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韓雜草誌 30(4):421~428(20) Kor. J. Weed Sci. 30(4):421~428(20) 목향 (Saussurea lappa) 유래 Dehydrocostus lactone의경엽접촉살초활성 조광민 1, 안설화 2, 전재관 1, 김효선 1, 전재철 1 * Foliage Contact Herbicidal Activity of Dehydrocostus lactone Derived from Saussurea lappa Kwang-Min Cho 1, Xue-Hua An 2, Jae-Kwan Chon 1 Hyo-Sun Kim 1 and Jae-Chul Chun 1 * ABSTRACT A foliage contact herbicidal substance was separated from ethyl ether fraction in n-hexane extract of Saussurea lappa roots and identified as dehydrocostus lactone [(3aS,6aR,9aR, 9bS)-3,6,9-trimethylidene-3a,4,5,6a,7,8,9a,9b-octahydroazuleno[5,4-d]furan-2-one](DHCL). When DHCL at 4,000 ppm was foliage-applied to two grasses and two broadleaf plants, greater than 85% necrotic injury was obtained from large crabgrass, maize and soybean, whereas only about 40% necrotic injury appeared in black nightshade, indicating that DHCL has no gross morphological selectivity, but shows difference in contact response among the plant species tested. Conductivity in incubation medium of the leaf disks treated with DHCL increased as the incubation time continued. Relatively low contact injury in black nightshade as compared with the other three plant species tested was attributed to decrease in absorption of DHCL due to relatively high amount of cuticle. DHCL did not require light in the herbicidal action and there were no inhibitory effects on seed germination and cell elongation. Acetyl-CoA carboxylase activity was inhibited by 30% and 58% at 0 μm and 1,000 μm DHCL, respectively. These results suggested that the herbicidal action of DHCL was related with inhibition of fatty acid synthesis which in turn caused to weaken cell membrane integrity. Key words: dehydrocostus lactone; herbicidal activity; Saussurea lappa. 1 전북대학교생물환경화학과및생리활성물질연구소 (Department of Bioenvironmental Chemistry and Research Center of Bioactive Materials, Chonbuk National University, Chonju 561-756, Korea). 2 중국절강성농업과학원 (Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou, China). * 연락저자 (corresponding author):phone) +82-63-270-2548, Fax) +82-63-270-2550, E-mail) jcchun@chonbuk.ac.kr (Received November 15, 20; Examined November 23, 20; Accepted December 1, 20) - 421 -

