사상체질의학회지

사상의학회지 ( I o f o n s l M e d 1 1 1 ' \ J ' l : o 2 1 < ) ' ) 6 유전자지문법을이용한사상체질의 유전적분석연구 趙東홉 B * 李昌 i 朱 * * 高炳熙 * * 趙용옳 * 요 약 V N T R 및 S T R 분석은유전자지문법 ( D N A f i n g e r p r i n t i n g ) 에서사용되는방법으로개체의식별등을목적으로하는범죄수사및기타유전적분석연구에서많이쓰이고있는유전적분석방법이다 본연구는 사상체질의판별에의해서분류된각체질들이유전적으로차이가있는지를조사하기위하여각체질인의제 놈 D N A 를대상으로 V N T R 및 S T R 의분석을실시하여서사상체질의학의객관화빛그임상활동에관한 유용한자료를제공함을목적으로추진되었다 본연구에서실시한 M C T 1 1 8, Y N Z 2 2 l o c u s 를이용한 V N T R 분석에서는체질별로나타난 a l l e l e 의분포양상이다양할뿐만아니라각체질에서나타난 a l l e l e 의 분포빈도가체질별로유의적인차이를보이지않았다 따라서 V N T R 의분석을이용하여서는사상체질의네 가지체질그룹에대한유전적동질성및그룹간유전적상이성을유추해내기가어려운것으로사료되었다 한편 a l l e l e 의종류가적고따라서그분포양상이 V N T R 에비해서다양하지않은 S T R 중에서본연구에서 는 T H O I 과 v W A l o c u s 에대한분석을실시하였는데그결과 v W A l o c u s 에서는각 a l l e l e N o 의분포양상이체질별로다소 다르게나타났다 웰國짧뽑學 R 究 f 꺼 짧國大쩔校生 i t 황科 慶熙大뺑校짧쩔함4 大學四象뽑횡科 - 1 5 1 -

- 사상의학회지제 8 권저 1 2 호 1 9 9 6 - I 서 르르 실시하였다 1 8 9 4 년동무이제마선생에의하여창안된사상의학은사람의체질을태양, 소양, 태음, 소음의네가지로분류하고각체질에대한생리, 병리, 진단감별법, 치료와약물에이르기까지서로연계를갖고 l l 재료및방법 1 사상체질의판별및혈액샘플의채취 이를임상에응용할수있는새로운방호 t 을제시하 고있다 ( 1 ) 한편사람의모든형질은유전자의정 보에따라나타나는것이며, 사상의학에서제시하는 체질적속성역시유전자가지닌형질에내재되어 있는속성이라할수있다 사상의학에서사용되는 체질진단의방법은거시적인방법으로서다양한방 법이제시되어있으나객관성과정확성이떨어진다 고할수있다 본연구는각체질을인체유전학적 인연에서검토하고조사하여체질별상이성및상 관성을찾아보고, 채질분류의객관화를위한기초를마련하고자시도되었다 이러한연구를위한유전적분석방법중에는 D N A f i n g e r p r i n t i n g 법 ( 2 ) 에서대표적으로사용하 는 A m p - F L P ( A m p l i f i e d f r a g m e n t l e n g t h p o l y m o r p h i s m ) 법 ( 3 ) 이있는데이방법은중합효소연쇄반응법인 P C R ( P o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ) 기법을이용하는것으로인체유전자의 i n t e r v e n i n g s e q u e n c e 내에존재하는 t a n d e m r e p e a t 의길이다형성을분석하는방법이다 이 t a n d e m r e p e a t 는일정한 c o r e s e q u e n c e 의 r e p e a t i n g u n i t 로이루어져있는데이 c o r e s e q u e n c e 의반복횟수에따라길이다형성을나타낸 다 이런종류로 V N T R ( V a r i a b l e n u m b e r o f t a n d e m r e p e a t s ) 과 S T R ( S h o r t t a n d e m r e p e a t s ) 을들수있는데본연구에서는각체질을 유전학적인 연에서검토하기위해서사상채질진단법 에의하여분류된태음, 소양, 소음인그룹에대해 서 A m p - F L P 법을이용한 V N T R 및 S T R 분석을 사상체질의판별은경회의료원동서종합건강진단 샌터에 1 9 9 6 년 4 월부터 7 월까지내원한남 녀를대 상으로한국한의학연구소임상연구부와경희대학교 한의과대학의사상의학교실이공동으로수행하였다 유전적분석연구에사용된혈액생플은한국한의학 연구소의임상연구부와경희대학교한의과대학의사 상의학교실에서실시한체질판별이일치한경우의개인들로부터각 2 m l 씩채취하여사용하였다 2 혈액으로부터제놈 D N A 의분리 혈액 2 m l 에 4 m l 의 R B C L 완충용액 ( R e d b l o o d c e l l l y s i s b u f f e r ; 1 0 m M T r i s - C J ( p H 8 이, 1 0 m M N a C I, l O m M M g C I 2 ) 을넣고잘섞은다 음 3, 0 0 0 r p m 에서원심분리하여적혈구를제거하 고침전물인백혈구를취하였다 백혈구침전물에 l y s i s b u f f e r ( 1 0 m M T r i s - C J ( p H 8 이, 1 m M E D T A, 1 0 0 m M N a C I, 1 % S D S, 2 0 0 얘 I m l p r o t e i n a s e K ) 1 m l 를넣고 5 6 t 에서 2-3 시간배 양하였다 1 m l 의 p h e n o l 을첨가하여잘혼들어준 다음 8, O O O r p m 에서원심분리하여상층액을취하 고, 여기에 p h e n o l 대신 p h e n o l - c h l o r o f o r m 을첨 가하고위의방법을반복하였다 그결과얻어진상 층액에 2 m I 의 c o l d e t h a n o l 을넣고섞은다음 D N A 의침전물이생기는것을확인하였다 D N A 침전물을유리막대로잘걷어 e p p e n d o r f t u b e 에 옮긴다음건조시켜서 1 0 0-2 0 0 p l 의 3 차증류수에 - 1 5 2 -

