질병관리본부학술연구용역사업최종결과보고서 과제명 수행기관 / 연구책임자 인증표준물질 (CRM) 생산을위한프로토콜개발및품질확보방안연구신진메딕스 ( 주 ) 이용래 발주부서 생물안전평가과 1

목 차 Ⅰ. 연구개발결과요약문 최종결과보고서요약문 ----------------------------------------------------- 3 Summary --------------------------------------------------------------- 4 Ⅱ. 학술연구용역사업연구결과 제1장. 최종연구개발목표 제 1 절. 목 표 ------------------------------------------------------- 5 제 2 절. 목표달성도및관련분야에대한기여도 -------------------------------- 6 제 3 절. 국내 외기술개발현황 --------------------------------------------- 7 제2장. 최종연구개발내용및방법제 1 절. 적용된규정및규격 --------------------------------------------- 11 제 2 절. 연구개발내용 --------------------------------------------------- 12 제 3 절. 연구개발방법 ---------------------------------------------------- 18 제3장최종연구개발결과 제 1 절. 인증표준물질생산계획의검토 --------------------------------------- 19 제 2 절. 인증표표준물질제조를위한절차서작성 ------------------------------- 38 제 3 절. 인증표준물질개발결과 ------------------------------------------- 47 제4장연구결과고찰및결론제 1 절. 연구결과고찰및결론 ------------------------------------------- 97 제5장연구성과및활용계획 제 1 절. 연구성과 ------------------------------------------------------- 98 제 2 절. 활용계획 ------------------------------------------------------- 99 제6장기타중요변경사항 제7장연구비사용내역 ------------------------------------------------------- 100 제8장참고문헌 ------------------------------------------------------------- 101 2

과제명 중심단어 인증표준물질 (CPM) 생산을위한프로토콜개발및품질확보방안연구 인증표준물질 (CPM), 균질성, 안정성 주관연구기관신진메딕스 ( 주 ) 주관연구책임자이용래 연구기간 2012.3.16-2012.12.15 본연구는우리나라대부분의검사실정도관리또는진단제의성능평가를위하여사용되는표준물질은 WHO 표준물질을사용하고있다. 그러나이러한표준품들은구입에많은비용이소요되고특히각기관별로 2vial이상을구매할수없는단점이있어일반적인실험실이나검사실의정도관리또는진단제의질평가등에사용하기에는무리가있었다. 이에우리나라실정에적합한표준물질을개발하고생산에필요한절차및지시서작성하여그절차에따라표준물질생산하고자하였으며, 그결과를토대로인증표준물질생산기관인증을위한기초자료로활용코자하였다. HIV항원 항체인증표준물질의제조는울산대학교병원진단검사의학과에서입수한감염자 4명으로부터채혈한혈액과대한산업보건협회한마음혈액원으로부터입수한음성 25명의혈액을이용하여제조하였다. 표준품은음성, 저농도 (S/C 2~3), 중농도 (S/C 5~7), 고농도 (S/C 15~16), 양성각각 1개씩 5개를 1set를구성하여총 300set를제조하였다. 또한제조에필요한절차서 6종의개발을완료하였다. DNA 인증표준물질제조에필요한주요원료인 K562 세포주 (ATCC CCL 243) 는 American Type Culture Collection (ATCC) 에서구입하여확보하였으며, Pseudomonas aeruginosa (ATCC : 29336 ) 는 KCCM에서구입하여제조하였다. Human RM DNA 50 ng/μl 300vial과 Human-Bacteria RM DNA(1:5) 50 ng/μl 1,000vial, Human-Bacteria RM DNA(1:0.5) 50 ng/μl 1,000vial을제조하였으며, 제조에필요한절차서 6종의개발을완료하였다. 3

Title of Project Key Words Protocol development for production of certified reference material and study on quality assurance CRM, Homogeneity, Stability, Reliability Institute SHINJIN MEDICS INC. Project Leader Lee yongrae Project Period 2012. 3.16-2012. 12.15 In this study, the reference materials used for the performance evaluation of the quality assurance or diagnosis in korea's many laboratories make use of WHO standard substance. However These standards are so expensive that each organization can not purchase more than two vials. On this account, those for evaluation of the quality assurance or diagnosis in the general laboratory is not reasonable to use. Therefore, we are trying to make or develop the production of reference materials depending on Procedures and instructions suitable for this situation in Korea. On the basis of these results, we are trying to utilize a basic information for the certified reference material Production agencies. The blood needed for HIV antigen antibody certification reference material obtained from infected foul peoples in the Department of Laboratory Medicine, Ulsan University Hospital and twenty five peoples in the Hanmaum blood center, Korean Industrial Health Association. Negative reference materials are made of low concentration(s/c 2~3), mid concentration(s/c 5~7) and high concentration(s/c 15~16). Positive reference materials are manufactured total 300set consisted of one set per five. Also the six types of procedures required for the manufacturing were completed. The host(atcc CCL 243) and Pseudomonas aeruginosa(atcc:29336) as the main raw material of DNA certified reference materials needed for the manufacturing was purchased from American Type Culture Collection(ATCC) and KCMM respectively. Human RM DNA 50ng/ μl 300 vials, Human-Bacteria RM DNA(1:5) 50ng/ μl 1000 vials and Human-Bacteria RM DNA(1:0.5) 50ng/ μl are made and the six types of procedures required for the manufacturing were completed. 4

1. 인증표준물질 (CRM) 생산계획수립 연구목표대비목표달성도 : 100% 2. 인증표준물질생산 연구목표대비목표달성도 : 100% 3. 인증표준물질제조지시서작성 연구목표대비목표달성도 : 100% 6

1. 국외연구동향 7

. 2. 국내연구동향 9

KS A ISO Guide 34 : 2005; General requirements for the competence of reference material producers KS A ISO Guide 35 : 2005; Certification of reference materials-general and statical principles. KS A ISO Guide 30 : 2005; Terms and definition used in connection with reference materials KS A ISO Guide 31 : 2005; Reference material-contents of certificates and labels KS A ISO Guide 32 : 2005; Calibration in analytical chemistry and use of certified reference materials KS A ISO Guide 33 : 2005; Uses of certified materials ISO 13485 : 2003; Medical device-quality management System-Requirements for regulatory Purposes EN ISO 17511 : 2003; Invitro diagnostic medical device-measurements of quantities in biological sample-meterological traceability of values assigned to calibrators and control materials WHO 2004 ; Recommendations for the preparation, Characterization and establishment of international and other biological reference standards CLSI ISSN 2093-873X : Method comparison and Bias Estimation Using Patient Sample; Approved Guideline-Second Edition Certified Reference Material IRMM-449 Certified Reference Material IRMM/IFCC-491 Certified Reference Material IRMM-470 11

1. 인증표준물질 (CRM) 생산계획수립 가. 정도관리물질을인증물질로인증받기위한연차별생산계획수립 특성 No 성상 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot KCDC CRM B001 음성 1이하 1이하 - no band 비고 KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16이상 50이상 +++ all band 12

No 특성비고 NBK-RM-H00001 NBK-RM-HB-00001 NBK-RM-HB-00001 Human DNA quantitation standard(5μg (50ng/ul) Bacteria DNA spiked(1 : 0.5) quantitation standard(5μg (50ng/ul) Bacteria DNA spiked(1 : 5) quantitation standard(5μg (50ng/ul) 나. 생산계획에따른시험항목및시험방법제시 13

다. 수립된생산계획의검증 14

2. HIV 항원 항체인증표준물질 (CRM) 개발 가. 원료물질의개발 나. 표준물질의특성 다. 표준물질의구성 HIV 항원 항체인증표준물질은원재료로사람의혈장을비동화시킨혈청으로만든표준물질을 각 1 ml /vial/5ea/set 로구성한다. 라. 표준물질제조용원료물질 마. 표준물질보관용기 15

