Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society Vol. 14, No. 8 pp. 3907-3915, 2013 http://dx.doi.org/10.5762/kais.2013.14.8.3907 최학주 1,2, 김청택 3, 도민연 4, 랑문정 5* 1 대전대학교난치성면역질환동서생명의학연구센터 (TBRC), 2 큐슈대학교의학연구원천연물화학연구실, 3 ( 주 ) 알엔에스, 4 고성군농업기술센터, 5 배재대학교분자과학부 Physiological Activities of Cudrania tricuspidata Extracts (Part I) Hak Joo Choi 1,2, Cheong Taek Kim 3, Min Yeon Do 4 and Moon Jeong Rang 5* 1 Traditional and Biomedical Research Center (TBRC), Daejeon University 2 Department of Chemo-Pharmaceutical Science, Kyusu University 3 RNS, Ltd., 4 Goseong Agricultural Technology Center 5 Division of Molecular Science, Pai Chai University 요약꾸지뽕나무는한국과중국에서전통한방약재로오랫동안사용되어왔다. 본논문은꾸지뽕나무의잎, 줄기, 뿌리부분의에탄올추출물의물, 에탄올, 에칠아세테이트용해성분획물에대한생리활성에관한실험결과이다. 이들분획물들의다양한세포들의성장에대한영향을검토한결과, 잎, 줄기, 뿌리의에칠아세테이트분획물이 macrophage(raw 264.7 cell), melanoma cell(b16-f10 cell), fibroblast cell(ccd-986sk cell), lung carcinoma cell(a549 cell) 들의성장을현저하게억제시키는세포독성을나타내었다. 자유라디칼 DPPH (di(phenyl)- (2,4,6-trinitrophenyl) iminoazanium) 를소거할수있는분획물의농도를비교한결과, 잎과뿌리의물분획물그리고뿌리의에탄올분획물이다른분획물들에비해라디칼을소거하는항산화효과가더우수한것으로나타났다. Abstract Cudrania tricuspidata has been used for a long time as a traditional herb medicine in Korea nad China. This paper has shown the experimental results about the physiological activities of water-, ethanol-, ethyl acetate-soluble fractions from ethanolic extracts of leaves, stems and roots of Cudrania tricuspidata. The effects of these fractions on the growth of various cells have exhibited that the ethyl acetate fractions from leaves, stems and roots inhibited significantly the growths of macrophage(raw 264.7 cell), melanoma cell(b16-f10 cell), fibroblast cell(ccd-986sk cell), and lung carcinoma cell(a549 cell). The water and ethanol fractions of leaves and ethanol fraction of stems demonstrated better antioxidant activities scavenging radicals than other fractions when compared with the concentrations of different fractions for scavenging free radical DPPH (di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl) iminoazanium). Key Words : Anti-oxidant, Cudrania tricuspidata, Cytotoxicity, Physiological Activities 1. 서론 꾸지뽕나무 (Cudrania tricuspidata) 는굿가시나무라고도하는쌍떡잎식물쐐기풀목뽕나무의낙엽활엽교소목으로서 2 8m정도자라며한국 ( 황해도이남 ), 일본, 중국등지에분포하며산기슭의양지쪽이나마을부근에서자 란다. 