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윤정 설
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1 ORIGINAL ARTICLE Korean J Clin Lab Sci. 2015, 47(4): pissn eissn Korean J Clin Lab Sci. Vol. 47, No. 4, Dec Effect of Smilax China L. Extract on Cultured NIH3T3 Fibroblasts Damaged by Mercury as Allergic Contact Dermatitis Inducer Sun-Hee Han 1 and Seung-Joo Jekal 2 Departments of 1 Nursing, 2 Clinical Laboratory Science, Wonkwang Health Science University, Iksan 54538, Korea 알러지성접촉피부염유발제인수은으로손상된배양 NIH3T3 섬유모세포에대한청미래덩굴추출물의효과 한선희 1, 제갈승주 2 원광보건대학교 1 간호학과, 2 임상병리학과 In order to examine the effect of Smilax china L. (SC) extract on the cytotoxicity of methymercuric chloride (MMC), allergic contact dermatitis, The cytotoxicity of MMC was assessed after cultured NIH3T3 fibroblasts were treated with various concentrations of MMC for 72 hours. And also, the following results were obtained by measuring the antioxidative effect of SC extract on the cytotoxicity of MMC. In this study, MMC remarkably decreased the cell viability of NIH3T3 fibroblasts in a dose-dependent manner, and MMC was seen to be highly-toxic below 100 um of XTT50 value. In addition, the toxicity of MMC was involved in oxidative stress via a blockage of MMC-induced cytotoxicity by vit. E as antioxidant. In the protective effect of SC extract on MMC-induced cytotoxicity, SC extract defended the cytotoxicity of MMC by a significant increase of cell viability which was decreased by MMC-induced cytotoxicity. It also showed antioxidative effects such as electron donating ability (EDA), superoxide dismutase (SOD)-like activity (SLA) and the lipid peroxidation activity (LPA). From these results, the natural component as SC extract may be a putative resource as the antioxidative agent for the treatment of inflammatory skin disease associated with the oxidative stress. Keywords: Allergic contact dermatitis, Antioxidative effect, Inflammatory skin disease Corresponding author: Seung-Joo Jekal Department of Clinical Laboratory Science, Wonkwang Health Science University, Iksan 54538, Korea Tel: sjjei@wu.ac.kr This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License ( which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Copyright 2015 The Korean Society for Clinical Laboratory Science. All rights reserved. Received: November 1, 2015 Revised 1 st : November 17, 2015 Revised 2 nd : November 25, 2015 Accepted: November 26, 2015 서론수은은돌연변이원인인동시에알레르기성접촉피부염유발제로알려져있으나일상생활에필요한온도계를비롯하여수은전지, 치아아말감및자동차부품과같은산업부문에주된원료로사용되고있으며, 미백이나살균을목적으로화장품부문에서도승홍 (HgCl 2) 이란이름으로널리사용되어왔다 (Son 등, 2013). 수은화 합물은승홍이나뇌홍과같은무기수은화합물과페닐수은이나알킬수은및메틸수은과같은유기수은화합물로나뉘는데유기수은화합물은무기수은화합물보다독성이훨씬강하기때문에취급시특별한주의를요한다 (Greener 와 Kochen, 1983). 1953년일본의미나마타만의수은중독이나 1972년이라크의알킬수은농약오염에의한중독의사건을계기로독성이강한수은중독에의한부작용은관심의대상이되었다 (Tsubaki 와 Takahashi, 1986). 그럼에

