발간등록번호 11-1470550-000330-01 식품중사용원료진위판별지침서 유전자분석법활용 2013. 12.

- 유전자분석법활용 - 발간사 최근부당이익을얻기위하여값싼원료를사용하거나표시사항을허위로기재하는등의불량식품 가짜식품 제조 유통사례가증가하고있는실정입니다. 특히고추양념을혼합한불량고춧가루 다진마늘에양파혼합 홍삼분말에마분말혼합등의사례가언론등을통하여보도되면서식품에대한불안감이있는실정입니다. 이에소비자를기만하는행위근절을위하여불량식품판별을위한검사지침마련이요구되어 식품의약품안전처에서는불량식품유통사례에대한정보를바탕으로시급히마련되어야할 판별목록을선정하여불량식품판별법을마련한것입니다. 본지침서에수록되어있는판별법은불량식품등의식품원료를확인하는방법으로는이화학적인분석법도있으나더정밀한판단을위하여유전자분석법을마련하여추가보정하였습니다. 원료농산물또는단순가공식품에는일반프라이머또는종특이프라이머를사용하는방법모두적용이가능하나가공식품의경우에는제조시가열 압력등에의하여식품중유전자의손상이발생하고유전자분석과정에서추출되는유전자의크기가작아지기때문에종특이프라이머를사용하는방법을선택하였습니다. 동물성과식물성원료총 119 종에대한판별법이수록되었으며불량식품판별및식품중이물 동정등에유용하게활용되기를기대합니다. 2013. 12. 식품의약품안전평가원장왕진호

Contents 지침서에사용된동물성 식물성원료목록과학명 6 Chapter Ⅰ 시료전처리및유전자추출 1. 시료전처리 12 2. 유전자추출 13 3. 추출유전자확인 15 Chapter Ⅱ 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR Ⅱ-Ⅰ. 동물성원료 1. 가축류 18 2. 가금류 26 3. 민물어류 36 4. 해양어류 43 5. 회유어류 60 6. 다랑어류및새치류 63 7. 심해성어류 66 8. 갑각류 69 9. 패류 73 10. 두족류 77 Ⅱ-Ⅱ. 식물성원료 1. 곡류 84 2. 서류 89 3. 콩류 92 4. 견과종실류 96 5. 과실류 105 6. 채소류 111 7. 근채류 120 8. 버섯류 128 9. 기타 133

- 유전자분석법활용 - Chapter Ⅲ 일반 universal 프라이머를이용한유전자증폭 PCR Ⅲ-Ⅰ. 동물성원료 1. LCO1490/HCO2198 프라이머를이용한방법 142 2. VF2/FISH R2 프라이머를이용한방법 144 3. L14724/H15915 프라이머를이용한방법 146 Ⅲ-Ⅱ. 식물성원료 1. trnh/psba 프라이머를이용한방법 148 2. rpob 프라이머를이용한방법 150 3. rbcl 프라이머를이용한방법 152 Chapter Ⅳ 유전자증폭산물의확인 1. 전기영동에따른결과의판정 156 Chapter Ⅴ 유전자증폭산물의결과판정 1. 결과판정 160 Chapter Ⅵ 참고문헌 164 Chapter Ⅶ 부록 176

- 유전자분석법활용 - 지침서에사용된동물성 식물성원료목록과학명 동물성시료 분류 원료명 학명 비고 소 Bos taurus 돼지 Sus scrofa 염소 Capra hircus 가축류 가금류 민물어류 사슴 Cervus elaphus Cervus nippon 양 Ovis aries 말 Equus caballus 캥거루 Macropus fuliginosus Macropus giganteus 토끼 Oryctolagus cuniculus 여우 Silurus asotus 닭 Gallus gallus 오리 Anas platyrhynchos 칠면조 Meleagris gallopago 타조 Struthio camelus 거위 Anser anser 꿩 Phasianus colchicus 집비둘기 Columba livia 멧비둘기 Columba rupestris 메추리 Coturnix coturnix 참새 Passer montanus 제비 Hirundo rustica 잉어및향어 Cyprinus carpio Cyprinus carpio nudus 붕어 Carassius auratus 미꾸라지 Misgurnus mizolepis 미꾸리 Misgurnus anguillicaudatus 가물치 Channa argus 메기 Silurus asotus 쏘가리 Siniperca scherzeri p18 p25 p26 p35 p36 p42 6

