1 - 편집순서 1 : 겉표지
2 - 정도관리 학술연구용역사업최종결과보고서 지표후보물질 국문과제명 영문과제명 발 굴 을 주관연구기관 : 원광대학병원 주 의 ( 주의내용기재 ) 위 한 ( 글 14 point 고딕체 ) 검체수집 질병관리본부 2 0 1 1 질병관리본부
3 -
4 - 주의내용
1 - 편집순서 2 : 제출문 과제번호 학술연구용역사업최종결과보고서 과제명 영문국문 주관연구기관 주관연구 책임자 기관명소재지대표 원광대학병원익산시신용동 344-2 정은택 성명 소속및부서 전공 박도심 원광대학병원진단검사의학과 진단검사의학 연락처 이메일 063-859-1863 emailds@hanmail.net 연구비 70,000 천원 연구기간 2011. 3. 7-2011. 11. 6 총참여연구원 ( 책임연구원 : 1 명, 연구원 :2 명, 연구보조원 :5 명 보조원 :3 명 ) 비고보안성유 (0) 무 () 2011 년도학술연구용역사업에의하여수행중인학술연구용역과제의 최종결과보고서를붙임과같이제출합니다. 붙임 : 1. 최종결과보고서 12 부. 2. 전자파일 CD 2 매. 2011 년 11 월 4 일 주관연구책임자박도심 ( 인또는서명 ) 주관연구기관장정은택 ( 직인 ) 질병관리본부장귀하
2 - 편집순서 3 : 목차 목 차 Ⅰ. 연구개발결과요약문 ( 한글 ) ( 영문 ) Ⅱ. 학술연구용역사업연구결과제1장최종연구개발목표제2장최종연구개발내용및방법제3장최종연구개발결과제4장연구결과고찰및결론제5장연구성과및활용계획제6장기타중요변경사항제7장연구비사용내역제8장첨부서류
3 - 편집순서 4 : 요약문 과제명 중심단어 주관연구기관원광대학병원주관연구책임자박도심 연구기간 ➀ μμ μ μ μμ ➀ ➁
4 - 편집순서 5 : 요약문 ( 영문 ) Title of Project Key Words Institute Wonkwang University Hospital Project Leader Do-Sim Park Project Period From March 7, 2011 through November 6, 2011 ➀ μμ μ ➀ ➁
5 - 편집순서 6 : 총괄연구과제의연구결과 학술연구용역사업연구결과. : (target specimen) - (1) - 100 plasma: 1000 vial (10 vial *100) serum: 1000 vial (10 vial*100) DNA: RNA: 100 tube + 3 DNA plate(20ug 3 copies) (100 ug *100 20ug EP tube ) 100 tube + 2 RNA plate (2ug 2 copies) (5 ~ 10 ug *100, RIN EP tube ) LCL cell: 200 vial (2 vial*100) 2 10 6 cells/vial (2 vial ) LCL cell DNA: 300 tube (100 ug * 100) 20 μg2ep tube 1EP tube (2) : 100%. (target specimen) : 100% (1) - 100
6 - plasma, serum : 2, DNA: 100% 260/280 1.8 () RNA : 100% 260/280 1.8 RNA integrity number (RIN) 4.0 () RNA RNA Later RNA Kit RNA (2) : 100% 100%
7 - Figure 1. An abstract about SPREC (Standard PREanalytical Code); Cancer Epiemiol Biomarker Prev 2010; 19: 1004-11 건식보관법의필요성및개발 건식보관법의필요성 : 기존냉동법은대형냉동공간필요, 전기력소모, 이산화탄소배출 - 지구온난화유발, 검체이송, 포장, 해동시변성이쉽고회복불가의단점이있음 미국스탠포드대학자료에의하면 350 개의검사실에서 2000 개의냉동고가가동되어 610,000 스퀘어피트의면적을차지하며연간 3,600 metric ton 의이산화탄소배출이외전 기료소요등으로 560 만달러의운영비를소요함 이러한관점에서세계인체자원은행및관련연구자들은건식법보관법의필요성이절실했고최근 DNA와 RNA를건식으로보관하는건식보관법이개발된상태임 (Assessing a novel room-temperature RNA storage medium for compatibility in microarray gene expression analysis. Biotechniques. 2009;47:667-8, 670)
8 - Figure 2. Freezing storage that is using as storage method of most of biobanks and annual increase of cumulative cost for bioresource storage. Figure 3. Water bear (tardigrade, left) and Synthetic matrix technique for molecular stabilization. Dried storage was applicated from principle for survival of water bear.