422 조등 : 목향유래 Dehydrocostus lactone의경엽접촉살초활성 서언 식물체에는타식물의생장을저해하는수많은물질이존재한다. 이들식물체유래식물독소 (phytotoxin) 는 phenol류, terpenoid류또는 alkaloid류들로서대부분이식물의 2차대사산물이다 (Godfrey 1995). 최근식물체로부터생리활성을나타내는식물독소의탐색은환경친화형농업기술개발의일환으로주목받고있고이와관련된다양한활성물질이보고되어왔다. 국내자생식물자원으로부터탐색된살초활성물질로는삽추 (Atractylodes japonica) 근경으로부터 sesquiterpene류인 isolantolactonoid butenolide A 가분리동정 ( 김등 2002) 되었고, 애기수영 (Rumex acetosella) 으로부터 chrysophanic acid( 김등 2003), 또한할미꽃 (Pulsatilla koreana) 으로부터 anemonin 과 5,6,7-trimethoxycourmarin( 최등 2003; 2008) 이분리동정된바있다. 이밖에도산초나무 (Zanthoxylum schinifolium) 열매에서 psoralen과 bergapten( 김등 2005a), 족도리 (Asarum sieboldii) 에서 elemicin( 김등 2005b), 삼지구엽초 (Epimedium koreanum) 에서 methyl-p-hydroxybenzoate( 임등 2007), 그리고방아풀 (Agastache rugosa) 에서 dhelwangin( 안등 2008) 등이보고된바있다. 지금까지탐색된살초활성물질들의원류식물들은어느특정식물분류군에만속하지않고매우다양한식물분류군들에분포하고있으며, 활성물질이나타내는활성작용력도타식물체의발아또는유묘생장저해효과가대부분이었다. 한편식물체중에존재하는활성물질의함유량은매우낮은수준으로존재하는것이보통인데그이유는고등식물체내에존재하며타식물체의생장에영향을끼치는식물독소의경우근본적으로낮은함유량수준이아니면높은식물독소량에의한자가독소역할을보이기때문이라할수있다. 또한활성물질이나타내는살초작용력은주로검정식물의발아및유묘생장저해효과가주로탐색에이용되어왔는데이는검정식물들에대하여활성물질의저농도수준에서가장민감하게반응하는생장반응이발아후초기생육이나유묘의생육반응이기때문이었다. 이러한이유로지금까지보고 된살초활성물질중경엽활성을보이는물질이보고된경우는많지않았다. 이러한상황에서목향 (Saussurea lappa) 뿌리비극성추출물의살초활성이발아및유묘생육저해보다는오히려경엽살초활성이강하였던기초실험의결과를바탕으로본연구에서는경엽살초활성물질을분리동정하고, 이물질의살초활성작용기구를검토하고자하였다. 재료및방법 식물재료건조된목향뿌리를전주시소재한약재상으로부터구입하여활성물질분리재료로사용하였다. 생물검정화본과및광엽잡초의종자는전북대학교잡초방제연구실에서보관중인휴면각성종자를이용하였다. 이들종자들을부농상토를담은프라스틱사각상자에파종하여관수하고, 온실 ( 주간 30±3 / 야간 20±3, 일장 14시간 ) 에서 5일동안발아생육시켰다. 제초활성물질의분리동정건조목향뿌리를수차례물로세척하여표면의토양과먼지를제거한후흡수지로수분을제거하고, 마쇄기로분쇄한가루 1kg을 methanol(9l) 로 2회에걸쳐 1일동안실온에서추출하였다. 추출물을 Whatman No. 1 여과지를통해여과한다음이들을 35 에서감압농축건고시켰다. 이건고물을 1L의증류수에녹이고동량의 n-hexane을가한다음분액여두에서진탕후두층을분획하였다. 이과정을 3회반복하여모은 n-hexane 층을감압농축하고완전건고시켜 n-hexane 추출물 (24g) 을얻었다. n-hexane 추출물을 flash column chromatography 를통해서 n-hexane, ethyl ether, ethyl acetate 및 methanol의분획을얻고, 이들중제초활성을포함하고있는 ethyl ether(18.7g) 만을취한다음, 이를유리 column(2.8 60cm) 을사용하여용출용매계 n-hexane:acetone(99:1, v/v) 으로 slurry를만들어현탁충진후극성을단계적으로증가 ( 50:50,

