JMLS [Journal of Marine Life Science] December 2018; 3(2): 96-100 [ 단보 ] 소양호, 남양호, 안동호및춘천호에서식하는잉어과어류의간흡충 Clonorchis sinensis 감염조사 전상우 1 허준욱 2 송준영 3 지보영 4 이정호 3 권준영 1 권세련 1,5* 1 선문대학교수산생명의학과 2 생물모니터링센터 3 국립수산과학원내수면양식연구센터 4 국립수산과학원수산방역과 5 유전체기반바이오 IT 융합연구소 Infestation Status of Clonorchis sinensis Metacercariae in Cyprinid Fish from four Artificial Lakes in South Korea Sang Woo Jeon 1, Jun Wook Hur 2, Jun Young Song 3, Bo Young Jee 4, Jeong Ho Lee 3, Joon Yeong Kwon 1, Se Ryun Kwon 1,5* 1 Department of Aquatic Life Medical Sciences, Sunmoon University, Asan 31460, Korea 2 Bio-Monitoring Center, Sejong 30121, Korea 3 Inland Aquaculture Research Center, National Institute of Fisheries Sciences, Changwon 51688, Korea 4 Aquatic Disease Control Division, National Institute of Fisheries Sciences, Busan 46083, Korea 5 Genome-based BioIT Convergence Institute, Asan 31460, Korea Corresponding Author Se Ryun Kwon Department of Aquatic Life Medical Sciences, Sunmoon University, Asan 31460, Korea E-mail : srkwon@sunmoon.ac.kr Received : November 05, 2018 Revised : December 12, 2018 Accepted : December 13, 2018 간흡충 (Clonorchis sinensis) 은우리나라에서인체감염율이가장높은기생충이며, 이는담수어류를중간숙주로삼는다. 따라서강유역에서식하는담수어류를대상으로간흡충의메타세르카리아 (Clonorchis sinensis metacercariae, CsMc) 가감염되어있는지를조사한연구가많이수행되었으나호수에서식하는물고기를대상으로한연구는거의없다. 본연구에서는주요인공호수인소양호, 남양호, 안동호, 춘천호에서 2016 년부터 2017 년까지잉어과어류를채집하여 CsMc 의감염여부를조사하였다. 이생흡충류의메타세르카리아는남양호에서채집한치리및붕어와, 소양호에서채집한피라미와끄리에서관찰되었다. 간흡충에특이적인프라이머를사용하여 PCR 을수행한결과, 남양호의치리에서관찰된것이 CsMc 이었음을확인할수있었다. 본연구는주요인공호수에서식하는잉어과어류에서 CsMc 의감염실태에대한정보를제공하고있으며, 남양호의치리에서 CsMc 감염을처음으로보고하고있다는것에의의가있다. Clonorchis sinensis is a main parasite that infects humans by making freshwater fish as an intermediate host in South Korea. There are so many reports about the infestation status of Clonorchis sinensis metacercariae (CsMc) in freshwater fish living in the river, but there are a few studies of fish in the lake. In this study, we examined CsMc in Cyprinid fish sampled from Soyang Lake, Namyang Lake, Andong Lake and Chunchun Lake from 2016 to 2017. Metacercaria of trematodes were found from Hemiculter eigenmanni and Carassius auratus in Namyang Lake, and Zacco platypus and Opsarichthys uncirostris in Soyang Lake. As a result of PCR using Clonorchis sinensis specific primer sets, it was confirmed that the metacercariae from Hemiculter eigenmanni in Namyang Lake was CsMc. This study provides information on CsMc infestation status of Cyprinid fish in four lakes and it is the first report of CsMc infestation in Namyang Lake. Keywords: Soyang Lake( 소양호 ), Namyang Lake( 남양호 ), Andong Lake( 안동호 ) and Chunchun Lake( 춘천호 ), Clonorchis sinensis( 간흡충 ), Metacercariae( 메타세르카리아 )