9-1. (target specimen). - 100 plasma: 1000 vial(10 vial *100) serum: 1000 vial(10 vial *100) DNA: 100 tube + 3 DNA plate(20ug 3 copies) (100 ug *100 20ug EP tube ) plate-biomatrica DNAstable 96 well plate kit RNA: 100 tube + 2 RNA plate (2ug 2 copies) (5 ~ 10 ug *100, RIN EP tube ) plate-biomatrica RNAstable 96 well plate kit 90221-001 LCL cell: 200 vial (2 vial*100) 2 10 6 cells/vial (2 vials ) LCL cell DNA: 300 tube (100 ug * 100) 20 μg2ep tube 1EP tube. (target specimen) μ μ
10 - μ
11 - 샘플 ID 공여자샘플의일련번호 검체분석전변수 ISBER 학회에서는제시한 보관박스 SPREC 기록 tag 번호 성명 공여자성명마지막자제외 나이 나이 성별 남 / 여 DNA 정보 DNA 전체정보 /RNA 전체정보 DNA/RNA Quantity (ug/ml) DNA 정도결과 DNA 보관정보 DNA/RNA 보관정보 ( 질소탱크, 초 저온냉동고등 ) Total DNA 전체유전자양 추출및보관일 유전자추출및보관일 RNA 정보 RNA 전체정보 RNA Quantity (ug/ml) RNA 정도결과 RNA 보관정보 RNA 보관정보 ( 질소탱크, 초저온 냉동고등 ) Total RNA 전체유전자양 Immortalized cell line 정보 Cell 제작전체정보 Cell Quantity Cell의 number Cell 보관정보 Cell 보관정보 ( 질소탱크번호등 ) Cell 배양및보관 Cell 배양및보관정보 Cell line 제작자 Cell line 제작자정보 Table 1 Import data for sample storage
12 - 임상정보및데이터 환자의세부임상정보및결과 WBC WBC(/mm3) Eosinophil Eosinophil (/mm3) Hct Hct counts hs-crp hs-crp 정량 AST/ALT/BUN/CR 참고치이상여부및결과 각항목정량, Normal 여부 TC 검사이상여부 각항목정량, Normal 여부 HBs Ag Negative HCV AB Negative HIV AB 10명표준혈장정도관리검체환자 Negative
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16 - Figure 4 Production Process of standard plasmsa for Quality control research
17 - () : ➀,➁, target - 500 vial+ 470 vial(300ul * 500, 300uL * 470) 100 vial + 90 vial (300uL * 100, 300uL * 90)
18 -
19 - ➂
20 - ➃
21 -
22 -
23-1. 2. 3. 4. 5. Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) 분리 1. PBS 10mL 50mL falcon tube 에넣고 ACD tube 의전혈 (8mL 정도 ) 을모두 50mL tube 에부음 2. PBS 로 50% 희석된전혈을 15ml tube 에 Ficoll 3ml 가담긴위에주사기로서서 히넣어줌 (ficoll 과섞이지않도록조심스럽게혈액을넣음 ): 2 개의 falcon 튜브에 실시함 2. 1400 g 에서 20 분간원심분리한후 PBMC 층만조심스럽게 suction 수거 3. 1 PBS 로 12mL X 1 회 wash 한다. 4. 1 RP20 로 2mL X 1 회 wash 한다. Lymphoblastoid Cell Line (LCL cell) 제작및배양
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25-1.. - 100 plasma: 1000 vial(10 vial*100) serum: 1000 vial(10 vial*100) DNA: 100 tube + 3 DNA plate(20ug 3 copies) (100 ug *100 20ug EP tube ) RNA: 100 tube + 2 RNA plate (2ug 2 copies) (5 ~ 10 ug *100, RIN EP tube ) LCL cell: 200 vial(2 vial*100) 2 10 6 cells/vial (2 vials ) LCL cell DNA: 300 tube (100 ug * 100) 20 μg2ep tube 1EP tube (1)Plasma 01062648 plasma ID (2)Serum 01062648 serum ID (3)DNA 3plate ID (4)RNA 3plate (5)LCL cell 01062648 LCL (6)LCL DNA 01062648 LCL DNA
