약학회지제 57 권제 4 호 258~264 (2013) Yakhak Hoeji Vol. 57, No. 4 종설 랫드에서향부자추출물의 13 주반복경구투여독성평가 한소리 *, ** 한형윤 ** 박희진 ** 민병선 *** 정문구 ** 문경식 ** 정자영 **** 노항식 **** 석지현 **** 김상겸 *,# * 충남대학교약학대학, ** 안전성평가연구소, *** 대구카톨릭대학교약학대학, **** 식품의약품안전평가원, 독성연구과 (Received June 10, 2013; Revised July 11, 2013; Accepted July 18, 2013) Toxicity Assessment of Cyperi rhizoma Aqueous Extract Orally Administered to Rats for 13 Consecutive Weeks So-Ri Han*, **, Hyoung-Yun Han**, HeeJin Park**, Byung-Sun Min***, Moon-Koo Chung**, Kyoung-Sik Moon**, Ja Young Jeong****, Hang-sik Roh****, Ji Hyeon Seok**** and Sang Kyum Kim*,# *College of Pharmacy, Chungnam National University, Daejeon 305-764, Korea **Department of Non-Clinical Studies, Korea Institute Toxicology, Daejeon 305-343, Korea ***College of Pharmacy, Catholic University of Daegu, Gyeongsangbuk-do 712-702, Korea ****Toxicological Research Division, Toxicological Evaluation and Research Department, National Institute of Food and Drug Safety Evaluation, Osong Health Technology Administration Complex, Chungcheongbuk-do 363-700, Korea Abstract Herbal medicine has been traditionally used in Asian countries for a long time. Many pharmacological effects are identified in the herbs and these herbs are believed to be safe for human. However, the safety or adverse effect of some traditional herbal medicines has not been established. We have chosen Cyperi rhizoma based on the Korea Herbal Pharmacopoeia and which have been widely used for an anti-inflammatory effect in Korea. The object of the study was to evaluate safety of Cyperi rhizoma in rats. The aqueous extract of Cyperi rhizoma was prepared according to the standard hot water extraction method of the Korea Pharmacopoeia. In the sub-chronic study, the aqueous extract of Cyperi rhizoma was orally administered once daily as 0, 125, 250, 500, 1000 and 2000 mg/kg/day to male and female F344 rats for 13 weeks. There were no treatment related abnormalities in mortality, clinical signs, food consumption, ophthalmologic examination, hematology, serum chemistry, urinalysis, gross observation, organ weight and histopathologic examination. In conclusion, The NOAEL (No Observed Adverse Effect Level) for Cyperi rhizoma aqueous extract was determined as more than 2000 mg/kg/day in the present experimental condition. Keywords toxicity, Cyperi rhizoma, NOAEL 전통적으로생약재는여러가지질병을치료하거나예방하는목적으로오랫동안사용되어왔으며, 전세계적으로도생약재소비는증가하고있다. 