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1 Polymer(Korea), Vol. 32, No. 6, pp , 8 신경재생을위한 BDNF 를함유한 PLGA 지지체의제조및방출 김초민ㆍ김순희ㆍ오아영ㆍ김근아ㆍ이일우 ㆍ이종문ㆍ강길선 전북대학교융합소재연구센터, 가톨릭대학교신경외과 (8년 5월 22일접수, 8년 7월 7일수정, 8년 7월 11일채택 ) Preparation and BDNF Release Profile of BDNF-loaded PLGA Scaffolds for Tissue Engineered Nerve Regeneration Chomin Kim, Soon Hee Kim, A Young Oh, Geun Ah Kim, Il Woo Lee*, John M. Rhee, and Gilson Khang BK-21 Polymer BIN Fusion Research Team, Chonbuk National University, , Dukjin, Jeonju , Korea *Department of Neurosurgery, College of Medicine, The Catholic University of Korea, 5-2, Daeheung 2 dong, Jung ku, Daejeon , Korea (Received May 22, 8; Revised July 7, 8; Accepted July 11, 8) 초록 : 뇌추출신경성장인자 (BDNF) 의서방성전달체로써락타이드-글리콜라이드공중합체 (PLGA) 용액에탈미네랄화된골분 (DBP) 및히알루론산 (HA) 를균일하게혼합하여얼음입자추출법으로다공성지지체를제조하였다. ELISA 로 BDNF 방출량을확인하였으며 SEM 으로방출에따른지지체의다공특성을관찰하였다. PLGA 지지체와비교시 DBP/HA/PLGA 지지체에서지속적으로일정량이방출됨을확인하였으며 BDNF 의양이증가할수록빠르고많은양이방출되는패턴을보였다. 얼음입자추출법으로제조된 DBP/HA/PLGA 지지체는 BDNF 등의수용성사이토카인의포접이용이하고, 생분해성고분자분해특성에의해서방출이조절되며, 신경손상부분에이식시 BDNF 가서방화되어신경재생에도움을줄것으로기대된다. Abstract: We manufactured poly(l-lactide-co-glycolide)(plga) scaffolds impregnated demineralized bone particle(dbp) and hyaluronicacid(ha) by ice-particle leaching method and tested their ability of sustained release of brain derived neurotrophic factor(bdnf). BDNF(5 and ng) mixed with PLGA, DBP/PLGA, HA/PLGA and DBP/HA/PLGA scaffold. The release profiles of BDNF from BDNF loaded scaffolds were assayed using ELISA. Morphological changes of scaffolds by BDNF release were also observed by SEM. BDNF stably and sustainedly released from DBP/HA/PLGA than from PLGA and DBP/PLGA scaffolds. DBP/HA/PLGA scaffolds showed the great structural changes, which demonstrated BDNF release amount from DBP/HA/PLGA scaffolds were highest in all groups. We suggest that BDNF loaded DBP/HA/PLGA scaffold would be very useful for nerve regeneration. Keywords: brain derived neurotrophic factor, poly(l-lactide-co-glycolide), demineralized bone particle, hyaluronic acid, scaffold, spinal cord regeneration. 