2 176 Sun-Hee Han and Seung-Joo Jekal. Effect of Smilax China L. Extract on Allergic Contact Dermatitis Inducer 도불구하고아직까지이의중독현상에대한자세한기전은물론, 효과적인치료방법이나치료약제가매우부족한실정이다 (Kim 등, 2010). 수은에대한한연구에서수은을포함한크롬이나구리와같은몇몇중금속류는이들의붕괴시자유라디칼을생성한다는것이제시되면서수은독성이산화적손상과관련이있다는것이보고된바있다 (Gage, 1975). 실제로수은으로손상된배양세포에항산화제를투여한결과수은의독성이경감되었다고보고된바있다 (Park 등, 1996). 현재, 수은중독에대한기전을산화적손상 (oxidative stress) 측면에서접근하는연구가진행되고있다. 자유라디칼에의한산화적손상은세포내항산화효소의활성저해를비롯한세포내칼슘과연관된 N-methyl-D-aspartate 수용체의활성, 흥분성아미노산 (excitatory amino acids, EAAs) 의분비와같은현상을초래하여세포를퇴화내지는고사 (apoptosis) 시킨다고알려져있다 (Park 등, 1996). 최근, 허브를비롯한한약제나약용식물중에는항산화를비롯한항암, 항염, 항독등에유효한성분들을다량포함하고있다는것이밝혀지면서이들성분에대한생리활성을규명하려는연구가진행되고있다 (Li 등, 2007; Rim 등, 2010). 그결과페놀화합물 (phenolic compound) 을비롯한이소프레노이드 (isoprenoid) 및배당체 (glycoside) 와같은물질들이항균이나항독, 항산화와같은유효한활성을나타낸다고보고되었다 (De-Heredia 등, 2001; Kwon, 2015). 식물중청미래덩굴 (Smilax china L., SC) 은우리나라전국에서식하고있는낙엽활엽수로서백합과 (Liliaceae) 에속하는다년생덩굴성식물이다. 청미래덩굴의꽃은 5월경에개화하는데 9 10 월경에는붉은색의열매를맺는다 (Li 등, 2007). 생약명은토복령또는우계라고도부르며, 주로뿌리나줄기를약제로많이사용하여왔으며, 관절염, 임파선염, 독중독과같은질환에유효한효과가있다 (Pyo 등, 2013). 특히청미래덩굴의잎은발계엽이라하여중금속독성에대한예방에효과가있으며, 줄기와열매도피부질환과같은병변에도효과가있어전초모두가약제로서사용가능하다 (Oh, 2011). 청미래덩굴에는사포닌 (saponin) 을비롯한스밀라신 (smilacin), 파릴린 (parillin), 리놀레산 (linoleic acid) 및올레인산 (oleic acid) 과같은다양한성분들이함유되어있으며, 이들성분중사포닌이나리놀레산및올레인산은항산화작용이뛰어난것으로알려져있다 (Chang, 2003). 최근, 세포배양법이발달함에따라배양세포를이용하여각종질환의병인적기전규명을비롯하여신물질의효능이나또는독성물질의독성정도를측정하는도구로자리잡고있다. 세포배양은동질의재료를쉽게다량확보할수있으며, 동일한실험을여러번반복할수있어재현성이뛰어나다는장점을가지고있다 (Song 등, 2002). 따라서본연구는알러지성접촉피부염 (allergic contact dermatitis) 과같은염증성피부질환에치료적효과를가지고있는천연소재의탐색일환으로, 청미래덩굴추출물을재료로배양 NIH3T3 섬유모세포에알러지성접촉피부염유발제인메틸수은 (methymercuric chloride, MMC) 을처리한후추출물의영향을항산화측면에서조사하였다. 재료및방법 1. 실험재료 NIH3T3 섬유모세포는 American Type Culture Collection (ATCC) 에서분양받아사용하였다. 2. 약제제조본실험에사용한시약으로는 methymercuric chloride (MMC) 를비롯한 vitamin E (vit. E), 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), ethanol, pyrogallol, ammonium thiocyanate, phosphate buffered saline (PBS), fetal bovine serum (FBS), minimum essential medium (MEM), 및 XTT (2,3-bis-[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-caboxanilide, disodium salt) 는 Sigma사 (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO, USA) 에서각각구입하였다. MMC의제조는 FBS가없는배양액을사용하여최종농도가각각 20 um, 50 um, 80 um 및 100 um의저장액을만들어냉암소에보관한후실험직전필요한양을배양액에직접첨가하여사용하거나또는필요농도로희석하여사용하였다. XTT는실험전날 PBS를이용하여 50 ug/ml의저장액을제조한후사용하였다. 3. 청미래덩굴 (Smilax china L., SC) 추출청미래덩굴은 8월경전라북도익산시야산부근에서채취하여시에위치하고있는대학부설생명자원과학연구소에서확인동정후사용하였다. 채집한청미래덩굴전초는깨끗이세척후통풍이잘되는곳에서말린다음일정길이로잘라냉암소에보관하여시료로사용하였다. 시료추출은시료 82.6 g을파쇄한다음열수추출을위해시료의 3배정도의증류수와함께 1,000 ml의환저플라스크에넣고 2시간동안가열하였다. 위의과정을 5회반복추출한다음여과하여 3,000 rpm에서 30분동안원침시켰다. 원침후진공농축기에서농축감압시킨다음 5.1 g의시료를얻었다. 이때수율은 6.2% 로나타났다.