1) 현재대한약전및약전외생약 ( 한약 ) 규격집에수재된생약재는약 500종이상으로국내에서다양한생약재가이용되고있다. 또한서양에서도대체의학의활용이증가함에따라천연물및생약재를이용한연구의필요성은점점증가되고있다. 최근에생약재및천연물추출물에대한성분추출및분석그리고약효및활성성분연구가활발하게이루어지고 # 본논문에관한문의는저자에게로 ( 전화 ) 042-821-5930 ( 팩스 ) 042-823-6566 (E-mail) sangkim@cnu.ac.kr 있다. 그러나생약재사용증가와활발한활성연구에비하여현재까지천연물의안정성및독성등의부작용은체계적으로연구되지않고있다. 2) 또한일반적으로많은사람들은천연에서유래한생약제제들은합성의약품보다더안전하다고믿고있으나과학적인근거는부족한실정이다. 3) 그리고천연물을이용한생약제제나건강기능식품은일반의약품보다복용기간이장기간이며복용자의대다수가노약자인것을고려할때천연물의부작용에대한평가는매우중요하다. 지금까지생약재의부작용으로은행나무추출물 (Ginkgo biloba) 로유발될수있는자연출혈, St. John's Wort의위장관장해및알레르기반응, 마황 (Ephedra) 의고혈압및불면증, 카바 (kava) 의과도한진정작용등이보고되고있으며, 4) 향후과도한용량의천연물복용에의한잠재적인 258
향부자추출물의 13 주독성평가 259 위험성에대한연구는한약, 천연물신약, 건강기능식품등의활용에우선되어야한다. 향부자 (Cyperi rhizoma) 는향부자의뿌리줄기부분을사용하며, 5) 세포보호, 항염작용, 항비만효과, 해열작용및항혈소판작용등이있는것으로알려져있다. 6-8) 향부자의뿌리줄기에는탄수화물과휘발성정유성분 (sesquiterpenoids) 이다량포함되어있다. 9,10) 이들성분들은향부자의주요한약효성분으로항염등의작용을나타내는것으로보고되었다. 7,11) 국내에서사용된역사가길고, 소비량이많은향부자등의생약재에대해서활성성분및약리적효과는많이연구되어있다. 그러나생약재의장기간사용에의한안전성및독성여부에대한연구가확립되어있지않은실정이다. 따라서본연구에서는한국에서다량소비되는향부자를대상으로하여, 동물모델에서반복투여시험을수행하여생약재의독성을평가하였다. 본연구는식품의약품안전청및 Organization for Economic Coorperation and Development (OECD) 의비임상시험기준 (Good Laboratory Practice, GLP) 을준수하여실시하였다. 실험방법생약재추출물제조및지표성분분석향부자의표준생약재를선발하기위하여생약관련연구자들로구성된생약감별자문위원회에서시중에유통되는생약재를대상으로대한약전및생약규격집을근거로감별을실시하였다. 선발된생약재는대구가톨릭대학교약학대학표본실에보관되어있다. 식약청고시 2003-17, 안전성유효성심사규정 (2003) 에준한표준탕액제조법에따라 5,12) 열수추출을하여표준탕액으로제조하였다. 그후냉동건조하여증류수를가하여적당한농도로조제할수있도록분말상태로만든후, 그상태의향부자추출물을제공받아본연구에사용하였다. 제공받은향부자추출물은유해및오염물질분석에서잔류농약 ( 총 benzene hexachloride 0.2 mg/kg 이하, DDT 0.1 mg/kg 이하, 알드린, 앤드린및디엘드린 0.01 mg/kg 이하등 ), 중금속 ( 카드뮴 1.0 mg/kg 이하, 납 5.0 mg/kg 이하, 비소 3.0 mg/kg 이하및수은 0.2 mg/kg 이하 ) 및아플라톡신 B1(0.01 mg/kg 이하 ) 이모두기준농도이하로검출되지않았다. 또한향부자추출물은실온과냉장보관 ( 약 5 o C) 에서 6개월간안정한것으로확인되었다. 5) 향부자의정유성분중주요한성분으로 α-cyperone이알려져있으며, 7) 본연구에서도 α-cyperone을지표성분으로하여고속액체크로마토그래피 (high performance liquid chromatography, HPLC) 를이용하여측정하였다. 향부자추출물의지표물질 α- cyperone의함량은 0.034±0.01 mg/g이었다. 5) 본연구에서는향부자추출물을멸균증류수에현탁하여최고농도의조제시험물질을만들고, 다시그현탁액을순차적으로희 석하여중및저농도의시험물질을조제하여사용하였다. 동물모델을이용한독성시험각각암수 70마리의특정병원체부재 (SPF) F344 랫드를오리엔트바이오 ( 경기도성남시 ) 로부터공급받아독성시험에사용하였다. 랫드는약 6주령에안전성시험동물동의동물실에입수하여약일주일간의순화기간을거친후건강한동물만본시험에사용하였다. 순화기간후암수각각 60마리의동물을 Path/Tox system(version 4.2.2, Xybion Medical Systems Corporation, USA) 을이용하여무작위로각군당암수 10마리씩 6개의군으로지정하였다. 투여개시시동물의체중은각각수컷 138.0~ 178.7 g 그리고암컷 105.6~133.3 g이었다. 동물은깔짚 (Laboratory animal Aspen bedding, ABEDD BALTIC LTD., Latvia) 을깐 polycarbonate 케이지에시험기간동안수용되었다. 