2012 년도혈액검사학회ㆍ수혈검사학회연합추계학술대회일정표 일시 : 2012 년 11 월 3 일 ( 토 ) 13:30~17:40 장소 : 건국대학교병원대강당 시간순서좌장 13:30 ~ 14:00 개회식행사 - 14:00 ~ 14:30 구연 -1 ( 유전 ) 심문정교수 14:30 ~ 14:45 구연 -2 ( 수혈 ) 최범열고문 14:45 ~ 15:30 특강 -1 ( 수혈 ) 김동찬학회장 15:30 ~ 15:50 Coffee break - 15:50 ~ 16:20 특강 -2 ( 면허재신고등 ) 이귀순학회장 16:20 ~ 17:00 특강 -3 ( 혈액 ) 함천경고문 17:00 ~ 17:30 구연 -3 ( 혈액 ) 변대훈고문 17:30 ~ 17:40 폐회및기념촬영 - i -
학술발표안내학술발표안내 구연발표 Ⅰ( 유전 ) 좌장 : 심문정교수 FISH검사전처리자동화장비 XmatrxTM와수기법의비교평가 세브란스병원진단검사의학과 / 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성 서울아산병원진단검사의학과 / 김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 구연발표 Ⅱ( 수혈 ) 좌장 : 최범열고문 Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 / 양성식 특강 Ⅰ( 수혈 ) 좌장 : 김동찬학회장 수혈의학의현재와미래 서울의대검사의학교실, 분당서울대병원진단검사의학과 / 박경운 특강Ⅱ( 면허재신고등 ) 좌장 : 이귀순학회장 2014년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사 / 이상호 특강 Ⅲ( 혈액 ) 좌장 : 함천경고문 체액세포검사 울산의대서울아산병원 / 장성수 구연발표Ⅲ( 혈액 ) 좌장 : 변대훈고문 PFA-100의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A & B position 검사결과비교연구 고려대학교안산병원진단검사의학과 / 박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 6-color판넬을이용한형질세포암의유세포분석 세브란스병원진단검사의학과 / 류희정ㆍ양미숙ㆍ김경숙ㆍ김수정 - ii -
목 차 논 문 1. 제대혈무게에따른전혈구수 (complete blood count) 참고치메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 3 2. 한국의제대혈이식과보관 : 11 년간의기증제대혈은행운영현황메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 양정윤ㆍ최기훈ㆍ김희정ㆍ임소진ㆍ홍혜경ㆍ오원일 10 3. 냉동보관된제대혈조혈모세포의냉동전과해동후의보관기간별검사결과분석메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 임소진ㆍ김희정ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 19 구연발표 Ⅰ( 유전 ) 1. FISH 검사전처리자동화장비 XmatrxTM 와수기법의비교평가세브란스병원진단검사의학과 / 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 29 2. Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성서울아산병원진단검사의학과 / 김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 30 구연발표 Ⅱ( 수혈 ) 3. Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 / 양성식 33 특강 Ⅰ( 수혈 ) 1. 수혈의학의현재와미래서울의대검사의학교실, 분당서울대병원진단검사의학과 / 박경운 37 특강 Ⅱ( 면허재신고등 ) 2. 2014 년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사 / 이상호 51 특강 Ⅲ( 혈액 ) 3. 체액세포검사울산의대서울아산병원 / 장성수 55 - iii -
구연발표 Ⅲ( 혈액 ) 4. PFA-100 의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A&B position 검사결과비교연구고려대학교안산병원진단검사의학과 / 박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 59 5. 6-color 판넬을이용한형질세포암의유세포분석세브란스병원진단검사의학과 / 류희정ㆍ양미숙ㆍ김경숙ㆍ김수정 61 포스터 ( 유전 ) 1. HLA-B51 유전자검사의양성율조사와고찰삼광의료재단 / 윤은희 65 2. IUGR( 자궁내성장지연 ) 로의뢰된염색체검사결과에대한분석및고찰삼광의료재단세포유전검사팀 / 김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 66 3. 고령산모의양수염색체검사결과에대한유형분석삼광의료재단세포유전검사팀 / 김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 67 4. Premature ovarian failure 환자의염색체핵형분석 1 예의료법인삼광의료재단 / 권지현 68 5. ssmc 가발견된양수검체의부모혈액염색체결과분석의료법인삼광의료재단 / 권지현 69 6. 산모들의 MTHFR C677T 유전자단일염기다형성의빈도의료법인삼광의료재단 / 진한울 70 7. 자연유산으로의뢰된수태산물염색체검사결과의유형삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 71 8. Patau, Edward, Down Syndrome 에서의산모의나이유형삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 72 9. 혈액종양에서관찰되는 Y 염색체소실삼광의료재단세포유전검사팀 / 권윤정 73 10. 조기폐경의심환자의핵형결과 46,X,idic(X)(q27) 1 례삼광의료재단세포유전검사팀 / 김진현 74 11. PCR & Sequencing 법을이용한글리벡내성유전자변이통계조사녹십자의료재단 / 방성희ㆍ전희선ㆍ김윤경ㆍ조은해 75 12. BCR-ABL IS 정량검사소개의료법인녹십자의료재단인간유전체팀 / 전희선 76 13. 습관성유산환자의증가추세와염색체이상의분포삼광의료재단 / 박영주 77 - iv -
14. 양수검체상태에따른검사소요일삼광의료재단 / 박영주 78 15. marker chromosome 의기원을알아본증례보고 (2 예 ) 삼광의료재단 / 박영주 79 16. 선천성난청을유발하는 GJB2 유전자돌연변이빈도의료법인삼광의료재단 / 이연주 80 17. 혈액질환별염색체핵형분석과임상적의의네오딘의학연구소유전체연구센터 / 임경옥ㆍ송지원ㆍ이현정ㆍ최수현ㆍ한재이ㆍ신은심 81 18. Jacobsen syndrome 을보이는환자의핵형분석과임상적특징고찰서울아산병원 / 권은미 82 19. Imatinib 에저항성이있는유전자변이의빈도서울아산병원 / 권미량ㆍ최미옥ㆍ박상혁ㆍ조영욱ㆍ지현숙 83 20. 18p deletion 증후군에관한증례보고서울아산병원 / 오유겸 84 21. Cytogenetic Microarray 으로확인한 15 번염색체의 Prader-willi/Angelman syndrome 1 예녹십자의료재단의학유전체연구소제 2 연구팀 / 김주연ㆍ강유선ㆍ조은해 85 22.Chromosomal microarray 로확진한말초혈액의 X 염색체단완 (Xp22.31) 의 STS 유전자결실녹십자의료재단 / 백민정ㆍ강유선ㆍ조은해 86 23. Myelodysplastic syndrome 환자의골수 chromosomal analysis 와 Cytogenetic Microarray 분석결과증례보고녹십자의료재단 / 남옥이ㆍ강유선ㆍ조은해 87 포스터 ( 혈액 ) 1. 당화혈색소 (Hb A1c) 검사의보관온도별검체안정성검사녹십자의료재단진단검사의학부혈액학팀 / 유일호 88 2. 최근 3 년간 Malaria 양성율보고녹십자의료재단감염유전체팀 / 김은주ㆍ박용원ㆍ장자현ㆍ조은해 89 3. Microarray 로확인한 ALL 환자의 Bone marrow 결과 2 건녹십자의료재단 / 구선영ㆍ강유선ㆍ조은해 90 4. 검체보관조건에따른 Lymphocyte Subset 검체안정성평가녹십자의료재단 / 이숙정 91 5. 혈액응고검사 (PT, aptt) 시약제조시온도변화에따른결과값의영향녹십자의료재단 / 김영래 92 6. 제대혈의단핵세포비율과재태연령의상관성분석메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 최정미ㆍ양정윤ㆍ김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 94 - v -
7. Cooling 시간에따른제대혈세포생존도의변화추이관찰메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 / 유옥선ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 95 8. Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase 측정시위양성예울산의대서울아산병원진단검사의학과 / 전소현ㆍ박정숙ㆍ최미옥ㆍ지현숙 96 9. AMC 의 CBC 정도관리물질허용범위설정방법소개서울아산병원진단검사의학과 / 최미옥ㆍ김종화ㆍ김동제ㆍ박찬정 97 10. 2009 년 ISTH 에서제안된 Lupus Anticoagulant(LA) 검사방법도입서울아산병원 / 이명심ㆍ최미옥ㆍ장성수ㆍ지현숙 98 11. 국내말라리아 PCR 의양성추이조사의료법인삼광의료재단 / 이연주 99 12. PFA-100 closure time 에영향을미치는요소와유용성인제대학교해운대백병원진단검사의학과 / 권형범 100 13. Mixing test 를위한 Homemade Normal Pooled Plasma 의제조및평가세브란스병원진단검사의학과 / 배가희ㆍ양미숙ㆍ김선경ㆍ김일ㆍ김수정 101 14. Stago revolution 장비를이용한 D-dimer 정량검사의유용성평가삼광의료재단 / 박홍철 102 15. Stago revolution 장비를이용한 FDP 정량검사의유용성평가삼광의료재단 / 박홍철 103 포스터 ( 수혈 ) 1. 검체보관조건이동종응집소역가에미치는영향국립암센터진단검사의학과 / 서희승ㆍ송윤경ㆍ안태규ㆍ김강림공선영 104 2. 항 -E 를지닌간이식환자에게서추가동정된항 -Di a 검출사례서울아산병원혈액은행 / 김효진 105 3. 제대혈의 Hematocrit 과 LRP(Leukocyte rich plasma) 의관계분석메디포스트 생명공학연구소 / 이선미ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 106 4. 단일혈액원에서처음시행한헌혈혈액에대한 B 형간염핵산증폭검사경험한마음혈액원 / 윤형주ㆍ김근옥ㆍ안현기ㆍ박지훈ㆍ정희숙ㆍ황유성 107 5. NBM-200 장비를이용한헌혈자헤모글로빈의측정연세의료원세브란스병원진단검사의학과 / 노연희ㆍ이은경ㆍ김신영ㆍ김현옥 108 6. Duffy a (Fy a ) 항원음성혈액출고증례 1 예인천적십자혈액원 1 ㆍ중앙검사센터 2 ㆍ가천대중앙길병원 3 ㆍ미 8 군 121 병원 4 / 이충영ㆍ송창면 1 ㆍ김종필ㆍ김종훈 2 ㆍ김한규 3 ㆍ남필순 4 109 7. 성분채혈혈소판제제의혈소판수 (yield) 에따른사용실태및현황한마음혈액원제제공급팀 / 김희범ㆍ김자선ㆍ김정남ㆍ이정은ㆍ이원아ㆍ김종원 110 - vi -
논문 혈액 ( 논문 1) 수혈 ( 논문 2 ~ 3) - 1 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 1 제대혈무게에따른전혈구수 (complete blood count) 참고치 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Complete Blood Count Reference Values according to Weights of Cord Blood Hee Jung KimㆍHye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Korea Family cord blood banking are comprised of diverse weights of at least 40g to more than 200g. In this study, we analyzed CBC parameters of the CB to establish CBC reference values according to weight of large-scale family cord blood. We examined using cord blood divided into three groups based on difference of cord blood weight. The results, we could not assort the reference intervals of each group because each group did not have differences of differential count of WBC and platelets. Thus, we set up the reference intervals based on analysis of three groups data. Whereas hemoglobin (Hb) and white blood cell (WBC) set up in accordance with differences of cord blood weight. The reference intervals of CBC according to weight is as in the following. Group of 40-99g : Hb, 6.8-12.3g/dL; WBC, 4.0-14.6x10 3 /μl; Group of 100-139g : Hb, 9.6-13.9g/dL; WBC, 5.3-17.0x10 3 /μl; Group of more than 140g : Hb 10.0-14.9g/dL; WBC 6.1-18.7x10 3 /μl. Differential count of WBC (neutrophils, 32.0-71.1%; lymphocytes, 18.3-58.6%; monocytes, 3.9-10.5%; eosinophils, 1.0-6.7%; basophils, 0.4-1.9 %); platelet, 91.3-272.1x10 3 /μl. We suggest that the established CBC reference values from this study will be useful as basic data for CBC interpretation of CB in the family cord blood bank are comprised of diverse weights. Key Words : Cord blood, Weight, Reference value, CBC Ⅰ. 서론 현대의학에서최근까지가장과학적인근거를가지고질병치료에이용되고있는분야는탯줄속의혈액을이용한제대혈분야이다. 제대혈에조혈모세포가다량포함되어있어임상에적용이가능하다는연구결과가처음발표 [1] 된이래로특히골수이식을시행할수없는백혈병환자에대한새로운치료법으로자리를잡았다. 여러난치성혈액질환이나유전성질환의 - 3 -
치료에제대혈이식이성공적으로이루어지고있으며, 전세계적으로제대혈은행들이활발하게설립운영되기시작하였다 [2]. 국내에서도제대혈은행들이활발하게운영되고있으며이러한제대혈은행의운영형태는두가지로나뉘어지는데, 비혈연간제대혈조혈모세포이식을목적으로하는기증제대혈은행과자가또는혈연간이식을목적으로하는가족제대혈은행이다. 기증제대혈과가족제대혈의보관적합한총유핵세포수 (total nucleated cells, TNC) 의기준은다른데, 제대혈관리및연구에관한법률시행령제 10조에의하면, 기증제대혈은보관처리전총유핵세포수가 8억개이상이고가족제대혈의경우, 총유핵세포수검사항목은위탁자의명시적인동의가있으면적합기준을다르게지정할수있다고되어있어제대혈은행마다가족제대혈의보관적합한총유핵세포수기준은차이가있다. 가족제대혈은기증제대혈에비해채취량의분포가다양하여, 채취된제대혈의무게를측정해보면최소 40g에서최대 200g 이상까지의분포를보인다. 제대혈이의료기관에서채취되어제대혈은행으로입고가되면여러검사를거친후법규에서규정한보관적합한제대혈만선별보관이가능하게된다. 법규에규정된제대혈검사로는제대혈유핵세포수및세포생존율, 미생물배양검사및감염성질환검사등이있다. 전혈구수 (complete blood count, CBC) 검사는제대혈의유핵세포수산정을위한기본검사이며, 제대혈저장여부를결정짓는첫번째요소이다. 하지만, 최근까지제대혈의전혈구수검사결과해석을중요시여기지않았다. 그리고제대혈에서전혈구수의참고치를설정한대규모연구결과가많지않아제대혈의검사결과해석과저장적합성평가에있어외국에서소규모로연구한결과 [3-5] 나말초혈액의전혈구수참고치를부분적으로참고하고있는실정이다. 이에저자들은제대혈은행에위탁보관된다양한채취량의분포를갖는가족제대혈검체를대상으로제대혈의무게에따른전혈구수에대한참고치를설정하고자하였다. Ⅱ. 대상및방법 1. 대상 2011년 8월 11일부터 12월 31일까지메디포스트 ( 주 ) 제대혈은행에위탁되어가공후보관이완료된제대혈 5,533단위를대상으로하였다. 채취된제대혈은무게에따라세개의무게군으로나뉘었고 40 99g은 2,989단위, 100 139g 은 2,171단위, 140g 이상은 373단위로분석하였다. 2. 방법 1) 무게측정제대혈은각분만병원에서항응고제 (citrate posphate dextrose adenine,cpda-1) 24.5mL 포함된채취백에채취되어져운송담당자에의해실온상태를유지하여제대혈은행으로운반된다. 운송된제대혈은먼저제대혈채취백에달려있는긴라인을 sealer (Tube sealer, SE200, Centron Technologies Corporation, Korea) 를이용하여봉합후제거한다. 라인이정리된채취백을저울 (BJ 410C, Precisa Instruments Ltd., Switzerland) 에올려무게를재고계측된값에서채취백의무게를뺀값을취한다. 본연구에서설정된제대혈무게는채취된순수제대혈량에항응고제 (citrate posphate dextrose adenine, CPDA-1) 24.5mL가포함된값이다. - 4 -
2) 검사채취백의제대혈을 10분이상잘혼합한후 1mL를채취하여전혈구수검사를시행하였다. 분석장비로는자동혈구분석기 ADVIA 2120 (Siemens, USA) 을이용하였고혈색소, 백혈구수, 백혈구감별계수 ( 호중구, 림프구, 단구, 호산구, 호염구백분율 ), 혈소판수를측정하였다. 3) 항목별참고치설정기준제대혈의측정값에서 1/3 법칙에따라, 즉최대측정값에서두번째로큰측정값을뺀절대값이최대측정값과최소측정값차이의 1/3 이상이면이때의최대측정값은이상치 (outlier) 로간주하여참고치설정에서제외하였고, 최소측정값에도같은기준을적용하였다. 항목별로제대혈측정값의평균 (Mean) 과표준편차 (SD), 2.5 및 97.5 백분위수를산출하였으며, 정규분포가확인된항목은모수법 (Mean±2SD) 으로, 정규분포가확인되지않은항목은비모수법 (2.5-97.5 백분위수 ) 으로참고치를설정하였다 [6, 7]. 통계분석에는 SPSS 16.0 프로그램 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 과 Excel 2007 (Micro soft Office, USA) 을사용하였다. Ⅲ. 결과 정규분포를확인한결과, 제대혈무게군 40 99g은백혈구수와혈소판수에서정규분포가정이성립되었고나머지무게군에서는혈소판수에서만정규분포가정이성립되었다. 항목별로제대혈측정값의평균 (Mean) 과표준편차 (SD), 2.5 및 97.5 백분위수를산출하여, 제대혈전혈구수의평균과표준편차는 Table 1에, 2.5 및 97.5 백분위수는 Table 2에제시하였다. 모든무게군에서정규분포를확인한혈소판수는모수법 (Mean±2SD) 에의하여하한과상한참고범위를설정하였으며, 나머지항목은정규분포가정이성립되지않아비모수법인 2.5 percentile과 97.5 percentile 각각의값을참고범위의하한과상한으로설정하였다 (Table 3). Table 1. Complete blood count values (Mean±SD) by weight groups of cord blood 40-99g 100-139g >140g Hb (g/dl) 10.1±1.5 11.8±1.1 12.5±1.3 WBC (x10 3 /μl) 8.3±2.7 9.9±3.0 10.8±3.2 Differential count (%) Neutrophil 53.9±9.9 53.4±10.1 53.6±10.0 Lymphocyte 35.1±10.3 35.9±10.4 35.8±10.5 Monocyte 7.0±1.7 6.8±1.7 6.8±1.7 Eosinophil 3.1±1.5 3.0±1.5 2.9±1.4 Basophil 1.0±0.7 0.8±0.4 0.9±0.3 Platelet (/μl ) 166.9±40.5 197.1±43.6 211.0±46.0 Abbreviation: CBC, complete blood count; WBC, white blood cell. - 5 -
Table 2. Complete blood count values (2.5-97.5 percentile) by weight groups of cord blood 40-99g 100-139g >140g Hb (g/dl) 6.8-12.3 9.6-13.9 10.0-14.9 WBC (x10 3 /μl) 4.0-14.6 5.3-17.0 6.1-18.7 Differential count (%) Neutrophil 32.1-71.1 31.7-71.2 32.6-70.1 Lymphocyte 17.8-58.7 18.6-58.3 19.2-59.0 Monocyte 4.0-10.4 3.9-10.5 3.7-10.3 Eosinophil 1.1-6.7 0.9-6.7 0.9-6.8 Basophil 0.4-2.1 0.4-1.7 0.4-1.8 Platelet (/μl ) 98-260 126-297 133-313 Abbreviation: See Table 1. Table 3. Complete blood count reference values by weight groups of cord blood 40-99g 100-139g >140g Hb (g/dl) 6.8-12.3 9.6-13.9 10.0-14.9 WBC (x10 3 /μl) 4.0-14.6 5.3-17.0 6.1-18.7 Differential count (%) Neutrophil 32.1-71.1 31.7-71.2 32.6-70.1 Lymphocyte 17.8-58.7 18.6-58.3 19.2-59.0 Monocyte 4.0-10.4 3.9-10.5 3.7-10.3 Eosinophil 1.1-6.7 0.9-6.7 0.9-6.8 Basophil 0.4-2.1 0.4-1.7 0.4-1.8 Platelet (/μl ) 85.9-247.9 109.9-284.3 119.0-303.0 Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method (2.5-97.5 percentile). Abbreviation: See Table 1. Table 3에서알수있듯이, 혈색소와백혈구수는무게군에따라비례적으로높아지는반면, 백혈구감별계수는무게군에따른큰차이가없음을알수있다. 혈소판수는 40-99g 무게군의하한값이다른두무게군에비해낮은편으로, 이는제대혈양이적을수록혈색소, 백혈구수가낮은요인과같은효과로볼수있다. 위결과를토대로, 혈색소와백혈구수는무게군에따라참고치를설정하였고, 백혈구감별계수와혈소판수는무게군별참고범위를구분하지않고전체제대혈값을대상으로참고범위를설정하여 Table 4에제시하였다. - 6 -
Table 4. Complete blood count reference values according to weight of cord blood 40-99g 100-139g >140g Hb (g/dl) 6.8-12.3 9.6-13.9 10.0-14.9 WBC (x10 3 /μl) 4.0-14.6 5.3-17.0 6.1-18.7 Differential count (%) Neutrophil 32.0-71.1 Lymphocyte 18.3-58.6 Monocyte 3.9-10.5 Eosinophil 1.0-6.7 Basophil 0.4-1.9 Platelet (/μl ) 91.3-272.1 Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method (2.5-97.5 percentile). Abbreviation: See Table 1, Table 5. Comparison between CBC reference values established in this study and the study using donated CB units donated CB units This study Hb (g/dl) 9.0-14.4 7.3-13.7 WBC(x10 3 / μl ) 5.6-18.5 4.3-16.1 Differential count (%) Neutrophil 40.8-72.4 32.0-71.1 Lymphocyte 17.2-46.7 18.3-58.6 Monocyte 4.9-12.8 3.9-10.5 Eosinophil 0.7-7.0 1.0-6.7 Basophil 0.0-1.6 0.4-1.9 Platelet (/ μl ) 130-286 91.3-272.1 Estimated by using parametric method (mean±2sd); the other results using non-parametric method (2.5-97.5 percentile). Abbreviation: See Table 1; CB, cord blood. Ⅳ. 고찰 최근의학의발전으로제대혈을이용한난치병치료에많은진전을보이고있고세포치료제의중요한자원으로도활용됨으로써제대혈의활용가치는더욱더높아질것으로보인다. 최근에제대혈이조혈모세포이식에이용되어지는경우가종종생김으로써임상적인중요성이커지고있어제대혈의전혈구수에대한연구가필요하다. 참고범위의설정과해석은임상에있어매우중요한문제지만제대혈보관에있어참고범위의설정과결과해석에관한인식은매우낮은편이다. 현재사용하고있는제대혈의전혈구수 - 7 -
참고범위는외국에서소규모로연구한결과 [3-5] 이거나말초혈액의참고치로, 제대혈에그대로적용하는것이타당한지에대한정확한검토없이참고하고있는실정이다. 제대혈에대한정확한참고범위가존재하지않아, 실무에서는자동혈구분석기를이용하여전혈구수측정시재검사를해야하거나도말표본을제작하여수기법으로확인해야하는경우가많이발생한다. 특히백혈구감별계수 ( 호중구, 림프구, 단구, 호산구, 호염구백분율 ) 는제대혈가공처리의진행및저장여부를결정하는요인에크게영향을미치지않는검사항목이면서도전혈구수검사에서재검을많이요구하는항목이기도하다. 이는현재사용하고있는참고범위의오류를보여주는것이라생각된다. 최근에국내에서자동혈구분석기를이용한제대혈전혈구수에대한대규모연구 [6] 가보고되었다. 이연구는아무런대가없이순수하게기증된제대혈을보관하는기증제대혈은행의제대혈 2,129단위를대상으로하였고, 이연구에서산정한제대혈전혈구수참고치 [6] 와비교해보면, 본연구에서제대혈의혈색소, 백혈구수그리고혈소판수가상대적으로낮았는데 (Table 5), 이러한차이는채취된제대혈의용량차이에서오는결과로생각된다. 가족제대혈이기증제대혈에비해보관적합한총유핵세포수의기준이낮기때문에보관가능한제대혈용량도비례하여적다. 제대혈의총량에따른총유핵세포수의상관관계를본연구결과를보면제대혈의용량이증가함에따라총유핵세포수 (total nuclea ted cells, TNC) 가증가하는것을볼수있었으며, 이는모두통계학적으로유의한상관관계를보였다 [8]. 본연구에서는위탁자와의계약에의해서위탁보관을하고있는가족제대혈은행을기준으로하여제대혈채취량에있어다양한분포를갖는가족제대혈검체를대상으로제대혈의무게에따른전혈구수에대한참고치를설정하였다. 본연구는대단위의가족제대혈을대상으로하였고제대혈의채취량을세개의무게그룹으로나뉘어제대혈무게에따라전혈구수참고치를설정했다는점에서의의가있다. 본연구를통해설정된참고치는제대혈무게군이다양한가족제대혈을보관하는제대혈은행에서제대혈검사결과를해석하는데유용할것이고, 더나아가제대혈이질병치료에효과적으로사용되기위해서는냉동보관되는제대혈에대한품질관리가우선되어야하는데, 그것의기본이될것이다. 참고문헌 [1] Knudtzon S. In vitro growth of granulocytic colonies from circulating cells in human cord blood. Blood. 1974;43:357-61. [2] Young-Ho Lee, M.D., Ph.D. Cord Blood-Current Status and Perspective. Korean J Hematol 2007;42:181-196. [3] Pranke P, Failace RR, Allebrandt WF, Steibel G, Schmidt F, Nardi NB. Hematologic and immunopheotypic characterization of human umbilical cord blood. Acta Haematol 2001;105:71-6 [4] Walka MM, Sonntag J, Kage A, Dudenhausen JW, Obladen M. Complete blood counts from umbilical cords of healthy term newborns by two automated cytometers. Acta Haematol 1998;100:167-73. [5] Rolfo A, Maconi M, Cardaropoli S, Biolcati M, Danise P, Todros T. Nucleated red blood cells in term fetuses: reference values using an automated analyzer. Neonatology 2007;92:205-8. - 8 -