26 - serial N B code originaln 0= 1 1062648 00 21 1 0 26 2011.05.17 2 1062649 00 22 2 1 24 2011.05.17 3 1062650 00 22 3 1 22 2011.05.18 4 1062651 00 21 4 0 27 2011.05.18 5 1062652 00 32 5 1 30 2011.05.19 6 1062653 00 22 6 1 20 2011.05.23 7 1062654 00 32 7 1 35 2011.05.23 8 1062655 00 21 8 0 23 2011.05.24 9 1062656 00 21 9 0 23 2011.05.24 10 1062657 00 52 10 1 50 2011.05.24 11 1062658 00 32 11 1 32 2011.05.24 12 1062659 00 31 12 0 31 2011.05.25 13 1062660 00 22 13 1 29 2011.05.25 14 1062661 00 51 14 0 51 2011.05.27 15 1062662 00 31 15 0 34 2011.05.31 16 1062663 00 32 16 0 33 2011.05.31 17 1062664 00 42 17 1 41 2011.05.31 18 1062665 00 42 18 1 44 2011.05.31 19 1062666 00 21 19 0 29 2011.06.03 20 1062667 00 21 20 0 25 2011.06.03 21 1062668 00 52 21 1 52 2011.06.21 22 1062669 00 22 22 1 25 2011.06.07 23 1062670 00 52 23 1 59 2011.06.08 24 1062671 00 32 24 1 33 2011.06.08 25 1062672 00 21 25 0 23 2011.06.08 26 1062674 00 52 26 1 50 2011.06.09 27 1062678 00 31 27 0 38 2011.06.09 28 1062679 00 42 28 1 44 2011.06.09 29 1062681 00 42 29 1 41 2011.06.10 30 1062682 00 42 30 1 42 2011.06.10 31 1062683 00 31 31 0 32 2011.06.10 32 1062685 00 41 32 0 49 2011.06.13 33 1062686 00 61 33 0 63 2011.06.14 34 1062687 00 41 34 0 45 2011.06.14 35 1062688 00 51 35 0 53 2011.06.14 36 1062689 00 62 36 1 62 2011.06.17 37 1062690 00 41 37 0 43 2011.06.20 38 1062691 00 42 38 1 41 2011.06.20
27-39 1062692 00 42 39 1 44 2011.06.21 40 1062693 00 32 40 1 30 2011.06.21 41 1062694 00 61 41 0 60 2011.06.22 42 1062696 00 41 42 0 45 2011.06.23 43 1062697 00 31 43 0 31 2011.06.24 44 1062698 00 42 44 1 41 2011.06.24 45 1062699 00 51 45 0 54 2011.06.24 46 1062700 00 51 46 0 52 2011.06.24 47 1062701 00 52 47 1 51 2011.06.27 48 1062702 00 42 48 1 45 2011.06.28 49 1062703 00 42 49 1 49 2011.06.28 50 1062704 00 21 50 0 26 2011.06.29 51 1062705 00 51 51 0 51 2011.06.29 52 1062707 00 31 52 0 32 2011.06.29 53 1062708 00 22 53 1 25 2011.06.30 54 1062709 00 22 54 1 29 2011.06.30 55 1062710 00 22 55 1 27 2011.06.30 56 1062711 00 51 56 0 53 2011.07.01 57 1062712 00 51 57 0 53 2011.07.01 58 1062713 00 42 58 1 44 2011.07.01 59 1062714 00 41 59 0 40 2011.07.01 60 1062715 00 42 60 1 43 2011.07.01 61 1062716 00 52 61 1 50 2011.07.01 62 1062718 00 32 62 1 38 2011.07.05 63 1062719 00 52 63 1 50 2011.07.06 64 1062720 00 51 64 0 54 2011.07.06 65 1062721 0 52 65 1 50 2011.07.06 66 1062722 00 22 66 1 24 2011.07.06 67 1062723 00 32 67 1 30 2011.07.06 68 1062724 00 42 68 1 41 2011.07.06 69 1062725 00 52 69 1 58 2011.07.06 70 1062727 