J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 DOI:http://dx.doi.org/10.5010/JPB.2014.41.1.56 ISSN 1598-6365 Research Article 분자표지를활용한고품질가공용고순도무품종육성 정운화 오종혁 김영규 안춘희 이광식 최수련 임용표 박수형 최기영 이용범 Development of highly uniform variety for processing using SSR markers in radish (Raphanus sativus L) Un-Hwa Jung Jong-Hyuck Oh Young-Gyu Kim Chun-Hee Ahn Kwang-Sik Lee Su-Ryun Choi Yong-Pyo Lim Su-Hyoung Park Ki-Young Choi Yong-Beom Lee Received: 20 March 2014 / Revised: 22 March 2014 / Accepted: 26 March 2014 c Korean Society for Plant Biotechnology Abstract Using commercial radish varieties for processing, about 30% of radish was discarded due to the root shape and low purity. To raise the processing ability, we tried to develop a new variety producing H-shaped root. As another characteristic required in variety for processing is high purity, we tried to raise purity using simple sequence repeats (SSR) markers for testing seed purity in every segregating generation. To develop Male-sterile (MS) seeding parent, we crossed commercial variety of Gwan dong spring and Gyeo ryong spring. One elite inbred was selected as recurrent parent for the MS plant. The major horticultural traits of selected inbred line were disease resistance, late U.-H. Jung J.-H. Oh Y.-G. Kim C.-H. Ahn K.-S. Lee 농업회사법인 ( 주 ) 코레곤 (Breeding&Research Institute, Koregon Co.,LTD, Anseong Center 60-34, Gokcheon-gil, Bogae-Myeon, Anseong-Si, Gyeonggi-Do, 456-871, Korea) S.-R. Choi Y.-P. Lim 충남대학교원예학과 (Department of Horticulture, Chungnam National University, Daejeon 305-764, Korea) S.-H. Park 국립원예특작과학원 (Dept. of Horticultural Crop Research, NIHHS, Suwon 440-706, Korea) K.-Y. Choi 강원대학교시설농업학과 (Department of Protected Agriculture, Kangwon National University, Chuncheon 200-701, Korea) Y.-B. Lee ( ) 서울시립대학교환경원예학과 (Department of Environmental Horticulture, The University of Seoul, Seoul 130-743, Korea) e-mail: hydropo@uos.ac.kr bolting, heat resistance and bright green root top color. To develop pollen parent, we crossed commercial variety of Tae sang king and Seoul spring. We used individual selection method to develop H-shaped hard root and disease resistant inbred. In each segregating generation, we selected one plant based on phenotype and the uniformity of selected plant was tested by SSR markers using self-pollinated seeds. In the first segregating generation, 64.6% of sib plants shared the same band in PCR amplification using ACMP-490 primer and 66.7% using cnu-316 primer. The uniformity of segregating generations using ACMP-490 and cnu-316 raised in second generation to 68.8%, 70.8%, respectively; in third generation to 93.8%, 100%; in fourth generation to 93.8%, 100%; in fifth generation to 95.8%, 100%; in sixth generation to 100%, 100%. A novel cross was made using selected MS parent and pollen parent. When we checker the horticultural traits using autumn cultivation, the novel cross variety produced H-shaped root comparing other commercial varieties and produced highly uniform radish. Thus we registered this novel cross variety as YR ORE at 2013 (Registration No. 4550). Keywords 서언 Radish, Processing, SSR, Markers, Uniformity 무는배추과채소로원산지는중국, 지중해연안, 서아시아, 코카서스남부로부터팔레스타인에이르는지방으로추정되고있으며우리나라에는통일신라시대이전에도입되어재배되었을가능성이있다고한다.