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혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 2 한국의제대혈이식과보관 : 11 년간의기증제대혈은행운영현황 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 양정윤ㆍ최기훈ㆍ김희정ㆍ임소진ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Cord Blood Banking and Transplantation in Korea: A 11 Years Experience of a Single Public Bank Jung Yun YangㆍKi Hoon ChoiㆍHee Jung KimㆍSo Jin Limㆍ Hye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Republic of Korea Background: Umbilical cord blood(ucb) has successfully used for transplantation to treat wide variety of disorders. Herein, we describe the experience generated during this period(november 2000-December 2011) in a single public cord blood bank in Korea. Method: Good manufacturing practice and standard operating procedures were used to address donor selection as well as UCB collection, processing, cryopreservation and release. Total nucleated cells(tncs), cellular viability, CD34+ cells were determined, and infectious diseases screening test, sterility test, and HLA typing for UCB units were done. Results: 8,434 UCB units were cryopreserved in 11 years. The volume of UCB units was 102.2±20.2ml. The number of TNCs after processing was 8.16±2.62x10 8.0.28±0.16% of the TNCs were CD34+ cells. Based mainly in HLA and nucleated cell content, 419 UCB units were released for transplantation. Conclusion: A public UCB bank was successfully established in Korea; collection and processing of UCB units should be optimized in order to gain maximum volume and cell count. Key words : Umbilical cord blood, transplantation, cryopreservation I. 서론 1988년세계최초로제대혈이동종조혈모세포이식에성공적으로사용하였다. 이환자는판코니빈혈을앓고있는 5세의남아로, 환자의여동생출생시제대혈을채취및처리하여냉동보관하였으며, 환자와의주조직적합성항원이일치함을확인한뒤이식을시행하였다 [1]. 국내에서는 1999년재발된급성혼합형백혈병환자에게동생의냉동보관제대혈을이식하여처음으로성공하였으며, 그이후부터간헐적으로제대혈이식이이루어졌으나 2003년 1월부터제대혈이식이소아에서의료보험급여인정을받게되면서증가하는추세이다 - 10 -
[18,19]. 현재제대혈유래동종조혈모세포이식은백혈병, 선천성면역결핍증, 골수부전증, 대사이상증후군을포함한다양한질환에효과적인치료방법으로쓰이고있다 [2]. 제대혈은혈액 면역학적기능을가진조혈모세포와전구세포를포함하고있고, 제대혈은행에서는조혈모세포성분을분리가공후냉동상태로저장하였다가이식을필요로하는시점에서해동하여사용할수있다. 또한, 조혈모세포이식에사용하는제대혈은이식편대숙주병 (graftversus-host disease,gvhd) 의발병이낮아 HLA 1 2개가불일치해도이식이가능하며, 미리세포를분리하여조직적합항원 (Human Leukocyte antigen,hla) 검사완료후냉동상태로저장하기때문에 HLA가일치하는공여자를찾기위한시간도필요하지않다. 제대혈은행은산모로부터기증받은제대혈에서조혈모세포를보관한후저장하였다가향후조직적합성이일치하는환자의이식을위해사용하는기증은행과태어날아이의보호자에의해보관의뢰계약을하여아이본인또는아이와조직적합항원 (HLA) 이부분또는완전일치하는가족이사용하기위한가족은행의두가지형태로운영한다. 최초의기증제대혈은행은 1993년 Rubinstein 등이설립한 New York Blood Center이다 [3]. 한국에서는 2011년관련법 ( 제대혈관리및연구에관한법률 ) 의허가를받은 17개의제대혈은행이있으며, 이중가족제대혈은행만운영하는기관, 기증제대혈은행만운영하는기관, 두가지형태모두운영하는기관이있다. 2000년설립한본제대혈은행은기증은행과가족은행두가지형태의은행을모두운영하고있다. 본내용에서는기증제대혈은행에서의제대혈보관과이식에관한경험을기술하고자한다. II. 대상및방법 1. 대상 2000년 11월 6일부터 2011년 12월 31일까지메디포스트 ( 주 ) 기증제대혈은행에제대혈기증을서면으로동의한산모로부터채취한제대혈중저장에적합한제대혈 8,434단위를대상으로하였다. 2. 방법 1) 채취기증동의서에자발적으로동의및서명한산모에게서출산시분만을담당한산부인과의사가태아만출직후태반이나오기전에제대를결찰하고항응고제 CPDA(citrate-phosphatedextrose-adenin)-1을포함한채취백에채취절차에따라제대혈을채취하였으며, 채취된제대혈은운송담당자에의해온도 (4-25 ) 를유지하면서기증동의서및채취기록문서와같이제대혈은행으로운반하였다. 2) 검사기증된제대혈은일차적으로산모의의학병력기록과제대혈채취기록를검토한후제대혈은행표준업무지침 ( 보건복지부,2005.08) 과제대혈관리및연구에관한법률 ( 보건복지부,2011.07) 에부합한검사를시행하였다. 혈액량은채취백의무게를제외한혈액량과항응고제 (CPDA-1) 양을측정한후, 1mL를채취하여처리전세포수와세포생존도를검사하였다. 제대혈은행표준업무지침에따라처리한농축제대혈 (concentrated leukocyte rich plasma, CLRP) 0.5mL에서는처리후총유핵세포수 (total nucleated cells:tncs),cd34 양성세포 - 11 -
수 ( 조혈모세포양성표지자 ) 를검사하였다. 동결보존제첨가후냉동직전소량의혈액을채취하여처리후세포생존도를검사하였다. (1) 세포생존도검사 : 0.4% Tryphan blue dye exclusion법 (Tryphan blue solution,sigm A) 으로시행하였고, 검사자간오차를줄이기위해한검체에두명이상교차확인하여평균값으로나타내었다. (2) 총유핵세포수 (Total nucleated cell, TNC): 자동혈액분석기 SYSMEX KX-21(Sys mex, Kobe, Japan) 과 ADVIA 2120(SIMENS Healthcare, USA) 를이용하여가공처리후의백혈구수를확인하였다. (3) CD34 양성세포수 (CD34+ cells) 검사 : 처리후농축제대혈의 CD34 양성세포수를유세포분석기 FACSCalibur(Becton Dickinson, USA) 를이용하여확인하였다. 검사는 ISHAG 방법에따라 FITC-CD45 단클론항체 (Becton Dickinson, USA) 로백혈구분획을 gating하고 PE-CD34 단클론항체 (Becton Dickinson, USA) 로 CD34 양성세포수를산정하였다. (4) 조직적합성항원검사 (HLA Typing): high resolution PCR-SSOP 방법으로 INNO-L ipa Kit(INNOGENETICS, Belgium) 와 Dynal Kti(Biotech, UK) 의시약과분석프로그램을사용하였다. (5) 혈액형검사 : anti-a(murine IgM monoclonal,millipore,uk), anti-b(murine IgM mon oclonal,millipore,uk), anti-d(human IgG/IgM monoclonal,uk) 로시행하였으며처리전혈액과처리후제거된농축적혈구를대상으로검사하였다. (6) 미생물배양검사 (Sterility test): 분리후제거된혈장을호기성혈액배양용기 (Thi oglycollate broth,tsb,komed, 한국 ) 와혐기성혈액배양용기 (Trypticase soy broth: THIO,KOMED, 한국 ) 에각각 2mL씩분주하여 37 배양기 (JEIOTEC, 한국 ) 에서 7일간배양후, 맹검배양 (Blind culture) 을시행하여균의유무를확인하였다. 이검사는제대혈채취시와운송, 처리과정중의혈액오염을확인하기위함이다. (7) 감염성질환검사 : 제대혈의혈장과제대혈과함께입고된산모혈액으로 C형간염검사 (anti-hcv), B형간염검사 (HBs Ag), 선천성면역결핍바이러스검사 (anti-hiv ty pe 1/2), 매독검사 (Treponemal test,tpha), 거대세포바이러스 (Cytomegalo virus,anti -CMV IgM) 검사, 인체T림프영양성바이러스 (Human T-lymphotropic virus,anti-htl V type1/2) 를시행하였다. 상기검사중 HLA Typing 검사와감염성질환검사는 랩지노믹스검사센터연구소에수탁을의뢰하여시행하였다. 3) 가공외부의오염물질혼입을방지하기위해혈액백외부를소독하고백의파손여부를확인한후, 채취량을측정하였다. 최초세포상태를확인하기위해혈액 1mL을채취하고, 채혈량 1:4의비율로혈장증량제인 hetastarch(hes,pentaspan, 제일약품, 한국 ) 를혈액백에첨가하였다. 혈장증량제와혈액을혼합한후, 원심분리장비 (Sorvall RC3C+, Kendro Laboratory Products,USA) 와분리기 (Auto volume expressor, Thermogenesis, USA) 를사용하여적혈구와혈장을제거하고조혈모세포가포함된농축제대혈층 (concentrated leukocyte rich plasma, CLRP) 20mL을동결보존제 5mL과함께냉동백 (ThermoGenesis Corporation& Pall Corporation,USA) 으로옮겼다. 혈액분리와제거작업을위한혈액의이동은 Transfer bag set(thermogenesis Corporation& Pall Corporation,USA) 를사용하여무균적으로시행하였 - 12 -
다. 50% dimethyl sulfoxide(dmso, Cryosev, Bioniche Teo., Inverin, Co.Galway, Ireland) 와 dextran 40( 대한약품공업, 한국 ) 를포함한동결보존제는가공처리한농축제대혈에실린지펌프 (Syring pump, KD Scientific,USA) 를사용하여지정한속도를주입하였고, 최종 DMSO 의농도는 10% 이었다 [3]. 냉동백은밀봉하여오염과충격을방지하기위해캐니스터에넣고자동냉각장치인 CRF(controlled-rate freezer, Thermo Scientific CryoMed Freezer, USA) 를사용하여냉각하였다. 냉각된혈액은액체질소를담은초저온냉동보관 Tank(MVE, MVE-Chart, USA) 에 -196 로장기간저장하였다. 4) 이식가공처리와검사의과정에서일탈이발생하지않고, 제대혈은행표준업무지침과제대혈관리및연구에관한법률기준을준수한제대혈의모든검사결과와정보는국내외각이식센터의전문의가조회및검색할수있도록한국조혈모세포은행협회 (Korea Marrow Donor Program,KMDP) 또는질병관리본부장기이식관리센터 (Korea Network for Organ Sharing, KONOS) 의검색프로그램에등록하였다. 이식센터에서는환자와 HLA가주조직복합체수준에서 A,B,DR이일치하거나부분일치하는제대혈을선정하여제대혈은행으로정보확인을요청하고, 제대혈은행은냉동보관중인제대혈의 segment part로확인검사를시행하였다. 이식이확정되면일정에맞춰이식센터로제대혈을온도추적장치가부착된이동용운송용기에넣어 -196 의온도를유지하여환자에게제공하였다. 2001년부터 2011년까지본제대혈은행에서제대혈이식을수행한환자를대상으로이식세포수, 질환별, HLA 일치율별, 연도별현황등을조사하였다. III. 결과 1) 가공및검사채취한혈액량은 102.2±20.2ml(range,70.0-221.0), 가공처리후총유핵세포수는 8.16± 2.62. x10 8 /unit(range,5.0-46.0) 이었다. 냉동전 CD34 양성세포수는 2.24±1.84x10 6 / unit(range,0.0 5-39.24) 이고, CD34 양성세포비율은 0.28±0.16%(range,0.04-1.80) 이었다. 가공전세포의생존도는 96.7±2.1%(range,82.0-99.0), 냉동전동결보존제첨가한세포의생존도는 85.8±3. 8%(range,80.0-97.0) 으로나타났다 (Table 1). Table 1. 채취량과세포수, 세포생존도검사결과 Mean(Range) SD Volume collected( 70ml), ml 102.2(70.0-221.0) 20.2 TNCs after processing, x10 8 /unit 8.16(5.0-46.0) 2.62 CD34+cells, x10 6 /unit 2.24(0.05-39.24) 1.84 Rate of CD34+/CD45+ cells,% 0.28(0.04-1.80) 0.16 Cells viability before processing,% 96.7(82.0-99.0) 2.1 Cells viability after processing(add DMSO),% 85.8(80.0-97.0) 3.8 본제대혈은행에서의 HLA-A는총 17alleles, HLA-B는총 39alleles, HLA-DRB1은총 14 alleles로확인하였다. 대부분의빈도는 A*02, A*24, A*33, A*11, A*26, B*44, B*62, - 13 -
B*51, B*61, B*58, B*35, B*54, DRB1*04, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*08, DRB1*09, DRB1*14, DRB1*12, DRB1*01, DRB1*07를보였다 (Table 2). Table 2. HLA 유전자빈도 HLA-A* % HLA-B* % HLA-DRB1* % 02:XX 49.9 44:XX 19.9 04:XX 35.5 24:XX 39.3 62:XX 19.1 15:XX 21.8 33:XX 29.8 51:XX 18.7 13:XX 21.0 11:XX 20.1 61:XX 17.0 08:XX 19.0 26:XX 13.5 58:XX 12.4 09:XX 18.7 35;XX 12.3 14:XX 15.0 54:XX 11.5 12:XX 14.9 01:XX 12.6 07:XX 12.5 9,053 단위의제대혈중미생물배양검사를시행하여 0.77%(70/9,053) 의세균검출률을보였다. 감염질환검사는 0.07%(6/9,053) 의양성율을나타냈다. 감염검사항목별로는 HBs Ag 양성 0%(0/9,053), anti-hcv 양성 0.02%(2/9,053), anti-hiv1/2 양성 0%(0/9,053), TPHA 양성 0.02%(2/9,053), CMV IgM 양성 0.02%(2/9,053) 이었다. 감염질환양성제대혈은산모의산전혈액에서도모두양성의결과를보였다. 2) 이식 2001년 3월 14일부터 2011년 12월 29일까지총 309명의환자에게 419단위의제대혈을이식하였다. 이중성인 51명에게제대혈 72단위, 소아 258명에게 347단위를이식하였으며, 냉동보관된제대혈중 4.97%(419/8,434) 를이식에사용하였다. 이식환자의체중은 31.7±20.12Kg(range,5.0-86.0) 이었고, 이식한제대혈의총유핵세포수는 10.37x10 8 ±3.70/ unit(range,3.20-32.4), CD34 양성세포수는 4.23X10 6 ±2.92/unit(range,0.5-23.7) 을나타냈다 (Table 3). 이식시주입한제대혈의총유핵세포수는평균 3.27x10 7 /Kg, CD34양성세포수는평균 1.33x10 5 /Kg를나타냈다. Table 3. 제대혈이식대상환자의체중과세포수 Mean(Range) SD 체중, Kg 31.7(5.0-86.0) 20.12 TNCs, x10 8 /unit 10.37(3.20-32.40) 3.70 CD34+cells, x10 6 /unit 4.23(0.5-23.7) 2.92 국내이식센터에 415단위, 국외이식센터에 4단위를불출하였고국외이식센터로는미국, 스웨덴, 호주, 캐나다로각국가별이식적합절차에따라시행하였다. 제대혈조혈모세포이식대상질환은백혈병이 81.2%(251/309), Aplastic anemia를비롯한빈혈이 7.4%(23/309) 이며골수이형성증후군, 림프조직구증식증, 골석화증, Wiskott- - 14 -
Aldrich 증후군, 중증복합면역결핍증을비롯한기타질환이 11.3%(35/309) 를나타냈다 (Table 4). Table 4. 제대혈조혈모세포이식환자질환분포대상질환 환자 ( 명 ) % 급성골수성백혈병 (AML, ANLL) 112 36.2 급성림프구성백혈병 (ALL) 101 32.7 연소성골수단구성백혈병 (JMML) 14 4.5 만성골수성백혈병 (CML) 10 3.2 기타백혈병 (Infantile leukemia등 ) 14 4.5 Anemia(aplastic, fanconi, congenital dyserythropoietic) 23 7.4 골수이형성증후군, 림프조직구증식증, 골석화증 18 5.8 Wiskott-Aldrich syndrome, Adreno-leukodystrophy 7 2.3 증증복합면역결핍증,ChronicEBVinfection,congenital Neutropenia, 4 1.3 Krabbe disease, Neuroblastoma 등 6 1.9 Total 309 100 조혈모세포이식을시행한제대혈과환자와의 HLA 일치율의분포는완전일치 8.1%(34/419), 1개불일치 65.8%(276/419), 2개불일치 25.1%(105/419), 3개불일치 0.96%(4/419) 를보였다. 연도별제대혈이식은 2001년 13단위, 2002년 10단위, 2003년 27단위, 2004년 52단위, 2005년 58단위, 2006년 96단위, 2007년 60단위, 2008년 40단위, 2009년 33단위, 2010년 14단위, 2011년 16단위를시행하였다 (Fig. 1). Fig. 1. 제대혈연도별이식사례 - 15 -
IV. 고찰 제대혈은다양한유전, 혈액, 면역, 대사, 종양질환의치료를위한조혈모세포와전구세포를포함하고있는임상적으로유용한자원이다 [4-6]. 골수나 PBSC(Peripheral Blood Stem Cell) 에비해제대혈의가장큰장점은조혈모세포이식시제대혈은행에서제대혈을즉시공급받을수있고, 이식으로인한이식편대숙주병 (Graft-versus-host-disease,GVHD) 이상대적으로낮다는것이다 [7-8]. 이러한이유로세계의각지역에서제대혈을가공하여동결보관하는제대혈은행을운영하고있다. 우리나라는 1997년삼성서울병원과가톨릭대학교에기증제대혈은행을설립하였고, 본은행은 2000년설립하여기증자의조건을제대혈은행표준업무지침 ( 보건복지부,2005.08) 과제대혈관리및연구에관한법률 ( 보건복지부,2011.07) 에준수하여선정하였다 [9,18]. 본은행에보관중인총유핵세포수는 8.16±2.62x10 8 으로다른나라에비해낮은수치를보이며이는세포수득률이더높은자동분리장비를사용하기때문으로사료된다. 동결보존제를첨가한세포의생존도는 85.8±3.8% 으로이식적합한수치 ( 80%) 이며, 제대혈내세균배양검사에서의 0.77% 의오염율은외국제대혈은행의세균오염율보다훨씬낮은수치를보인다. 상기결과는본은행이분리가공에적합한시설과안정된기술로제대혈은행을운영하고있음을증명한다 [11]. 제대혈의조직적합성을분석한결과 HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 의유전자빈도는이미보고된한국인의유전자빈도와일치하였다 [16-17]. 본은행은 2010년까지국내제대혈이식의 77.8%(388/499) 를수행하였고 [15], 보관된총 8,434단위의제대혈중 419단위가환자이식을위해사용하였다. 2006년이후로본은행의제대혈이식이감소하기시작한것은이시점에설립된기증은행인서울특별시립보라매병원제대혈은행영향때문일것으로생각한다. 10년동안본은행제대혈이식사용율은 4.97% 로바르셀로나제대혈은행 (4.67%) 과비슷한수치를, 뉴욕제대혈은행 (6.59%) 과동경제대혈은행 (6.21%) 보다는낮은사용율을보인다 [12]. 소아에서 HLA가 1 2개불일치한제대혈을이식받은경우에골수이식을받은경우보다생착은느리지만대부분의환자에서완전한조혈기능을회복하게된다는보고가있었다 [20,21]. 반면, 성인에서는이식에필요한총유핵세포수의상대적부족으로인하여많은환자들에게적용되지못하고있으며, 본은행의결과도이식환자의 82.8% 가소아였으며, 대상질환은백혈병이 81.2% 를차지하였다. 그러나혈액종양질환이외의골수이형성증후군을비롯한다른대사및유전질환에제대혈이식을시행하는것으로보아대상질환의범위가확대되고있다고볼수있다. 제대혈이식의치료성적을좌우하는데는주입되는세포수가가장중요한인자이며, 세포수가많게되면 HLA 불일치를일부극복할수도있다 [18]. 많은연구자들이성공적인제대혈이식을위한최소한의주입총유핵세포수로서 3.0x10 7 /Kg, CD34 양성세포수는최소한 1x10 5 /Kg가필요하다고한다 [18,21]. 본은행의이식시주입하는총유핵세포수는 3.27x10 7 /Kg이며, CD34 양성세포수는 1.33x10 5 /Kg으로이식시충분한세포가환자에게투여되었다고사료된다. 최근의학의발전으로제대혈을이용한난치병치료에많은진전을보이고있다. 이와같은제대혈이질병치료에효과적으로사용되기위해서는냉동보관되는제대혈에대한품질관리가우선기반이되어야한다. 제대혈의품질은분리방법, 절차, 저장온도및관리에영향을받으며이에본은행에서는 closed system과적혈구와혈장의양을줄이는방법을이용하여실용성과효율성, 비용면에서도유용하게운영하고있다 [10]. 이분리, 저장방법은본제대혈은행 - 16 -
설립시국내소개된이후타제대혈은행에서도동일한방법으로처리, 보관하고있으며제대혈채취및분리방법을표준화하였다. 2011년 7월보건복지부에서는제대혈과제대혈은행의품질관리에대한법적근거를마련하기위해 제대혈관리및연구에관한법률 을제정하여시행하였다. 이는국가적인제대혈은행에대한관리와규제로인해조혈모세포이식을비롯한세포치료제로사용할수있는제대혈에대한높은수준의품질관리를요구한다. 본은행은관련법에서제시한품질관리수준이상으로현재운영하고있으며, 이로인해환자의질병치료에제대혈을효과적으로사용할수있고제대혈은행에대한높은신뢰가생길수있기를기대한다. 참고문헌 [1] Hurley CK, Raffoux C: World Marrow Donor Association:international standards for unrelated hematopoietic stem cell donor registries. Bone Marrow Transplant. 2004;34: 103-110. [2] Hurley CK, Foeken L, Horowitz M,Lindberg B, McGregor M, Sacchi N, WMDA Accr editation and Regulatory Committees:Standards, regulations and accreditation for regi stries involved in the worldwide exchange of hematopoietic stem cell donors and pro ducts. Bone Marrow Transplant. 2010;45-819-824. [3] Rubinstein P, Dobrila L, Richard E, Rosenfield RE, Adamson JW, Migliaccio G, Migli accio AR, Taylor PE, Stevens CE:Processing and cryopreservation of placental/umbili cal cord blood for unrelated bone marrow reconstitution. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92:10119-10122. [4] Rocha V, Cornish J, Siecers EL, Flipovich A, Locatelli F, Peters C, Remberger M,Mi chel G, Arcese W, Dallorso S, Tiedemann K, Busca A, Chan KW, Kato S, Ortega J, Vowels M, Zander A, Souillet G, Oakill A, Woolfrey A, Pay AL, Green A, Garnier F, Ionescu I, Gluckman E: Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and u mbilical cord blood transplants in children with acute leukemia. Blood. 2001;97-2962- 2971. [5] Smith FO, Thomson BG: Umbilical cord blood collection, banking, and transplantatio n:current status and issues relevant to perinatal caregivers. Birth. 2000;27:127-135. [6] Ballen KK:New trends in umbilical cord blood transplantation.blood. 2005;105: 3786-3 792. [7] Gluckman E: Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplan tation. Exp Hematol. 2000;28:1197-1205. [8] Wadlow RC, Porter DL: Umbilical cord blood transplantation:where do we stand? Blood Marrow Transplant. 2002;8:637-647. [9] Nakagawa R, Watanabe T, Kawano Y, Kanai S, Suzuya H, Kaneko M, Watanabe H, Okamoto Y, Kuroda Y, Nakayama T, Chugoku-Shikoku Cord Blood Bank: Analysis o f maternal and neonatal factors that influence the nucleated and CD34+ cell yield for cord blood banking. Transfusion. 2004;44:262-267. [10] Hongyou Yang, Acker JP, Abley D, McGann LE, Akabutu J: High efficiency volume - 17 -
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혈액검사학회ㆍ수혈검사학회논문 3 냉동보관된제대혈조혈모세포의냉동전과해동후의보관기간별검사결과분석 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소임소진ㆍ김희정ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 Analysis of test results before freezing and after thawing hematopoietic cell from umbilical cord blood units according to cryopreserved period So Jin LimㆍHee Jung KimㆍJung Yun YangㆍHye Kyung HongㆍWon Il Oh Biomedical Research Institute, MEDIPOST Co., Ltd., Seoul, Korea The aim of this study was to evaluate the quality of long-term cryopreserved umbilical cord blood(ucb) units for hematopoietic cell transplantation. In this study, we used all 661 UCB samples which were cryopreserved from less than 1year to more than 10years. We compared how the test results after thawing had changed according to storage duration. The recovery of the number of total nucleated cells(tnc), hematopoietic progenitor cells(cd34+ cells), and the percentage of viable cells of UCB units cryopreserved for 10years for hematopoietic cell transplantation were examined. The mean level of the recovery rate was obtained TNC(100.3 ± 12.7 x10 8 /unit), CD34+ cells(99.3 ± 32.20 x10 6 /unit) and cell viability(100.3 ± 6.8%). These results indicate that long-term cryopreservation does not affect the quality of CB units for hematopoietic cell transplantation. Key words : Umbilical cord blood, Cryopreservation, Hematopoietic cell transplantation. Ⅰ. 서론 자가재생능력과모든조직세포로분화할수있는잠재력을가진줄기세포를이용한세포치료는신경계질환, 심혈관계및내분비질환, 골및관절질환, 자가면역질환, 암, 요실금, 폐질환, 탈모등의거의모든질환에서폭넓게적용되며희귀병및만성질환치료에까지재생의학으로서의핵심으로자리잡고있다. 성체줄기세포로구분되는조혈모세포는자가복제및분화를통해백혈구, 적혈구및혈소판등의혈액세포를만들어내는세포이다. 조혈모세포의공급원으로인정되고있는제대혈조혈모세포또한국내외에서많은이식이이루어지면서주목받고있다 [1-3,5]. 국내에서는 1999년재발된급성혼합형백혈병환자에게동생의냉동보관된제대혈이식하여처음으로성공하면서 [4] 2010년까지 499단위의이식이이루어졌다 - 19 -
[5]. 제대혈의조혈모세포뿐만아니라다양한줄기세포가포함된연구 [6] 가보고되면서국내외에서제대혈보관에대한관심이높다. 현재와미래에중요한자원이되는제대혈이국내뿐만아니라세계적으로도 10년이상장기간보관되고있다. 그러므로냉동보관된제대혈의품질유지에대한보고가필요하다. 본연구에서는냉동보관기간이 1년미만인제대혈부터 10년이상까지제대혈의냉동전과해동후의검사결과를분석하였다. Ⅱ. 대상및방법 1. 대상본연구는 2011년 7월제대혈관리및연구에따른법률이시행되고보건복지부허가를받은메디포스트 제대혈은행에서실시되었다. 2000년 11월부터 2009년 11월까지메디포스트 제대혈은행에기증의뢰되어보관처리완료된제대혈 661단위를대상으로하였으며대상제대혈은기증동의서에자발적으로동의및서명한산모로부터채취되었다. 해동된제대혈의선정은이식센터에서한국조혈모세포협회 (KMDP) 또는질병관리본부장기이식센터 (KONOS) 의검색프로그램을이용하여확인검사를요청한제대혈로시행하였다. 본연구는제대혈냉동전과해동후의유핵세포수 (TNC, total nucleated cell), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells), 세포생존율검사결과를보관기간별로분류하여분석하였다. 2. 방법 1) 제대혈채취분만을담당한산부인과의사가태아와탯줄이완전히만출된이후에탯줄을절단한다음태반이만출되기이전에탯줄정맥에주사하여항응고제 (citrate phosphate dextrose adenine, CPDA-1) 가포함된채취백에제대혈을채취하였다. 2) 제대혈가공제대혈보관처리법은적혈구혈장제거법으로 Rubinstein법 [7] 에의한것이다. 제대혈에적혈구침강제인 25% hydroxyethyl starch(hes, Pentaspan, 제일약품, 한국 ) 을첨가후첫번째원심분리하였다. Transfer/Freezing bag set(thermogenesis, USA) 와연결하여적혈구를제거한다음두번째원심분리를하였다. 혈장을제거하고최종적으로 20ml의제대혈농축인유핵세포 (CLRP, concentrated leukocyte-rich plasma) 를분리하였다. 3) 제대혈동결보관및해동확인검사분리된제대혈농축유핵세포에 20% dimethylsulfoxide(dmso, Cryoserv, BionichePharma, USA) 와 dextran40( 대한약품, 한국 ) 를혼합하여만들어진 10% 동결보존제 (DMSO/dextran) 5ml를천천히주입한다. 유핵세포의최종보관량은 25ml이며초저온온도에도견딜수있는재질로된 freezing bag(thermogenesis, USA) 에보관된다. Freezing bag은외부오염이나충격노출을방지하기위해 overwrap bag에넣은후, sealer(fujiimpulse, USA) 로 sealing 후알루미늄 canister에넣는다. Canister를냉동기 (CRF, controlled rate freezing, ThermoForma, USA) 에넣고냉동프로그램으로단계적으로 -90 까지온도를낮추어준다. 동결된제대혈농축유핵세포는 -196 의액체질소탱크 (liquid nitrogen tank) 에보관한다. - 20 -
