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1 한국어병학회지제 22 권제 1 호 (2009) J. Fish Pathol., 22(1):75 ~ 83 (2009) 2008 년우리나라연근해산어류에대한병원체모니터링 조미영 지보영 박경현 이창훈 이덕찬 김진우 박미선 박명애 국립수산과학원병리연구과, 제주수산연구소 Monitoring of fish pathogens in wild marine fish of Korean coastal offshore water in 2008 Mi Young Cho, Bo Young Jee, Gyeong Hyun Park, Chang Hoon Lee, Deok Chan Lee, Jin Woo Kim, Mi Seon Park and Myoung Ae Park Pathology Division, National Fisheries Research and Development Institute, Busan , Korea Jeju Fisheries Research Institute, NFRDI, Jeju Special Self-Governing Province , Korea Disease surveillance was performed to monitor the prevalence of fish pathogens in wild marine fish caught in coastal offshore water from February to October in A total of 401 fish samples were collected at set net or fish market at landing port on the coast of Pohang, Geoje, Yeosu and Jeju. In this study, 17 kinds of fish pathogens were isolated from 152 fish samples. The detection rates of parasites, bacteria or viruses were 21.4%, 17.0% and 2.7%, respectively. The detected parasites were Scutica, Trichodina, Cryptocaryon, Dactylogyrus, Microcotyle, Benedenia, Bivagina, Heteraxin, Caligus, Epistylis and nematode. The dominant bacterial pathogens were Vibrio, Streptococcus, Photobacterium and Psuedomonas. Red sea bream iridovirus (RSIV) and lymphocystis disease virus (LDV) were detected in 6 species of fish virus examined in this study. The detection rates of fish pathogens from Scorpaenidae, Monacanthidae, Pleuronectidae, Sparidae and Carangidae investigated over 30 samples were 59.2%, 48.4%, 34.2%, 30.6% and 18.2%, respectively. Key words: Monitoring, Wild marine fish, Bacteria, Parasite, Virus, Korea, Coastal offshore water 자연수계에서식하는어류군집이수산동물 의질병에있어제 2 의저장소 (reservoir) 가될 수있다는인식이증가하고있어자연산어류의질병에대한연구가차츰증가하고있다 (Mayers and Winton, 1995; Dixon et al., 1997; Betts and Stone, 2000). 자연상태의어류에서질병이발생할가능성이매우희박하다하더라도, 자연산어류를실험적으로다양한병원체에노출시켰을때대부분의자연산어류가감수성이있는것으로보고되고있으므로 (Bucke, 1980), 동일해역내에존재하는양식어류와자연산어류가감수 Corresponding Author : Myoung Ae Park, Tel : Fax : , mapark@nfrdi.go.kr 성이있는질병의감염원에동시에노출될경우두집단이서로에게질병원의제공자로서작용할수도있다 ( 조등, 2008). 우리나라에서도자연산어류의질병감염에대한보고가점차증가하고있으며, 양식어류에서질병을야기하는일부병원체가자연산어류에서도검출되는것으로보고되고있다 ( 김등, 2003; 김과박, 2004; 이등, 2007a&b; 조등, 2008). 본연구에서는자연산어류와양식어류질병의상관관계를구명하기위한기초자료를마련 75