J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 57 무는약 94% 가수분이며단백질, 지질, 당질, 섬유질, 비타민, 철, 마그네슘, 칼슘, 매운맛등다양한성분을가지고있는채소이다 (Mather 1977). 무의매운맛을내는것은여러가지유황화합물이원인이고무를먹고트림을하면불쾌한냄새가나는데이는메칠메르캡탄이라는유기화합물에의한것이다. 무에는소화에관련된여려가지효소를많이가지고있는데그중가장대표적인것으로는전분가수분해효소인아밀라제 (amylase) 를들수있다. 비타민 A, B 1, B 2, C 가함유되어있고부위에따라그함량이많이다른데잎에는비타민 A 가시금치보다많지만뿌리에는전혀없고, 비타민 C 는어느부위에나함유되어있어다른채소류보다는비교적많은편이다. 무의용도는깍두기, 김치, 쌈무, 단무지, 무국, 무찜, 무조림, 무말랭이, 생선회받침용, 씨래기등다양하게이용되는식재료로우리식생활에서매우중요한부분을차지하고있으며서양에서는 20 일무등을사용하여샐러드용으로사용되기도하고독일등에서는맥주안주로도사용되기도한다. 국내가공식품회사에서연간사용하는가공용쌈무는가을무와봄무를합하여약 2 만 5 천톤정도이며, 쌈무소비시장은다양한제품출시로인하여소비가활성화되어 2~3 년후에는약 4 만톤의쌈무소비시장으로성장할것으로업계에서는추정하고있다. 지금까지의쌈무는무를일자형으로가공하는초기가공과정에서 30% 의가공손실이발생되고있는실정이며국내에서가장규모가큰가공회사의경우쌈무를만들고난자투리는연간 3 억을들여지정업체에폐기물처리하게되어있어가공에적합하도록짧게형성되는품종의개발이요구되고있는현실이다. 무의육종방법은전통육종법에서사용하는성숙모본선발방법에의한즉, 세대진전중인분리계통들을원하는재배작형 (cultivation type) 에공시하여분리 (F 1 F 7) 세대동안선발계의자식계 (selfing line) 를매년파종하여재배하면서완전하게자란무개체들중목적형질을보유한개체를계통으로육성하는방법이가장일반적으로사용되고있다. 그런데육성된계통의순도검정은대부분표현형에의하여선발이되므로일대잡종품종을만들경우순도가낮아지는문제가간혹발생된다. 최근육종학에서중요한부분을차지하고있는분자생물학적 (molecular biological) 마커검정은주요채소작물에서활발히연구되어발표되고있으나육성된무계통의순도검정에활용가능한분자표지관련보고는거의없는실정이다. 최근배추에서개발된 simple sequence repeats (SSR) 마커를무에적용하여유전적다양성을해석한보고가있다. 무는배추와같은배추과에속하며유전적으로가까운배추의농업및학문적중요성으로인해국제배추과유전체프로젝트 (Multinational Brassica Genome Project, MBGP) 가활발히진행되어방대한유전체정보가제공되었으며, 이들정보의이용도가능하게되었다 (Mun et al. 2009, 2010). 배추에서이미보고된유전자지도에는대량의 SSR 마커정보가집적되어있으며 (Kim et al. 2006, 2009; Li et al. 2010; Ramchiary et al. 2011), 최근배추유전체에대한초안이발표되어분자마커의개발에도활용이가능하다 (Wang et al. 2011). SSR 마커는 microsatellite 이라고도하는데 1-6 개의염기서열이단위로하여반복되어존재하는염기서열을의미하는것으로, 반복염기서열부위에인접한염기서열을탐침으로이용하여 PCR (polymerase chain reaction) 반응하였을때반복횟수의차이에의해나타나는다형성을분석한다. 이는유전체에다수가있고유전체전반에걸쳐고르게분포하며개체간의다형성정도가크게나타나는특성이있으며, RAPD 나 AFLP 방법보다실험과정이간단하며공우성으로나타나데이터의정확성이높고, 실험결과에있어재현성이매우높은것으로알려져있다 (Ishii et al 2001; Richards and Sutherland 1994). 본연구에서는가공하기유리한형태의무를효과적으로육성하기위해선발과정에서전통적인성숙모본선발방법에의한즉, 세대진전중인분리계통들의자식종자들을원하는재배작형 (cultivation type) 에공시하여분리 5 ~6 세대동안선발계의자식계 (selfing line) 를매년파종하여재배하면서목적형질을보유한완전성숙된무모본을다양성있게선발하고세대진전을통하여고정작업을실시하여표현형 (phenotype) 이균일하고선발목적에부합된우량한내혼계 (inbred line) 를획득하는고난도의전통적계통육성방법에의한선발로표현형 (phenotype) 상으로순계 (pure line) 로판정된내혼계 (inbred line) 는분자생물학적인분자표지검정을통하여분리고정세대별고정율몇순계세대를확인 (confirmation) 하여최종적으로고순도일대잡종품종을개발코자하였다. 재료및방법 육성계통모본양성 가공용쌈무 F 1 품종육성을목적으로우수계통을육성하기위하여 ( 주 ) 코레곤에서보유하고있는고정계통및분리중인계통 81 점 (BN501~581) 을이용하여가을노지작형에 2005 년 8 월 25 일에파종하여 11 월 5 일부터 11 월 20 일까지계통에따라시차를두고유용한 72 계통에서 362 주의성숙모본 ( 成熟母本 ) 을선발하여아그렙토마이신 1,000 배로가볍게수세하여근표피건조후육성하우스에정식하였다. 계통육성을위하여모본을선발하고세대진전은 6 세대까지실시하였다.
