26(6)04신선미 hwp

Transcription

1 동의생리병리학회지 제 26권 6호 Korean J. Oriental Physiology & Pathology 26(6): , 2012 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 고 흥 김기태 신선미* 세명대학교 한의과대학 내과학교실 Study on Validity of Using Injinho-tang in Non Alcohoic Fatty Liver Disease Heung Ko, Ki Tae Kim, Seon Mi Shin* Department of Internal Medicine, College of Oriental Medicine, Semyung University Now a days, number of non alcoholic fatty liver patients are increasing more rapidly compare to past rate, and the average age of patients is getting younger, but there are no appropriate therapeutics in non alcoholic fatty liver disease. This study was aimed to analyze relationship between non alcoholic fatty liver disease and Injinho-tang. The papers were collected and analysed from domestic and international journals. The effects of Injinho-tang and constituent-herb were researched. Non-alcoholic fatty liver disease was induced complex causes of the metabolic syndrome. Medications that can be used in non-alcoholic fatty liver disease, it should be have many effects such as anti-hepatic fibrosis, hepatocyte protection, liver cancer inhibitory effect, inflammatory cytokine regulation, improving hyperlipidemia, weight control, decrease the toxicity of the drug, antioxidant. Injinho-tang (Artemisia capillaris Thunb, Gardenia fructus, Rhei rhizome) has been widely used in disease that causes jaundice and liver biliary disease. Drugs for standardization of Injinho-tang index components(6,7-dimethylesculetin, geniposide, rhein) have been presented. And Injinho-tang has been proven reliability in the administration of single dose toxicity. Also clinical stability in the administration of four years was reported. Injinho-tang has been reported some effects which anti-hepatic fibrosis, hepatocyte protection, liver cancer inhibitor, inflammatory cytokine regulation, improving hyperlipidemia, weight control, decrease the toxicity of the drug, and antioxidant. Therefore, Injinho-tang can be used in Non alcoholic fatty liver disease without Syndrome Differentiation. Key words : Injinho-tang, Inchin-ko-to, Yin Chen Hao Tang, Non alcoholic fatty liver disease 서 론 지방간이란 간에 지방이 과도하게 축적되어 발생되는 질환 으로 지방섭취가 많거나, 지방의 간 내 축적 및 합성 증가 또는 지방이 간에서 배출되는 양이 감소하여 정상적인 지방대사가 이 루어지지 못하고 지방이 전체 간 무게의 5% 이상을 차지하게 되 는 경우를 말한다 1). 지방간은 치명적인 질환은 아니지만 만성적 인 측면에서 볼 때는 간 섬유화를 유발하며 심하면 간경변증까 지 초래할 수 있어서 예방적 관리의 중요성이 증대되고 있다 2). 최근 비알콜성 지방간이 임상적으로 중요하게 대두되고 있 는데. 이는 비알콜성 지방간의 유병율이 급격하게 증가하였기 때 * 교신저자 : 신선미, 충북 제천시 신월동 산 세명대학교 부속한방병원 bunggujy21@hanmail.net, Tel : 접수 : 2012/11/08 수정 : 2012/12/12 채택 : 2012/12/18 문이다. 직장인에서 지방간 발생은 20년 전보다 3배 이상 증가하 였고, 특히 비알콜성 지방간 발생률이 30%에 육박하였다. 비알 콜성 지방간은 의미 있는 음주력이 없는 환자에서 병리학적으로 알콜성 지방간과 유사한 소견을 보이는 질환으로, 증상이 거의 없어 우연히 시행한 혈액검사에서 간기능 이상으로 발견되는 경 우가 대부분이다. 단순 지방증(steatosis)과 염증이나 섬유화가 진 행된 지방간염, 간경변증의 간질환을 모두 포함한다 3). 비알콜성 지방간은 임상증상이 무증상에 간부전까지 다양하 고 진단에서도 임상증상보다는 혈액검사, 영상진단을 통하여 질 병의 호전도를 판단할 수 있어 2), 임상증상을 중심으로 만들어지 는 변증보다는 현대적인 진단을 통하여 전방전치로 사용할 수 있는 약물과 처방이 필요하다. 茵 蔯 蒿 湯 은 張 仲 景 이 傷 寒 論 에서 제시한 이후, 경험적으로 황달을 발생하는 질환으로 간염, 담낭염, 담도폐색성 황달, 간경 변증에서 응용되어 왔다 4-6). 이에 비알콜성 지방간에 茵 蔯 蒿 湯 을

2 고 흥 김기태 신선미 專 方 專 治 처방으로 활용 가능한지를 검토하기 위하여, 茵 蔯 蒿 湯 과 구성약물을 중심으로 비알콜성 지방간 및 비알콜성 지방간 발병에 영향을 미치는 인자들에 대한 연구 결과를 분석하여 보 고하는 바이다. 본 론 1. 연구대상 및 방법 茵 蔯 蒿 湯 과 관련된 논문을 검색하고, 비알콜성 지방간의 발 생과 기전과 연관된 茵 蔯 蒿 湯 의 효능을 검토하였다. 2. 자료수집 및 검색어 자료 수집은 한국교육학술정보원(http// 한국학술정보(http//kiss.kstudy.com), 과학기술정보통합서비스 (http// 전통의학정보포털(http//oasis.kiom.re.kr), 한국전통지식포털(http// Pubmed ( Google scholar ( google.co.kr) 등 국내와 국외 학술검색 사이트를 이용하였고, 검 색어는 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯, Injinho-tang, Inchinkoto, TJ-135, Yin Chen Gao Tang 등을 사용하였다(Table 1). 茵 蔯 蒿 湯 구 성 약물에 대한 문헌적 고찰은 한국교육학술정보원 (http// 한국학술정보(http//kiss.kstudy.com), 과학기술정보통합서비스(http// 전통의학정보포 털(http//oasis.kiom.re.kr), 한국전통지식포털(http// 국내 사이트를 통하여 검색하였다. Table 1. Electronic bibliographic databases and search terms for Injinho-tang. Electronic bibliographic databases Search terms Search paper 한국교육학술정보원 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯 35 한국학술정보 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯 13 과학기술정보통합서비스 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯 14 전통의학정보포털 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯 17 한국전통지식포털 茵 蔯 蒿 湯, 茵 陳 蒿 湯 26 Pubmed Injinho-tang, Inchinkoto, TJ-135, 44 Yin Chen Gao Tang Google scholar Injinho-tang, Inchinkoto, TJ-135, Yin Chen Gao Tang 분석 대상 선정 茵 蔯 蒿 湯 관련 분석 대상 논문은 인터넷 검색을 통해 원문 과 초록을 구할 수 있는 1980년대 이후에 발표된 논문을 대상으 로 하였다. 