00 31 70 0 38 2011.07.06 71 1062728 00 51 71 0 51 2011.07.07 72 1062729 00 52 72 1 58 2011.07.07 73 1062730 00 32 73 1 30 2011.07.07 74 1062731 00 51 74 0 55 2011.07.08 75 1062734 00 31 75 0 36 2011.07.09 76 1062735 00 51 76 0 51 2011.07.11 77 1062736 00 41 77 0 42 2011.07.12 78 1062738 00 41 78 0 49 2011.07.13 79 1062741 00 41 79 0 40 2011.07.22 80 1062742 00 61 80 0 62 2011.07.22 81 1062743 00 41 81 0 47 2011.07.22
28-82 1062744 00 42 82 1 43 2011.07.27 83 1062745 0 41 83 0 43 2011.07.27 84 1062746 00 62 84 1 74 2011.07.28 85 1062747 00 61 85 0 73 2011.07.29 86 1063229 00 62 86 1 73 2011.08.23 87 1063385 00 62 87 1 67 2011.08.26 88 1063386 00 62 88 1 73 2011.08.26 89 1063387 00 62 89 1 66 2011.08.30 90 1063388 00 21 90 0 22 2011.09.15 91 1063389 00 21 91 0 21 2011.09.15 92 1063390 00 21 92 0 26 2011.09.22 93 1063392 00 42 94 1 44 2011.09.30 94 1063393 00 21 95 0 27 2011.09.30 95 1063395 00 21 97 0 28 2011.10.10 96 1063397 00 21 99 0 25 2011.10.10 97 1063399 00 32 101 1 31 2011.10.13 98 1063401 00 31 102 0 34 2011.10.13 99 1063402 00 21 103 0 25 2011.10.13 100 1063403 00 21 104 0 25 2011.10.13 101 1063405 00 21 105 0 24 2011.10.13
29 - B code AST(5 [ALT] CREA(0.5 GLU(70 CHO(1 S-CRP( Bun(8-20 H B s -35IU (5-40 -1.3mg/d -100mg 30-250 0-5mg/ mg/dl) AgII /L) IU/L) L) /dl) mg/dl) L) 1062648 16 10 10.9 0.94 66 168 0.15 Neg 1062649 25 16 9.8 0.71 84 163 0.26 Neg 1062650 22 17 14 0.64 74 173 1.01 Neg 1062651 27 17 11 1.02 80 179 0.46 Neg 1062652 19 14 14 0.76 90 163 0.3 Neg 1062653 15 13 16.4 0.68 83 158 0.44 Neg 1062654 17 12 17 0.74 97 155 0.62 Neg 1062655 18 12 8.2 0.78 90 181 0.31 Neg 1062656 17 12 9.9 0.89 61 183 0.48 Neg 1062657 21 18 15.1 0.74 98 220 1.18 Neg 1062658 19 11 12.2 0.67 90 183 6.57 Neg 1062659 19 27 11.7 0.99 90 167 0.66 Neg 1062660 15 9 10.2 0.65 79 169 0.24 Neg 1062661 20 20 10.8 0.82 88 172 0.57 Neg 1062662 21 23 13.1 0.79 83 162 0.2 Neg 1062663 17 10 13.2 1 101 167 1.08 Neg 1062664 23 13 8 0.64 81 167 0.34 Neg 1062665 22 16 12.1 0.55 88 231 0.37 Neg 1062666 24 38 12.1 0.76 92 180 0.64 Neg 1062667 14 24 9.4 0.84 105 190 0.8 Neg 1062668 18 12 12.3 0.52 97 188 0.31 Neg 1062669 21 14 9.9 0.58 81 170 0.24 Neg 1062670 23 18 12.1 0.52 99 208 0.43 Neg 1062671 14 14 9.7 0.54 91 181 0.43 Neg 1062672 19 20 8.9 0.87 95 182 0.31 Neg 1062674 16 15 12.7 0.68 83 193 1.81 Neg 1062678 16 17 9.4 0.71 85 193 0.51 Neg 1062679 22 14 20.9 0.65 96 211 0.41 Neg 1062681 18 13 10.6 0.61 86 166 0.29 Neg 1062682 19 13 7.7 0.62 86 170 0.29 Neg 1062683 22 33 12.5 0.84 100 203 0.36 Neg 1062685 24 18 11.4 0.82 105 239 0.28 Neg 1062686 22 18 15.5 0.56 105 172 1.13 Neg 1062687 21 18 12.2 0.8 92 189 4.6 Neg 1062688 18 15 14.2 0.89 107 228 0.28 Neg 1062689 19 17 9.8 0.47 93 230 1.16 Neg 1062690 28 32 15 1.06 100 230 0.48 Neg 1062691 16 10 13.7 0.71 97 149 1.19 Neg 1062692 18 21 8.7 0.58 90 188 0.29 Neg