58 J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 전통육종방법에의한계통육성 공시한 81 계통중에서 관동여름무 와 계룡봄무 의합성조합후대고정계를 CGMS 계통에여교잡 (back cross) 하여육성한웅성불임계통 (MSKD-A) 을세대진전하여웅성불임성의유전적안정성을시험하였고 MS 친의화분친으로사용할부계친은 태상왕무 와 서울봄무 합성조합의 F 2 분리세대 ( 분리 1 세대 ) 를전개한결과육성목적에근접하는분리계로예측되는계통육성번호 BN515 에서 12 개체 (12 계통 ) 를선발하여그중선발계통 BN515-64 를쌈무계통육성목적으로선발하여 F 7 세대 ( 분리 6 세대 ) 까지세대진전을실시하고자하였다. 자가불화합성검정 (Self incompatibility testing) MS 친의화분친으로이용할 BN515-64, 718-61, 508-65, 624-61, 602-61, 602-61-G1 계통들의자가불화합성활력및임성을검정하여 F 1 조합작성에이용하고자하였다 (Table 1). 육성계통의웅성불임성 (Male sterility) 검정 고순도의일대잡종 F 1 품종육성을목적으로육성한 CGMS 유전자형의 MS 계통과유지친의인자를분석하여 MS 출현의안정성검정을실시하였다. 근형이우수하여육성한 MS 계통 (MSKD-A) 7 주선발하고유지친 (B-line) 도 7 주선발하여내혼계 (inbred-line) A-line 과 B-line 간의뇌수분 (Bud pollination) 를통하여차대 MS 검정을실시하여 MS 출현율에관한시험을실시하고자하였다. F 1 조합작성및우수조합선발시험 분리고정 5 년차에 17 조합과대비품종 9 품종을공시하여 F 1 조합선발시험을실시하여육성목적형질에근접한조합을선발하고자하였다. 재식거리는 50 cm x 27 cm, 파종립수는파구당 2 ~3 립, 공시주수는 20 주 3 반복으로재배하였으며원예적특성조사는초세, 엽색, 엽형, 엽장, 엽수, 잎몸털, 근형, 근장, 근경, 근중, 육질, 바람들이, 숙기, 육질갈변현상, 열근성, 내병성등을조사하였다. DNA 추출 파종하여 5 주자란식물체의잎조직을채취하여동결건조하고액체질소를넣고고운가루가되도록갈아각각 1.5 ml micro centrifuge 튜브에옮겼다. DNA 는 Genomic DNA Extraction Kit Protocol (RBC Real Biotech Corp, Korea) 에따라추출하였다. 추출한 DNA 를 0.8% 의아가로스젤에전기영동하여추출여부를확인하였고, DNA 의농도는 260 nm 의 UV 흡광도를 spectrophotometer 로측정하였다. DNA 농도는 PCR 반응에사용하기전에시료간에농도가크게차이가나지않도록 5-10 ng/µl 로희석하여등분하였다. SSR 마커를이용한 PCR 증폭 분자마커재료로는배추내혼계 Chiifu-401-41 의 genomic 염기서열을기반으로개발하여배추유전자지도에사용된 SSR 마커중선발된 2 개의프라이머 (ACMP-490, cnu-316) 를이용하여 F 2 부터 F 6 까지매세대선발하였다. 이들각각의프라이머는뿌리의특성과연관된것으로선발되었으며, 각 SSR 마커에대한염기서열정보는 Kim (2009) 에서확인할수있다. PCR 반응의조성은 0.1 unit 의 Taq polymerase (Intron, Daejeon, Korea), 각각 0.5 μm 의 Primer, 250 μm 의 dntp 혼합용액 ( 각 2.5 mm), 2.0 mm 의 MgCl 2, 1 μl 의 10X PCR 완충액, 10 ~ 15 ng 의 genomic DNA 를주형으로하였으며총반응조성물부피는 10 μl 로하였다. PCR 반응조건은 94 C 에서 4 분간의변성 (denaturation) 을한후에, DNA 변성단계 94 C 에서 45 초간, 결합 (annealing) 단계에서는각 primer 별적정온도에서 45 초간, 신장단계 72 C 에서 45 초간으로 35 반복을하였으며, 최종신장단계는 72 C 에서 7 분간으로하였다 (Bioneer, Deajeon, Korea). PCR 로증폭한생성물은 (PCR amplicon) 2% 아가로스젤및 Table 1 Self-incompatibility (SI) activity in developing radish inbreds Segregatedg Generation Name of line No. of plants Sowing Date Plant Selection Period SI Testing Period 1 st 515-64 4 2005.08.25 2005.10.31 2005.04.10 2 nd 718-61 4 2006.08.21 2006.11.01 2006.04.20 3 rd 508-65 4 2007.08.20 2007.11.05 2007.05.06 4 th 624-61 4 2008.08.22 2008.11.06 2008.04.15 5 th 602-61 4 2009.08.20 2009.11.10 2009.05.10 6 th 602-61-G1 4 2010.08.21 2010.01.08 2010.05.08
