대한임상병리사회지 : 제 19 권제 l 호 1987 소아의혈청단백분획치 (Agarose gel 법 ) 아산재단부속보려병원임상병리과 서덕규, 이재헥, 최영션, 백병윤 The Reference Values of Serum Protein Fraction of Children Duck Kyu Seo, J ae Hyeok Lee, Y oung Sun Choi, Byung Yun Bak Department 01 Clinical Pathology, Bo-Ryong Hospital = Abstract 二 A study was carried out to compare an agarose gel electrophoresis for the protein fractions with the other reported reference values. Authors analyzed the serum protein fraction of 136 subjects by method of agarose gel electrophoresis from january 1986 to march 1987. The results were as table 1, 2, and 3. 1. 서론획치는성인성적치와차이가있지않을까항시유 혈청단백분획치에관한정상치보고는비교적일았다. 념하여왔던차에비교할기회를가져조사하여보 찍부터오랫동안실시되어왔었다. 이와같은검사성 적은주기적으로경제적생활여건향상에따라그 성적치변동이보고되어야바람직하나임상적으로 자주실시되는 zone electrophoresis 법에대한발표 가많지는않다. 이와같은결과에는여러가지여건 이 있을것으로생각되지만우선생각되는것이지 지체 (supporting media) 종류의다양성에수반되는 성적차이, 전기영동에사용되는전기영동기계및영 동조작변화등이측정성적에영향을끼쳐서채용술 식에따라서특유의참고치를정하여야하는어려움 등이존재할수있다고보기때문이아닌가추측된 다. 근래에는임상환자검사법으로서는거의가 zone electrophoresis 법 i 로 100-200 volt 를사용하고지 지체로서는 cellulose acetate (Titan III plate 등 )1) 빛 agarose film 2 ) 이이용되고염색색소는 Ponceau S dye 가쓰인다고보았기때문에본인등 은 agarose film 을사용하고 Ponceau S dye 를이용 하는소아참고치를구하여보았다. 소아의단백분 1. 검사대상 11. 검사대상및분석방법 대상인원은 1986 년 1 월부터 1987년 3 월 31 일까지신생아에대해서는보령병원에내원하여입원한정상분만산모에게서출생한 1-3 일된정상선생아의비용혈모셰관족지혈액에서분리한혈청 15 례와건강상담및예방접종을목적으로내원한 1 개월내지 6 세미만영소아로서보령병원및지역소아과전문의원에내원한 81례의소아대상에서얻은모세혈관비용혈혈청과만 6 셰이상만 11세미만의국민학교학동에게서채혈한정맥혈혈청 40례로써총합계 136례에대한성적을구하였다. 2. 혈첨단백측정혈청단백측정은 Biuret법을이용하여정량하였 -129-
다. 표준단백으로서는 Versat 이의혈청단백량을기장높아지는경향을보였음은다른보고와 5.6.7.8) 같은 준으로측정하였다 3) 결과였다. Beta-globulin 에대해서는백분율상약간의변화 3. 혈첨단백분획정량가인정되지만전체대상군에서통계적으로유의한 혈청단백전기영동은 tris-barbital buffer 액을사 용한 agarose gel zone electrophoresis 를실시하였 다. 각분획의백분율은 Coming 720 fluorometer / densitometer 의 520nm 파장을사용하여 densitogram 을구하였고이백분율에의해 total serum protein 량에서각분획의단백농도를계산하였다 4) 1". 검사성적및고찰 검사대상의연령별 total protein 량은 table 1 과 같다. 정상성인의혈청단백참고치와단백분획백 분율및 g/dl 농도는저자등이발표한 7. 199m::!:O. 47 (X::!:2SD) 와 agarose gel 전기영동볍 4) 에서 albumin 61. 9::!:7.58%(4.45::!:O.55g/dl), alpha 1-globulin 3.1::t l. 26% (0.22 ::t O. 09g/dl), alpha 2-g1obulin, 7. 6::t 3. 00% (0. 55 ::t 0. 