가지에가시가있고, 잎은 3갈래로갈라진것과가장자리가밋밋하고달걀모양인것이있다. 꽃은암수딴그루이고 5 6월에두상꽃차례를이루며핀다. 열매는껍질이말라서단단해지고그속에종자를가지는수과이고열매들이모여덩어리를이루는데지름이 2 3cm 로둥근모양이고육질이며 9월에붉은색으로익는다. * Corresponding Author : Moon Jeong Rang(Pai Chai Univ.) Tel: +82-42-520-5919 email: mjrang@pcu.ac.kr Received July 2, 2013 Revised (1st July 18, 2013, 2nd July 25, 2013) Accepted August 7, 2013 3907
한국산학기술학회논문지제 14 권제 8 호, 2013 일반적으로잎은뽕잎대용으로누에사료로쓰고열매는먹을수있으며잼이나술을담그고, 줄기와뿌리는약용이나종이원료로쓰인다 [1-3]. 동의보감에서는자목 ( 柘木 ) 또는산뽕나무라고하는약재로서성질이따뜻하며맛이달고독이없으며풍허로귀먹은것과학질을낫게하며삶은물은노랗게물이든다고하였다 [4]. 또한중약대사전에서는꾸지뽕나무의뿌리를 ' 천파석 ( 穿破石 )', 나무껍질과뿌리껍질 ' 자목백피 ( 柘木白皮 )', 잎을 ' 자수경엽 ( 柘樹莖葉 )', 열매를 ' 자수과실 ( 柘樹果實 )' 이라고하여부위별로다양한효능의약재로서기재되어있다. 뿌리인천파석은풍사를몰아내고습을배출시키며혈을잘순환시키고월경을통하게하는효능이있으며. 풍습에의한관절통, 황달, 임탁 ( 임병 ), 고창 ( 주로간장병에복부가붓는증상 ), 폐경, 노상에의한해혈, 타박상, 정창, 부스럼을치료한다. 나무껍질과뿌리껍질인자목백피는신을보하고정을수렴하며혈을서늘하게하고근육과힘줄을푸는효능이있으며요통, 유정, 객혈, 구혈, 외상성손상을치료한다. 잎인자수경엽은부스럼, 습진을치료한하고소염하고통증을완화시키며풍을제거하고혈액순환을촉진시키고유행성이하선염, 폐결핵, 만성요퇴통, 타박노상, 부스럼, 종기, 급성관절좌상을치료한다, 열매인자수과실은열을내리고혈분에서열사를제거하며근육과힘줄을풀고낙맥을잘통하게한다 [5,6]. 위와같이다양한질환에오랫동안사용되어온꾸지뽕나무는최근에는느릅나무 ( 유근피 ), 하고초 ( 꿀풀 ), 와송과함께 4대항암약초로알려져특히자궁암, 난소암, 식도암, 대장암 ( 직장암 ), 위암, 결장암, 폐암, 간암, 모든소화기관암에대해항암효능이있는것으로관심을받고있다 [6,7]. 동의보감과중약대사전에기재된많은천연약재들이나타내는효능과작용기전을확인하기위해많은연구가수행되어온것처럼꾸지뽕나무에대해서도항균, 항산화, 항염, 항당뇨, 항고지혈증, 항고혈압, 항바이러스, 항세포독성, 항비만등의연구를통해꾸지뽕나무의효능을확인하기위한노력들이진행되고있다 [7-12]. 본연구에서는꾸지뽕나무의잎, 줄기, 뿌리부위별로추출물및분획물에대하여다양한세포독성과항산화실험을통해꾸지뽕나무의생리활성효과를확인하고활용분야확대를검토하는데도움이되고자한다. 2. 실험방법 2.1 시약및기기 2.1.1 약재본연구에서사용된꾸지뽕나무는고성군농업기술센 터에서공급받아줄기, 잎, 뿌리의부위별로나누어분쇄기로분쇄하여사용하였다. 2.1.2 시약 Lipopolysaccharide(LPS), dimethyl sulfoxide (DMSO), di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl) iminoazanium (DPPH), 2,7 -dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA) 는 Sigma 사 ((Saint Louis, USA) 에서, Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), Fetal Bovine Serum(FBS), Penicillin 및 Streptomycin은 Hyclone사 (Logan, Ut, USA) 에서, Cell viability assay kit은 Daeillab sevice사 (Seoul, Korea) 에서구입하였다. 2.1.3 기기본실험에사용된기기는 ELISA reader (Molecular Devices, U.S.A) 와 Flow cytometry system(bd Biosciences immunocytometry systems, U.S.A.) 등을이용하였다. 2.2 실험방법 2.2.1 꾸지뽕나무의생리활성성분의추출및용매분획물제조가. 꾸지뽕나무의생리활성성분의추출꾸지뽕나무의잎, 줄기및뿌리각 500 g씩취하여 5배부피의에탄올을가하고 80 에서 3시간동안환류추출한후여과지로여과하였다. 여과액을 40 ~ 50 에서감압농축하여에탄올엑스를각각 94 g, 53 g, 131 g을얻었다. 