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32 - B code CREA(0. GLU(70- CHO(130 AST(5-3 [ALT](5- Bun(8-20 S-CRP(0-5 5-1.3mg 100mg/ -250mg/ 5IU/L) 40IU/L) mg/dl) mg/l) /dl) dl) dl) HBsAgII 1062648 16 10 10.9 0.94 66 168 0.15 Neg 1062649 25 16 9.8 0.71 84 163 0.26 Neg 1062650 22 17 14 0.64 74 173 1.01 Neg 1062651 27 17 11 1.02 80 179 0.46 Neg 1062652 19 14 14 0.76 90 163 0.3 Neg 1062653 15 13 16.4 0.68 83 158 0.44 Neg 1062654 17 12 17 0.74 97 155 0.62 Neg 1062655 18 12 8.2 0.78 90 181 0.31 Neg 1062656 17 12 9.9 0.89 61 183 0.48 Neg 1062657 21 18 15.1 0.74 98 220 1.18 Neg 1062658 19 11 12.2 0.67 90 183 6.57 Neg 1062659 19 27 11.7 0.99 90 167 0.66 Neg 1062660 15 9 10.2 0.65 79 169 0.24 Neg 1062661 20 20 10.8 0.82 88 172 0.57 Neg 1062662 21 23 13.1 0.79 83 162 0.2 Neg 1062663 17 10 13.2 1 101 167 1.08 Neg 1062664 23 13 8 0.64 81 167 0.34 Neg 1062665 22 16 12.1 0.55 88 231 0.37 Neg 1062666 24 38 12.1 0.76 92 180 0.64 Neg 1062667 14 24 9.4 0.84 105 190 0.8 Neg 1062668 18 12 12.3 0.52 97 188 0.31 Neg 1062669 21 14 9.9 0.58 81 170 0.24 Neg 1062670 23 18 12.1 0.52 99 208 0.43 Neg 1062671 14 14 9.7 0.54 91 181 0.43 Neg 1062672 19 20 8.9 0.87 95 182 0.31 Neg 1062674 16 15 12.7 0.68 83 193 1.81 Neg 1062678 16 17 9.4 0.71 85 193 0.51 Neg 1062679 22 14 20.9 0.65 96 211 0.41 Neg 1062681 18 13 10.6 0.61 86 166 0.29 Neg 1062682 19 13 7.7 0.62 86 170 0.29 Neg 1062683 22 33 12.5 0.84 100 203 0.36 Neg 1062685 24 18 11.4 0.82 105 239 0.28 Neg 1062686 22 18 15.5 0.56 105 172 1.13 Neg 1062687 21 18 12.2 0.8 92 189 4.6 Neg 1062688 18 15 14.2 0.89 107 228 0.28 Neg 1062689 19 17 9.8 0.47 93 230 1.16 Neg 1062690 28 32 15 1.06 100 230 0.48 Neg 1062691 16 10 13.7 0.71 97 149 1.19 Neg 1062692 18 21 8.7 0.58 90 188 0.29 Neg
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39 -
40 - (3) (4) target -
41-54(20) (20)