멸균된수도수및실험동물용사료 (PMI nutrition International, USA) 가동물에게자유롭게공급되었다. 실험동물실은온도 23±3 o C, 상대습도 50±10%, 조명시간 12시간 (08:00 점등 ~20:00 소등 ), 환기횟수 10~20회 / 시간및조도 150~300 Lux로설정되어유지되었다. 본동물실험은실험동물의관리및사용에적용할수있는모든규정을준수하여실시하였으며 (AAALAC International 인증획득, 1998), 한국화학연구원부설안전성평가연구소의 Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC) 에의해검토되었다. 또한식품의약품안전청고시제2009-116호 (2009년 08월 24일 )' 의약품등의독성시험기준 ' 에준하여본시험은실시되었다. 투여및시험항목인간에게있어향부자추출물의사용경로는경구이므로, 경구투여로 13주간반복독성시험을실시하였다. 본연구의측정과관찰결과는 Path/Tox system을이용하여기록하였다. 본 13주간반복경구투여독성시험의투여용량은앞서실시한 2주간반복경구투여독성용량설정시험의결과를참조하여설정하였다. 먼저실시한 2주간반복경구투여독성용량설정시험에서, 향부자추출물을 2000 mg/kg/day 의용량까지투여하였을때, 관련된독성소견이관찰되지않아그에따라본연구에서의투여용량은 0( 부형제대조군 ), 125, 250, 500, 1000 및 2000 mg/kg/ day로설정하였다. 순화기간동안에는 1일 1회, 투여기간에는 1일 2회 ( 투여전및후 ) 및부검당일 1회씩모든동물의일반증상및사망유무에관하여관찰하고기록하였다. 체중은동물입수, 군분리, 투여당일의투여시작전, 투여기간중에는주 1회씩및부검일에측정하였다. 사료섭취량은투여개시전 1회측정하고, 투여기간중에는주 1회측정하여개체당일일평균섭취량 (g/rat/day) 으로산출하였다. 또한투여개시전모든동물에대하여외안검사를 Vol. 57, No. 4, 2013
260 한소리 한형윤 박희진 민병선 정문구 문경식 정자영 노항식 석지현 김상겸 실시하고, 투여기간에는부검 1주일이내에부형제대조군과최고용량군의모든동물에대해산동제 (Tropicamide 5 mg/ml 및 Phenylephrine HCl 5 mg/ml, Midrin-P, Santen Pharmaceutical, Japan) 를처치한후양안간접안저검사기 (IO-H, Neitz Instrument Co., Japan 또는 Vantage Plus Digital, Keeler, England) 를이용하여안저를관찰하였다. 모든동물에대하여부검당일약 16시간동안의요를채취하여요량, 요색, 비중, ph, 단백질, 케톤체, 잠혈, 당, 빌리루빈, 아질산염및유로빌리노겐, 요침사 [ 원주, 상피세포, 적혈구, 백혈구 ] 측정및검사를실시하였다. 요분석은요시험지 (Multistix, 10 SG, Siemens) 및요자동분석장치 (CliniTek-500, Bayer) 를이용하여실시하였다. 부검시까지생존한모든동물을대상으로부검및채혈전약 16시간동안절식을실시하였다. 동물은 isoflurane을이용하여마취된상태에서개복하여, 후대정맥 (vena cava) 에서혈액학, 응고계및혈액생화학검사를위한혈액을채취하였다. 혈액학검사를위한혈액샘플은 EDTA-2K를포함한튜브에채취후, 혈구자동계측장치 (ADVIA120 Hematology system, Bayer, USA) 를이용하여백혈구수, 적혈구수, 혈색소, 헤마토크리트, 평균적혈구용적, 평균적혈구혈색소, 평균적혈구혈색소농도, 혈소판, 백혈구감별계수 ( 호중구 : NEU%, 림프구 : LYM%, 단핵구 : MON%, 호산구 : EOS%, 호염구 : BAS%, Large unstained cells: LUC%) 및망상적혈구수 [RET(%)] 를측정하였다. 혈액응고계검사를위한혈액샘플은 3.2% sodium citrate로처리하여혈액응고분석기 (ACL 9000, Instrumentation Laboratory, Italy) 를이용하여프로트롬빈시간및활성화부분트롬보플라스틴시간을측정하였다. 그리고혈액생화학검사를위한혈액샘플은실온에서약 90 분간방치한후원심분리 (1600 g, 10분 ) 하였다. 원심분리한샘플은자동분석장치 (TBA 200FR NEO, Toshiba Co., Japan) 를이용하여요소질소, ALT, AST, ALP, 크레아티닌, 당, 총콜레스테롤, albumin/globulin ratio, 총단백, 알부민, 크레아틴인산화효소, 중성지방, 총빌리루빈, 인지질 (phospholipid, PL), gammaglutamyl transferase(ggt), 칼슘 (calcium, Ca), 무기인 (inorganic phosphorus, IP), 염소 (chloride, Cl), 나트륨 (sodium, Na), 칼륨 (potassium, K) 을측정하였다. 채혈후복대동맥을절단하여방혈하는방법으로도살을실시하고, 부검소견을관찰하였다. 