J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 59 PAGE 전기영동법 (Poly Acrylamide Gel Electrophoresis) 으로분리하였다. PAGE 전기영동및은염색 (silver staining) 방법은 6% denaturing polyacrylamide gel 상에서 90W 로 2 시간전기영동을한후시판되는은염색키트 (k-1050, Bioneer, Korea) 를사용하여염색하고, 상온에서 2 시간건조시킨후분석에사용하였다. 결과및고찰 계통육성 공시한 81 계통중 관동여름무 와 계룡봄무 의합성조합후대고정계를 CGMS 계통에여교잡 (back cross) 하여육성 한웅성불임계통 (MSKD-A) 을모계친으로선발하였으며 MS 친의부계친을선발할목적으로 태상왕무 와 서울봄무 합성조합간의 F 2 분리세대 ( 분리 1 세대 ) 에서계통육성번호 BN515-64 분리계가육성목적에부합되어 6 세대에걸쳐성숙모본선발방법으로계통고정작업을실시하여완전분리고정된 6 세대 (602-61-G1) 계통에계통명 (E04M) 을부여하여편친으로확정하였다 (Fig. 1). MS 친모계친계통육성 CGMS 계웅성불임계통 (MSKD-A) 을모계친으로확정하고 CGMS 유전자형의 MS 계통과유지친 (B-line) 의인자를분석하여 MS 출현여부를검정하였다. MS 계통 (MSKD-A) 7 주, 유지친 (B-line) 7 주 (Fig. 2) 를교배실에정식하고 A-line Fig. 1 Diagram of selection based on horticultural trait of root and uniformity using cropping field at autumn cultivation Fig. 2 The uniformity of fully developed seeding parent (left : male-sterile source, right : pollen donor of male-sterile source)
60 J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 Table 2 The seed numbers of MS-line pollinated by hand using flower-selfing (A-line B-line) method Pollen Seeding parent parent -1-2 3-4 -5-6 -7 MSKD-A-1 0.10 0.12 0.11 0.09 0.10 0.08 0.07 MSKD-A-2 0.09 0.11 0.13 0.15 0.09 0.11 0.08 MSKD-A-3 0.05 0.04 0.05 0.07 0.04 0.05 0.04 MSKD-A-4 0.15 0.11 0.15 0.13 0.12 0.13 0.15 MSKD-A-5 0.12 0.13 0.11 0.12 0.12 0.10 0.14 MSKD-A-6 0.10 0.09 0.06 0.08 0.09 0.07 0.08 MSKD-A-7 0.07 0.08 0.07 0.06 0.10 0.08 0.09 과 B-line 간의뇌수분 (Bud crossing) 를통하여종자를생산하였다 (Table 2). 이렇게얻어진종자를다시파종하여개화시킨후화분 (pollen) 을검경하여 MS 여부를검정한결과공시한 MS 모계친이모두웅성불임계통으로확인되었다. MS-A line 과유지친인 B-line 은근형태와원예적특성이동일하며자가불화합성인자 (S-allele) 도동일하였다. 따라서원원종을채종할경우에는뇌수분을통하여 MS-A line 에 B-line 의꽃가루를수분 (pollination) 해주거나 CO 2 처리를통하여자가불화합성을일시적으로소거한후종자를확보하였다. 전통육종방법에의한 MS 유지친계통육성 MS 유지친 (MS-B line) 을육성할목적으로 태상왕무 와 서울봄무 합성조합의 F 2 세대를전개하였다. 계통육성번호 BN515 의 F 2 세대에서 12 개체를선발하고, 그중 BN515-64 를성숙모본으로선발한후, F 7 세대까지세대진전을실시하였다. 선발방법은 1 년차에 BN515-64 를선발하고자식종자 (selfing seed) 를얻어, 파종후재배하여성숙모본으로 718-61 을선발하였다. 