3. DNA 인증표준물질개발 가. 원료물질의개발 Human DNA quantitative standard 를제조하기위한원료물질을개발한다. Bacteria DNA quantitative standard 를제조하기위한원료물질을개발한다. 나. 표준품물질의특성 다. 표준품물질의구성 라. 표준물질보관용기 16

4. 인증표준물질 (CRM) 제조를위한절차서개발 원료물질 (RM: Resference Material) 채 혈및확보지시서 원료 물질분석지시서 표준물질제조지시서 표준물질제조시설환경지시서 표준물질제조안전관리지시서 표준물질포장, 보관및배포지시서 17

질병본부 생물안전평가과 연구계획의수립 사업의관리감독 관계법 제도협의 질병관리본부 에이즈 종양바이러스과 신진메딕스 ( 주 ) 진단시약연구소 질병관리본부 생물자원은행과 국가차원의 HIV감염진단표준화확립 검사능력향상관리 표준물질개발 표준물질의안정적공급 HIV Ag/Ab 표준물질개발 다량의원료물질확보 DNA외부정도평가물질제작 균질성및안정성평가 CRM 제작절차서작성 인체자원표준물질제작 숙련도시험을통한인체자원관리표준화 CRM 인증자료확보 인증표준물질 (CRM) 생산프로토콜개발 품질확보방안연구 18

1. 정도관리물질을인증물질로인증받기위한연차별생산계획수립 가. 1 차검토회의 19

다. 3 차검토회의 21

라. 4 차검토회의 22

마. 5 차검토회의 24

바. 6 차검토회의 26

사. 7 차검토회의 일자 2012.11.01 ~ 2012.11.05 과정 구성 사용시약 구성 특성 수량 ( 개 ) ELISA 수동 CLIA 확인 음성 음성 500 AVIDIA 저농도 S/C 2~3 500 Centaur Genedia R Western 중농도 S/C 5~7 500 PA (Bayer사) vironostica R blot 고농도 S/C 15~16 500 Architect 양성 양성 500 (Abbott사) 2012.11.06~9 Pilot study( 울산대 / 녹십자 / 질병관리본부 ) 제조균질성검사 2012.11.20 제조완료및보관 30

과정 일자 DNA 제작 예비실험 Spiking test, PCR 예비실험 2012.09.10 K562 cell DNA 예비배양 1주 본배양 4주 DNA제작 1주 ~2012.11.30 Bacteria cell DNA 본배양 4주 DNA제작 1주 2012.12.1~7 DNA정량및 PCR, 균질성평가, 전기영동 2012.12.7~14 배포용패널제조, 균질성및단기안정성평가 2012.12.17~20 숙련도평가시행 2012.12.24 이후 결과취합및분석 비고단기안정성평가지속단기안정성평가지속 아. 8 차검토회의 31

자. 9 차검토회의 32

온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 -75 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2-25 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 냉장 (4~6 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 실온 (18~25 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 고온 (30 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 33

2. 생산계획에따른시험항목및시험방법 가. HIV 항원 항체인증표준물질 병간균질성 병내균질성 검체수 실험수 검체수 실험수 음성 3 vial 18회 20 vial 60회 저농도 3 vial 18회 20 vial 60회 중농도 3 vial 18회 20 vial 60회 고농도 3 vial 18회 20 vial 60회 양성 3 vial 18회 20 vial 60회 합계 15 vial 90회 100 vial 300회 온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 -75 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2-25 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 냉장 (4~6 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 실온 (18~25 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 고온 (30 ) 2vial 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 34

나. DNA 인증표준물질 병간균질성 병내균질성 검체수 실험수 검체수 실험수 Human DNA 3 vial 18회 20 vial 60회 Bacteria DNA 0.5ug(5ng/ul) 3 vial 18회 20 vial 60회 Bacteria DNA 5ug(50ng/ul) 3 vial 18회 20 vial 60회 합계 9 vial 54회 60 vial 180회 Table.9 인증표준물질의안정성시험및평가방법 온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 -75 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2-25 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 냉장 (4~6 ) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 실온 (18~25 ) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 고온 (30 ) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 소계 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 합계 120 vial 35

3. 수립된생산계획의검증 가. 적절한물질선정여부검증 나. 생산측면의적절한환경유지검증 다. 물질제조과정의적합성검증 라. 측정과시험에관련된장비의보유여부확인검증 마. 교정 / 장비의유효성확인과측정방법의적합성검증 바. 균질성및안정성평가및분석방법의적합성검증 사. 협력기관들과시험소간공동작업조직의적합성검증 아. 측정결과에기초한특성값부여여부검증 자. 적합한보관시설및조건보장여부검증 차. 적합한포장시설및운반여부검증 36

카. 적절한운송조치보장검증 파. 적합한유동서비스보장검증 37

제 2 절. 인증표준물질 (CRM) 제조를위한절차서작성 원료물질 (RM: Reference Material) 채혈및확보지시서 원료물질분석지시서, 표준물질제조지시서 표준물질제조시설환경지시서 표준물질제조안전관리지시서, 표준물질포장, 보관및배포지시서 KS A ISO Guide 34 : 2005; General requirements for the competence of reference material producers KS A ISO Guide 35 : 2005; Certification of reference materials-general and statical principles. KS A ISO Guide 30 : 2005; Terms and definition used in connection with reference materials KS A ISO Guide 31 : 2005; Reference material-contents of certificates and labels KS A ISO Guide 32 : 2005; Calibration in analytical chemistry and use of certified reference materials KS A ISO Guide 33 : 2005; Uses of certified materials ISO 13485 : 2003; Medical device-quality management System-Requirements for regulatory Purposes EN ISO 17511 : 2003; Invitro diagnostic medical device-measurements of quantities in biological sample-meterological traceability of values assigned to calibrators and control materials WHO 2004 ; Recommendations for the preparation, Characterization and establishment of international and other biological reference standards 38

CLSI ISSN 2093-873X : Method comparison and Bias Estimation Using Patient Sample; Approved Guideline-Second Edition Certified Reference Material IRMM-449 Certified Reference Material IRMM/IFCC-491 Certified Reference Material IRMM-470 39

1. 원료물질채혈및확보지시서 40

2. 원료물질분석지시서 41

3. 표준물질제조지시서. 43

4. 표준물질제조실환경지시서 44

5. 표준물질제조시설안전관리지시서 45

6. 표준물질포장 보관및배포지시서 46

1. HIV 항원 항체인증표준물질 가. 원료물질의개발 47

사진 2. 혈액운송형태 나. 혈액의검사 49

검사명 검사방법 양성 음성 합계 비고 간기능검사 (ALT) * clorimetry 25 4 29 Advia 1650(Gimens, USA) HIV Ag/Ab CLIA 4 25 29 Architect (Abbott, USA) Anti-HCV CLIA 0 25 29 Architect (Abbott, USA) HBsAg CLIA 0 25 29 Architect (Abbott, USA) 다. 인증표준물질의특성 특성 No 성상 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot KCDC CRM B001 음성 1이하 1이하 - no band 비고 KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16이상 50이상 +++ all band 50