3 Korean J Clin Lab Sci. Vol. 47, No. 4, Dec 세포배양 NIH3T3 섬유모세포의배양은 Han 등 (2006) 의방법에따라배양용기에부착된세포를효소해리술에의하여분리하였다. 분리된세포들은원침후 10% FBS가함유된 MEM 배양액에넣어 cells/well 의농도로조절한후 96-well plate에분주하였다. 분주된세포들은 72시간동안 36 o C, 5% CO 2 로조절된항온기내에서배양하였다. 5. MMC 처리 XTT 50 값의 MMC를배양세포에처리하기 2시간전에항산화능이확인된 vit. E의농도중연구자가임의대로선택한 30 um과 40 um의농도가포함된배양액에서세포를배양한다음세포생존율을양성대조군인 MMC의처리군과비교조사하였다. 6. Vit. E 처리 Vit. E의항산화능을측정하기위하여활성산소의일종인 20 mu/ml glucose oxidase (GO) 를배양세포에처리하기 2시간전에 vit. E가각각 um의농도로포함된배양액에서세포를처리한후세포생존율을대조군과비교조사하였다. 7. MMC에대한 vit. E 영향 XTT 50 값의 MMC를배양세포에처리하기 2시간전에항산화능이확인된 vit. E의농도중연구자가임의대로선택한 30 um과 40 um의농도가포함된배양액에서세포를배양한다음세포생존율을양성대조군인 MMC의처리군과비교조사하였다. 8. SC 추출물처리 MMC에대한청미래덩굴추출물의영향을조사하기위하여배양 NIH3T3 섬유모세포에 MMC XTT 50 값의 MMC를처리하기 2시간전에 70 ug/ml와 90 ug/ml의추출물이각각포함된배양액에서세포를처리한다음세포생존율을양성대조군인 MMC의처리군과비교조사하였다. 9. 세포생존율분석세포생존율의분석은 Borenfreund 와 Puerner (1984) 의방법에따랐다. 즉, 배양세포에약제나추출물을농도별로처리한다음실험당일제조한 XTT 50 ug/ml를 well당 100 ul씩넣고 36 o C로조절된항온기에서 4시간동안배양하였다. 배양완료후 dimethylsulfoxide (DMSO) 를넣어일정시간실온에서정치한다음 Variskan flash ELISA reader (Thermo Scientific Co., Vantaa, Finland) 로 450 nm에서흡광도를측정하였다. XTT 50 값의산출은회귀직선식에의하여산정하였다. 10. 전자공여능측정전자공여능 (electron donating ability, EDA) 의측정은 Blois (1958) 의방법에따라, 메탄올시료에 0.3 mm DPPH 메탄올용액 100 ul를넣고실온에서 30분간처리하였다. 처리완료후 ELISA reader로 517 nm에서흡광도를측정하였다. EDA는시료첨가군과시료무첨가군간의차이를시료무첨가군에의한백분율로나타냈으며, vit. E의활성을비교군으로사용하기위하여 vit. E의항산화능측정에서활성이 50% 를넘은농도를선정하여사전실험을한결과 vit. 35 um 활성이 50% 를넘은농도를선택하여비교농도로하였다. 11. SOD-유사활성측정 SOD-유사활성 (SOD-like activity) 의측정은 Marklund와 Marklund (1974) 의방법에따랐다. 즉, 시료에 Tris-HCl buffer와 10 mm pyrogallol을넣고 25 o C에서 10분동안처리하였다. 처리후 HCl로반응시킨다음 ELISA reader로 420 nm에서흡광도를측정하였다. 또한, vit. E의활성을비교군으로하였으며, 활성은시료첨가군과시료무첨가군의차이에의한백분율로나타냈으며, vit. E의활성을비교군으로사용하기위하여 vit. E의항산화능측정에서활성이 50% 를넘은농도를선정하여사전실험을한결과활성이 50% 를넘은농도를선택하여비교농도로하였다. 12. 지질과산화측정지질과산화능 (lipid peroxidation activity, LPA) 는 Kikuzaki와 Nakatani (1993) 의방법에따라, 에탄올에 3.9 ml의시료를넣어혼합한액에에탄올에녹인 2.52% linoleic acid와 0.05 M PBS (ph 7.0) 용액 12.1 ml를첨가한후 40 o C에서 24시간동안처리하였다. 처리완료후 30% ammonium thyocyanate 로처리하고 0.02 M ferrous chloride 0.1 ml를가한후실온에서반응시켰다. 반응완료후 ELISA reader로 500 nm에서흡광도를측정하였다. LPA 는대조군에대한시료첨가군의차이를백분율로표시하였다. 13. 통계처리자료분석은 SPSS 18.0 (SPSS Inc., Chicago. IL. USA) 에의하여행하였으며 mean±sd로표시하였다. 또한, 자료에대한유의성검정은 independent t-test에의하였으며, 통계처리에대한유의수준은 p값이 0.05 미만인경우로설정하였다.