나. 용매분획물제조 [Fig. 1] 꾸지뽕나무각부위별에탄올엑스에 5배부피의초산에칠을가한후상온에서 3시간환류추출한후여과하여얻은초산에칠가용분획을 40 ~ 50 에서감압농축하여각각의초산에칠분획물 (EA fr.) 을 26 g, 3 g, 49 g을얻었다. 초산에칠에녹지않는각각의잔사에 5배부피의에탄올을가한후상온에서 3시간환류추출한후여과하여얻은에탄올가용분획을 40 ~ 50 에서감압농축하여각각의에탄올분획물 (EtOH fr.) 을 21 g, 18 g, 29 g을얻었다. 에탄올에녹지않는각각의잔사에 5배부피의증류수를가하고상온에서환류추출한후여과하여얻은증류수가용분획을 40 ~ 50 에서감압농축하여각각의물분획물 (DW fr.) 을 47 g, 32 g, 53 g을얻었다. 다. 생리활성평가시료의조제꾸지뽕나무의잎, 줄기, 뿌리의물, 에탄올, 초산에칠분획물각각의 100 mg을 DMSO 10 ml에녹인후, 0.2 μm 3908
멤브레인필터로여과하여생리활성평가시료로사용하였다. 라. A549 cells A549 cells은 96 well plates에 2X10 3 cells/well로분주하여 24시간동안배양한후, 각각의추출물을각각농도별로처리하여 24시간동안배양하였다. 배양후, 10 ul 의 WST solution을첨가한후 CO2 배양기 (37, 5% CO 2) 에서 30분반응시킨후, 450 nm에서흡광도의변화를측정하여대조군에대한세포생존율을백분율로표시하였다. [Fig. 1] Scheme of Solvent Fractionation 2.2.2 세포독성가. RAW 264.7 cells RAW 264.7 cells은 96 well plates에 10 4 cells/well로분주하여 24시간동안배양한후, 각각의추출물을각각농도별로처리하여 24시간동안배양하였다. 배양후, 10 ul의 WST solution을첨가한후 CO2 배양기 (37, 5% CO 2) 에서 30분반응시킨후, 450 nm에서흡광도의변화를측정하여대조군에대한세포생존율을백분율로표시하였다. 나. B16-F10 cells B16-F10 cells은 96 well plates에 10 4 cells/well로분주하여 48시간동안배양한후, 각각의추출물을각각농도별로처리하여 24시간동안배양하였다. 배양후, 10 ul 의 WST solution을첨가한후 CO2 배양기 (37, 5% CO 2) 에서 30분반응시킨후, 450 nm에서흡광도의변화를측정하여대조군에대한세포생존율을백분율로표시하였다. 다. CCD-986sk cells CCD-986sk cells은 96 well plates에 10 4 cells/well로분주하여 24시간동안배양한후, 각각의추출물을각각농도별로처리하여 24시간동안배양하였다. 배양후, 10 ul의 WST solution을첨가한후 CO2 배양기 (37, 5% CO 2) 에서 30분반응시킨후, 450 nm에서흡광도의변화를측정하여대조군에대한세포생존율을백분율로표시하였다. 2.2.3 DPPH소거능측정자유라디칼소거활성시험은안정한자유라디칼 DPPH (di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl) iminoazanium) 를사용하는방법으로에탄올에용해시킨 0.2 mm의 DPPH 용액 150 ul와각각의추출물 (25, 50, 100, 200 ug/ml) 100 ul 를각각혼합하고, 37 에서 30분간반응시킨후, 517 nm에서흡광도를측정하였다. 대조군은시료액대신증류수를넣었으며, DPPH 용액대신에탄올을넣어보정값을얻었다. 자유라디칼소거율은아래의식에따라계산하였다. 소거율 (%) = ( 대조군의흡광도 - 시료첨가군의흡광도 ) 대조군의흡광도 x 100 2.2.4 세포내 ROS생성측정 Raw 264.7 세포내에서 reactive oxygen species (ROS) 를측정하기위하여 2,7 -dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA) 를이용하였다. 12 well plate에 Raw 264.7 세포를 1.5 10 5 cells/well이되게분주하였다. 24시간동안배양한후, 여기에 LPS 및각각의추출물을 10 100 μg / ml의농도로각각의 well에첨가한후, 24시간동안 3 7, 5% CO 2 배양기에서배양한후 1,200 rpm에서 5분간원심분리하였다. 원심분리후모은세포를차가운 PBS로 2회세척한후 DCF-DA 10 μm이되도록첨가하여 15분동안빛이차단된상온에서염색하였다. 염색후차가운 PBS를넣어 1,200 rpm에서 5분간원심분리한다음상등액을제거하고다시 PBS 400 μl를부유시켜유세포분석기 (Flow cytometer, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA) 를이용하여형광강도의세기에따른변화를분석하였다. 2.2.5 실험결과의통계처리세포독성, DPPH 소거능측정, 세포내 ROS생성실험등모든실험결과는 SPSS 11.0의 unpaired student's T-test를사용하여통계처리하였으며 P<0.05, P<0.01 및 P<0.001 수준에서유의성을검정하였다. 3909