문헌 연구 논문, 학위논문과 학술지 논문이 중복되는 경우, 임상 논문 등을 제외한 실험 연구 및 임상 연구 논문 95편 을 선정하였다(Fig. 1). 개별 약물에 관한 국내 실험 연구 논문은 약물 개별적인 문헌 연구, 임상 논문 및 개개 약물의 독성이나 성분을 제외한 개별 약물의 실험적 효과 연구 중심으로 하여 1980년 이후 발표된 茵 蔯 관련 논문 64편, 大 黃 관련 논문 33편, 梔 子 관련 논문 28편을 선정하였다. Fig. 1. Paper searching process. 고 찰 1. 비알콜성 지방간과 약물개발 비알콜성 지방간은 1980년대부터 비만한 여성 환자에서 음 주를 하지 않음에도 조직학적 소견에서 알콜성 간염 소견을 나 타내는 새로운 증후군으로 알려지게 되었다. 비알콜성 지방간을 가지고 있는 경우는 대개 대사증후군을 동반하는데 비만, 당뇨, 고지혈증, 고혈압을 동반하고 있다. 하지만 이외에도 갑작스런 체중감소, 비경구 영양공급, 회장절제술에서도 발생하고 약물로 Tamoxifen, Amiodarone, Petrochemical에 노출된 경우에서도 발 생하는 것으로 알려져 있다 7). 비알콜성 지방간 환자의 임상증상은 특별한 것이 없고, 대개 50-60대 사이에서 주로 발생하며 일부에서 피로, 우상복부 불편 감을 호소하지만 대부분은 무증상이다. 대다수의 환자가 정기검 사에서 우연히 간비대, AST ALT 상승(대개 AST/ALT ratio <1.0)으로 발견하게 되며 중심형 비만과 II형 당뇨병이 동반되어 있는 경우가 많은 것으로 알려져 있다 8). 최근 소규모 임상연구에 서 소아 비알콜성 지방간 질환이 점차 증가하고 있으며 49명의 비만아동중 지방간소견을 나타내는 아이는 26명으로 53.1%이었 고 이중 ALT가 증가된 환아가 17명으로 34.7%이었다. 비알콜성 지방간염을 가진 아동은 adiponectin 수치가 낮고 인슐린 저항성 이 높은 것으로 나타났다. 초음파 진단은 비알콜성 지방간에서 hyperechoic texture로 나타나는데 지방간염과 간경변증 모두에서 민감하고 유용한 진 단기기이다. 알콜성 간염과 바이러스성 간염과 같이 ALT가 상승 될 수 있는 다른 요인은 현병력과 과거력 가족력을 통하여 배제 하여야 하고, 인슐린 저항성이나 혈당검사가 시행되어야 한다. 경과 관찰에 있어서 섬유화로 진행되는 것을 평가하는 진단지표 가 필요한데, 아직까지는 이에 대한 명확한 방법은 제시되지 않 았다. 최근 Fibro Scan을 이용하여 섬유화 정도를 평가하려는 시 도가 이루어지고 있지만 아직까지는 간생검이 비알콜성 지방간 을 진단하고 진행 경과를 확인할 수 있는 유일한 방법이다. 비알콜성 지방간은 염증이 동반되지 않는 경우는 양호한 예 후를 보이고, 염증과 섬유화가 동반하면 지방간염, 간경변, 간부전 그리고 간암 등으로 진행할 수 있다 3). 건강검진에서 대장선종의

3 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 발병은 비알콜성 지방간의 유무와 특별한 관련성은 없지만, 비알 콜성 지방간과 함께 병발하였을 때는 대장선종의 개수가 증가하 는 경향을 나타내었고 부위는 근위부 대장에 주로 분포하였다. 비알콜성 지방간 환자의 예후를 결정하는 중요한 지표로 언 급되는 것은 인슐린저항성, 고혈압, alanine aminotransferase 상 승이다. 비만이 아니라 하더라도 지방간을 동반한 사람은 중성지 방이나 HDL 콜레스테롤의 장애가 많고, 혈당이 높으며, 염증성 지표가 높게 나타난다. 따라서 실제 임상에서 비알콜성지방간으 로 진단된 사람은 현재 비만이 아니더라도 과거 성인기 초기 체 중을 파악하여 현재 체중에서 4% 정도의 감량을 하면 치료적 도 움을 받을 수 있다 9). 지방간의 발병률은 체중이 높을수록, BMI에 따른 비만도가 높은 군일수록, 체지방율이 높을수록, 허리둘레와 신장의 비가 높을수록 높게 나타나고 지방간을 가진 경우는 비 만지표, 간기능 검사치, 고지혈증지표에 이상이 있다. 건강검진 자를 대상으로 한 후향적 조사에서 여성의 유리 T4 저하, 저장철 의 고갈 및 빈혈이 비알콜성 지방간과 관련성이 높았다 10). 성인 남성을 대상으로 한 조사에서, 지방세포에서 주로 분비되는 adipokine으로 음식물섭취 억제와 연관된 leptin은 대사 장애를 유발하여 간접적으로 비알콜성 지방간에 관여하지만 10) 간섬유화 와 연관성은 없었고, 인슐린 감수성 향상과 연관된 Adiponectin, Resistin은 상관성이 없었다 10). 현재까지 비알콜성 지방간의 발생기전으로 알려진 것은 산 화 스트레스, 미토콘드리아 기능이상, 미토콘드리아 지방산 대사 이상, 간에서 지방산 대사 증가, 간 중성지방 대사와 축적 증가, 비정상적인 사이토카인, 인슐린 저항성, 변형된 methionine/same/homocysteine가 언급되고 있다 7,8). 비알콜성 지방간의 약물 치료는 아직 확립되지 않았다. 현재 시도되는 방법으로 비만 환자에서는 10%의 체중감소를 권장하 는데 체중감소가 산화 스트레스를 감소시키기 때문인 것으로 보 인다 11). 3개월 동안의 지속적 운동과 체중감소는 혈액검사 상 간 효소 수치를 호전시키고 조직학적 소견을 향상시킨다 12). 20대 중 반 이후를 지나면 노화의 과정으로 점차 체중이 중가하며 특히 중년 이후에는 체질량지수가 25 kg/m2미만이어도 대부분은 복부 내장지방을 포함한 체지방량이 증가한다. 또한 비만하지 않은 사 람에 있어서도 인슐린 저항성은 꾸준히 증가하는 경향을 나타내 기 때문에 비만과 무관하게 체중감소는 의미 있는 치료 방법이 다 9). 산화적 스트레스가 발병기전에서 중요하게 여겨지면서 항 산화제로 Vitamine E가 가장 많이 연구되고 있는데, Vitamine E 는 전 염증성 사이토카인을 조절하고 간의 섬유화와 콜라겐 합 성을 억제하는 것으로 알려져 있고 13), 항사이토카인 요법으로는 TNF-α를 감소시켜 전 염증성 사이토카인의 합성을 억제하는 잠 재적인 치료제 개발이 시도되고 있다 14). 인슐린 저항성을 개선시 키는 방법으로 metformin, thiazolidenediones를 투여하기도 하 지만, 인슐린 자극제가 간에서 중성지방과 adiponectin 축적을 유발하여 체중을 증가시킬수 있어서 그 유효성에 대해서는 논란 의 여지가 있다 7,8). 이외에도 식이조절로 SAMe 함량을 높이고 증가되어 있는 SAH와 homocysteine을 감소시키는 것이 시도되 었다 7,8). 최근에는 엔도카나비노이드의 리셉터로 CB1을 억제하는 경우 식욕을 저하시켜 비만을 치료하는 것으로 rimonabant가 개 발되었고 설치류에서 식욕저하와 체중감소효과가 확인되었다 15). 엔도카나비노이드의 영향을 받는 뇌(식욕욕구), 간(지방간, 인슐 린 저항성, 혈중지질변화), 췌장(II형 당뇨병) 및 지방조직(비만) 에 엔도카나비노이드 리셉터 길항제가 비알콜성 지방간의 치료 제로 연구되고 있다 15). Table 2. Current treatment of NAFLD/NASH explored by RCTs 3,7,8) Weight Control 9,11,12) Calorie restriction Exercise Exercise + Diet Exercise + Diet + Drug Drug Therapy 7,8,13,14,15) Insulin resistance improving agent : metformin, thiazoidinediones Hyperlipidemia improver : Statins, Hydrophilic bile salt : UDCA Antioxidants : Vit. E, Vit. C Anti- TNF-α : pentoxifylline Antihypertensive drugs : sartanics Endocannabinoid receptor antagonists : rimonabant L-Carnitine 이와 같이 비알콜성지방간에 대하여 현재까지 여러 가지 치 료법이 제시되었으나 결정적인 치료법은 제시되지 못하고 있다. 체중을 감소시키는 것이 가장 안전하지만 대부분의 환자가 다양 한 원인으로 체중감소에 실패하는 것으로 알려져 있다. 