15 December 2018; 3(2): 96-100 남양호치리의간흡충감염 97 간흡충 (Clonorchis sinensis) 은우리나라의기생충중에서인체감염율이가장높은기생충이다. 2012 년도의국내간흡충조사결과감염도는 1.9% 로서 932,540 가구에서감염되어있을것으로추정하고있다 (Sohn et al., 2017, 2018). 간흡충감염율은강유역에서상대적으로높은편이어서강유역을중심으로되어있는조사결과가많다 (Seo et al., 1981; Rim, 1986; Hong and Hong, 2005; Cho et al., 2008; Kim et al., 2009; Kim et al., 2010; Jeong et al., 2016). 특히 1981년도에는 7개의주요강에서조사한결과낙동강에서 40.2%, 영산강에서 30.8%, 섬진강에서 17.3%, 탐진강에서 15.9%, 한강에서 15.7%, 금강에서 12.0% 및만경강에서 8.0% 의최대감염율을보였다 (Sohn et al., 2017, 2018). 최근의 Jeong et al. (2016) 에의한조사결과낙동강은 11.7%, 섬진강은 9.9%, 금강은 6.5%, 영산강은 3.1% 및한강은 1.0% 로낮아진감염율을확인할수있었다. 간흡충은최종숙주가포유류이나성충이되기위해담수어류를제2차중간숙주로삼는다. 어류에서는피낭에싸여져있는 metacercariae 의형태로존재하고있다가종숙주인인간이어류를조리하지않은채날것으로섭취하게되면피낭을깨고나와담관에서성충으로자라게된다. 여러연구자에의해간흡충의감염인자로서여러담수어종을조사한바있는데그결과 7개과의 49종이상의담수어에서간흡충의 metacercariae 가검출된바있다 (Sohn et al., 2018). 그중잉어과어류에서가장높은감염율을보였다 (Kim et al., 2008). 한편우리나라의지역을구획별로나누어간흡충의감염을조사한여러연구가실시된바있다 (Kim et al., 2008; Cho et al., 2011). 이러한연구들도간흡충의감염율이기존에높게나타났던강유역을기본으로한것이주가된다. 그러나댐에의해조성된인공호수에서식하는어류를대상으로간흡충감염을조사한연구는거의없다. 인공호수에도다수의어종이서식하고있으며시민들이낚시를하거나호수의물이농업용수및식수원으로사용되고있다는점에서중요도가높다. 따라서본연구에서는우리나라에서주요호수인소양호, 남양호, 안동호및춘천호를대상으로그곳에서식하고있는잉어과어류를채집하여간흡충의 metacercariae 감염여부를조사하여보았다. 2016년에서 2017년에걸쳐소양호, 남양호, 안동호, 및춘천호에서어류를채집한후, 각채집시점에서잉어과어류만 15마리씩선별하여간흡충검사에사용하였다. 어류의채집은 Table 1에표시한조사정점을기준으로사방 200 m의범위에서투망, 족대및삼각망을사용하여실시하였다. 간흡충의감염확인실험시선별된 15마리의잉어과어류를같은어종별로나눈후 3마리내외로 pooling 하여 Mun et al. (2018) 과 Kim et al. (2018) 에보고된방법대로근육을소화시킨후침전물을현미경으로관찰하고, 간흡충에대한 specific primer sets를사용하여간흡충인지를확인하였다. High pure PCR template preparation kit (Roche, Germany) 를이용하여제조사의 protocol 에따라침전물로부터핵산을추출한후 PCR 검사를실시하였다. PCR 검사시에는 Cho et al. (2013) 에 Table 1. Subjected sites and sampling date for fish collection Name of lake Sampling spot Sampling date Soyang Lake 38 02'22", 127 57'49" May 4, 2016 June 24, 2016 Sep 8, 2016 Oct 6, 2016 38 02'01", 128 02'48" May 12, 2017 Namyang Lake 37 00'36", 126 49'33" May 10, 2016 July 5, 2016 Sep 9, 2016 Oct 8, 2016 Andong Lake 36 41'33", 128 51'06" May 12, 2017 36 37'52", 128 50'01" May 12, 2017 Chunchun Lake 37 59'05", 127 39'37" May 12, 2017 제시된대로간흡충의 retrotransposon 을 target 으로하는 2쌍의 primer 를사용하였다. RT5-1 (5'-ACTTCATCGAGTCATTGGTCGT-3') 과 RH3 (5'-CGTACTGTAACGCGTTTGTGCA-3') 를사용하게되면 929 bp 크기의 PCR 산물이증폭되고 Int5-2 (5'-GGACATGCTAACTTCCC TCTCA-3') 과 Int3-1 (5'-CCCAGGATGTCAGATCCTT-3') 을사용하면 1,349 bp 크기의 PCR 산물을얻을수있게된다. 두쌍의 primer 에대한 PCR 조건은 Kim et al. (2018) 에제시된바와같다. PCR 양성시료는 Wizard SV Gel and PCR Clean-UP System (Promega) 을사용하여정제한후염기서열분석을실시하여간흡충인지를 확인하였다. 