또한부검후뇌, 뇌하수체, 부신, 간, 비장, 신장, 심장, 흉선, 폐, 타액선, 갑상선, 고환, 부고환, 정낭, 전립선, 자궁및난소의절대중량을측정하고, 부검전절식된체중에대한상대장기중량을산출하였다. 부검후모든육안적병변, 피부, 유선 ( 암컷 ), 정낭, 전립선, 방광, 부고환, 난소, 자궁 ( 경부 ), 질, 비장, 췌장, 장간막임파절, 위, 십이지장, 공장, 회장, 맹장, 결장, 직장, 신장, 부신, 간, 타액선, 하악임파절, 갑상선 ( 부갑상선 ), 대동맥, 흉선, 심장, 폐 ( 기관지 ), 기관, 혀, 식도, 좌 골신경, 골격근, 흉골, 대퇴골 ( 조인트, 골수 ), 흉척수, 하더리안선, 뇌, 뇌하수체, 안구 ( 시신경 ) 및고환을모든동물에서적출하였다. 적출한장기는 10% 중성완충포르말린액에고정하고, 안구와시신경은 Davidson's 고정액, 고환은 Bouin's 고정액에고정한후약 48시간이후에 70% 알코올에옮겨담았다. 부형제대조군과최고용량군의고정한장기는파라핀포매, 박절및 hematoxylin and eosin(h&e) 염색후검경을실시하였다. 통계학적분석방법얻어진자료에대한통계분석은다중비교검정법을실시하였다. 검사항목에대해 Bartlett법으로등분산검정을실시하여유의성이인정되지않을경우에는일원배치분산분석 (ANOVA) 을유의수준 α=0.05로검정하였다. 검정결과유의성이인정된경우에만유의한결과가부형제대조군과투여군사이에차이가있는지를조사하기위하여다중비교법인 Dunnett test를실시하였다. Bartlett법에서유의성이인정된경우에는부등분산으로서 nonparametric 통계학적방법에이용되는 Kruskal-Wallis(H) 검정을유의수준 α=0.05로검정하여유의성이인정된경우에만부형제대조군과투여군사이에차이가있는지를조사하기위하여 Dunn's Rank Sum test를실시하였다. 출현율및백분비에대하여는 Fisher exact test를이용하여군간의유의차를조사하였다. 검정의위험율은 5% 및 1% 로정하였다. 이러한분석은당연구소에서사용하고있는 GLP 독성시험용전산프로그램인 Path/Tox System을이용하여실시하였다. 실험결과및고찰향부자추출물을이용한 13주간의시험기간동안시험물질투여와관련된사망동물은발생하지않았다. 또한시험기간동안일반증상관찰에서시험물질투여와관련된변화는관찰되지않았다. 탈모 (loss of fur), 안지 (eye discharge), 안구돌출 (exophthalmos) 및연변 (soft feces) 이일부동물에서관찰되었으나, 일시적이거나용량상관성이관찰되지않아시험물질투여와는무관한것으로판단되었다. 시험기간동안의체중변화는 Fig. 1에나타내었으며투여군과대조군사이의유의성은관찰되지않았다. 또한투여기간동안사료섭취량의변화는없었다 (data not shown). 안검사에서시험물질투여와관련된이상소견은관찰되지않았다. 각막상피미란 (corneal erosion) 이부형제군을포함한암수대부분의투여군에서관찰되었다. 이는깔짚을이용한사육환경에서발생할수있는소견이며, 13) 부형제대조군에서도관찰되었으므로시험물질투여와는관련이없는것으로사료된다. 부검당일약 16시간동안요를채취하여요검사를수행하였다. 뇨검사의지표는요량, 요색, 비중, ph, 단백질, 케톤체, 잠혈, 당, 빌리루빈, 아진산염, 요로빌리노겐, 뇨침사를포함하였다. 평 J. Pharm. Soc. Korea
향부자추출물의 13 주독성평가 261 Fig. 1 Body weight increases in male (left) and female (right) rats treated orally with Cyperi rhizoma aqueous extract for 13 weeks. Table I Hematological values of rats treated orally with Cyperi rhizoma aqueous extract for 13 weeks Parameters Vehicle control 125 mg/kg 250 mg/kg 500 mg/kg 1000 mg/kg 2000 mg/kg Males WBC ( 10 3 /µl) 06.58±1.51 06.58±1.56 06.73±0.83 07.12±1.58 06.78±1.11 07.16±1.28 RBC ( 10 6 /µl) 10.08±0.46 10.00±0.40 09.87±0.43 10.12±0.31 09.99±0.31 10.02±0.34 HGB (g/dl) 16.5±1.4 16.7±0.7 16.4±0.7 16.8±0.5 16.5±0.5 16.6±0.6 HCT (%) 50.7±2.5 50.3±1.8 49.6±1.8 50.8±1.3 50.0±1.3 50.2±1.8 MCV (fl) 50.3±1.2 50.3±0.9 50.3±0.8 50.2±0.8 50.1±0.6 50.1±0.8 MCH (pg) 16.4±1.0 16.6±0.2 16.6±0.2 16.6±0.1 16.5±0.2 16.6±0.2 MCHC (g/dl) 32.6±2.3 33.1±0.6 33.1±0.5 33.1±0.4 33.0±0.4 33.2±0.6 PLT ( 10 3 /µl) 