이를다시자식하여얻은종자를파종하여성숙모본 508-65 을선발하였고, 다시자식하여얻은종자를파종하여성숙모본 624-61 을선발하였다. 동일한방법으로 602-61 을선발하고다시자식하여, 순계인 602-61-G1 원원종을확보하였다 (Table 3, Fig. 3). 무의성숙모본은일반적으로부패율이높아생존율이 Fig. 3 Root shape of pollen parent in every segregating generations using pedigree method Table 3 Pedigree breeding diagram of 04EM male line (C-line) Year 03/ 04 05 06 07 08 09 10 Generation Selected No. Selected No. Cross F 1 Tae sang king x Seoul spring Breeding - Individual - F 2 F 3 F 4 F 5 F 6 F 7 515 718 508 624 602 602-61-G1 64 61 65 61 61 Sib Cross
J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 61 계통에따라낮은편이나본시험에서는성숙모본선발방식으로 6 세대까지계통을육성하는성과를얻었다. 이는분리계통이내병성을지니고, 육질이치밀한것과도관계가있을것으로추정된다. SSR 마커를이용한순도검정 육성최초세대에서상하근경비대차이가적고가공손실률이적을것으로 BN515 에서 12 개체를선발하였다. 그중가장우수한 BN515-64 를성숙모본으로선발하였으며, 그후대종자 48 점의순도를 SSR 마커를이용하여조사한결과 ACMP-490 에서는 31 점의공동밴드검출로 64.6%, cnu-316 에서는 32 점의공동밴드검출로 66.7% 의고정율을보였다 (Fig. 4A). BN515-64 의자식종자 80 점의원예적특성을조사하여가공적성이우수한 718-61 을선발하였다. 선발된개체는뇌수분하여세대를진전하였으며수확된후대종자 48 점의순도를검정한결과 ACMP-490 에서는 33 점의공동밴드검출로 68.8%, cnu-316 에서는 34 점의공동밴드검출로 70.8% 의고정율을보였다 (Fig. 4B). 718-61 후대의 80 점의원예적특성조사결과 508-65 를선발하였고, 이를세대진전하여그종자 48 점의시료를분석한결과 ACMP-490 에서는 45 점의공동밴드검출로 93.8%, cnu-316 에서는 48 점의공동밴드검출로 100% 의고정율을보였다 (Fig. 4C). 508-65 후대의 80 점의원예적특성검정결과가공적성이뛰어난 624-61 을선발하였고, 그후대종자 48 점의 시료를이용하여분석한결과 ACMP-490 에서는 45 점의공동밴드검출로 93.8%, cnu-316 에서는 48 점의공동밴드검출로 100% 의고정율을보였다 (Fig. 4D). 624-61 의후대 80 점의원예적특성검정결과 602-61 을선발하였고, 그후대 48 점시료를이용하여분석한결과 ACMP-490 에서는 46 점의공동밴드검출로 95.8%, cnu-316 에서는 48 점의공동밴드검출로 100% 의고정율을보였다 (Fig. 4E). SSR 마커를이용하여순도를검정한결과 cnu-316 표지에서 2 년연속 100% 를보였으며, 표현형도상당히고정된것으로판단되어 602-61 을원종으로선발하고이를다시자식하여 602-61-G1 원원종을확보하였다 (Fig. 4F). 조합능력검정결과 가공용품종육성을위해최종선발계통을이용하여신규조합을작성하였으며그원예적특성을시판대비품종과비교 (Table 4) 한결과우수하여신품종으로육성하였으며이를 YR 오래 (YR ORE) 로 2011 년에품종보호출원 (Fig. 5) 하여 2013 년신품종으로등록되었다 ( 품종보호제 4550 호, 2013.06.10.). 육성된품종은추대가늦으며가공용품종에알맞도록규격출하에유리하여가공수율이약 90% (data was not shown) 로기존의 70% 에비하여높았으며, 뿌리비대가빨라재배기간을단축할수있으며, 육질이단단하고내병성이있어시장성이높은품종으로기대되고있다. Fig. 4 Breeding process for generation of breeder s stock in field. A-F represents F2-F6 in generation advancement. Radish progeny were selected by morphological trait in field. And a part of progeny were confirmed the uniformity using SSR markers in segregating generation, respectively. a) Phenotype of the radish progeny selected, b) and c) Gel electrophoresis profile of PCR amplicon using SSR marker, ACMP490 and cnu_m316. M1, 25bp size standard ladder; M2, 50bp size standard ladder; lane No. designated by 1-48 represents radish progeny
