한세포의단일층으로덮여있는데, 특별한질환이없는경우에는중피 (mesothelium) 의벽측막과장측막사이에는약간의윤활액만들어있다. 2. 체강내유출액장막사이의공간에공기나과량의액체가차는것은병적인과정이며, 특별한질환이없는경우에는약간의윤활액만들어있다. 체강내에병적으로공기가차는경우는위치에따라기흉 (pneumothorax, 흉강 ), 기복 (pneumoperitoneum, 복강 ), 심낭기종 (pneumopericardium, 심낭 ) 등이라하며, 액체가고인경우, 특히혈액이고인경우에각각혈흉 (hemothorax), 혈액복막 (hemoperitoneum), 심낭혈종 (hemopericardium) 이라한다. 특히복강내에유출액이차는경우를복수 (ascites) 라한다. 유출액은그성분에따라누출액 (transudate) 과삼출액 (exudate) 으로나눌수있다. 3. 유출액에서관찰되는비종양성세포 A. 중피세포 (mesothelial cells) B. 대식세포 (Macrophage) C. 혈구세포 D. 간세포

70 4. 기타관찰되는구조 A. 헤모시데린 B. 멜라닌 C. 담즙 D. 크리스탈 E. 섬유소응괴 5. 종양성세포 - 체강의유출액내에서는다양한종양성세포가관찰될수있다. - 정상적으로존재하는세포를정확히아는것이종양성세포를놓치지않는가장좋은방법이다

71 구연발표 Ⅲ 혈액 ( 구연 4 ~ 5) 좌장 : 변대훈고문

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73 혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 4 PFA-100의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A & B position 검사결과비교연구 고려대학교안산병원진단검사의학과박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 배경 (Background) : Platelet Function Analyzer 100(PFA 100, Dade Behring, Marburg, Germany) 은혈소판의기능중부착과응집정도를측정할수있는신속한측정장비로 1996 년처음출시되었고다음해에 FDA승인을받아혈소판기능이상측정을위해만들어진기계이다. 혈소판활성물질이코팅된 Cartrige Collagen/Epinephrine (Col/EPI), Collagen/ADP (Col/ADP) 를이용하여혈소판의기능을측정하는기기로수술전지혈기능이상검사방법, 아스피린저항성검사, 항혈소판제제의반응평가등임상적으로다양하게적용되고있다. 간편신속하고현장검사가가능하며비침습적이고중증혈소판장애에민감하다. 과거부정확했던 Bleeding time의대체검사로대두되고있다. 검사를시행하면서시약의단가가높아재검율을줄이고자하는목적으로 Error message(a E) 에대한연구를하였고 A & B 위치검사결과차이와 A & B Position 모두에서 300초이상이나온경우다른한쪽은대기상태로혈소판기능이감소되면서뭉치는경우가발생하지않을까하는의구심이생겨연구과제로선정하였다. 방법 (Methods) : 월까지고대안산병원을내원하여검사한환자총 10,956 명 ( 여 :5260, 남 :5696) 대상으로부적합검체 (Hematocrit <35%, Platelet <150*10 3 /ul) 도포함하여모두검사하였다. 1) Reportable error message (A, D, E) 와 Unreportable error message (B,C) 의적합성을위하여재검하여전 & 후를비교하였다. 2) A와 B Position에동시장착후결과값이 Prolong 된경우 B Position 검체를재검하였다. 단환자병력이나현재력에문제가없거나 Hct <35% & Platelet count가 150*10 3 /ul이하가아닌정상으로예상되는환자의검체는다시단독으로 A position에서재검을시행하여전, 후의결과값을비교하였다. 3) 통계처리는 SPSS 12.0을이용하여빈도율을포함한 Chi square를이용하였다. 또한카이제곱의기대빈도가작은경우검정의부정확결과를확인하기위하여 Fisher s exact test를이용하여양측검정을시행하고유의수준은 p <0.05로하였다. 결과 (Results) : 총 10,956건 (Normal 9,412건, Prolong 942건 ) 중 Reportable message A, D, E 중에서처음에 message A로나와재검후같은 message A로결과를보인검체는 145건으로전체의 78% 를차지하였고 D >A,D,E message로나온경우는 10건 (1.6%), 6건 (3.2%), 6건 (3.2%) 로나왔으며 E > A와 E로나온경우는 3건 (1.6%) 와 9건 (4.8%) 이었다. 동시장착한 A & B Position 모두에서 182초이상으로연장된 93건중 B Position 검체를재검하였을때정상으로나온결과가 16건 (17.2%), 비정상으로나온 sec는 14건 (15.1%), 300 sec은 63건 (67.7%) 으로유의한관련성을나타냈다 (p=0.001)