22g/dl), beta-globulin 9.3:!:3.42% (0.67::!:O.25g/dl) 빛 gamma-globulin 18. 1 ::!: 5. 26 % (1.30 ::t 0. 38g/ dl) 와 비교하여보았다. 신생아의혈청만백량은낮은농도를나타냈지만정상산모가성인여자의참고치 7.21::!:O.47g/dl보 다낮은이유에서일것이다. 농도는성장함에따라 상승되어만 7 세 -10 세에는통계적으로성인치와 유사하게상승되어감을나타내었다. Albumin 은백분율에서만은유의한차이를인정 할수없었지만 (P>0.05), 농도 (g/dl) 에있어서는 신생아때부터만 8 세미만때까지유의한감소 (P<0.05) 가인정되었다. 8 셰이후는성인치와의유의차가인정되지않았 다. 이는혈청단백량의변동과연관된결과를나타 내는것이였다 (Table 1, 2, 3). Alpha 1-g1obulin 은백분율에있어서는조사대 상계층전례에서유의한증가를나타냈지만 g/dl 농도에서는유의한차이가인정되지않았다. 즉백 분율에서는상승되지만농도상에는차이가없다고 보겠다 (Table 2, 3). Alpha 2-g1obulin 은백분율에서출생초기에는 유의차가인정되지않다가 1 개월이후 8 세때까지 는유의적증가가인정되고다시 9 세때이후는성 인치에이르는변화를보이고있다. g/dl 농도상에 는통계적유의차를인정할수없는결과를나타내 었다. 특히 127>> 월에가까와짐에따라백분율상가 차이가인정되지않았다. 또한 g/dl 농도상에셔도 유의한차이가없음은 table 3 에나타난바와같다. Gamma-globulin 에대하여셔는백분율상출생초 에는유의차가없으나 (P>0.05) 1 개월이후 6 세 까지유의한감소를보이고 (P <0.05) 다시 7 셰이 후는성인의백분율에유사한성적을나타내였다 (P<0.05). g/dl 농도에셔는출생후만 6 세까지유의한감 소를보이다가 (P<0.05) 만 7 세부터는성인과의 유의적차이플나타내지않아성인치에접근해감을 보였다 전반적으로볼때 albumin 은 g/dl 농도상낮아졌 다. 상승되는추세를보이고 alpha 1- 빛 alpha 2-g1obulin 은백분율상유의한증가를보이고 gamma-globulin 은백분율및 g/dl 농도상다같이 감소되었다가연령이증가함에따라성인치에유사 해지는양상을보였다. 소아단백의전기영동상참고치들은성인참고치 를구하는것보다는대단히어려움이많다. 이러한 여건이기에우리나라어린이들의참고치보고는펙 드물어서朴等 5) 이보고한성적을볼수있고이보 고와의비교에서혈청단백증감경향이저자동의조 Table 1. Serum protein values of the children serum proteín difference Age group N :!:2. SD. g/dl between adults New bom 15 5.37:!: l. 73 P<0.05 (1-3 days) 1-4 months 6 5.67::t 2.48 P<O.Ol 5-8 months 8 6. 06 ::t 0. 96 P<0.05 9-12 months 11 6.42 ::t1. 24 P<O.Ol 1 -( 2 years 12 6. 30 ::t 0. 80 P<0.05 2 -( 3 years 14 6.57::!:O.80 P<0.05 3-( 4 years 7 6.76::t 2.28 P<0.05 4 -( 5 years 12 6.39:!: 1. 00 P<0.05 5 -( 6 years 11 6. 7l ::!:O. 94 P<0.01 6-( 7 years 14 6. 51 ::t 1. 06 P<0.05 7 -( 8 years 12 6. 58 ::t 1. 04 P<0.05 8-( 9 years 6 6.71::t 0.94 P<0.05 9-( 10 years 4 6.73::t 3.42 P<0.05 10 -( 11 years 4 7. 33 ::t 1. 24 P<0.05-130-