42 - item AST U/L ALT U/L B u n mg/dl Cr mg/dl G L U mg/dl C H O mg/dl 19 14 12.9 0.89 89 162 62 18 14 13.7 0.91 88 163 64 TG mg/dl 19 15 13.1 0.93 90 162 60 mean 18.7 14.3 13.2 0.9 89.0 162.3 62.0 sd 0.6 0.6 0.4 0.0 1.0 0.6 2.0 cv% 3.1 4.0 3.1 2.2 1.1 0.4 3.2 item H D L L D L S - C R P LDH U/L mg/dl mg/dl mg/l HBSAG HCV Ab HIV Ab 61 84 301 0.4 Neg Neg Neg 60 85 300 0.44 Neg Neg Neg 61 85 303 0.4 Neg Neg Neg mean 60.7 84.7 301.3 0.4 sd 0.6 0.6 1.5 0.0 cv% 1.0 0.7 0.5 5.6 item AST U/L ALT U/L B U N g l u c o s e cholesterol TG Cr mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl mg/dl 22 22 12.4 0.86 94 182 85 22 24 12 0.86 94 182 85 22 24 12.1 0.88 95 186 86 mean 22.0 23.3 12.2 0.9 94.3 183.3 85.3 sd 0.0 1.2 0.2 0.0 0.6 2.3 0.6 cv% 0.0 4.9 1.7 1.3 0.6 1.3 0.7 item H D L L D L S - C R P LDH U/L mg/dl mg/dl mg/l HBSAG HCV Ab HIV Ab 58 109 289 0.68 Neg Neg Neg 58 111 289 0.71 Neg Neg Neg 60 111 292 0.7 Neg Neg Neg mean 58.7 110.3 290.0 0.7 sd 1.2 1.2 1.7 0.0 cv% 2.0 1.0 0.6 2.2
43 -
44 - μ μ μ. Comparison of same volume of DNA using ArchivePure DNA Cell/Tissue 2300810 Kit, 5 prime, absorbance 260/280 =1.85, 260/230=1.97, total 99 μg) PerfectPure DNA Blood Kit 10mL 2301930, 5 prime 260/280 =2.0, 260/230=2.2 total 220μg)
45 -
46 - (3) : (4) : 4
47 - 제 5 장연구성과및활용계획 5.1 활용성과 과제명 과제책임자박도심 / 원광대학병원 / 진단검사의학과 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 국내 / 국제 번호출원 / 등록 1 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류
48-5.2 활용계획
49 -
50 - 연구원변경 : 연구원퇴사로인한연구원교체 성명 참여기간 성명 참여기간 김준호백철현 연구보조원 유현동연구보조원 양용근연구보조원 고주희보조원 김민정연구보조원
51 - 학술연구용역사업연구비변경 과제명정도관리지표후보물질발굴을위한검체수집 (2011) 과제번호 2011E7400100 발주부서생물자원은행 ( 과 ) 연구수행기관학교법인원광학원연구책임자박도심 연구기간 2011 년 03 월 07 일부터 2011 년 11 월 06 일까지 사업비 70,000( 천원 ) 학술연구용역사업연구비변경사항 비목변경전변경후변경사유 인건비 28,746,123 28,746,123 여비 1,022,000 182,952 유인물비 800,000 50,000 전산처리비 450,000 - 시약및연구용재료비 29,776,877 32,944,915 회의비 4,900,000 4,491,010 임차료 0 - 교통통신비 720,000 - 의뢰부서추가요청에의한공여자수증가및이에대한처리비용증가 위탁정산수수료 385,000 385,000 일반관리비 ( 이윤 ) 3,200,000 3,200,000 총액 70,000,000 70,000,000 변경사유 ( 추가사항 ) 세부과제는주관연구기관을통해제출
52 -
53-1. Betsou F, Lehmann S, Ashton G, Barnes M, Benson EE, Coppola D, DeSouza Y, Eliason J, Glazer B, Guadagni F, Harding K, Horsfall DJ, Kleeberger C, Nanni U, Prasad A, Shea K, Skubitz A, Somiari S, Gunter E: International Society for Biological and Environmental Repositories (ISBER) Working Group on Biospecimen Science : Standard preanalytical coding for biospecimens: defining the sample PREanalytical code, Cancer Epiemiol Biomarker Prev, 19: 1004-1011, 2010 2. Hernandez GE, Mondala TS, Head SR : Assessing a novel room-temperature RNA storage medium for compatibility in microarray gene expression analysis, Biotechniques, 47:667-8, 670, 2009
54 - 본학술연구용역사업의성과로기술된게재된학술지논문전체사본 ( 게재허가를받은경우게재 증명서 ) 과산업재산권등록증 ( 또는출원서 ) 사본을반드시첨부할것.