- 趙東빼외 3 A : 유전자지문법율이용한사상체질의유전적분석연구 - 용해시켰다 추출된 D N A 는 M i n i f l u o r o m e t e r ( H o e f e r I n c, T K 0 1 0 0 m o d e l ) 를사용하여 정량 하였다 3 A m p - F L P 법에의한분석방법 ( 1 ) V N T R t y p i n g 본연구에서는 V N T R 분석을위하여 M C T 1 1 8 ( D l S 8 0 ) 과 Y N Z 2 2 ( D l 7 S S ) l o c u s 의 a l l e l e 을조사 하였다 1 ) 전기영동을위한 P C R 증폭조건 M C T 1 1 8 의증폭을위하여사용된 p n m e r 의서 열은다음과같다 : 5 - G A A A C T G G C C T C C A A A C A C T G C C C G C C G - 3 5 ( f o r w a r d ) - G T C T I G T I G G A G A T G C A C G T G C C C C T I G C - 3 ' ( r e v e r s e ) R e a c t i o n m i x t u r e 는 l O n g 의 b l o o d D N A 를 t e m p l a t e 로사용하고총 2 0 씨의 r e a c t i o n v o l u m e 으로다음과같이만들었다 : 1 0 m M T r i s - C I ( p H 8 3 ), S O m M K C l, 1 S m M M g C l z, O 2 m M d N T P, O 3 p M e a c h p r i m e r, 1 u n i t A m p l i T a q p o l y m e r a s e ( P e r k i n E l m e r C o ) P C R 조건은다음과같다 : 사용기기 : T h e r m a l c y c l e r ( P e r k i n E l m e r m o d e l 2 4 0 0 ) C y c l e c o n d i t i o n : 9 S t 1 0 s e e, 6 7 t 1 0 s e e, 7 0 t 3 0 s e e, 2 7 c y c l e s G e n o t y p e 결정에표지 D N A 로쓰이는 a l l e l i c l a d d e r 는 P e r k i n E l m e r 의 D l S 8 0 A l l e l i c l a d d e r 를구입하여사용하였다 Y N Z 2 2 의증폭을위하여사용된 p n m e r 의서열 은다음과같다 : 3 S ' - C G A A G A G T G A A G T G C A C A G G - ( f o r w a r d ) 5 - C A C A G T C T I T A T T C T T C A G C G - 3 ' ( r e v e r s e ) R e a c t i o n m i x t u r e 는 l O n g 의 b l o o d D N A 를 t e m p l a t e 로사용하고총 2 0 μ l 의 r e a c t i o n v o l u m e 으로다음과같이만들었다 : 1 0 m M T r i s - C I ( p H 8 3 ), S O m M K C l, 1 S m M M g C I 2, 0 2 m M d N T P, 0 3 p M e a c h p r i m e r, 1 u n i t A m p l i T a q p o l y m e r a s e ( P e r k i n E l m e r C o ) P C R 조건은다음과같다 : 사용기기 : T h e r m a l c y c l e d P e r k i n E l m e r m o d e l 2 4 0 0 ) C y c l e c o n d i t i o n : 9 S t I S s e e, 6 3 t 1 0 s e e, 7 2 t 2 m i n 3 0 s e e, 3 0 c y c l e s G e n o t y p e 결정에표지 D N A 로쓰이는 a l l e l i c l a d d e r 는 s a m p l e D N A 로부터수집하여 사용하였 다 2 ) 전기영동및염색 전기영동은다음과같이 v e r t i c a l g e l s y s t e m 을 사용하였다 G e l : 7 % T, 2 % C ( M C T 1 1 8 ), 9 % T, 3 % C ( Y N Z 2 2 ) 6 0 m M T r i s - f o r m a t e p o l y a c r y l a m i d e g e l, 1 m m t h i c k R u n n i n g B u f f e r : T r i s - B o r a t e b u f f e r G e l A p p a r a t u s : H o e f e r M o d e l S E 4 0 0 ( 1 6 c m l o n g ) 전기영동이끝난후 g e l 은 s i l v e r s t a i n i n g 으로염 색, D N A b a n d 를관찰하였다 즉 g e l 을증류수에 w a s h i n g 한후 1 % 질산용액에서 5 분간처리하고, - 1 5 -