Table 2. The serum protein fraction percents of children Age group N Albumin alpha 1-g1ob. alpha 2-g1ob. beta-glob. gamma-glob. New bom 15 62.8 ::t 5.04 4.3::t1. 26* 7.7::t 1. 68 9. 2::t 3.98 16. O::t 5.00 1-4M 6 63.1 ::t 4.06 4. 4::t 1. 86* 11. 0 ::t 4. 98 * 10. 6::t 4.16 10. 9::t 7. 08 * 5-8M 8 62.4 ::t 7. 42 4. 2::t 1. 28* 12.6::t 5.68* 10. 3::t 2. 60 10.5::t 5.28* 9-12M 11 59. 5::t 5. 82 4. 3::t 2. 04 * 12.6::t 4. 04* 10.5::t 2.82 13.1::t 5.84 * 1-<2Y 12 62.2::t 6.12 3.91:1. 76* 11.5::t 3.36* 9.8::t 3.96 12.6::t 4.10* 2-<3Y 14 60. O::t 7. 64 4.3::t1. 40* 10. 9::t 3. 94* 10.5::t 3.02 14.3::t 4.10* 3-<4Y 7 60. 7::t 5. 74 4. 2::t 1. 24 * 9. 8::t 3. 44 * 11. 6::t 3. 54 13.7::t 4.14* 4-<5Y 12 59. 7::t 5. 70 4.2::t1. 10* 9.6::t 3.72* 11.4::t 4.32* 15. 1 ::t 5. 12 * 5-<6Y 11 59.4 ::t 5.62 4.2:f0.76* 11. 3::t 3. 94* 10. 6::t 3.68 14. 5::t 3. 94 * 6-<7Y 14 58.4::t 6.40* 4. 3::t 2.12* 10.3::t 5.10* 11. 2::t 3. 90 * 15.8::t 6.90 7-<8Y 12 59.5::t 7.42 4.0::t1. 40* 11.0::t 4.24* 10.2 ::t 2. 98 * 15. 3::t 6. 90 8-<9Y 6 58.71: 6.66 4.5::t1. 46* 10.6::t 5.40* 10.3::t 2.70 15.9::t 6.26 9-<10Y 4 58.9::t 6.42 4. 2::t 0. 78* 10.4::t 4.18 10. 0 ::t 3. 68 16.5::t 5.92 10- <11Y 4 57.2 ::t 7.62 4. O::t 1. 36* 10.4 ::t 5. 98 11. 1::t 3. 78 17. 3::t 6. 54 *t-test : difference between adults and children values. *P <.05 Mean::t 2 SD Table 3. The serum protein fraction values of children (g/100 ml) Age group N Albumin alpha 1-g1ob. alpha 2-g1ob. beta-glob. gamma-glob. New born 15 3.372 ::t 0.271 * 0.231::t 0.0568 O. 413 ::t 0. 090* 0.494::t 0.214 O. 859 ::t 0.269* 1-4M 6 3.578 ::t 0.229* 0.249::t 0.105 o. 624 ::t 0. 280 0.601 ::t 0.234 0.618 ::t 0.399* 5-8M 8 3.781::t 0.450* O. 255 ::t 0.078 0.764 ::t 0.344 0.624::t 0.158 0.636::t 0.320* 9-12M 11 3.820 ::t 0.374* 0.276::t 0. 131 O. 809 ::t 0.259* 0.674::t 0.181 0.841 ::t 0.375* 1-<2Y 123.919::t 0.386* O. 246 ::t 0.111 0.725 ::t 0.212 0.617::t 0.249 0.794 ::t 0.258* 2-<3Y 143.942::t 0.502* o. 283 ::t 0. 092 0.716::t 0.259 0.690::t 0.1980.940::t 0.269* 3-<4Y 7 4.103::t 0. 388 o. 284 ::t 0. 084 o. 662 ::t 0. 233 0.784 ::t 0.239 O. 926 ::t 0.280* 4-<5Y 12 3.815::t 0.364* o. 268 ::t 0. 070 0.613::t 0.238 O. 728 ::t 0. 276 o. 965 ::t 0. 327* 5-<6Y 11 3. 986 ::t 0. 377* 0.282 ::t 0.051 o. 758 ::t 0. 264 O. 711 ::t 0. 247 O. 973 ::t 0. 264 * 6-<7Y 14 3.802 ::t 0.417* o. 280 ::t 0. 138 0.671::t 0.332 o. 729 ::t 0. 254 1. 029 ::t 0. 