4 178 Sun-Hee Han and Seung-Joo Jekal. Effect of Smilax China L. Extract on Allergic Contact Dermatitis Inducer 결과 1. MMC 의독성측정 MMC의세포독성을조사하기위하여배양 NIH3T3 섬유모세포에 MMC가 um 농도로각각포함된배양액에서 72시간동안처리한결과, 대조군에비해 MMC의농도가증가할수록세포생존율이유의하게감소되었으며 (p<0.001), 이때 XTT 50 값은 33.7 um의처리에서나타났다 (Table 1). 2. Vit. E 의항산화능측정 세포생존율은대조군인 100% (0.226±0.05) 에비하여 20 mu/ml GO만을처리한경우 35.4% (0.080±0.01) 로나타났으나, 20 um 농도의 vit. E의처리에서는 52.2% (0.118±0.03) 로 GO 만의처리에비하여유의한증가를보였다 (p<0.05). 또한, vit. E를 25 um과 30 um를처리한결과세포생존율이각각 61.5% (0.139±0.02) 와 70.4% (0.159±0.06) 로나타났으며, 35 um 과 40 um의처리에서는각각 81.9% (0.185±0.04) 와 89.4% (0.202±0.07) 로나타났다. 따라서, GO만의처리에비하여모두유의한세포생존율의증가를보였다 (p<0.001) (Table 2). 3. MMC 에대한 vit. E 의영향 MMC의세포독성에산화적손상이관여하는지를알아보기위하여 XTT 50 값의 MMC 33.7 um를배양세포에처리하기 2시간전 Table 1. The cytotoxicity of MMC on cultured NIH3T3 fibroblasts by XTT assay Concentrations of MMC (um) Mean±SD (% of control) Control 0.243± ± ** ± *** ± *** 33.7 (XTT 50) 0.122± *** 에항산화제인 vit. E를 30 um과 40 um의농도로세포에처리하였다. 그결과 XTT 50 값의 MMC만을처리한경우세포생존율이대조군인 100% (0.214±0.04) 에비하여 46.3% (0.099±0.01) 로나타난반면, 30 um와 40 um 농도의 vit. E 처리에서는각각 69.6% (0.149±0.05) (p<0.01) 와 88.3% (0.189±0.02) (p<0.001) 로나타나 MMC 만의처리에비하여모두유의하게증가하였다 (Table 3). 4. MMC 의독성에대한 SC 추출물의영향 MMC의세포독성에대한 SC 추출물의영향을조사하기위하여 XTT 50 값의 MMC 33.7 um를배양 NIH3T3 섬유모세포에처리하기전에 70 ug/ml와 90 ug/ml의 SC 추출물을전처리한결과, 대조군인 100% (0.238±0.05) 에비하여 MMC만의처리에서세포생존율이 52.5% (0.125±0.03) 로나타났으나 70 ug/ml SC 추출물처리에서는 62.2% (0.148±0.01) 로나타나 MMC만의처리에비하여다소증가하였으나통계적인유의성은나타나지않았다. 그러나, 90 ug/ml SC 추출물처리에서는세포생존율이 71.8% (0.171±0.04) 로나타나 MMC만의처리보다통계적으로유의한증가를나타냈다 (p<0.01) (Table 4). 5. EDA 측정 EDA를측정하기위하여 70 ug/ml와 90 ug/ml 농도의 SC 추출물시료를분석한결과 70 ug/ml SC 추출물시료의처리에서 EDA 활성이 32.6% 로대조군에비하여통계적으로유의한증가를나타냈다 (p<0.01). 또한, 90 ug/ml SC 추출물처리에서도 53.6% 로나타나대조군에비하여통계적으로유의한증가를보였다 (p<0.001). Table 3. The effect of vit. E on the cytotoxicity induced by MMC in cultured NIH3T3 fibroblasts Concentrations of vit. E (um) Mean±SD (% of control) Control 0.214± MMC (XTT 50) 0.099± ± ** ± *** Table 2. The antioxidative effect of vit. E on glucose oxidase