韓雜草誌 30(4) 號. 20년 423 v/v) 시키는 step-wise 용출법으로분리하였다. 유속은 1ml/sec 로하였고 20ml 시험관을이용하여분획당 15ml 씩 500 개의시료를분취하였다. 분취한시료를 Thin Layer Chromatography(TLC) 판 (precoated silica gel F254, 5 1cm) 에 ml씩점적하여건조하고 n-hexane:acetone(9:1, v/v) 용매에전개시킨후 UV 램프하에서전개양상을조사하여제초활성물질이함유 (R f 0.36) 되어있는 163 235번째시료를한곳에모은후이들을 35 에서감압건고시켰다. TLC를통해단일물질로확인된분리물질을 acetone 으로용해하여 HPLC에 ml를주입하여분석하였다. HPLC의분석조건은 column; Bondapak NH 2 (3.9 300mm), mobile phase; mm NaH 2 PO 4 용액 :methanol(6:4, v/v), flow rate; 1ml/min, detector (UV/VIS); 342nm이었다. 또한 1 H-NMR과 13 C-NMR 을이용하여구조를확인하였다. 제초활성생물검정제초활성물질분리과정중각분획별생물검정은발아생육후 5일된화본과및광엽식물유묘에 2,000ppm 수준으로경엽처리한후엽신고사율로효과를조사하였다. 한편단일물질로분리동정된물질의살초활성특성을조사하기위한생물검정은검정식물의발아억제력과경엽처리효과등에대하여조사하였다. 발아억제력은화본과 2초종 ( 옥수수, 바랭이 ) 과광엽식물 2초종 ( 콩, 까마중 ) 의종자각 립씩을여지를깐 Petri dish에 4반복으로파종하고검정물질을희석 (500 4,000ppm) 하여 3ml씩주입하고덮개를덮어 25 정온기에치상한다음 7일후에발아율을조사하였다. 경엽처리효과는앞서와동일한초종에대하여콩을기준으로제1엽이완전히전개된시기에위와동일한검정물질의농도수준으로약제를조제하여경엽처리후엽신고사율로조사하였다. 제초활성발현기구제초활성발현에관여하는광에대한요구여부는온실에서 2주간생육시킨콩을비롯한검정식물이 2엽기에도달하였을때실시하였다. 이들검정식물 을실내배양실로옮긴후분리동정된검정물질 dehydrocostus lactone( 이하 DHCL) 을 1,000ppm 수준으로처리하고, 광이차단된암조건및광도 180μmole m -2 s -1 조건하에서각각 12시간동안 25 배양실에정치시킨후에측정한엽신고사율로살초활성을조사하였다. 또한세포신장에끼치는영향은귀리엽초를녹색광하에서 5mm크기로절단하여 Petri dish에엽초 30개씩을담고여기에 DHCL이함유된인산완충용액 (ph 5.3) 을가한후 25 의정온기에서배양하고 24시간후에신장된길이를측정하였다. 세포신장은 dial caliper로 0.01mm까지측정한다음최초의길이를빼고남은길이로하였다. DHCL 처리에따른전해물질누출측정을위하여유리온실에서 3주간생육시킨까마중을비롯한검정식물의제1엽을채취하여직경 5mm의엽절편을만들고 Petri dish에엽절편 50개 (0.1g) 를넣고 1% sucrose, 1mM 2-(N-morpholino)ethane sulfonic acid(ph 6.5) 완충용액 7ml를가하였다. 검정약제를 200ppm 수준으로처리한후 25 암상태의정온기서 1시간동안배양하고이어서 180μmole m -2 s -1 의광조건에서 24시간동안배양하면서경과시간에따라배양액의전도도를측정하였다. DHCL이옥수수에서 acetyl-coa carboxylase (ACCase) 활성에끼치는영향을 H 14 CO 3 와 acetyl- CoA에의해생성되는 14 C-malonyl-CoA의방사능을 Liquid Scintillation Counter(LSC, Beckman LS6500) 로측정조사하였다. 온실에서생육시킨 2엽기의엽시료 5g에 15 ml의 1mM EDTA, %(v/v) glycerol, 2mM isoascorbic acid, 1mM PMSF, 0.5% PVP-40, 20mM DTT가함유된 0mM Tris 완충액 (ph 8.0) 을가하여막자사발로마쇄, 추출하고 27,000g에서 30분간원심분리하였다. 그후상등액을취하여각각 20% 및 40% ammonium sulfate로 2회에걸쳐부분정제한다음 Sephadex G25가충진된 PD- 컬럼 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sweden) 을이용하여제염하고반응효소액으로이용하였다. 효소반응을위한완충액은 mm KCl, 5mM ATP, 2mM MgCl 2, 2.5mM DTT, 0.15mM NaH 14 CO 3 (specific activity 251.6MBq/mole) 가함유된 20mM

424 조등 : 목향유래 Dehydrocostus lactone의경엽접촉살초활성 Tricine-KOH(pH 8.3) 이었으며, 32 수조에서 ml acetyl-coa( 최종농도 0.8mM) 를첨가하여 분간반응시켰다. 검정약제는 1 1,000μM 수준으로처리하였고, 처리시용매는 dimethyl sulfoxide(dmso) 를사용하였으며, 반응액중의 DMSO의최종농도는 5% 이었다. 반응개시 분후에 12N HCl 20ml를첨가하여반응을정지시키고 80 항온수조에서 1시간동안건조시킨다음 0.5ml의 50% ethanol과 4ml의 LSC cocktail 용액 (Beckman, USA) 을순차적으로첨가하고방사능을측정하였다. 