211 * 7-<8Y 123.915::t 0.488* o. 363 ::t 0. 092 0.724::t 0.279 0.671::t 0.196 1. 007 ::t 0.454 8-<9Y 6 3.939::t 0. 447 o. 302 ::t 0. 098 0.711::t 0.362 0.691::t 0.181 1. 067 ::t 0.420 9- <10Y 4 3.964::t 0. 432 O. 283 ::t 0.052 0.700::t 0.281 O. 673 ::t 0. 248 1. 110 ::t 0. 398 10-<nY 44.193::t 0.559 O. 293 ::t 0.100 0.762::t 0.438 o.814 ::t 0. 277 1. 268 ::t 0.479 *t-test : difference between adults and children values. *P <.05 Mean::t 2 SD 사와유사하였으나약 0.3-0.4g/dl 정도낮게측정 되었음은아마도 refractometer 법과 Biuret 법간의 차이때문으로보아야되리라고본다. 혈청만백에 관한비교는이외에도수많은보고가있으나단백분 획에치중한다는면에서그이상의비교는하지않 았다. Cellulose acetate 천기영동법에의한백분율 에서구한 5) albumin, alpha 1-g1obulin, alpha 2- globulin 에대한 g/dl 는유사하였으며 beta-globulin 은저자등의성적보다 0.25g/dl 가량높은성척을 나타내었다. 이조사연도와저자등의조사연도와 는 12 년간의간격이있는점도고려되어야되겠다. Richard, B6) 등의기록과정상참고치폭이넓기는 하지만저자등의성적과유사하며 Kempe7) 등의성 적과도유사하여차이를볼수없었다. -131-
河合忠等 8) 의 cellulose acetate (Separax -S) 에 의한성적은 total protein 농도에서유사하였으나 albumin 의백분율과 g/dl 농도에서저자등의성적 보다 4% 빛 O.4g/dl 높았으며 alpha 1-g1obulin 은 1% 빛 O.07g/dl 정도낮았고 alpha 2-g1obulin 과 beta-globulin 은백분율과 g/dl 농도에서다같이유 사한성적이였다. Gamma-globulin 은백분율과 g/ dl 농도에서다같이저자등의성적보다 2-3% 빛 O.2g/dl 가량낮았다. 이와같은결과는지지체로서 쓰이는 Separax-S 와 agarose gel 과의차이때문이 아닌가생각된다. 소아참고치를찾아보기가쉽지 않으므로이미발표된성적을연도와더불어보기 편리하게정리하여개재하는것이도움이될것으로 여겨설었다 (Table 5, 6, 7, 8). IV. 결론 건강소아에대한 protein agarose electrophoresis 를 1986 년 1 월부터 1987 년 3 월까지실시하여각 분획의참고치를 table 2 빛 3 과같이얻었다. 만백 분획농도는영양상태, 생활환경향상등에따라변 하고특히 gamma-globulin 농도는문화수준과연 관된다는조사도있어서주기적조사통계가필요하 며이에대한검토를하여보았다. 참고문헌 1. Tipton Golias : Helena electrophoresis manual, 1976-1979. Table 4. The protein fraction values of children (g/dl) 1975 박찬걸, 이경순에셔유도함. Age group N Serum Albumin :t SE alpha 2-glob. alpha 2-golb. beta-glob :t SE gamma-glob Protein :t SE :t SE :t SE :t SE :t SE New born (1-7d.) 73 6.76 :t 0.304 3.48:t 0.194 0.31 :t 0.021 0.54 :t 0.03 0.89 :t 0.070 1.535 :t 0.070 1-2M 62 5.96 :t 0.233 3.32 :t 0.140 0.235 :t 0.011 0.66 :t 0.045 0.90 :t 0.063 0.88 :t 0.085 3-5M 69 6.53 :t 0.233 3.54 :t 0.131 0.34 :t 0.068 0.84 :t 0.054 0.96 :t 0.060 0.94 :t 0.05 6-8M 53 6.71 :t0.283 3.55 :t 0.171 0.29 :t 0.021 0.87 :t 0.052 1.03 :t 0.072 0.98 :t 