Concentrations of vit. E (um) Mean±SD (% of control) Control 0.226± mu/ml GO 0.080± ± * ± *** ± *** ± *** ± *** Table 4. The protective effect of Smilax china L. (SC) extract on MMC-induced cytotoxicity in cultured NIH3T3 fibroblasts Concent. of SC extr. (ug/ml) Mean±SD (% of control) Control 0.238± MMC (XTT 50) 0.125± ± ± **

5 Korean J Clin Lab Sci. Vol. 47, No. 4, Dec 특히, 90 ug/ml의 SC 추출물이갖는 EDA 활성은 35 um vit. E의 EDA 활성 (74.2%) 보다 70% 이상인것으로나타났다 (Table 5). 6. SOD- 유사활성측정 MMC에대한 SC 추출물의 SOD-유사활성에대한영향을조사하기위하여 70 ug/ml와 90 ug/ml의 SC 추출물시료를분석한결과,70 ug/ml SC 추출물시료의 SOD-유사활성은대조군에비하여 21.4% 로유의하게증가하였다 (p<0.01). 또한 90 ug/ml SC 추출물시료의처리에서도 45.9% 로나타나대조군에비하여유의한활성증가를보였다 (p<0.01). 특히, 90 ug/ml의추출물시료는비교군인 20 um vit. E의 SOD-유사활성인 53.5% (p<0.001) 에비해 85% 이상의활성을나타냈다 (Table 6). 7. LPA 측정 MMC에대한 SC 추출물의 LPA 에대한영향을조사하기위하여 70 ug/ml와 90 ug/ml의 SC 추출물시료각각을분석한결과 70 ug/ml SC 추출물시료의 LPA 는대조군인 100% 에비하여 83.1% 나타나유의한감소를보였고 (p<0.01), 90 ug/ml SC 추출물시료의처리에서는 76.8% 로나타나대조군에비하여유의한활성감소를보였다 (p<0.01) (Table 6). 따라서 LPA 는 70 ug/ml와 90 ug/ml 농도에서각각 16.9% 와 23.2% 로나타나대조군에비하여유의하게증가한것으로나타났다 (p<0.01) (Table 7). 고찰알러지성접촉피부염유발제인 MMC가배양 NIH3T3 섬유모세포에미치는독성효과를 SC 추출물이갖는보호효과를확인하기위하여실시된연구이다. 배양세포인 NIH3T3 섬유모세포를 MMC를포함한배양액에서 72시간동안배양한결과, MMC는대조군에비하여농도의존적으로세포생존율을유의하게감소시켰으며 (p<0.001), 이때 XTT 50 값은 33.7 um에서나타나 MMC가배양 NIH3T3 섬유모세포에세포독성을가지고있음을말해주고있다. 또한 XTT 50 값이 100 um 이하인 33.7 um에서나타남으로서 Borenfreund 와 Puerner (1984) 에의한독성판정기준에의하여고독성 (highly-toxic) 인것으로나타났다. 이들은독성판정기준을 XTT 50 값이나 MTT 50 값이 100 um 이하인경우를고독성 (highly-toxic) 으로, 100 1,000 um인경우를중간독성 (mid-toxic) 으로, 1,000 2,000 um인경우를저독성 (lower-toxic) 으로, 2,000 um 이상인경우를무독성 (non-toxic) 으로각각판정하였다. 이같은본연구결과는 Jung 등 (2008) 에의한 MMC의배양심장근육세포에대한독성보고나, Kim 등 (2010) 에의한 MMC의배양인체섬유모세포에대한독성보고와도일치하였다. 이와같이 MMC가배양 NIH3T3 섬유모세포에독성을보인것은 MMC에의한세포내 DNA의손상이나, 아미노산및단백질합성저해와같은가능성도배제할수는없지만 (Olson과 Massaro, 1977), 그보다는 MMC가메틸라디칼과같은자유라디칼을생성함으로서산화적손상에의하여세포생존율의감소를초래하였을가능성이클것으로생각된다 (Park 등, 1996). 따라서본연구에서는 MMC에의한독성이산화적손상인지를확인하기위하여항산화의일종인 vit. E를적용하였다. 