라. 표준물질분석시험 51

Table12. 각시약별반응도 구분 시약명 ELISA-Anti-HCV ELISA-HBsAg ELISA-Antibody ELI DIAKEY R Anti-HCV ELISA 시약명 DIAKEY R HBsAg ELISA 시약명 Vironostika R HIV Uni-Form Plus O 시약명 DIAKEY R Anti-HCV ELISA 신진메딕스 ( 주 ) 신진메딕스 ( 주 ) BIOMURIEUX 신진메딕스 ( 주 ) Lot E031201 Lot E011201 Lot A42LC Lot E041202 Lot Exp 2013-03 Exp 2013-05 Exp 2012-10-28 Exp June-13 Exp 검체번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Samp p12-3 0.02 0.23 >3.0 >3.0 p12-4 0.05 0.25 >3.0 >3.0 p12-5 0.01 0.26 >3.0 >3.0 p12-6 0.02 0.36 >3.0 >3.0 N1 0.12 0.28 0.17 0.25 N2 0.1 0.54 0.13 0.22 N3 0.06 0.25 0.25 0.27 N4 0.14 0.41 0.26 0.32 N5 0.13 0.26 0.23 0.17 N6 0.21 0.29 0.15 0.22 N7 0.13 0.32 0.11 0.26 N8 0.18 0.14 0.26 0.38 N9 0.08 0.19 0.35 0.15 N10 0.02 0.14 0.15 0.29 N11 0.12 0.51 0.27 0.11 N12 0.16 0.13 0.13 0.26 N13 0.11 0.45 0.14 0.18 N14 0.13 0.36 0.28 0.3 N15 0.11 0.21.21 0.23 N16 0.11 0.25 0.18 0.18 N17 0.16 0.51 0.11 0.41 N18 0.12 0.4 0.11 0.26 N19 0.15 0.46 0.51 0.31 N20 0.18 0.45 0.14 0.06 N21 0.14 0.43 0.21 0.21 N22 0.14 0.45 0.13 0.42 N23 0.05 0.24 0.16 0.31 N24 0.17 0.33 0.11 0.11 N25 0.06 0.39 0.41 0.19 시약명 52

PA Rapid SERODIA R HIV 1/2 PA SD R Bio line HIV 1/2 rapid 시약명시약명구분 Flujirebio ( 주 )SD Lot XP10809 Lot 031122A Exp 2012-07 Exp 2014-06 검체번호 HIV1/HIV2 HIV1/HIV2 p12-3 ++/- ++++/- p12-4 ++/- ++++/- p12-5 ++/- ++++/- p12-6 ++/- ++++/- N1 -/- -/- N2 -/- -/- N3 -/- -/- N4 -/- -/- N5 -/- -/- N6 -/- -/- N7 -/- -/- N8 -/- -/- N9 -/- -/- N10 -/- -/- N11 -/- -/- N12 -/- -/- N13 -/- -/- N14 -/- -/- N15 -/- -/- N16 -/- -/- N17 -/- -/- N18 -/- -/- N19 -/- -/- N20 -/- -/- N21 -/- -/- N22 -/- -/- N23 -/- -/- N24 -/- -/- N25 -/- -/- 53

CLIA HIV Ag/Ab Architect ADVIA 시약명시약명 Abbott SIEMENS 구분 Lot 17246LI00 Lot 109 Exp 2013.03.08 Exp 2012.12.05 cut-off 1.00 cut-off 1.00 검체번호 Sample OD Sample OD p12-3 양성 : 839.75 양성 : >50.00 p12-4 양성 :307.31 양성 : >50.00 p12-5 양성 :861.14 양성 : >50.00 p12-6 양성 :548.30 양성 : >50.00 N1 음성 :0.07 음성 :<0.05 N2 음성 :0.58 음성 :<0.05 N3 음성 :0.11 음성 :<0.05 N4 음성 :0.10 음성 :<0.05 N5 음성 :0.69 음성 :<0.05 N6 음성 :0.07 음성 :<0.05 N7 음성 :0.11 음성 :<0.05 N8 음성 :0.15 음성 :<0.05 N9 음성 :0.19 음성 :<0.05 N10 음성 :0.14 음성 :<0.05 N11 음성 :0.18 음성 :<0.05 N12 음성 :0.52 음성 :<0.05 N13 음성 :0.34 음성 :<0.05 N14 음성 :0.26 음성 :<0.05 N15 음성 :0.11 음성 :<0.05 N16 음성 :0.17 음성 :<0.05 N17 음성 :0.23 음성 :<0.05 N18 음성 :0.39 음성 :<0.05 N19 음성 :0.31 음성 :<0.05 N20 음성 :0.28 음성 :<0.05 N21 음성 :0.31 음성 :<0.05 N22 음성 :0.34 음성 :<0.05 N23 음성 :0.14 음성 :<0.05 N24 음성 :0.16 음성 :<0.05 N25 음성 :0.24 음성 :<0.05 54

구분 Western blot 반응 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p17 판정 p12-3 +++ +++ +++ - +++ +++ +++ ++ ++ positive p12-4 +++ +++ +++ - ++ +++ +++ +++ ++ positive p12-5 +++ +++ +++ - +++ +++ +++ + ((+)) positive p12-6 +++ +++ +++ - +++ +++ + ++ +++ positive N-1 - - - - - - - - - negative N-2 - - - - - - - - - negative N-3 - - - - - - - - - negative N-4 - - - - - - - - - negative N-5 - - - - - - - - - negative N-6 - - - - - - - - - negative N-7 - - - - - - - - - negative N-8 - - - - - - - - - negative N-9 - - - - - - - - - negative N-10 - - - - - - - - - negative N-11 - - - - - - - - - negative N-12 - - - - - - - - - negative N-13 - - - - - - - - - negative N-14 - - - - - - - - - negative N-15 - - - - - - - - - negative N-16 - - - - - - - - - negative N-17 - - - - - - - - - negative N-18 - - - - - - - - - negative N-19 - - - - - - - - - negative N-20 - - - - - - - - - negative N-21 - - - - - - - - - negative N-22 - - - - - - - - - negative N-23 - - - - - - - - - negative N-24 - - - - - - - - - negative N-25 - - - - - - - - - negative Standard from Criteria USA ASTPHLD, CDC USA FDA recommend Biotech/Du pont. CO. HIV Diagnosis USA Red Cross REDS(Retrovirus Epidemiology Donor Study) p24, gp41, gp120-160 more than 2 band p24, p31, gp41 more than gp120-160 at least one band of ech products of gap, pol and envgene, more than 3 band more than 2 band of p24 or p31 and gp41 or gp120-160 WHO more than 2 band of env 56

마. HIV 항원 항체인증표준물질의제조 57

결과 Genedia R HIV Ag/Ab 1차 2차 3차 cut-off OD S/C cut-off OD S/C cut-off OD S/C 100 0.220 5.041 22.9 0.222 5.120 23.1 0.221 5.231 23.7 500 0.220 2.869 17.6 0.222 3.854 17.3 0.221 3.870 17.6 600 0.220 3.450 15.7 0.222 3.465 15.6 0.221 3.424 15.5 800 0.220 3.040 13.8 0.222 3.012 13.6 0.221 3.110 14.1 1000 0.220 2.601 11.8 0.222 2.601 11.7 0.221 2.634 11.9 2000 0.220 1.312 6.0 0.222 1.345 6.1 0.221 1.381 6.3 3000 0.220 0.623 2.8 0.222 0.648 2.9 0.221 0.659 3.0 60