냉동된제대혈의해동확인검사는 freezing bag 에연결되어있는 segment 로시행한다. 4) 총유핵세포수검사총유핵세포수 (TNC) 는자동혈구분석기인 Sysmex KX-21(Sysmex, Japan) 와 ADVIA 2120(Siemens, USA) 를이용하였다. 해동후의세포수검사는 segment의제대혈농축유핵세포를 5배로희석하여시행하였다. 회수율 = ( 해동후 TNC/ 냉동전 TNC) x 100 5) 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 검사제대혈농축유핵세포 100μl에 Mouse IgG1 PE(phycoerythrin), CD45 FITC(fluorescein isothiocyanate), CD34 PE로표지된단클론항체 (BD Biosciences, USA) 를각각 10μl씩혼합한후상온암소에 10분방치하고, 적혈구용해액 2ml를첨가하여다시상온암소에 15분방치한후원심분리하였다. 적혈구용해가완료된후 FACSFlow(BD Biosciences, USA) 2ml로원심분리하여세척한다. 고정완충액 (1% paraformaldehyde-pbs) 1ml로고정한후부유시켜유세포분석기 (FACSCalibur, Becton Dickinson, USA) 의 Cell Quest software로분석하였다. 분석된 Gated % 로세포의수를계산하였다 (Fig. 1). CD34+ cells = (Gated %/100) x WBC 회수율 = ( 해동후 CD34+ cells/ 냉동전 CD34+ cells) x 100 Fig. 1. The characteristics of the HCB-MNCs. The CD34, CD45 and Mouse IgG maker used for the FACSCalibur data of HCB-MNCs. 6) 세포생존율검사 Trypan blue dye-exclusion 법으로 trypan blue용액 (Sigma, USA) 과제대혈농축유핵세포를 1:1 로희석후염색된세포를죽은세포와구분하여전체세포수에대한생존세포를계수하였다. 회수율 = ( 해동후세포생존율 / 냉동전세포생존율 ) x 100 7) 통계제대혈냉동전과해동후의총유핵세포수, 조혈모세포표지자양성세포수, 세포생존율검사결과는평균 ± 표준편차로나타내었다. - 21 -
Ⅲ. 결과 제대혈의냉동전과해동후총유핵세포수 (TNC), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 와세포생존율검사결과는보관기간별로각각 Table 1, Table 2와 Table 3에제시하였다. 제대혈의냉동전과해동후데이터를분석한결과총유핵세포수평균은각각 10.2 x10 8 /unit, 10.2 x10 8 /unit 이고평균회수율은 100.3% 이었다. 냉동전과해동후제대혈의 CD34+ cells 평균은각각 4.07 x10 6 /unit, 3.96 x10 6 /unit이고평균회수율은 99.3% 이었다. 냉동전과해동후제대혈의세포생존율는각각 82.6%, 82.9% 이고평균회수율은 100.3% 이었다 (Table 4). Table 1. Before freezing and after thawing TNC(x10 8 /unit) for cord blood units(mean ± SD) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year 64 10.9 ± 4.4 10.7 ± 4.4 99.3 ± 12.5 < 2 year 115 11.0 ± 3.4 11.3 ± 3.5 103.9 ± 15.0 < 3 year 114 9.7 ± 3.1 9.6 ± 3.5 100.0 ± 15.0 < 4 year 104 9.9 ± 4.1 9.9 ± 4.2 100.5 ± 11.1 < 5 year 84 10.1 ± 3.3 9.9 ± 3.5 97.6 ± 9.9 < 6 year 61 10.0 ± 3.3 10.0 ± 3.5 99.4 ± 10.4 < 7 year 57 10.5 ± 3.5 10.5 ± 3.9 99.9 ± 12.6 < 8 year 32 9.3 ± 3.7 9.3 ± 3.5 101.3 ± 10.2 < 9 year 12 9.7 ± 2.6 9.5 ± 3.1 97.2 ± 15.0 < 10 year 10 11.2 ± 2.9 11.1 ± 3.1 99.1 ± 10.8 10 year 8 8.1 ± 2.5 8.2 ± 2.2 102.9 ± 10.3 Table 2. Before freezing and after thawing CD34+ cells(x10 6 /unit) for cord blood units (mean±sd) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year 64 5.04 ± 3.58 4.75 ± 3.52 95.7 ± 22.18 < 2 year 115 4.34 ± 2.57 4.16 ± 2.70 96.6 ± 37.59 < 3 year 114 3.90 ± 2.47 3.82 ± 2.66 98.4 ± 27.52 < 4 year 104 3.87 ± 2.51 3.75 ± 2.47 96.7 ± 33.47 < 5 year 84 3.74 ± 2.75 3.38 ± 2.05 99.6 ± 35.05 < 6 year 61 4.80 ± 3.58 4.55 ± 3.47 97.5 ± 30.20 < 7 year 57 3.50 ± 2.08 3.65 ± 2.27 105.8 ± 33.53 < 8 year 32 3.37 ± 1.82 3.78 ± 2.63 110.8 ± 28.47 < 9 year 12 3.23 ± 2.15 3.28 ± 2.28 100.7 ± 29.98 < 10 year 10 5.05 ± 1.39 6.05 ± 2.70 118.4 ± 41.42 10 year 8 2.16 ± 1.04 2.35 ± 1.71 103.2 ± 31.70-22 -
Table 3. Before freezing and after thawing cell viability(%) for cord blood units(mean ± SD) Storage period Samples(N) Before freezing After thawing Recovery(%) < 1 year 64 83.9 ± 5.4 82.4 ± 4.7 98.3 ± 5.4 < 2 year 115 82.2 ± 5.1 81.7 ± 6.4 99.6 ± 8.2 < 3 year 114 81.9 ± 5.4 82.2 ± 6.1 100.7 ± 6.2 < 4 year 104 83.1 ± 5.2 83.5 ± 5.3 100.7 ± 6.8 < 5 year 84 82.4 ± 5.8 82.7 ± 4.9 100.9 ± 7.4 < 6 year 61 83.6 ± 5.9 83.9 ± 5.1 100.5 ± 5.8 < 7 year 57 82.7 ± 6.3 84.4 ± 4.9 102.1 ± 6.3 < 8 year 32 82.1 ± 5.5 84.9 ± 6.0 102.3 ± 5.1 < 9 year 12 81.3 ± 7.2 80.4 ± 7.7 93.3 ± 3.7 < 10 year 10 81.2 ± 8.0 80.8 ± 5.6 97.4 ± 4.5 10 year 8 84.0 ± 5.1 86.6 ± 4.6 101.3 ± 5.4 Table 4. Before freezing and after thawing data for cord blood units(mean ± SD) Before freezing After thawing Recovery(%) TNC(x10 8 /unit) 10.2 ± 3.6 10.2 ± 3.8 100.3 ± 12.7 CD34+ cells(x10 6 /unit) 4.07 ± 2.73 3.96 ± 2.74 99.3 ± 32.20 Cell viability(%) 82.6 ± 5.5 82.9 ± 5.6 100.3 ± 6.8 Abbreviations: TNC, total nucleated cell Ⅳ. 고찰 제대혈에줄기세포가풍부하다는연구가보고되면서전세계적으로도제대혈에대한관심이높다. 1988년최초의제대혈이식이 [8] 이루어지면서골수이식을대체할조혈모세포공급원으로제대혈조혈모세포이식이활발히시행되고있다. 제대혈조혈모세포이식은제대혈을쉽게얻을수있으며공여자검색이신속히이루어질수있고이식편대숙주병이적게발생한다는장점 [9,10] 으로계속증가하고있다. 세계적으로도많은제대혈은행에서제대혈이보관되고있는데세계기증제대혈은행의네트워크인 NetCORD에 2010년 2월기준 200,000단위이상이보관된것으로등록되어있다 [5]. 국내에서는 2011년 6월기준기증제대혈 25,000단위이상이등록되어있다 [5]. 이와같이최초이식보고이후많은제대혈이 10년이상장기간보관되어지고있다. 따라서보관된제대혈의이식이시행될때는보관기간이오래된제대혈도사용되어진다. 제대혈이식적합여부를결정할때는총유핵세포수 (TNC), 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells), 세포생존율등이중요한인자가된다 [5]. 본연구에서는제대혈보관기간 1년미만부터 10년이상까지를분류하여총유핵세포수, 조혈모세포표지자양성세포수및세포생존율의결과를제대혈냉동전과해동후로비교분석해보았다. 제대혈이식의치료성적을좌우하는데는총유핵세포수가가장중요한인자이며총유핵세포수가많으면조직적합성항원의불일치도극복할수있다 [6]. 제대혈의냉동전과해동후의총유핵세포수결과를비교했을때냉동후의감소된결과도있지만평균회수율은 - 23 -
냉동전총유핵세포수를유지하고있음을보여준다. 이러한결과는제대혈냉동전과해동후의총유핵세포수결과를보고한연구들과일치하는소견을보인것이다 [11-13 ]. 반면해동후의결과가높게나타난것은세포수검사를시행하는검사시료인 segment의검체량이적은점과희석배수가영향을미쳤을것으로사료된다. 조혈모세포표지자양성세포수 (CD34+ cells) 또한제대혈이식에중요한지표로된다 [1 ]. CD34 세포표면항원은 BFU-E, CFU-GM, CFU-Meg, CFU-GEMM, CFU-Blast 등의전구세포표면에서표현되며, 미성숙원시세포에서최고로표현되고성숙함에따라점차감소한다 [15]. 제대혈내 CD34+ cells의빈도는성인의골수와비슷하며 [16] 이식후생착및예후에중요한영향을미치므로 CD34+ cells이충분해야한다 [17]. 본연구에서는제대혈의해동후에감소된결과도있지만평균회수율은냉동전과같이유지되고있음을확인할수있다. 그러나해동후의 CD34+ cells 결과가높게나타난것은 CD34+ cells의결과를계산할때세포수가반영되므로세포수에따른것이라고할수있겠다. CD34+ cells 또한세포수와같이해동확인검사를시행하는 segment의검사시료량이적어오차가발생할수있기때문으로사료된다. 연구보고에는본연구와비슷한결과인해동후 97% 가있다 [18]. 제대혈의세포생존율측정은냉동된제대혈의보관상태를잘반영하는요인이된다. 제대혈이장기간보관되면해동후세포생존율이감소된다고예상할수있겠지만 -196 의액체질소에완전히담겨져최적의조건으로보관된본연구의제대혈은평균세포생존율냉동전과비슷하게유지되었음을알수있다. 해동후결과가높게측정된값이있는것은 Trypan blue 염색법이신속하게측정되는장점이있으나수기로판독하므로검사자에따른주관적판독이라는점과해동후에는적혈구깨져백혈구가더잘보일수있다는점이있기때문으로생각된다. 이상의결과를종합하면제대혈보관기간이제대혈보관품질유지에영향을미치지않는것으로확인된다. 또한제대혈이식후자료분석에따르면평균 2.49년의냉동보관기간을기준으로무질병생존율의차이가없다는연구보고도있다 [19]. 냉동전과해동후의검사결과를발표한연구 [11-14,18,20] 는많지만본연구가다른점은보관기간별로분류하여분석한점과대단위를대상으로연구되었다는것이다. 보건복지부업무지침에의거하여제대혈품질관리가유지되고있음을증명하였으며향후 10년이상부터 20년, 30년된제대혈의연구발표도지속적으로이루어져야한다. 제대혈이식의치료성적에영향을줄수있는냉동된제대혈의품질유지로질병에효과적으로사용되어더욱제대혈이식이시행되기를기대한다. 참고문헌 [1] Wagner JE, Barker JN, DeFor TE, Baker KS, Blazar BR, Eide C, et al. Transplantation of unrelated donor umbilical cord blood in 102 patients with malignant and nonmalignant diseases: influence of CD34 cell dose and HLA disparity on treatment-related mortality and survival. Blood. 2002;100:1611-8. [2] Laughlin MJ, Eapen M, Rubinstein P, Wagner JE, Zhang MJ, Champlin RE, et al. Outcomes after transplantation of cord blood or bone marrow from unrelated donors in adults with leukemia. N Engl J Med. 2004;351:2265-75. [3] Rocha V, Labopin M, Sanz G, Arcese W, Schwerdtfeger R, Bosi A, et al. Transplants - 24 -
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구연발표 Ⅰ 유전 ( 구연 1 ~ 2) 좌장 : 심문정교수 - 27 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 유전 ) 1 FISH 검사전처리자동화장비 Xmatrx TM 와수기법의비교평가 세브란스병원진단검사의학과 강지연ㆍ안미숙ㆍ최종락 배경 (Background) : 형광동소보합법 (fluorecence in situ hybridization, FISH) 은형광표지된 probe DNA 를표적 DNA와 hybridization을시행한후형광 signal로특정염색체및표적유전자의결실및위치를신속하게진단할수있는검사이다. 본원에서는 2008년 MetaSystem (Zeiss, Germany) 도입이후로 FISH image를자동으로 capture하고이를분석하여검사의자동화와표준화를시작하였다. 이후 FISH검사의전처리과정을자동화로수행하기위한일련의과정들이 ThermoBrite TM, VP 2000 등의반자동화장비를통하여시도되었다. 2011년 11월 Xmatrx TM (Abott, U.S.A) 를도입함으로 FISH 과정의 Pre hybridization step, Probe apply, Post hybridization step, Counter stain을전자동으로수행하고있고현재검사실에서유용하게사용하고있다. 이에 Xmatrx TM 를이용한 FISH 검사결과를수기법과비교평가하였다. 방법 (Methods) : 세브란스병원에 2011년11월에도입되어 2012년 10월현재까지사용하고있는 Xmatrx TM 의전반적인소개와유용성등을소개하고자한다. 2011년 11월부터 2012년 10월까지주로사용하는 20 probe (LSI probe, Abott, U.S.A) 별로최적화조건을설정하였고재현성검사를시행하였다. 또한수기법과 Xmatrx TM 의 Parallel test를시행해검사의상관성을평가하였다. 판정기준은 % CV값으로비교하였고허용 % CV는 5% 이내일때적합한것으로판정하였다. 결과 (Results) : 대부분의 probe에서최적화조건을설정하였고좋은재현성을보였다. Parallel test에서 % CV값은 5% 이내에들어적합하였다. 하지만 TP53 probe는 % CV값 5% 이상을보였고, RB1은 % CV값 5% 이내였으나재현성이떨어졌고, IGH/MAF는 split out 현상을보여더최적화의노력이요구된다. 고찰 (Discussion) : Xmatrx TM 는수기법과비교시좋은재현성과상관성을보였으나몇몇의 probe는최적화된조건을더설정할필요가있었다. Xmatrx TM 는현재검사실에서유용하게사용되고있으며 hands on time을줄여 throughput을증가시켰고결과에대한질향상과재현성의향상을가져왔다. Xmatrx TM 의사용은검사방법을표준화하고수기전처리과정에소요되는업무부담과기술적오류를감소시킬것으로판단되므로유용한검사장비로생각된다. 또한 slide마다각기다른조건을적용할수있으므로 solid tumor의조직이나양수같은다양한검체에도적용할수있으리라생각되며, m FISH나 FICTION등의다른기법에도다양하게적용할수있으리라기대한다. - 29 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 유전 ) 2 Leukemia 환자에서 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 의유용성 (The prognostic value of Acute leukemia profile test (Hemavision ) with leukemia patient) 서울아산병원진단검사의학과김지현ㆍ권미량ㆍ최미옥ㆍ지현숙 배경 (Background) : Hemavision 은백혈병의특별한 subtype들을결정짓게하는 28개의다른 translocation이나 80개이상의 breakpoint나 splice variant들을포함한 chromosome rearrangement를 detect하기위한 Reverse trasnscription polymerase chain reaction(rt PCR) Test이다. 이에본연구는최근 2년간검사한환자들에한해서검출빈도와분포및임상적특성을분석하고자하였다. 방법 (Methods) : 2010년 7월부터 2012년 8월까지 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 로의뢰된 419명의 Bone Marrow 또는 Peripheral blood 533개를대상으로 Acute leukemia profile test (Hemavision ) 를시행하였다. Acute leukemia profile test (Hemavision ) 검사방법은 RNA를추출하여 cdna합성을하여 Screening PCR을한다음, 2% Agarose gel로전기영동하여 band 확인후양성또는음성으로결과를내었다. Screening PCR에서음성이나온검체는음성으로최종결과를보고하였고, Screening PCR에서양성이나온검체는다시 Splitout PCR을시행하여동정하여보고하였다. 그리고이들의결과를분석해보았다. 결과 (Results) : 성별은남성이302예, 여성이 231예였고, 연령층은 6개월부터 91세까지였다. 진단명은 ALL이 130예, AML 이 396 예, MPAL 이 7예였다. ALL에서의양성빈도는 54.6% 로 BCR ABL재배열이가장많았고그중 25.0% 가 b3a2 또는 b2a2의 major재배열이었으며 minor 재배열이 72.0% 이었고 2예에서 major및 minor 재배열이공존함을보여주었다. 반면혼합형급성백혈병에서는 42.9% 에서 BCR ABL 재배열이관찰되었다. 급성골수성백혈병에서는의뢰된 396예중 127예에서양성반응을보였는데 (32.1%) 그중가장높은빈도를보이는유전형은 PML RARA재배열이었고 DEK NUP214, AML ETO 의순서이었다. 또한 MLL 재배열이 38예 (26.0%) 에서관찰되어불량한예후를보이는환자군에서의적극적인치료가가능하게되었다. MLL재배열은 MLL AF9이가장많았고 MLL AF6,MLL AF10,MLL ELL,MLL MLLT1의순서로나타났다. 고찰 (Discussion) : Acute leukemia profile test (Hemavision ) 는 multiplex RT PCR assay 로써골수진단시보다정확하고빠르게유전자재배열정보를제공하여환자의치료에적극적으로임할수있는중요한검사로사료되며빈도가높은재배열의경우정량 PCR로서최소잔존질병의추적검사로이용할수있겠다. - 30 -
구연발표 Ⅱ 수혈 ( 구연 3) 좌장 : 최범열고문 - 31 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 ( 수혈 ) 3 Passenger Lymphocyte Syndrome 서울아산병원혈액은행 양성식 배경 (Background) : 최근장기이식이필요한환자수에비하여이식할장기가절대적으로부족하여 ABO 부적합장기이식이적극시행되고있다. 특히최근면역억제약물의발달로인해수술후예후도좋아짐에따라과거에비해그시행빈도가늘어나고있는추세이다. 하지만, 수술후 ABO부적합장기이식의부작용으로면역기전에의한용혈성빈혈이생기기도하는데이를 Passenger Lymphocyte Syndrome( 이하 PLS) 이라한다. 본원에서이형간장기이식후 PLS증례가 2례가있어보고하는바이다. 방법 (Methods) : 환자의헤마토크리트, 혈색소, 빌리루빈검사등을하였으며, 환자의적혈구에서 Elution을통해공여자의혈액형항체를검출해냈다. 결과 (Results) : IgG, IgM, Complemet등이감작되어있었으며, 이형간장기이식 14일후 Hb 및 Hct가최저로떨어져전형적인 PLS증상을보였다. Donor의혈액형항체가검출되어환자의혈액형이아닌 O+RBC로교차시험을시행하여수혈하였으며, Therapeutic pheresis를통해공여자의 lymphocyte로부터만들어진혈액형항체의 titer를낮춰주어환자의상태가호전된것을확인하였다. 고찰 (Discussion) : ABO 불일치장기이식일경우지속적인용혈성빈혈에대한검사와직접항글로불린검사를시행하여야하며, 수술전공여자의비예기항체에대한검사도시행되어야할것이다. ABO 불일치장기이식후 7 14일후혈색소나헤마토크리트가감소하고, 빌리루빈이증가한다면 PLS를의심해봐야하며, 세밀한주의와검사가필요할것이다. - 33 -
특강 Ⅰ 수혈연자 : 박경운 ( 서울의대검사의학교실 ) 좌장 : 김동찬학회장 - 35 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-37 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-38 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-39 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-40 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-41 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-42 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-43 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-44 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-45 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-46 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-47 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 수혈 ) 1-48 -
특강 Ⅱ 면허재신고등연자 : 이상호 ( 대한임상병리사협회총무이사 ) 좌장 : 이귀순학회장 - 49 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 면허재신고등 ) 2 2014년면허재신고제실시에따른임상병리사평가원기획및보수교육규정개정 ( 안 ) 사단법인대한임상병리사협회총무이사이상호 급변하는의료환경변화와보건복지부의방침에따라우리협회도많은변화와개선이불가피한상황입니다. 2014년부터면허재신고제가의료기사전체로확대실시되고, 기사단체연합회를중심으로의료기사교육인증평가제도의정착및발전, 의료기사국가시험의수준향상, 전문의료기사자격시험및교육기관질관리등의료기사의질향상등의요구에부응하기위하여의료기사평가원 ( 의기평 ) 이설립인가를준비하고있고, 이의기평의산하기구로임상병리전문직의자율조정기구로의역할을수행하기위한임상병리사평가원설립을준비하고있습니다. 그동안큰변화없이정착화되어있던우리협회의보수교육규정도보건복지부지침에따라기본틀부터시작하여다방면의개정이실시될것이며또한사이버보수교육의강화로회원들에게보수교육의편리성과접근성뿐만아니라교육의내실을기하기위한노력이진행될예정입니다. 2013년한해는여러가지과도기적혼란과불편이예상되지만, 협회의노력과회원들의이해와적극적협조로변화에따른어려움들을함께극복해나갈수있으리라생각됩니다. 그동안회원들에게팽배되어있는불만과고충을해소하면서변화와혁신을이뤄내기위해서는현재의편안함에서벗어나혼란과불편을감수하지않고는변화할수없고, 해산의고통끝에출산의기쁨이오듯우리의노력과협력으로회원들이만족할수있는제도와규정으로자리잡을수있으리라확신합니다. 변화와혁신은큰그림을다시그리는것이아니라작은것부터, 나부터, 지금부터라는생각을하는것에서부터시작된다고할수있습니다. 그시작점에서있는제24대협회집행부에게힘과지혜와아낌없는격려를부탁드립니다. - 51 -
특강 Ⅲ 혈액연자 : 장성수 ( 울산의대서울아산병원 ) 좌장 : 함천경고문 - 53 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회특강 ( 혈액 ) 3 체액세포검사 울산의대서울아산병원 장성수 임상검사실에서체액의세포검사를시행하는체액의종류는주로뇌척수액, 체강액 ( 흉막액, 복막액, 심낭액 ), 활액등이다. 이러한체액은뇌척수액과활액등을제외하고는정상적으로아주소량의체액만이존재하게되며, 체액의증가는다양한병적인소견을나타낸다. 체액의화학검사뿐아니라세포수계산과감별계수는임상적으로매우중요하며, 체액내존재하는암세포등을구별하는것은매우어렵고, 중요한과정이다. 그중에서도체강액의경우임상검사실에가장많이의뢰되고다양한세포들이존재하기때문에세포의감별계수를정확히하는데어려움이있다. 여기서는주로체강액을중심으로정상소견과병적인소견, 감별해야할점을중심으로살펴보고자한다. 1. 체강의해부학체강내의기관들은장막 (serous membrane, serosa) 라고불리는얇은막으로둘러싸여있다. 기관쪽을둘러싸는막을장측막 (visceral layer), 체강의반대편을둘러싸는막을벽측막 (parietal layer) 이라고하며, 이양쪽의막은서로연결이되어있어서외부와는통하지않는폐쇄된공간을형성한다 ( 그림3 1). 흉강 (pleura, 폐 ), 복강 (peritoneum, 내장 ), 심낭 (pericardium, 심장 ) 은태생학적으로동일한기원 (mesenchymal embryonal layer) 을가지고있기때문에유사한해부학적구조를보인다. 장막은중피세포 (mesothelial cell) 라는납작한세포의단일층으로덮여있는데, 특별한질환이없는경우에는중피 (mesothelium) 의벽측막과장측막사이에는약간의윤활액만들어있다. 2. 체강내유출액장막사이의공간에공기나과량의액체가차는것은병적인과정이며, 특별한질환이없는경우에는약간의윤활액만들어있다. 체강내에병적으로공기가차는경우는위치에따라기흉 (pneumothorax, 흉강 ), 기복 (pneumoperitoneum, 복강 ), 심낭기종 (pneumopericardium, 심낭 ) 등이라하며, 액체가고인경우, 특히혈액이고인경우에각각혈흉 (hemothorax), 혈액복막 (hemoperitoneum), 심낭혈종 (hemopericardium) 이라한다. 특히복강내에유출액이차는경우를복수 (ascites) 라한다. 유출액은그성분에따라누출액 (transudate) 과삼출액 (exudate) 으로나눌수있다. 3. 유출액에서관찰되는비종양성세포 A. 중피세포 (mesothelial cells) B. 대식세포 (Macrophage) C. 혈구세포 D. 간세포 - 55 -
4. 기타관찰되는구조 A. 헤모시데린 B. 멜라닌 C. 담즙 D. 크리스탈 E. 섬유소응괴 5. 종양성세포 - 체강의유출액내에서는다양한종양성세포가관찰될수있다. - 정상적으로존재하는세포를정확히아는것이종양성세포를놓치지않는가장좋은방법이다. - 56 -
구연발표 Ⅲ 혈액 ( 구연 4 ~ 5) 좌장 : 변대훈고문 - 57 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 4 PFA-100의 Error Message(A,B,C,D,E) 의적합성과동시장착된 A & B position 검사결과비교연구 고려대학교안산병원진단검사의학과박지혜ㆍ박만근ㆍ안은주ㆍ이현아 배경 (Background) : Platelet Function Analyzer 100(PFA 100, Dade Behring, Marburg, Germany) 은혈소판의기능중부착과응집정도를측정할수있는신속한측정장비로 1996 년처음출시되었고다음해에 FDA승인을받아혈소판기능이상측정을위해만들어진기계이다. 혈소판활성물질이코팅된 Cartrige Collagen/Epinephrine (Col/EPI), Collagen/ADP (Col/ADP) 를이용하여혈소판의기능을측정하는기기로수술전지혈기능이상검사방법, 아스피린저항성검사, 항혈소판제제의반응평가등임상적으로다양하게적용되고있다. 간편신속하고현장검사가가능하며비침습적이고중증혈소판장애에민감하다. 과거부정확했던 Bleeding time의대체검사로대두되고있다. 검사를시행하면서시약의단가가높아재검율을줄이고자하는목적으로 Error message(a E) 에대한연구를하였고 A & B 위치검사결과차이와 A & B Position 모두에서 300초이상이나온경우다른한쪽은대기상태로혈소판기능이감소되면서뭉치는경우가발생하지않을까하는의구심이생겨연구과제로선정하였다. 방법 (Methods) : 2010.1 2011.10월까지고대안산병원을내원하여검사한환자총 10,956 명 ( 여 :5260, 남 :5696) 대상으로부적합검체 (Hematocrit <35%, Platelet <150*10 3 /ul) 도포함하여모두검사하였다. 1) Reportable error message (A, D, E) 와 Unreportable error message (B,C) 의적합성을위하여재검하여전 & 후를비교하였다. 2) A와 B Position에동시장착후결과값이 Prolong 된경우 B Position 검체를재검하였다. 단환자병력이나현재력에문제가없거나 Hct <35% & Platelet count가 150*10 3 /ul이하가아닌정상으로예상되는환자의검체는다시단독으로 A position에서재검을시행하여전, 후의결과값을비교하였다. 3) 통계처리는 SPSS 12.0을이용하여빈도율을포함한 Chi square를이용하였다. 또한카이제곱의기대빈도가작은경우검정의부정확결과를확인하기위하여 Fisher s exact test를이용하여양측검정을시행하고유의수준은 p <0.05로하였다. 결과 (Results) : 총 10,956건 (Normal 9,412건, Prolong 942건 ) 중 Reportable message A, D, E 중에서처음에 message A로나와재검후같은 message A로결과를보인검체는 145건으로전체의 78% 를차지하였고 D >A,D,E message로나온경우는 10건 (1.6%), 6건 (3.2%), 6건 (3.2%) 로나왔으며 E > A와 E로나온경우는 3건 (1.6%) 와 9건 (4.8%) 이었다. 동시장착한 A & B Position 모두에서 182초이상으로연장된 93건중 B Position 검체를재검하였을때정상으로나온결과가 16건 (17.2%), 비정상으로나온 183 299sec는 14건 (15.1%), 300 sec은 63건 (67.7%) 으로유의한관련성을나타냈다 (p=0.001). - 59 -