한국산학기술학회논문지제 14 권제 8 호, 2013 3. 결과및고찰 3.1 세포독성실험결과 3.1.1 RAW 264.7 cells Murine macrophage인 RAW 264.7 세포주에서잎, 줄기, 뿌리각각의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물이세포에미치는영향을측정한결과 Fig. 2와같은결과를나타내었다. 대조군의세포생존율을 100% 로하였을때, 각각의추출물은 10-100 ug/ml의농도에서 90% 이상의세포생존율을나타내었는데, 잎의에틸아세테이트추출물만 100 ug/ml의농도에서세포독성이나타나서 10과 50 ug/ml의농도로처리하였다. 3.1.2 B16-F10 cells Murine melanoma cell인 RB16-F10 세포주에서잎, 줄기, 뿌리각각의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물이세포에미치는영향을측정한결과 Fig. 3과같은결과를나타내었다. 대조군의세포생존율을 100% 로하였을때, 각각의추출물은 10-100 ug/ml의농도에서 80% 이상의세포생존율을나타내었는데, 잎, 줄기, 뿌리의에틸아세테이트추출물만 100 ug/ml의농도에서세포독성이나타나서 10과 50 ug/ml의농도로처리하였다. [Fig. 2] Effect of Each Extract on the Cell Viability of RAW 264.7 Cells Cells were treated with 10-100 ug/ml of each extract for 24 hr. Cell viability was determined using the WST assay. The results are expressed as mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with only cells. [Fig. 3] Effect of Each Extract on the Cell Viability of B16-F10 Cells Cells were treated with 10-100 ug/ml of each extract for 24 hr. Cell viability was determined using the WST assay. The results are expressed as mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with only cells. 3910
3.1.3 CCD-986sk cells Human skin fibroblast cell인 CCD-986sk 세포주에서잎, 줄기, 뿌리각각의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물이세포에미치는영향을측정한결과 Fig. 4와같은결과를나타내었다. 대조군의세포생존율을 100% 로하였을때, 각각의추출물은 10-100 ug/ml의농도에서 84% 이상의세포생존율을나타내었는데, 줄기의에틸아세테이트추출물만 100 ug/ml의농도에서세포독성이나타나서 10과 50 ug/ml의농도로처리하였다. 3.1.4 A549 cells Human lung carcinoma cell인 A549 cells에서잎, 줄기, 뿌리의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물이암세포에 미치는영향을측정한결과 Table 1과같은결과를나타내었다. 대조군의세포생존율을 100% 로하였을때, 잎의물과에탄올추출물은 200 ug/ml의농도에서도 85% 이상의세포생존율을나타내었으나, 에틸아세테이트추출물만 50, 100, 200 ug/ml의농도에서 25%, 54%, 76% 의세포독성을나타냈다. 줄기의에탄올추출물은 200 ug/ml 의농도에서도세포독성이나타나지않았으나, 물과에틸아세테이트추출물은 50, 100, 200 ug/ml의농도에서각각 25%, 54%, 76% 와 0%, 45%, 89% 의세포독성을나타냈다. 