- 사상의학회지저 18 권제 2 호 1 9 9 6 - 다시증류수세척을한후 s i l v e r n i t r a t e 용액 ( 2 따 ) 에서 1 5 분간혼들어준후에, 증류수로세척하고 s o d i u m - c a r b o n a t e - f o r m a l i n 용액 ( 3 0 g / l - 0 S m l / l ) 으로발색시켜 D N A b a n d 가보일때까지흔들어주 었다 1 0 % a c e t i c a c i d 로반응을멈추고증류수로세척후 g e l d r y e r 로말려 g e l 을보관하였다 ( 2 ) S T R t y i n g 본 연구에서는 S T R 분석을 위하여 T H 0 1 ( T C l l ) 과 v W A ( v W F ) l o c u s의 a l l e l e 을조사하였 다 1 ) 전기영동을위한 P C R 증폭조건 T H O 1 의증폭을위하여사용된 p n m e r 의서열은 다음과같다 : 5 ' - G T G G G C T G A A A A G C T C C C G A T T A T - 3 ( f o r w a r d ) 5 ' - A A T C A A A G G G A T T C T G G G C T C T G G - 3 ( r e v e r s e ) R e a c t i o n m i x t u r e 는 l O n g 의 b l o o d D N A 를 t e m p l a t e 로사용하여총 2 0 씨의 r e a c t i o n v o l u m e 으로다음과같이만들었다 : 1 0 m M T r i s - C l ( p H 8 3 ), 5 0 m M K C I, 1 5 m M M g C I 2, 0 0 1 % G e l a t i n, 0 2 m M d N T P, 0 5 μ M e a c h p r i m e r, 0 1-0 2 u n i t A m p l i T a q p o l y m e r a s e( P e r k i ne l m e r C o ) P C R 조건은다음과같다 : 사용기기 : T h e r m a l c y c l e r ( P e r k i n E l m e r m o d e l 2 4 0 0 ) C y c l e c o n d i t i o n : 9 4 ' t 1 0 s e e, 5 9 ' t 1 0 s e e, 7 2 ' t 3 0 s e c 3 0 c y c l e s G e n o t y p e 결정에표지 D N A 로쓰이는 a l l e l i c l a d d e r 는 P r o m e g a 의 T H 0 1 A l l e l i c l a d d e r 를구입하여사용하였다 v W A 의증폭을위하여사용된 p n m e r 의서열은 다음과같다 : 5 - C C C T A G T O G A T G A T A A G A A T A A T C - 3 ' ( f o r w a r d ) 5 - O G A C A G A T G A T A A A T A C A T A G G A T O G A T G G - 3 ( r e v e r s e ) R e a c t i o n m i x t u r e 의제조및 P C R 의조건은 T H 0 1 과동일하였다 G e n o t y p e 결정에표지 D N A 로쓰이는 a l l e l i c l a d d e r 는잃 m p l e D N A 로부터수집하여사용하였다 2 ) 전기영동및염색 T H O I, v W A 의전기영동은다음과같이 d i s c o n t i n u o u s v e r t i c a l g e l s y s t e m 을 사용하였 다 G e l : 8 % T, 5 % C, 6 0 m M T r i s - f o r m a t e p o l y a c r y l a m i d e g e l, 0 8 m m t h i c k R u n n i n g B u f f e r : T r i s - B o r a t e b u f f e r G e l A p p a r a t u s : G i b c o - B R L M o d e l S A 3 2 ( 3 2 c m l o n g ) 전기영동이끝난후 g e l 은 V N T R 의경우와동일 하게 s i l v e r s t a i n i n g 법에의해염색, D N A b a n d 를관찰하였다 1 M C T 1 1 8 ( D 1 S 8 0 ) i l l 결과및고촬 M C T 1 1 8 l o c u s 는 1 번염색체에위치하며 N a k a m u r a 등 ( 4 ) 에의해존재가밝혀진이후많은 사람들을대상으로이 l o c u s 에대한연구가이루어 져왔다 M C T l 1 8 l o c u s 는 5 G A A G A C C A C C G G A A A G 3 찍 1 6 b p ( 염기 ) 를기본 r e p e a t i n g - 1 5 4 -

? - 趙東빼외 3 ) \ 유전자지문법을이용한사상체질의유전적분석연구 - u n i t 로하는대표적인 V N T R 의 l o c u s 로서본연구 에서태음, 소양, 소음인으로분류된각그룹별 1 2 인에대해서 M C T 1 1 8 에대한 V N T R t y p i n g 을실시하여체질그룹별유전적상관성을조사하였다 일반적으로 M C T 1 1 8 은 1 6 b p 의 c o r e r e p e a t i n g u n i t 가 1 4 번반복하는것과 1 6 번부터 4 1 번반복하 는것을합쳐총 2 7 종의 a l l e l e 가존재하는것으로 알려져있고따라서 a l l e l i c l a d d e r 도위 2 7 종을일반적으로사용하고있다 그렴 1, 그림 2 그림 3 에는태음, 소양, 소음인 에대한 M C T 1 1 8 의 a l l e l e N o ( r e p e a t i n g u n i t 의 반복횟수 ) 가나타나있고, 도표 1 에는태음, 소양, 소음인의 a l l e l e N o 의분포와그빈도를표시하였 다 도표에서 o b s e r v e d N o 는태음, 소양, 소음 각체질별조사대상인 1 2 명에서관찰된 M C T 1 l 8 l o c u s 의 a l l e l e N o 의분포를나타낸것이고, 빈도 써빼펴M 4 간 ιf 6-8 짧뼈짧지9 M V - 씨/? 