770±64 745±65 778±51 754±60 765±52 757±45 RET% (%) 02.2±0.2 02.2±0.2 02.2±0.2 02.2±0.3 02.1±0.1 02.2±0.2 NEU% (%) 21.4±5.9 20.1±5.4 19.0±3.1 19.5±3.8 20.7±2.8 20.4±3.5 LYM% (%) 73.2±7.2 74.2±5.6 76.0±3.6 75.4±4.1 73.9±3.3 74.1±3.9 EOS% (%) 01.3±0.5 01.2±0.3 01.1±0.4 01.1±0.3 01.1±0.4 01.3±0.4 MON% (%) 02.5±0.7 02.4±0.4 02.2±0.5 02.5±0.4 02.4±0.5 02.4±0.5 BAS% (%) 00.4±0.2 00.6±0.2 00.5±0.1 00.5±0.1 00.5±0.1 00.5±0.2 LUC% (%) 01.1±0.3 01.5±0.6 01.3±0.6 01.1±0.3 01.3±0.3 01.4±0.4 PT (sec) 15.6±0.4 15.4±0.5 15.6±0.3 16.0±0.6 0.16.5±0.4+ 0.17.1±0.8+ APTT (sec) 16.4±1.8 15.8±2.0 15.8±2.0 16.5±2.0 16.5±2.0 17.7±0.9 Females WBC ( 10 3 /µl) 05.27±1.08 05.43±1.16 05.52±1.20 05.17±1.41 05.31±0.96 05.09±0.88 RBC ( 10 6 /µl) 09.66±0.29 09.89±0.69 09.50±0.25 09.59±0.21 09.38±0.22 09.44±0.34 HGB (g/dl) 17.2±0.5 17.6±1.2 16.6±1.0 17.0±0.3 016.6±0.4* 016.8±16.8 HCT (%) 51.0±1.8 52.7±4.0 50.2±1.4 50.5±1.3 49.5±1.4 49.9±1.8 MCV (fl) 52.8±0.6 53.2±0.8 52.8±0.6 52.6±0.4 52.8±0.5 52.8±0.5 MCH (pg) 17.8±0.2 17.8±0.1 17.5±1.1 17.8±0.1 17.7±0.1 17.7±0.1 MCHC (g/dl) 33.7±0.4 33.4±0.4 33.1±2.1 33.7±0.4 33.5±0.3 33.6±0.4 PLT ( 10 3 /µl) 726±71 734±69 743±39 0699±122 761±28 721±64 RET% (%) 02.1±0.2 02.1±0.2 02.1±0.3 02.0±0.2 02.3±0.2 02.1±0.2 NEU% (%) 18.2±5.0 18.8±3.8 17.8±2.9 17.9±4.0 20.4±4.4 17.1±2.7 LYM% (%) 76.0±4.9 76.0±4.5 76.7±2.9 76.5±4.3 73.6±4.6 77.7±2.9 EOS% (%) 01.2±0.2 01.2±0.4 01.2±0.3 01.2±0.4 01.3±0.4 01.2±0.5 MON% (%) 02.5±0.6 02.4±0.4 02.3±0.4 02.3±0.5 02.6±0.4 02.2±0.3 BAS% (%) 00.5±0.2 00.6±0.2 00.6±0.2 00.5±0.2 00.6±0.3 00.5±0.1 LUC% (%) 01.5±0.3 01.4±0.3 01.5±0.1 01.6±0.3 01.6±0.3 01.4±0.3 PT (sec) 18.0±1.7 17.9±2.0 17.6±1.7 17.7±1.3 17.4±1.6 17.4±1.8 APTT (sec) 14.4±0.7 14.9±1.1 14.3±0.8 13.7±1.2 14.9±0.8 14.4±0.7 Each value represents the mean±sd for ten rats. *Significantly different from the vehicle control at p<0.05. +Significantly different from the vehicle control at p<0.01. Vol. 57, No. 4, 2013
262 한소리 한형윤 박희진 민병선 정문구 문경식 정자영 노항식 석지현 김상겸 가결과모든시험항목에서향부자추출물에기인한것으로판단되는변화는관찰되지않았다 (data not shown). 혈액학검사 (Table I) 에서도시험물질투여와관련된변화는관찰되지않았다. 수컷 1000 및 2000 mg/kg/day 투여군에서프로트롬빈시간이부형제대조군에비해통계적으로유의하게증가 ( 최대 1.1배 ) 하였다. 이러한프로트롬빈값변화는관련된조직학적변화가관찰되지않고변화의정도가크지않으며, 수컷에서만나타났으므로독성학적의의는없는것으로판단되었다. 혈액생화학검사 (Table II) 에서부형제대조군을제외한모든 투여군에서총콜레스테롤이증가한경향이나타났으며, 수컷 500 및 1000 mg/kg/day 투여군과암컷 250, 1000 및 2000 mg/kg/ day 투여군에서통계적으로유의하게총콜레스테롤이증가 ( 각각최대 1.14배및 1.24배 ) 하였다. 