뿌리물추출물은 200 ug/ml의농도에서도세포독성이나타나지않았으나, 에탄올과에틸아세테이트추출물은 50, 100, 200 ug/ml의농도에서각각 17%, 17%, 20% 와 10%, 15%, 33% 의세포독성을나타냈다. [Fig. 4] Effect of Each Extract on the Cell Viability of CCD-986sk Cells Cells were treated with 10-100 ug/ml of each extract for 24 hr. Cell viability was determined using the WST assay. The results are expressed as mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with only cells. [Table 1] Effect of Each Extract on the Cell Viability of A549 Cells Groups Conc.(ug/ml) DW(%) EtOH(%) EA(%) Leaf Stem Root 50 117.2 ± 4.6 103.7 ±19.7 75.9 ± 0.4 *** 100 107.0 ±15.0 87.7 ± 7.9 46.1 ± 1.2 *** 200 106.3 ± 0.4 86.4 ±10.9 24.3 ± 2.0 *** 50 75.9 ± 0.4 ** 199.9 ± 2.3 111.3 ±11.8 100 46.1 ± 1.2 ** 100.3 ±12.5 55.9 ±17.0 200 24.3 ± 2.0 ** 110.5 ±11.6 11.5 ± 5.4 ** 50 142.5 ± 7.6 83.3 ± 7.0 90.8 ± 9.2 100 141.6 ±14.1 83.3 ±12.0 85.6 ± 4.3 * 200 138.8 ± 7.4 80.3 ± 6.6 67.2 ±12.2 * Cells were treated with 50-200 ug/ml of each extract for 24 hr. Cell viability was determined using the WST assay. The results are expressed as mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with only cells (*P<0.05, **P< 0.01, ***P< 0.001). 3911
한국산학기술학회논문지제 14 권제 8 호, 2013 대부분의식물과마차가지로꾸지뽕나무가함유한생리활성성분들은폴리페놀계화합물, 즉 flavonoid 유도체들로써대표적인성분은 flavonone, flavonol, flavonol glycoside, flavonone glycoside, xanthone 등이다 [13]. 이들성분중 flavonol, xanthone 등이 tumor cell들에대해세포독성효과를나타낸다 [14-16]. 꾸지뽕나무를알코올로추출한추출물중잎부위추출물이가장높은페놀함량을보여주는연구결과 [17] 와뿌리분분의에틸아세테이트추출물이가장현저한세포독성을보였다는연구결과 [14] 를고려한다면본실험에서잎부위의에틸아세테이트추출물이가장높은세포독성효과를보인것은추출부위와추출조건이상이하지만종전의실험결과의일관성을유추할수있다. 단실험대상세포에따라분획추출물의세포독성정도의차이는분획추출물중의성분상의차이와이에따른세포의민감성의차이로판단된다. 3.2 항산화실험결과 3.2.1 DPPH 소거능효과잎, 줄기, 뿌리의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물 25-200 ug/ml의농도에서 DPPH 소거능에미치는영향을 측정한결과, Table 2와같은결과를나타내었다. 대조군을 0으로보았을때, 잎의물추출물은 25-200 ug/ml의농도에서 11%, 15%, 23%, 43%, 에탄올추출물은 5%, 12%, 20%, 24%, 에틸아세테이트는 10%, 17%, 29%, 37% 의소거능을보였다. 줄기의물추출물은 25-200 ug/ml의농도에서 1%, 6%, 10%, 15%, 에탄올추출물은 8%, 13%, 23%, 29%, 에틸아세테이트추출물은 1%, 3%, 6%, 10% 의소거능을보였다. 또한, 뿌리의물추출물은 10%, 13%, 19%, 41%, 에탄올추출물은 17%, 22%, 25%, 54%, 에틸아세테이트추출물은 10%, 11%, 12%, 28% 의소거능을보였다. 3.2.2 ROS 생성억제효과 RAW 264.7 세포주에서잎, 줄기, 뿌리의물, 에탄올, 에틸아세테이트추출물이 ROS 생성억제에미치는영향을측정한결과, Table 3과같은결과를나타내었다. 대조군을 100으로보았을때, 정상군에비해 3.4배증가하였고, 잎과줄기의물추출물과뿌리의에탄올추출물과에틸아세테이트추출물은효과가거의없었으나, 잎의에탄올추출물은 10과 100 ug/ml의농도에서 10% 와 17%, 에 [Table 2] DPPH Fee Radical Scavenging Activity of Each Extract Groups Conc.