따라서 비알콜성 지방간 치료를 위하여 식이조절 등 생활습관을 통한 접근 뿐만 아니라, 지방간염으로 진행되면서 발생할수 있는 간 손상, 간 섬유화 및 간암 발생을 억제하면서, 비알콜성 지방간의 진행을 차단할 수 있는 항산화 효과, 인슐린저항성 개선, 염증성 사이토카인 조절효과 및 지질의 과산화를 예방할 수 있는 복합 효능을 가진 약물개발이 필요하다. Table 3. The required effect in drug treatment of non alcoholic fatty liver disease 7,8,10) Hepatoprotective, Liver fibrosis suppression, Inhibition of liver cancer 2. 茵 蔯 蒿 湯 과 구성약물의 약리작용 + Weight Control Antioxidant activity Inflammatory cytokines adjustment Lipid metabolism improvement Insulin resistance improvement 茵 蔯 蒿 湯 은 茵 蔯, 大 黃, 梔 子 로 구성되었으며, AD 200년경 張 仲 景 이 최초로 傷 寒 七 八 日, 身 黃 而 梔 子 色, 小 便 不 利, 腹 微 滿 者, 茵 蔯 蒿 湯 主 之 라 하였다. 東 醫 寶 鑑 에서는 傷 寒 太 陰 形 證 과 太 陰 病 發 黃 에 사용 하였는데, 주로 급성 바이러스성 간염, 만성 간염, 간경화, 담낭 및 담도질환 등에서 볼 수 있는 있는 황달에 활용되어 왔다. 임상보고에서는 간염, 간경변증, 담도폐색, 담도암 으로 인한 담도폐색, 담낭염에서 치료 경험례가 보고되었다 3-6). 茵 蔯 蒿 湯 을 한국식품안전청 의약품의 독성기준에 근거한 단 회투여 독성을 관찰한 결과, 일부에서 泄 瀉 와 軟 便 등 배변양상 의 변화를 보였지만 그 외 체중과 주요 장기조직 검사소견은 모 두 정상소견을 나타냈고, LD50은 암수 랫트에서 2000 mg/kg이상 으로 나타났다. 茵 蔯 蒿 湯 을 煎 湯 液 으로 한 경우 보존기간은 10일

4 고 흥 김기태 신선미 까지는 효능이 인정되나 13일 부터는 유의성이 없어져 茵 蔯 蒿 湯 煎 湯 液 처방 시에는 10일 이하로 처방하는 것이 타당한 것으로 조사되었다. 茵 蔯 蒿 湯 을 장기 복용한 임상례로, 선천성 담도폐색 으로 수술을 받은 소아 간기능 장애 환자들에서 茵 蔯 蒿 湯 을 2~4년 동안 투여하여 간기능 검사 수치가 안정화된 것 5) 으로 보 아 茵 蔯 蒿 湯 은 장기 투여할 수 있는 안전한 처방으로 추측된다. 茵 蔯 蒿 湯 은 간세포보호와 간섬유화 억제와 연관된 실험보고 가 많은데, 주로 사염화탄소를 이용한 급성 간세포 손상모델에서 간세포 보호 효과를 나타내었고, 장기간 사염화탄소에 노출되면 유발되는 간 섬유화증이나 간경변증으로의 진행을 茵 蔯 蒿 湯 이 억 제하는 것으로 보고되었다. 또한 사염화탄소를 이용한 간염 병태 모텔에서 상승된 AST, ALT, bilirubin을 유의성 있게 감소시켰다. 사염화탄소를 10주 이상 투여한 간경변증 병태모델에서 20 일 간 茵 蔯 蒿 湯 을 투여하여 간기능 관련 수치들이 유의하게 감 소한 것을 확인하였는데, 茵 蔯 蒿 湯 에 熊 膽 을 가미한 군에서 茵 蔯 蒿 湯 만 투여한 것보다 좀 더 의미있는 AST, ALP GGT, ALT, LDH, T-Bilirubin 수치의 감소를 나타내었다 16,17). 小 柴 胡 湯 과 茵 蔯 蒿 湯 을 합방한 경우도 사염화탄소로 유발된 병태모델에서 AST, ALT와 조직학적 소견을 호전시켰고 18), 柴 胡 疏 肝 湯 과 茵 蔯 蒿 湯 을 합방하여 사용한 경우에서는 AST, ALT, ALP, Triglyceride, LDH가 호전되고 SOD활성을 억제하는 것으로 나 타지만, D-galactosamine으로 유발시킨 경우에서는 간세포보호 효과가 나타나지 않았다 19). 사염화탄소 유발 간손상 모델에 茵 蔯 蒿 湯 을 藥 鍼 으로 肝 兪 穴 에 주입한 경우와 경구 투여한 것을 비교한 결과 두군에서 모 두 AST, ALT, ALP, LDH, bilirubin 수치와 조직학적 소견이 호 전되었고, 약침을 사용한 경우가 경구 투여보다 효과가 높게 나 타났다 20). Acetaminophen으로 유발시킨 급성 간손상에서 茵 蔯 을 단독 투여한 군에서는 간기능 개선 효과가 미약했고, 茵 蔯 蒿 湯 원방을 투여한 군에서 AST, ALT, r-gtp, ALP, LDH, bilirubin 수치를 개선하였다 21). 최근에는 茵 蔯 蒿 湯 의 주요성분을 중심으로 제형의 표준화, 약물 역동학적으로 약물의 주요 성분을 찾아내고 이를 통하여 약효를 유지하며 약물의 표준화를 만들기 위한 연구가 진행되었 다. 茵 蔯 蒿 湯 의 지표성분으로 언급되는 6,7-Dimethylesculetin, geniposide, rhein을 간 손상 랫트에서 조합 구성을 달리하여 투 여한 경우, 세 가지 성분이 모두 포함된 조합에서 혈장 약물 농 도가 가장 높고 제거율은 느린 것으로 나타났다 22). 각 약물의 주 요 성분을 적절하게 조합하였을 때 기존 처방을 투여 했을 때와 동일한 효과를 나타낸다면, 해당 처방은 기존 한약의 제형을 벗 어나 새로운 약물 제형으로 변화를 꾀할수 있을 것이다. 기존 연 구를 토대로 향후 茵 蔯 蒿 湯 의 제형을 표준화시킬 때 표준 성분 으로 6,7-Dimethylesculetin, geniposide, rhein의 함량을 기준으 로 설정할 수 있을 것으로 보인다. 담도결찰로 유발시킨 간손상 병태모델에서 단백 영동검사를 통하여 茵 蔯 蒿 湯 이 영향을 미치는 단백질을 검증했는데, 세포골 격과 연관된 plectin-1, 지질대사와 연관된 low-density lipoprotein receptor와 관련된 protein 2 precursor(glycoprotein 3 30), apolipoprotein A-I procursor(apoa-i)에 주로 작용하는 것 으로 나타났다 23). 또한 MCP-1과 TIMP-1을 유의하게 down-regulation 하여 apoptosis를 억제하고 지질 대사를 조정하 는 기전을 통해 간섬유화 치유효과를 나타내었다 23). UPLC/MS fingerprints를 이용하여 茵 蔯 蒿 湯 에서 45개의 화합물을 검출하 였고 茵 蔯 蒿 湯 을 투여한 랫트의 혈장에서는 21개의 화합물을 검 출하였는데, 21중 19개는 茵 蔯 蒿 湯 본래의 화합물에서 유래한 것 이고 2개는 茵 蔯 蒿 湯 화합물이 대사된 것 이었다. 또한 茵 蔯 蒿 湯 을 투여한 랫트의 소변에서도 茵 蔯 蒿 湯 의 구성성분인 scoparone, capillarisin, rhein, emodin이 동시에 검출되었다. HPLC-UV를 이용하여 茵 蔯 蒿 湯 제형의 15가지의 fingerprint peaks를 확인하였는데, 산지가 달라도 99.9% 일치율을 나타내어 서 제품의 동질성을 개발하는데 이용될 수 있을 것이다. 랫트를 이용한 간절제술 실험에서 茵 蔯 蒿 湯 의 전처치가 간 절제술 후의 생존율을 향상시키고 간 절제 후 남은 간조직의 재 생과 회복을 증진시키는 것으로 나타났다. 茵 蔯 蒿 湯 을 전처지하 고 간절제술을 시행한 Wista rat에서 생존율이 67%로 높고 체중 증가가 빨랐으며 AST, ALT, T-bilirubin, bile acid 수치가 빠르게 호전되었다. 70% 절제 후 높아지는 염증성 사이토카인, AST, NO, nitrotyrosine이 茵 蔯 蒿 湯 을 투여한 군에서 의미 있게 감소 하였고 항산화 유전자의 발현이 증가하였다. 또 다른 연구에 의 하면 茵 蔯 蒿 湯 투여군에서 간절제술 후 24시간 혈청 빌리루빈 수치, 72시간과 168시간 혈청 간효소 수치가 낮게 조절되었고 일 주일 생존율이 높았는데, 간 절제술 이후 간효소치의 호전보다는 급성기 담즙형성과 분비에 의미 있는 효과가 있었다. 임상연구에 서도 동일한 결과가 보고되었는데, 수술 전 茵 蔯 蒿 湯 을 투여한 군은 대조군에 비하여 빌리루빈에서는 차이가 없지만 간접형 빌 리루빈의 수치가 현저하게 낮아, 간절제술을 받는 환자에서 담증 정체를 예방하고 치료하는데 효과적 이었다 24). 간암과 관련하여 in vivo 및 in vitro 실험에서 茵 蔯 蒿 湯 은 암의 발생을 억제하거나 지연시키고 암세포의 사멸을 유도하였 다. 茵 蔯 蒿 湯 은 인체 간암세포 HepG2 세포의 생존율을 감소시키 는데 주로 mitochondrial pathway를 통한 apoptosis를 유도하고 MAP kinase 활성을 조절하여 apoptosis에 영향을 주는 것으로 나타났다 25). N-nitrosodiethylamine(NDEA)와 사염화탄소로 간암 을 유발시킨 백서에게 茵 蔯 蒿 湯 을 8주 동안 투여한 결과, superoxide dismutase(sod)의 활성이 증가되고 catalse활성은 감 소하였으며, P53의 면역 반응율을 감소시켜 간암을 억제하거나 지연시키는 작용을 하였다 26). Diethylnitrosamine과 사염화탄소로 유발시킨 간암과 간경변증 병태모델에서도 茵 蔯 蒿 湯 은 상승된 AST, ALT, ALP, LDH, AFP, SOD를 감소시키고 p53 단백에 의 한 면역 반응을 감소시켜 간암 발생을 억제하거나 지연하였다 27). 담도결찰을 통해 백서에 간손상을 유발한 후, 茵 蔯 蒿 湯 약침 을 기문혈에 시술한 결과 농도의존적으로 AST, ALT 수치를 감 소시켰다. 조직학적으로 대조군에 비하여 간섬유화의 진행이 완 만해지고, 세담관의 확장 팽창 및 담관강의 축소가 나타나지 않 았고, 담관주위의 염증세포와 백혈구가 감소되는 양상을 나타내 었다. 또한 간의 α-sma(α-smooth muscle actin) 단백질과