2 76 조미영 지보영 박경현 이창훈 이덕찬 김진우 박미선 박명애 하고자 2007 년부터실시하고있는연근해산어 류의질병에대한지속적인조사의일환으로서 2008년한해동안우리나라연안에서서식하는자연산어류를대상으로양식어류에서분리되는주요병원체의검출률을조사하였다. 재료및방법 2008년 2월부터 10월까지우리나라동 남해 제주연안에서식하는자연산어류를대상으로기생충, 세균및바이러스의검출유무를조사하였다. 해역별로동해안은포항시양포면, 남해안은거제도능포및오송해역, 여수시삼산면거문도해역, 제주연안은서귀포시위미해역을대상으로하였으며, 동해안시료는공동 어장에서판매되는어류를직접구입하여조사하였고, 남해안시료는거제와제주에서정치망에포획되는어류를구입하였으며, 여수에서는자망및양망으로포획되는어류를구입하여조사하였다. Table 1. Oligonucleotide primers used in PCR amplification Primer Nucleotide sequence PCR condition MBV F- GCACCACGAAGGTACGAAAT R-GTACGTTGCCGTTTCCTGAT 조사시료는살아있는상태로실험실로운반하여병원체분리에사용하였으며, 모든시료는개체별로기생충, 세균및바이러스에대한검출유무를조사하였다. 기생충은먼저현미경으로검경하여속명까지동정하고, 육안적으로감염이확인된개체는병소를 10% 중성포르말린으로고정하고상법에따라조직절편을제작하여병리조직검사를실시하였다. 세균의동정법으로는생화학시험및 API kit (BioMeriux, France) 법을병행하였다. 즉, 실험어를무균적으로해부하여내부조직을 brain heart infusion agar (BHIA, BD, USA) 등의세균분리용배지에백금이로도말하여 27 에서 24~48시간배양한후배지에자란집락의특성에따라순수분리하였다. 분리된균은형태학적및생화학적특성을검사한후API kit를사용하여균을동정하였다. 바이러스동정을위하여 Table 1에언급한 5종에대해서는상법에따라 DNA 및 RNA를분리한후 PCR법을사용하였으며, lymphocystis disease virus (LDV) 는육안으로상피종을확인하였다. Product size(bp) 94 (1')-55 (1')-72 (1') 597 RSIV HRV VNNV VHSV F- GTGACTGCACACCAATGGAC R-GGCTTTCTCAATCAGCTTGC F-ACCCTGGGATTCCTTGATTC R-TCTGGTGGGCACGATAAGTT F- CGGATACGTTGTTGTTGACG R-CAACAGGCAGCAGAATTTGA F- GAGAGAACTGGCCCTGACTG R-ATGATCCGTCTGGCTGACTC 94 (30'')-58 (45'')-72 (45'') (30'')-55 (10'')-72 (45'') (30'')-55 (45'')-72 (45'') (30'')-57 (45'')-72 (45'') 444 MBV, marine birnavirus; RSIV, Red sea bream iridovirus; HRV, hirame rhabdovirus; VNNV, viral nervous necrosis virus; VHSV, viral hemorrhagic septicaemia virus.
3 2008 년우리나라연근해산어류에대한병원체모니터링 77 결 과 조사시기및지역별로조사된시료의수는 Table 2 에나타내었다. 병원체조사에사용한어류를종별로분류해보면농어목이 191 마리로 가장많았으며, 그다음으로쏨뱅이목 74 마리, 가자미목 50 마리, 복어목 44 마리, 가자미목 50 마 리, 청어목 34 마리, 동갈치목 4 마리, 숭어목및 뱀장어목이각각 2 마리로나타났다 (Table 3). 농 어목에속하는어류중에서는도미과어류가 72 마리로가장많아전체조사시료의 18.0% 를 차지하였으며, 그다음으로전갱이과어류가 44 마리 (11.0%), 놀래기과어류가 22 마리 (5.5%) 로 나타났다. 쏨뱅이목에속하는어류는양볼락과 49 마리 (12.2%), 성대과 16 마리 (4.0%), 쥐노래미과 9 마리 (2.2%) 로나타났으며, 가자미목어류는 가자미과 38 마리 (9.5%), 넙치과 12 마리 (3.0%) 순으로나타났다. 복어목에속하는어류는쥐치 과 31 마리 (7.7%), 참복과 13 마리 (3.2%) 로나타 났으며, 청어목에속하는어류는청어과 24 마리 (6.0%), 멸치과 10 마리 (2.5%) 로분류되었다. 조사시료를대상으로어류병원체의감염여 부를조사한결과, 기생충류는 11 종 (Trichodina, Scutica, Cryptocaryon, Dactylogyrus, Benedenia, Microcotyle, Bivagina, Heteraxin, Caligus, Epistylis 및 Nematode) 이검출되었으며, 세균은 4종으로 Photobacterium, Pseudononas, Streptococcus 및 Vibrio속세균이분리되었다. 바이러스는조사대상6종중에서 RSIV 및 LDV 2종이 검출되었다. 우점적으로검출된병원체의종류로는기생충류중에서 Trichodina 및 Microcotyle 가각각8.2% 및 5.0% 의검출률을나타내었으며, 그외Benedenia 및 Caligus 등도검출률이각각 1.7% 로검출되었다. 세균류중에서는 Vibrio 및 Photobacterium속세균이각각 7.7% 및 2.2% 의검출률을나타내었으며, 바이러스는 RSIV가 2.0% 로나타났다 (Table 4). 