성@ ~ 시, / ~ j 빼-! a η μ~ ; 4 ] 애繼; r L - - - u 搭 획껴서 μ? 따 }!ι 닝 7 f I j, 1-2 lμ야탑 / i F i g u r e 2 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f M C T l 1 8 l o c u s o f S o y a n g g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 4 1 6-4 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1 8, 3 4 2 J 5 ( i I 7 I I 를나타내는 f r e q u e n c y 는소수셋해자리에서반올 1 ' ), ; t 싫 * ; : { J 안 i t " t 매, - ' " j '! 임 -,, I 셔 g 시 4,ι9 1 0 I I 1 2 I 나 w 확 늘 를늘 ; 닉 i 3 닐며 } a 넉} } } } } - F i g u r e 1 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f M C T l 1 8 l o c u s o f T a e u m g r o u p ( S i I v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 4 1 6-4 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 3 0, 3 1 F i g u r e 3 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f M C T l 1 8 l o c u s o f S o u m g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 4, 1 6-4 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1 6, 1 8 1 5 5

- 사상의학회지저 18 권제 2 호 1 9 9 6 - a l l e l e ÐÜÇL ( 1-1 2 ) ÁŒÅ ( 1-1 2 ) ÁŒÇL ( 1-1 2 ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s eà e d N o f r e q u e n c y ( % ) 1 6 4 1 7 1 4 1 7 4 1 7 1 7 4 1 7 1 8 6 2 5 0 0 3 1 2 5 0 6 2 5 0 0 1 9 4 1 7 2 0 2 1 4 1 7 2 2 2 3 4 1 7 2 4 5 2 0 8 3 6 2 5 Å` 1 4 1 7 2 5 1 4 1 7 2 6 2 7 2 8 3 3 4 1 7 2 8 4 1 7 2 8 3 3 2 9 4 1 7 4 1 7 4 1 7 3 0 5 2 0 8 3 3 1 2 5 0 4 1 6 6 7 3 1 3 1 2 5 0 3 1 2 5 0 4 1 6 6 7 3 2 3 3 3 4 4 1 7 3 5 4 1 7 3 6 T a b l e 1 M C T 1 1 8 a l l e l e d i s t r i b u t i o n o f T a e u m, S o y a n g a n d S o u m g r o u p 3 7 4 1 7 4 1 7 4 1 4 1 7 4 1 7 L o t a l 2 4 1 0 0 0 0 2 4 1 0 0 0 3 2 4 1 0 0 0 3 림한 % 값으로나타내었다 이후모든도표는체 질별로조사된각 l o c u s 에대해서위와같은방식으 로작성되었다 그림및도표에나타난바와같이 t y p i n g 을통해서는실제사상체질의네가지체질 그룹에대한유전적동질성및그룹간유전적상이성을유추해내기가어려운것으로사료되었다 태음, 소양, 소음인의 a l l e l e 의분포는한국인에게서 많이나타나는 a l l e l e N o 1 8 에서공통척으로그 2 Y N Z 2 2 ( D 1 7 S 5 ) 빈도가비교적높은것으로나타났지만그이외에 각체질별로유의성있게다른분포양상을보이지는 않은것으로나타났다 M C T 1 1 8 의경우 a l l e l e 의종류및분포양상이다양하기때문에 M C T l l 양 l Y N Z 2 2 는 1 7 번염색체에위치하는 l o c u s 로서 H o r n 등 ( 5 ) 에의해서다형성연구가본격화된이 후 g e n e t i c l i n k a g e 연구, 친자감별, 법의학분야 - 1 5 6 -

쩍4 - 趙東都외 3 A : 유전자지문법률이용한사상체질의유전적분석연구 에서많이이용되어왔다 기본 r e p e a t i n g u n i t 는 7 0 b p 로서본연구에서태음, 소양, 소음인으로분 류된각그룹별 1 2 인에대해서 Y N Z 2 2 에대한 V N T R t y p i n g 을실시하여체질그룹별유전적상 관성을조사하였다 Y N Z 2 2 는 7 0 b p 의 c o r e r e p e a t i n g u n i t 가 1 번반복부터 1 2 번반복까지인 1 2 종과 1 4 번반복을합쳐총 1 3 종의 a l l e l e 가존재 하는것으로알려져있고따라서 a l l e l i c l a d d e r 도위 1 3 종을일반적으로사용하고있다 그림 4 그림 5, 그림 6 및도표 2 에나타난바 와같이태응, 소양, 소음인의 Y N Z 2 2 의 a l l e l e 의 분포는 M C T 1 1 8 와비슷하게각체질별로특징적인 분포양상을보이지는않았다 Y N Z 2 2 의경우 a l l e l e 의종류가 M C T 1 1 8 의 2 7 종에비해적은 1 3 종이어서상대적으로 