5 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 hydroxyproline, TBARS(thiobarbituric acid reactive subsrances) 수치를 감소시켜 콜라겐 수치를 감소시켰다 28). 담관 결찰 후 茵 蔯 蒿 湯 을 경구 투여한 경우에서도 혈청 AST, ALT 수치를 저하 되었고, Azan염색으로 확인한 α-sma와 TGF-β1의 간조직 내 발 현이 감소되었는데, 이는 茵 蔯 蒿 湯 이 간성상세포의 활성을 억제 하여 간섬유화를 억제한 것으로 보인다. 임상적으로 담관암으로 인한 담관 폐쇄 환자들에게 茵 蔯 蒿 湯 을 투여한 경우에서도 총 빌 리루빈 수치가 감소하였으며, 다제내성 관련 단백질(multidrug resistance associated protein: MRP)을 증가시켰다 29). 茵 蔯 蒿 湯 이 담즙정체를 개선하고, 성상세포를 억제하여 간 섬유화를 억제하고 TNF-α를 억제하여 간손상을 개선하는 것은 geniposide가 장내세균에 의해 대사된 genipin의 효과로 추정된 다. Genipin이 관여하는 기전은 MRP와 관련이 높은데 canalicular membrane vesicles(cmvs)의 MRP2의 단백량을 증가시키는 수 준에서의 작용이다. Genipin은 담즙산에 비의존적인 간세포의 분비 용량을 증강시키는데, 주로 모세담관에서의 토세포작용을 자극하고 MRP2를 부착을 강화시키는데 기인한다 30). 또한 genipin은 사염화탄소로 유발한 간섬유화 랫트에서 성상세포를 억제하여 간섬유화를 막는 주요성분으로 제안되었다. GalN/LPS 를 주입한 mice에서 genipin을 투여한 군에서는 24시간동안 15 마리 중 8마리가 생존했고 대조군은 12시간 안에 모두 사망하였 다. 혈청 AST, ALT, TNF-α는 감소하였고 IL-6와 IL-1β에서는 변 화가 없었다. 따라서 급성 간부전 병태모델에서 genipin은 TNFα를 억제해서 급성 간손상을 개선하는 것으로 보인다. RAW 264.7세포를 이용하여 茵 蔯 蒿 湯 을 전처리하고 LPS로 염증을 유발시킨 경우, 茵 蔯 蒿 湯 은 LPS로 유도되는 NO(nitric oxide), PGE2의 생성량을 억제하였고 inos(inducible nitric oxide synthase), COX-2의 발현을 저해하였으며, 염증성 사이토 카인 IL-1β, TNF-α, IL-6, MCP-1을 억제하였다. 茵 蔯 蒿 湯 을 구성 하고 있는 茵 蔯, 梔 子, 大 黃 각각의 약물도 모두 염증성 사이토카 인을 억제한다. 아토피와 연관된 것으로 알려진 TNF-α, IL-4도 용량 의존적으로 억제 효과를 나타내었다. 茵 蔯 蒿 湯 은 IL-1β로 유도되는 NO의 생성을 억제하며 NO를 생성하는 inos 단백질과 mrna를 억제한다. nuclear factor-κ B(NF-κB)를 억제하고 Akt를 억제하여 type I IL-1 receptor mrna와 단백 표현을 감소시킨다. 따라서 茵 蔯 蒿 湯 은 inos 활 성에 의한 다양한 간손상을 억제할 수 있다 31). 일주일 정도 茵 蔯 蒿 湯 을 전처지하고 concanavalin A를 정맥주사하여 간염을 유발 시킨 mice 모델에서 IL-12 IFN-γ, IL-2가 낮아지고 IL-10은 증가 하며 AST, ALT, LDH은 저하되었다. 이는 茵 蔯 蒿 湯 이 염증을 유 발하는 사이토카인을 억제하고 항염증성 사이토카인을 증가시키 는 것으로 특히 자가 면역성 간염의 급성 염증기에 茵 蔯 蒿 湯 을 사용할수 있는 근거가 될 수 있다. 간섬유화 억제와 관련하여 茵 蔯 蒿 湯 은 간 성상세포의 apoptosis를 유도하여 간의 섬유화를 억제하며, Thioacetamide로 유발되는 간 섬유화를 억제하는데 大 黃 의 emodin 성분이 유효 한 성분으로 추정된다 32). 茵 蔯 蒿 湯 의 성분 중 genipin은 간 성상 세포의 활성을 억제하여 간섬유화 및 문맥 고혈압에 효과가 있 고, 황달과 연관된 담즙울체성 간질환에서 간과 신장에서의 빌리 루빈 처리 능력을 높이는 것으로 나타났다. 茵 蔯 蒿 湯 은 항산화작용과 관련하여 tacrine으로 독성을 유발 시킨 Hep G2 세포 실험에서 지질 과산화 억제와 연관이 있는 것 으로 알려진 DPPH 라디칼에는 영향을 미치지 않았지만 superoxide 라디칼 소거 활성은 관찰되었다. 다른 실험에서 茵 蔯 蒿 湯 은 산화질소 발생을 일으키는 inos 유도를 억제하여, inos 발생으로 인한 간손상을 억제하였다. Fructose 부하 식이는 간에서 중성지방 합성을 증가시키고 중성지방 분비가 증가되어 고중성지방 혈증을 유발하고, Triton WR-1339를 정맥으로 투여하는 경우 혈청 콜레스테롤과 중성지 방이 증가되는데, 茵 蔯 蒿 湯 은 두 병태모델에서 모두 콜레스테롤 과 중성지방을 저하시켰다. 또한 고지방식이로 유발된 쥐의 혈장 지질 수치를 낮추며, 지방간 진행과 연관된 산화적 스트레스를 감소시켰다. 고지방식으로 유도한 비만 mice에서 항산화 효과와 더불어 아디포넥틴과 혈관전구세포가 증가되었고 간에서 자유 지방산의 축적이 억제되고 glutathione 수준이 높아졌다. 茵 蔯 蒿 湯 의 구성약물중 茵 蔯 은 동의보감에서 더위지기 性 微 寒 ( 一 云 凉 ) 味 苦 辛 無 毒 ( 一 云 小 毒 ) 主 熱 結 黃 疸 通 身 發 黃 小 便 不 利 治 天 行 時 疾 熱 狂 頭 痛 及 瘴 瘧 이라 하여, 황달, 두통, 학 질, 전염성 질환에서 사용되어져 왔다. 특히 동의보감에서는 황 달편에서 황달의 분류와 상관없이 모든 황달에 전방전치적 개념 으로 사용되었다. 茵 蔯 은 대한약전외한약(생약)규격집에서는 사철쑥(A. capillaris Thunberg)의 지상부를 茵 蔯 이라고 규정하고 있다. 한의학에서는 줄기를 말린 것을 茵 蔯 蒿 라고 하여 黃 疸, 利 尿, 利 膽, 肝 炎 등의 치 료에 사용하고 있는데, 사철쑥의 꽃이 달린 식물 전체를 말린 것을 흔히 茵 蔯 蒿 라고 한다. 東 醫 寶 鑑 에서 茵 蔯 을 더위지기(Artemisia iwayomogi)로 기술하였는데, 더위지기의 생약명이 한 茵 蔯 ( 韓 茵 蔯 )이고 사철쑥의 생약명은 인진호( 茵 蔯 蒿 )로 종이 다르다. 그러 나 동의보감 이후 한국에서 茵 蔯 은 사철쑥과 더위지기가 혼용되 어 왔으며, 生 肝 健 脾 湯, 茵 蔯 淸 肝 湯 을 투여한 임상보고에서도 간 질환에 효과가 입증되었으나 더위지기와 사철쑥을 구분하여 사 용하지 않았다. 韓 茵 蔯 은 주로 간질환에 처방되었고, 실험실 연 구에 의하면 알러지 반응 억제, 전염증성 사이토카인 분비 억제, 면역조절제, 항종양 효과, 자유라디칼 제거 효과가 보고되었다. 茵 蔯 蒿 에 대한 연구로는 간세포독성과 알코올이 유도하는 apoptosis 억제, 고지혈증 가선, 항비만, 항암 활성이 보고되었다. 사철쑥과 더위지기 비교 연구에서 항미생물 활성은 더위지 기 추출물이 사철쑥 추출물에 비해 높은 활성을 보였다. 이러한 추출물들의 항균활성은 폴리페놀 함량과 일부 연관성이 있으며, 인체 유해균을 억제할 목적으로 사용할 경우 더위지기 추출물이 사철쑥 추출물들보다 안정적인 효과를 나타내었다. DPPH free radical 소거능을 기준으로 볼 때 더위지기가 사철쑥에 비해 높은 항산화활성을 보였으며, linoleic acid 기질에 대한 추출물별 항산 화활성 또한 더위지기가 사철쑥에 비해 높은 활성을 보였다 33). 장기간의 알콜 투여로 유발시킨 고지혈증과 간손상에서 더 위지기, 錦 紋 大 黃, 梔 子 로 구성된 경우와 사철쑥, 錦 紋 大 黃, 梔 子