0.070 9-11M 60 6.875 :t 0.251 3.67-0.15 0.30 :t 0.038 0.89 :t 0.054 0.995 :t 0.071 1.035 :t 0.065 12-17κt 60 6.88 :t 0.262 3.76 :t 0.286 0.28 :t 0.044 0.865 :t 0.057 0.9oo :t 0.04 1.035 :t 0.075 18-23M 44 6.87 :t 0.345 3.71 :t 0.221 0.27 :t 0.029 0.845 :t 0.061 0.98 :t 0.07 1.097 :t 0.096 2-3Y 60 6.99 :t 0.262 3.74 :t 0.189 0.28 :t 0.025 0.825 :t 0.040 0.94 :t 0.04 1. 15 :t 0.078 4-6Y 77 7.23 :t 0.697 4.14 :t 0.134 0.25 :t 0.022 0.78 :t 0.036 0.97 :t 0.110 1. 18 :t 0.050 7-8Y 60 7.45 :t 0.365 4.19 :t 0.200 0.25 :t 0.02 0.755 :t 0.036 0.93 :t 0.054 1.265 :t 0.092 9-11Y 62 7.465 :t 0.270 4.18 :t 0.170 0.28 :t 0.02 0.75 :t 0.046 0.93 :t 0.059 1.32 :t 0.06 Table 5. The reference values of children protein fraction 1983. from N elson Text book of Pediatrics Serum protein Electrophoresis reference g/dl range albumin alpha l-g1ob. alpha 2-g1ob. beta-glob. gamma-glob. Premature 4.3-7.6 Premature 3.0-4.2 0.1-0.5 0.3-0.7 0.3-1.2 0.3-1.4 New born 4.6-7.4 New born 3.6-5.4 0.1-0.3 0.3-0.5 0.2-0.6 0.2-1.0 Child 6.2-8.0 Infant 4.0-5.0 0.2-0.4 0.5-0.8 0.5-0.8 0.3-1.2 Thereafter 3.5-5.0 0.2-0.3 0.4-1.0 0.5-1.1 0.7-1.2 Table 6. Proteins in serum (values are for cellulose electrophoresis and are in g/dl. 1984. from Kempe. Silver. 0 brien Current Pediatric Diagnosis &: Treatment 8th ed. Age group Total prtein albumin alpha l-g1ob. alpha 2-g1ob. beta-glob. gamma-glob. At birth 4.6-7.0 3.2-4.8 0.1-0.3 0.2-0.3 0.3-0.6 0.6-1.2 3 months 4.5-6.5 3.2-4.8 0.1-0.3 0.3-0.7 0.3-0.7 0.2-0.7 1 year 5.4-7.5 3.7-5.7 0.1-0.3 0.5-1. 1 0.4-1.0 0.2-0.9 4 years 5.9-8.0 3.8-5.4 0.0-0.3 0.4-0.8 0.5-1.0 0.4-1.3-132-
m 생Table 7. Separax-S 천기영동엽에의한혈청단백분획치의소아정상치 1978 : 河合忠 等 연령예수 1-4 4 5-8 7 9-12 2 10 2 2 3 10 4 5 5 9 6 7 7 4 8 4 9 5 10-12 10 TP 단핵분획비 (%) 단핵분획농도 (g/dl) (g/d) alb 01 02 N Y alb 01 02 6.2 65.1 2.2 10.2 12.4 9.5 4.01 0.17 0.63 0.78 0.61 :t 0.5 :t 10.3 :t 2.3 :t 2.1 :t 5.4 :t 8.1 :t 0.11 :t 0.03 :t0.20 :t 0.40 :t 0.60 6.0 61.2 3.5 14.1 9.2 6.2 3.81 0.21 0.83 0.55 0.38 :t 1.2 :t 13.4 :t 3.6 :t 2.1 :t 2.4 :t 4.8 :t 0.72 :t 0.24 :t 0.21 0.20 :t 0.38 6.1 68.7 2.6 11.6 9.7 7.6 4.19 0.16 0.71 0.59 0.47 :t 0.2 :t 0.1 :t 0.4 :t 0.7 :t 2.1 :t 1.9 :t 0.38 :t 0.02 :t 0.16 :t0.l0 :t 0.04 6.6 68.3 3.4 11.9 10.2 8.9 4.31 0.20 0.83 0.64 0.59 :t 1.0 :t 8.9 :t 1.0 :t 5.0 :t 2.4 :t 0.2 :t 0.0 :t 0.12 :t 0.30 :t 0.18 :t 0.33 6.5 68.3 3.4 11.9 10.2 10.9 4.42 0.21 0.77 0.70 0.76 :t 0.6 :t 1.0 :t 1. 