전체조사시료의 37.9% 에서병원체가검출되었으며, 기생충이검출된시료수는 86마리로총조사시료중21.4% 에서검출되어가장높게나타났으며, 세균및바이러스의검출률은각각 17.0% 및 2.7% 로나타났다. 조사시기별로는저수온기인 2월에는조사시료의 40.9% 에서병원체가검출되었으며, 이중기생충검출률이 28.2% 로가장높았다. 수온상승기인 5월에는 40.0% 에서병원체가검출되었으며, 역시기생충의검출률이 26.7% 로가장높게나타났다. 고수온기인 8월에는 32.6% 로병원체검출률은다소감소하였으며, 2월및5월과달리세균검출률이 18.6% 로가장높게나타났다. 이후수온이하강하기시작하는 10월의경우, 병원체검출률이 39.7% 로나타났으며, 기생충및바이러스에비해세균의검출률이 23.1% 로가장높게나타나 8월과유사한경향을보였다 (Fig. 1). 조사시기와장소별로병원체의혼합감염양상을비교해본결과, 혼합감염률은 0.2~2.2% 로매우낮게나타났다. 조사시기별로비교해보면 5월의경우모두단독감염의형태로검출되었으 Table 2. Number of fish sampled in this study Time No. of fish examined Pohang Geoje Yeosu Jeju Total February May August October Total
4 78 조미영 지보영 박경현 이창훈 이덕찬 김진우 박미선 박명애 Table 3. Fish species used in this study Fish species Order Family Common name Scientific name No. of fish Brown sole Limanda herzensteini 13 Marbled sole Limanda yokohamae 7 Pleuronecti- Pleuronectidae Roundnose flounder Eopsetta grigorjewi 2 formes Stone flounder Kareius bicoloratus 1 Fine spotted flounder Pleuronichthys cornutus 15 Paralichthyidae Olive flounder Paralichthys olivaceus 12 Percichthyidae Sea bass Lateolabrax japonicus 7 Embiotocidae Sea chub Ditrema temminckii 11 Sparidae Red sea bream Pagrus major 68 Black sea bream Acanthopagrus schlegeli 4 Oplegnathidae Spotted parrot fish Oplegnathus punctatus 2 Rock bream Oplegnathus fasciatus 3 Kyphosidae Stripey Microcanthus strigatus 2 Pomacanthidae Bluestriped angelfish Chaetodontoplus septentrionalis 3 Scarbreast tuskfish Choerodon azurio 2 Labridae Pudding wife Halichoeres tenuispinis 4 Multicolorfin rainbowfish Parajulis poecilepterus 16 Perciformes Carangidae Yellow tail Seriola quinqueradiata 22 Horse mackrel Trachurus japonicus 17 African pompano Alectis ciliaris 1 Goldstiped amberjack Seriola aureovittata 4 Siganidae Mottled spinefoot Siganus fuscescens 1 Bluefin tuna Thunnus thynnus 2 Scombridae Chub mackerel Scomber japonicus 9 Japanese Spanish mackerel Scomberomorus niphonius 2 Sciaenidae White croaker Argyrosomus argentatus 5 Serranidae Sevenband grouper Epinephelus septemfasciatus 1 Hong Kong grouper Epinephelus akaara 2 Kelp bass Epinephelus bruneus 2 Longispine grouper Epinephelus longispinis 1 Beloniformes Scomberesocidae Pacific saury Cololabis saira 3 Hemirarnphidae Half beak Hyporhampus sajori 1 Schegel's black rockfish Sebastes schlegeli 39 Black rockfish Sebastes inermis 4 Scorpaenidae Scorpaeni- Longspined rockfish Sebastes longispinis 1 formes Scorpion fish Sebastiscus marmoratus 5 Hexagrammidae