서 생체조직공학을이용한새로운바이오장기를재생하기위해 (i) 배 아줄기세포, 성체줄기세포, 전구세포와초대배양세포등의세포원, (ii) 생체재료로만들어진지지체및 (iii) 성장을억제하거나촉진시키는생체활성분자등의세가지인자가필수적으로필요하다. 1-3 이와같은조건을갖춘재료중합성고분자인락타이드- 리콜라이드공중합체 (PLGA) 가널리사용되고있는데이는뛰어난생체적합성을가지며, 조절할수있는생분해성, 그리고상대적으로양호한가공성을지 론 To whom correspondence should be addressed. gskhang@chonbuk.ac.kr 니고있기때문이다. 그리고이물질의안정성은많은임상실험에의하여증명되었고, 현재조직공학과약물전달시스템분야에서많이사용되고있다. 1,2,4,5 그러나비활성의합성고분자인 PLGA 는염증반응을야기하는생분해성의특성과, 세포에적합한환경을제공하는데한계를가지고있다. 6,7 탈미네랄화된골분 (demineralized bone particle, DBP) 은골형성단백질 (bone morphogenic proteins, BMPs) 을함유하여세포분화를자극하는데, 이는 TGF-β 그룹중하나로신경보호와시냅스형성에도움을주고별아교세포의생성을촉진한다는특성을지닌다는보고가있다 또한천연유래고분자로글리코사미노글리칸고분자의일종인 hyaluronic acid(ha) 는다양한조직에서발견되는점 529

2 53 김초민 ᆞ 김순희 ᆞ 오아영 ᆞ 김근아 ᆞ 이일우 ᆞ 이종문 ᆞ 강길선 액다당류로서세포외기질을구성하는중요한구성물질이며, HA 가가지는점탄성, 우수한수분보유능력및생분해성때문에의학, 미용및조직공학분야에서널리사용되고있는생체재료이다. 2,13-19 본연구팀의전연구에서는 DBP 및 HA 를함유한 PLGA 지지체는친수성및물흡수성을증대시키며세포의부착및증식에유리한환경을제공함을확인하였고, 생리활성물질의서방형지지체로서의가능성등을보고하는연구를수행하였다. 8,13,-22 높은활성을가졌다면세포의지지체인생분해성고분자지지체만으로도새로운조직이형성될것이지만이들은활성이매우낮기때문에새로운조직재생에있어서성장인자가필요하다. 여러성장인자신경성장인자로중추신경계와말초신경계의세포의성장, 분화, 생존, 사멸등의다양한기능을조절하는인자로서 brain derived neurotrophic factor(bdnf), nerve growth factor(ngf) 그리고 neurotrophin-3(nt-3) 가있다. BDNF 는중추신경계에서 NGF 보다발현이높으며분포도넓고신경단위들사이시냅스연결강도를증가시키며신경돌기의재생에중요한역할을하는것으로알려져있다 본연구에서는 PLGA 에친수성및생활성을부여하고자천연재료를하이브리드화한연구로생체활성천연재료인 DBP 및 HA 을함유하여 3차원적인다공성지지체를제조하였으며조직공학적신경재생의목적으로생분해성고분자의특성을이용한 DBP/HA/PLGA 지지체에 BDNF 를서방화시키려는시도를하였다. 또한, 성장인자의생물학적효능을발휘하도록하기위하여생분해성고분자전달체와성장인자가결합한약물전달시스템기술을적용하여고분자전달체에따른성장인자의방출속도를조절하고자하였다. 하기위하여지지체당 5 ng, ng의농도로 BDNF 를첨가하여제조된얼음입자와교반기를이용하여균일하게혼합하였다. 혼합된입자는자체제작한직경 8 mm, 두께 5 mm 크기의실리콘몰드에넣은후급속동결하여잔류용매및얼음입자추출을위해 8 mtorr, -55 조건에서 48 시간동안동결건조하였다. 얼음입자가액상으로변화하는것을방지하기위하여모든과정은액체질소위에서실시하였다. 1,29 BDNF를함유한 DBP/HA/PLGA 지지체의제조. DBP 및 HA를포함한 PLGA 지지체의제조방법은 PLGA 만함유한지지체제조방법과동일한방법으로제조하였으며, 요약하면다음과같다. 먼저, PLGA.1 g을 MC.5 ml 에용해시킨후 PLGA 무게의 % 에해당되는.2 g의 DBP 및 μl 의 HA(1%) 용액을첨가하여혼합시켰다. BDNF 를함유한지지체를제조하기위하여지지체당 5 ng 및 ng 의 BDNF 를첨가하여얼음입자추출법을이용하여지지체를제조하였으며이들의제조모식도를 Figure 2에나타내었다. BDNF 를함유한지지체의특성분석. 