결과 Genedia R HIV Ag/Ab SERODIA R HIV 1/2 PA Vironostika R HIV Uni-Form Plus O S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 1회 2.9 6.3 15.5 ± + +++ 2.6 4.9 15.3 2회 2.9 6.2 15.5 ± + +++ 2.6 5.1 15.6 3회 2.9 6.3 15.0 ± + +++ 2.7 4.8 15.8 4회 2.9 6.1 15.4 ± + +++ 2.6 4.9 15.1 5회 3.0 6.2 15.4 ± + +++ 2.9 5.2 15.3 Mean 2.93 6.22 15.4 ± + +++ 2.68 4.98 15.4 SD 0.33 0.57 0.19 ± + +++ 0.13 0.16 0.23 CV 1.11 0.92 1.24 ± + +++ 4.86 3.30 1.80 결과 Genedia R HIV Ag/Ab 저농도 중농도 고농도 cut-off OD S/C cut-off OD S/C cut-off OD S/C 0.223 0.621 2.8 0.223 1.362 6.1 0.223 3.412 15.3 0.223 0.623 2.8 0.223 1.381 6.2 0.223 3.398 15.2 0.223 0.645 2.9 0.223 1.366 6.1 0.223 3.345 15.0 0.223 0.625 2.8 0.223 1.385 6.2 0.223 3.521 15.8 0.223 0.633 2.8 0.223 1.369 6.1 0.223 3.516 15.8 Mean 0.629 2.822 Mean 1.373 6.155 Mean 3.438 15.419 SD 0.010 0.044 SD 0.010 0.044 SD 0.077 0.347 CV 1.563 1.563 CV 0.722 0.722 CV 2.248 2.248 결과 Architect (Abbott A Promise Lfe Co, USA) ADVIA Centaur(Bayer Co, Germany) 저농도 중농도 고농도 저농도 중농도 고농도 1회 1.52 11.0 35.91 2.2 4.49 13.42 2회 1.56 10.7 35.69 2.3 4.43 13.39 3회 1.6 10.8 37.14 2.3 4.61 13.34 4회 1.53 10.6 36.22 2.4 4.55 13.52 5회 1.55 10.7 36.59 2.3 4.15 13.56 Mean 1.55 10.72 36.31 2.29 4.44 13.45 SD 0.03 0.15 0.57 0.50 0.18 0.09 CV 2.00 1.39 1.59 2.19 4.01 0.68 62

No 성상 특성 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot 비고 KCDC CRM B001 음성 1 이하 1 이하 - no band KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5 이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50 이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16 이상 50 이상 +++ all band 64

구분 시약명 신진메딕스 ( 주 ) ( 주 ) 녹십자MS ELISA-Ag/.Ab ELISA-Antibody Rapid PA ELISA-Ag/.Ab SD Genedia R3 Vironostika R Genedia R Bio line HIV 시 HIV 시시 Seordia R HIV 시약 HIV 1/2 Ag/Ab 약 Uni-Form 시약약명 3.0 multi 약 HIV-1/2 Ag/Ab ELISA Plus O 명명명명 ELISA 녹십자 ( 주 ) BIOMURIEUX ( 주 ) SD FUJIREBIO ( 주 ) 녹십자 Lot 149C0011 Lot A42LC Lot 031122A Lot 테 10809 Lot 149C0011 Exp 2013-06 Exp 2012-10-28 Exp 2014.06.24 Exp 2012-07 Exp 2013-06 표준품번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off +/- HIV/HIV2 Sample OD/Cut-off KCDC CRM B001 0.043/0.215 0.063/0.163 - -/- 0.013/0.210 KCDC CRM B002 0.630/0.215 0.424/0.163 - ±/- 0.621/0.210 KCDC CRM B003 1.337/0.215 0.812/0.163 - +/- 1.312/0.210 KCDC CRM B004 >3.0/0.215 2.510/0.163 + ++/- >3.0/0.210 KCDC CRM B005 >3.0/0.215 >3.0/0.163 + +++/- >3.0/0.210 65

구분 시약명 시약 명 분주후 신진메딕스 ( 주 ) ( 주 ) 녹십자 MS 울산대학교 ELISA-Ag/.Ab ELISA-Antibody Rapid PA ELISA-Ag/.Ab Architect Centaur Genedia R3 HIV Ag/Ab ELISA 시약 명 Vironostika R HIV Uni-Form Plus O 시약 명 SD Bio line HIV 1/2 3.0 multi 시약 명 Seordia R HIV-1/2 시약 명 Genedia R HIV Ag/Ab ELISA 시약명 Abbott 시약명 SIMEN 녹십자 ( 주 ) BIOMURIEUX ( 주 ) SD FUJIREBIO ( 주 ) 녹십자 Lot 17246LI00 Lot 109 Lot 149C0011 Lot A42LC Lot 031122A Lot XP10809 Lot 149C0011 Exp 2013.03.08 Exp 2012.1 Exp 2013-06 Exp 2012-10-28 Exp 2014.06.24 Exp 2012-07 Exp 2013-06 cut-off 1.00 cut-off 1.0 표준품번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off +/- HIV/HIV2 Sample OD/Cut-off Sample OD Sample OD KCDC CRM B001 KCDC CRM B002 KCDC CRM B003 KCDC CRM B004 KCDC CRM B005 0.023/0.228 0.051/0.161 - -/- 음성 :0.13 음성 :0.13 음성 :<0.05 0.692/0.228 >3.0/0.161 - ±/- 양성 : 1.62 양성 : 1.62 양성 :2.36 1.411/0.228 0.056/0.161 - +/- 양성 : 10.15 양성 : 10.15 양성 :4.68 >3.0/0.228 >3.0/0.161 + ++/- 양성 : >3.0 양성 : >3.0 양성 :14.30 >3.0/0.228 0.051/0.161 + +++/- 양성 : >3.0 양성 : >3.0 양성 :>50.00 66

* 물질에대한생산기관의코드 음성 KCDC CRM B001 B : Blood products( 혈액제제 ) 저농도 KCDC CRM B002 C : indicator chemicals for clinical 중농도 KCDC CRM B003 diagnosis ( 임상화학지표물질 ) 고농도 KCDC CRM B004 양성 KCDC CRM B005 * 배치번호 (Lot No.) 2012년 11월 5일날생산, 총생산 Vial 500개라면 Lot No. 121105 11104(500-1) 표준물질인증제도운영세칙 [ 별표 4] 표준물질의분류중분류 (111. 이상및생화학물질 ) 소분류 (04. 혈액제제 67

표준품 No KCDC CRM B001 KCDC CRM B002 KCDC CRM B003 KCDC CRM B004 KCDC CRM B005 vial 1 vial 2 vial 3 구분 상부 하부 상부 하부 상부 하부 횟수 S/C S/C cut-off OD OD OD 1 0.26 0.26 0.25 0.26 0.24 0.26 2 0.25 0.25 0.25 0.26 0.23 0.25 3 0.25 0.25 0.26 0.25 0.25 0.25 Mean 0.253 0.253 0.254 0.256 0.239 0.251 SD 0.007 0.007 0.005 0.005 0.007 0.005 CV 2.811 2.811 2.112 0.181 2.976 1.852 1 2.93 2.95 2.95 2.95 2.96 2.95 2 2.91 2.97 2.97 2.95 2.95 2.98 3 2.94 2.94 2.98 2.96 2.96 2.95 Mean 2.929 2.953 2.967 2.957 2.957 2.960 SD 0.019 0.014 0.017 0.005 0.006 0.017 CV 0.661 0.472 0.565 0.182 0.195 0.585 1 6.35 6.21 6.20 6.26 6.17 6.27 2 6.23 6.32 6.24 6.26 6.15 6.29 3 6.27 6.33 6.24 6.28 6.24 6.30 Mean 6.282 6.287 6.226 6.267 6.188 6.287 SD 0.061 0.068 0.023 0.015 0.048 0.016 CV 0.978 1.078 0.368 0.239 0.768 0.260 1 15.9 15.8 15.6 15.6 15.3 15.85 2 15.3 15.8 15.9 15.2 15.7 15.2 3 15.6 15.4 15.1 15.3 15.3 15.6 Mean 15.6 15.6 15.5 15.6 15.4 15.6 SD 0.300 0.231 0.404 0.351 0.231 0.379 CV 1.920 1.474 2.602 2.256 1.496 2.422 1 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 2 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 3 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 Mean #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! SD #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! CV #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! 69