(ug/ml) DW(%) EtOH(%) EA(%) 25 10.6 ± 1.2 5.4 ± 2.3 9.9 ± 1.9 Leaf 50 15.1 ± 1.9 12.0 ± 4.2 17.2 ± 1.3 100 23.4 ± 4.4 20.0 ± 8.6 28.9 ± 1.9 200 43.2 ± 2.7 24.3 ± 6.4 37.3 ± 1.9 25 1.1 ± 2.8 7.5 ± 1.0 0.9 ± 1.3 Stem 50 6.2 ± 0.6 12.9 ± 1.7 2.9 ± 0.5 100 9.9 ± 1.6 23.4 ± 2.2 5.6 ± 0.8 200 15.1 ± 5.2 29.3 ± 4.7 9.6 ± 1.1 25 10.2 ± 0.4 16.8 ± 2.6 9.8 ± 5.5 Root 50 13.4 ± 0.5 21.8 ± 4.0 10.8 ± 9.2 100 18.5 ± 0.5 24.7 ± 2.2 12.1 ± 5.2 200 41.1 ± 0.5 54.1 ± 5.1 28.2 ± 1.3 Extracts were incubated with DPPH solution at 37 for 30 mins. Activities were determined by measurement of absorbance at 517 nm. The results are expressed as mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with 0 ug/ml. [Table 3] Effect of Each Extract on ROS Production in RAW 264.7 cells Groups Conc.(ug/ml) DW(%) EtOH(%) EA(%) Leaf 10 96.6 ± 8.1 89.8 ±12.8 93.0 ±14.6 100 101.4 ±10.0 82.9 ± 4.9 * 82.5 ±15.8 Stem 10 123.9 ±17.1 116.7 ±11.4 99.9 ±13.6 100 112.2 ±11.5 86.2 ±18.9 75.0 ±20.8 Root 10 90.4 ± 7.4 108.9 ± 0.8 137.1 ± 9.5 100 105.2 ± 2.2 96.1 ± 4.4 246.9 ±28.3 Raw 264.7 cells were stimulated with LPS(1 μg / ml ) and treated with 10-100 μg / ml of each extract for 24 hrs. The ROS production was analysed following incubation with DCFH-DA by flow cytometry. The results are presented by the mean±sd from three independent experiments. Statistical significance is based on the difference when compared with control (*P<0.05). 3912
틸아세테이트추출물 10과 50 ug/ml의농도에서각각 7% 와 17%, 줄기의에탄올추출물과에틸아세테이트추출물 100 ug/ml의농도에서는 14% 와 25%, 뿌리물추출물 10 ug/ml의농도에서는 10% 의생성억제능을보였다. ROS는세포의구성성문에손상을주어세포의대사활동저해및사멸을유도한다. 일반적으로폴리페놀은 ROS에전자를공여함으로써 ROS의반응성을감소시켜 ROS에의한세포의산화적손상을방지한다 [18,19]. ROS의일종인 DPPH에전자를공여하여 non-radical DPPH로변환시키는항산화능력은잎과줄기부위추출물이뿌리부분추출물보다높은것으로나타났다. 이는당연히부위별로함유된성분또는부위별로추출된성분들의종류및양의차이로기인한것으로판단된다. 대식세포내에서의 ROS생성에대한꾸지뽕나무추출물의억제효과는미미한것으로나타났다. ROS자체에대해서는어느정도의항산화효과가있으나대식세포의대사과정에서항산화성분의기능이발현되지못한것으로판단된다. 4. 결론 꾸지뽕의각부위 ( 잎, 줄기, 뿌리 ) 에대한각용매 ( 물, 에탄올, 에틸아세테이트 ) 분획물들의세포독성, 항산화에대한효과를평가한결과다음과같은결과를얻었다. 첫째, 꾸지뽕나무의잎, 줄기및뿌리각부위별에탄올엑스를에칠아세테이트, 에탄올, 증류수를이용하여용매분획을수행하여꾸지뽕의각부위별에칠아세테이트, 에탄올, 물분획물을제조하였다. 둘째, murine macrophage인 RAW 264.7 cell 에대한세포독성은각부위별 / 용매별세포생존율이잎의에틸아세테이트분획물은 50 ug/ml의농도이하에서그리고나머지는 100 ug/ml 이하에서세포독성을나타내지않았다. 