62 J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 Table 4 Major horticultural traits of novel combination and commercial varieties Leaf Root length Root width Weight Protruding No. Variety Length (cm) Number (cm) Upper Middle Low (g) (cm) 466 YR Ore 35.3f z 26.0f 31.1d 9.8a 10.2ab 9.4ab 1,710.0cd 9.0f 468 Cheon mu hu mu 34.7f 36.3a 32.1bcd 9.5ab 9.9abc 9.2bc 1,916.7ab 12.8c 470 Kwand dong 38.0de 23.5c 31.8bcd 8.0cd 9.5bc 8.5cde 1,823.3bc 12.0c 471 Kang seong 41.0c 25.3b 32.2bcd 7.9cd 9.2cd 8.2e 1,726.7cd 8.8f 472 Pyeong Geong 40.3c 26.0b 33.4b 7.7d 8.6d 8.5de 1,733cd 13.7b 473 Super kilgo 45.6a 25.7b 33.0bc 8.1cd 10.0abc 8.4de 1,646.7de 10.7e 474 Keuk dong 42.3b 23.0c 31.6bcd 7.9cd 10.0abc 8.9bcd 1,713.3cd 12.0d 476 Tae cheong 38.7d 24.7bc 32.6bcd 8.0cd 10.5a 8.9bcd 1,800c 13.0c 477 Neul pu reum 37.0e 20.7d 31.3cd 8.0cd 9.2cd 8.5cde 1,583.3e 10.3e 478 Peak pong 38.1de 26.0b 38.1a 8.7cd 10.5a 9.8a 1,983.3a 21.7a z Mean separation within coloumns Duncan s multiple range test at P 0.05 Fig. 5 Horticultural trait of novel combination ( MS-A line x 6 th generation pollen donor ) 사사 본연구는농림축산식품부농림기술개발사업 ( 과제번호 : 108005-05-5-SB010) 지원에의해이루어진것임. 적요 무의가공용품종의가공수율이현재약 70% 로버리는부분이많아뿌리의형태가가공에유리하도록상부와하부의굵기가유사한품종을육성코자하였으며웅성불임을이용하여채종함으로종자의순도도높이고자본연구를실시하였다. 가공용품종은특히순도가높아야하므로계통육성과정에서순계로고정되었는지여부를확인하기위해표현형뿐아니라분자표지를활용하여증식된종자의순도를검정하였다. 우수품종육성을위해 A 친은 ( 관동여름 x 계룡봄무 ) 의후대에서위황병에저항성이며추대성이늦고고온기재배에서근비대성이타계통보다양호한담록수계통을고정하였고, B 친 은 ( 태상왕 x 서울봄무 ) 의후대에서위황병, 근류병에저항성이며잎색은진한녹색으로청수색이강하고근비대성, 육질치밀성인계통을선발고정하였다. 화분친 (C 친 ) 은개체선발법으로세대를진전하였으며분리세대순도검정을위해각세대별로종자 48 점을 ACMP-490, cnu-316 프라이머를이용하여분석한결과분리 1 세대 ACMP- 490 은 64.6%, cnu-316 은 66.7% 의고정율을보였으며, 분리 2 세대 ACMP-490 은 68.8%, cnu-316 은 70.8% 의고정율을보였고, 분리 3 세대 ACMP-490 은 93.8%, cnu-316 은 100% 의고정율을나타냈으며, 분리 4 세대 ACMP-490 은 93.8%, cnu-316 은 100% 의고정율을보였고. 분리 5 세대 ACMP-490 은 95.8%, cnu-316 은 100% 의고정율을보였고, 분리 6 세대 ACMP-490 은 100%, cnu-316 은 100% 의고정율을보여원원종을확보하였다. 고정이확인된계통을이용하여조합을작성한결과뿌리의형태가가공에적합하고순도가우수하여이를 YR 오래 (YR ORE) 로 2011 년에품종보호출원하여 2013 년신품종으로등록되었다 ( 품종보호제 4550 호, 2013.06.10.).