소양호에서는 2016년에 4회및 2017년도에 2회에걸쳐잉어 과어류를채집하였고, 그중 79마리의피라미 (Zacco platypus), 8 마리의끄리 (Opsarichthys uncirostris amurensis), 5마리의몰개 (Squalidus japonicus coreanus), 3마리의참중고기 (Sarcocheilichthys variegatus wakiyae), 2마리의붕어 (Carassius auratus) 및 1마리의 누치 (Hemibarbus labeo) 를대상으로간흡충검사를진행하였다. 남양호에서는 2016년에 4회에걸쳐채집을수행하였으며, 40마 리의붕어 (C. auratus), 11마리의치리 (Hemiculter eigenmanni), 6마 리의강준치 (Erythroculter erythropterus), 2마리의잉어 (Cyprinus carpio) 및 1마리의참붕어 (Pseudorasbora parva) 를실험하였다. 안
98 전상우 허준욱 송준영 지보영 이정호 권준영 권세련
15 December 2018; 3(2): 96-100 남양호치리의간흡충감염 99 sinensis metacercariae (CsMc) 와다른 trematode 의것과구별하기매우힘들다. Sohn (2009) 은우리나라의다양한어류에서분리한 metacercaria 의형태적특징을비교한바있다. 그도밝혔듯이 CsMc 와다른것들과형태적으로구분하기는매우까다로워서, 타이간흡충 (Opisthorchis viverrini) 과는동그란형태의 cyst, 유사한크기의구흡반과복흡반, 갈색색소과립, O 자형태의배설낭등의특징이동일하나 CsMc의크기가작다는것으로구별해야한다. 또한동양담낭흡충 (Metorchis orientalis) 과는 cyst 벽의두께가얇다는점으로구분해야하며, 메타고니무스 (Metagonimu sp.) 와는복흡반과배설낭의형태가약간다르다는점으로구분해야한다 (Sohn, 2009). 이와같이형태적으로동정하는것이전문적인소견을필요로하고시간이오래소요되기때문에 Cho et al. (2013) 은사람의분변에서핵산을추출하여 PCR 하는것으로간흡충을검출할수있는조건에대해검토한바있다. 이방법은인체에감염되는요코가와흡충 (Metagonimus yokogawai) 과폐흡충 (Paragonimus watermani) 및간흡충을구별할수있는특이적인것이었다. 본연구에서는이방법을사용하여남양호에서채집한치리 (H. eigenmanni) 에서간흡충을특이적으로검출할수있었다 (Fig. 3). 실험에사용된모든어종은배스 (M. salmoides) 를제외하고는기존에 CsMc가검출되었다고보고된바있는것이었으나 (Sohn, 2009), 검사결과치리 (H. eigenmanni) 에서만간흡충이검출되었다. 피라미의경우에는 CsMc 감염율이 48% 로서높은편이라고보고되어있지만 (Kim et al., 2008), 본연구에서는검출되지않았다. 이것은검사에사용된어류의개체수가기존의연구에비해적었기때문일가능성이있다. 이러한한계점에도불구하고본연구의결과는남양호에서서식하는치리 (H. eigenmanni) 에서간흡충의감염을밝힌최초의보고이며, 어류의근육소화액을사용하여 PCR 하는것으로간흡충감염여부를확인할수있음을증명하고있다. 동호에서는 2017 년에중류와하류의 2구역으로나누어 2회씩채집을수행하였다. 상류에서는 26마리의붕어 (C. auratus), 8마리의잉어 (C. carpio), 5마리의끄리 (O. uncirostris amurensis), 3마리의배스 (Micropterus salmoides), 1마리의누치 (H. labeo) 를실험하였다. 중류에서는붕어 (C. auratus) 15마리, 잉어 (C. carpio) 12마리, 누치 (H. labeo) 10마리, 배스 (M. salmoides) 4마리를실험하였다. 춘천호에서는 2017 년에간흡충검사를 2회실시하였는데, 누치 (H. labeo) 23마리, 붕어 (C. auratus) 7마리, 잉어 (C. carpio) 4마리, 배스 (M. salmoides) 1마리를대상으로하였다. 이생흡충류의 metacercariae 는남양호에서채집된치리및붕어와소양호에서채집된피라미와끄리에서검출되었다. Fig. 1과 Fig. 2에서는각호수에서분리된흡충의 metacercaria 사진을제시하고있다. 사진에서보이는바와같이다양한형태의 metacercaria 가존재하며, 이들의형태는현미경관찰에의해서는 Clonorchis 사사 이논문은 2018년도국립수산과학원의수산생물방역프로그램개발 운영 (R2018065) 의지원으로수행된연구이며연구비지원에감사드립니다. 참고문헌 Cho SH, Lee KY, Lee BC, Cho PY, Cheun HI, Hong ST, Sohn WM, Kim TS. 2008. Prevalence of clonorchiasis in southern endemic areas of Korea in 2006. Korean J Parasitol 46: 133-137. Cho SH, Sohn WM, Na BK, Kim TS, Kong Y, Eom K, Seok W, Lee T. 2011. Prevalence of Clonorchis sinensis metacercariae in freshwater fish from three latitudinal regions of the Korean Peninsula. Korean J Parasitol 49: 385-398.