6 고 흥 김기태 신선미 로 구성된 茵 蔯 蒿 湯 의 유효성을 비교한 경우, 총콜레스테롤과 중 성지방치가 두 군 모두 감소하였으나 더위지기를 사용한 경우에서 유의성이 확인되었다. AST, ALT는 두 군 모두에서 유의성 있게 감 소되었고, 더위지기나 사철쑥 모두에서 알콜로 인한 고지혈증을 억제하고 간손상을 보호하는 것으로 나타났다. 더위지기 추출믈과 사철쑥 추출물은 유의적으로 지방산 합성, 중성지방 합성, 지방산 β-oxidation 및 CPT 효소 활성도를 저해하는 것으로 나타났다. 더위지기 추출물에서 Aldehyde dehydrogenase 활성이 사 철쑥 추출물에 비해 유의적으로 높게 나타났으며, 더위지기 추출 물의 혈장 아세트알데히드, 혈장 중성지방, 간조직의 중성지방, 간조직의 콜레스테롤 및 AST, LDH가 대조군에 비해 유의적으 로 낮게 측정되었다. 사염화탄소로 유발시킨 간섬유화 모델에서 더위지기 추출물이 茵 蔯 蒿 추출물에 비해 간섬유화 억제효과가 뛰어난 것으로 나타났다. 따라서 더위지기와 사철쑥은 만성적으 로 알코올을 투여한 알코올 대사, 지질 대사 및 항산화 대사를 개선함으로써 간보호 효과를 나타내었으며, 더위지기가 사철쑥 보다 우수한 것으로 평가되나, 사철쑥 또한 간손상 개선 효과가 실험적으로 밝혀졌으므로 茵 蔯 蒿 湯 을 비알콜성 지방간에 사용할 경우 더위지기 및 사철쑥 모두 사용이 가능할 것으로 사료된다. 에탄올 투여로 유발시킨 간손상과 고지혈증에서 茵 蔯 은 총지질, 콜레스테롤의 증가를 억제하였고 ALT를 안정화시키고 항산화 효소로 SOD, catalase를 증가시켰다 34). 사염화탄소로 유발시킨 랫트의 간손상 병테모델에서 茵 蔯 은 중성지방과 콜레스테롤을 낮추고 ALT를 안정화시켰고, 실리마린과 비교실험에서 茵 蔯 추 출물은 실리마린과 유사한 정도로 AST ALT를 낮추고 초음파 및 조직학적 소견의 호전을 보였다. 사염화탄소로 유발시킨 개의 간 손상 모델에서도 茵 蔯 生 汁 은 AST. ALT, GGT, ALP를 호전시켜 간세포 보호 작용을 하였다. 茵 蔯 호 추출법에 있어서 사염화탄소 유발 간손상에서 수용성 추출물이 메탄올 추출물보다 유의하게 AST, ALT, ALP, bilirubin을 호전시켰다. 茵 蔯 과 葛 根 을 비교한 실험에서 d-galactosamine으로 유발된 간장애에서는 茵 蔯 이 葛 根 보다 우수하고, 급성 알콜중독에서는 茵 蔯 과 葛 根 이 비슷하며 사염화탄소 중독에서는 葛 根 이 茵 蔯 보다 AST, ALT, ALP의 억 제효과가 높았고, 혈중 콜레스테롤 및 중성지방의 억제효과는 茵 蔯 이 葛 根 보다 우수한 것으로 나타났다. 사염화탄소로 유발시킨 간손상에서 茵 蔯 水 鍼 을 肝 兪, 曲 泉 穴 에 사용한 경우는 AST, ALT, Glucose, cholesterol을 호전시켰으나 임의로 설정한 혈에 서는 호전효과가 없었다. 이는 약침형태로 사용하는 경우는 침자 리의 영향을 받는 것으로 볼 수 있다. 고지방섭취로 비만을 유발한 흰쥐에서 茵 蔯 은 중성지방만 유의하게 감소시키고 LDL, 콜레스테롤, 담즙산 증가, 간조직내 지방감소에는 영향을 미치지 못했다. 다른 실험에서는 91일간 고 지방식을 통해 비만, 당뇨, 당뇨병성 간 병증, 신장병증, 고지혈 증을 유발시켰고, 茵 蔯 추출물을 투여한 결과 혈당, LDL, 중성지 방, 총콜레스테롤이 감소하고 HDL은 상승하였다. 실험결과에 의하면 茵 蔯 250 mg/kg 용량은 simvastatin 10 mg/kg과 유사한 정도의 효과였고, AST, ALT도 안정화시키고, 상대적으로 적어 지는 신장중량을 늘리고 상승된 BUN, Cr을 정상으로 저하시켰 다. 항비만, 항고지혈, 간 및 신장 손상억제, 혈당강하효과 등 茵 蔯 추출물의 복합 작용은 대사증후군의 치료나 예방에 유효할 것 으로 보인다 35). 특히 茵 蔯 의 올리고당 분획물은 체중감소, HDL 상승, 복부 지방무게 감소, 대변중 지질 함유량 증가, 렙틴 저항 성을 저하시켰고 36), 콜레스테롤과 중성지방이 증가하는 Triton WR 1339식이로 고지혈증을 유발한 경우에서 콜레스테롤, phospholipid, LDL을 유의하게 저하시켰고, 중성지방, AST 및 ALT는 감소되었으나 유의성은 없었다 37). 다른 임상보고에서는 식품으로 茵 蔯 쑥을 섭취한 지방간 환자의 ALT가 낮아지고 초음 파 상의 지방축적이 호전된 것으로 보고되었다. 茵 蔯 의 담즙분비 개선작용으로 사염화탄소로 만든 병태모델 에서 phenobarbital과 茵 蔯 蒿 를 비교하여 실험한 결과 담즙분비 증가와 더불어 cholate 배출은 현저히 증가하고 bilirubin 배출은 약간 증가하였는데, phenobarbital 투여군에서 더 좋은 결과가 나타났다. 가토실험에서는 茵 蔯 蒿 의 담즙색소 분비증가는 간장 microsome내 cytochrome p-450의 증가와 관련이 있으며 biliverdin 배출이 증가한 것으로 보아 bilirubin 포합능과 bilirubin의 담즙배설경로에 관여하는 것으로 보고하였다. 흰쥐 에 3일동안 茵 蔯 蒿 를 복용시킨 경우에서는 담즙량이 증가하였는 데, 이는 canalicular membrane의 Na+ K+ ATPase 활성에 따라 Na+이온의 능동성 수송이 촉진되는 담즙산 비의존성 분비의 항 진이라고 분석하였다. 이는 茵 蔯 蒿 湯 의 주요성분인 genipin이 간 세포에서 담즙산과는 다른 분비능력을 증강시키고 bile canaliculi에서 Mrp2의 분비와 배출을 통하여 이루어지는 것 30) 과 연관이 있는 것으로 사료된다. 茵 蔯 은 벤조피렌이나 방사선의 유해반응을 억제하는 것으로 보고되었다. Benzopyrene은 유기화합물의 불연소물이나, 담배연 기, 오염된 대기, 숯불 구이한 육류, 훈제품, 커피와 같이 고온 조 리시 지방 및 단백질의 탄화에 의해 생성되며 체내에서는 cytochrome P450 효소계에 의하여 산화되어 폐, 위암, 피부종양 을 발생시킨다. 벤조피렌의 변이원성에 대한 억제효과가 茵 蔯 물 추출물에서 나타났고 이는 cytochrome P 450 1A1에 의해 ulimate mutagenic meabilites로 활성화되는 것을 차단해서 나타 나는 것으로 추측되었다. 茵 蔯 은 RAW 264.7세포를 이용한 LPS나 INF-gamma에 활 성화된 세포주의 생존율을 향상시키고 농도 의존적으로 inos 억제를 통하여 NO의 생성을 억제하였고 superoxide를 농도 의 존적으로 억제하였다 38). LPS로 유발시킨 흰쥐 간손상에서 AST. ALT, LDH를 호전시키고 간조직에서 NFkb, inos, TNF-α, COX-2 면역반응을 억제하여 항염증작용을 한다 39). 茵 蔯 의 ethyl acetate 분획물은 항산화 효과 뿐만 아니라 관절조직에서 inos, PGE2, MMP9을 억제하고 연골재생 마커인 proteoglycan의 파괴 를 억제하며 초산유발 통증을 감소시키는 것으로 관절염치료의 후보약물이 될 수 있을 것으로 보인다. 방사선에 의한 산화적 손상에 대한 茵 蔯 의 방어효과는 CHO 세포에서 미소핵형성시험과 마우스의 간과 흉선조직 DNA에서 8-OHdG의 형성정도로 관찰하였는데, 미소핵형성시험에는 50 μg /ml농도에서 8-OHdG형성시험에서는 30 mg/kg에서 높은 방어효

7 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 과가 나타났다. 방사선 보호효과가 자유라디칼 소거제로 작용하 여 산화적 손상을 억제하는 것과 茵 蔯 의 라디칼 소거효과가 방 사선에 의한 DNA손상을 경감시키는 것으로 추측하였다 40). 미생물억제실험과 연관하여서는 식품의 보전제로서 병원성 미생물, 식중독 유발 미생물에 대한 항균작용이 있었다. 특이한 점은 茵 蔯 의 에탄올 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이 트, 부탄올로 분획하고 항균활성을 관찰한 결과 장내 유해세균인 C. perfringens, C. difficile, E.Limosum, B fragilis 모두가 다른 분획물에 비해 클로로포름 분획물에서 생육의 억제환이 가장 크 게 생성되었고, 장내유익균인 B. bifidum, L acidophilus는 모든 분획물에서 억제환이 형성되지 않았다. 이는 일반식이군에 비하 여 비만 식이군에서 장내 유해균을 억제하고 장내 유익균을 증 진시키는 결과로 茵 蔯 이 장내 균총을 개선할 수 보았다 41). 大 黃 은 東 醫 寶 鑑 에서 장군플 性 大 寒 味 苦 無 毒 ( 一 云 有 毒 ) 主 下 瘀 血 血 閉 破 癥 瘕 積 聚 通 利 大 小 腸 除 溫 瘴 熱 疾 療 癰 疽 瘡 癤 毒 腫 號 爲 將 軍 라 하여 血, 積 聚, 大 小 便 不 通, 전염성질환, 腫 脹 에 사용되어왔다. 현재 大 黃 은 Rheum 속 Palmata 절의 약용중인 금문( 錦 紋 )계 4종을 기본종으로 하여 이들의 중간 잡종까지를 지 정하고 있다. 금문계 4종에는 錦 紋 大 黃 (R. palmatum L.), 장군풀 ( 韓 國 大 黃 ), 唐 古 特 大 黃 (Rheum tanguticum Maximowicz) 및 雲 南 大 黃 (R. officinale Nailon)이 해당되고, 土 大 黃 系 는 種 大 黃 (R. undulatum L.)이 해당된다. 大 黃 의 약리작용으로는 sennoside가 경구투여를 통해 위, 소장에서는 흡수되지 않고 대장으로 이행된 후 대장 내의 세균에 의해 rhein anthrone을 생성하고 이것이 장연 동 운동의 촉진, 수분 및 Na 흡수 저해, 점액분비 촉진에 의해 사 하( 瀉 下 )작용을 하는 것으로 알려져 있으며, rhein과 aloe-emodin 을 비록 한 몇 종의 anthraquinone류는 항균작용이 있고, glucoobtusifolin은 항혈소판 응집작용, chrysophanol은 항염증 작용을 나타내며, rhein은 항류마티스작용이 있다고 보고되었다. 