고찰 (Discussion) : Reportable message(a, D, E) 의검체는전체 186건중에서 182건으로대부분을차지하였으며이는단가가높아재검이부담스러운검사로재검의필요성이없다는결론을보여주었다. Unreportable message C 가표시될때는 flow obstruction인경우와현미경관찰결과대부분 Platelet aggregation을확인할수있었으며재검체를받는즉시바로검사하도록권장한다. Air leak일때보여주는 B message는매일아침기기점검시 vaccum을확인하였더니나타나지않았다. 검사를 A Position 과 B Position에동시장착후둘다비정상결과를보일경우 B Position은재검이꼭필요하며, 이는 A Position에서검사가진행 (300초이상 ) 되는동안 B Position에있는검체는대기상태로혈소판의응집이일어나면서점착능이제대로측정되어지지않은결과로생각되어진다. - 60 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회구연 5 6-color 판넬을이용한형질세포암의유세포분석 세브란스병원진단검사의학과 류희정ㆍ양미숙ㆍ김경숙ㆍ김수정 배경 (Background) : 형질세포암 (plasma cell neoplasm) 은면역글로불린 (immunoglobulin) 을분비하는최종분화단계의 B세포클론으로부터발생한종양이다. 형질세포암에는형질세포골수종 (plasma cell myeloma), 형질세포종 (plasmacytoma), 아밀로이드증 (amyloidosis) 이있고, 선행질환으로는불분명한징후의단클론성감마글로불린장애 (monoclonal gammopathy of undetermined significance) 등이있다. 형질세포암에서의유세포분석은골수내형질세포수측정, 진단및잔존암모니터링과예후판정에이용할수있다. 또한, 최근에 International Myeloma Working Group에서제시한 stringent complete remission 판정기준에유세포분석이포함되어치료효과판정에있어서필수적인검사가되었다. 본연구에서는 6 color 유세포판넬을구성하여형질세포암환자를대상으로검사한결과를분석하였다. 방법 (Methods) : 2012년 4월에서 10월에내원한형질세포골수종환자 17명을대상으로하였다. European Myeloma Network (EMN) 가이드라인에서제시한 marker들을포함하여 CD38/CD138/CD56/CD45 cytoplasmic κ/cytoplasmic λ/cd19/ CD38/CD138/CD45로두개의판넬을구성하였다. CD38, CD138, CD45를 Gating marker로사용하여형질세포수를측정하였으며 cytoplasmic immunoglobulin (Ig) light chain으로는클론성을확인하였다. 결과 (Results) : 형질세포수측정에있어서골수도말검사와유세포분석검사를비교하였을때상관계수는 0.81 로우수하였다 (P < 0.001). CD56의경우, 17명의환자모두에서양성으로나타났으며, CD19는 10명 (58.8%) 에서음성으로나타났다. 17명의환자모두 cytoplasmic Ig 검사에서클론성을보였으며, kappa restricted pattern은 6명, lambda restricted pattern은 11명에서관찰되었다. 고찰 (Discussion) : 형질세포암에대한새로운유세포판넬검사를시행함으로써형질세포암의수를측정할수있었고, 비정상적인형질세포표현형을검출하고, 클론성을확인할수있었다. 형질세포암의유세포분석을통하여진단및예후판정, 치료모니터링에유용한정보를제공할수있을것으로생각되어진다. - 61 -
포스터 - 63 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 1 HLA-B51 유전자검사의양성율조사와고찰 삼광의료재단 윤은희 배경 (Background) : 베체트병은조직학적으로정맥에혈전형성을잘하며혈관염이특징적인질환으로재발성구강및외음부궤양같은피부증상및관절증상등비교적경미한증상에서부터장궤양및천공등의소화기계증상, 혈관계증상그리고중추신경계침범등주요장기를침범하는심한증상까지다양하게유발한다. HLA-B51 유전자는지금까지알려진베체트병과가장연관성이많은유전인자로우리나라베체트병환자중약 50% 에서 HLA-B51 이검출되었다. 이에본원에서는최근 4년간본원에의뢰된 HLA-B51유전자검사의양성율을조사하여보았다. 방법 (Methods) : 2008년 1월에서 2011년 12월까지 HLA-B51 유전자검사를의뢰하였던 658개의 EDTA Blood 검체를 Chemagic(chemagen사 ) 자동핵산추출장비를이용하여 DNA를추출한후중합효소연쇄반응 (PCR) 법으로검사한후그증폭산물을 2% agarose gel에전기영동하여증폭유무를확인하였다. 결과 (Results) : 총 658건중 HLA-B51 양성은 157건으로 23.9% 으로조사되었으며, 성별에따른양성율은남성 63명 (40.1%), 여성 94명 (59.9%) 로조사되었다. 고찰 (Discussion) : 본조사에서 HLA-B51은여성이남성보다높은양성율을보였으며이는우리나라의베체트병발생빈도가남성보다여성이높은것과상관관계가있는것으로생각된다. 베체트병의발병원인이나기전에대해확실히밝혀지지않았으나유전적인소인이있는사람에서감염등환경적인요인이면역반응이상을일으켜질병의여러증상이발현한다고보고되고있으며 HLA-B51 유전자는지금까지알려진베체트병과가장연관성이많은유전자이다. 베체트병은진단에결정적으로도움이되는임상증상이나검사소견이없는실정을고려할때베체트병이의심되는환자군에서 HLA-B51 검사의보조적진단검사로써의활용은가치가있다고생각된다. - 65 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 2 IUGR( 자궁내성장지연 ) 로의뢰된염색체검사결과에대한분석및고찰 삼광의료재단세포유전검사팀김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 배경 (Background) : 자궁내성장지연 (IUGR: Intrauterine growth retardation) 은해당임신기간에서출생체중이 10 백분위수미만일경우를말하며, 특히 3 백분위수미만인경우는심한발육지연이있다고볼수있다. 자궁내발육지연과관계된요인으로는 1) 태아측요인 : 염색체이상 ( 예상염색체삼체성 ), 만성태아감염, 선천성기형 증후군복합체, 방사선조사, 다태임신, 췌장무형성증, 인슐린결핍, IGF 1 결핍 2) 태반측요인 : 태반의무게나세포의감소또는겸할경우, 표면적의감소, 융모태반염, 종양, 태반분리 3) 산모측요인 : 임신중독증, 고혈압, 신질환, 저산소증, 영양결핍또는만성질환, 겸상적혈구빈혈, 약물등이있다. 이러한요인들중태아측요인으로인해염색체검사를시행하게되며, 본기관에 IUGR의소견으로의뢰된혈액염색체검사결과를분석하여보고하고자한다. 방법 (Methods) : 2010년1월부터 2012년8월까지 IUGR의소견으로의뢰된말초혈액 57건을대상으로하였다. 말초혈액을 RPMI1640을이용한 PHA자극배양을 72시간배양하여 0.075M KCL저장액으로처리하고, Canoy고정액으로처리하여 slide를제작하였다. 이 slide를 GTGbanding하여 ISCN2009를바탕으로 20개의염색체를판독하여나온결과를분석하였다. 결과 (Results) : 총 57건의말초혈액염색체검사중염색체이상은 8.7%(5건 ) 에서나타났고, 나머지 91.3%(52건 ) 는정상혈액염색체결과를나타냈다. 염색체이상의유형을살펴보면 47,XY,+21(2건 ), 47,XYY(1건 ), 47,XXY(1건 ), 47,XX,+18[27]/46,XX[3](1건 ) 이었다. 고찰 (Discussion) : 보통태아측원인으로자궁내발육지연이발생하는경우예후가좋지못하고, 특히염색체이상이나기형증후군 ( 다운증후군 ) 에의한발육지연이있을경우에는동반기형이있을수있으며, 앞으로의성장과발달에지속적인장애가존재한다고알려져있다. 본검사실에서분석한결과총8.7% 의염색체이상을보였고다운증후군, 성염색체이상증후군, 에드워드증후군순으로나타났다. 이처럼 IUGR 환자의진단을위한염색체검사는반드시수행하여야할필수적인검사항목으로사료된다. - 66 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 3 고령산모의양수염색체검사결과에대한유형분석 삼광의료재단세포유전검사팀 김인경ㆍ정안나ㆍ석윤미 배경 (Background) : 고령임신은세계보건기구와국제산부인과학회에서초산여부에관계없이만 35세가넘어임신한여성을 고령임산부 라고정의하고있다. 그중에서도고령의첫임신이문제가되는경우가많다. 특히유산, 사산, 선천성기형이 40세이상고령산모에서증가된다는보고가많은데, 이는산모의나이가증가할수록모체의노화로인해난자의염색체에돌연변이가생겨다운증후군과같은염색체이상아를출산하는경우가증가하기때문이다. 본기관에서는 35세이상고령산모의양수염색체검사결과에대해분석해보고자한다. 방법 (Methods) : 2010년1월부터 2012년8월까지 Elderly gravida의소견으로의뢰된양수염색체검사를대상으로하였다. In situ 배양법으로 7~10일배양후 GTG banding하여 ISCN 2009를바탕으로 20개의염색체를판독하여나온결과를분석하였다. 결과 (Results) : 총 9511건의양수염색체검사중 4870건 (51.2%) 이고령산모의양수염색체검사였으며그중에서염색체이상은 110건 (2.3%) 이었다. 수적이상은 96건 (1.9%), 구조적이상은 14건 (0.2%) 였다. 염색체이상에서수적이상중 Down syndrome은 53건 (1%), Edward syndrome은 18건 (0.3%), Patau syndrome은 2건 (0.04%) 이였으며, 성염색체이상은 18건 (0.3%) 으로나왔다. 고찰 (Discussion) : 출산시임산부나이 40세의다운증후군발생률은 1000명당 15명, 35세에는 4명, 그리고 33세에는 2명정도이며, 전체임산부에서다운증후군의발생률은 800 1000명당 1명정도로알려져있다. 이처럼 Down syndrome의비율이가장높이나타났으며, 그다음으로 Edward syndrome의비율이높은것으로나타났다. 이와마찬가지로본기관에서분석한고령산모의양수염색체결과에서수적이상을살펴보면 Down syndrome Edward syndrome 의높은비율로나타났다. 또한양수검사에서고령산모의검사비율이상당히높았으며, 염색체이상의비율이일반적인통계보다좀더높게나타난것으로보여진다. 앞으로고령산모의비율은더높아질것으로예측되며, 그에따른양수염색체검사가반드시시행되어져야한다고사료된다. - 67 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 4 Premature ovarian failure 환자의염색체핵형분석 1 예 의료법인삼광의료재단 권지현 배경 (Background) : 조기폐경이란 40세이전에폐경이되는경우로서전여성의 1% 에서발생하며, 30세이전의경우도 1,000명당한명이발생하는비교적흔한질환으로알려져있다. 조기폐경의원인으로는자가면역질환, 방사선치료, 항암제투여, 난소제거, 염색체이상외에원인이불명인경우도많다. 조기폐경의유전적요인으로 Turner syndrome과같이염색체이상이있는경우가있다. Turner syndrome은 X 염색체의수적, 구조적이상에의해유발되는선천성유전질환으로원발성무월경, 불임, 조기폐경등의증상을보인다. 본기관에서는조기폐경을주소로의뢰된말초혈액염색체검사결과 1예를보고하고자한다. 증례 (Case) : 2012년 9월조기폐경으로염색체검사가의뢰된말초혈액을 PHA가첨가된 RPMI 1640 배지에각각 48시간과 72시간배양한뒤 GTG banding 하고, 20개이상의 metaphase를관찰하여얻어진핵형을분석하였다. 분석결과 20 metaphase에서 13, 14번염색체의온전한장완끼리결합하여이루어진 der(13;14)(q10;q10) 과 Turner syndrome 환자에게서관찰되는 del(x)(q26) 이복합적으로나타난 45,X,del(X)(q26),der(13;14)(q10;q10) 핵형이관찰되었다. 고찰 (Discussion) : der(13;14)(q10;q10) 의경우 composite chromosome으로수세대를거쳐유전될수있으며repeated spontaneous abortion과관련이있고, 그밖의 phenotypic effect는거의없는것으로보고되어있다. 또 del(x)(q26) 은 Turner syndrome 환자에게서보이는다양한핵형양상중의하나로 premature ovarian failure와연관있는것으로보고되어있다. 따라서환자에서나타난조기폐경의증상은두가지의 abnormal 핵형중 del(x)(q26) 에서기인된것으로사료된다. - 68 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 5 ssmc 가발견된양수검체의부모혈액염색체결과분석 의료법인삼광의료재단 권지현 배경 (Background) : 인간의정상염색체이외에추가로나타나는조그마한크기의기원을알수없고구조적으로비정상적형태를보이는염색체를 small supernumary marker chromosom (ssmc) 라고한다. ssmc는주로고령임신에서빈번히발생하며, 신생아의 0.02~0.072% (0.043%), 산전염색체분석에서는 0.06~0.15% 발견된다. 이러한 ssmc는 23쌍의모든염색체에서유래할수있지만약 80% 는 acrocentric 염색체에서유래하기때문에크기가너무작아일반세포유전학적검사법으로는동정이어려우며, 어떤유전자를포함하고있는지불확실하여유전적으로의미가없을수도있지만, 유전적으로의미를부여받는경우태아의기형과발달장애등의위험도가높아질수있다고보고되고있다. 때문에부모의혈액으로세포유전검사를실시한뒤같은종류의 ssmc가발견되는지를우선적으로확인하여야한다. 본기관에서는산전염색체분석으로 ssmc가발견된사례에서부모의혈액염색체검사를요청하여얻어낸결과를분석하여보고하고자한다. 방법 (Methods) : 2008년 1월부터 2012년 9월까지본원에의뢰된양수검체중 47,OO,+mar 로보고된사례 16건중 7건의부모혈액염색체검사를시행하였다. 검사방법은 PHA를첨가한 RPMI 배지에각각 48시간과 72시간배양한뒤 GTG banding 하고, 20개이상의 metaphase 를관찰하여얻어진핵형을분석하였다. 결과 (Results) : 총 7건의부모말초혈액염색체핵형을분석한결과, ssmc가부모에게서유전되었음이확인된결과가 47,OO,+mar pat 1건, 47,OO,+mar mat 3건으로총 4건이었고나머지 3건은 47,OO,+mar dn(de novo) 로나타났다. 고찰 (Discussion) : 보고된통계상 de novo(new mutation) 는 70% 정도이나본기관에서는 de novo 결과보다부모에게서유전이확인된결과가더많은비율을차지하였다. 그러나이는통계적으로분석하기엔 ssmc가발견된양수결과건수에비해부모혈액검사의뢰건수가부족하여일치할수없었던것으로사료된다. ssmc가가족적인유전으로확인되고가계내에서특별한기형이없다면기형의위험은증가하지않지만, de novo로나타난경우에는 marker 염색체가몇번에서기원한것인지, 기존에알려진증례가있는지에따라표현형에미치는영향을예상할수있으므로 multiplex를이용해일회의검사로여러유전자의정확한기원을알수있는 SKY(spectral karyotyping technique) 나 array CGH등과같은분자유전학적검사방법이요구되며, 일차적으로부모의혈액염색체검사가필수적으로시행되어야할것이다. - 69 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 6 산모들의 MTHFR C677T 유전자단일염기다형성의빈도 의료법인삼광의료재단 진한울 배경 (Background) : 호모시스테인은혈액속에서동맥벽에지방을축적시켜심장질환과뇌졸중뿐아니라임산부에서는자간전증을발생시켜태아의건강에문제를일으키는물질로알려져있다. 임신기간동안엽산과비타민 B12의저농도상태는 MTHFR 유전자변이와상호작용하여호모시스테인농도를높여태아또는태반의세포성장과재생에장애를초래하여조기분만및자궁내발육지연을일으킬수있다고보고되고있다. 고호모시스테인혈증은호모시스테인대사과정중의재메틸화또는황전환작용에영향을주는유전적요인및환경적요인에의해영향을받을수있다. 이와관계된유전자중 methylentetrahydrofolate reductase (MTHFR) 유전자의 C677T 다형성이임산부자간전증발생에있어광범위하게연구되었다. 이에본원에서는산모에서 MTHFR C677T 다형성의빈도를조사해보았다.. 방법 (Methods) : 2010년 10월부터 2012년 9월까지최근 2년간본원에의뢰된 MTHFR C677T 유전자형검사 525건을대상으로하였다. 검체는 Chemagic DNA/RNA kit (Chemagen, Germany) 를이용하여 DNA 추출을시행하였고자체개발한 primer를사용하여 polymerase chain reaction (PCR) 로증폭하였다. 증폭된 PCR 산물을제한효소로절단하여전기영동으로확인하였다결과 (Results) : 임산부 525명의 MTHFR C677T 유전자형검사결과, CC 유전자형이 159건 (30.29%), CT 유전자형이 269건 (51.24%), TT 유전자형이 97건 (18.48%) 로조사되었다. 고찰 (Discussion) : 많은연구결과에서 MTHFR C677T 유전자형중 CT/TT 유전자형은높은혈장내호모시스테인농도와관련이있으며 TT 유전자형을가진사람이낮은엽산농도를동반하고있을때고호모시스테인혈증이더욱심화된다고보고되었다. 그러나, C677T 변이가있더라도비타민 B군과엽산의섭취상태가좋은임산부인경우에는호모시스테인의농도가낮은것으로보고되었다. 따라서, 임신시 MTHFR C677T 유전자형검사결과에따라엽산과비타민 B군의영양상태를조절하는것이임신합병증예방에도움이될것으로생각된다. - 70 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 7 자연유산으로의뢰된수태산물염색체검사결과의유형 삼광의료재단세포유전검사팀 권윤정 배경 (Background) : 자연유산이란임신 20주이전에자연적으로임신이소실되는것을말하며자연유산의 80% 이상이임신첫 12주이내에일어난다. 자연유산의가장흔한원인은 50 60% 이염색체이상으로자연유산에의한수태산물염색체분석은유전상담및치료에유용한정보를제공한다. 따라서본검사실에의뢰된수태산물의염색체검사결과의유형을분석해보았다. 방법 (Methods) : 2011년 10월 ~2012년 9월까지자연유산으로의뢰된총 88건의수태산물염색체검사결과를분석해보았다. Cytogen Amniogrow media로 long culture 배양, GTG banding으로검사하였다. 결과 (Results) : 총 88건의수태산물염색체검사중염색체이상은 40.9%(36건 ) 에서나타났다. 그중수적이상이 97.2%(35건 ) 로대부분을차지하였고, 수적이상중에는상염색체의삼염색체가 80% 였고, 그종류는 2번, 4번, 6번, 8번, 9번, 10번, 13번, 14번, 15번, 16번, 21번, 22번으로다양하게나타났으며, 이중 22번삼염색체가 21.4% 로가장많았다. X 단일염색체가 11.4%, 다배수성은 8.6% 를차지하였다. 구조적이상은 2.8%(1건 ) 로 add(14) 가포함된 Mosaicism이었다. 고찰 (Discussion) : 자연유산의원인은불분명한경우가가장많고면역학적요인, 환경오염, 태아감염등여러가지원인이있다. 또한비정상핵형의산모나이를살펴보면평균 38.7세로고령산모인경우자연유산의원인이될것으로생각된다. 12주이내의자연유산의 50% 이상이태아의염색체이상에기인한것으로알려져있기때문에자연유산에의한세포유전학적검사는환자들의상담및치료에유용한정보를제공할것으로생각된다. - 71 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 8 Patau, Edward, Down Syndrome 에서의산모의나이유형 삼광의료재단세포유전검사팀 권윤정 배경 (Background) : 생물학적으로는일찍임신하고출산해야건강한아기를얻을수있고산모의건강적인측면에서도유리하다. 산모의나이가많아질수록난자의노화탓에임신율이떨어지고착상이점점어려워져유산율이높으며임신이유지되더라도염색체이상이발생할확률이높기때문이다. 그러나사회구조상고령산모들이늘어나면서양수검사를해야하는산모들이증가하는추세이다. 이에양수검사결과가 13번, 18번, 21번염색체가삼염색체로비정상핵형을가진산모들의나이유형을알아보았다. 방법 (Methods) : 2010년 1월 ~2012년 9월까지 Patau, Edward, Down Syndrome으로나온총 154건의양수검사결과의산모들의나이유형분석하였다. Cytogen Amniogrow media로 in situ culture 배양, GTG banding으로검사하였다. 결과 (Results) : 총 154건의양수검사결과에따른산모나이는Patau syndrome(13번삼염색체 ) 으로결과가나온산모의나이는 25 29세가 20%(1/5), 30 34세 20%(1/5), 35 39세 40%(2/5), 40 45세 20%(1/5) 이고,Edward syndrome(18번삼염색체 ) 으로양수검사결과가나온산모의나이는 25 29세가 17.9%(7/39), 30 34세가 28.2%(11/39), 35 39세가 33.3%(13/39), 40 45 세가 20.5%(8/39) 였다.Down Syndrome(21번삼염색체 ) 으로양수검사결과가나온산모의나이는 25 29세가 12.7%(14/110), 30 34세가 35.4%(39/110), 35 39세가 40.9%(45/110), 40 45세가 10.9%(12/110) 였다. 고찰 (Discussion) : 전반적으로교육과취업준비로결혼이늦어지면서임신과출산시기가고령화되어산모들에게여러가지위험가능성이높아지고있다. 산모의나이가많아질수록임신성고혈압, 당뇨, 조산, 유산, 기형아출산등임신관련질환에걸릴위험이높고고령으로인한난자 / 세포의노화는태아에게도영향을줄수있기때문에만35세이전에출산을하는것이바람직하겠다. - 72 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 9 혈액종양에서관찰되는 Y 염색체소실 삼광의료재단세포유전검사팀 권윤정 배경 (Background) : Y 염색체소실은노화현상중하나로관찰될수있으며, 혈액종양과연관되어관찰될수있는염색체이상중하나이다. Y 염색체가소실된세포비율을연구한문헌에따르면, 중기세포에서 Y 염색체소실이 75% 이하이면질환과의관련성은불확실하고, 75~100% 라면나이와무관하게혈액종양과연관된클론성염색체이상일가능성이높다고알려져있다. 이에본검사실에서는혈액종양으로골수염색체검사를의뢰한환자들의 Y 염색체소실비율을관찰하고그에따른질환별상관관계를알아보았다. 방법 (Methods) : 2009년 4월 ~2012년 4월까지골수염색체검사결과중 Y 염색체소실이있는 76명의혈액종양환자들을대상으로하였다. mitogen이첨가되지않은 RPMI 1640 media에 2시간, 24시간배양하여 GTG Banding법으로검사하였다. 결과 (Results) : 혈액종양으로의뢰된골수검체중 Y 염색체소실의결과를가진환자는총 76명이었다. 이중 75% 이상에서 Y 염색체소실을나타내는환자는 15명으로 19.7% 였다. 이중만성골수성백혈병은 3명으로 20%, 골수이형성증후군은 1명으로 6.7%, 급성골수성백혈병은 3명으로 20%, 다발성골수종은 3명으로 20%, 재생불량성빈혈, 만성림프구성백혈병, 철결핍성빈혈, 폐암, 특발성혈소판감소성자반증이각각 1명씩으로 6.7% 였다. 또한, 90% 이상에서 Y 염색체소실을나타내는환자는 7명으로그중 6명이 t(8;21) 또는 t(9;22) 또는 t(15;17) 또는복잡한핵형과동반되어나타났고 1명은 Y 염색체소실단독염색체이상으로관찰되었다. 고찰 (Discussion) : 한문헌에서는성염색체소실은혈액종양과연관되어관찰될수있는염색체이상중하나이며, 혈액종양환자중 3~10% 에서 Y 염색체소실이관찰되었다고보고하였다. 또한다른염색체이상없이 Y 염색체소실이단독이상으로관찰되었던빈도는 2~10%, 다른염색체이상에동반되어이차성으로 Y 염색체소실이관찰되었던경우는 1~4% 로보고하여, 단독염색체이상으로관찰되는빈도가약간더높았다. 다른문헌에서는골수증식종양중에서만성골수성백혈병은10%, 골수이형성증후군은 9.5%, 급성골수성백혈병은 3.2% 에서염색체소실이발견되었고림프계종양에서는발견하기어렵다라고하였다. 그러나본검사실에서는만성골수성백혈병과급성골수성백혈병에서는약간높은수치를나타내었고, 골수이형성증후군은비슷한수치를나타냈으며만성림프구성백혈병에서도 1명이발견되었다. 또한Y 염색체가 90% 이상세포에서소실되었던혈액종양환자는 t(8;21) 또는 t(9;22) 염색체이상이동반되었던환자가많았다고보고하였다. 위의결과를살펴보면본검사실에서도 t(8;21), t(9;22), t(15;17) 와같은염색체이상이동반되어있는경우 Y 염색체가소실되는세포비율이높음을알수있다. - 73 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 10 조기폐경의심환자의핵형결과 46,X,idic(X)(q27) 1 례 삼광의료재단세포유전검사팀 김진현 배경 (Background) : 조기폐경이란 40세이전에폐경이되는경우로서전여성의 1% 정도에서발생하며, 30세이전의경우도 1,000명당한명꼴로발생하는비교적흔한질환이다. 조기폐경의유전적요인에는터너증후군이나염색체이상이있는경우가있다. 본기관에의뢰된 30세조기폐경의심환자의말초혈액염색체검사에서 46,X,idic(X)(q27) 으로판독된 case 가있어증례보고하고자한다. 방법 (Method) : 1) 검체 : 30세조기폐경의심환자의말초혈액 2) 배지 : RPMI 1640 media 3) 분열자극제 : phytohemaggutin 4) 배양시간 : 72시간 5) 염색대 : GTG-Banding 6) 핵형분석수 : 20 metaphase 결과 (Case) : 30세조기폐경의심환자의말초혈액을 RPMI 1640 media에 phytohemaggutin을첨가하여 72시간배양한후 GTG-banding하여 20 metaphase를분석하였다. 20 metaphase에서온전한 X 염색체하나와두개의 X 염색체가 Xq27 부분에서결합된 idic(x) 가함께발견된 46,X,idic(X)(q27) 핵형이관찰되었다. 고찰 (Discussion) : Isodicentric X chromosome 은두개의 X 염색체가결합하여발생하며 phenotypic effect는단완과장완중어디에서접합되느냐혹은어느부분이 deletion 되었느냐에따라다양하게나타날수있다. 단완에서접합된 idic(x) 는 short 또는 normal stature, gonadal dysgenesis와때때로 Turner Syndrome의특징을갖는다. 장완에서접합된 idic(x) 는정상또는평균이상의신장과정상지능을갖고다른 somatic abnormalities도없으나 gonadal dysgenesis는나타날수있는것으로보고되어있다. 본증례는 X의장완 q27 부분에서 isodicentric된경우로외형적으로나타나는 abnormality는없었으나 idic(x) 으로인한조기폐경이일어난것으로사료된다. 참고문헌 : - Reynolds, J.F., Daniel, A., Kelly, T.E., et al. (1987) Isochromosome 12p mosaicism (Pallister mosaic aneuploidy or Pallister Killian syndrome): report of 11 cases. Am. J. Med. Genet. 27, 257~274. - Wenger, S.L., Steele, M.W., and Yu, W.D. (1988) Risk effect of maternal age in Pallister i (12p) syndrome. Clin. Genet. 34, 181~184. - Schubert, R., Viersbach, R., Eggermann, T., Hansmann, M., and Schwanitz, G. (1997) Report of two new cases of Pallister-Killian syndrome confirmed by FISH: tissuespecific mosaicism and loss of i(12p) by in vitro selection. Am. J. Med. Genet. 72, 106~110. - 74 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 11 PCR & Sequencing 법을이용한글리벡내성유전자변이통계조사 녹십자의료재단 방성희ㆍ전희선ㆍ김윤경ㆍ조은해 배경 (Background) : 글리벡이라고알려진 Imatinib mesylate (Signal Transduction Inhibitor, STI-571, Gleevec TM ) 는만성골수성백혈병 (chronic myelogenous leukemia, CML) 의원인인 Philadelphia chromosome에의해생성되는 BCR-ABL1 tyrosine kinase의저해제로서, 지속투여시 abl kinase 유전자에다수의돌연변이를유발하게되며, 그중에서도인산화효소의 ATP-binding 부위의 Y253F, Imatinib binding domain T315I 등은약제내성과관련된주요돌연변이로알려져있다. 이러한돌연변이는약제내성으로인해치료실패내지는재발로이어지게되므로유전자변이검사를통해 Imatinib의치료경과모니터링및치료방침점검이가능하다. 방법 (Methods) : 2010년 1월부터 2012년 9월까지글리벡내성유전자 (Sequencing) 로본원에의뢰된 315건의임상검체 ( 골수또는말초혈액 ) 에서환자검체로부터백혈구를분리하여 RNA를추출한후이를근거로 cdna를합성한다. c-abl의 exon 4에위치한 forward primer로 5 -CGCAACAAGCCCACTGTCT-3' 를, c-abl의 exon 9와 10에위치한 reverse primer로 5 -TCCACTTCGTCTGAGATACTGGATT-3' 를 Biometra T3000 장비를이용하여 PCR 진행사용한 863bp의 PCR product를 Chemagen Chemagic MSM 기기를이용하여 PCR Product Purification 후 Sequencing용 PCR Reaction, Dye removal method after Sequencing Reaction 과정을거친후 ABI 3130x1 자동핵산추출장비를이용하여직접염기서열분석을시행하여얻어진염기서열을분석하여 reference와비교하여그내성유전자유무를검사하였다. 결과 (Results) : 임상소견을가지고글리벡내성유전자 (Sequencing) 로의뢰된임상검체 315건으로글리벡내성유전자검사결과의통계분석결과, Detected 49건 (16.72%), Not Detected 244건 (83.28%), Not Applicable 22건 (BCR/ABL1 음성으로 % 에서제외 ) 으로나타났다. 검출된글리벡내성유전자는모두점돌연변이로 T315I Point Mutation 이 14건 (28.57%) 으로가장많은분포를나타냈고다음으로 E255K 7건 (14.29%), G250E/ Y253H/ F317L 각 5건 (10.20%), H396R 3건 (6.12%), M244V/ M351T/ F359V/ L273M/ E275K/ F311I/ V379I 등이 1-2건의빈도로다양하게검출되었다. 