반응에사용한조효소액의단백질량은 0 150mg으로최종반응액은 200ml이었다 (Stoltenberg 등 1989; Yenne와 Hatzios 1989; Maneechote 등 1994). 효소의단백질정량은 Bradford (1976) 법에따랐다. 결과및고찰 목향근추출물의제초활성목향뿌리 n-hexane 추출물로부터얻은 1차분획물의경엽살초활성은 ethyl ether 분획에서나타났으나, 그외의 n-hexane, ethyl acetate 및 methanol 분획에서는접촉살초특성이전혀나타나지않았다. Ethyl ether 분획은화본과검정식물에대하여약 30 50% 의살초효과를보인반면에, 광엽식물중콩과 자귀풀에대하여서는각각 30% 및 45% 의살초효과를보였고, 까마중에대해서는 % 정도의낮은살초효과를나타내었다 ( 그림 1). 이상의결과는목향근 1차조출물의비극성분획중 ethyl ether 분획내에경엽살초활성물질이포함되어있음을나타낸결과로검정식물종간에살초반응성차이가어느정도나타내고는있으나, 검정식물들의외부형태적차이에따른선택성차이는얻을수없었다. 한편목향뿌리추출물의모든분획들은검정식물의종자발아에대하여서는전혀영향을끼치지못하였다 ( 자료제시생략 ). DHCL 의분리동정및경엽처리활성 Ethyl ether 분획으로부터 column 및 TLC를통하여얻은제초활성물질이포함된분획은 HPLC 분석결과단일물질로확인되었으며, 이에대한 1 H-NMR 및 13 C-NMR 분석결과 ( 표 1) 에서얻은활성성분은 C 15 H 18 O 2 ( 분자량 230.3) 의 (3aS,6aR,9aR,9bS)-3,6,9- trimethylidene-3a,4,5,6a,7,8,9a,9b-octahydroazuleno [5,4-d]furan-2-one(dehydrocostus lactone, 그림 2) 으로동정되었다. 이 sesquiterpene lactone인 DHCL은목향에존재하는물질로 Lu(1996) 에의해최초로분리되어보고된이래, 항균작용성이보고 (Cantrell 등 1998; Sun 등 2003) 되었으며, 최근에 Hong 등 (2008) 은 DHCL이인체의암세포전이와침입을억제하는효과가있다고보고한바있었으나, 살초활성에대해서는아직까지보고된바가없었다. 그러나 Macias 등 (2000) 은 sesquiterpene lactone 물질이다양한생물학적활성을보이고있음에착안하여 DHCL을산화시켜 dehydrozaluzanin C를합성하고, 이합성화합물이종자발아억제및여러단자엽및쌍자엽식물에대하여생장억제효과가있음을보고한바있다. Fig. 1. Herbicidal injury of grass and broadleaf plants as affected by foliage application of ethyl ether fraction (2,000 ppm) obtained from n-hexane extract of Saussurea lappa roots. Fig. 2. Chemical structure of dehydrocostus lactone.

韓雜草誌 30(4) 號. 20년 425 Table 1. NMR data for dehydrocostus lactone in CDCl 3 (1H,m). Table 2. Herbicidal activity of dehydrocostus lactone to grass and broadleaf plants. Carbon number 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 12 13 14 15 δ C δ H (Multi., J) 47.55 30.24 32.54 151.21 45.07 85.19 51.97 30.88 36.21 149.18 139.70 120.13 170.21 112.56 9.53 2.92 (1H, m) 1.94 (1H, m), 1.88 (1H, m) 2.54 (2H, m) 2.88 (1H, m) 3.93 (1H, t, 9.3) 2.86 (1H, m) 2.24 (1H, m), 1.42 (1H, m) 2.48 (1H, m), 2.17 (1H, m) 6.22 (1H, d, 3.5), 5.39 (1H, d, 3.2) 4.9 (1H, s), 4.82 (1H, s) 5.27 (1H, d, 4.3), 5.07 (1H, d, 4.2) DHCL의제초활성은 500ppm의경엽처리수준에서까마중을제외한나머지 3종검정식물 ( 옥수수, 콩, 바랭이 ) 에대하여 % 이하의엽신고사율을보였으나, 처리농도의증가와함께살초효과도증가하여 2,000ppm 처리수준에서는 45 60% 정도의엽신고사율을나타내었다 ( 표 2). 또한 4,000ppm의고농도처리에서살초활성은더욱증대되어 85% 이상의높은엽신고사율을나타내었다. 