KCDC CRM B0001 KCDC CRM B0002 KCDC CRM B0003 Source of variation Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Sum of squares DF Mean square Sum of squares DF Mean square Sum of squares 0.0002333 2 0.0001167 0.0268 2 0.0134 0.007811 2 0.00 0.0008167 15 5.444E-05 0.0038 15 0.0002533 0.04002 15 0.00 DF Me squ Total 0.00105 17 0.0306 17 0.04783 17 F-ratio 2.143 2.895 1.464 Significance level P=0.152 P=0.258 P=0.263 Factor n Mean n Mean n Mean (1) 10 6 0.2533 6 2.94 6 6.285 (2) 11 6 0.255 6 2.96 6 6.246 (3) 12 6 0.2467 6 2.96 6 6.236 70

구분 표준품 KCDC DRM 001 KCDC DRM 002 KCDC DRM 003 KCDC DRM 004 KCDC DRM 005 시험수 S/C S/C S/C S/C S/C 1 0.25 2.96 6.58 15.6 >3.0 vial 1 2 0.25 2.96 6.53 15.9 >3.0 3 0.24 2.95 6.66 15.3 >3.0 1 0.23 2.93 6.64 15.2 >3.0 vial 2 2 0.25 2.83 6.25 15.6 >3.0 3 0.25 2.76 6.38 15.4 >3.0 1 0.24 2.93 6.67 15.6 >3.0 vial 3 2 0.25 2.96 5.97 15.1 >3.0 3 0.25 2.94 6.25 15.8 >3.0 1 0.25 2.96 6.23 15.6 >3.0 vial 4 2 0.24 2.95 6.41 15.3 >3.0 3 0.24 2.85 6.61 15.7 >3.0 1 0.25 2.91 6.52 15.3 >3.0 vial 5 2 0.25 2.84 5.96 15.3 >3.0 3 0.25 2.93 6.66 15.8 >3.0 1 0.23 2.95 6.48 15.6 >3.0 vial 6 2 0.24 2.92 6.51 15.6 >3.0 3 0.25 2.92 6.38 15.6 >3.0 1 0.23 2.92 6.46 15.4 >3.0 vial 7 2 0.25 2.93 6.55 15.1 >3.0 3 0.24 2.93 6.49 15.9 >3.0 1 0.23 2.93 6.28 15.6 >3.0 vial 8 2 0.25 2.94 6.53 15.6 >3.0 3 0.25 2.95 6.17 15.8 >3.0 1 0.23 2.93 6.63 15.8 >3.0 vial 9 2 0.24 2.87 6.55 15.6 >3.0 3 0.24 2.93 6.59 15.1 >3.0 1 0.24 2.95 6.48 15.3 >3.0 vial 10 2 0.24 2.86 6.51 15.9 >3.0 3 0.25 2.95 6.52 15.9 >3.0 1 0.25 2.89 6.09 15.7 >3.0 vial 11 2 0.25 2.95 6.45 15.8 >3.0 3 0.23 2.93 6.38 15.3 >3.0 1 0.25 2.89 6.41 15.6 >3.0 vial 12 2 0.25 2.89 6.29 15.2 >3.0 3 0.25 2.91 6.33 15.9 >3.0 1 0.24 2.89 6.52 15.9 >3.0 vial 13 2 0.25 2.96 6.28 15.6 >3.0 3 0.25 2.81 6.29 15.3 >3.0 1 0.23 2.95 6.19 15.8 >3.0 vial 14 2 0.25 2.87 6.23 15.4 >3.0 3 0.24 2.88 6.41 15.1 >3.0 1 0.25 2.91 6.27 15.9 >3.0 vial 15 2 0.24 2.93 6.22 15.8 >3.0 3 0.24 2.56 6.38 15.9 >3.0 1 0.25 2.92 6.31 15.3 >3.0 vial 16 2 0.25 2.87 6.12 15.2 >3.0 3 0.23 2.68 6.67 15.1 >3.0 1 0.25 2.84 5.96 15.3 >3.0 vial 17 2 0.24 2.67 6.18 15.8 >3.0 3 0.24 2.95 6.45 15.4 >3.0 1 0.25 2.96 6.25 15.8 >3.0 vial 18 2 0.25 2.94 6.29 15.9 >3.0 3 0.24 2.96 5.99 15.9 >3.0 1 0.24 2.96 6.15 15.3 >3.0 vial 19 2 0.25 2.84 6.64 15.8 >3.0 3 0.25 2.81 6.53 15.1 >3.0 1 0.24 2.94 6.51 15.6 >3.0 vial20 2 0.24 2.82 6.48 15.4 >3.0 3 0.25 2.93 6.44 15.3 >3.0 Mean 0.244 2.898 6.386 15.545 #DIV/0! SD 0.007 0.077 0.190 0.270 #DIV/0! CV 2.942 2.664 2.982 1.738 #DIV/0! 72

Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) 0.00064 19 0.00003368 0.0024 40 0.00006 Total 0.00304 59 F-ratio 0.561 Significance level P=0.911 73

Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) 0.1185 19 0.006235 0.2331 40 0.0.005827 Total 0.3515 59 F-ratio 1.07 Significance level P=0.414 74

Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) 0.7495 19 0.03945 1.3903 40 0.03476 Total 2.1398 59 F-ratio 0.135 Significance level P=0.357 75

Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) 1.3885 19 0.07308 2.92 40 0.073 Total 4.3085 59 F-ratio 1.001 Significance level P=0.480 76

보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc 0.011 0.011 0.009 0.009 nc 0.008 0.008 0.015 0.015 nc 0.011 0.011 0.018 0.018 Mean NC 0.01 0.01 0.014 0.014 Ab-PC 1.749 1.749 1.788 1.788 Ag-PC 1.822 1.822 1.804 1.804 cut-off 0.21 0.21 0.214 0.214 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5 S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S 1 0.07 23.6 2.29 5.13 15.1 0.10 22.8 2.17 5.16 15.9 0.07 22.4 2.39 5.31 15.5 0.08 22.3 2.23 5. 2 0.08 22.5 2.17 5.21 15.1 0.10 22.9 2.21 5.22 15.0 0.07 22.2 2.39 5.29 15.2 0.08 22.3 2.14 5. 3 0.08 22.8 2.28 5.03 15.3 0.11 23.4 2.12 5.05 15.2 0.07 22.0 2.28 5.36 15.3 0.07 22.5 2.15 5. Mean 0.07 22.9 2.24 5.12 15.1 0.10 23.0 2.17 5.14 15.3 0.07 22.2 2.35 5.32 15.3 0.08 22.4 2.17 5. SD 0.00 0.56 0.06 0.08 0.09 0.00 0.31 0.04 0.08 0.45 0.00 0.17 0.06 0.03 0.16 0.00 0.12 0.04 0. CV 3.46 2.45 2.94 1.72 0.61 2.58 1.37 2.19 1.67 2.96 3.68 0.79 2.69 0.71 1.05 3.26 0.54 2.24 2. 1 0.08 22.8 2.16 5.16 15.5 0.08 23.8 2.27 5.17 15.1 0.08 22.0 2.27 5.31 15.1 0.07 22.5 2.17 5. 2 0.08 23.2 2.08 5.14 15.1 0.08 23.7 2.22 5.07 15.1 0.08 22.2 2.31 5.35 15.8 0.07 21.3 2.11 5. 3 0.08 23.7 2.09 5.04 15.3 0.09 23.7 2.34 5.19 15.5 0.08 22.2 2.23 5.45 15.5 0.08 21.5 2.22 5. Mean 0.08 23.2 2.11 5.11 15.3 0.08 23.7 2.28 5.14 15.2 0.08 22.1 2.27 5.37 15.4 0.08 21.8 2.17 5. SD 0.00 0.43 0.04 0.06 0.18 0.00 0.05 0.05 0.06 0.26 0.00 0.15 0.04 0.07 0.35 0.00 0.60 0.05 0. CV 0.00 1.86 2.14 1.27 1.18 3.14 0.23 2.51 1.22 1.73 3.14 0.68 1.74 1.35 2.27 3.33 2.79 2.58 0. 78