상기의방법들을사용하여제조한다공성지지체의방출전다공의크기및형태를관찰하고자주사전자현미경 (bio-sem, SN-3, Hitachi, Japan) 을이용하여관찰하였다. 측정크기를 mm 크기로절단한후, 샘플폴더에고정시키고플라스마스퍼터 (Emscope, Model SC 5K, UK) 를사용해서백금코팅후, 지지체의내 외부형태를관찰하였다. 13,3 BDNF 를함유한지지체의생체외방출거동. 단백질의함량별, DBP 또는 HA의여부에따른 BDNF 의방출거동을확인하기위하여제 실 험 시약및재료. 3차원구조물의주재료인 PLGA(Resomer RG 756, 락타이드 : 글라이콜라이드몰비 =75:25, Boehringer Ingelheim Chem. Co. Ltd., Germany) 는분자량 9 g/mole인것을사용하였으며, 메틸렌클로라이드 (methylene chloride, MC, Tedia Co. Inc., USA) 는 1급시약을정제하지않고그대로사용하였다. DBP 는 Urist 방법으로제조하였으며, 동결건조후액체질소내에서동결분쇄기 (Freezer Mill, SPEX 67, USA) 를이용하여입자의크기가 18 μm 이하가되도록동결분쇄하였고, HA(Fluka Co., USA) 는연쇄상구균으로부터분리된것을사용하였다. BDNF 방출을확인하기위하여 BDNF ELISA 키트 (R&D system, Inc., USA) 를사용하였으며, 방출을위한용출액으로인산염완충용액 (phosphate buffered saline, PBS, ph 7.4) 은 Gibco BRL(Grand Island, NY, USA) 에서구입하여사용하였다. 다공형성물질로사용한얼음입자는 18.2 MΩcm 의순수한증류수를사용하여입자의크기를조절하였다. BDNF 를함유한다공성 PLGA 지지체제조. 얼음입자추출법을이용하여 BDNF 를함유한생분해성다공성 PLGA 지지체의제조모식도를 Figure 1에나타내었다. 먼저얼음입자추출법을이용한다공성지지체의제조를위해액체질소에증류수를분무하여얻어진얼음입자들을선별하여직경 μm 인입자들을얻었다. PLGA.1 g을 MC.5 ml 에용해시킨후 BDNF 를함유한지지체를제조 Figure 1. Schematic diagram illustrating the fabrication process of BDNF-loaded PLGA scaffolds by ice-particle leaching method. Figure 2. Schematic diagram illustrating the fabrication process of BDNF-loaded DBP/HA/PLGA scaffolds. 폴리머, 제 32 권제 6 호, 8 년

3 신경재생을위한 BDNF 를함유한 PLGA 지지체의제조및방출 531 조된각지지체로부터생체외방출실험을실시하였다. 바이알에 ml 의 PBS 를넣고농도별 BDNF 를함유한지지체를넣은후, 37 의인큐베이터에서 7 rpm 의속도로교반시켜주면서정해진시간간격마다 1 ml 의 PBS 를회수하고동일한양의용출액을보충해주었다. 약물의방출량결정을위한분석시료는분석시까지빛을차단하여 4 에서보관하였고, 방출량은 ELISA 로측정하여방출경향을분석하였다. ELISA 는항원이항체와결합하여효소가접합된항체 가접합됨으로써새로이부착되어마치샌드위치같은형태를나타내는효소결합면역적방법으로서마이크로플레이트에서발색반응을시켜가시광선또는자외선등의특정파장을조사하여물질의흡광도를측정함으로써정량및정성분석하는장치이다. 면역반응에의해서생성된복합체에결합되지않은항체효소시약을제거하면 BDNF 의결합양에비례하여발색반응이이루어지는데이의색상강도를마이크로플레이트판독기 (Thermolex, Molecular 5 ng/scaffold ng/scaffold (a) (b) (c) (d) Figure 3. SEM photographs of different BDNF loaded scaffolds prepared by of ice-particle leaching method. (a) PLGA only, (b) DBP/PLGA, (c) HA/PLGA, and (d) DBP/HA/PLGA. Polymer(Korea), Vol. 32, No. 6, 8