현재 유통 중인 大 黃 중 sennoside A 및 유리형 anthraquinone 화합물 함량분석에서, 약전수재 大 黃 및 중국산 大 黃 에서는 sennoside A 반점이 검출되었으나 Rhapontica 계열 의 種 大 黃 류 및 소리쟁이속 생약에서는 검출되지 않았다. 또한 藥 典 收 載 大 黃 및 유통 중인 藥 典 未 收 載 錦 紋 大 黃 에서는 5종의 유리형 anthraquinone 성분이 모두 검출되었으나 Rhapontica 계 열의 種 大 黃 류 생약에서는 rhein이 검출되지 않았고, 소리쟁이 속 생약에서는 aloe-emodin 및 rhein이 검출되지 않았다. 따라서 茵 蔯 蒿 湯 에서 大 黃 은 藥 典 收 載 大 黃 이나 錦 紋 大 黃 으로 조제된 茵 蔯 蒿 湯 이나 엑기스제제를 사용함이 타당하다. 현재 국내에서 시판되고 있는 보험 엑기스제는 7종이며 이들 茵 蔯 蒿 湯 은 茵 蔯, 錦 紋 系 大 黃, 梔 子 로 구성된 엑기스제제가 시판되고 있다. 일본 에서 시판되는 쯔므라 제약의 茵 蔯 蒿 湯 엑기스제제는 茵 蔯 蒿 (일 본산), 錦 紋 大 黃 (중국산), 山 梔 子 (중국산)를 사용하지만 현재 국 내에서는 유통되고 있지 않다. 大 黃 이 간과 신장에 미치는 독성을 연구가 있는데, 신장세포 A498을 이용한 실험에서 大 黃 추출방법중 Butanol 추출이 세포 에 미치는 영향이 가장 크고 물추출물이 가장 낮았다. 독성과 관 련하여 적출관류 간을 이용한 실험에서 大 黃 은 AST. ALT활성에 변화가 없었고, lipid peroxidation 정도가 대조군에 비하여 증가 되어 간 소포체막의 손상가능성을 제시하였지만, 조직학적인 관 찰결과 대조군에 비하여 유의한 차이가 나타나지 않았다. 大 黃 에 서 간손상의 가능성이 있는 성분으로는 anthraquinone 유도체인 rhein의 가능성만 제시하였다. 大 黃 의 β-carotene bleaching inhibition activity와 DPPH radical scavenging activity를 통한 항산화 효과 실험에서 농도 의존적으로 항산화 능력이 증가하여, 80%에탄올 추출물은 천연 산화제로 사용이 가능하지만 합성산화제와 비교 시 높은 농도가 필요하다고 하였다 42). 大 黃 의 free radical 제거작용과 지질과 산 화억제활성의 물질은 rhapontingenin과 piceatannol로 규명되었 다. 피부섬유아세포를 이용하여 산화능력을 측정한 경우에서는 콜라겐에 특이적으로 작용하는 단백질 분해효소 MMP-1 활성을 억제하고 자외선에서 유발되는 MMP-1활성도 억제하는 것으로 나타났다. 그리고 초산소음이온 라디칼과 DPPH radical 소거는 농도의존적으로 증가하였다 43). 錦 紋 大 黃, 酒 蒸 錦 紋 大 黃, 酒 蒸 種 大 黃, 種 大 黃 은 고콜레스 테롤 흰쥐에서 총콜레스테롤, LDL을 저하시키고 혈중 creatinine 함량에는 영향을 미치지 않았다. 그리고 in vitro에서 lipase, lactate dehydrogenase, creatine kinase 효소 활성을 감소시켰는 데, 이는 지질의 소화와 흡수과정 및 지질대사에 관여하는 효소 에 영향을 미친 것이라고 하였다. 大 黃 의 고지혈증 저하작용의 성분에 대한 연구에서는 methanol 용해부분이 총콜레스테롤 LDL를 유의하게 감소시켰다. 췌장의 lipase를 강력하게 억제하고 지질 함량을 저하시킨 분획은 lipase 억제효능이 있었지만 활성은 다른 분획보다 약하였다. 따라서 大 黃 의 혈중 지질 저하효과는 lipase 억제성분이 아닌 다른 성분에 의한 것으로 추정하였다. 大 黃 분말, 大 黃 에탄올 추출물, 大 黃 물 추출물의 비교 실험 에서는 大 黃 분말은 총콜레스테롤, LDL를 감소시키고 大 黃 에탄 올 추출물과 물추출물은 총 콜레스테롤에서 감소효과가 분말보 다 못하였지만 HDL 콜레스테롤의 함량을 증진시킨다고 하였다. 또한 大 黃 물 추출물은 AST, ALT, BUN 수준이 대조군에 비하 여 오히려 감소한다고 하였다 44). 大 黃 은 瘀 血 을 없애는 작용으로 인하여 항혈전효과를 비교 하는 실험이 있었다. 大 黃 의 종류가 많아서 유사종과 藥 用 大 黃 을 비교하여 항혈전효과를 검증하였다. 掌 葉 大 黃, 藥 用 大 黃, 高 山 大 黃, 華 北 大 黃 을 대상으로 혈전용해, 응고시간(PT, aptt), 혈소판 응집증 실험에서 PT를 제외하고는 대조군과 비교하여 효과가 있 으며 특히 高 山 大 黃 에서 항혈전효과가 높았는데 stilbenes가 주 요한 성분일 것을 추정하였다 45). 신경세포손상 모델로 흰쥐에서 4-vessel occlusion에 의한 일 시적 5분 10분 정도 전뇌허혈을 유발하였을 때 전뇌부위세포 에서 glutamate와 K+농도, 세포내 Ca++가 증가하지만, 재관류후 에는 다시 정상으로 회복된다. 이때 뇌의 neocortex, striatum, hippocampal CA1부위에 선택적으로 신경세포의 손실이 발생하 게 되는데, hippocampal CA1 pyramidal neuron이 허혈에 가장 손상받기 쉬우며 재 관류 3 4일 후 죽기 시작한다. 세포의 파 괴는 apoptosis와 PCD(programmed cell death)로 추정된다. 大

8 고 흥 김기태 신선미 黃 은 실험동물의 체온저하가 발생할 때 적외선을 조사하여 체온 을 조절한 경우, 체온을 조절하지 않은 경우, 미리 복용하여 예방 적으로 투여한 경우 복강, 경구투여에 상관없이 모두에서 대조군 에 비하여 hippocampal CA1 pyramidal, neuron의 사멸을 11.4% % 억제하였다. 휜쥐의 구속스트레스를 유발시킨 실험에서도 大 黃 과 大 黃 이 함유된 大 黃 黃 連 瀉 心 湯 은 대식세포의 NO를 감소시키고 대뇌 해 마체의 inos를 감소시키고 혈중 corticosterone 함량을 저하시 켰다. 치매의 병태모델로 Scopolamine으로 유발시킨 생쥐모델에 서 glucose 증가, uric acid 감소, AChE 활성을 감소시켰다. 생쥐 에게 Morris water maze에서 반복학습을 실시하여 1일 1회 30초 내에 platform에 올라가는 생쥐를 대상으로 한 실험에서 일주일 간 약물을 사용하고 scopolamine을 복강에 주입하여 나타나는 연장된 platform 도달 시간을 단축시키고 distance movementthrough latency 측정에서 거리를 단축시키는 효과가 있었다. MPTP로 유발시킨 파킨슨 병태모델에서 大 黃 은 대뇌피질과 소 뇌의 미토콘리아에서 증가된 MAO-B를 감소시키고 흑질에서 dopamine함량의 저하를 억제하였으며 지질과산화지표인 MDA가 감소하는 것으로 나타나 신경독성을 완화시키는 것으로 나타났다. 梔 子 는 東 醫 寶 鑑 에서 梔 子 性 寒 味 苦 無 毒 主 胸 心 大 小 腸 大 熱 胃 中 熱 氣 心 中 煩 悶 去 熱 毒 風 利 五 淋 通 小 便 除 五 種 黃 病 止 消 渴 治 口 乾 目 赤 腫 痛 面 赤 酒 皰 齄 鼻 白 癩 赤 癩 瘡 瘍 殺 虫 毒 이 라 하여, 염증성 질환과 황달, 당뇨, 음주와 연관된 증상에 사용 되어져 왔다. 황달에서는 통치방으로 사용되며 陰 黃 을 제외한 黃 疸, 酒 疸, 穀 疸, 疫 癘 黃 疸 에 사용되었다. 梔 子 는 담즙분비, 간세포보호, 총콜레스테롤 억제효과가 보 고되었으며, 사염화탄소로 유발시킨 간손상모델에서 AST. ALT, LDH, ALP를 호전시켰다. D-galasctosamine으로 유발시킨 간손 상에서는 AST, ALT, LDH, ALP는 호전되었으나 total cholesterol에는 변화가 없었다. UDCA를 이용한 담즙분비효과에 서는 담즙분비 촉진효과가 있다. 梔 子 의 항산화 효과에 대하여 梔 子 열수 추출물은 hairless 마우스 피부에 자외선 조사로 생성된 ROS의 제거를 높여 MMP 의 생성을 억제함으로서 교원질의 파괴를 줄이고 섬유아세포에 작용하여 교원질의 합성을 증가시켜 주름개선효과를 나타내는 것으로 보고되었다 46). 