Spotty belly greenling Agrammus agrammus 9 Triglidae Red gurnard Chelidonichthys spinosus 16 Mugili formes Mugilidae Flathead mullet Mugil cephalus 2 Engraulidae Japanese anchovy Engraulis japonicus 10 Clupeiformes Pacific herring Clupea pallasii 20 Clupeidae Dotted gizzard shad Konosirus punctatus 4 Anguilliformes Congridae Conger eel Conger myriaster 2 Tiger puffer Takifugu rubripes 3 Tetraodonti- Panther puffer Takifugu pardalis 10 Tetraodontidae formes Thread-sail filefish Stephanolepis cirrhifer 20 Black scraper Thamnaconus modestus 11 Total 401
5 2008 년우리나라연근해산어류에대한병원체모니터링 79 Fig. 1. Detection rates of fish pathogens in wild marin fish caught in Korean coastal offshore water in Table 4. Detection rates and host ranges of dominant pathogens isolated in this study Fig. 2. Prevalence of mixed infection of fish pathogens in wild marin fish caught in Korean coastal offshore water in P, parasite; B, bacteria; V, virus; PP, PB, BV and PPB mean the case of mixed infection by each pathogen. Pathogen Detection rate (%) Host group Trichodina 8.2 Brown sole, olive flounder, fine spotted flounder, stone flounder, rock bream, red sea bream, schegel's blasck rockfish, black rockfish, spotty belly greenling, red gurnard, panther puffer Parasite Microcotyle 5.0 Schegel's blasck rockfish, scorpion fish, sea bass, white croaker, longispine grouper Bacteria Benedenia 1.7 Yellow tail, schegel's blasck rockfish, panther puffer Caligus 1.7 Yellow tail, schegel's blasck rockfish, flathead mullet, panther puffer Vibrio 7.7 Olive flounder, red sea bream, multicolorfin rainbowfish, spotted parrot fish, yellow tail, African pompano, goldstriped amberjack, mottled spinefoot, bluefin tuna, Pacific saury, thread-sail filefish, black scraper Photobacterium 2.2 Fine spotted flounder, multicolorfin rainbowfish, schegel's blasck rockfish, scorpion fish, Pacific herring Streptococcus 0.7 Olive flounder Virus RSIV 2.0 Fine spotted flounder, thread-sail filefish, black scraper 나, 2월, 8월, 10월에검출률은비교적낮지만혼합감염의양상이관찰되었다. 2월에는기생충간의혼합감염이 4.0%, 기생충과세균의혼합감염이 2.0% 로나타났다. 8월에는기생충과세균의혼합감염이 5.4%, 세균과바이러스의혼합감염이 2.3% 로나타났으며, 10월에는기생충간의혼 합감염만 2.6% 로나타났다 (Fig. 2). 조사에사용된시료수의차이를고려하여과 ( 科 ) 별로 30개체이상이분석된어종만비교해본결과, 양볼락과, 쥐치과, 가자미과, 도미과및전갱이과에서각각 59.2%, 48.4%, 34.2%, 30.6% 및 18.2% 의검출률을나타내었다. 또한, 시료수와상관없이