4 532 김초민 ᆞ 김순희 ᆞ 오아영 ᆞ 김근아 ᆞ 이일우 ᆞ 이종문 ᆞ 강길선 Device Co.,USA) 로측청하여방출된 BDNF의양을측정하였다. 1,13,24,31 방출후지지체의모폴로지변화확인. 방출후의내부형태변화를 SEM 을통해관찰하였다. 방출실험후의지지체는 - 에서하루동안보관하고 5 mtorr, -8 에서동결ᆞ 건조시킨후, 샘플을샘플폴더에고정시켜플라즈마스퍼터를이용하여백금으로진공 ᆞ 증착하였다. 13,32 결과및토론 얼음입자추출법을이용한다공성지지체의제조. 조직공학적신경재생에응용하기위하여 BDNF 가함유된다공성 PLGA 지지체를얼음입자추출법에의하여제조하였다. 29 제조된지지체의외형적형태는실리콘몰드의빈공간과똑같은디스크형태로얻어졌으며, 여타의수축, 부풀림, 불규칙한크기의구멍및여타결함이없는것으로관찰되었다 상기의방법으로완성된지지체의모습은결과에서제시하지않았으나 DBP 및 HA 만을첨가한 PLGA 지지체는이들을포함하지않은 PLGA 지지체와외관상의차이를발견할수없었다. 본연구팀에서는이전의연구에서 DBP 및 HA 를혼합하여다공성지지체를제조하더라도물성의변화가크지않고, 원하는형태의다공성지지체를제조할수있음을확인하였다. 13, BDNF 를함유한 PLGA 지지체의다공분석. Figure 3은 5 및 ng의 BDNF를함유한지지체의내부다공형태를 SEM 사진으로확인한사진이며, 기공과기공사이의연결이양호하고, 대부분이열린셀구조를하고있는것으로나타났으며크게는 18 μm의크기에서대부분이 μm 사이로서영양분이원활히제공되어져신경세포의증식과성장을할수있는공간을지지해주며, 절단된신경의재생이용시신경과신경사이를연결하는유도관으로사용되었을때, 주변의신경세포및혈관세포들의부착, 이동및성장하기에좋은다공형태를가진것으로판단된다. 29 이연구를통해 BDNF 의농도가증가할수록다공의크기가작고닫혀있는형태를확인할수있었으며, DBP 및 HA 를첨가하더라도일정한크기의다공을가진지지체를제조할수있음을확인하였다. 또한, 상대적으로큰 PLGA 다공사이에는 DBP 및 HA 가잘혼합되어있는구조적특성을잘유지함을알수있었다. 13,36,37 PLGA 지지체에서의 BDNF 의함량에따른방출경향. PLGA는벌크하게분해가일어남으로인해약물의장기방출에유용하며, 분해물인락타이드와글리콜라이드단량체는독성이없어여러방출조절에이용된다. 2 이러한특성을가진 PLGA 를이용하여지지체를제조하였고여기에 5 및 ng 의 BDNF 를함유시켜 7 일동안의방출경향을 ELISA 를통해관찰하였다. 방출결과약간의초기방출이일어났지만, 시간이지남에따라각기다른약물함유량을가진지지체모두서방형의방출경향을확인할수있었고, 이는 PLGA 내부의 BDNF 가 PBS 의수용액에의하여서서히분해됨에따라 BDNF 가방출된것으로사료된다. 그리고 BDNF 의함유량에따라방출경향이다르며 BDNF 가 ng 이함유된지지체내에서방출된 BDNF 의양은 5 ng 이함유된지지체의양보다더많이방출됨을확인할수있었다 (Figures 4 and 5). PLGA 지지체에서의 DBP 및 HA 혼합에따른 BDNF 의방출경향. 얼음입자추출법으로제조된 PLGA 지지체와 DBP 및 HA를혼합 Release time(hours) Figure 4. Release behavior of BDNF from BDNF-loaded PLGA scaffolds with two different BDNF loading amounts(1 day at 37 ) Release time(days) Figure 5. Release behavior of BDNF from BDNF-loaded PLGA scaffolds with two different BDNF loading amounts(7 days at 37 ). 한 PLGA 지지체를단백질약물및싸이토카인의전달체로서의가능성을확인하고자모델성장인자로 BDNF 를지지체당 5 및 ng 씩로딩하여지지체에서의방출경향을확인하였다. BDNF 가함유된지지체의방출확인은 7 일동안수행하였으며방출기간동안지속적인 BDNF 의방출경향을확인할수있었다. Figures 6과 7에 1일째에서의 BDNF 의방출을나타낸것으로, BDNF 를함유한지지체는약간의초기방출이진행되었다. 