7 :t 3.7 :t 0.9 :t 5.5 :t 0.40 :t 0.03 0.20 :t 0.22 :t 0.45 6.9 64.5 3.0 11.2 10.2 11.0 4.14 0.21 0.70 0.61 0.70 :t 0.9 :t 7.8 :t 1.3 :t 2.7 :t 2.6 :t 2.8 :t 0.45 :t 0.10 :t 0.30 :t 0.16 :t 0.25 6.4 65.2 3.3 10.9 9.6 11.4 4.64 0.20 0.63 0.65 0.85 :t 0.9 :t 6.5 :t 1. 1 :t 3.6 :t 1.9 :t 3.5 :t 0.92 :t 0.08 :t 0.20 :t 0.20 :t 0.42 7.0 66.0 3.0 9.8 9.6 11.7 4.44 0.21 0.77 0.64 0.84 :t 1.2 :t 6.7 :t 0.7 :t 2.4 :t 1.6 :t 2.9 :t 0.53 :t 0.16 :t 0.32 :t0.20 :t 0.23 6.9 64.8 3.0 11.2 9.3 11.2 4.50 0.22 0.79 0.67 0.77 :t 0.6 :t 8.4 :t 2.3 :t 4.1 :t 2.5 :t 1.5 :t 0.45 :t 0.05 :t 0.20 :t0.18 :t 0.10 7.0 64.8 3.1 11.4 9.6 14.0 4.43 0.23 0.72 0.78 1.00 :t 0.3 :t 1.3 :t 0.8 :t 2.5 :t 1.5 :t 3.6 :t 0.42 :t 0.08 :t 0.18 :t 0.10 :t 0.24 7.2 61.9 3.2 10.5 11.0 14.0 4.43 0.23 0.72 0.78 1.00 :t 0.3 :t 4.3 :t 0.8 :t 2.5 :t 1.5 :t 3.6 :t 0.42 :t 0.08 :t 0.18 :t 0.10 :t0.24 6.9 62.4 2.1 9.8 8.8 13.9 4.28 0.14 0.63 0.64 0.97 :t 1.2 :t l 1. 1 :t 1. 1 :t 3.6 :t 2.9 :t 5.3 :t 0.78 :t 0.08 :t 0.28 :t 0.28 :t 0.55 7.1 61.7 3.0 10.5 10.1 14.7 4.35 0.21 0.74 0.71 1.05 :t 1.4 :t 6.1 :t 1.7 :t 3.4 :t 2.0 :t 5.8 :t 0.83 :t 0.12 :t 0.28 :t0.20 :t 0.52 Y (M ::t 2 SD) 2. Corning Medical: Protein chemistry te - 에관하여. 대한임상병리사회지 7 : 48, 1975. chnical information manual procedures, 6. Richarde, B., Victorc, V., Waldoe, N. 1978-1979. N elson textbook of pediatrics 12th ed. W. 3. Gornall, A. G., Bardawill, C. J., and B. Saunders Co. 1983. David, M. M. : Determination of serum proteins by means of Biuret reaction. J. Biol. Chem., 177: 751, 1949. 4. 徐德授 : 血淸蛋白의 Agarose Gel 電氣泳動法 의普遍化試圖빛이方法에依한農村成 A 正 常 { 直. 臨皮病理와精度管理, 5: 67, 1983 5. 朴贊杰, 李景順 : 韓國健康小兒의血淸蛋白分劃 7. Kempe, C. H., Silver, H. K., and 0 Brien, D. : Current Pediatric diagnosis & treatment 8th ed. Lange Medical publications. 1984. 8. 河合忠, 淸木行生 : Cellulose acetate 電氣泳動 法에의한血淸蛋白分劃宇富堂入本書店, 1978.