6 80 조미영 지보영 박경현 이창훈 이덕찬 김진우 박미선 박명애 Table 5. Prevalence of mixed infection of bacteria, parasite or virus in wild marine fish caught in Korean coastal offshore water in 2008 Pathogen B 1) P V PP PB BV PPB ND Total Fish Family Pleuronectidae Paralichthyidae Percichthyidae Embiotocidae Sparidae Oplegnathidae Kyphosidae Pomacanthidae Labridae Carangidae Siganidae Scombridae Sciaenidae Serranidae Scomberesocidae Hemirarnphidae Scorpaenidae Hexagrammidae Triglidae Mugilidae Engraulidae Clupeidae Congridae Tetraodontidae Monacanthidae Total ), B, bacteria; V, virus; P, parasite; ND, not detected; PP, PB, BV and PPB mean the case of mixed infection by each pathogen. 넙치과, 도미과, 독가시치과, 양볼락과, 성대과, 숭어과, 참복과, 쥐치과에서혼합감염이관찰되었다 (Table 5). 고찰우리나라연안에서식하는자연산어류를대 상으로양식어류에서질병과관련되어분리되는병원체의검출유무를조사한결과, 기생충 11종및세균4종이분리되었으며, 바이러스는조사대상 6종중에서 2종이검출되어양식어류에서질병을일으키는병원체의대부분이자연산어류에서도검출되는것으로나타났다. 조사대상에포함된어종은총 8개목 24과 47
7 2008 년우리나라연근해산어류에대한병원체모니터링 81 종으로자연산어류에대한질병조사보고로는국내에서가장광범위한연구결과로볼수있다. 그러나본연구가현재양식되고있는어류를주조사대상으로사용하였기때문에자연산채포의어려움및조사시기의계절적변동에의한어획어종의변동등으로조사에사용할수있는시료수에한계가있었다. 그결과일반적으로질병의원인분석에사용되고있는최소마리수인 10마리이상을분석한어종은 15개어종에불과하며, 이중 30마리이상이분석에사용된경우는불과두어종으로참돔과조피볼락뿐이다. 따라서본연구의조사결과가해당어종에대한질병경향을대표한다고판단하기어려우며, Table 5에나타낸바와같이조사어종이속하는과 ( 科 ) 별로분류하여결과를분석하고전반적인경향을파악하고자하였다. 동일한분류학상위치에있는어종일경우특정병원체에대한감수성의정도도유사할것으로추정되나, 현재까지이와관련된직접적인연구결과가없으므로본연구결과의해석에서도분류학적관점에서유사한위치에있는과 ( 科 ) 별또는목 ( 目 ) 별질병발생가능성에대한경향만추정할수있을것으로판단된다. 이러한관점에서과 ( 科 ) 별로분류하여 30개체이상의시료가분석된어류만비교해본다면, 양볼락과, 쥐치과, 가자미과, 도미과및전갱이과에서나타난병원체검출률등이통계학적의미에서미약하나마다소의신뢰성을가질수있을것으로사료된다. 특히, 양볼락과는병원체검출률이 59.2% 로가장높게나타났을뿐만아니라혼합감염의양상도가장복잡하게나타났다. 본조사에서사용된양볼락과어류로는조피볼락, 볼락, 흰꼬리볼락및쏨뱅이로이중조피볼락은주요양식어류중하나로서 59.0% (23마리 /39마리) 의높은검출률을나타내었다. 동일한과에속하는볼락과쏨뱅이의경우분석에사용된개체수가각각 4마리와 5마리로분석결과에대한통계적신뢰성은매우낮으나, 이들에서검출된기생충류인 Cryptocaryon, Dactylogyrus 및 Trichodina가모두조피볼락에서도동일하게검출되었다. Trichodina의경우주요양식어류중하나인넙치에서도주로검출되었는데유사어종이라고할수있는가자미, 도다리및돌가자미에서도분리되었을뿐만아니라, 노래미, 방어, 참돔, 돌돔, 조피볼락, 볼락, 성대및졸복에서도분리되어기생충류중에서는가장높은검출률을나타내었다. 그러나본조사에서검출된기생충의대부분이조건성병원체로분류될수있으며, 특히 Trichodina의경우일반해수중에서도분리될수있다는점을감안한다면이러한결과는단지양식넙치및조피볼락에서나타난기생충성질병이자연산어류를양식할경우에도유사하게나타날수있으며, 반대로자연해수중에있는이들기생충이어떠한원인에의해밀도가증가할경우동일수역내의양식어류에감염될가능성도추정할수있다. 세균류중에서 Vibrio속세균을제외하고검출률이가장높게나타난 Photobacterium의경우모두P. damselae 로동정되었으며, 어종별로는쏨뱅이목에속하는조피볼락, 쏨뱅이및성대뿐만아니라청어, 용치놀래기등에서도검출되었다. Photobacterium group은자연산볼락의장내세균총또는수중공통세균총으로보고된바가있으나 ( 김등, 2007), P. damselae의경우양식넙치에서분리되고있는주요병원성세균이므로 ( 권등, 2005), 추후오염수역의범위및분리숙주별병원성에대한연구가필요할것으로판단된다. 조사대상바이러스중에서가장검출률이높게나타난 RSIV는일본의양식참돔에서처음으로분리되었으며 (Inouye et al., 1992), 국내에서는양식참돔과돌돔에서많은피해를야기하는것으로보고되고있다 ( 이등, 2007). RSIV의숙주범위는매우광범위하여, 일본에서는농어목 28종, 가자미목 2종및복어목 1종에서분리되었으며 (Kawakami and Nakajima, 2002), 우리나라에서는돔류이외에농어, 조피볼락및넙치에서분리된바있다 (Do et al., 2005). 본연구에서는가가미목에속하는도다리, 농어목에속하