5 ng 의 BDNF 를함유한지지체의경우약 17.3%(PLGA), 17.3%(DBP/ PLGA), 15.5%(HA/PLGA) 및 17.3%(DBP/HA/PLGA) 의방출량을보였고, ng 의 BDNF 를함유한지지체의경우 18.3%(PLGA), 19.5%(DBP/PLGA), 19.8%(HA/PLGA) 및 16.7%(DBP/HA/ PLGA) 의방출량을보였다. 이러한초기방출현상은용출액에 BDNF 가담지된지지체를담그게되면상대적으로친수성을띠게되는 BDNF 가소수성의지지체의표면보다물과결합하려는성질이강하기때문에그만큼물에빨리용해가진행되어초기방출을보일뿐아니 폴리머, 제 32 권제 6 호, 8 년

5 신경재생을위한 BDNF 를함유한 PLGA 지지체의제조및방출 Release time(hours) Figure 6. Release behavior of BDNF from 5 ng BDNF loaded scaffolds at 37 for 1 day Release time(days) Figure 8. Release behavior of BDNF from 5 ng BDNF loaded scaffolds at 37 for 7 days Release time(hours) Figure 7. Release behavior of BDNF from ng BDNF loaded scaffolds at 37 for 1 day Release time(days) Figure 9. Release behavior of BDNF from ng BDNF loaded scaffolds at 37 for 7 days. 라바깥부분에존재하던 BDNF 가용출액과만나초기에빠른방출을보인것으로판단된다. Figures 8 및 9는 7 일동안의 BDNF 의방출량을나타낸것으로각각의실험군에대한누적방출백분율을계산할때, 5 ng의 BDNF 를담지시킨경우약 3.1%(PLGA), 38.1%(DBP/PLGA), 42.2% (HA/PLGA), 35.3%(DBP/HA/PLGA) 였고 (Figure 7), ng의 BDNF 를담지시킨경우는 38.4%(PLGA), 39.5%(DBP/PLGA), 41.1%(HA/PLGA), 43.1%(DBP/HA/PLGA) 의방출을보였다 (Figure 8). 이실험을통해 BDNF 를 DBP 및 HA 가함유된 PLGA 지지체에혼합하여제조한경우, 보다안정적이고지속적인방출을확인할수있었다. 이는 DBP 및 HA 의영향으로약물의적절한분포에의해일정한속도로용출액을흡수하기때문으로사료된다. 또지지체에포함된 DBP 및 HA가용출액과접촉하면서용해가일어나게되고, 팽윤되어지지체내에외부와접촉할수있는채널을형성하기쉬워져, 지지체내부로침투하는물의양을증가시킴으로써 DBP 및 HA의용해와동시에약물이지지체밖으로빠져나오기용이하므로 DBP 및 HA를함유한지지체에서더높은방출거동을보인것으로사료된다. 이러한결과로부터약물전달체로사용하기위한지지체내에약물 을천연고분자와합성고분자를적절하게균일ᆞ혼합하여제조함으로써약물의방출기간을조절할수있음을확인하였다. 방출후지지체의모폴로지변화확인. 약물방출후의지지체의모폴로지변화를 Figure 에나타내었다. 방출후에는모든지지체의다공주변부위부터변화가일어난것을확인하였고, 약간의분해현상이일어나다공형태가상당부분사라진것을확인할수있었다. 고분자매트릭스내에서의약물의방출은농도차로인한확산에의해용출액이침투되거나고분자의분해에의하여생긴공간으로용출액이침투되어야진정한의미의방출이가능하며, 29 방출후 SEM 을통한지지체의모폴로지관찰결과다공표면에존재하는약물뿐만아니라지지체내부사이에용출액이침투하여지지체의내부에존재하는약물역시분해현상을통해방출이가능함을확인하였다. 또한 PLGA 만으로제조된지지체형태의지지체보다 DBP 및 HA를함유한 PLGA 지지체가더빠른분해를보였다. 이는 PLGA 의소수성표면을친수화시키는 DBP 의특성과,,21 HA 의물과쉽게결합하는특성으로 13 인해 DBP 및 HA 를포함하는 PLGA 지지체의내부의형태변화에있어서 DBP 및 HA 는내부의균열증가와용출액과접촉하는표면적을증가시킨것으로사료된다. 또한, 이러한붕괴현상이물의침투속도를가속화시키고빠른팽윤작용에의해약물의방출과지 Polymer(Korea), Vol. 32, No. 6, 8