M C 1 1 1 8 에비해체질별로유 의적으로차이가있는 a l l e l e 분포를보일가능성이 I l -9 생써4 8 m S r 셔까염경 l 6시c h / / h Lμ썩뿔냐:M j 짧쉰않빼 뼈션 s I 웠% 럼, 섬, i 써짧μ* M 시 r 닝 μ i, M 7 니-, F 씨 d J i, 기써뼈빼시헤빽씹 니 써샤M 납 씨닝μUι r 꺼썩 倫 싫니팀iμ 녀 μ뤘홉wμ1, 3 테꺼] ; 뻐셋써용톰 짧 F i g J r e 5 R e s 비 t s o f p m c m p l i f i c a t i o n o f η\ 1 Z 2 2 l o c u s o f S o y a n g g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e r ( R e p e a t N u m b e r 1-1 2, t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 4, 6, - 3 4 s 1 4 f r o m F i g u r e 4 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f Y N Z 2 2 l o c u s o f T a e u m g r o u p ( S i I v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e r ( R e p e a t N u m b e r 1-1 2, t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1, 6 1 4 f r o m F i g u r e 6 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f Y N Z 2 2 l o c u s o f S o u m g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e r ( R e p e a t N u m b e r 1-1 2, t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 5, 7 1 4 f r o m 1 5 7

- 사상의학획지저 1 8 권제 2 호 1 9 9 6 - T a b l e 2 Y N Z 2 2 a l l e l e d i s t r i b u t i o n o f T a e u m S o y a n g a n d S o u m g r o u p a l l e l e ÐÜÇL ( 1-1 2 ) ÁŒÅ ( 1-1 2 ) ÁŒÇL ( 1-1 2 ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) 4 1 6 6 7 4 1 6 6 7 5 2 0 8 3 2 4 1 7 4 1 7 2 8 3 3 3 3 1 2 5 0 4 1 7 4 3 1 2 5 0 5 2 0 8 3 3 1 2 5 0 5 3 1 2 5 0 5 2 0 8 3 6 3 1 2 5 0 4 1 6 6 7 2 8 3 3 7 4 1 7 4 1 7 4 1 7 8 9 2 8 3 3 4 1 7 4 1 7 1 0 4 1 7 2 8 3 3 2 8 3 3 1 1 2 8 3 3 3 1 2 5 0 4 1 7 1 2 4 1 7 1 4 1 7 4 1 7 1 4 1 4 1 7 4 1 7 t o t a l 2 4 1 0 0 0 1 2 4 1 0 0 0 2 2 4 1 0 0 0 0 있는것으로기대하였으나 역시네가지체질에대한 4 b p ( 염개를기본 r e p e a t i n g u n i t 로동 F 는대표적 분류로압축되기에는 a l l e l e 의종류및그분포양상 이다양한것으로나타났다 대부분의 V N T R l o c i 경우와같이 M C T 1 1 8 및 Y N Z 2 2 는 a l l e l e 의종류 가많고각 a l l e l e 의분포양상이다양하여개체간의 식별을위한유전적분석법으로는적합하나 4 개의 그룹으로나뒤어지는체질간유전적차이를유추해 내기에는 a l l e l e 이종류및그분포가너무다양하여 V N T R 의 t y p i n g 을이용히여서는사상체질의네가지 체질그룹에대한유전적동질성및그룹간유전적상이성을유추해내기가어려운것으로사료되었다 인 S T R 의 l o c u s 로서본연구에서태음, 소양, 소음 인으로분류된각그룹별 1 2 인에대해서 T H O I 에 대한 S T R t y p i n g 을실시하여체질그룹별유전적 상관성을조사하였다 일반적으로 T H O I 은 4 b p 의 c o r e r e p e a t i n g u n i t 가 5 번반복부터 1 1 번반복까 지인 7 종의 a l l e l e 가존재하는것으로알려져있고 따라서 a l l e l i c l a d d e r 도 7 종을일반적으로사용하 고있다 그립 7 그립 8 그림 9 에는태음, 소양, 소음인 에대한 T H O 1 의 a l l e l e N o 가나타나있고, 도표 3 에는태음, 소양, 소음인의 a l l e l e N o 의분포와 3 T H 0 1 ( T C 1 1 ) T H O I l o c u s 는 1 1 번염색체 H u m a n t y r o s i n e h y d r o x y l a s e g e n e 에위치하는것으로밝혀졌으며, P u e r s 등 ( 6 ) 을포함에서많은사람들에의해서연 구되어왔다 T H O I l o c u s 는 5 A A T G 3 의 그빈도를표시하였다 그림및도표에나타난바와 같이태음, 소양, 소음인의 a l l e l e 의분포는 a l l e l e N o 9 에서공통적으로그빈도가아주높은것으로 나타났지만그이외에는각체질별로유의성있게다른분포양상을보이지는않은것으로나타났다 - 1 5 8 -