본원통계조사상 2011년에 L273M/ E275K, 2012년에 F311I/ V379I 점돌연변이가추가로발견된것을확인할수있었다. 고찰 (Discussion) : 본통계결과글리벡내성유전자변이를검사, 분석한결과 Detected 17% 로글리벡내성으로알려진전체환자의약 20% 에는못미치는근소한차이를보였으나, T315I 돌연변이는 29% 로알려진바와같이가장많은내성유전자형으로나타났으며, 이외다른다양한돌연변이등도검출이되고있는것으로조사되었다. 향후더다양한돌연변이들이검출될것으로보인다. 글리벡내성유전자 (Sequencing) 검사를통해서 Imatinib의치료경과모니터링및치료방침점검에적극활용되어져야할것으로사료된다. - 75 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 12 BCR-ABL IS 정량검사소개 의료법인녹십자의료재단인간유전체팀 전희선 배경 (Background) : BCR ABL결합유전자는 22번염색체장완의 BCR (Breakpoint Cluster Region) 과 9번염색체장완의c ABL oncogene의균형전좌에의해발생한다. BCR ABL은주로 2개의 Junction variant인 b2a2(40%) 또는 b3a2(55%) 로전사되는데이는 p210이라는 Chimeric protein을생성하여증가된 Tyrosine Kinase activity를가진다. 현재 Imatinib과같은 Tyrosine Kinase inhibitor의개발로많은환자들이완전관해 (Remissin) 상태를장기간유지할수있게되었다. BCR ABL 실시간정량검사는 BCR ABL Major b2a2,b3a2를정량화하여치료중인 CML 환자의경과를추적관찰하는데중요한진단방법이다. 이검사는기존의염색체검사보다매우민감하여십만개의정상세포중단한개의 CML 암세포를발견할수있다. 그러나 BCR ABL 정량검사의결과는검사를시행하는검사실마다사용하는실시간정량검사방법간의차이로인해결과값의차이가있다. 이렇게다른각검사실간의검사결과비교를위하여 IS(International Scale) 가도입되었다. 방법 (Methods) : 본원에의뢰된 Real Time BCR ABL 정량검사 sample 58건을대상으로실험을진행하였다. QIAampâ RNA Blood Mini Kit(Qiagene,USA) 를사용하여 RNA를추출한뒤 cdna를합성하여준비하고, BCR ABL Mbcr IS MMR Kit (Ipsogen, France) 시약을이용하여, LightCycler 480 장비에 Real Time PCR을진행하였다. 결과 (Results) : 기존에알고있던 Real Time BCR ABL 정량검사결과와비교하였을때 BCR ABL/ABL ratio값이검출된결과를보인 sample에서는 Real Time BCR ABL IS 정량검사에서도동일하게 IS conversion값을보이는결과가나왔다. 고찰 (Discussion) : BCR ABL Mbcr IS MMR Kit (Ipsogen, France) 시약은 WHO의생물학적표준전문위원회에서승인한표준물질을이용하여만든시약으로, 검사시농도를알고있는표준물질외에 IS MMR calibrator를같이검사하여정확한 IS값을도출할수있다. BCR ABL(IS) 보고방법은검사결과의국제적신뢰도를향상시켜약물반응에관한표준화된환자관리및학술연구에도움이될것으로사료된다. - 76 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 13 습관성유산환자의증가추세와염색체이상의분포 삼광의료재단 박영주 배경 (Background) : 습관성유산은임신이된후 20주이전에자연유산이세번이상연속으로발생하는경우를말하며발병률이높고해마다증가하고있는추세이다. 국민건강보험공단의통계에따르면임산부의 20% 가유산을경험한적이있고그중 3명가운데 1명은습관성유산이라고한다. 이에습관성유산환자의발병률추세와습관성유산의원인은다양하지만그중염색체이상을가진환자의빈도와그유형을확인해보고자한다. 방법 (Methods) : 2010년 1월부터 2012년 9월까지약 3년간본원에습관성유산으로수탁의뢰된말초혈액 2174예로검사하였다. 말초혈액염색체검사방법은분열자극제 PHA가첨가된 RPMI 1640 media를사용하여 48시간, 72시간배양후세포수거하기 1시간전에 colcemid 를처리한후저장처리 (0.075M KCl), 고정단계 (methanol:acetic acid=3:1) 를거쳐슬라이드를제작후 GTG 분염법으로염색하여 20개이상의 metaphase를분석하였다. 결과 (Results) : 말초혈액이의뢰된환자중습관성유산으로의뢰된환자는 2010년 536예 (42.2%), 2011년에는 733예 (45.1%), 2012년 (1월 ~9월 ) 에는 905예 (49.2%) 이며습관성유산으로의뢰된환자의염색체이상의빈도는 2010년에는 12예 (2.2%), 2011년에는 19예 (2.5%), 2012년에는 24예 (2.6%) 를보였다. 습관성유산환자의 55예 (2.5%) 에서비정상핵형을보였으며, 그분포는 translocation은 38예 (1.7%), derivative는 12예 (0.5%), inversion은 3예 (0.1%), inversion과 translocation이함께있는 1예 (0.04%), i(x)(q10) 을나타낸 1예 (0.04%) 가있었다. 고찰 (Discussion) : 습관성유산으로의뢰되는환자는해마다증가되는추세에있으며 2011년에는 2.9% 증가하였고, 2012년에는 4.1% 증가하였다. 또한염색체이상빈도도 2011년에는 0.3%, 2012년에는 0.1% 증가하였다. 염색체이상은 traslocation이 38예 (69%) 로가장많았으며, 그다음 derivartive 12예 (21.8%), inversion이 3예 (5.4%), 기타가 2예 (3.8%) 가있었다. 습관성유산환자가매년증가함에따라염색체검사를시행하면유전상담에도움이될것으로사료된다. - 77 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 14 양수검체상태에따른검사소요일 삼광의료재단 박영주 배경 (Background) : 양수염색체검사는보통 16~18주될때양수를채취하여검사를실시한다. 양수는보통맑은소변과비슷한색을띤다. 의뢰되는양수중탁하여 Bloody하거나 Dark Brown 색을띠는경우가있는데이럴경우양수를배양하여염색체를얻기까지의소요시간이길어진다. 양수검체상태가검사소요시간에미치는영향을알아보고자한다. 방법 (Methods) : 본원에의뢰되는양수는상태를관찰하여기록하는데양수색깔은육안으로관찰하고 cell의상태는 cell의양과 Blood가섞여있는정도를 centrifuse에돌려가라앉아있는 cell을관찰한다. 2011년 1월부터 2012년 8월까지의뢰된양수중양수의상태가 Blood가심하게섞여있는경우, Dark Brown인경우, 양호한상태인경우세가지경우에속하는 5008건의양수염색체검사의검사소요시간을알아보았다. 양수염색체검사는 Cytogen을사용하여 3 7, 5% CO₂Incubator에서 In citu법 or Flask법으로배양하였으며, 세포수거하기 1시간전에 colcemid를처리한후저장처리 (0.075M KCl), 고정단계 (methanol:acetic acid=3;1) 를거쳐슬라이드를제작후 GTG 분염법을시행하여 20개이상의 metaphase를분석하였다. 결과 (Results) : Blood가심하게섞여있는 99건의양수검체의평균검사소요일은 15.6일이었으며, Dark Brown을띠는양수152건은 14.4일, 상태가양호한양수 4757건은 13.2일정도가소요되었다. 고찰 (Discussion) : 본원에의뢰된양수의검체상태에따른검사소요일은정상검체에비해 Blood가섞인검체나 Dark brown 검체가소요시간이지연되는것으로나타났으며, 그중 Blood가섞인검체는검사소요시간이가장긴것으로확인되었다. 양수속의태아세포는다른이물질이함께있으면태아세포들이자라는데방해가되어배양시간이길어지는것으로사료된다. 양수채취시섞이는 Blood는검사소요시간을지연시키므로양수채취시 Blood가섞이지않도록주의해야하며좋은상태의양수세포는결과를기다리는산모들에게심리적도움이될것으로사료된다. - 78 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 15 Marker chromosome 의기원을알아본증례보고 (2 예 ) 삼광의료재단 박영주 배경 (Background) : Marker chromosome은기원을알수없는구조적비정상염색체이며, 과거보고에의하면그발생율은 0.6~1.5/1000이다. 주로고령임신에서빈번히발생하며, Marker 염색체는기형과발달장애등과관련이있으므로그기원을확인하는것이중요하다. Marker의기원을알아보기위해서부모의혈액염색체검사를권하여시행하였고의뢰된태아의 Marker 염색체가혹여 21번염색체에서유래되었는지확인하고자 FISH 검사를시행해보았다. 증례 (Case) : 증례 1 Down syndrome screen(+) 로 2011년 6월의뢰태아염색체결과 : 47,XX,+mar 모친의혈액염색체결과 : 46,XX 부친의혈액염색체결과 : 46,XY 부모검사한결과태아염색체결과 : 47,XX,+mar dn 태아 FISH 검사결과 : nuc ish 21q22(D21S259,D21S341,D21S342) 2 증례 2 Down syndrome screen(+) 로 2012년 9월의뢰태아염색체결과 : 47,XY,+mar 모친의혈액염색체결과 : 46,XX 부친의혈액염색체결과 : 46,XY,+mar 부모검사한결과태아염색체결과 : 47,XY,+mar pat 태아 FISH 검사결과 : nuc ish 21q22(D21S259,D21S341,D21S342) 2 고찰 (Discussion) : Down syndrome screen(+) 로의뢰된각각다른두태아의염색체결과는육안으로 Marker의모양이유사해보였으며, 부모의혈액염색체결과를확인한결과한태아는부친에게받았으며, 다른태아는부모로부터유전되지않았다. 태아의염색체검사결과 Marker chromosome 이나올경우부모로부터유래되어유전이확인된경우는특별히임상적문제가없었다면기형의위험은낮지만, 그렇지않을경우그기원을알수없어태아의예후를예측하기어려워유전상담에한계가있다. Marker chromosome이나올경우먼저부모의혈액염색체검사를반드시시행하여유전의유무를확인하고 de novo인경우는 microarray 나 SKY(Spectral Karyotyping Technigue) 법으로 Marker 염색체의기원을확인하는것이필요하다. - 79 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 16 선천성난청을유발하는 GJB2 유전자돌연변이빈도 의료법인삼광의료재단 이연주 배경 (Background) : 선천성난청 (congenital hearing loss) 은선천성장애중가장흔한것으로신생아 500명당 1명의빈도로발생한다. 난청은조기에진단하여적극적으로치료하는것이청각회복에중요하므로출생 3개월이내에모든신생아에게난청선별검사를권장하고있어전체신생아의 70% 정도가관련검사를받고있다. 유전성소아난청의경우약 40% 에서 GJB2 유전자변이가원인인것으로알려져있어유전자검사를통한신생아난청선별및산전예측이가능하다. 이에본원에서는선천성난청유전자의돌연변이를조사하여그빈도를살펴보았다. 방법 (Methods) : 2010년 8월부터 2012년 7월까지최근 2년간본원에의뢰된선천성난청유전자 (GJB2 gene) 검사 306건을대상으로하였다. 신생아혈액여지를전처리후 Chemagic DNA/RNA kit (Chemagen, Germany) 로 DNA 추출을시행하였고자체개발한 primer를사용하여 polymerase chain reaction (PCR) 로증폭하였다. 증폭된 PCR 산물을정제하고, 염기서열분석 (direct sequencing) 을시행하여유전자변이여부를확인하였다. 결과 (Results) : 전체 306건중염기변이가검출된건수는총 206건 (67.32%) 이였으며이중단일염기다형성인경우가 186건 (90.29%), 돌연변이가검출된건수는 20건 (9.7%) 이었다. 발견된돌연변이의빈도는 c.235delc가 8건 (3.88%) 으로가장많았고, 그다음으로 T123N (c.368c>a) 5건 (2.43%), V37I(c.109G>A) 4건 (1.94%) 순이었으며, T186T(c.558G>A), C202* (c.560_605dupc>a), 235delC와 V37I(c.109G>A) 이함께검출된것이각 1건씩이었다. 단일염기다형성중에는 V27I(c.79G>A) 가 172건 (83.5%) 으로가장많았고대부분 E114G(341A>G) 와함께검출되었다. I203T(c.608T>C) 단일염기다형성은 14건 (6.8%) 로조사되었고 E114G (c.341a>g) 단독으로나온경우는없었다. 고찰 (Discussion) : 조사결과전체 306건중에서돌연변이가발견된경우는 20건 (6.54%) 이고이중선천성난청의증상이있는경우는 c.235delc와 V37I(c.109G>A) 이함께검출된 1건 (0.33%) 으로나타나 1000명중 3 4명이 GJB2 유전자돌연변이에의한난청인것으로예상할수있었다. 유전성난청은출생직후, 또는늦어도출생 6개월이전에발견하여재활치료를받는경우에, 정상에근사한어휘력을획득할수있게하여학습능력발달장애를예방할수있으며, 환아의정상적사회적응을용이하게함으로써질환에따른사회적비용을크게경감시킬수있다. 선천성난청을조기에발견하여치료시기를앞당겨줌으로써치료및재활효과를극대화시키는것이필요하겠다. - 80 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 17 혈액질환별염색체핵형분석과임상적의의 네오딘의학연구소유전체연구센터 임경옥ㆍ송지원ㆍ이현정ㆍ최수현ㆍ한재이ㆍ신은심 배경 (Background) : 혈액질환에서염색체핵형분석은특정질환과의연관성을확인할수있어진단과치료의목적으로사용되고있다. 핵형분석을통하여혈액질환의원인과발생에연관된염색체변이에대한증명이가능하고, 이에따라치료방침을결정하는데활용되고있으며, 나아가치료효과및질환의추적관찰이가능하여, 예후관찰에도도움을주고있다. 또한, 핵형분석을통한다양한염색체의이상결과와각질환과의연관성을파악할수있어, 혈액질환과염색체이상의종류와빈도에대한통계적수치를확립하고, 각혈액질환과염색체핵형과의연관성을정리하여이를보고하고자한다. 방법 (Methods) : 2011년 8월부터 2012년 8월까지본원에의뢰된골수검체 336건에대해분석하였다. 염색체핵형분석을위해, 임상증상에따라 24시간배양을하거나, 72시간배양하여염색체를수확하였다. 수확을마친후, 슬라이드를제작하여 GTG-분염법으로염색하여 20개의분열중기세포를분석하였다. 결과 (Results) : 2011년 8월부터 2012년 8월까지시행된 336건의골수검체에대한염색체핵형분석에대하여, 각증례별로의뢰된환자의임상증상을혈액질환의종류별로구분하였고, 이에따라분석된염색체핵형의종류와빈도를분석하였다. 336건의골수염색체분석결과, Lymphoma 12.8%, thrombocytopenia 6.5%, MM (multiple myeloma) 5.6%, Anemia 5.1%, MDS (myelodysplastc syndrome) 3.6%, DLBL(diffuse large-b cell lymphoma) 3.6%, CML (chronic myeloid leukemia) 2.4%, AML (acute myeloid leukemia) 1.5%, ITP(idiopathic thrombocytopenia) 1.2% 등으로혈액질환이구분되었다. 또한, 염색체핵형분석결과, 83% 에서염색체이상이확인이되지않았으며, 염색체이상이확인된 17% 중, CML을임상증상으로가진증례 62.5% 에서 t(9;22) 가관찰되었고, AML의 60% 에서 t(8;21) 가확인되었으며, MM은염색체이상이관찰되지않고정상세포만분석되었다. 결론 (Discussion) : 혈액질환을진단하기위한, 골수검체의염색체핵형분석은임상증상에따른적절한배양방법의선택과그에따른염색체핵형분석의해석이무엇보다도중요하다고할수있다. 또한, 환자의임상증상이나추정진단에대한정보와함께염색체핵형분석을시행할경우, 보다정확한진단을얻을수있다. 백혈병과골수형성이상증후군, 골수증식종양, 림프계악성종양등대부분의혈액종양은염색체이상을동반하고, 그중일부는특정한혈액종양에특이하게나타나거나밀접하게연관되어있고독특한생물학적특징을보인다. 따라서, 본연구의분석결과와같은임상증상에따른염색체핵형분석의분석은, 한국인의혈액질환에서의염색체이상을이해하고해석하기위한중요한자료로사료된다. - 81 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 18 Jacobsen syndrome 을보이는환자의핵형분석과임상적특징고찰 서울아산병원 권은미 Clinical Characterization of Patients with Distal I I q Deletions (Jacobsen syndrome) Kwon Eun-MI 배경 (Background) : 11q terminal deletion syndrome (Jacobsen 증후군 ) 은 chromosome 11 번염색체장완말단부위의결실에의해야기되며, 10,0000명당 1명의빈도로드물게발생한다. 이증후군을가지고있는환자의핵형을분석해보면 11번염색체의 11q23, q24, 또는 q25 부위의결실을보인다. 이러한결실은 de novo 로발생하거나, balanced translocation carrier 의자손에게서 reciprocal translocation의불균형분리에의해발생하게된다. 일반적인임상적인특징으로는 heart problems, speech and language problems, specific facial characteristics, 그리고 mild to severe mental retardation의증상이알려져있다. 이에본원에서관찰된 11q terminal deletion 환자들의임상증상을살펴보고자한다. 방법 (Methods) : 말초혈액검체를배양한후염색체검사에서 20개이상의분열중기세포를 count하여, 550 band level의해상도를가진분열중기세포를분석하였다. 핵형의표기는 International System for human Cytogenetic Nomenclature(ISCN, 2009) 의기준에따랐다. 2007년부터 2012년 09월까지서울아산병원의학유전학센터에의뢰된검사중 6case에서 11q 장완말단부위의결실또는재배열을확인하였고, 임상적인특징을고찰하였다. 결과 (Results) : Hypoplastic left heart syndrome과 mental retardation, short stature으로의뢰된 Case1, Case2 환자의염색체에서는말단부인 11q24.2 qter의결실을확인하였으며 case 3 에서는 interstitial deletion이관찰되었고, 절단부위는 q23.3에서 q25사이로추정되었다. 임상적인특징으로는 high arched palate, asymmetric face, feeding difficulty를보였다. Delayed development와 early puberty를보인 Case 4에서는 add(11)(q25) 이관찰되었고, 11q25 qter의 partial monosomy 및 addition된염색체의 partial trisomy를가지고있었다. Case 5에서보인 der(11)t(7;11)(q22;q24.2) 는 11번염색체장완과 7번염색체장완의불균형전좌를보였고, cardiomegaly와 low set ear등의특징이관찰되었다. developmental delay를나타내는 Case 6 의환아는 der(11)t(11;18)(q24.2;q21.3) 핵형을보였고이는 11번염색체장완과 18번염색체장완의불균형전좌를나타낸다. 고찰 (Discussion) : 본연구에서 11q terminal deletion을보인 6 case 중 case 1과 case 3 는환아부모가균형전좌재배열보인자로서, 환아의 11 q deletion이부모로부터유래한 der(11) 이었고, case 2, 4, 5, 6은 de novo로발생한 deletion임을확인하였다. 11q23 qter은 diseasecausing genes을포함하고있는중요한부위로서주의깊은 cytogenetic analysis가필요하겠고, 임상적인특징과의연계성을통해비슷한임상증상을보이는 Turner syndrome 이나 Noonan syndromes 등과감별하여정확한진단을할수있을것이다. - 82 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 19 Imatinib 에저항성이있는유전자변이의빈도 서울아산병원 권미량ㆍ최미옥ㆍ박상혁ㆍ조영욱ㆍ지현숙 배경 (Background) : BCR ABL 융합유전자로특징이있는조혈모세포질환인만성골수성백혈병과필라델피아염색체양성급성림프구성백혈병환자의치료는 ABL 키나제의선택적인저해자 Imatinib의사용에의해개선되어왔다. 그러나진행되는단계의대부분환자들에서 imatinib의초기반응후재발되거나질환이지속되는데이것은 imatinib에저항성이있는유전자변이가 ABL 키나제위치에나타나는것이주원인이었다. 이에본원에서는재발되거나치료에반응하지않는환자들에대하여 Imatinib에저항성을보이는유전자변이를검출하기위하여혈액과골수검체에서염기서열분석방법을이용하여검사하고, 환자의질환에따른유전자변이의특징과빈도등을알아보고자하였다. 방법 (Methods) : 2009년 1월부터 2012년 7월까지본원에서내원한환자중 Imatinib에저항성이있을것으로의심되는만성골수성백혈병의가속기또는급성기환자및 BCR ABL 재배열양성인급성림프아구성백혈병환자 58명을대상으로결과를분석하였다. 총58명의환자에서의뢰된검체중혈액은 12개, 골수는 46개이었다. 혈액과골수에서 High Pure RNA Isolation Kit (Roche, Switzerland) 을이용하여 RNA를추출하고 cdna를만들었다. Nested PCR로증폭후전기영동하여 Product 393/482/487bp를확인하였다. 염기서열검사는 BIGDYE v3.1 (ABI, USA) 을사용하여 Genetic analyzer 3130XL 에서검사후, Sequencher 프로그램에서 Reference sequence (Gene Bank Accession No. X16416.) 와비교하여분석하였다. 결과 (Results) : 검사가의뢰된총58명의환자중 Imatinib에저항성이있는유전자변이가발견된환자는 10명 (17.2%) 이었다. 만성골수성백혈병 (CML) 환자 38명중 6명 (13.1%), 급성림프구성백혈병 (ALL) 환자19명중 3명 (15.7%), 혼합표현형급성백혈병 (MPAL) 환자 2명중 1명 (50%) 에서양성을보였다. 만성골수성백혈병환자에서는 c. 1423_1424ins35 (p.cys475 Tyrfs*11) 2례, c.749g>a (p.gly250glu) 1례, c.925c>t (p.pro309ser) 와 1423_1424ins35 (p.cys475tyrfs*11) 을동시에보이는경우가 1례, c.1357g>c (Glu453Gln) 1례, c.757t>c (Thr253His) 1례를보였다. 특히급성림프구성백혈병환자에서 c.944c>t (p.thr315iso) 2례, 1423_1424ins35 (p.cys475tyrfs*11) 1례를보였고혼합표현형급성백혈병환자에서는 c.943a> G (p.thr315ala)c.1064a>g (p.glu355gln) c.1423_1424ins35 (p.cys475tyrfs*11) 등 3개의유전자변이가 1례에서발견되었다. 고찰 (Discussion) : 본원에서Imatinib에저항성이있는유전자변이는 17.2% 의빈도를보였다. c. 1423_1424ins35 (p.cys475tyrfs*11) 변이는만성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 혼합표현형급성백혈병등세질환에서모두나타났고 50% 의높은빈도를보였다. c.944c>t (p.thr315iso) 변이는급성림프구성백혈병환자에서만관찰되는특징을보였다. 이와같이 Imatinib 치료에저항성을보이는만성골수성백혈병뿐아니라 BCR ABL재배열양성인, 급성림프아구성백혈병및혼합표현형급성백혈병환자에서도염기서열분석을이용한유전자변이검사를시행하므로서약제선택에방향을제시할수있을것으로사료된다. - 83 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 20 18p deletion 증후군에관한증례보고 (The report of the chromosome 18 short arm deletion syndrome) 서울아산병원오유겸 배경 (Background) : 18p deletion은단두증, 사시, 길고크게튀어나온귀, 넓은얼굴등의안면기형이있고, 심장기형을비롯한중증도의지능저하와발달지연이있는염색체질환으로발생률은 50,000:1이며, 남녀성비는 2:3이다. 18p deletion의 85% 정도는 de novo 결실이며, 15% 정도는가족성재배열에서발생한다. 본원에서최근 6년간 2건을보고하였고, 그와관련된증례를보고하고자한다. 방법 (Methods) : 환자의말초혈액에 PHA를넣어 72시간배양후 colcemid처리후세포팽창과정과고정단계를거쳐 slide를만들고 aging 후 stain하여분석하였다. 분석시 20개의분열중기세포를 count하고, 550 band level의해상도를가진분열중기세포를 5개이상분석하였다. 결과 (Results) : 첫번째 case는영아때심실중격결손이있는폐동맥폐쇄 (PA with VSD) 진단을받아본원에서체동맥 폐동맥단락술 (BT shunt) 을받은후 follow up으로진단받던환아로유전적심질환을의심하여 Digeorge FISH검사시행하여정상으로나왔으나염색체검사에서 del(18)(p11.1) 이관찰되었다. 두번째 case는영아때동맥관개존증 (PDA) 으로수술받은사례가있었고발달지연과중증도의지능저하로내원하여실시한염색체검사에서 del(18) (p11.1) 이관찰되었다. 고찰 (Discussion) : 본원서울아산병원에서는최근 6년간보고된말초혈액검사중, 2건에서 del(18)(p11.1) 이관찰되었다. 심장기형을동반하는경우는 10% 내외로보고되어있으나두환자모두심장기형으로인한수술을받은사례가있었다는특징이있었다. 상당히드문염색체질환이지만, 특징적인임상증상을통해다른염색체이상과더불어 18p deletion에도주의를기울인다면보다더정확한염색체결과를보고할수있을것이다. - 84 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 21 Cytogenetic Microarray으로확인한 15번염색체의 Prader-willi/Angelman syndrome 1예 녹십자의료재단의학유전체연구소제2연구팀김주연ㆍ강유선ㆍ조은해 배경 (Background) : Prader-willi/Angelman syndrome은 15번염색체 (15q11-13) 에유전자이상이발생하고, 이로인해시상하부기능에장애가발생하는질환으로, 연령과개인에따라나타나는증상은다르다. 일반적으로저신장, 근육저긴장, 수유곤란, 발달장애, 지능장애, 작은손발, 성장호르몬결핍증, 시상하부성생식샘저하증이나타나며발달이늦어목가누기, 기어다니기등이다른아이들에비해늦으며, 말도늦으나이후 2~3세경이되면식욕이갑자기증가하면서먹는양이증가하고, 음식에대한욕구가매우강해져비만과당뇨를유발하는유전질환이다. Prader-willi/Angelman syndrome 은결실부위가미세하여 FISH( fluorescence in situ hybridization ) 법이나 Cytogenetic Microarray법으로확진이가능하며일반적인 karyotype 상에서는판별이어렵다.(Fig.1) 본증례는 2012년 9월 19일의뢰된 1세환아로, Hypotonia와 Poor feeding을주소로본원에 Cytogenetic Microarray법을의뢰하였고, 분석결과 15번염색체의이상이발견되었다. 증례 (Case) : Cytogenetic Microarray를시행하기위해환자의말초혈액에서 DNA Mini Kit(Qiagene,Germany) 를이용하여 DNA를추출하였다. 추출된 DNA 250ng을 amplification 하여 purification과 Fragmentation, labeling과정을거친후, chip안의 probe와 hybridization 시키고,washing과 stain과정을거쳐 analysis하였다.(affymetrix Cytoscan 750k array) 분석결과 15 염색체의 q11.2에서 q13.1까지약 5,128 Kbp의결실이관찰되어 Prader-willi/Angelman syndrome 에합당한소견임을알수있었다 (Fig.2,3). 고찰 (Discussion) : Cytogenetic Microarray법은전체유전체에걸쳐유전자 500kb 이상의결실, 중복을검사하는고해상도검사로써, 유전자의결실이나중복, 기존의핵형분석으로발견이불가능한미세결실과유전체의미세이상을발견해낼수있으며, 특히위증례와같이결실이미세하여 karyotype 만으로확진이어려운경우 Cytogenetic Microarray법을이용하여신속하고정확한진단을내릴수있어유용한검사라고사료된다. - 85 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 22 Chromosomal microarray로확진한말초혈액의 X 염색체단완 (Xp22.31) 의 STS유전자결실 녹십자의료재단백민정ㆍ강유선ㆍ조은해 배경 (Background) : X 연관비늘증 (X linked ichthyosis) 은비늘증가운데두번째로흔한질환으로 X염색체열성으로유전되며남자 2000~6000명당 1명정도로발생한다. 임상적으로는비늘증을보이는경미한유전성질환으로보통태어날때부터생겨서나이가들수록심해진다. 일부에서는피부증상이외의다른증상이나타나기도한다. 이질환은스테로이드설파타제 (steroid sulfatase) 의유전자이상으로인한스테로이드설파타제결핍으로발생한다. X 염색체단완 (Xp22) 의스테로이드설파타제유전자 (STS) 돌연변이로인한 X 염색체열성유전의질환이다. 표피각질층의스테로이드설파타제의결핍으로정상적인각질의탈락이이루어지지않아증상이발생한다. 본원에의뢰된검체중말초혈액에서 X 염색체단완 (Xp22.31) 의 STS유전자결실을 chromosomal microarray 법으로확진하였다. 증례 (Case) : 2012년 5월의뢰된태어난지 3개월된남아의말초혈액으로비늘증을보이는피부증상소견으로 microarray 검사를의뢰하였다. Chromosomal microarray를시행하기위해말초혈액에서 DNA Mini Kit (Qiagene, Germany) 를이용하여 DNA를추출하였다. 추출된 DNA 100ng을 16시간동안 amplification하여, purification과 labeling 한후, chip안에있는 probe 와 16시간동안 hybridization하였다. 그리고 washing과 stain 과정을거쳐 analysis 하였다 (Affymetrix 2.7). Microarray 결과 X염색체단완 (Xp22.31) 에서약 1.9Mb의결실이관찰되었다. 고찰 (Discussion) : 일반적인염색체검사에서발견하지못하거나확진이어려운미세결실을찾아낼수있는방법으로최신 chromosomal microarray 기법을이용하여발달지연, 정신장애, 자폐증, 선천성기형과관련된유전자이상에대한검사를한꺼번에할수있는신속하고정확한검사로유용할것으로사료된다. - 86 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 유전 ) 23 Myelodysplastic syndrome 환자의골수 chromosomal analysis와 Cytogenetic Microarray 분석결과증례보고 녹십자의료재단남옥이ㆍ강유선ㆍ조은해 배경 (Background) : Myelodysplastic syndrome( 이하 MDS) 는조혈모세포의기능장애로유전자변이가생겨여기에서유래한비정상세포들이골수기능을차지하고정상조혈세포들의기능을억제하여골수내조혈세포의질적양적이상소견을보인다. MDS는골수세포유전학적검사를통해전체환자중 40% 에서염색체이상소견이나타나며이와같은혈액종양환자의경우매우복잡한수적, 구조적이상을나타내므로 chromosomal analysis와함께염색체의 breakpoint 및미세결실, 중복등을확인할수있는 cytogenetic microarray검사를함께시행하는경우가늘고있다. 