6 534 김초민 ᆞ 김순희 ᆞ 오아영 ᆞ 김근아 ᆞ 이일우 ᆞ 이종문 ᆞ 강길선 5 ng/scaffold ng/scaffold (a) (b) (c) (d) Figure. SEM photographs of different BDNF loaded scaffolds after 7 days in PBS solution. (a) PLGA only, (b) DBP/ PLGA, (c) HA/PLGA, and (d) DBP/HA/PLGA. 지체의분해를촉진시킨것으로예상된다. 상기의결과를통해천연재료의첨가로인하여자체우수한물성을가지나생체외에서분해기간이약여섯달정도로알려진분자량 9 g/mole인 PLGA의분해속도를조절할수있을것으로보이고, 13 이는서방형의이식형약물전달체로서여러용도로사용할수있을것으로예상된다. 결론성장인자의서방형전달체로서가능성을확인하고자수행한본연구에서천연 / 합성고분자인 PLGA 와 DBP 및 HA 를이용하여지지체를제조한후신경성장인자인 BDNF 를다양한농도별로함유시켜이의방출거동을확인하고자하였다. 얼음입자추출법으로지지체를제조하였는데이는약물의서방형지지체의제조방법인염추출법에비 폴리머, 제 32 권제 6 호, 8 년

7 신경재생을위한 BDNF 를함유한 PLGA 지지체의제조및방출 535 해수용성단백질을함유시킬수있고지지체를제조하는데많은시간이걸리지않으며, 저온조건만잘유지하면제조방법도매우간단하다는장점을가지고있으며얼음입자를조절하여다공크기및다공도를조절함으로써수용성단백질의서방형지지체로서의가능성을확인하였다. 29 생물학적활성물질인 BDNF 는말초신경및중추신경계의발생및유지 ᆞ재생하기위해서꼭필요한물질로서, 1,38,39 이러한성장인자가지속적으로방출되도록하기위해 PLGA 지지체에혼합해서 BDNF 가순차방출되는지연적과정을 ELISA 를통해관찰하였다. 실험에쓰인모든지지체에서 BDNF 는 7 일동안지속적으로방출되었으나, DBP 및 HA 를함유하지않은지지체보다함유한지지체에서안정적인방출결과를보였고, 지속적인방출을확인하였다. 또한 BDNF 의함량별방출경향을확인한결과 BDNF 의함량이증가됨에따라방출량도증가됨을알수있었다. 하지만, BDNF 가소수성의지지체표면보다물과결합하려는성질이강하고바깥부분에존재하던 BDNF 가용출액과만나약간의초기버스트는존재하는것으로확인되었다. 이로써얼음입자추출법으로제조한 DBP 및 HA 을함유한 PLGA 지지체는 DBP 나 HA 의특성에의하여 PLGA 의분해속도를조절할수있고, 생리활성물질의서방형지지체로서의가능성을보여주었다. 또한, 신경재생에긍정적인영향을주는인자로보고되고있는 BDNF 를함유한 DBP/HA/PLGA 지지체는손상된중추신경및말초신경의재생에있어기능성지지체로서의충분한역할을수행할것으로사료된다. 현재본연구를바탕으로생체내에서 3차원적인신경재생을위한신경유도관을제조중이다. 감사의글 : 본연구는세포응용연구사업단 (SC41) 의지원으로이루어졌으므로이에감사드립니다. 참고문헌 1. S. K. Kim, S. H. Kim, H. R. Lee, M. H. Cho, M. S. Kim, G. Khang, and H. B. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 2, 388 (5). 2. G. Khang, M. S. Kim, B. H. Min, I. W Lee, J. M. Rhee, and H. B. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 3, 376 (6). 3. S. Petit-Zeman, Nature Biotech., 19, 1 (1). 4. G. Khang, S. J. Lee, C. W. Han, J. M. Rhee, and H. B. Lee, Adv. Exp. Med. Biology, 657, 235 (3). 5. H. S. Choi, S. A. Seo, G. Khang, J. M. Rhee, and H. B. Lee, Int. J. Pharm., 234, 195 (2). 