趙東홉 1 외 3 - " : 유전자지문법을이용한사상체질의유전적분석연구 - M, - 1 - & ' i l 1Ñ 8 1 M ( j, i c > ' 4 -,δi1 8 9 1 0 I I 1 2 양l F i g u r e 7 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f T H 0 1 l o c u s o f T a e u m g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) 1 : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 5-1 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 9 9 F i g u r e 8 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f T H 0 1 l o c u s o f S o y a n g g r o u p ( S i I v e r s t a i n e d g e I ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 5-1 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 9 1 0 M 3 4 S 6 M 7-0 뿔 j J J $ 씨V F, 셔사, l 4 - ' ) 1 0 I I 1 2 i g u r e 9 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f 까 0 1 l o c u s o f S o u m g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 5-1 1 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 7 9 F i g J r e 1 Q R e s 비 t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f v W A l o c u s 아 T 앓 u r n g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 3-2 0 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1 6 1 7 4 v W A ( v W F ) v W A l o c u s는 1 2 번염색체 H u m a n v o n W i l l e b r a n d f a c t o r g e n e 의 i n t r o n 에위치하는것으로밝혀졌으며, K i m p t o n 등 ( 7 ) 을포함해서많은사람들에의해서그 p o l y m o r p h i s m 이연구되어왔 다 v W A l o c u s 는 5 A T C T 3 의 4 b p ( 염기 ) 를기 본 r e p e a t i n g u n i t 로하는 S T R 의 l o c u s 로서본연구에서태음, 소양, 소음인으로분류된각그룹별 1 2 인에대해서 v W A 에대한 S T R t y p i n g 을실시하여체질그룹별유전적상관성을조사하였다 일반적으로 v W A 는 4 b p 의 c o r e r e p e a t i n g u n i t 가 1 5 9 -

- 사상의확회지저 1 8 컨제 2 호 1 9 9 6 - a l l e l e 5 태음 (I - 1 2 ) 소양 (I - 1 2 ) 소응 (H 찌 o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) 6 2 8 3 3 3 1 2 5 0 7 3 1 2 5 2 8 3 3 5 2 0 8 3 8 4 1 7 4 1 7 9 1 8 7 5 0 0 1 5 6 2 5 0 1 8 7 5 0 0 1 0 4 1 7 3 1 2 5 0 1 1 T a b l e 3 T H O l a l l e l e d i s t r i b u t i o n o f T a e u m, S o y a n g a n d S o u m g r o u p t o t a l 2 4 1 0 0 0 0 2 4 1 0 0 0 0 2 4 1 0 0 0 0 a l l e l e 1 3 T a b l e 4 v W A a l l e l e d i s t r i b u t i o n o f T a e u m, S o y a n g a n d S o u m g r o u p ÐÜÇL ( 1-1 2 ) ÁŒÅ ( 1-1 2 ) ÁŒÇL ( H 2 ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) o b s e r v e d N o f r e q u e n c y ( % ) 1 4 4 1 7 8 3 3 3 3 3 1 2 5 0 1 5 4 1 7 4 1 7 1 6 8 3 3 3 3 4 1 6 6 7 6 2 5 0 0 1 7 3 1 2 5 0 5 2 0 8 3 1 0 4 1 6 7 1 8 8 3 3 3 3 5 2 0 8 3 3 1 2 5 0 1 9 3 1 2 5 0 2 8 3 3 4 1 7 2 0 t o t a l 2 4 1 0 0 0 0 2 4 9 9 9 9 2 4 1 0 0 0 1 1 3 번반복부터 2 0 번반복까지인 8 종의 a l l e l e 가존 재하는것으로알려져있고따라서 a l l e l i c l a d d e r 도 8 종을일반적으로사용하고있다 그립 1 0 그림 1 1, 그립 1 2 에는태음, 소양, 소음 인에대한 v W A 의 a l l e l e N o 가나타나있고, 도표 4 에는태음, 소양, 소음인의 a l l e l e N o 의분포와 그빈도를표시하였다 그링및도표에나타난바와 같이 v W A 의경우는태음, 소양, 