梔 子 의 주요 항산화 물질은 geniposide와 Table 4. The effects of Injinho-tang and Artemisia capillaris Thunb, Gardenia fructus, Rhei rhizome on non alcoholic fatty liver disease. Effect Non fatty liver disease association studies Injinho-tang Artemisia capillaris Thunb Rhei rhizome Gardenia fructus CCl4 D-galactosamine Hepatoprotective effect 16,17,18,19,20,34) Azo compound-induced Acetaminophen Ethanol Long-term administration of CCl4 Liver fibrosis suppression 23,27,32) Bile duct ligation Thioacetamide Hepatic stellate cells inhibition Apoptosis of HepG2 cell Hepatoma suppression 25,26,27) NDEA induced Diethylnitrosamine induced Hepa1c1c7 cancer cell suppression High-fat diet Hyperlipidemia 35,36,37,44) Fructos diet Triton WR 1339 DM induced by streptozotoxin Antioxidant activity 38) spuoxide Removal IL-1 IL-1β IL-4 IL-6 TNF-α Cytokines adjustment 31,33,38,39,42,43,46,47) IL-10 INF-gamma IL-12 NF-κB NO, inos MMP9 COX2 Obesity 35,41) Enterobacteriaceae change Long-term administration of high fat diet Reduced toxicity 40) Radiation toxicity reduction Benzopyrene toxicity reduction Bile secretion 5,6,23,24,28,29,30) Antithrombotic effect 45)

9 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 crocin으로 추정되고 있다. crocin은 genoposide보다 항산화력이 강한 것으로 보고되었다 47). 비알콜성 지방간은 지방간염으로 진행될 때 간부전까지 진 행되며, 지방간에 머물 경우는 양호한 예후를 가지는 것으로 보 고되었다. 따라서 비알콜성 지방간 치료는 간염과 간섬유화를 억 제하면서 지방간의 발생기전에 관여하는 비만 개선 효과, 항산화 효과, 고지혈증 개선, 인슐린저항성 개선, 사이토카인 조절 효과 가 필요할 것으로 사료된다. 茵 蔯 蒿 湯 은 단회독성시험에서 LD50은 암수 랫트에서 2000 mg/kg이상이며, 임상에서 선천성 담도폐색 환자에게 2-4년간 투 여에도 간기능을 정상화 시키는 것으로 보고되어 안전성이 확보 되었다. 茵 蔯 蒿 湯 의 주요성분지표로는 6,7-Dimethylesculetin, geniposide, rhein이 제시되어 약물의 표준화와 제형의 동질성을 확보할 수 있게 되었다. 현재까지 보고된 茵 蔯 蒿 湯 과 茵 蔯 蒿 湯 을 구성하는 茵 蔯, 梔 子, 大 黃 은 간세포보호, 간섬유화억제, 간암발 생억제, 담즙분비촉진, 지질 혈증 개선, 항산화효과, 체중조절효 과, 방사선 손상 억제, 벤조피렌에 대한 돌연변이 억제, 항혈전효 과가 보고되었다. 따라서 茵 蔯 蒿 湯 은 처방 구성 약물의 개개 효 과 뿐만 아니라 茵 蔯 蒿 湯 의 기존 연구 결과로 보아 간염과 간섬 유화의 병리 변화를 보이는 비알콜성 지방간의 치료에 유효한 효과가 있을 것으로 사료되며, 비알콜성 지방간 치료의 초기 선 택 처방으로 적합할 것으로 생각된다. 결 론 비알콜성 지방간은 복합적인 원인으로 유발되는 대사증후군 의 한 형태로, 비알콜성 지방간을 치료하기 위한 약물에는 간세 포보호, 간섬유화억제, 간암억제 효과를 기본으로 하면서 염증성 사이토 카인 조절, 고지혈증개선, 체중조절, 약물의 독성저하, 항산 화효과가 모두 필요하다. 茵 蔯 蒿 湯 은 경험적으로 황달을 유발하는 질환에 사용되어 간 담도 질환에 광범위하게 운영되어 왔다. 茵 蔯 蒿 湯 의 약물 표준화를 위한 지표성분으로 6,7-Dimethylesculetin, geniposide, rhein이 제시되었으며, 단회 독성투여에서 안정성이 입증되었고 임상적으로 2 4년의 투여에서도 안정성이 보고되었 다. 茵 蔯 蒿 湯 과 茵 蔯 蒿 湯 의 구성약물은 비알콜성 지방간의 발생 기전과 연관하여 간세포 보호, 간 섬유화 억제, 간암 억제 효과와 더불어 비만개선, 고지혈증개선, 항염 작용, 항산화효과, 독성감 소 작용이 보고되었다. 따라서 茵 蔯 蒿 湯 은 비알콜성 지방간에 초 기 선택 처방으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다. 감사의 글 이 논문은 2011년 하반기 한의학선도기술개발사업(과제고유 번호:B110061) 지원에 의해 수행되었습니다. 참고문헌 1. A.M. Jr, Hoyumpa, H.I. Green, G.D. Dumm, and S. Schencken. Fatty liver, Biochemical and Clinical consideration. America Journal, Digestive disease. 20(12): , 윤정한, 임대순, 전재윤, 강진경, 최홍재. 생검으로 확진된 지 방간의 임상적 고찰. 대한소화기병학회지 18(1): , Amgulo, P. Nonalcoholic fatty liver dusease. New England journal Med. 346: , Okino, I., Uchida, K., Nakamura, M., sakura, K. Studies on choleretic constitutions in Artemisia capillaries THUNB. Chem Pharmacol Bull. 36: , Yasushi Iinuma, Masayuki Kubota, Minoru Yagi, satoshi Kanada, Satoru Yamazaki, Yoshiaji Kinoshita. Effect of the herbal medicine Inchinkoto-to on Liver function on postperative patients with biliary atresia-a pilot study. Journal pf Pediatric surgery. 13(11): , Tamura, T., Kobayashi, H., Yamataka, A., Lane, G.J., Koga, H., Miyano, T. Inchin-ko-to prevents medium-term liver fibrosis in postoperative biliary atresia patients. Pediatr Surg Int. 23(4): , Craig, J. McClain. Sri Prakash L. Mokshaundam, Shirish S. Brarve. Ahenyuan Song. Daniell B. Hill. Teresa Chen. Ion Deaciuc. Mechanisms of non-alcoholic steatohepatitis. Alcohol 34(1):67-79, Marin Krawczyk, Leonilde Bonfrate, Piero Portincasa. Nonalcoholic fatty liver disease. Best practice & Research Clinical Gasroenterology. 24(5): , 이선희, 서영성, 김대현. 비만하지 않은 남성에서 성인기 체 중력과 비알콜성 지방간과의 관련성. 대한비만학회지 18(2): 53-58, 오세용, 조용규, 유태우, 박정호, 김홍주, 박동일, 손정일 et al. 한국남성 비알콜성 지방간에서 혈중 adipokine 농도변화에 영향을 미치는 요인. 대한내과학회지 71(1):58-66, Palmar, M., Schaffner, F. Effect of weight reduction on hepatic abnormalities in overweight patients. Gastroenterology 99: , Ueno, T., Sugawara, H., Sujaku, K., Hashimoto, O., Tsuji, R., Tamaki, S., Torimur, T., Inuzuke, S., Sata, M., Tanikawa, K. Therapeutic effects of restricted diet and exercise in obese patients with fatty liver. J Hepatol 21: , Hill, D.B., Devalaraja, R., Joshi-barve, S., Barve, S., McClain, C.J. Antioxidants attenuate nuclear factor-kappa B activation and tumor necrosis factor-alpha production in alcoholic hepatitis patient monocytes and rat Kupffer cells, in vitro. Clin Biochem 32: , Lee, K.S., Buck, M., Houglum, K., Chojkier, M. Activation of hepatic stellate cells by TGFαand collagen type I is mediated by oxidative stress through c-myb expression. J Clin Invest 96: ,