그러나광엽식물인까마중에대하여서는 2,000ppm 처리수준에서 % 정도의엽신고사율을나타내었고, 고농도처리수준인 4,000ppm에서도단지 40% 의엽신고사율을보였다. 한편귀리엽초에대한 DHCL의농도 (0 200ppm) 별처리결과세포신장에는어떠한영향도끼치지않는것으로나타났다 ( 자료제시생략 ). 이상의결과는 DHCL이나타내는경엽살초활성이화본과및광엽식물간뚜렷한선택성차이는나타내지않지만, 검정초종간에반응성차이가나타나고있음을인정할수있었던것으로, 이러한경향은앞서의 ethyl ether 분획이나타내었던살초반응효과와유사한결과로 ethyl ether 분획중에함유되었던살초활성성분이 DHCL에의한것임을확인시켜준결과이었다. Plant species Large crabgrass Maize Black nightshade Soybean Herbicidal injury (%)* Dehydrocostus lactone (ppm) 500 1,000 2,000 4,000 0 20 20 0 20 60 45 60 95 85 40 90 * Dehydrocostus lactone was applied to leaves of target plants. Injury rating:0=no injury; 0=completely killed. 제초활성발현기구 DHCL의경엽처리활성발현은광유무에관계없이나타났다 ( 그림 3). 바랭이를비롯한옥수수와콩의경엽에처리된 DHCL은암조건하에서도광조건하에노출시킨경엽에서나타난엽신고사율과동일하거나거의유사한수준으로나타나서, 활성발현에광의역할을인정할수없었다. 또한검정식물중까마중에대한 DHCL의반응성차이는다른검정식물보다는크게낮은엽신고사율을보였지만광유무에따른반응성차이는거의나타나지않았다. 이와같이 DHCL 활성발현에광이요구되지않는다는사실은 DHCL에의한접촉살초활성이광활성물질에의한활성산소발생과는관련되어있지않고있음을시사해준결과로생각된다. 한편엽절편의 DHCL 처리배양액의전도도변화는검정식물 4초종모두시간의경과와함께계속증가하는경향 ( 그림 4) 을보여 DHCL이세포막파괴에영향을끼치고있음을나타내고있었다. 그러나 DHCL에대한세포막파괴에끼치는반응성이까마중에있어서는앞의엽신고사율결과와는다르게나타났는데, 이것은아마도 DHCL을처리한실험재료의차이때문인것으로생각된다. 즉광유무의효과실험의경우완전한잎의전면에 DHCL 을처리한반면에전해질유출실험의경우엽절편을사용하였기때문에, 후자의경우절단된엽조직면을통해서보다많은양의 DHCL이세포내로흡수되어약효를발현되었기때문에초종간차이가크게감소된것으로생각된다. 이러한사실은까마중의완전한

426 조등 : 목향유래 Dehydrocostus lactone의경엽접촉살초활성 Fig. 3. Effect of light on herbicidal activity of dehydrocostus lactone (1,000 ppm) in grass and broadleaf plants. Fig. 4. Conductivity change in leaf disks of grass and broadleaf plants incubated with dehydrocostus lactone (200 ppm) at different light exposure times. 잎표면의 cuticle 함량이다른 3초종의 cuticle 함량보다높았기때문 ( 그림 5) 에이로인한엽표면에서의 DHCL의흡수량이감소되어그결과엽신고사반응성이감소되었던것으로생각된다. 식물세포막에영향을끼쳐살초활성을나타내는제초제의작용기구로는광활성물질에의해발생된독성산소에의한세포막파괴와지방산생합성의저해에의한세포막약화에따른괴사등이알려져있다 (Devine 등 1993). DHCL의경우살초발현에광이요구되지않았던사실로부터전자에의한작용성발현보다는후자와같은지방산생합성저해에의한살초활성을보일가능성이큰것으로나타났다. 즉 DHCL은지방산생합성과정에관여하는 acetyl-coa carboxylase (ACCase) 의활성을억제하는것으로나타났는데, DHCL의저농도처리수준에서는억제증가가완만하게이루어지다가 DHCL 0μM 처리에서는 ACCase 활성이무처리대비약 30%, 1,000μM 처리에서약 58% 정도의저해를나타내었는데 ( 그림 6), 이러한저해수준은 ACCase 활성저해제로잘알려진 cyclohexanedione계의 sethoxydim(rendina와 Felts 1988) 에비하면비교적낮은수준으로, sethoxydim 은 μm 처리농도에서무처리대비약 84% 정도의 ACCase의활성저해를나타내었다. Fig. 6. Effect of sethoxydim and dehydrocostus lactone on activity of acetyl-coa carboxylase extracted from maize leaf. Fig. 5. Contents of epicuticular wax and cuticle in grass and broadleaf plants employed in this study. 이상의결과를종합하면국화과목향뿌리의비극성분획물내의살초활성을나타내는 sesquiterpene