지침서에사용된동물성 식물성원료목록과학명 분류원료명 학명 비고 해양어류회유어류다랑어류및새치류심해성어류갑각류패류두족류 대구 Gadus macrocephalus 청대구 Micromesistius poutassou 명태 Theragra chalcogramma 틸라피아 Oreochromis niloticus 꽁치 Cololabis saira 고등어 Scomber japonicus 다금바리 Niphon spinosus 자바리 Epinephelus bruneus 능성어 Epinephelus septemfasciatus 날치 Cheilopogon agoo 열빙어 Mallotus villosus 청어 Clupea pallasii 까나리 Ammodytes hexapterus 멸치 Engraulis japonicus 참조기 Larimichthys polyactis 광어 Paralichthys olivaceus 조피볼락 우럭 Sebastes schlegelii 홍어 Okamejei kenojei 가오리 Urolophus aurantiacus 말쥐치 Thamnaconus modestus 농어 Lateolabrax japonicus 성게 Strongylocentrotus intermedius 연어 Salmo salar 송어 Oncorhynchus mykiss 다랑어류 Thunnus albacares Thunnus tonggol Thunnus obesus Thunnus atlanticus Thunnus thynnus 새치류 Makaira mazara Tetrapturus angustirostris Istiophorus platypterus Tetrapturus audax Xiphias gladius Makaira indica 기름갈치꼬치 Ruvettus pretiosus 흑갈치꼬치 Lepidocybirium flavobrunneum 게 Portunus trituberculatus 새우 Marsupenaeus japonicus Penaeus monodo 바닷가재 Homarus americanus 전복 Haliotis discus Haliotis madaka Haliotis gigantea 백합 Meretrix petechialis 소라 Turbo cornutus 오징어 Sepia esculenta 한치 Loligo bleekeri 주꾸미 Octopus ocellatus 낙지 Octopus minor p43 p59 p60 p62 p63 p65 p66 p68 p69 p72 p73 p76 p77 p81 7

- 유전자분석법활용 - 식물성시료목록 분류원료명 학명 비고 곡류서류콩류견과종실류과실류채소류 쌀 Oryza sativa 밀 Triticum aestivum 메밀 Fagopyrum esculentum 고구마 Ipomoea batatas 타피오카 Manihot esculenta 검정콩 Glycine max MERR. 녹두 Vigna radiatu 팥 Vigna angularis 땅콩 Arachis hypogaea L. 참깨 Sesamum indicum L. 들깨 Perilla frutescens var. japonica Hassk. Hara 올리브 Olea europaes L. 아몬드 Prunus dulcis Miel Wedd. 해바라기 Helianthus annuus L. 밤 Castanea crenata Sieb 잣 Pinus koraiensis 호두 Juglans regi 복숭아 Prunus persica Batch var. vulgaris 딸기 Fragaria ananassa Duch 앵두 Prunus tomentosa Thunb 포도 Vitis vinifera L. 대추 Ziziphus jujuba 배추 Brassica campestris L. 파및쪽파 Allium fistulosum L. & Allium ascalonicum 토마토 Lycopersicon esculentum 호박 Cucurbita moschata Duch 알로에 Aloe vera 미나리 Oenanthe javanica 부추 Allium tuberosum 오이 Cucumis sativus 고추냉이 Eutrema wasabi 겨자 Brassica juncea p84 p88 p89 p91 p92 p95 p96 p104 p105 p110 p111 p119 8

지침서에사용된동물성 식물성원료목록과학명 분류원료명 학명 비고 근채류 버섯류 기타 인삼 Panax schinseng 도라지 Platycodon grandiflorum 더덕 Nopsis lanceolata 마 Dioscorea batatas 마늘 Allium sativum 양파 Allium cepa 무 Raphanus sativus L. 생강 Zingiber officinale ROSC. 당근 Daucus carota L. 팽이버섯 Flammulina velutipes 표고버섯 Lentinula edodes 양송이버섯 Agaricus bisporus 영지버섯 Ganoderma lucidum 새송이버섯 Pleurotus eryngii 느타리버섯 Pleurotus ostreatus 녹차 Camellia taliensis 시금치 Spinacia oleracea L 클로렐라 Chlorella spp. 태국칡 Pueraria mirifica 과라나 Paullinia cupana 흰민들레 Taraxacum coreanum 민들레 Taraxacum platycarpum p120 p127 p128 p132 p133 p139 9