그러기위해먼저활성산소의일종인 GO에대한 vit. E의항산화능을분석하였다. Vit. E um의농도를처리한결과, 20uM/mL 의 GO만을처리한것보다모두통계적으로유의한세포생존율의증가를나타내어 vit. E의높은항산화능을확인하였다. Vit. E는 ascorbic acid 와같이강력한항산화제로서식품의불포화지방산, 인지질, vit. A 의산화방지및세포노화를막아준다고알려져있다 (Yamamoto 등, 1983). 따라서, MMC에대한 vit. E의영향을조사하기위하여 XTT 50 값의 MMC를배양세포에처리하기전항산화제인 vit. E를배양세포에처리한결과 MMC만을처리한경우에비하여 30 um (p<0.01) 과 40 um (p<0.001) 의 vit. E의처리에서는각각유의한 Table 6. SOD-like activity of Smilax china L. (SC) extract determined at a wavelength of 420 nm SOD-like activity (420 nm) Experimental group Mean±SD (% of control) 20 um vit. E 0.244± *** 70 ug/ml SC extract 0.193± ** 90 ug/ml SC extract 0.232± ** Table 5. Electron donating ability (EDA) of Smilax china L. (SC) extract determined at a wavelength of 517 nm Table 7. lipid peroxidation activity of Smilax china L. (SC) extract determined at a wavelength of 500 nm Electron donating ability (517 nm) Lipid peroxidation activity (500 nm) Experimental group Mean±SD (% of control) 35 um vit. E 0.581± *** 70 ug/ml SC extract 1.517± ** 90 ug/ml SC extract 1.044± *** Concent. of SC extr. (ug/ml) Mean±SD (% of control) Control 0.237± ± ** ± **

6 180 Sun-Hee Han and Seung-Joo Jekal. Effect of Smilax China L. Extract on Allergic Contact Dermatitis Inducer 세포생존율의증가를보였다. 본실험의결과에서항산화제인 vit. E가 MMC의독성을방어한것은 MMC가산화적손상과관련이있다는것을증명하고있으며, 이는 Park 등 (2000) 에의한 vit. E의 MMC 독성감소에대한보고나 Son 등 (2013) 에의한 MMC 독성에대한 vit. E의방어효과에대한보고와도일치하였다. MMC의독성에대한 SC 추출물의영향을조사하기위하여 XTT 50 값의 MMC를배양세포에처리하기전에 70 ug/ml와 90 ug/ml의 SC 추출물을전처리한결과, 70 ug/ml와 90 ug/ml SC 추출물처리에서세포생존율이각각 62.2% (0.148±0.01) 와 71.8% (0.171±0.04) 로나타났으며, 특히 90 ug/ml의처리에서는 MMC만의처리에비하여유의한증가를나타냈다 (p<0.01). 본연구결과는 SC 추출물이 MMC의세포독성을방어한것으로서, Oh (2011) 가보고한 SC 추출물이 MMC와같은접촉피부염유발제인크롬의세포독성을방어하였다는연구결과와도상통하였다. 위에서처럼 MMC에대한 SC 추출물의방어효과는 Song 등 (2002) 의보고에따라 MMC에의한세포내단백질합성과관련된내형질세망 (endoplasmic reticulum) 의기능저해나, DNA polymerase 와같은전구물질의저해와같은현상을방어한이유도있겠지만, 그보다는 SC 추출물의항산화작용이 MMC의산화적손상을방어한결과로판단된다. 따라서 SC 추출물에대한항산화능의조사를위하여 EDA를비롯한 SOD-유사활성및 LPA 를분석하였다. 그결과 SC 추출물은 EDA를비롯하여, SOD-유사활성및 LPA 를나타냄으로서항산화효과가있음을증명하였다. 특히, 90 ug/ml 추출물시료처리에있어서 EDA와 SOD-유사활성은비교군인 vit. E 활성의 70 80% 이상의활성을보임으로서 vit. E와같은항산화능을증명하였으며, 70 ug/ml와 90 ug/ml 농도에서지질의과산화를감소시켰다. 