그러나조직병리검사에서이러한변화와연관지을수있는소견이관찰되지않고, 용량상관성이뚜렷하게관찰되지않았다. 또한 F344 랫드를이용한다른 13주독성시험 14,15) 및 F344 랫드의참고값 (Charles River Laboratories Japan, Inc.) 의총콜레스테롤범위에비춰봤을때, 총콜레스테롤의범위는수컷과암컷각각 62.1~70.0 mg/dl 및 80.5~93.9 mg/ Table II Serum chemistry value of rats treated orally with Cyperi rhizoma aqueous extract for 13 weeks Parameters Vehicle control 125 mg/kg 250 mg/kg 500 mg/kg 1000 mg/kg 2000 mg/kg Males GLU (mg/dl) 119.8±21.5 137.7±24.00 134.2±20.90 130.7±20.20 141.9±17.60 144.3±16.50 BUN (mg/dl) 17.4±1.6 17.2±1.10 17.7±1.30 17.0±1.00 16.9±1.20 16.3±1.10 CREA (mg/dl) 00.65±0.04 0.67±0.03 0.66±0.05 0.68±0.05 0.67±0.05 0.69±0.03 TP (g/dl) 07.50±0.32 7.52±0.34 7.37±0.31 7.64±0.30 7.66±0.33 7.59±0.18 ALB (g/dl) 04.68±0.10 4.66±0.12 4.63±0.12 4.70±0.11 4.72±0.14 4.70±0.07 A/G (ratio) 01.67±0.12 1.64±0.11 1.70±0.08 1.60±0.10 1.61±0.08 1.62±0.09 TCHO (mg/dl) 58.3±2.9 61.7±7.40 63.5±5.40 65.4±6.7*.66.5±3.8+ 63.1±5.30 TG (mg/dl) 054.7±18.1 65.9±29.5 57.0±13.8 65.7±18.2 73.3±27.2 72.0±26.2 PL (mg/dl) 103±60 109±140 108±800 113±100 115±800 113±900 AST (IU/l) 112.1±9.40 119.5±15.80 109.5±14.20 121.4±26.30 103.4±11.80 115.0±18.70 ALT (IU/l) 52.0±6.1 58.1±11.1 53.3±8.30 57.3±14.5 48.9±4.70 54.0±8.20 TBIL (mg/dl) 00.101±0.008 0.101±0.007 0.104±0.010 0.102±0.008 0.100±0.008 0.097±0.009 ALP (IU/l) 295.1±37.4 292.6±33.10 310.1±22.70 284.1±25.10 272.3±36.70 264.6±34.80 CK (IU/l) 633±94 625±960 544±750 651±216 596±137 602±152 Ca (mg/dl) 12.07±0.51 12.17±0.470 12.04±0.690 12.41±0.210 12.39±0.490 12.36±0.300 IP (mg/dl) 09.04±1.55 9.06±0.96 8.44±0.84 9.36±1.27 9.04±0.97 9.37±0.76 Na (mmol/l) 149±10 149±200 150±200 149±100 150±200 149±200 K (mmol/l) 06.74±1.11 6.90±0.52 6.74±0.51 7.06±0.59 6.55±0.53 6.57±0.44 Cl (mmol/l) 101±20 101±200 102±200 101±100 102±100 100±200 GGT (IU/l) 00.58±0.35 0.58±0.29 0.40±0.28 0.68±0.27 0.49±0.41 0.46±0.35 Females GLU (mg/dl) 078.5±15.7 93.1±20.0 100.1±89.70 89.7±9.50 90.2±15.4 92.2±20.0 BUN (mg/dl) 17.7±1.7 17.5±1.40 17.2±1.80 18.1±1.40 16.7±1.40 17.8±1.70 CREA (mg/dl) 00.62±0.04 0.65±0.04 0.65±0.04 0.64±0.03 0.63±0.04 0.62±0.04 TP (g/dl) 07.22±0.29 7.52±0.34 7.40±0.19 7.37±0.22 7.22±0.23 7.35±0.44 ALB (g/dl) 04.55±0.13 4.65±0.10 4.56±0.08 4.60±0.10 4.52±0.07 4.62±0.17 A/G (ratio) 01.71±0.08 1.63±0.13 1.61±0.07 1.66±0.10 1.69±0.09 1.70±0.11 TCHO (mg/dl) 83.7±7.4 98.9±19.0 103.4±13.2* 86.2±9.80 99.9±9.8* 100.4±19.7* TG (mg/dl) 51.3±9.1 57.4±20.0 56.5±15.6 46.0±8.40 56.8±17.9 47.9±8.50 