본원에의뢰된 67세 MDS 남성환자의골수 chromosomal analysis 결과와골수 cytogenetic microarray 분석결과를비교한결과 chromosome의정확한 breakpoint 를확인하여이를보고하고자한다. 증례 (Case) : 67세의남성환자로 MDS소견으로본원에골수 chromosomal analysis 와골수 Cytogenetic Microarray 검사가의뢰되었다. 골수 chromosomal analysis 는 20% RPMI1640 배지에 72hrs 배양법과 MTX/Thymidine 을처리한 24hrs 배양법, PW를처리한 72hrs 배양법등의다양한방법으로배양하였다. 배양후 0.075M KCl 저장액처리와 Carnoy sol. 고정처리후 slide 를제작하였다. GTL Banding 으로염색하여 20개의분열세포를분석하였다. Cytogenetic microarray 검사를위해 DNA Mini Kit (Qiagene, Germany) 를이용하여 DNA 를추출하였고, 추출된 DNA 100ng 을 16시간동안 amplification 하여, purification 과 labeling 한후, chip 안에있는 probe 와 16시간동안 hybridization 하였다. 그리고 Washing 과 stain 과정을거쳐 analysis 하였다 (Affymetrix 2.7M). 골수 chromosomal analysis 결과 46,X, Y,t(3;18)(q21;p11.2),t(8;14)(q24.1;q32),+der(18)t(3;18)[2]/ 47,idem,+mar[7]/45,X, Y[3]/46,XY[8] 이고, cytogenetic microarray 분석결과 Loss: Yp11.3q12 Gain: 3q13.32q29, 6q15q15, 18q11.1q23의결과를보여 t(3;18)(q21;p11.2) 에서 3번의정확한 breakpoint가 3q13.32로확인할수있었다. 고찰 (Discussion) : MDS와같은혈액종양환자의염색체는수적, 구조적으로매우복잡한이상을나타내며다양한유전적변화를동반하는경우가많다. chromosomal analysis는전체적인염색체의수적, 구조적이상을관찰하기는용이하나미세결실이나중복등육안으로관찰하기어려운부분에는한계가있다. Cytogenetic microarray검사는 2,700,000개의 maker를이용하여유전자의결실, 중복을검사하며, 기존의염색체분석으로발견이어려운대부분의미세결실 / 중복증후군뿐아니라 breakpoint 및새로운미세이상을발견할수있다. 대신낮은수준의모자이시즘, 균형전좌, 역위, 점돌연변이의검출은어렵다는단점이있기때문에기존의 chromosomal analysis, FISH 등의검사와병행하면진단에도움이되리라본다. 본원에의뢰된 67세남성환자의 BM chromosomal analysis와 cytogenetic microarray를병행하여검사한결과균형전좌 (Balanced translocation) 와육안으로확인하기어려운정확한 breakpoint 를확인할수있었다. - 87 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 1 당화혈색소 (Hb A1c) 검사의보관온도별검체안정성검사 녹십자의료재단진단검사의학부혈액학팀 유일호 배경 (Background) : 당화혈색소 (Hb A1c) 검사는최근 2 3개월간의종합적인혈당관리를 monitoring하는데중요한지표가되는검사이다. 원내기준검체 (EDTA Whole blood) 는접수, 검사후냉장상태 7일보관하고있으나, 냉동상태에따른검체안정성및재현성의기초자료및정보가없고관련된문의가종종발생하여원내기준검체 (EDTA Whole blood) 의일자별, 온도별보관상태에따라안정성을보고자하였다. 방법 (Methods) : 검사방법은 HPLC원리를사용하는 BIO RAD사의 Variant Turbo II로측정하였다. 검체는원내기준검체인 EDTA Whole blood 15건을 DATA별로선정하여, 실온 (20~24 ), 냉장 (2~8 ), 냉동1( 18~ 25 ), 냉동2( 70 ) 의 4개군으로분류하고 5uL씩 micro tube에나누어각각보관하고, 측정시 Dilution buffer 1,500uL와혼합하여검체당 2회씩, 3일간측정하여 %Bias로비교하였다. 결과 (Results) : 보관온도별 %Bias 변화는보관1일후, 2일후, 3일후측정시실온 (20~2 4 ) 에서 3.05, 6.18, 8.07 이고, 냉장 (2~8 ) 에서는 1.68, 5.56, 7.15이었다. 냉동1( 18~ 25 ) 에서는 1.57, 1.29, 1.99 이고, 냉동2( 70 ) 에서는 1.11, 0.64, 0.94 이었다. 고찰 (Discussion) : 3일간의측정결과실온 (20~24 ) 보관검체의경우 %Bias의 mean 값이크게증가하였으나, 냉동2( 70 ) 보관검체의경우 %Bias의 mean값은거의변화가없었다. 이번보관온도별검체안정성검사로미루어보아 EDTA Whole blood 의경우장시간보관을요할때에는냉동 ( 70 ) 상태로보관하는것이안정적일것으로보여진다. - 88 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 2 최근 3 년간 Malaria 양성율보고 녹십자의료재단감염유전체팀 김은주ㆍ박용원ㆍ장자현ㆍ조은해 배경 (Background) : 말라리아는 Plasmodium 속에속하는단세포기생동물인원충이적혈구와간세포내에기생함으로써발병하는급성열성감염증이다. 사람의말라리아감염은 Plasmodium 속원충가운데 Plasmodium falciparum( 열대열원충 ), Plasmodium vivax( 삼일열원충 ), Plasmodium ovale( 난형열원충 ), Plasmodium malariae( 사일열원충 ) 4종의원충이질병을유발한다. 현재우리나라와같은온대지방에서유행하는말라리아는 Plasmodium vivax( 삼일열원충 ) 로 1970년대에사라졌다가 1993년이후다시유행하기시작하였다. 감염된모기에서물린후인체에서임상증상이나타날때까지잠복기는 14일이지만, 삼일열말라리아의경우는 1년까지간속에잠복해있기도한다. 말라리아가의심되면혈액으로진단이가능한데말초혈액을도말하여염색한후현미경으로관찰하여찾아낼수있고말라리아원충의단백질항원을이용하여검사하는혈청학적검사가있으며위두가지검사법의한계인저농도혈증진단까지가능한중합효소연쇄반응 (PCR) 법이있다. 본검사실에서는 2009년부터최근 2012년 3년간의전국지역에서 PCR법으로의뢰된말라리아의지역별양성율과그변화추이를살펴보고자한다. 방법 (Methods) : 2009년에서 2012년본검사실에의뢰된검체를대상으로전체양성율을조사하였으며임상검체는 Chemagen chemagic MSM I 자동핵산추출장비를이용하여제조사지침에따라 DNA를추출하였다. 추출한 DNA에대해시발체 (primer) 를이용하여 T3000 (Biometra Germany) 장비로추출된핵산을증폭하고선별검사, 종별검사를시행하였다. 결과 (Results) : 본검사실의 2009년에서최근 2012년의뢰된말라리아는총1,203건이며평균양성율은 22.3% 를보였다. 지역별로는서울 (7.6%) > 경기 (5.6%) > 인천 (3.6%) > 대전 (1.9%) > 전라도 (1.2%) > 광주, 경상도, 부산 (0.8%) > 대구 (0.7%) > 울산, 제주 (0.2%) 순으로나타났고그외지역에서도미비한양성율을나타내었다. 고찰 (Discussion) : 2009년부터 2012년상반기까지 3년간전지역의양성율평균은각기 28.6%, 26.7%, 19.2%, 14.5% 로 3년평균은 22.3% 를보였다. 지역적으로는서울, 인천, 대전등주로경기서북부지역에환자발생증가가집중되었다. 이러한현상은우리나라말라리아발생은일반적인경향이아니라특정지역에국한된관련성이있을것으로생각된다. 휴전선근처와해안가지역, 대도시주변등에밀집되어있는데이런특징이사회경제적변수와역관계를만든요인으로사료된다. - 89 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 3 Microarray 로확인한 ALL 환자의 Bone marrow 결과 2 건 녹십자의료재단 구선영ㆍ강유선ㆍ조은해 배경 (Background) : ALL 환자에서나타날수있는염색체의변이는매우다양한양상을보일수있다. 일반적으로 ALL환자의 65~90% 이상에서세포유전학적이상이동반될수있다고한다. 특히다른질환과마찬가지로 ALL에서도특정한염색체의이상은치료의방향과예후를예측하는데있어중요한인자로작용할수있기때문에, 정확한검사결과를제공하는것이중요하다. 본 case는본원에의뢰된같은환자에서실시한두건의 BM-Microarry 결과에서전혀다른패턴의 abnormal이관찰되었으므로이를보고하고자한다. 방법 (Methods) : Microarry 검사를위해 BM 샘플에서 DNA를추출하여, 추출한 DNA 100ng을 Thermal cycler안에서 amplification 과정을거치고, Purif wash buffer로정제를한후, 2.7M Cytochip 위에서교잡반응을시행하였다. Hybridized된 Chip을 GeneChip Fluidics Station 450 장비를이용하여 Wash 및 Stain하고 Affymatrix GeneChip Scanner로 Scanning 한 data를분석하였다결과 (Results) : 101로구분된결과에서는 9p에서약 1.8M의결실과 13q14.2의 RB1 유전자를포함한 91Kb 결실이 heterozygous로관찰되는반면, 102로구분된결과에서는 6p22.2, 8q22.1, 9p21.3p21.2, 14q11.2, 18q22.2, 19p13.2부위의소실을동반하고, 9p21.3과 13q14.2 부위의 homozoygous 소실을보였다. 고찰 (Discussion) : 동일한환자에서라도, 혈액종양을앓고있는환자들에서 BM chromosome 결과는치료와약물의영향하에상당히다른패턴으로나타날수있다. 그러나, 특히 ALL 검체는같은 slide 내에서도정상세포는해상도가좋고, 비정상세포일수록해상도가나쁜경우가많아육안으로확인하고결과를내는데있어오류를범할가능성이높다. 또한일반적으로 slide를만드는과정에서일어날수있는 random loss라생각해서염색체의개수가적어보이는 cell을분석에서제외시키는경우도있을수있으나, ALL에서는염색체의수적이상자체가예후와연관되는경우가많으므로이에대해서도주의를기울여야한다. Microarry검사는위두건과같이동일한사람에게서도다양하게나타날수있는염색체의이상을정확하고명확하게결실된부위의위치와크기및포함되어있는 gene까지도밝혀낼수있어서, 까다롭게분석해야하는혈액종양환자의검사에서도유용하게쓰일수있다. - 90 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 4 검체보관조건에따른 Lymphocyte Subset 검체안정성평가 녹십자의료재단 이숙정 배경 (Background) : Lymphocyte Subset 검사는림프구표면에있는항원의종류및표현정도를알아내어혈액질환및각종질환의진단및치료에도움을주는검사로세포표면에각각특징적인항원을표현하고있다. 검체는세포표면의항원을검사하게되므로검체의상태가결과에미치는영향또한크다. 이에수탁전문의료기관에서의검체보관조건에따른검체안정성을평가하기로하였다. 방법 (Methods) : 검사항목은 Lymphocyte Subset 5종 (CD3, CD4, CD8, NK Cell, B Cell) 으로하고, 분석장비는 Cytomic FC500으로한다. Cell Viability를측정하여 Cell 상태를확인후검체보관조건에따른결과의차이를보기위하여채혈후 1시간이내에검사를진행하고, 2그룹으로나누어 A그룹은실온보관, B그룹은냉장보관하여 24시간, 48시간경과후반복검사를진행, 1시간이내검사한결과를기준으로 %Bias로평가하기로하였다. 결과 (Results) : 검체의 Cell Viability는모두 85% 이상을보였으며, T Cell중 CD3는조건에따른영향이적었던반면 CD4는냉장보관시결과의감소를보였으며, CD8은시간에따른증가를보였다. NK Cell은실온에서시간이지남에따라감소를보였으며, B Cell 역시실온에서시간이지남에따라결과의감소를보였다. 고찰 (Discussion) : Lymphocyte Subset 은실온 24시간에서가장작은 Bias를보여안정적이라할수있었으며, 냉장보관할경우 CD4의감소를보이므로유세포검사보관시지양해야할조건이라판단된다. 따라서 Lymphocyte Subset 검사시검체의 Cell Viability가 85% 이상이라도채혈후가능한빨리검사를진행하되그렇지못할경우 48시간내에검사하고, 검체는냉장보관보다는실온보관하는것이적합하다고판단된다. - 91 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 5 혈액응고검사 (PT, aptt) 시약제조시온도변화에따른결과값의영향 녹십자의료재단 김영래 배경 (Background) : 일상적으로시행하는혈액응고검사의경우검체인혈장 (3.2% Sod. Citrate) 에시약을가하고, 응고될때까지의시간을역학적또는광학적원리를이용하여측정하는것이다. 그러나응고인자의양과기능측정의경우복잡한연쇄효소반응인응고반응이적용되는검사로서시약의특이성, 감도, PH, 반응온도, 전기전도도등의측정조건변화에크게영향을받게된다. 또한사용시약은생물학적재료를원료로하므로제조및보존에올바른관리가요구된다. 이와관련하여계절변화에따른실내온도차이가응고검사결과에영향이있을것으로사료되어검사진행시관리가가장취약할수있는시약제조단계에서온도변화에따른결과값의차이를비교관찰하였다. 방법 (Methods) : 관찰시약범위는분말형태로제공되어담당자의제조단계가필요한시약으로하였고, 검사항목은일반적으로사용되는 prothrombin time(pt), activated partial thromboplastin time (aptt) 2항목을비교하였다. 시약은제공 insert 지침에따라개봉 ( 제조 ) 전냉장 (4 6 ) 보관하였고, 증류수분주 ( 제조 ) 후안정화단계에서온도변화를주어각단계별상용화된물질 (CONTROL) 의 normal 과 abnormal level결과차이를비교분석하였다. 온도는 1냉장1(2 8 ), 2냉장2( 장비내부온도기준 : 15 20 ), 3실온 (18 25 ), 4가온 (3 7 ) 의 4단계로분류하고, 단계마다 CONTROL 물질 (normal, abnormal) 을각 10회씩반복측정하여재현성과결과의평균값을비교분석하였다. 측정장비는 STA R evolution ( 제조사 :DIAGNOSTICA STAGO), PT시약은 NEOPLASTINE Cl PLUS, aptt 시약은 PTT A5, Control 물질은 STA COAG CONTROL N 과 P, 측정원리는 electromagnetic을이용하여혈장의유동성변화측정을기초로한 Clot assay법이다. 결과 (Results) : STA COAG CONTROL N(normal) 의 1냉장1(2 8 ), 2냉장2( 장비내부온도기준 : 15 20 ), 3실온 (18 25 ), 4가온 (37 ) 에서실시한 PT (%) 검사의평균은 95, 90, 90, 100% 이고, aptt (sec) 검사의평균은 34.2, 35, 35, 33.8 sec 이었다. PT (%) 검사의 CV는 3.6, 2.3, 1.8, 2.1 이고, aptt (sec) 검사의 CV는 2.3,1.1,1.6,1.9 이었다. STA COAG CONTROL P(abnormal) 의 1냉장1(2 8 ), 2냉장2( 장비내부온도기준 : 15 20 ), 3실온 (18 25 ), 4가온 (37 ) 에서실시한PT (%) 검사의평균은 41, 42, 41, 42% 였고, aptt (sec) 검사의평균은 54.4, 53.7, 53.2, 51.9 sec 이었다. PT (%) 검사의 CV는 3.3, 2.3, 2.5, 3.5 이고, aptt (sec) 검사의 CV는 2.3, 2.7,2.9, 3.9 sec 이었다. 고찰 (Discussion) : 가온 (37 ) 단계의결과값이 PT(%) 의경우유의하게상승하고, aptt (sec) 의경우단축되는것으로보아시약제조시높은온도를가함으로인해 Clot 형성이빠르게이루어지는것으로보인다. 또한, CV 계산시냉장1, 가온의경우는냉장2, 실온에비해높은 CV값을보여결과의재현성이낮아지는경향이보인다. 그리고, 냉장2( 장비내 REAGENT DRAWER AREA) 와실온의결과에서는차이가거의나타나지않았다. 결국, 시약조제시주변환경의급격한온도변화는시약의안정화단계에있어필요한 protein의균질화와 - 92 -
activation에영향을주어재현성이떨어지고 Overactivated된활성인자로인하여빠른응고형성이이루어지는현상이나타나므로, 환자상태를올바르게반영하지못할것으로사료된다. 따라서실내온도를적정 (18 25 ) 하게유지하는것이올바른검사결과를얻기위하여반드시선행되어야할것이며, 장비 DRAWER내의온도는 15 20 로항시적정온도를유지하고있으므로계절변화에따른 DATA의변화를줄이기위해선시약조제후장비내에서안정화시키는방법을사용하는것도고려할만하다. - 93 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 6 제대혈의단핵세포비율과재태연령의상관성분석 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 최정미ㆍ양정윤ㆍ김희정ㆍ홍혜경ㆍ오원일 배경 (Background) : 제대혈은분만시신생아로부터분리된탯줄과태반에남아있는혈액으로, 제대혈내의유핵세포 (nucleated cell) 분획에는조혈모세포가풍부하여혈액과면역장애질환등에효과적인치료방법으로쓰이고있다. 채취된제대혈은검사및가공과정을거쳐조혈모세포가포함되어있는유핵세포부분을분리, 저장하여향후이식에사용할수있도록한다. 분리된총유핵세포수 (total nucleated cells, TNCs) 와그속에포함된단핵세포수 (mononuclear cells, MNCs) 는제대혈이식성적을결정하는주요인자로재태연령, 체중등의신생아의요인에의해영향을받을수있다. 본연구에서는총유핵세포내의단핵세포비율과재태연령사이의상관성을분석하고자하였다. 방법 (Methods) : 2010년 1월부터 2011년 12월까지메디포스트 ( 주 ) 에보관의뢰된제대혈 25,370 단위를대상으로자동혈구분석기 ADVIA 2120 (Siemens, USA) 를이용하여일반혈액 (complete blood cell count, CBC) 검사를시행하고총유핵세포내의단핵세포비율을확인하였다. 측정된 25,370 단위의제대혈중산전감염질환검사결과와신생아의정보가기록된제대혈채취기록지를열람하여재태연령이기재되어있는 24,094 단위를대상으로단핵세포비율을비교하였다. 재태연령을기간별로 37주미만, 37주, 38주, 39주, 40주, 41주이상의 6군으로나누어서단핵세포비율과재태연령과의상관성을평가하였다. 결과 (Results) : 24,094 단위의제대혈평균단핵세포비율은 41.2% 를나타내었고, 재태연령기간별로나누어측정한단핵세포의비율은 37주미만 52.5%(955명 ), 37주 45.6%(2,087명 ), 38주 42.5%(6,079명 ), 39주 39.8%(7,142명 ), 40주 39.0%(6,240명 ), 41주이상 39.0%(1,591 명 ) 를보였다. 단핵세포비율과재태연령의상관성분석에서상관계수 (r) 값은 0.33으로제대혈의재태연령이높을수록단핵세포의비율이낮아지는상관성을보였다. 고찰 (Discussion) : 최근자료에서재태연령이총유핵세포수와총단핵세포수와연관성이있다고보고된바있다. 본연구에서는총단핵세포수가아닌단핵세포의비율과의연관성을분석하여재태연령이높을수록단핵세포의비율이낮아지는결과를나타냈다. 평균단핵세포의비율과재태연령기간별단핵세포의비율을비교한결과 37주미만, 37주, 38주까지는 11.3%, 4.4%, 1.3% 로기간에따라차이가나는것을볼수있으며, 39주, 40주, 41주이상부터는 1.4%, 2.2%, 2.2% 로변화의폭이적음을알수있었다. 이에 38주이하에서채취한제대혈은다른재태연령군에비해단핵세포비율이높아조혈모세포이식에서유용할수있을것으로사료되었다. - 94 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 7 Cooling 시간에따른제대혈세포생존도의변화추이관찰 메디포스트 ( 주 ) 생명공학연구소 유옥선ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 배경 (Background) : 출산시탯줄과태반에서나오는탯줄혈액인제대혈은백혈구와적혈구, 혈소판등다양한혈액세포들을만들어내는조혈모세포를다량함유하고있다. 산모에게서채취된제대혈은조혈모세포보관을위해일련의처리과정을거친후액체질소탱크에보관 ( 196 ) 한다. 처리과정중첨가되는동결보존제는고온상태에서는가연성을띄므로냉장보관한다. Precryo 상태인제대혈에냉장보관된동결보존제첨가시생기는온도변화에의한세포손상을줄이기위해제대혈의 cooling 단계를시행한다. 본실험에서는 cooling 시간에따라세포생존도에어떠한변화가있는지알아보고자하였다. 방법 (Methods) : 2012년 6월 2일 ~9월 30일까지메디포스트 생명공학연구소에보관의뢰된제대혈중채취부터저장까지 20시간이상 40시간미만인검체를대상으로 606건임의추출하였다. 제대혈은채취부터저장까지시간에따라생존도값에영향을줄수있으므로추출대상을 20시간이상 40시간미만으로지정하였다. Precryo 상태인제대혈의 cooling 시간을 10분에서 60분까지 10분단위로총 6개집단으로나누었다. 동결보존제 (10% DMSO, BIONICHEPHAPMA) 를첨가한세포의생존도를측정하고, 동결보존제첨가전과첨가후제대혈의세포생존도를측정하였다. 세포생존도검사는 Tryphan blue dye Exclusion법 (Tryphan blue solution, SIGMA) 을시행하였고, 검사자간의오차를줄이기위해한검체에두명이상 Cross reading을하여평균값으로나타내었다. 결과 (Results) : Precryo 상태인제대혈의 cooling 시간에따른세포생존도는 10분 88.0% (n=96), 20분 87.6%(n=138), 30분 87.4%(n=125), 40분 87.3%(n=117), 50분 87.8%(n=71), 60분 86.8%(n=59) 로나타났다. 동결보존제첨가전과첨가후제대혈의세포생존도차이는 10분 6.4%, 20분 7.0%, 30분 6.6%, 40분 6.8%, 50분 6.5%, 60분 7.6% 이었다. 고찰 (Discussion) : 실험결과 cooling 시간이지연될수록세포생존도는저하되었다. cooling 시간 10분과 60분의세포생존도차이는 1.2% 로유의한차이를보이는데이는 cooling 시간의지연이세포생존도저하에영향을미친다고볼수있다. 또한동결보존제첨가전후의세포생존도는시간이경과할수록차이가커지는양상을보였다. 20분에서 50분까지검체생존도차이는 10분기준평균 0.48% 로세포생존도가저하되고있지만변화의폭이적음을알수있었다. Cooling 시간 60분이상의제대혈은세포생존도값에영향을줄수있으므로현재시행되고있는 Precryo 상태인제대혈의 cooling 60분이내기준이바람직하다고볼수있다. - 95 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 8 Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase 측정시위양성예 울산의대서울아산병원진단검사의학과 전소현ㆍ박정숙ㆍ최미옥ㆍ지현숙 배경 (Background) : G 6 PDH는적혈구에존재하는 hexose monophosphate pathway의효소로서결핍시용혈성빈혈을일으킨다. G 6 PD 결핍된환자의적혈구내에산화성물질이축적되어혈색소의변성을일으키고용혈을일으키게되며, 이산화성물질의환원을위해서는 NADPH가필요한데이는 hexose monophosphate pathway에의해공급된다. 유전자변이에의한 G 6 PDH 활성의감소는 heinz bodies를형성하고용혈성빈혈을초래한다. 산화성용혈을일으키는약제는해열제, 설파제, 항말라리아제등이고, G 6 PDH결핍된환자에서약물복용후 48 96시간후용혈이나타난다. 검사소견으로는헤모글로빈혈증, 헤모글로빈뇨증, heinz body의관찰등을특징적으로볼수있다. 하지만이런 G 6 PDH 활성의감소는극히드문질환이기는하나용혈성빈혈환자에서는감별진단시반드시필요한검사이므로본원에서는 BEN BIOCHEMICAL ENTERPRISE SRL( Italy) 사의시약으로정량검사를시행하고있는데최근백혈구증다증환자에서참고치보다높은결과값을보여백혈구제거후재측정하여정상범위로돌아온경우가있었기에측정시주의해야할사항으로생각되어보고하는바이다. 증례 (Case) : 만성육아종성질환 (Chronic granulomatous disease) 으로입원한 14개월된남아로피부과약을투여하기전, G 6 PDH 의결핍유무를알기위하여검사의뢰하였음. CBC 결과는 WBC 37.3 x 10 3 /µl, RBC 2.84 x 10 6 /µl, Reticulocyte 3.20%, Hb 7.3 g/dl, PLT 329 x 10 3 /µl 이었으며, G 6 PDH 결과는 28.41 U/gHb로참고치 (7.0 U/gHb 20.5 U/gHb) 를벗어나는결과를나타내었다. 그래서 buffy coat층을제거하고재검사하여정상범위인 20.14 U/gHb 의결과를얻을수있었다. 고찰 (Discussion) : G 6 PDH는신생아의경우높을수있고, 망상적혈구에의해상승될수있으며, 약물에의해서도영향을받을수있다. 백혈구및혈소판내에는 G 6 PDH가풍부하여검사결과에영향을미칠수있으므로백혈구증다증또는백혈병의경우, buffy coat층을제거하고검사를시행할것을권고하고있으나간과되는경우가있으므로g 6 PDH정량검사시반드시백혈구수및혈소판수를확인하여증가되어있을경우이를제거후검사를시행해야할것으로사료된다. - 96 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 9 AMC 의 CBC 정도관리물질허용범위설정방법소개 서울아산병원진단검사의학과 최미옥ㆍ김종화ㆍ김동제ㆍ박찬정 배경 (Background) : 자동혈구분석기의내부정도관리를위해서는최소 2가지농도이상의정도관리물질로정도관리를시행해야하며검사실자체에서설정된허용범위를사용하도록규정되어있다. 본원은현재자동혈구분석기 XE 2100(SYSMEX, JAPAN) 7대를사용하여일평균 4,000여건의 CBC검사를시행하고있고년 6회다른 Lot No. 의정도관리물질이공급되어각장비별로자체허용범위를설정하여사용하고있다. 이에연자는본검사실의장비및정도관리물질공급의일정을고려한검사실실정에맞는정도관리물질의자체허용범위설정기준을마련하였기에이를소개하고자한다. 방법 (Methods) : XE 2100의정도관리물질인 e CHECK의허용범위를검증하기위해사용중인정도관리물질과 5일동안 2회씩parallel test를시행하여 10회측정한값으로평균값을구하여제조사허용범위에포함되는지를확인하였다. 일반적으로안정적인정도관리를시행하였고각 level별로 lot마다정도관리물질의평균값이유사한값을보이므로전 Lot의 CV를이용하여각항목별로 SD를구하고 10회측정시평균값과전Lot의 CV를이용하여구한 SD로허용범위를설정하였다. 허용범위의재검증은자체설정된범위로사용하다가 20일간누적 data의 mean 값이자체설정된 mean±1sd 이내일경우수정없이사용하며그렇치않을경우 20일간의누적결과로허용범위를재설정하여사용하였다. 고찰 (Discussion) : 자동혈구분석기의정도관리물질은짧은유효기간으로 parallel검사에한계가있고다수의장비를사용할경우각장비별로빈번하게정도관리업무를시행해야하므로검사를운용하는검사자의업무부담을가중시킬수있다. CLSI guideline에따른허용범위설정기준에따라검사실의실정에맞는기준을제시함으로서검사자가좀더편리하게검사업무를수행하며 CBC검사의정확도를향상시킬수있었다. - 97 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 10 2009 년 ISTH 에서제안된 Lupus Anticoagulant(LA) 검사방법도입 서울아산병원 이명심ㆍ최미옥ㆍ장성수ㆍ지현숙 배경 (Background) : Lupus Anticoagulant(LA) 는일종의항인지질항체로인지질에결합하여정상적인응고과정을방해하여시험관내에서는인지질의존성응고장애를가져오지만, 인체내에서는오히려색전증을일으켜임상적으로반복적인유산이나심부정맥혈전증등을일으킨다. 진단을위해서는인지질의존성응고검사상비정상적인응고시간연장, 정상혈장과혼합하여도응고장애가교정되지않는억제효과, 인지질성분을더하면응고장애가교정되는조건들을만족해야한다. LA검사는 1995년 ISTH (International Society on Thrombosis & Haemostasis) 가이드라인에따라검사를시행하였으나, 2009년 ISTH에서기존가이드라인의문제점을보완한새로운 LA 가이드라인을제안하였다. 그내용으로는환자선택, LA 검사시부적절요구최소화, 채혈법, 검체처리과정, drvvt와 sensitive aptt검사로의제한, 각검사의 cut off 계산설명, 상황에따른결과해석을포함하고있어본원에서는제안된 LA검사방법을변경하였기에이를소개하고자한다. 방법 (Methods) : 91명의환자검체를대상으로 STA R(Diagnostica Stago; France) 장비를이용하여 PT, aptt, aptt 혼합검사, 혈소판중화검사, Dilute Russell s viper venom time (DRVVT) of DVV test/confirm (American Diagnostica Inc; USA) 를시행하였고, ACL TOP (Instrumentation Laboratory; USA) 장비를이용하여 DRVVT method (IL DRVVT) 와 silica clotting time (IL SCT) 검사를실시하였다. 2009년가이드라인에따라선별검사의양성기준이되는 cut off 값은건강한성인 48명의결과치로분포도의 99% 이상값으로설정하였고, 20일이상의정도관리결과로허용범위를설정하였다결과 (Results) : 변경된방법의 LA 선별검사에서확진검사를시행하는기준이되는 cut off 값은 LA screen 34.9sec, SCT Screen 48.7sec이며, LA 양성기준이되는선별검사와확진검사의비율은 LAC (DRVVT) ratio 1.14, SCT (LA Screen) ratio 1.22였다. 기존방법과의결과를비교해보면, 91명중, American Diagnostica (AD) 시약을사용한검사에서 44명, ACL TOP을이용한검사에서는 45명의양성결과를얻을수있었다. 91명중 22명의환자가임상적으로항인지질증후군의증상을보였고, 그외의환자에게서는증상이나타나지않았다고찰 (Discussion) : ISTH의 1995년가이드라인과비교하여 2009년가이드라인에서변경된중요한내용으로는첫째 LA 진단을위해기존에제시된 LA방법은 2가지이상의검사를시행하도록하였으나, 2009년가이드라인에서는 drvvt와 sensitivity aptt로제한하여위양성을줄일수있도록하였고, 두번째는확진검사에사용하는인지질을 hexagonal phase 또는 lipid bilayer를사용하도록제한하여위음성을줄일수있도록하였다. 