J Plant Biotechnol (2014) 41:56 63 63 References Ishii T, Xu Y, McCouch SR (2001) Nuclear-and chloroplast microsatellite variation in A-genome species of rice. Genome 44:658-666 Kim H, Choi SR, Bae J, Hong CP, Lee SY, Hossain M, Nguyen VD, Jin M, Park BS, Bang J, Bancroft I, Lim YP (2009) Sequenced BAC anchored reference genetic map that reconciles the ten individual chromosomes of Brassica rapa. BMC Genomics 10:432-446 Kim JS, Chung TY, King GJ, Jin M, Yang TJ, Jin YM, Kim HI, Park BS (2006) A sequence-tagged linkage map of Brassica rapa. Genetics 174:29-39 Kwon SJ, Kim DH, Lim MH, Long Y, Meng JL, Lim KB, Kim JA, Kim JS, Jin M, Kim HI, Ahn SN, Wessler SR, Yang TJ, Park BS (2007) Terminal repeat retrotransposon in miniature (TRIM) as DNA markers in Brassica relatives. Mol. Genet. Genomics 278:361-370 Mather K, Jinks JL (1977) Introduction to Biometrical Genetics. Chapman and Hall. London, pp68-98 Mun JH, Kwon SJ, Park BS (2010) The strategy and current status of Brassica rapa genome project. Plant Biotechnol 37:153-165 Mun JH, Kwon SJ, Yang TJ, Seol YJ, Jin M, Kim JA, Lim MH, Kim JS, Baek S, Choi B, Yu HJ, Kim DS, Kim N, Lim K, Lee SI, Lim Y, Bancroft I, Hahn JH, Park B (2009) Genome-wide comparative analysis of the Brassica rapa gene space reveals genome shrinkage and differential loss of duplicated genes after whole genome triplication. Genome Biol 10:R111.1- R111.18 Richards R, Sutherland GR (1994) Simple repeat DNA is not replicated simply. Nat. Genet 6:114-116 Wang X, Wang H, Wang J, Sun R, Wu J, Liu S, Bai Y, Mun JH, Bancroft I, Cheng F, Huang S, Li X, Hua W, Wang J, Wang X, Freeling M, Pires JC, Paterson AH, Chalhoub B, Wang B, Hayward A, Sharpe AG, Park BS, Weisshaar B, Liu B, Li B, Liu B, Tong C, Song C, Duran C, Peng C, Geng C, Koh C, Lin C, Edwards D, Mu D, Shen D, Soumpourou E, Li F, Fraser F, Conant G, Lassal G, King GJ, Bonnema G, Tang H, Wang H, Belcram H, Zhou H, Hirakawa H, Abe H, Guo H, Wang H, Jin H, Parkin IA, Batley J, Kim JS, Just J, Li J, Xu J, Deng J, Kim JA, Li J, Yu J, Meng J, Wang J, Min J, Poulain J, Wang J, Hatakeyama K, Wu K, Wang L, Fang L, Trick M, Links MG, Zhao M, Jin M, Ramchiary N, Drou N, Berkman PJ, Cai Q, Huang Q, Li R, Tabata S, Cheng S, Zhang S, Huang S, Sato S, Sun S, Kwon SJ, Choi SR, Lee TH, Fan W, Zhao X, Tan X, Xu X, Wang Y, Qiu Y, Yin Y, Li Y, Du Y, Liao Y, Lim Y, Narusaka Y, Wang Y, Wang Z, Li Z, Wang Z, Xiong Z, Zhang Z (2011) The genome of the mesopolyploid crop species Brassica rapa. Nat Genet 43:1035-1038