셋째, murine melanoma cell인 B16-F10 cell 에대한세포독성은각부위별 / 용매별세포생존율이잎, 줄기, 뿌리의에틸아세테이트분획물물은 50 ug/ml의농도이하에서그리고나머지는 100 ug/ml 이하에서세포독성을나타내지않았다. 넷째, human skin fibroblast cell인 CCD-986sk cell 에대한세포독성은각부위별 / 용매별세포생존율이줄기의에틸아세테이트분획물은 50 ug/ml의농도이하에서그리고나머지는 100 ug/ml 이하에서세포독성을나타내지않았다. 다섯째, human lung carcinoma cell인 A549 cell의생 장억제효과를측정한결과, 잎의에틸아세테이트분획물의모든농도에서유의성있는 (***P<0.001) 억제효과를나타내었고, 줄기의물분획물모두와줄기의에틸아세테이트분획물에서유의성있는 (**P<0.01) 억제효과를나타내었다. 그리고뿌리의에틸아세테이트분획물의 100 ug/ml과 200 ug/ml 처리에서유의성있는 (*P<0.05) 억제효과를나타내었다. 여섯째, 항산화효과의자유라디칼 DPPH 소거능을측정한결과, 잎의물분획물 200 ug/ml, 뿌리의물분획물 200 ug/ml에서 40% 이상의소거효과와뿌리의에탄올분획물 200 ug/ml 처리에서 50% 이상의소거효과를나타내었다. 그리고 RAW 264.7 세포주에서의 ROS생성억제효과는분획물들모두전체적으로효과를나타내지않았다. 위실험결과를통해꾸지뽕나무의잎, 줄기, 뿌리의에틸아세테이트추출물이 macrophage, melanoma cell, skin fibroblast cell, lung carcinoma cell 등의성장을현저하게억제하는세포독성을나타났으며, 꾸지뽕나무의잎과뿌리의물, 에탄올추출물이라디칼을소거하는항산화효과가나타났다. 본연구를토대로앞으로지속적인연구를통해꾸지뽕나무의식품, 의약, 화장품등다양한분야에의소재의응용가능성을높일수있을것으로판단된다. References [1] Y. N. Lee, New Flora of Korea, I, p.246-247, Kyo-Hak Publishing Co. Ltd., 2006. [2] J. S. Kim and T. Y Kim, Woody Plants of Korea, p.142, Dolbegae, 2011. [3] Doopedia(Doosan Encyclopedia), Cudrania tricuspidata, Doosan Corporation, Available From http://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_ method=view&mas_idx=101013000831679, (accessed May 24, 2013) [4] Heo-Jun, Translation Dongui Bogam, pp.1972, Bub-In Culture Co., 1999. [5] C. M. Kim, Translation Encyclopedia of Oriental, p.4166, p.3357, p.3582, Herbal Medicine, Jeong-Dam, 2004. [6] D. M. Jeon, Cudrania tricuspidata, Available From http://www.jdm077.com, (accessed May 24, 2013) [7] H. J. Lee, J. R. Do, J. H. Kwon and H. K. Kim, Physiological Activities of Extracts from Different Parts of Cudrania tricuspidata, J Korean Soc Food Sci Nutr, 40, 7, pp.942~948, 2011. 3913
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도민연 (Min Yeon Do) [ 정회원 ] 1995 년 2 월 : 강릉대학교원예학과 ( 학사 ) 1995 년 8 월 : 속초시농촌지도소농촌지도사입사 1996 년 12 월 ~ 2012 년 2 월 : 강원도고성군농업기술센터 2012 년 2 월 ~ 현재 : 강원도고성군농업기술센터원예특작담당 < 관심분야 > 원예특용작물 랑문정 (Moon Jeong Rang) [ 정회원 ] < 관심분야 > 계면활성제, 화장품 1973 년 2 월 : 서울대학교공과대학화학공학과 ( 공학사 ) 1998 년 5 월 : Rice University, Department of Chemical engineering (Ph. D) 1979 년 8 월 ~ 2006 년 2 월 : LG 화학 /LG 생활건강연구원 / 연구위원 2006 년 3 월 ~ 현재 : 배재대학교분자과학부교수 3915