보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc 0.012 0.013 0.012 0.021 nc 0.013 0.014 0.018 0.019 nc 0.012 0.016 0.017 0.018 Mean NC 0.012 0.014 0.016 0.019 Ab-PC 1.754 1.756 1.791 1.802 Ag-PC 1.835 1.831 1.813 1.823 cut-off 0.212 0.214 0.216 0.219 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5 S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S 1 0.09 22.9 2.14 5.01 15.1 0.10 22.7 2.13 5.16 15.9 0.06 21.9 2.36 5.15 15.5 0.07 21.5 2.22 5 2 0.08 22.6 2.17 5.12 15.2 0.11 23.1 2.09 5.18 15.7 0.07 22.3 2.44 5.26 15.3 0.08 21.3 2.24 5 3 0.08 22.4 2.22 5.20 15.4 0.11 22.9 2.06 5.08 15.4 0.07 22.0 2.42 5.29 15.4 0.08 22.2 2.16 5 Mean 0.09 22.6 2.18 5.11 15.2 0.10 22.9 2.09 5.14 15.6 0.07 22.1 2.41 5.23 15.4 0.08 21.7 2.21 5 SD 0.00 0.23 0.04 0.10 0.14 0.01 0.22 0.04 0.06 0.24 0.00 0.19 0.04 0.07 0.09 0.00 0.44 0.04 0 CV 3.15 1.00 1.86 1.89 0.89 5.17 0.98 1.67 1.08 1.51 3.94 0.84 1.79 1.39 0.56 3.46 2.03 2.03 1 1 0.08 22.9 2.09 5.06 15.1 0.10 23.2 2.18 5.15 15.6 0.07 22.3 2.28 5.26 16.0 0.08 22.0 2.17 5 2 0.08 22.5 2.12 5.02 15.1 0.10 23.3 2.15 5.06 15.9 0.08 21.8 2.33 5.30 15.8 0.08 21.1 2.24 5 3 0.08 22.6 2.11 5.23 15.3 0.11 23.0 2.08 5.24 15.7 0.07 22.2 2.23 5.46 15.7 0.08 21.5 2.21 5 Mean 0.08 22.7 2.11 5.10 15.2 0.10 23.2 2.14 5.15 15.7 0.08 22.1 2.28 5.34 15.8 0.08 21.5 2.21 5 SD 0.00 0.19 0.02 0.11 0.14 0.01 0.17 0.05 0.09 0.18 0.00 0.27 0.05 0.11 0.16 0.00 0.44 0.04 0 CV 3.27 0.85 0.78 2.22 0.91 6.84 0.72 2.36 1.77 1.16 3.53 1.24 2.14 1.99 0.98 3.27 2.06 1.77 2 79

보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc 0.015 0.021 0.012 0.016 nc 0.011 0.018 0.017 0.015 nc 0.016 0.015 0.016 0.017 Mean NC 0.014 0.018 0.015 0.016 Ab-PC 1.732 1.755 1.791 1.797 Ag-PC 1.845 1.816 1.821 1.821 cut-off 0.214 0.218 0.215 0.216 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5 S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S 1 0.08 22.4 2.23 5.07 15.3 0.10 22.3 2.18 5.16 15.5 0.08 22.4 2.35 5.17 15.3 0.10 22.8 1.90 4 2 0.08 22.5 2.18 5.15 15.4 0.09 22.0 2.22 5.25 15.6 0.07 22.3 2.32 5.10 15.5 0.09 21.1 2.17 6 3 0.08 22.0 2.20 5.21 15.8 0.10 22.0 2.15 5.03 15.3 0.08 22.0 2.38 5.36 15.8 0.10 22.9 2.06 6 Mean 0.08 22.3 2.20 5.14 15.5 0.09 22.1 2.18 5.15 15.5 0.08 22.2 2.35 5.21 15.5 0.10 22.3 2.04 5 SD 0.00 0.29 0.03 0.07 0.29 0.01 0.15 0.03 0.11 0.14 0.00 0.20 0.03 0.13 0.27 0.01 1.00 0.13 0 CV 3.27 1.29 1.28 1.37 1.87 7.39 0.68 1.59 2.14 0.88 3.46 0.91 1.30 2.55 1.76 7.39 4.51 6.59 1 1 0.08 22.5 2.14 5.02 15.4 0.09 22.5 2.14 5.29 15.8 0.08 22.7 2.42 5.52 15.9 0.09 20.9 1.88 5 2 0.08 22.9 2.22 5.20 16.0 0.08 22.3 2.20 5.40 15.6 0.08 22.2 2.39 5.34 15.6 0.11 22.5 1.84 4 3 0.08 22.8 2.19 5.08 15.8 0.09 22.7 2.21 5.34 15.4 0.08 22.7 2.47 5.37 15.6 0.10 22.7 2.11 6 Mean 0.08 22.7 2.18 5.10 15.7 0.09 22.5 2.18 5.35 15.6 0.08 22.5 2.43 5.41 15.7 0.10 22.0 1.94 5 SD 0.00 0.23 0.04 0.09 0.30 0.00 0.22 0.03 0.06 0.20 0.00 0.26 0.04 0.10 0.17 0.01 0.99 0.14 0 CV 3.33 1.01 1.83 1.82 1.92 5.26 0.96 1.59 1.03 1.29 3.27 1.15 1.73 1.77 1.09 9.52 4.49 7.35 1 80

보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc 0.016 0.016 0.012 0.016 nc 0.014 0.015 0.016 0.015 nc 0.012 0.014 0.015 0.014 Mean NC 0.014 0.015 0.014 0.015 Ab-PC 1.769 1.755 1.792 1.756 Ag-PC 1.852 1.809 1.824 1.834 cut-off 0.214 0.215 0.214 0.215 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 5-7 15 N P 2-3 S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C 1 0.08 22.7 2.27 5.15 15.5 0.09 22.4 2.27 5.11 15.4 0.08 22.4 2.17 5.12 15.3 0.10 18.9 3.03 6 2 0.08 22.0 2.18 5.02 15.9 0.08 22.6 2.23 5.14 15.8 0.07 22.4 2.13 5.16 15.1 0.08 22.1 2.32 4 3 0.08 22.5 2.22 5.07 15.4 0.08 23.1 2.20 5.00 15.6 0.08 22.0 2.22 5.11 15.5 0.10 19.8 2.38 4 Mean 0.08 22.4 2.22 5.08 15.6 0.09 22.7 2.23 5.08 15.6 0.08 22.3 2.17 5.13 15.3 0.09 20.3 2.58 5 SD 0.00 0.33 0.04 0.06 0.27 0.00 0.34 0.04 0.07 0.21 0.00 0.20 0.04 0.02 0.19 0.01 1.67 0.39 1 CV 3.27 1.47 2.00 1.25 1.75 3.15 1.52 1.67 1.45 1.37 3.46 0.89 2.04 0.48 1.22 10.2 8.25 15.2 2 1 0.08 22.6 2.18 5.09 15.9 0.09 23.1 2.24 5.06 15.6 0.09 22.2 2.20 5.16 15.4 0.10 19.3 2.90 5 2 0.08 22.3 2.25 5.15 15.6 0.08 22.7 2.20 5.18 15.9 0.08 22.4 2.21 5.08 15.2 0.49 23.1 2.45 4 3 0.08 22.9 2.29 5.03 15.2 0.09 22.8 2.30 5.15 15.5 0.09 22.0 2.24 5.23 15.3 0.32 21.1 1.85 6 Mean 0.08 22.6 2.24 5.09 15.6 0.09 22.9 2.25 5.13 15.7 0.09 22.2 2.22 5.15 15.3 0.30 21.2 2.40 5 SD 0.00 0.28 0.06 0.06 0.38 0.00 0.24 0.05 0.06 0.20 0.00 0.22 0.02 0.08 0.09 0.20 1.86 0.53 1 CV 3.27 1.26 2.53 1.19 2.41 3.09 1.05 2.31 1.18 1.28 3.09 0.98 1.11 1.49 0.61 65.1 8.80 21.8 1 81