10 고 흥 김기태 신선미 15. Pacher, P., Batkai, S., Kunos, G. The endocannabinoid system as an emerging target of pharmacotherapy. Pharmacol Rev. 58: , 김창종, 조승길, 최충식, 최윤석. 植 物 性 生 理 活 性 物 質 의 肝 保 護 作 用 (I). 생약학회지 21(3): , 김건진. 茵 蔯 蒿 湯 加 熊 膽 의 경구투여가 CCl4투여로 유발된 간 경변에 미치는 영향. 경산대학교 대학원 학위논문, 김정수. 小 柴 胡 湯 엑기스와 茵 蔯 蒿 湯 엑기스의 倂 用 投 與 에 關 한 硏 究 : 四 鹽 化 炭 素 로 誘 發 한 白 鼠 肝 損 傷 에 미치는 豫 防 效 果. 중앙대학교 대학원 학위논문, 김태식, 강재춘. 茵 蔯 蒿 湯 合 柴 胡 疏 肝 湯 加 減 方 이 肝 損 傷 에 미 치는 영향. 대한예방한의학회지 3(2): , 이승우, 한상원, 박창국. 茵 蔯 蒿 湯 의 藥 鍼 과 經 口 投 與 가 損 傷 肝 에 미치는 影 響 의 비교연구. 대한침구학회지 16(1): , 최재우. 茵 陳 蒿 湯 의 조합에 따른 간보호 효과. 동국대학교 학 위논문, Zhang, A., Sun, H., Yuan, Y., Sun, W., Jiao, G., Wang, X. An in vivo analysis of the therapeutic and synergistic properties of Chinese medicinal formula Yin-Chen-Hao-Tang based on its active constituents. Fitoterapia. 82(8): , Lee, T.Y., Chang, H.H., Kuo, J.J., Shen, J.J. Changes of hepatic proteome in bile duct ligated rats with hepatic fibrosis following treatment with Yin-Chen-Hao-Tang. Int J Mol Med. 23(4): , Kaiho, T., Tsuchiya, S., Yanagisawa, S., Takeuchi, O., Togawa, A., Okamoto, R., Saigusa, N., Miyazaki, M. Effect of the herbal medicine Inchin-Ko-To for serum bilirubin in hepatectomized patients. Hepatogastroenterology 55(81): , 윤현정, 김병완, 이창현, 정재하, 허숙경, 박원한, 박선동. 사 람 간암세포주인 HepG2에 대한 茵 蔯 蒿 湯 의 항암효과. 대한 본초학회지 22(3):27-37, 윤중식, 김정상. 인진호탕 추출액의 투여가 흰쥐의 간암 발생 에 미치는 효과. 한국현미경학회지 39(4): , 이종범, 허래경, 성기문, 문구, 이종덕, 원진희. 茵 蔯 蒿 湯 추출 액이 Diethylnitrosamine과 CCl4로 유발된 흰쥐의 肝 癌 형성 과 肝 硬 變 에 미치는 영향. 대한약침학회지 12(3):5-24, Tzung-Yan Lee, Hen-Hong Chang, Jenn-Han Chen, Ming-Lung Hsueh, Jong-Jen Kuo. Herb medicine Yin-Chen-Hao-Tang ameliorates hepatic fibrosis in bile duct ligation rats. Journal of Ethnopharmacology 109(2): , Shinya Watanabe, Yukihiro Yokoyama, Koji Oda, Toshio Kokuryo, Junichi Shoda, Kosuke Okada et al. Choleretic effect of inchinkoto, a herbal medicine, on livers of patients with biliary obstruction due to bile duct carcinoma. Hepatology Resh 39: , Shoda, J., Miura, T., Utsunomiya, H., Oda, K., Yamamoto, M., Kano, M., Ikegami, T., Tanaka, N., Akita, H., Ito, K., Suzuki, H., Sugiyama, Y. Genipin enhances Mrp2 (Abcc2)-mediated bile formation and organic anion transport in rat liver. Hepatology. 39(1): , Matsuura, T., Kaibori, M., Araki, Y., Matsumiya, M., Yamamoto, Y., Ikeya, Y., Nishizawa, M., Okumura, T., Kwon, A.H. Japanese herbal medicine, inchinkoto, inhibits inducible nitric oxide synthase induction in interleukin-1β -stimulated hepatocytes. Hepatol Res. 42(1):76-90, Imanishi, Y., Maeda, N., Otogawa, K., Seki, S., Matsui, H., Kawada, N., et al. Herb medicine Inchin-ko-to (TJ-135) regulates PDGF-BB-dependent signaling pathways of hepatic stellate cells in primary culture and attenuates development of liver fibrosis induced by thioacetamide administration in rats. Journal of Hepatology 41(2): , 서경순, 윤경원. 인진으로 쓰이는 사철쑥과 더위지기 추출물 의 항산화 활성. 韓 資 植 誌 21(4): , 한은경, 김영섭, 유윤숙, 정의진, 이지영, 정차권. 에탄올 투여 흰쥐의 지질대사 및 간독성 저하에 미치는 인진쑥 및 눈꽃 동충하초의 영향. 한국식품영양과학회지 38(8): , 김홍태, 김대동, 구세광, 김주완, 장광호, 오태호, 이근우. 고 지방사료 급여 마우스에서 인진쑥 추출물의 항비만효과. J Vet Clin. 27(4): , 장정연, 최현주. 인진쑥 올리고당의 섭취가 비만쥐의 혈중 지 질, 복강내 지방조직과 렙틴수치에 미치는 영향. 韓 國 營 養 學 會 誌 36(5): 함인혜, 정성웅, 이경진, 박규하, 최호영. 茵 蔯 蒿 와 韓 茵 蔯 이 Triton WR-1339로 유도된 고지혈증 흰쥐에 미치는 영향. 大 韓 本 草 學 會 誌 20(1):45-52, 박진상, 문석재, 문구, 원태희. 인진추출물이 마우스 대식세포 주인 RAW264.7세포주의 inos 발현 및 superoxide 형성에 미치는 영향. 한국전통의학지 9(1): , 길영기, 이준혁, 최병태. 인진추출물이 lipopolysaccharide 주 입에 의한 흰쥐 간의 염증반응에 미치는 혈청학적 및 면역조 직화학적 영향. J. of life science. 14(2): , 조성기, 오헌, 천의현, 정우회, 조남정. 방사선 유도 DNA 손 상에 대한 인진쑥의 방어효과. 한국식품영양과학회지 33(1):22-27, 오미현, 김광엽. In vitro 및 In vivo에서 인진쑥 추출물이 장 내미생물에 미치는 영향. 한국식품영양과학회지 39(11): , 김철재, 서희지. 페놀화합물이 포함된 대황(Rhubarb)추출물의 항산화성평가. KOREAN J FOOD CULTURE 20(1):77-85, 박성민, 이계원, 조영호. 대황추출물의 항산화 활성 및 MMP-1 저해 활성. J of lige Science 18(12): , 장연희, 최상원, 조성희. 고지방식이 급여 흰쥐에서 대황 및 대황정제환의 혈청 지질 개선효과. 한국영양학회지

11 비알콜성 지방간의 약물개발 중 茵 蔯 蒿 湯 의 타당성 연구 41(1):5-12, 양원경, 성윤영, 전명숙, 윤태숙, 김호경. 4종 大 黃 류 추출물 의 항혈전 효능비교. 대한본초학회지 25(4):1-6, 강성례, 박은예, 박미순, 박지현, 김영철. 치자와 삼백초 열수 추출물의 항산화능 및 콜라겐 합성능. 대한미용학회지 7(2): , 양혜정, 박미정, 이흠숙. 치자의 항산화 활성 및 활성성분의 분리. 한국식품과학회지 43(1):51-57,