이같은결과는 Seo 등 (2012) 이 SC 추출물에서항산화능을보고한연구결과와 Pyo 등 (2013) 이 SC 추출물이 LDH (lactate dehydrogenase) 의활성을억제하였다는연구결과와유사하였다. SOD-유사활성은세포내항산화효소의하나인 SOD와같은기능정도를측정하는것으로서이는 SC 추출물이 SOD 효소처럼자유라디칼의일종인과산화수소 (H 2O 2) 를물로변환하는유사기능을가지고있음을제시하고있다. SC 추출물의항산화능은추출물성분중에 saponin을비롯한리놀렌산 (linoleic acid) 이나올레인산 (oleic acid) 과같은항산화작용이강한성분들에의한것으로생각되며, Li 등 (2007) 이 SC 추출물에서강력한항산화성분의하나인플라보노이드 (flavonoid) 물질을분리하였다는연구보고가이를더욱뒷받침해주고있다. 특히, saponin은인삼의주성분으로서항산화능을비롯한, 항암, 항염과같은유효한약리활성을나타낸다고알려져있다 (Wang 등, 2006). 그러나, SC 추출물과같은천연성분에대한항산화측면에서의분석은각성분의생리활 성은물론, 세포내산화적손상과관련된수용체및신호전달계와같은다양한측면에서체계적으로연구가이루어져야할것으로생각된다. 요약 알러지성접촉피부염유발제인수은의독성에대한청미래덩굴 (Smilax china L.) 추출물의영향을조사하기위하여배양 NIH3T3 섬유모세포에여러농도의메틸수은 (methylmercuric chloride, MMC) 을 72시간동안처리한후이들의세포독성을조사하였다. 또한, MMC의독성에대한청미래덩굴추출물의보호효과를항산화측면에서조사하여다음과같은결론을얻었다. MMC는농도의존적으로배양 NIH3T3 섬유모세포의세포생존율을유의하게감소하였으며 XTT 50 값이 100 um 이하로서고독성 (highly-toxic) 인것으로나타났다. 또한, MMC의독성이항산화제인 vit. E에의하여방어됨으로서 MMC의독성에산화적손상이관여하고있는것으로나타났다. 한편, MMC의세포독성에대한청미래덩굴추출물의방어효과에있어서청미래덩굴추출물은 MMC에의하여감소된세포생존율을유의하게증가시킴으로서 MMC의독성을방어하였다. 또한, 청미래덩굴추출물은전자공여능 (EDA) 을비롯한 SOD- 유사활성 (SLA) 및지질과산화능 (LPA) 와같은항산화효과를나타냈다. 이상의결과로부터청미래덩굴과같은천연성분은산화적손상과관련된염증성피부질환의치료를위한항산화제로서의미래가능한천연소재라고생각된다. Acknowledgements: None Funding: None Conflict of interest: None References 1. Blois MS. Antioxidant determination by the use of a stable free radical. Nature. 1958,26: Borenfreund E, Puerner JA. A simple quantitative procedure using monolayer culture for cytotoxicity assay (HTD/NR-90). J Tissue Cult Meth. 1984,9: Chang JK. The wild plants for health of human body. 2rd ed. 2003, p551. Nexusbook, Seoul. 4. De-Heredia JB, Torregrosa J, Dominguez JR, Peres JA. Kinetic model for phenolic compoud oxidation by fenton's reagent. Chemosphere. 2001,45: Gage JC. Mehnism for the biodegradation of organic mercury compounds: The actions of ascorbate and of soluble proteins. Toxicol App Pharmacol. 1975,32: Greener Y, Kochen JA. Methylmercuric toxicity in chick

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Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,