2. DNA 인증표준물질개발결과 가. 물질제조전준비사항 82

나. 인증제조의제조 83

Human RM DNA Human-Bacteria RM DNA (1:5) Human-Bacteria RM DNA (1:0.5) 농도 50ng/ul 50ng/ul 50ng/ul 1vial당함량 100ul 100ul 100ul human 세포 K562 세포주 K562 세포주 K562 세포주 균주 무포함 P.aeruginosa P.aeruginosa K562 세포수 : 균수혼합비율 1:0 1:5 1:0.5 제조 vial 300 vial 1000 1000 Human RM DNA Human-Bacteria RM DNA (1:5) Human-Bacteria RM DNA (1:0.5) 측정 vial 수 20 20 20 vial 당측정회수 3 3 3 Ct 평균 (20 3=60 회 )/CV % 29.9/1.8 예정예정 85

Human RM DNA Bacteria DNA (1:5) Bacteria DNA (1:0.5) 생물자원은행과 원광대학교 생물자원은행과 원광대학교 생물자원은행과 원광대학교 균질화 20 20 제외 제외 안정성 82 40 82 40 제외 제외 숙련도 20 보관 140 890 1000 합계 222 80 972 1000 다. 균질화평가 86

K562 real time PCR Starting Quantity(SQ) SQ Mean SQ Std. Dev C(t)-Thresh oldcycle C(t) Mean C(t) Std Dev Log Starting Quantity mean(60)ng/ul 76 76 19 29.9 29.9 0.3 1.8 sd(60) 29 23 11 0.5 0.4 0.3 0.2 cv(%) 39 31 59 1.87 1.3 99.4 11.7 mean(20)ng/ul 76 76 19 29.9 29.9 0.3 1.8 sd(20) 24 24 11 0.4 0.4 0.3 0.2 cv%(20) 31 31 60 1.3 1.3 101.1 8.9 NTC N/A N/A 0 36.15 36.15 0 N/A NTC N/A N/A 0 33.51 33.51 0 N/A 6.25(K562 DNA) 6.25(K562 DNA) 12.5(K562 DNA) 12.5(K562 DNA) 6.3 6.3 0 32.71 32.71 0 0.796 6.3 6.3 0 32.15 32.15 0 0.796 12.5 12.5 0 31.78 31.78 0 1.097 12.5 12.5 0 31.49 31.49 0 1.097 25(K562 DNA) 25 25 0 31.34 31.34 0 1398 25(K562 DNA) 25 25 0 30.89 30.89 0 1.398 50(K562 DNA) 50 50 0 30.16 30.16 0 1.699 50(K562 DNA) 50 50 0 29.86 29.86 0 1.699 100(K562 DNA) 100 100 0 29.4 29.4 0 2 100(K562 DNA) 100 100 0 29.16 29.16 0 2 200(K562 DNA) 200 200 0 28.11 28.11 0 2.301 200(K562 DNA) 200 200 0 29.65 29.65 0 2.301 400(K562 DNA) 400 400 0 27.72 27.72 0 2.602 400(K562 DNA) 400 400 0 28.4 28.4 0 2.602 0101 74 7 29.79 29.92 0.113 1.868 0102 60 7 30.01 29.92 0.113 1.78 0103 63 66 7 29.97 29.92 0.113 1.796 0201 72 66 27 29.82 29.82 0.386 1.856 0202 50 66 27 30.21 29.82 0.386 1.698 0203 104 75 27 29.43 29.82 0.386 2.016 0301 135 75 39 29.16 29.52 0.453 2.131 0302 110 75 39 29.38 29.52 0.453 2.04 0303 59 101 39 30.03 29.52 0.453 1.772 0401 74 101 10 29.8 29.71 0.124 1.867 0402 75 101 10 29.77 29.71 0.124 1.876 0403 91 80 10 29.57 29.71 0.124 1.959 0501 61 80 23 29.98 29.73 0.292 1.789 0502 73 80 23 29..8 29.73 0.292 1.864 0503 106 80 23 29.41 29.73 0.292 2.024 0601 56 59 2 30.08 30.03 0.035 1.751 0602 60 59 2 30.01 30.03 0.035 1.777 0603 60 59 2 30.02 30.03 0.035 1.776 87

0701 64 74 20 29.95 29.81 0.263 1.804 0702 97 74 20 29.5 29.81 0.263 1.987 0703 62 74 20 29.97 29.81 0.263 1.795 0801 65 76 15 29.92 29.77 0.204 1.815 0802 94 76 15 29.54 29.77 0.204 1.972 0803 70 76 15 29.86 29.77 0.204 1.842 0901 91 99 31 29.57 29.52 0.318 1.958 0902 73 99 31 29.8 29.52 0.318 1.865 0903 133 99 31 29.17 29.52 0.318 2.124 1001 148 106 38 29.06 29.46 0.376 2.169 1002 97 106 38 29.51 29.46 0.376 1.986 1003 73 106 38 29.81 29.46 0.376 1.861 1101 90 87 24 29.58 29.65 0.308 1.955 1102 109 87 24 29.38 29.65 0.308 2.038 1103 61 87 24 29.98 29.65 0.308 1.789 1201 141 121 26 29.11 29.29 0.246 2.15 1202 91 121 26 29.57 29.29 0.246 1.958 1203 130 121 26 29.2 29.29 0.246 2.113 1301 110 115 8 29.37 29.32 0.072 2.043 1302 125 115 8 29.24 29.32 0.072 2.095 1303 111 115 8 29.36 29.32 0.072 2.045 1401 50 64 12 30.19 29.95 0.209 1.703 1402 72 64 12 29..81 29.95 0.209 1.859 1403 70 64 12 29.85 29.95 0.209 1.844 1501 74 74 7 29.79 29.79 0.1 1.869 1502 81 74 7 29.69 29.79 0.1 1.91 1503 67 74 7 29.89 29.79 0.1 1.827 1601 68 40 32 29.88 30.94 1.509 1.831 1602 47 40 32 30.28 30.94 1.509 1.668 1603 5 40 32 32.67 30.94 1.509 0.681 1701 36 41 9 30.55 30.42 0.222 1.555 1702 52 41 9 30.16 30.42 0.222 1.716 1703 36 41 9 30.54 30.42 0.222 1.56 1801 35 49 14 30.57 30.25 0.304 1.546 1802 62 49 14 29.97 30.25 0.304 1.795 1803 50 49 14 30.2 30.25 0.304 1.701 1901 72 41 19 29.82 30.22 0.381 1.856 1902 47 51 19 30.27 30.22 0.381 1.672 1903 35 51 19 30.58 30.22 0.381 1.543 2001 48 55 8 30.25 30.12 0.147 1.68 2002 53 55 8 30.15 30.12 0.147 1.722 2003 63 55 8 29.96 30.12 0.147 1.8 2101 45 64 16 30.3 29.97 0.287 1.657 2102 74 64 16 29.79 29.97 0.287 1.87 2103 71 64 16 29.83 29.97 0.287 1.853 2201 91 64 26 29.57 29.88 0.443 1.959 2202 42 72 26 30.39 29.88 0.443 1.624 2203 83 72 26 29.68 29.88 0.443 1.917 88