8 82 조미영 지보영 박경현 이창훈 이덕찬 김진우 박미선 박명애 는독가시치, 복어목에속하는쥐치와말쥐치에 서 RSIV 가검출되어양식어류이외에다양한 자연산어류가 RSIV 를보균하고있는것으로 확인되었다. 이등 (2007) 도남해안과동중국해 에서샘플링한자연산어류를대상으로 RSIV 의 검출률을조사한결과, 상어목 57.1%, 가자미목 27.2%, 농어목 28.5% 에서바이러스가검출되어숙주영역이매우넓은것으로보고한바있다. 그러나현재로서는자연산어류에서분리된 RSIV가숙주에병원성을가지는지에대한연구가매우미흡한실정이며, 국내에서분리되고있는 RSIV의유전형에대한자료도품종및지역적으로제한되어있어추후이에대한역학적인조사가지속적으로필요할것으로사료된다. 요 약 우리나라연안에서채포되는자연산어류를대상으로주요어류병원체의검출유무를조사하기위해 2008년 2월부터 10월까지질병조사를실시하였다. 포항, 거제, 여수및제주지역의정치망, 양망에채포된어류및공동어시장에서판매되는어류를구매하여총 401마리를실험에사용하였다. 전체조사시료중 152마리에서 17종의병원체가분리되었다. 기생충, 세균및바이러스의검출률은각각 21.4%, 17.0% 및 2.7% 로나타났다. 분리된기생충류는 Scutica, Trichodina, Cryptocaryon, Dactylogyrus, Microcotyle, Benedenia, Bivagina, Heteraxin, Caligus, Epistylis 및 nematode 이며, 세균류로는 Vibrio, Streptococcus, Photobacterium, Psuedomonas가우점적으로분리되었고바이러스는조사대상인 6종중에서 red sea bream iridovirus (RSIV) 및 lymphocystis disease virus (LDV) 가검출되었다. 과 ( 科 ) 별로검사시료가 30 개체이상인어류중에서양볼락과, 쥐치과, 가자미과, 도미과및전갱이과의검출률이 59.2%, 48.4%, 34.2%, 30.6% 및 18.2% 로나타났다. 감사의글 본연구는국립수산과학원 ( 수산동물질병모니터링및진단연구, RP-2009-AQ-015) 의지원에의해운영되었습니다. 참고문헌 Betts, A.M. and Stone, D.M.: Nucleotide sequence analysis of the entire coding regions of virulent and avirulent strains of viral haemorrhagic septicaemia virus. Virus Genes, 20: , Bucke, D.: Experimental and naturally occurring furunculosis in various fish species: a comparative study. In W. Ahne (editor), Proceedings of 3rd COPRAQ Fish Diseases meeting Munich, Life Sciences 1980, Springer, Berlin, pp , Dixon, P.F., Feist, S., Kehoe, E., Parry, L., Stone, D.M. and Way, K.: Isolation of viral haemorrhagic septicaemia virus from Atlantic herring Clupea harengus from the English channel. Dis. Aquat. Org., 30: 81-89, Do, J.W., Cha, S. J., Kim, J.S., An, E.J., Park, M.S., Kim, J.W., Kim, Y.C., Park, M.A. and Park, J.W.: Sequence variation in the gene encoding the major capsid protein of Korean fish iridoviruses. Arch Virol. 150: , Inouye, K., Yamano, K., Maeno, Y., Nakajima, K., Matsuoka, M., Wada, Y., Sorimachi, M.: Iridovirus infection of cultured red sea bream, Pagrus major. J. Fish Pathol., 27: 19-27, Kawakami, H., Nakajima, K.: Cultured fish species affected by red sea bream iridoviral disease from 1996 to Fish Pathol., 37: 45-47, 2002.
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72 유준택ㆍ김희용ㆍ송세현ㆍ김영혜., Kim et al. (211) (5-6 ). 이각망어획물및수온 재료및방법 (Fig. 1) ,,, (cooler). Chyung (1977), Kim et al. (25) Kim
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