2가지검사중에서도 drvvt 검사를우선실시하도록권하여검사의우선순위를부여함으로보다일관된검사를수행할수있게권고하였다. LA 검사는임상적으로후천적혈전증상을나타내는 Antiphospholipid antibody syndrome (APS) 진단에필수적인검사로서 anti cardiolipin (acl) 과 anti b2glycoprotein I (B2 GPI) antibodies 검사와함께검사실적진단의기준이되고있으며 12주간격으로 2회이상양성이나오는경우임상적으로중요한의미를갖게된다. 본원에서는 2009년 ISTH에서권고한 LA검사가이드라인에맞춰검사를세팅하였다. - 98 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 11 국내말라리아 PCR 의양성추이조사 의료법인삼광의료재단 이연주 배경 (Background) : 말라리아는 Plasmodium 속원충이적혈구와간세포내에기생함으로써발병하는급성열성감염증이다. 최근국내에서비무장인접지역과인천, 강화, 경기북부지역을중심으로삼일열말라리아 (Plasmodium vivax) 가유행하고있으며, 해외여행의증가로인하여열대열말라리아 (Plasmodium falciparum) 에의한감염도증가되고있다. 또한수혈전파성감염의위험도함께증가되고있어말라리아의조기진단이필요하며원충의종류에따라감염기간이나중증도가다르므로정확한진단과치료가중요시된다. 이에본원에서진단된국내말라리아의양성추이를조사해보았다. 방법 (Methods) : 2010년 9월부터 2012년 8월까지최근 2년간본원에의뢰된 Malaria PCR 398건을대상으로하였다. 검체는 Chemagic DNA/RNA kit (Chemagen, Germany) 를이용하여 DNA 추출을시행하였고자체개발한 primer를사용하여 Polymerase chain reaction (PCR) 로증폭하였다. 증폭된 PCR 산물을정제하고, 염기서열분석 (Direct sequencing) 을시행하여원충을확인하였다. 결과 (Results) : 총 398건에서양성을보인건수는 29건 (7.29%) 이였고, 월별로보았을때 9월이 9건 (31.03%) 으로가장많았고 6월, 7월이각 5건 (17.24%), 5월 3건 (10.34%), 8월이 2건 (6.90%) 이였으며 2월, 3월, 10월, 11월, 12월에각 1건 (3.45%) 으로조사되었다. 이중삼일열말라리아가 23건 (79.31%), 열대열말라리아 5건 (17.24%), 사일열말라리아 (Plasmodium malariae) 1건 (3.45%) 으로검출되었다. 삼일열말라리아가아닌원충은 2월, 3월, 5월, 8월, 9월, 12월에각 1건씩이였다. 고찰 (Discussion) : 월별양성률을보았을때기온이높아져기존에많이나왔던 7 8월보다는약간기온이떨어진 9월에가장많은양성률을보였다. 또한삼일열말라리아뿐아니라열대열말라리아나사일열말라리아도총 6건 (20.69%) 을차지하고있었으며겨울에도꾸준히검출되는것으로조사되었다. 이로미루어보아국내말라리아양성률증가에따른감염및수혈성전파의위험도를줄이기위해서여름철뿐만아니라가을철에도주의가필요하며말라리아의빠르고정확한진단이필요하겠다. - 99 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 12 PFA-100 closure time에영향을미치는요소와유용성 (Factors affecting PFA-100 closure time and effectiveness of PFA-100) 인제대학교해운대백병원진단검사의학과권형범 배경 (Background) : 혈소판은일차지혈에관여하는중요한요소로혈소판응괴는혈소판부착, 활성화, 분비, 응집단계를거쳐이루어진다. PFA 100(Simens, Newark, USA) 은혈소판부착과응집능을측정함으로써혈소판기능장애선별검사에유용하게사용되고있다. 그러나검사결과에이상이있는경우약물의효과, 본빌레브란트병, 혈소판기능장애등을감별해야하며이외에도채혈시간, 혈액형, 혈소판수, 적혈구용적율등의영향으로정상혈소판기능의경우에도비정상적으로연장되어나올수있다. 최근본원에도입된 PFA 100의측정결과에이상을보인사례와문헌고찰을통해, 결과에영향을미치는요소파악의중요성과유용성에대해알아보고자하였다. 방법 (Methods) : 2012년 2월부터 4월까지인제대학교해운대백병원진단검사의학과에의뢰된혈소판부착ㆍ응집능검사인 Collagen/Epineprine, Collagen/ADP 검사중 Collagen/Epineprine에서비정상적인폐색시간을나타내는결과에대하여환자의약물투여여부와적혈구용적율및혈소판수를관찰하였다. 측정장비는 PFA 100를사용하였다. 결과 (Results) : 본원에서는 Collagen/Epineprine, Collagen/ADP참고치가각각81~182초, 62~110초로설정되어있다. 관찰기간동안 Collagen/Epineprine검사 3건에서결과가182초이상연장되어나타났다. 연장된결과를보이는환자는재검측정시에도동일한결과를나타내었으며각각의환자에서적혈구용적율은 16.6%, 28.7%, 14.2% 를혈소판수는 86,000/ul, 132,000/ul, 104,000/ul를나타내었다. 결과이상이 Aspirin에기인한것인지알아보기위하여, 한환자에서는 Collagen/ADP검사를추가로실시하였고결과는 94초로나타났다. 고찰 (Discussion) : PFA 100 Closure time(ct) 결과는여러요인에의해영향을받는다. 성별과연령은대개영향을미치지않지만, 남성보다여성에서연장되며신생아에서는 von Willebrand factor 양이적어 CT가짧게나타난다는보고도있다. 또한검체채취시간에도영향을받을수있는데 Collagen/Epineprine은오후에채취한혈액에서 30% 정도 CT가연장되어나타난다고한다. CLSI Guideline에따르면 Hct<20%, Platelet<50,000/ul인경우에 PFA 100 CT검사를권장하지않으나, 제조사지침서에의하면 Hct<30%, Platelet<150,000/ul로규정하고있다. O형혈액을가진사람들은 von Willebrand factor양이적어다른혈액형보다 10 20% 정도 CT결과가연장될수있다. 이외에 Aspirin, Indometacin, Meloxicam은 Collagen/Epineprine CT의연장을, Abiciximab, Hydroxyethylstarch, gelatin은 Collagen/ADP CT의연장을초래한다. 따라서결과이상시영향을미치는요소에대하여정확한분석이요구되며이는검사의신뢰도를높이고검사의유용성을향상시킬수있는중요한요소가될것으로사료되었다. - 100 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 13 Mixing test를위한 Homemade Normal Pooled Plasma의제조및평가 세브란스병원진단검사의학과배가희ㆍ양미숙ㆍ김선경ㆍ김일ㆍ김수정 배경 (Background) : Mixing test는혈액응고검사중prothrombin time(pt) 또는 activated partial thromboplastin time (aptt) 결과가연장될경우그원인이응고인자결핍으로인한것인지아니면응고인자억제제에의한것인지를규명해주기위한선별검사로서, 환자의혈장과 normal pooled plasma(npp) 를동량혼합하여 PT, aptt 검사를시행한다. NPP에는충분한양의응고인자들이포함되어있으므로응고인자결핍이있는경우, 응고시간이단축 ( 교정 ) 되지만, 응고인자억제제에의해응고시간이연장된경우라면교정되지않는원리를이용한검사이다. 본연구에서는 mixing test를위한 NPP 를제조하고혈수판수, 응고검사, 응고인자검사를포함한응고관련단백에대한검사를시행하여그성상을평가하였다. 방법 (Methods) : 2012년 8~9월세브란스병원진단검사의학과검사실에 PT, aptt검사가의뢰된 3.2% sodium citrate 검체중정상결과를보이는 200명의검체를혈소판결핍혈장 ( 혈소판수 10x10 9 /L) 으로만들기위해 3400rpm에 10분간이중원심분리하여플라스틱컨테이너에수집하였다. 수집하는동안에는 70 에냉동보관하였고, 수집완료후, 냉동된 pooled plasma를 37 water bath 에서해동하였다. 해동된pooled plasma에대하여혈소판수, PT, aptt, fibrinogen, D dimer, fibrinogen fibrin degradation products (FDP), thrombin time(tt), anti thrombin lll(at lll), protein C, free protein S, factor ll, V, Vll, Vlll, lx, X, Xl, Xll assay, von Willebrand factor(vwf) activity, VWF antigen(ag), lupus anticoagulant (LA) screen, LA confirm 검사를각 4회씩실시하였다. 검사한pooled plasma는 mixing test에사용하기위하여 microtube에각각 1.5ml씩분주하여 70 에보관하였다결과 (Results) : Homemade NPP의평균혈소판수는 7.8 x10 9 /L, PT 10.3초, 116.3%, 0.9 INR, aptt 34.1초, fibrinogen 296.8mg/dl, D dimer 151.8ng/ml, FDP 3.6μg /ml, TT 16.1 초, AT lll 107.0%, protein C 110.3%, free protein S 91.3%, factor ll 100.5%, V 102.3%, Vll 116.9%, Vlll 96.9%, lx 103.6%, X 95.0%, Xl 91.9%, Xll 78.2%, VWF activity 139.0%, VWF Ag 100.3%, LA screen negative, LA confirm negative 였다. 고찰 (Discussion) : 검사실에서제조한 NPP의혈소판및응고검사평가결과가검사실의참고범위안의값을보였으며정상혈장을이용하는검사에사용이가능하다. - 101 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 14 Stago revolution 장비를이용한 D-dimer 정량검사의유용성평가 (Evaluation of D-dimer quantitative test with Stago revolution) 삼광의료재단박홍철 배경 (Background) : D-dimer는혈액응고결과형성되는섬유소들이플라즈민에의해분해되어생기는분해산물이다. 플라즈민은피브리노겐, 피브린, 교차결합한피브린을분해하지만 D-dimer는혈액응고과정에서형성된교차결합한피브린을분해할때만형성된다. D-dimer 는범혈관내응고증 (DIC) 을진단하는데중요한검사법의하나로사용되고있다. DIC는혈관내응고기전이활성화되고여기에이어섬유소용해가계속적으로일어나는상태인데이때 D-dimer가증가한다. D-dimer는혈전형성질환에서도증가하기때문에심부정맥혈증 (DVT) 이나폐색전증의진단에서도이용된다. 민감한검사방법을이용하여 D-dimer 정량검사를시행하면 DVT 환자의경우거의 100% 에서 D-dimer가증가되어있기때문에 D-dimer 농도가정상일경우 DVT의가능성을배재할수있다는보고도있다. 정상혈장에서는 D-dimer가존재하지않기때문에 FDP검사보다 DIC에대한특이도가높으나민감도가낮기때문에두가지검사를동시에실시하는것이좋다. 이에 STAGO Revolution 장비를이용하여 D-dimer 정량검사의유용성을평가하였다. 방법 (Methods) : 본원에의뢰된 40건을대상으로정밀도평가를위해 Low, High level로검사일내 CV(%) 값을알아보았고, Stago revolution 와 CA1500 장비의상관관계를평가하였다. 또한자동화장비이므로 Carry over를실시하였다. 결과 (Results) : 검사일내재현성에대한변이계수 (CV) 는 Low level: 3.42%, High level: 4.76% 로아주좋은재현성을보였으며두장비간의상관계수는 r=0.976로나타났다. Carry over는 0.34% 로 1.0% 의매우양호한결과를보였다. 고찰 (Discussion) : 본원에서사용하는자동화기기인 Stago revolution 장비를이용한 D-dimer정량검사의유용성을평가해본결과재현성, 직선성및두장비간상관성도우수하였고 Carry over 평가역시양호한결과를보여 CA1500 자동화장비를이용한 D-dimer 정량검사는여러혈전형성질환의진단검사로임상검사실에서유용하게사용할수있을것이다. - 102 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 혈액 ) 15 Stago revolution장비를이용한 FDP 정량검사의유용성평가 (Evaluation of FDP quantitative test with Stago revolution) 삼광의료재단박홍철 배경 (Background) : 혈관이다치면아드레날린이분비되어혈관이수축하고혈관벽에노출된콜라겐에혈소판이붙게된다. 이차적으로응고인자가활성화되어결국섬유소원 (fibrinogen) 이섬유소 (fibrin) 로되고섬유소끼리뭉쳐서섬유소중합체 (polymer) 가되어응괴에붙어서단단해진다. 만들어진응괴는섬유소용해효소 (plasmin) 를활성화시킨다. 섬유소용해효소에의해섬유소중합체가분해되면섬유소분해산물 (FDP) 이생긴다. 섬유소분해산물은섬유소원이섬유소로되는것을막아서항응고작용을한다. FDP는 D-dimer 검사와더불어 DIC진단에중요하다. DIC는응고기전이갑작스럽게비정상적으로자극받은상태이다. 비정성적인응고가폭발적으로자극되면응고인자와혈소판이모두고갈되어광범위하게퍼진혈전이형성되며과도한혈전형성은섬유소용해과정을활성화시킨다. 미세혈관내손상된장기에허혈이생기고좁아진미세혈관을통과하던적혈구가파괴되어빈혈이생긴다. 또한플라즈미노겐의활성화뿐아니라혈소판및응고인자의소모로인한출혈이나타나기도한다. 이에 Stago revolution 장비를이용하여 FDP 정량검사의유용성을평가하였다. 방법 (Methods) : 본원에의뢰된 40건을대상으로정밀도평가를위해 Low, High level로검사일내 CV(%) 값을알아보았고, Stago revolution와 CA1500 장비의상관관계를평가하였다. 또한자동화장비이므로 Carry over를실시하였다. 결과 (Results) : 검사일내재현성에대한변이계수 (CV) 는 Low level: 3.84%, High level: 3.15% 로좋은재현성을보였으며두장비간의상관계수는 r=0.9800로나타났다. Carry over 는 0.42% 로 1.0% 의매우양호한결과를보였다. 고찰 (Discussion) : CA1500 장비를이용한 FDP검사는재현성, 직선성및두장비간상관성도우수하였고 Carry over 평가역시양호한결과를보였다. CA1500 자동화장비를이용한 FDP 정량검사는 D-dimer 정량검사와더불어임상검사실에유용하게사용될수있으리라생각한다. - 103 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 1 검체보관조건이동종응집소역가에미치는영향 (Effects of specimen storage conditions on the isoagglutinin titer) 국립암센터진단검사의학과서희승ㆍ송윤경ㆍ안태규ㆍ김강림공선영 배경 (Background) : ABO혈액형의동종응집소역가는 ABO 부적합골수이식의경과관찰에중요한지표이다. 최근 ABO 부적합장기이식이증가하면서수술전공여자 ABO 형에부적합한동종응집소를제거하고이를지속적으로평가하는것이중요해지고있다. 하지만, 통상 24시간이내에시행하는동종응집소역가검사시간이짧지않아검사의뢰가있을때마다수행하기어려운점이있어검체저장후보관기간과온도에따른영향이있는지알아보고자하였다. 방법 (Methods) : 국립암센터국가암검진센터에서건강검진을받은성인 (20-70세) 중혈액형별로각각 10명씩총30명을검사대상으로선정하였다. 검체별로실온과냉장보관으로나누어보관전과보관후매 24시간마다 96시간까지검사하였다. 냉장보관검체의경우검사전 30분간실온방치후검사하였고, 10개의시험관에생리식염수 100μl를분주한후검체를 100μl넣고연속희석하여실온식염수법으로검사하였다. 각시험관마다 3% 의혈구부유액 100μl를넣고실온에서혼합하여 3400rpm에서 15초동안원심분리후즉시판독하였다. 결과 (Results) : 보관전과비교하여실온보관검체에서 A형 4개, B형 4개검체에서한번이상 1단계역가차이를보였다. O(anti-B) 형 3개와 O(anti-A) 형 3개의검체에서 1단계역가차이를보였다. 냉장보관검체의검사결과 A형 6개, B형 4개검체에서 1단계역가차이를보였고 O(anti-B) 형 4개와 O(anti-A) 형 3개검체에서 1단계역가차이를보였다. 고찰 (Discussion) : 동종응집소역가검사에서검체보관전과비교시 96시간까지역가차이가 1단계를초과한검체는없었다. 1단계역가차이는반정량검사의결과비교시허용범위에속하므로동종응집소역가검체의안정조건을냉장및실온보관에서 96시간까지연장하는것을고려할수있겠다. 하지만, 중요성이커지는동종응집소역가의검사실간검사법이달라검사방법표준화의필요성이요구된다. - 104 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 2 항-E를지닌간이식환자에게서추가동정된항-Di a 검출사례 (The Cases of Anti-E and Anti-Di a appeared in liver trasnsplantation patient) 서울아산병원혈액은행김효진 배경 (Background) : Diego 항원은신생아용혈성질환의신생아를분만한산모의혈청중에서처음발견되었다. Di a 항원은백인에게는드문저빈도항원이나미국인디언과몽고계아시아인에게비교적높은빈도로발견되는항원으로국내대부분의검사실에서사용하고있는외국산선별혈구에는 Di a 항원이대부분포함되어있지않아 Di a 항원에대한항체 ( 이하항 Di a 항체로약함 ) 검출이어려운실정이다. 이에국내에서도 Di a 항원선별혈구의필요성이제기된바있다. 본원에서는 2012년 4월항 E를지닌간이식환자에게서추가로항 Di a 가동정된사례가있어보고하는바이다. 방법 (Methods) : 환자의항체선별검사 (ID Diacell I II, BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 및항체동정검사검사 (DiaPanel, BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 는미세원주응집법 (LISS Coombs Card. BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 을이용하여검사하였다. 또항 Di a 검사는 DiaCell Di a (BioRad, cressier s/morat, Switzerland ) 선별혈구와환자의혈청을미세원주응집법 (LISS Coombs Card. BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 으로검사하였고, 대한적십자사중앙검사센터에서제공받은 E,c항원이제외된 Di a 항원선별혈구와환자의혈청을미세원주응집법 (LISS Coombs Card. BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 으로비교검사하였다. 결과 (Results) : 환자의항체선별검사는 (4+) 양성이었으며, 본원에서실시한항체동정검사는항 E로동정되었다. 이에 E항원이없는농축적혈구 10단위와환자의혈청을교차시험하였고, 항글로블린단계에서혈액 2단위가 (2+) 양성반응으로부적합을보였다. 추가로시행된 DiaCell Di a (BioRad, cressier s/morat, Switzerland) 선별혈구와환자혈청과의반응에서 (4+) 양성을보였고, 대한적십자사중앙검사센터에서제공받은 E,c항원이제외된 Di a 항원선별혈구와의반응에서 (2+) 양성을보여항 Di a 가환자의혈청내에존재함을확인하였다. 고찰 (Discusion) : 항 Di a 는수혈이나임신등에의해생길수있는면역항체이며, 심하지는않지만용혈성수혈부작용이나신생아용혈성질환을일으킬수있다. 또한 37 에서강하게반응하는 Ig G계열의항체이므로 Di a 항원이포함되어있지않은외국산선별혈구를사용하여 Type & Screen' 으로실온식염수법만시행하고혈액을출고하였을때발생할수있는수혈부작용을배제하기어렵다. 이에국내에서도 Di a 항원선별혈구의필요성을강조하고자한다. - 105 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 3 제대혈의 Hematocrit 과 LRP(Leukocyte rich plasma) 의관계분석 메디포스트 생명공학연구소 이선미ㆍ최기훈ㆍ양정윤ㆍ홍혜경ㆍ오원일 배경 (Background) : 제대혈은태반과탯줄을포함하여태아의순환계를돌고있던혈액으로최근제대혈을이용한조혈모세포의이식의임상적유용성이널리인정받고있으며제대혈보관이늘고있다. 성공적인제대혈보관처리는조혈모세포가포함되어있는세포층인유핵세포층을분리하여보관하기위해제대혈안에존재하는여러다른세포들을제거하는것이다. 적혈구와혈장의비율인 Hematocrit 수치와제대혈에서적혈구를분리, 제거한양을뜻하는 LRP (Leukocyte rich plasma) 량과의의미가관계있을것으로사료되어본분석을시행하였다. 방법 (Methods) : 2010년 7월 1일부터 2012년 6월 30일까지메디포스트 제대혈은행에보관을의뢰하여보관처리가완료된제대혈 30,242건중에서항응고제 (citrate phosphate dextrose adenine, CPDA-1) 24.5ml를포함한채취백 ( 녹십자, 한국 ) 으로채취한 23,944건을대상으로하였다. Hematocrit은가공처리전제대혈에서채취한혈액으로혈액분석장비 ADVIA 2120 (Siemens, USA) 으로측정하였다. 빈백의무게를제외한순수혈액량과 24.5ml의항응고제를포함한무게를측정하여원심분리후 LRP층을분리하였다. Hematocrit 수치의분포에따라구분하여평균 LRP 비율 ( 혈장증량제를첨가한제대혈에서 LRP가차지하는비율 ) 을분석하였다. 제대혈무게군별로구분하여평균 Hematocrit과평균 LRP 비율을분석하였다. 결과 (Results) : Hematocrit(%) 분포별평균 LRP 비율 (%) 은 <20(75.7), 20~24(73.4), 25~ 29(67.6), 30~34(61.7), 35~39(57.9), 40~44(55.8), 45~49(51.8), 50(48.8) 으로나타났다. 제대혈무게군별평균 Hematocrit(%) 은 40~59g(29.0), 60~79g(35.3), 80~99g(38.6), 100~ 119g(40.6), 120~139g(41.7), 140g(42.9) 으로나타났다. 제대혈무게군별평균 LRP 비율 (%) 은 40~59g(67.6), 60~79g(58.9), 80~99g(57.7), 100~119g(57.2), 120~139g(55.3), 140g(54.2) 으로나타났다. 고찰 (Discussion) : Hematocrit이증가할수록평균 LRP 비율이감소한다는결과로 Hematocrit과평균 LRP 비율이반비례관계인것을알수있었다. 또한, 무게가무거울수록평균 Hematocrit은증가하고, 평균 LRP 비율은감소하였으나평균 Hematocrit 수치가증가하는변화폭은점점줄어드는것으로나타났다. 이는무게가적을수록순수채혈량에비해항응고제가차지하는비율이상대적으로크기때문에분석항목에큰영향을미쳐서나타나는결과라고생각한다. 본분석을통해 Hematocrit과 LRP의관계가증명되었으므로 Hematocrit과 LRP와관련한제대혈품질향상에도움이되는추가적인분석이필요하다고사료된다. - 106 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 4 단일혈액원에서처음시행한헌혈혈액에대한 B형간염핵산증폭검사경험 한마음혈액원윤형주ㆍ김근옥ㆍ안현기ㆍ박지훈ㆍ정희숙ㆍ황유성 배경 (Background) : Hepatitis B Virus (HBV) 는수혈전파성감염의주요원인으로, 전염성이매우높아극소량의감염혈액만주사되어도감염이가능하다. 특히우리나라는 HBV에의한만성간염의유병률이높으므로헌혈혈액관리시더욱주의가요구된다. 기존의헌혈혈액의선별검사로 HBsAg 검사를시행해왔으나, 이는항체미형성기 (window period) 나변이형 HBV, 그리고잠복 HBV 감염 (Occult HBV infection, OBI) 등의경우에는검출해낼수없으므로이를보완하기위해본혈액원에서는 HBV에대한핵산증폭검사 (Nucleic acid amplification testing, NAT) 를도입하였다. 본연구의목적은 HBV NAT 시행경험을통해헌혈자에서의 HBV 양성률을구하고, 그결과를 HBsAg 검사만시행할경우와비교하여 HBV NAT의유용성에대해알아보고자함이다. 방법 (Methods) : 2011년 5월부터 2012년 7월까지한마음혈액원에헌혈한혈액을대상으로하였다. Novartis사의 Procleix TIGRIS System에 Procleix Ultrio assay 시약을사용하여 HIV, HCV, HBV를동시에검출하는선별초회검사를시행하고, 선별초회검사결과양성인경우각 virus에대한구별검사를시행하였다. 이러한과정을거쳐전체헌혈자중에서 NAT 결과 HBV 양성의비율과, 이들에시행한 HBsAg 검사결과를비교하였다. 결과 (Results) : 총 204,093개의헌혈혈액에대해검사가시행되었으며, 선별초회검사양성은 227건이었고이중 145건에서 HBV 양성결과를보여전체헌혈혈액중 HBV 양성률은 0.07% 로확인되었다. NAT에서 HBV 양성인 145건중 111건은 HBsAg 양성이었으나 34건에서는 HBsAg 음성결과를보여총 23% 에서검사결과불일치를보였다. 결론 (Conclusions) : 본연구에서는단일혈액원에서자발적헌혈자들에대해 HBV NAT를시행하여 HBV 양성률을산출하였다. 또, NAT 결과와 HBsAg 검사결과를비교하여, HBsAg 단독검사만시행했을경우전체 HBV 양성혈액중 23% 의혈액은걸러내지못함을알수있었다. 이 23% 의혈액은항체미형성기나변이형 HBV, 또는 OBI에해당하는경우일것으로추측할수있으며, 이결과를통해헌혈혈액의선별검사에 HBV NAT를도입함으로써 HBV 양성혈액을더욱민감하게검출할수있고더나아가수혈전파감염의빈도도줄일수있을것으로사료된다. - 107 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 5 NBM-200 장비를이용한헌혈자헤모글로빈의측정 연세의료원세브란스병원진단검사의학과 노연희ㆍ이은경ㆍ김신영ㆍ김현옥 배경 (Background) : 현행혈액관리법에따라황산구리법에따른혈액비중검사, 혈색소검사, 적혈구용적률검사중한가지를실시하여헌혈자의빈혈여부를검사하여야한다. 본원에서는혈액소검사또는적혈구용적률검사를사용하고있으나추가적인채혈로인하여헌혈자의만족도향상에어려움이있었다. 따라서비침습적인헤모글로빈측정기도입을위하여공식적인방법과함께비교하여성능을평가하였다. 방법 (Method) : 2012년 7월부터 2012년 9월까지본원에내원한일반헌혈자및자가헌혈자 94명 ( 헌혈군 ) 과혈장교환술과치료적성분채집술을위해내원한입원환자와사혈술을위해내원한외래환자 39명 ( 환자군 ) 을대상으로하여비교분석하였다. 비침습적헤모글로빈측정장비인 NBM 200의검사결과와자동혈구분석기인 ADVIA 2120i의헤모글로빈값을각각측정비교하였다. 결과 (Result) : 헌혈군과환자군의헤모글로빈측정치의상관계수는각각 0.6923, 0.8328로모두유의확률 0.0001이하의우수한상관관계를보였다. 헌혈군과환자군을모두합한전체를대상으로는상관계수 0.802, 상관식 y (NBM 200) = 0.927 x (ADVIA)+ 0.802로우수한결과를보였다. 고찰 (Discussion) : 헌혈지원자의빈혈검사는혈액속의적혈구를측정하는것으로정상수치이하인헌혈자로부터채혈하는경우헌혈자에게건강상의위험을초래할수있으며또한수혈자에게양질의혈액을공급할수없으므로중요한건강진단이다. 그러나기존방법은통증, 재검사등의이유로만족도등이낮았으나새로도입된장비는비침습적인방법으로통증이없고감염의위험이없으며사용하기편리하여헌혈지원자의만족도가높았다. 그러나본방법은침상에누워있거나빈혈이심한경우는적합하지않으며손가락이굵거나얇은경우는측정이불가능하며헤모글로빈만측정하기때문에치료목적으로는사용하기어렵다. - 108 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 6 Duffy a (Fy a ) 항원음성혈액출고증례 1 예 인천적십자혈액원 1 ㆍ중앙검사센터 2 ㆍ가천대중앙길병원 3 ㆍ미 8 군 121 병원 4 이충영ㆍ송창면 1 ㆍ김종필ㆍ김종훈 2 ㆍ김한규 3 ㆍ남필순 4 배경 (Background) : 1950년 Mollison등에의하여혈우병으로수혈을자주받은경험이있는환자인 Mr. Duffy의혈청에서발견된 Duffy식혈액형은한국인에서 Fy a 항원음성빈도는 0~0.03% 이며고빈도항원으로대응하는항체는용혈성수혈부작용과신생아용혈성질환의원인이되는 IgG에속하는면역항체이다. 본증례는 Fy a 항체를가진환자로수혈을위하여한국인에서매우희귀한 Fy a 항원음성혈액을출고한드문경우이기에증례보고하고자한다. 증례 (Case) : 환자는인천K병원에입원한 80세여성급성골수성백혈병환자로 CBC결과 Hb 6.7g/dL, Hct 19.9%, RBC 2.20*10-6/mm 3, 혈액형및항체동정검사결과 A(+) 형, Anti-Fy a 가검출되어 A형 Fy a 항원음성농축적혈구 6단위를혈액원에요청하였다. 즉시, 중앙혈액검사센터에 Fy a 항원음성혈액검사를요청하여보유하고있던 A형 850검체에서 1단위를확보한후미8군 121병원의도움으로적합혈액을출고할수있었다. 이과정에서국내 Fy a 항혈청시약의소진으로검사에어려움이있었고 121병원에서도 A형재고부족으로 O형적혈구농축액만가능하다는연락을받고해당병원과협의하여 A형대신 O형으로수혈이이루어진사례를보고하는바이다. 결론 (Discussion) : 고빈도항원인 Fy a 는한국인 0.03%, 중국인 0.3%, 일본인 1.1% 등동양인에서낮은빈도를보인반면백인 32%, 흑인 20% 등서양인에서더높은항원음성을보이므로이번사례에서보듯이향후저빈도항원이나희귀혈액의수혈적합혈액확보에미8군 121병원의협조가필요할것으로사료되며무사히수혈을할수있도록도움을주신관계자여러분들께감사를드린다. - 109 -
혈액검사학회ㆍ수혈검사학회포스터 ( 수혈 ) 7 성분채혈혈소판제제의혈소판수 (yield) 에따른사용실태및현황 한마음혈액원제제공급팀 김희범ㆍ김자선ㆍ김정남ㆍ이정은ㆍ이원아ㆍ김종원 배경 (Background) : 성분채집혈소판제제는한명의헌혈자로부터약 250ml의혈소판제제를채집하게되는데, 이렇게채집된혈소판제제에는 3.0 10 11 개이상의혈소판이들어있다. 그러나헌혈자의혈소판수나현재의건강상태, 장비의문제등으로인하여실제적인혈소판수 (yield) 가 3.0 10 11개이하인경우가많이있다. 이런경우혈액을공급받는의료기관에서는혈소판수가부족한성분채혈혈소판제제에대하여사용여부의결정을서로다르게하고있어이에대한의료기관의차이를분석하고자한다. 방법 (Methods) : 한마음혈액원에서 2012년 1월부터 9월까지채혈되어공급된혈소판제제에대하여전량혈소판수 (yield) 를확인하였다. 한마음혈액으로부터백혈구제거성분채혈혈소판을공급받는의료기관은 15 기관이며, 의료기관별로혈소판수 (yield) 에따라출고가능및출고불가의기준을확인하였다. 결과 (Results) : 한마음혈액원에서의 2012년 1월부터 9월까지의총헌혈량은 127,296 Units였고그중성분채혈혈소판은 11,733 units로전체헌혈량의 9.2% 를차지하였다. 그중실제수혈용으로공급한혈소판의량은 11,468units였으며, 채혈량대비출고율은약 98% 임을확인하였다. 아울러출고된성분채혈혈소판제제의평균혈소판수 (yield) 는 3.56 10 11 개였으며그중 3.0 10 11 개이상인것이 10,359units로 90.3% 를차지하였다. 3.0 10 11 개이하에서부터 2.5 10 11 개이상인성분혈소판제제의출고는 950units로 8.3%, 2.5 10 11 개이하의성분혈소판제제의출고는 69units로 0.6% 였다. 이상의결과로각혈액청구기관의혈소판수별공급유형을확인하여본바성분채혈혈소판제제의혈소판수 (yield) 가반드시 3.0 10 11 개이상이어야만공급받는기관이 2기관이었으며, 2.5이상만되면공급받는기관이 13개기관으로 3.0에서 2.5 10 11 개사이만되면협의없이공급가능한기관이 1개기관, 협의를거쳐야만하는기관이 12개기관으로성분채혈혈소판제제의혈소판수 (yield) 가 2.5 10 11 개이상만되면성분혈소판제제의공급에문제가없는것으로사료된다. 2.5에서 2.0 10 11 개이상의혈소판제제는 2개기관에 2units가공급되었으며 10 units는혈소판수 (yield) 부족으로폐기하였다. 고찰 (Discussion) : 혈소판제제의수혈은혈소판감소증이나혈소판기능장애를가진환자의출혈예방및치료에사용되고있는데, 최근혈소판제제는혈액종양등의환자들에대하여적극적인치료에따라그사용량이급격히증가되고있다. 그러나혈소판제제는그필요량에비하여실제공급량이부족한실정이다. 또한한사람으로부터다량의혈소판을채혈하는방식인혈소판성분채혈혈소판제제는약 1시간에서 1시간 30분정도가소요되는관계로지원자가부족한상황으로혈소판제제의공급에어려움을겪고있는실정이다. 혈수판제제의공급이부족한현실에서 2.5 10 11 개의성분채집혈소판제제라도혈소판의보충이필요한환자에게는큰도움이될수있을것이라사료된다. 추가적으로성분채혈혈소판제제의량 (Volume) 에대해서도재평가가필요할것으로사료되며, 이같이어렵게채혈된혈액제제가기준이하라고하여귀중한혈액이폐기되는상황이발생되어서는안될것이다. - 110 -