6. Y. K. Ko, S. H. Kim, H. J. Ha, M. S. Kim, C. W. Han, J. M. Rhee, Y. Son, H. B. Lee, and G. Khang, Tissue Eng. Regen. Med., 4, 67 (7). 7. Y. L. Cui, A. D. Qi, W. G. Liu, X. H. Wang, H. Wang, D. M. Ma, and K. D. Yao, Biomaterials, 24, 3859 (3). 8. S. M. Kim, S. H. Kim, C. M. Kim, A. Y. Oh, I. W. Lee, M. S. Kim, J. M. Rhee, G. Khang, and H. B. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 4, 583 (7). 9. S. Mekki-Dauriac, E. Agius, P. Kan, and P. Cochard, Development, 129, 5117 (2).. J. See, P. Mamontov, K. Ahn, L. Wine-Lee, E. B. 3rd Crenshaw, and J. B. Grinspan, Mol. Cell. Neurosci., 35, 171 (7). 11. D. M. Panchision, J. M. Pickel, L. Studer, and S. H. Lee, Genes Dev., 15, 94 (1). 12. J. B. Grinspan, E. Edell, D. F. Carpio, J. S. Beesley, L. Lavy, D. Pleasure, and J. A. Golden. J. Neurobiol., 43, 1 (). 13. Y. K. Ko, S. H. Kim, J. S. Jeong, J. S. Park, J. Y. Lim, M. S. Kim, H. B. Lee, and G. Khang, Polymer(Korea), 31, 55 (7). 14. G. Prestwich, D. Marecak, J. Marecek, K. Vercruysse, and M. Ziebell, J. Control. Release, 53, 93 (1998). 15. S. N. Park, H. J. Lee, K. H. Lee, and H. Seo, Biomaterials, 24, 1631 (3). 16. S. J. Kim, C. K. Lee, Y. M. Lee, I. Y. Kim, and S. I. Kim, Reat. Func. Polymer, 55, 291 (3). 17. S. Cai, Y. Liu, X. Z. Shu, and G. D. Prestwich, Biomaterials, 26, 654 (5). 18. H. S. Yoo, E. A. Lee, J. J. Yoon, and T. G. Park, Biomaterials, 26, 1925 (5). 19. V. Zacchi, C. Soranzo, R. Cortivo, M. Radice, P. Brun, and G. H. Abatangelo, Biomed. Mater. Res., 4, 187 (1998).. Y. K. Ko, S. H. Kim, J. S. Jeong, H J. Ha, S. J. Yoon, J. M. Rhee, M. S. Kim, H. B. Lee, and G. Khang, Polymer(Korea), 31, 14 (7). 21. S. M. Kim, S. H. Kim, C. M. Kim, A. Y. Oh, M. S. Kim, G. Khang, J. M. Rhee, and H. B. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 4, 179 (7). 22. S. M. Kim, S. H. Kim, C. M. Kim, A. Y. Oh, G. A. Kim, I. W. Lee, J. M. Rhee, G. Khang, M. S. Kim, and H. B. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 4, 589 (7). 23. M. H. Cho, S. K. Kim, H. Hyun, Y. N. Shin, M. S. Kim, B. Lee, J. S. Lee, G. Khang, H. B. Lee, and I. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 3, 46 (6). 24. E. K. Jeon, H. J. Whang, G. Khang, I. Lee, J. M. Rhee, and H. B. Lee, Polymer(Korea), 25, 893 (1). 25. E. Vögelin, J. M. Baker, J. Gates, V. Dixit, M. A. Constantinescu, and N. F. Jones, Exp. Neurol., 199, 348 (6). 26. S. M. Walker, V. A. Mitchell, D. M. White, R. A. Rush, and A. W. Duggan, Brain Res., 899, 24 (1). 27. J. M. Pean, M. C. Venier-Julienne, F. Boury, P. Menei, B. Denizot, and J. P. Benoit, J. Control. Release, 56, 175 (1998). 28. R. E. Eliaz and J. Kost, J. Biomed. Mater. Res., 5, 388 (). Polymer(Korea), Vol. 32, No. 6, 8

8 536 김초민 ᆞ 김순희 ᆞ 오아영 ᆞ 김근아 ᆞ 이일우 ᆞ 이종문 ᆞ 강길선 29. K. D. Hong, K. S. Su, S. H. Kim, S. K. Kim, G. Khang, H. S. Shin, M. S. Kim, and H. B. Lee, Polymer(Korea), 29, 282 (5). 3. J. W. Jang, B. Lee, C. W. Han, M. S. Kim, S. H. Cho, H. B. Lee, and G. Khang, Polymer(Korea), 28, 382 (4). 31. M. H. Cho, S. K. Kim, H. Hoon, Y. N. Shin, M. S. Kim, B. Lee, J. S. Lee, G. Khang, H. B. Lee, and I. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 3, 46 (6). 32. G. D. Hong, G. S. Seo, S. H. Kim, S. K. Kim, G. Khang, H. S. Shin, M. S. Kim, and H. B. Lee, Polymer(Korea), 29, 282 (5). 33. G. Khang, C. S. Park, J. M. Rhee, S. J. Lee, Y. M. Lee, I. Lee, M. K. Choi, and H. B. Lee, Korea Polym. J., 9, 267 (1). 34. G. Khang, P. Shin, I. Kim, B. Lee, S. J. Lee, Y. M. Lee, H. B. Lee, and I. Lee, Macromol. Res.,, 158 (2). 35. J. W. Jang, B. Lee, C. W. Han, I. Lee, H. B. Lee, and G. Khang, Polymer(Korea), 27, 226 (3). 36. G. Khang, J. H. Jeon, J. C. Cho, and H. B. Lee, Polymer (Korea), 23, 471 (1999). 37. M. H. Cho, S. K. Kim, H. Hoon, Y. N. Shin, M. S. Kim, B. Lee, J. S. Lee, G. Khang, H. B. Lee, and I. Lee, Tissue Eng. Regen. Med., 3, 46 (6). 38. S. U. Kim, Tissue Eng. Regen. Med., 1, 33 (4). 39. S. U. Kim, J. H. Bang, and I. H. Park, Tissue Eng. Regen. Med., 2, 38 (5). 폴리머, 제 32 권제 6 호, 8 년

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