PL (mg/dl) 155±13 185±34*..189±17+ 163±160.183±14+ 185±32* AST (IU/l) 102.3±11.1 101.3±10.40 105.1±20.20 107.0±15.10 100.0±11.50 102.1±22.80 ALT (IU/l) 40.3±7.7 38.0±2.80 41.0±9.60 41.3±8.00 39.9±7.50 40.2±10.8 TBIL (mg/dl) 00.106±0.006 0.112±0.008 0.107±0.006 0.111±0.010 0.104±0.009 0.107±0.009 ALP (IU/l) 198.9±25.6 215.3±35.90 188.3±24.70 217.2±34.40 180.6±21.40 194.5±30.20 CK (IU/l) 0533±137 533±131 495±900 506±108 507±850 417±520 Ca (mg/dl) 11.98±0.53 12.45±0.800 12.34±0.470 12.11±0.480 12.43±0.340 12.48±0.570 IP (mg/dl) 09.27±1.92 9.58±2.08 9.44±1.48 8.48±1.25 9.56±0.89 9.09±1.15 Na (mmol/l) 147±30 148±100 149±100 149±100 149±1*0 150±1+. K (mmol/l) 07.51±0.51 7.36±0.58 7.11±0.60 7.17±0.65 7.60±0.89 7.27±0.32 Cl (mmol/l) 102±30 103±200 102±200 105±2*0 104±200 105±2*0 GGT (IU/l) 01.40±0.36 1.24±0.32 1.44±0.54 1.41±0.71 1.25±0.40 1.16±0.35 Each value represents the mean±sd for ten rats. *Significantly different from the vehicle control at p<0.05. +Significantly different from the vehicle control at p<0.01. J. Pharm. Soc. Korea
향부자추출물의 13 주독성평가 263 Table III Absolute organ weight of rats treated orally with Cyperi rhizoma aqueous extract for 13 weeks Organ Vehicle control 125 mg/kg 250 mg/kg 500 mg/kg 1000 mg/kg 2000 mg/kg Males Brain (g) 1.933±0.067 1.951±0.035 1.933±0.032 1.926±0.074 1.919±0.051 1.936±0.053 Pituitary gland (g) 0.008±0.001 0.008±0.001 0.007±0.001 0.008±0.001 0.008±0.001 0.008±0.001 Liver (g) 7.477±0.716 7.953±0.692 7.476±0.546 8.176±0.678 8.219±0.518* 8.401±0.609+ Spleen (g) 0.601±0.040 0.628±0.058 0.630±0.031 0.640±0.031 0.612±0.035 0.630±0.038 Heart (g) 0.910±0.092 0.907±0.066 0.886±0.053 0.943±0.048 0.906±0.042 0.944±0.068 Thymus (g) 0.209±0.030 0.233±0.021 0.228±0.022 0.229±0.043 0.230±0.019 0.227±0.008 Salivary glands (g) 0.447±0.049 0.457±0.045 0.427±0.036 0.475±0.052 0.472±0.050 0.479±0.038 Seminal vesicle (g) 1.023±0.119 1.002±0.137 0.990±0.079 1.109±0.1288 1.122±0.134 1.156±0.115 Prostate (g) 0.278±0.054 0.237±0.038 0.233±0.050 0.223±0.040 0.238±0.047 0.246±0.036 Kidneys (g) 1.864±0.173 1.943±0.141 1.839±0.130 1.977±0.130 1.965±0.097 1.975±0.101 Adrenal glands (g) 0.044±0.007 0.044±0.005 0.041±0.004 0.044±0.005 0.045±0.006 0.047±0.004 Testes (g) 3.098±0.200 3.191±0.173 3.050±2.69 3.172±0.110 3.174±0.122 3.199±0.124 Epididymides (g) 1.020±0.062 1.062±0.073 0.964±0.078 1.051±0.047 1.044±0.053 1.044±0.030 Lung (g) 1.297±0.314 1.126±0.096 