2012 년도혈액검사학회임원및평의원연락처 (2012.4.) 구분 성명 근무처 전화번호 E-mail 휴대폰 변대훈 부천대성병원 032-610-1381,2 byun5415@hanmail.net 017-720-5415 고 문 홍인표 고대보건대학 016-323-2776 iphong12@hanmail.net 016-323-2776 최범열 을지대학교 2657-0040 brchoi10@naver.com 010-7149-6624 고문 ( 혈액전문병리사 함천경 서울대학교병원 02-2072-3510 ckham99@hanmail.net 010-9062-3986 위원장 ) 학회장 이귀순 한양대병원 02-2290-8981 hmckslee@yahoo.co.kr 011-9731-8992 부학회장 양미숙신촌세브란스 02-2228-6125, clara@yuhs.ac 010-4242-2142 최미옥서울아산병원 02-3010-4455 t890378@hanmail.net 010-2318-6487 심문정 안산대학 031-400-6938 mjshim@ansan.ac.kr 010-6202-7020 상임평의원 구본경 삼성서울병원 02-3410-6191 bonkyung.koo@samsung.com 010-3198-6361 박주현 부천성모병원 032-340-2218 urijuhyun@hanmail.net 010-7274-2589 정재설 서울대학교병원 02-2072-2779 jaesel59@hanmail.net 010-3795-5912 김은지 삼성서울병원 02-3410-2866 eunjee.kim@samsung.com 010-9933-2866 윤광로 원주기독병원 033-741-1574 bpici@hanmail.net 010-9480-5341 박종문 서울성모병원 02-2258-1654 sd2003@catholic.ac.kr 010-5347-2927 강옥균 전남대병원 062-220-5354 okkang11@hanmail.net 010-6609-2265 강효찬 동의과학대학 051-860-3523 mlskang@dit.ac.kr 010-3480-3171 구본윤 대구카톨릭병원 053-650-4132 gubonyoun@naver.com 011-806-7226 평의원 윤옥진국립암쎈타 031-920-1327 ojyun@ncc.re.kr 010-9409-8044 김일택대전보건대학 042-670-9164 itkim@hit.ac.kr 010-8101-9716 김화연 한양대병원 02-2290-8992 fairpond@hmc.hanyang.ac.kr 010-4231-5648 양석환 충남대병원 042-280-7786 shyang@cnuh.co.kr 010-8814-5602 권형범 부산해운대백병원 051-797-3167,8 kk9426@hanmail.net 010-6643-3623 전상백 충북대병원 043-269-6248 jsp6780@naver.com 010-8283-6780 조윤경 동남보건대학 031-249-6414 ykjo@dongnam.ac.kr 010-6218-2467 최진희 전북대병원 063-250-1211 smmom@cuh.co.kr 010-9697-0451 안미숙 신촌세브란스 02-2228-6128 ahn@yuhs.ac 010-8001-9094 간사 ( 행정 ) 임혜정 서울대학교병원 02-2072-2777 64sinyoungm@hanmail.net 010-3276-1821 간사 ( 학술 ) 이상호 서울대학교병원 02-2072-3942 lsh1998@daum.net 010-7124-7506 혈액전문 나승찬병리사총무 서울대학교병원 02-2072-3512 iamnasc@naver.com 010-8983-5921 감사 이지영서울아산병원 02-3010-2011 jylee@amc.seoul.kr 010-2014-2407 유기원아주대병원 031-219-5779 ryuorigin@hanmail.net 010-4076-6705-111 -
2012 년도수혈검사학회임원및평의원연락처 (2012.10.) 구분 이름 근무처 전화번호 E-mail 변대훈 부천대성병원 010-4720-5415 byun5415@hanmail.net 고 문 홍인표 고대보건과학대 010-3238-2776 iphong12@hanmail.net 최범열 을지대학교 010-7149-6624 brchoi10@naver.com 학회장 김동찬 서울대학교병원 010-2763-5525 welcomekdc@hanmail.net 박현준 서울아산병원 016-266-4462 phj41@yahoo.co.kr 부학회장 김종훈 중앙혈액검사센터 018-259-1132 jhkim9001@redcross.or.kr 배인철 세브란스병원 010-6508-7533 icbae@yuhs.ac 곽영국 서울대학교병원 010-2304-6773 kwak6773@hanmail.net 상임평의원 김은영 삼성서울병원 010-3548-6193 a294392@hanmail.net 이창희 보라매병원 010-9706-7198 abcdlch@yahoo.co.kr 간사 ( 학술 ) 임민규 서울대학교병원 010-8902-0715 agwolf@naver.com 간사 ( 행정 ) 김진석 서울아산병원 010-9308-0414 bbjin72@naver.com 고중석 서부혈액원 010-3239-2049 freei@redcross.or.kr 김갑숙 광주혈액원 010-4609-7144 hjm0415@redcross.or.kr 김상철 경남혈액원 010-5241-3510 61sckim@redcross.or.kr 김성숙 중부혈액검사센터 010-3080-3394 ksspop@redcross.or.kr 김한규 가천의대길병원 010-4192-3442 succung2424@hanmail.net 김현주 삼성창원병원 010-8554-7263 zoogo00@naver.com 김희범 한마음혈액원 010-8831-4526 bum6223@naver.com 남필순 121병원 010-8612-7189 nampilsun@hotmail.com 박경희 단국대학교병원 010-4130-4283 bankpkh@hanmail.net 박영나 화순전남대병원 010-3301-2113 minuet1@hanmail.net 박종석 대구보건대학 010-8277-5005 antpro@hanmail.net 서무원 동부혈액원 010-3558-7136 dkyong2@redcross.or.kr 평의원 송영선 서울성모병원 010-5382-3607 marine@catholic.ac.kr 유영희 대구혈액원 010-9025-8167 yooyh0808@redcross.or.kr 이동실 부산고신대학병원 010-8520-8765 dslee1796@hanmail.net 이희자 대전혈액원 010-7635-4300 kaya40@redcross.or.kr 장남진 강원혈액원 010-6810-1321 njjang@redcross.or.kr 장순모 진주보건대학 010-9507-1056 smchang54@hanmail.net 조동직 부산혈액원 010-2475-9012 jdj56@redcross.or.kr 조민균 전북혈액원 010-5529-0683 mgjo@redcross.or.kr 지영천 중앙혈액검사센터 010-4915-3980 alba1203@redcross.or.kr 채금란 순천향병원 ( 서울 ) 010-2280-6940 ran2624@schmc.ac.kr 최인열 원주기독병원 010-3075-3487 cir58@naver.com 최진규 남부혈액검사센터 010-2627-1563 choi3322@yahoo.co.kr 황석연 대전대학교 010-9429-4175 syhwang@dju.ac.kr 감 사 최재열고대구로병원 010-2218-6627 thanga@hanmail.net 임승렬한림대강남성심병원 010-4201-0185 fervim@kg21.net - 112 -
대한임상검사학회지논문투고규정 제 1 조 논문원고 ( 이하원고 ) 의투고는원칙적으로전년도회비를납부한회원과임상병리관련분야의종사자로한다. 단, 편집부의청탁원고는예외로한다. 제2조본학술지 ( 대한임상검사학회지 ) 는대한임상검사학회의공식학술지로서매년 3월, 6 월, 9월, 12월말에발간한다. 원고는임상병리검사과학및이와관계되는것으로하며, 타지에이미게재된같은내용의원고는게재하지않으며본지에게재된것은임의로타지에게재할수없다. 제 3 조 원고제출자의성명, 소속, 그리고제목, 중심단어, 교신저자내용은영문으로만기록한다. 제 4 조 원고는국문혹은영문으로작성할수있으며, 원고의종류는연구논문 ( 원저 ), 증례보고및편집위원회에서위촉한종설과조사보고서등으로한다. 원저및증례보고는반드시영문초록 (abstract) 을첨부하여야한다. 제5조원고의작성요령은다음과같다. 1. 국 영문가로쓰기로하되, Table과 Figure( 이하 Fig.) 를포함하여 A4용지 10매이내로하고, 그이상일경우인쇄비를부담시킬수있다. 2. 원고작성시의미의혼동이없는것은모두한글로하고, 학술용어는의학용어집 ( 제4집, 대한의사협회편, 2001) 와필수의학용어집 ( 제4.5집, 대한의사협회편, 2005) 그리고해부학용어 ( 다섯째판, 대한해부학회, 2005) 에등재된국문용어를사용하고, 용어의원활한이해를위해처음본문중에나타났을때영문을병기할수있다. 부득이한경우 ( 인명, 지명 ) 는원어로쓴다. 3. 괄호 ( ) 를사용할때의띄어쓰기는괄호 ( ) 앞에영문이나숫자가올때는띄어쓰기를하고, 국문이올때는띄어쓰기를하지않고붙여서쓴다. 또한국 영문모두에서단위앞은한칸씩띄운다 ( 단, % 와 는예외로한다.). ( 예1) alkaline phosphatase (AP) 은 ( 예2) 대장균군 (coli-form bacteria) 은 4. 기타원고작성은다음과같이한다. 1) 원고작성프로그램 : 글 97 이상 2) 글자모양 : 글자체-신명조, 장평-100, 자간-0, 글자크기-10P 3) 문단모양 : 좌우여백-0, 문단위 아래간격-0, 줄간격-160, 낱말간격-0, 정렬방식-양쪽혼합, 한단쓰기 - 113 -
제 6 조 제 7 조 인명, 지명기타의고유명사는원어체로하며, 학명 ( 종, 속명 ) 은반드시이탤릭체 ( 기울임체 ) 로하며, 처음표기시에는전체이름을풀어서표기하고 ( 예 : Escherichia coli), 그이후는속명이름을약하여표시한다 ( 예 : E. coli). 단균속이름을약하여표기시다른균명과혼돈이있으면약하지않는다. 그러나학명이아닌경우는이탤릭체로표시하지않는다. ( 예1) 이탤릭체로표시하는경우 : E. coli, Parpovavirus, Simplexvirus ( 예2) 이탤릭체로표시하지않는경우 : Coagulase-negative staphylococci, Hepatitis B virus 숫자, 단위, 신뢰도, 약어, 장비, 시약표시 1. 숫자는아라비아숫자로기록하며, 1000 이상의아라비아숫자로표시할경우에는천단위로쉼표를사용한다 ( 예, 1,234, 혹은 5,678.01 등 ). 2. 도량형에관한것은미터법으로표시하며, 단위는국제표준단위 (SI 단위 ) 를사용함을권장한다. Liter는대문자 L로표시한다. 3. 신뢰도를나타내는 p는소문자이탤릭체로표기하며부등호와붙여쓴다 ( 예, p <0.001) 4. 영문또는영문약자를사용할때는영문초록, 본문, 국문요약각항에서첫번째사용시에전단어를표기하고, 약자를제시한다. 단, 제목에는약자를사용하지않는다. 5. 기계및장비의경우괄호 ( ) 안에모델명, 제조회사, 도시, ( 주 ), 국적을기입한다. 6. 시약의경우일반명을쓰는것이원칙이며, 일반명과함께상품명을쓰고싶을때에는괄호 ( ) 안에쓴다. 상품명을쓸경우에는제조회사, 도시, ( 주 ), 국적을괄호 ( ) 안에쓴다. 7. 상품명을뜻하는 TM, 등은꼭필요한경우가아니면쓰지않는다. 8. 출처가표기된장비나시약을다시표기하는경우제조회사만을괄호안에기입한다. 9. 영문초록및국문초록에장비나시약을표기할때는제조회사와국가만을표시한다. 제8조 Table과 Fig. 는다음의형식으로기재한다. 1. 표와그림의번호는 Table 1, Table 2, Fig. 1, Fig. 2 등의형식을취하며 Table은모두순서대로정렬하여참고문헌뒤에배치한다. Fig. 는모두 Powerpoint 파일 (PPT) 에순서대로삽입하여별도로제출한다. 2. 본문에서인용되는순서에따라번호를붙이며, Table의제목은상단에, Fig. 의설명은하단에표시한다. Table의제목에는마침표 (.) 를쓰지않고, Fig. 의설명에는마침표를쓴다. 3. Table에는불필요한종선을긋지않으며, 횡선도가급적사용하지않는다. Table 제목의제 1열은왼쪽에정열시키며, 제 2열부터는가운데정렬을원칙으로한다. 4. Table의각주는어깨글자설명, 약어설명의순으로하며, 어깨글자설명과약어설명사이에는반드시줄을바꾸어쓴다. 6. 어깨글자는위첨자로쓰되, 위치는단어의우측에 *,,,,,, **,, 의순서로사용하고숫자나알파벳은사용하지않는다. 여러어깨글자의설명은다음예와같은형식에따른다. ( 예 ) * not tested ; p<0.05-114 -
7. Table에표시된약어는모두하단에설명을첨부한다. 약어설명은다음예와같은형식을따른다. Table마다약어설명이중복될경우에는 See Table 1. 과같이표시한다. ( 예 ) Abbreviation: NG, No growth; SG, slightly growth. 8. Fig. 가현미경사진일경우에는염색방법과배율을표기하여야한다. 9. Fig. 가두개이상의그림으로구성될때는, 각그림에 A, B, C 등으로표시하고, Fig. 설명 (legend) 에 A. 설명, B. 설명 과같이각각설명하거나한꺼번에설명하고괄호속에각그림을표시할수도있다. 제9조논문작성의체계는다음과같다. 1. 논문작성의순서는다음과같이한다. 1) 제목, 저자및소속 ( 모두영문 ) 2) 영문초록 3) 중심단어 (Key words) 와교신저자연락처 4) 본문 5) Tables 6) Fig. 는별도의 PPT 파일을첨부한다. 2. 제목은영문으로만작성하며출판시머리말로사용할요약된짧은제목 (short title) 을병기한다. 3. 저자명 ( 영문 ) 은이름을앞에, 성을뒤에두며다음예에따른다. 1) 1인저자인경우 : Yoo Sin Kim 2) 2인저자인경우 : Yoo Sin Kim and Soon-Sin Lee 3) 3인이상의저자인경우 : Yoo Sin Kim, Soon-Sin Lee, and Gildong Hong 4. 저자의참여기관이 2곳이상의경우에는저자명, 기관명에아라비아숫자로어깨번호를붙이고, 소속은다음의예와같은형식으로기술한다. ( 예 ) Yoo Sin Kim 1, Soon-Sin Lee 1, and Gildong Hong 2 Department of Laboratory Medicine, Seoul National University Hospital, Seoul 110-744, Korea 1, Department of Clinical Laboratory Science, Wonkwang Health Science University, Iksan, 570-750, Korea 2 5. 영문초록은영문 250 단어이내로작성하며하나의문단단락으로기술한다. 6. 중심단어 (Key words) 는영문단어 3~5개를선정하여초록하단에기재한다. 중심단어는 Index Medicus의 Medical Subject Heading (MeSH) 를참조하여선택하는것을권장한다 (http://www.nlm.nih.gov/mesh/mbrowser.html). 영문초록이나국문요약에는어떤기기, 시약의제조사, 도시, 국가등을모두기술하지않고, 간단히제조사와국가만을표시한다. 7. 교신저자 (Corresponding author) 의내용은다음의예와같이기록한다. ( 예 ) Corresponding Author : Kim, Yoo Sin. Department of Laboratory Medicine, Seoul National University Hospital, Seoul 110-744, Korea. Tel: 010-1111-4444. E-mail: kimyoosin@snuh.org - 115 -
8. 본문작성은다음과같이한다. 1) 원저의경우 Ⅰ. 서론 (Introduction) Ⅱ. 재료및방법 (Materials and Methods) Ⅲ. 결과 (Results) Ⅳ. 고찰 (Discussion) ( 감사의글 ), 참고문헌 (Reference). 2) 증례보고의경우 Ⅰ. 서론 (Introduction) Ⅱ. 증례 (Cases) Ⅲ. 고찰 (Discussion) ( 감사의글 ), 참고문헌 (Reference). 3) 종설의경우집필자의투고구성을수용한다. 4) 결과 (Results) 를기술할경우고찰의내용을기술하지않으며, 고찰 (Discussion) 에는서론이나결과에기술된내용을중복하여기술하지않고, 별도의결론을번호를넣어요약하지않는다. 9. 본문중문헌내용은다음예에따른다. 1) 1인저자인경우 : Kim (1998), 김 (1999), 2) 2인저자인경우 : 김과이 (1997), Robbert와 Liouis (1984) 3) 3인이상의저자인경우 : 김등 (1996), Hiramatsu 등 (1996) 4) 괄호내에표기할경우에는국 영문구분없이오래된문헌부터최근문헌까지의연도순으로한다. ( 예1) 국문원고의경우 : (Robert와 Liouis, 1984; Hiramatsu 등, 1996; 김과이, 1997) ( 예2) 영문원고의경우 : (Robert and Liouis, 1984; Hiramatsu et al, 1996; Kim and Lee, 1997) 10. 참고문헌은영문, 국문의순서로하고, 영문은알파벳순서로, 국문은가나다순서로한다. 1) 참고문헌의영문잡지명은 Index Medicus의공인된약어를사용하며. 이탤릭체로기록한다. 이는 NCBI의 Journal database (http://www.nlm.nih.gov/serials /journals/index.cfm) 에서확인할수있다. 잡지의부록 (supplementary volume) 인경우에는 46( 부록 2) 혹은 26(S1) 등으로표시한다. 영어이외의외국어로된논문의제목은영어로번역된것으로작성함을원칙으로한다. 2) 잡지 : 저자명. 제목. 잡지명. 연도, 권수 : 면수. 영문저자명은성과이름 ( 약어 ) 로기술하며, 로연결한다. 저자가 6인이하면전원을, 7인이상이면 6인만을기록하고등 (, et al.) 을첨부한다. ( 예1) Clarke R, Daly L, Robinson K, Naughten E, Cahalane S, Fowler B, et al. Hyperhomocysteinemia: an independent risk factor for vascular disease. N Engl J Med. 1991, 324:1149-1155. - 116 -
( 예2) 김유신, 이순신, 홍길동. Vibrio vulnificus의생물학적성상과생물형. 대한임상검사학회지. 2005, 37(1):23-27. 3) 단행본 : ( 편 ) 저자명. 단행본명. 판수, 연도, 면수. 출판사명, 발행지명. 편저자가복수일경우는 2인까지만기술하고등 (, et al.) 으로표현한다. ( 예 )Albert B, Bray D. Molecular biology of the cell. 3rd eds, 1994, p491-499. Garland Publishing, New York. ( 예 ) 김유신, 이순신, 홍길동. 진단병원미생물학. 제3판, 1999, p12-16, 한국의학, 서울. 4) 단행본내단원 : 단원저자명. 단원제목. In: ( 편 ) 저자명. 단행본명. 판수, 연도, 면수. 출판사명, 발행지명. 편저자가복수일경우는 2인까지만기술하고등 (et al.) 으로표현한다. ( 예 ) Allen SD. Gram-positive nonsporeforming anaerobic bacilli. In: Lennette EH, Balows A, et al. Manual of clinical microbiology. 4th eds, 1985, p461-472. American Society for Microbiology, Washington DC. 5) 기관이나단체가저자일경우는저자명에기관이나단체의약어를사용할수있다. ( 예 ) CLSI Guideline 문헌예 CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement. CLSI document M100-S16. 2006, p96-97. Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, Pennsylvania. 6) 온라인상의참고문헌 : 저자명. 제목 ( 혹은인터넷주소이름, 혹은잡지명 ). 온라인주소 (URL), 최종방문일혹은확인일. ( 예1) 질병관리본부. 감염병웹통계시스템. http://stat.cdc.go.kr/, 2011-03-04 에최종방문. ( 예2) KCDC. Disease Web Statistics System. http://stat.cdc.go.kr/, last visited on 04 March 2011. 11. 감사의글 (Acknowledgments) : 일반적인감사와그외에이해관계에대한명시의필요가있는것은모두기술한다. 제10조원고의채택, 게재순서및체재는편집위원회에서결정하며, 본규정에맞지않는논문은수정을권유하거나게재를보류한다. 제11조논문의접수, 심사, 게재결정 1. 접수된논문은편집간사가수시로접수하여투고규정에대하여검토하고전문심사위원에게심사를의뢰한다. 심사를보낸원고에대하여논문접수증을발송한다. 2. 논문심사는 1편당 2인이상의전문심사위원이심사하며, 심사위원 2인이상이수정후게재로판정할경우, 저자는즉시저자수정을하여재심사를받아야한다. 3. 재심사의결과게재가가능하면편집간사는편집위원장에자료를송부하며, 편집위원장은게재가능판단을위해통계전문가에게의뢰하여통계적측면에서자문을구할수있다. - 117 -
4. 편집간사는게재가승인된논문의참고문헌의교정을실시하고, 또한영문초록교정자에게교정의뢰하며, 논문투고자에게게재증명서를전자우편으로전송한다 ( 게재승인일은편집위원장이 게재가능 으로승인한날짜이다 ). 5. 다음원고에대해서는게재불가판정을내려저자에게전자우편으로통보한다. 1) 심사위원 3명중 2명이상에서게재불가판정을내린경우 2) 심사위원심사후저자수정의뢰를하였는데, 6개월내에답이없는경우 6. 저자추가및삭제는저자전원의자필서명을다시받아편집위원장이결정한다. 제12조편집위원회에서는원고의내용중필요할때에는원문에영향을미치지않는범위내에서논문투고규정에맞도록자구와체제를수정할수있다. 제13조원고의저자들은논문의내용에대하여의미있는기여를하였음과그리고원고에대한책임을질것을공저자전원의확인서명을기록하여원고와같이제출한다 ( 별첨 1). 제14조원고는연중접수하며, 협회웹하드에온라인으로제출하며, 동시에원고본문과논문표지 ( 별첨 1) 와저자점검사항 ( 별첨 2) 의모든내용을기록하고자필서명하여편집위원회에우편으로접수하거나스캔하여논문과함께온라인제출한다. 1. 편집위원회주소 : 대한임상검사학회편집위원회, ( 우 ) 136-860 서울시성북구종암 1동 25-10 대한임상병리사협회회관 5층 2. 온라인논문제출 1) Webhard 접속 (http://www.webhard.co.kr) 2) ID와비밀번호입력 (ID: kamt5591, 비밀번호 : 55915591) 3) 대한임상검사학회지접수처 에파일올리기 제 15 조접수된원고는반환하지않으나미게재된원고는반환할수있다. 제16조본학회지에서게재를신청하여게재승인을받은모든논문은저작권인계동의서 ( 별첨 3) 를제출하여야하며논문에대한저작권은대한임상검사학회지가소유한다. 이학회지에실린원저의표및사진등을인용하기위해서는저자나편집위원회의승인을받아야한다. 제17조이학회지에게재되는논문은순수연구및공공의복리와부합되는것으로제한한다. 사람을대상으로한실험의경우반드시설명된동의서에대한기술이있어야한다. 사람및동물을대상으로하는실험은대한민국의연구관련규정을준수하여야한다. 환자의병력번호, 이름, 기타신원을알수있는사진등은싣지않는다. 연구에외부의자금지원이있었을경우감사의글부분에명확히밝히도록한다. 임상연구의경우원고제출시반드시해당기관의임상연구심의위원회의심의를받았음을증명하는서류를함께제출하여야한다. 대한임상검사학회는게재된논문에기술된연구방법론이나사용키트, 사용도구등의적합성에대하여보증하지않으며, 게재된논문은저자의의견을반영할뿐대한임상검사학회의의견과는일치하지않을수있다. - 118 -
부 칙 본규정은 1999년 1월 30일부터시행한다. 본규정은 2002년 11월 29일부터시행한다. 본규정은 2005년 7월 16일부터시행한다. 본규정은 2006년 2월 1일부터시행한다. 본규정은 2008년 1월 1일부터시행한다. 본규정은 2011년 1월 1일부터시행한다. - 119 -
[ 별첨 1] KJCLS THE KOREAN JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY SCIENCE 논문내용공저자확인서 대한임상검사학회편집위원장귀하 학 술 지 : The Korean Journal of Clinical Laboratory Science 원고의종류 : 원저, 종설, 증례, 학회의뢰조사보고서 ( 택 1) 게재희망권호 : 년 월 호 제출일자 : 년 월 일 저 자 : 제 목 : 요약제목 : 공저자확인 1. 본인은본논문의내용이의미있는기여를하였습니다. 2. 본투고논문에대한내용이과학적사실에어긋남이없음을확인합니다. 년월일 제1 저자 : ( 서명 ) 제2 저자 : ( 서명 ) 제3 저자 : ( 서명 ) 제4 저자 : ( 서명 ) 제5 저자 : ( 서명 ) 제6 저자 : ( 서명 ) 제7 저자 : ( 서명 ) - 120 -
KJCLS THE KOREAN JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY SCIENCE 저자점검사항 저자 : 논문제목 : 일반사항 1. 이논문은다른학회지에개재가안되었으며, 게재예정도없다. 2. 원고는 A4용지에 160% 간격으로작성하였다. 3. 원고의양은 Table과 Fig. 를포함하여 10매 ( 증례는 7매 ) 이내이다. 공저자확인 1. 저자전원이자필서명을하였다. 2. 연구비에대한사항을적었다 ( 해당되는경우 ). 영문초록 1. 단락나눔없이개요, 연구목적, 방법, 결과, 고찰을요약하여작성하였다. 2. 250단어이내로작성하였다. 3. 3-5개의영문중심단어를기재하였다. MeSH 목록을확인하였다. 4. 논문교신저자의연락처 ( 우편번호및주소, 전화, 팩스, 이메일주소 ) 를명기하였다. 본문 1. 참고문헌을투고규정에의거하여괄호 ( ) 속에기재하였다. 2. 본문의구성및표기법등은투고규정에어긋남이없이작성하였다. 참고문헌 1. 투고규정을준수하였다. 2. 학술지의표기는 NCBI의공인된약어를사용하였다. Table과 Figure 1. Table과 Fig. 를중복되지않도록작성하였다. 2. Table과 Fig. 를투고규정에맞도록작성하였다. 2. Fig. 를 Powerpoint 파일에모으고별첨하였다. 이논문의저자 ( 들 ) 은대한임상검사학회지의투고규정에따른위의사항들을확인하였습니다. 년월일 교신저자 : ( 서명 ) - 121 -
KJCLS THE KOREAN JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY SCIENCE 저작권인계동의서 대한임상검사학회장귀하 학 술 지 : The Korean Journal of Clinical Laboratory Science 게재예정권호 : 권 호 발행예정년월 : 20 년 월 접수번호 : KJCLS- 저 자 : 제 목 : 위논문의저작권중일부를본잡지의발행인인대한임상검사학회지로인계합니다. 1. 저자들은본논문의판권을가지며논문의내용에책임을집니다. 2. 저자들은본논문의내용을저자의다른논문, 교과서, 강의록등의출판에이용할수있습니다. 3. 본잡지의발행인은위잡지해당권호에서위논문의인쇄를허락받아인쇄하며이에대하여는저자로서이의를제기할수없습니다. 4. 본잡지발행인은저자나본잡지발행인의허락없이타인에의해이루어지는저작권침해에대하여이의를제기할권리가있습니다. 위와같은내용에동의합니다. 년월일 저자대표 : 서명 : - 122 -
초록 ( 포스터 ) 규정 ( 규격 : 90cm 120cm) ABSTRACT FORM (2011년추계학술대회 ) 성명 ( 한글 ) : ( 영문 ) 근무처 ( 한글 ) : ( 영문 ) 근무처주소 : 전화 : Fax : 발표방법 : 구연 ( ), 포스터 ( ) 분야 : 혈액 ( ), 수혈 ( ), 임상화학 ( ), 미생물 ( ), 조직 세포 ( ), 면역 혈청 ( ) 핵의학 ( ), 공중보건학 ( ), 임상생리학 ( ), 경영관리 ( ), 기타 ( ) 제목 (Title) 배경 (Background) 방법 (Methods) 결과 (Results) 고찰 (Discussion) - 123 -
편집위원회 혈액검사학회이귀순 ( 위원장 ) 양미숙최미옥심문정, 구본경, 박주현, 이상호, 임혜정 발행인편집인 이귀순최미옥 The Korean Journal of Technical Hematology Publisher Lee, Kuy Soon Editor Choi, Mi Ok 수혈검사학회김동찬 ( 위원장 ) 김종훈박현준배인철곽영국, 이창희, 김은영, 임민규, 김진석 발행인편집인 김동찬박현준 The Korean Journal of Blood Transfusion Laboratory Science Publisher Kim, Dong Chan Editor Park, Hyun Jun 제14권제1호 ( 통권제14호 ) 2012년 10월 30일인쇄 2012년 11월 2일발행발행소사단법인대한임상병리사협회혈액검사학회ㆍ수혈검사학회 (110-744) 서울종로구연건동 28번지 TEL 02)2072-3942,2569 FAX 02)762-5285 (Vol. 14, No. 1) The Korean Journal of Technical Hematology The Journal of Blood Transfusion Laboratory Science Published by The Korean Society of Technical Hematology The Journal of Blood Transfusion Laboratory Science (110-744) 28, Yeongeon-Dong, Jongno-Gu, Seoul, Korea TEL 02)2072-3942, 2569 FAX 02)762-5285 인쇄한림원 ( 주 ) TEL 02)2273-4201