韓雜草誌 30(4) 號. 20년 427 lactone 물질은 DHCL으로동정되었으며, 이활성물질은식물체의발아및생장억제효과는나타내지않았으나, 경엽활성으로엽신고사및세포막파괴등의효과를보였고이러한활성발현에있어서광은요구되지않았다. 따라서광활성물질로부터생성되는독성산소에의한세포막파괴와같은작용특성은 DHCL의살초효과발현에서고려될수없었던반면에지방산생합성관련효소인 ACCase 활성저해효과에따른세포막약화로인한엽신괴사로나타나는작용기구를보이는것으로생각된다. 요약 목향 (Saussurea lappa) 뿌리 n-hexane 추출물의 ethyl ether 분획물로부터경엽살초활성을나타내는물질로 dehydrocostus lactone (3aS,6aR,9aR,9bS)- 3,6,9-trimethylidene-3a,4,5,6a,7,8,9a,9b-octahydroa zuleno[5,4-d]furan-2-one)(dhcl) 을분리동정하였다. DHCL 4,000ppm의경엽처리결과, 바랭이, 옥수수및콩에대하여 85% 이상의엽신고사율을보인반면에까마중에서는약 40% 의저해율을나타내어, 화본과및광엽식물간선택성차이는나타나지않았으나, 검정식물초종간반응성차이를나타내었다. 까마중에서의반응성차이는다른검정식물과비교하여까마중잎의비교적높은 cuticle 함량에의한흡수량감소때문이었다. 광은 DHCL의살초활성발현과관련이없었으며, 종자발아및세포생장억제효과는나타내지않았다. DHCL 처리에의한엽절편의전도도증가및 acetyl-coa carboxylase의활성저해효과로부터 DHCL의살초활성발현은일정부분지방산생합성저해에따른세포막약화에의해나타날가능성이있는것으로나타났다. 인용문헌 김건우, 백정규, 김진석. 2005a. 산초나무열매로부터살초활성물질의분리. 한국잡초학회지 25(3): 194-201. 김건우, 신준구, 김진석. 2002. 삽주근경으로부터살초활성물질의분리. 한국잡초학회지 25(3):194-201. 김미성, 이유선, 김희연, 최해진, 허수정, 권순배, 임상현, 김경희, 김성문. 2005b. 족도리 (Asarum sieboldii Miq.) 로부터신규살초활성물질 Elemicin 의분리. 한국잡초학회지 25(3):202-208. 김희연, 최해진, 김도순, 허수정, 김성문. 2003. 애기수영 (Rumex acetosella L.) 으로부터새로운살초활성물질 chrysophanic acid의분리. 한국잡초학회지 23(4):301-309. 안설화, 이입충, 조광민, 김성은, 전재철. 2008. 방아풀로부터분리한 dhelwangin의살초작용특성. 한국잡초학회지 28(4):406-413. 임상현, 김희연, 허수정, 김경희, 임순성, 김성문. 2007. 삼지구엽초 (Epimedium koreanum) 로부터살초활성물질 methyl-p-hydroxybenzoate의분리. 한국잡초학회지 27(3):235-240. 최해진, 김희연, 허장현, 허수정, 김도순, 김성문. 2003. 할미꽃 (Pulsatilla koreana Nakai) 으로부터새로운살초활성물질 anemonin의분리. 한국잡초학회지 23(4):3-317. 최해진, 정미정, 김성문. 2008. 할미꽃 (Pulsatilla koreana Nakai) 으로부터신규살초활성물질 5, 6,7-trimethoxycourmarin의분리및동정. 한국잡초학회지 28(3):229-235. Bradford, M. M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry 72:248-254. Cantrell, C. L., I. S. Nunez, J. Castaneda-Acosta, M. Foroozesh, F. R. Fronczek, N. H. Fischer and S. G. Franzblau. 1998. Antimycobacterial Activities of Dehydrocostus Lactone and Its Oxidation Products. J. Nat. Prod. 61():1181-1186. Devine, M., S. O. Duke and C. Fedtke. 1993. Physiology of herbicide action. P T R Prentice

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