1.081±0.087 1.192±0.183 1.138±0.040 1.136±0.093 Thyroid/parathyroid (g) 0.015±0.003 0.015±0.003 0.013±0.001 0.015±0.002 0.015±0.003 0.016±0.002 Females Brain (g) 1.809±0.043 1.779±0.087 1.799±0.108 1.798±0.033 1.790±0.049 1.797±0.045 Pituitary gland (g) 0.011±0.002 0.010±0.001 0.011±0.002 0.010±0.002 0.010±0.001 0.011±0.002 Liver (g) 4.355±0.130 4.644±0.382 4.703±0.261 4.520±0.382 4.516±0.297 4.614±0.331 Spleen (g) 0.413±0.024 0.410±0.033 0.419±0.025 0.411±0.024 0.431±0.024 0.438±0.040 Heart (g) 0.610±0.054 0.623±0.059 0.628±0.049 0.634±0.042 0.614±0.057 0.609±0.036 Thymus (g) 0.208±0.016 0.202±0.029 0.200±0.023 0.202±0.043 0.207±0.024 0.186±0.021 Salivary glands (g) 0.321±0.023 0.325±0.031 0.328±0.014 0.321±0.035 0.318±0.021 0.318±0.031 Kidneys (g) 1.161±0.037 1.218±0.103 1.226±0.073 1.212±0.086 1.207±0.079 1.238±0.080 Adrenal glands (g) 0.048±0.004 0.049±0.006 0.050±0.004 0.051±0.007 0.050±0.005 0.050±0.004 Ovaries (g) 0.060±0.007 0.058±0.013 0.057±0.009 0.058±0.004 0.057±0.009 0.056±0.007 Lung (g) 0.925±0.098 0.991±0.311 0.911±0.072 0.854±0.070 0.864±0.091 0.840±0.049 Thyroid/parathyroid (g) 0.012±0.002 0.012±0.003 0.011±0.001 0.013±0.003 0.011±0.002 0.013±0.004 Uterus/cervix (g) 0.422±0.043 0.611±0.283 0.513±0.194 0.511±0.133 0.512±0.176 0.487±0.140 Each value represents the mean±sd for ten rats. *Significantly different from the vehicle control at p<0.05. +Significantly different from the vehicle control at p<0.01. dl로본결과와비교해봤을때, 크게차이가나지않았다. 따라서혈액생화학수치의변화를독성소견으로판단하지않았다. 부검소견및장기중량측정 (Table III) 에서시험물질과관련된변화가관찰되지않았다. 수컷 1000 및 2000 mg/kg/day 투여군에서부형제대조군에비해간의절대 ( 최대 1.12배 ) 및상대중량 ( 최대 1.08배 ) 의증가가관찰되었다. 그러나해당장기의조직학적검사에서이와연관된소견이관찰되지않았고, 이와관련있는혈액생화학수치의변화도없어, 시험물질투여와는무관한변화인것으로판단하였다. 그리고조직병리학적검경에서도시험물질투여와관련된변화가관찰되지않았다. 결론향부자추출물에대한활성성분, 약리작용및효과는많이알려져있으나, 아급성독성및안전성에대한연구결과및정보는찾아보기어렵다. 따라서본연구는향부자추출물의안전성을평가하기위하여 F344 랫드에게 13주간향부자추출불을반 복투여하고일반독성시험을진행하였다. 독성시험군은총 6개의군으로부형제대조군, 125, 250, 500, 1000 및 2000 mg/kg/ day 투여군으로구성하였다. 13주간향부자추출물을반복투여후치사율, 임상증상, 체중, 사료섭취량, 안검사, 혈액학, 혈액생화학, 뇨검사, 육안소견, 장기중량및조직병리검경을실시하였다. 결론적으로향부자추출물을 F344 랫드에 0, 125, 250, 500, 1000 및 2000 mg/kg/day의용량으로 13주간반복경구투여한결과사망률, 일반증상, 체중측정, 사료섭취량, 안검사, 뇨검사, 혈액학검사, 혈액생화학검사, 부검소견, 장기중량및조직병리학적검사에있어서시험물질과관련된소견은관찰되지않았다. 따라서본시험에서향부자추출물의무해용량 (NOAEL) 은암수각각 2000 mg/kg/day 이상으로사료된다. 감사의말씀본연구는 2011년도식품의약품안전청의연구개발비 (11182KFDA557) 로수행되었으며, 이에감사드립니다. Vol. 57, No. 4, 2013
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