2301 58 72 34 30.05 31.86 3.176 1.763 2302 61 40 34 30 31.86 3.176 1.782 2401 75 40 41 29.78 29.53 0.404 1.873 2402 77 100 41 29.75 29.53 0.404 1.885 2403 147 100 41 29.07 29.53 0.404 2.168 2501 100 93 6 29.47 29.55 0.067 2 2502 92 93 6 29.56 29.55 0.067 1.964 2503 88 93 6 29.6 29.55 0.067 1.946 K562 cell DNA양 (ng/ul) 230 260 270 280 330 260/280 260/230 mean(60) 5.27 0.50 1.01 0.80 0.47 0.00 2.13 2.01 sd(60) 1.00 0.04 0.02 0.02 0.03 0.01 0.09 0.13 cv%(60) 2.00 7.53 1.98 2.91 5.68-298.44 4.06 6.31 mean(20) 50.27 0.50 1.01 0.80 0.47 0.00 2.13 2.01 sd(20) 0.83 0.003 0.02 0.02 0.02 0.00 0.06 0.08 cv%(20) 1.64 5.44 1.63 2.19 3.94-159.32 2.63 4.07 0101 52.5 0.53 1.05 0.869 0.575 0.008 1.83 1.98 0102 50.1 0.49 1.002 0.792 0.481 0.001 2.08 2.04 0103 51.4 0.5 1.029 0.835 0.499 0.006 2.06 2.06 0201 50.8 0.523 1.015 0.823 0.502 0.001 2.02 1.94 0202 51.1 0.617 1.022 0.799 0.484-0.001 2.11 1.66 0203 50.5 0.498 1.011 0.817 0.49 0.002 2.06 2.03 0301 50.6 0.511 1.012 0.799 0.472-0.011 2.14 1.98 0302 51 0.59 1.02 0.806 0.478-0.006 2.13 1.73 0303 52.9 0.565 1.058 0.846 0.515 0.003 2.05 1.87 0401 50.1 0.512 1.001 0.797 0.485-0.003 2.07 1.95 0402 49.6 0.628 0.992 0.783 0.464-0.01 2.14 1.58 0403 49 0.484 0.981 0.772 0.446 0.001 2.2 2.03 0501 51.4 0.512 1.028 0.831 0.511 0.002 2.01 2.01 0502 50.2 0.443 1.004 0.772 0.472-0.006 2.13 2.27 0503 49.6 0.498 0.992 0.794 0.476 0.002 2.09 1.99 0601 51.3 0.495 1.026 0.831 0.523-0.001 1.96 2.07 0602 49.5 0.447 0.99 0.781 0.462 0 2.14 2.22 0603 50 0.521 0.999 0.797 0.475 0.003 2.1 1.92 0701 49.7 0.509 0.995 0.78 0.442-0.011 2.25 1.95 0702 50.3 0.46 1.007 0.801 0.496 0 2.03 2.19 0703 49.7 0.504 0.994 0.797 0.477 0.003 2.09 1.97 0801 49 0.478 0.98 0.767 0.443 0 2.21 2.05 0802 50.2 0.457 1.005 0.797 0.475-0.003 2.11 2.2 0803 48.7 0.488 0.974 0.774 0.448-0.003-2.17 1.99 0901 49.9 0.503 0.997 0.798 0.469 0.004 2.13 1.98 0902 50.3 0.453 1.006 0.79 0.464-0004 2.17 2.22 0903 49.1 0.494 0.983 0.786 0.459 0.003 2.14 1.99 89

1001 50.9 0.51 1.018 0.82 0.502 0.001 2.03 2. 1002 50.4 0.46 1.008 0.792 0.471-0.01 2.14 2.19 1003 48.8 0.48 0.976 0.773 0.437-0.002 2.23 2.03 1101 51 0.515 1.02 0.8 0.461 0.003 2.21 1.98 1102 51.8 0.514 1.035 0.821 0.501 0.002 2.07 2.01 1103 50.6 0.513 1.012 0.806 0.463-0.001 2.19 1.97 1201 51.9 0.535 1.037 0.829 0.499-0.006 2.08 1.94 1202 52.4 0.519 1.047 0.836 0.506 0.006 2.07 2.02 1203 52.1 0.548 1.042 0.836 0.508 0.011 2.05 1.9 1301 51.1 0.536 1.022 0.812 0.473-0.001 2.16 1.91 1302 51.2 0.564 1.023 0.807 0.469-0.006 2.18 1.82 1303 51.2 0.547 1.024 0.817 0.491 0.009 22.09 1.87 1401 50.2 0.51 1.055 0.793 0.473 0.001 2.12 1.97 1402 49.9 0.463 0.998 0.772 0.431-0.018 2.32 2.16 1403 50.6 0.518 1.012 0.806 0.483 0.012 2.1 1.95 1501 49.8 0.48 0.996 0.786 0.454-0.016 2.19 2.08 1502 50.2 0.469 1.004 0.777 0.447-0.004 2.25 2.14 1503 50.5 0.52 1.009 0.803 0.477-0.003 2.12 1.94 1601 49.1 0.476 0.983 0.772 0.443-0.015 2.22 2.07 1602 50.1 0.466 1.001 0.79 0.476-0.003 2.1 2.15 1603 50.5 0.519 1.01 0.809 0.483 0.005 2.09 1.95 1701 49.5 0.483 0.99 0.783 0.458-0.009 2.16 2.05 1702 50.3 0.467 1.006 0.793 0.466-0.002 2.16 2.15 1703 48.6 0.481 0.972 0.752 0.408-0.013 2.38 2.02 1801 49.2 0.476 0.984 0.77 0.439-0.007 2.24 2.07 1802 50 0.463 1.001 0.788 0.47-0.007 2.13 2.16 1803 48.7 0.48 0.974 0.769 0.446 0 2.19 2.03 1901 49.1 0.476 0.982 0.764 0.434-0.012 2.26 2.06 1902 49.7 0.474 0.994 0.779 0.453-0.006 2.19 2.1 1903 50.4 0.522 1.008 0.815 0.489 0 2.06 1.93 2001 49.1 0.495 0.982 0.771 0.444-0.012 2.21 1.98 2002 49.6 0.461 0.993 0.782 0.468-0.005 2.12 2.15 2003 49 0.492 0.979 0.775 0.459 0.005 2.13 1.99 2101 50.9 0.527 1.017 0.81 0.495 0.002 2.05 1.93 2102 51.2 0.498 1.025 0.817 0.49-0.006 2.09 2.06 2103 49.9 0.509 0.997 0.798 0.471 0.003 2.12 1.96 2201 50.3 0.507 1.006 0.794 0.483-0.007 2.08 1.98 2202 50.9 0.501 1.019 0.811 0.49-0.003 2.08 2.03 2203 50.1 0.505 1.002 0.799 0.468 0.001 2.14 1.98 2301 50.2 0.503 1.005 0.804 0.49-0.001 2.05 2 2302 50.7 0.488 1.015 0.825 0.446-0.007 2.03 2.08 2303 49.5 0.498 0.989 0.78 0.428-0.001 2.22 1.99 2401 48.5 0.463 0.969 0.756 0.428-0.015 2.26 2.09 2402 50.8 0.498 1.017 0.831 0.508 0.006 2 2.04 2403 50.4 0.523 1.009 0.812 0.495 0.005 2.04 1.93 2501 50.3 0.373 1.005 0.798 0.464-0.012 2.17 2.7 2502 52.1 0.396 1.041 0.847 0.512 0.006 2.03 2.63 2503 50.4 0.404 1.008 0.804 0.647-0.002 2.16 2.49 90

라. 안정성평가 93

사진 13. 1 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 사진 14. 2 주차 사진 15. 2 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 94

사진 16. 4 주차 사진 17. 4 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 95

번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 국내 / 국제 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류. 언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 97

해당사항없음 99

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