100 전상우 허준욱 송준영 지보영 이정호 권준영 권세련 Hong ST, Hong SJ. 2005. Clonorchis sinensis and clonorchiasis in Korea. Food-Borne Helminthiasis in Asia. Asian Parasitology 1: 35-56. Jeong YI, Shin HE, Lee SE, Cheun HI, Ju JW, Kim JY, Park MY, Cho SH. 2016. Prevalence of Clonorchis sinensis infection among residents along 5 major rivers in the Republic of Korea. Korean J Parasitol 54: 215-219. Kim EM, Kim JL, Choi SY, Kim JW, Kim S, Choi MH, Bae YM, Lee SH, Hong ST. 2008. Infection status of freshwater fish with metacercariae of Clonorchis sinensis in Korea. Korean J Paraitol 46: 247-251. Kim HK, Cheun HI, Chung BS, Lee KY, Kim TS, Lee SE, Lee WJ, Cho SH. 2010. Prevalence of Clonorchis sinensis infections along the five major rivers in Republic of Korea, 2007. Osong Public Health Res Perspect 1: 43-49. Kim SY, Hur JW, Cha SJ, Park MA, Choi HS, Kwon JY, Kwon SR. 2018. Community analysis and pathogen monitoring in wild Cyprinid fish and Crustaceans in the Geum river estuary. Korean J Fish Aquat Sci 51: 47-53. Kim TS, Cho SH, Huh S, Kong Y, Sohn WM, Hwang SS, Chai JY, Lee SH, Park YK, Oh DK, Lee JK. 2004. A nationwide survey on the prevalence of intestinal parasitic infections in the Republic of Korea, 2004. Korean J Parasitol 47: 37-47. Mun SH, Hur JW, Cha SJ, Hwang SD, Son MH, Kwon JY, Kwon SR. 2018. Monitoring pathogen infection of freshwater Cyprinid fish and crustacean in Soyang Lake in 2016. Korean J Fish Aquat Sci 51: 47-53. Rim HJ. 1986. The current pathobiology and chemotherapy of clonorchiasis. Korean J Parasitol 24: 1-141. Seo BS, Lee SH, Cho SY, Chai JY, Hong ST, Han IS, Sohn JS, Cho BH, Ahn SR, Lee SK, Chung SC, Kang KS, Shim HS, Hwang IS. 1981. An epidemiologic study on clonorchiasis and metagonimiasis in riverside areas in Korea. Korean J Parasitol 19: 137-150. Sohn WM. 2009. Fish-borne zoonotic trematode metacercariae in the Republic of Korea. Korean J Parasitol 47: 103-113. Sohn WM, Na BK, Cho SH, Park MY, Kim CH, Hwang MA, No KW, Yoon KB, Lim HC. 2017. Prevalence of Clonorchis sinensis Metacercariae in Fish from Water Systems of Seomjin-gang (River). Korean J Parasitol 55: 305-312. Sohn WM, Na BK, Cho SH, Ju JW, Son DC. 2018. Prevalence and Intensity of Clonorchis sinensis Metacercariae in Freshwater Fish from Wicheon Stream in Gunwi-gun, Gyeongsangbukdo, Korea. Korean J Parasitol 56: 41-48.