소음인의 a l l e l e 분포가각체질별로비교적다른분포양상을보였 다 태음인에서는 a l l e l e N o 1 6 빈도가높은것으 로나타났지만소양인의경우는 a l 1 e l e N o 1 4 와소 음인의경우는 a l l e l e N o 1 7 이그빈도가가장높 은것으로각각나타났다 이외에도각 a l 1 e l e N o 의분포양상이체질별로다소다르게나타났다 V N T R 및 S T R 분석은 D N A f i n g e r p r i n t i n g 법에서사용되는방법으로개체의식별등을목적으 로하는범죄수사및기타유전적분석연구에서많 이쓰이고있다 본연구는사상체질의판별에의해 서분류된각채질들이유전척으로차이가있는지를 조사하기위하여 V N T R 및 S T R 의분석을실시하 여서사상의학의객관화및그임상활동에관한유 용한자료를제공함을목적으로추진되었다 그결 - 1 6 0 -

- 趙東빼외 3 A : 유전자지문법을이용한사상체질의유전적분석연구 - 1 2 1, 4 : ; 6 1 7 8 9 I I I 1 1 1 2 1 1 2 - ' 4 : ; 6 1 7 8 9 1 0 1 1 1 2 繼灣뺏냥렘뽑 鐵빼밟織繼 - -, - - - - - - F i g u r e 1 1 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f v W A l o c u s o f S o y a n g g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 3-2 0 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1 6, 1 8 과 V N T R 의경우는 a l l e l e 의종류가많고각 a l l e l e 의분포 o J : - 상이다양하여 V N T R 의 t y p i n g 을 이용하여서는사상체질의네가지체질그룹에대한 유전적동질성및그룹간유전적상이성을유추해 내기가어려운것으로사료되었고, 상대적으로 a l l e l e 의종류가적고따라서그분포양상이 V N T R 에비해서다양하지않은 S T R 중에서 v W A 와같이각 a l l e l e N o 의분포양상이체질별로다 소다르게나타나는 S T R l o c u s 를사용하여체질별 s a m p l e 수를 1 0 0 7 " 이상선정하여 S T R t y i n g 을 실시한후에그결과를통계처리하여 ( h e t e r o z y g o s i t y 1 형접합도 ) 및유전정보에의한 다형성을나타내는 P I C ( P o l y m o r p h i s m I n f o r m a t i o n C o n t e n t ) 값둥을각체질별로산출 하여비교함으로써체질간유전적차이를조사할수있을것으로기대된다 감사의말씀 본연구를위하여많은도움을주시고협조를해 주신대검찰청과학수사운영과유전자감식실여러분 F i g u r e 1 2 R e s u l t s o f P C R a m p l i f i c a t i o n o f v W A l o c u s o f S o u m g r o u p ( S i l v e r s t a i n e d g e l ) M : A l l e l i c l a d d e d R e p e a t N u m b e r 1 3-2 0 f r o m t h e b o t t o m ) e x a m p l e ) l a n e 1 : r e p e a t n u m b e r 1 4, 1 7 들에게감사드립니다 참고문헌 1 조황성 : 동양의학의새로운가능성, 한국의사 상체질의학연구 제 1 차한의학과중의학학 술세미나 초록집 p p 1-4 0 ( 1 9 9 6 ) 2 K u h n l e i n D D a w e Y Z a d w o r n y D a n d G a v o r a J S : D N A f i n g e r p r i n t i n g : a t o o l f o r d e t e r m n i n g g e n e t i c d i s t a n c e s b e t w e e n s t r a i n s o f p o u l t r y T h e r A p p l G e n e t 7 7 6 6 9 ( 1 9 9 2 ) 3 J a m e s L W a n d P a u l a E M : A b u n d a n t c l a s s o f h u m a n D N A p o l y m o r p h i s m s w h i c h c a n b e t y p e d u s i n g t h e p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n A m J H u m G e n e t 4 4 3 8 8 ( 1 9 8 9 ) 4 N a k a m u r a Y L e p p e r t M 0 C o n n e l l P W o l f f R H o l m T C u l v e r M M a r t i n C F u j i m o t o E, H o f f M -! ( )! -

- 사상의학회지저 1 8 권저 1 2 호 1 9 9 6 - K u m l i n E a n d W h i t e R : V a r i a b l e n u m b e r o f t a n d e m n r e p e a t ( V N T R ) m a r k e r s f o r h u m a n g e n e m a p p i n g S c i e n c e 2 3 5, 6 1 6 ( 1 9 8 7 ) 5 H o r n T G, B r e n d a R a n d K a t h e r i n e W K : A m p l i f i c a t i o n o f h i g h l y p o l y m o r p h i c V N T R s e g m e n t b y t h e p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n N u c I A c i d s R e s 1 7, 2 1 4 0 ( 1 9 8 9 ) 6 P u e r s C, H o l l y A H, L i J, C a s k e y C T a n d J a m e s W S : I d e n t i f i c a t i o n o f r e p e a t s e q u e n c e h e t e r o g e n e i t y a t t h e p o l y m o r p h i c s h o r t t a n d e m r e p e a t l o c u s H U M T H O l ( A A T G ) n a n d r e a s s i g n m e n t o f a l l e l e s i n p o p u l a t i o n a n a l y s i s b y u s i n g a l o c u s - s p e c i f i c a l l e l i c l a d d e r A m J H u m G e n e t 5 3, 9 5 3 ( 1 9 9 3 ) 7 K i m p t o n C, W a l t o n A a n d G i l l P : A f u r t h e r t e t r a n u c l e o t i d e r e p e a t p o l y m o r p h i s m i n t h e v W F g e n e H u m M o l G e n e t 1, 2 8 7 ( 1 9 9 2 ) - ] 6 2 -

- 趙東빼외 3 人 : 유전자지문법을이용한사상체질의유전적분석연구 - A b s t r a c t G e n e t i c A n a l y s i s s t u d y o f S a s a n g C o n s t i t u t i o n C l a s s i f i c a t i o n b y D N A - f i n g e r p r i n t i n g m e t h o d s D o η g W u k C h o, H w a n g S u η g C h o K o r e a I n s t i t u t e o f O r i e n t a l M e d i c i n e C h a ηg S o o L e e D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y, K o n - K u l U n i v e r s i t y B y u η g H e e K o D e p a r t m e n t o f O r i e n t a l M e d i c i n e, K y u n g - H e e U n i v e r s i t y V N T R a n d S T R D N A t y p i n g s a r e t y p i c a l g e n e t i c a n a l y s i s m e t h o d s w h i c h a r e w i d e l y u s e d i n D N A - t i n g e r p r i n t i n g f o r f o r e n s i c s c i e n c e a n d o t h e r g e n e t i c r e s e a r c h p u r p o s e s I n t h i s s t u d y, g e n o m i c D N A o f d i f f e r e n t c o n s t i t u t i o n s ( T a e u m, S o y a n g a n d S o u m ) w e r e a n a l y z e d b y V N T R a n d S T R D N A t y p i n g t o p r o v i d e s c i e n t i f i c a n d o b j e c t i v e r e f e r e n c e s f o r S a s a n g M e d i c i n e I t w a s f o u n d o u t i n t h i s s t u d y t h a t V N T R - M C f 1 1 8 a n d Y N Z 2 2 l o c i s h o w e d t o o m a n y d i δ e r e n t v a r i a t i o n o f a l l e l e d i s t r i b u t i o n a n d n u m b e r s f o r e a c h c o n s t i t u t i o n T h e r e f o r e, i t i s t h o u g h t t h a t V N T R t y p i n g c a n n o t b e u s e d f o r g e n e t i c c l a s s i f i c a t i o n s t u d y f 이, - S a s a n g C o n s t i t u t i o n w h i c h c l a s s i f i e s h u m a n b o d y i n t o 4 g r o u p s H o w e v e r, v W A l o c u s, o n e o f t h e S T R l o c i i n v e s t i g a t e d i n t h i s s t u d y, s h o w e d s l i g h t d i f f e r e n c e i n a l l e l e d i s t r i b u t i o n f o r e a c h d i f f e r e n t c o n s t i t u t i o n - 1 6 1 -