- 유전자분석법활용 - ⅠChapter 시료전처리및 유전자추출

- 유전자분석법활용 - Ⅰ 시료전처리및유전자추출 1. 시료전처리 1-1 시료이미지촬영 필요시의뢰된시료는디지털카메라등의영상처리장치를이용하여사진을촬영한다. 육안으로 구분이어려운경우실체현미경 광학현미경등을통하여사진을촬영할수있다. 1-2 식품유형별전처리가 건어포류 식품중어육 패육등의판별법을적용하기위한북어채등의경우에는소량의혼입량도확인하여야하기때문에가급적많은양을이용하여유전자추출에사용한다. 또한염농도가높은제품은일정시간동안멸균증류수에침지하여탈염과정을반복하면효율적이다. 나 떡류 식품중곡류등의판별법을적용하기위한떡국떡등의경우에는유전자추출의효율을높이기위하여아밀라제 α-amylase 등의효소를이용할수있다. 다 분말류 원료중근채류등의판별법을적용하기위한홍삼분말등의경우에는모든내용물을시료로선택하여야한다. 라 전류 식품중어류판별법을적용하기위한대구전 동태전등의경우밀가루부분을제거하고내부의어육부분만을시료로선택할수있다. 마 젓갈류 원료중어류 패류등의판별법을적용하는경우젓갈류에사용된고춧가루등의양념류는증류수로세척하여내용물만을시료로선택할수있다. 바 죽류 전복죽중패류등의판별법을적용하는경우육안판별이가능한경우전복등의내용물만을시료로선택할수있다. 다만 육안판별이어렵거나미세하게분쇄된경우에는전체를시료로선택하여야한다. 사 수분함량이많은검체 건조기등을이용하여수분을제거한다. 아 당분또는염농도가높은검체 멸균증류수로희석후원심분리하여침전물을검체로사용한다. 자 액상제품 원심분리후침전물을검체로사용한다. 차 기타유전자추출효율을높이기위하여식품유형별전처리조건을다양하게할수있다. 12

Ⅱ. Ⅰ. 시료전처리및유전자추출 제 1 장 2. 유전자추출 2-1 유전자추출 Ⅰ CTAB 완충용액사용법 가 균질하게분쇄된검체 2g 을폴리프로필렌튜브 50 ml용 에넣고 CTAB 완충액 15 ml를가하여 교반기 vortex mixer 로잘섞은후추가로 CTAB 완충액 30 ml를가하고 55 에서 30 분간 반응시킨다 10 분마다 10 초간교반기를사용하여충분히혼합한다. 나 균질화한용액 600 μl를 1.5 ml튜브에넣고 P C I 용액 500 μl를가하여잘혼합한후 원심분리 12 000 rpm 15 분 실온 한다. 다 상층액을새로운 1.5 ml튜브에옮긴후 C I 용액 500 μl를가하여교반기를이용하여잘혼합한 후원심분리 12 000 rpm 15 분 실온 한다. 라 상층액을새로운 1.5 ml튜브에옮기고동량의이소프로판올을가하여혼합후원심분리 12 000 rpm 10 분 실온 한다. 마 상층액을버리고 침전물에 500 μl의 70% 에탄올을벽면으로천천히가한후원심분리 12 000 rpm 1 분 실온 하여상층액을제거한후건조시킨다. 바 TE 완충액 ph 8.0 50 μl를가하여잘녹인다. 단 추출된 DNA 를정제하기위하여바 의용액에 RNase A 10 mg / ml 1 μl를가하여 37 에서 30 분간정치한경우에는나 ~ 바 항을반복할수있다. 2-2 유전자추출 Ⅱ Lysis 완충용액사용법 가 시료를액체질소나드라이아이스를이용하여잘갈아준다 파쇄입자가적을수록 DNA 추출수율이좋다. 나 DNA Extraction buffer를첨가 1 g 1 ml 하여잘섞어준다. 다 65 항온수조에서 60분간처리한다 5분간격으로흔들어준다. 라 튜브를항온수조에서꺼내어첨가한 DNA Extraction buffer와동량의 P C I 용액을넣고잘섞어준후원심분리 13 000rpm 20분 4 한다. 13

- 유전자분석법활용 - 마 상층액을새튜브에옮긴후동량의 C I 용액을넣고원심분리 13 000rpm 15분 4 한다. 바 상층액을새튜브에옮겨준후동량의이소프로판올을첨가한후잘섞어원심분리 13 000rpm 15분 4 한다. 사 상층액을버리고 1 ml 70% 에탄올을넣고 10~15초동안잘섞고원심분리 13 000rpm 10분 한다. 아 상층액은버리고침전물 pellet 을상온에서하룻밤방치하거나건조기기를이용하여완전히건조시킨다 Pellet에알코올이완전히제거될때까지건조시킨다. 자 건조가끝나면 100 μl의 TE buffer를첨가후 pellet을완전히녹인다. 차 RNase A 10 mg / ml 1 μl를첨가하여잘섞어준후 37 배양기에서 30분반응시킨다 필요시. 2-3 상업용추출키트사용 실리카겔막법 Silica gel membrane method 마그네틱비드법 Magnetic bead method 등을 이용한시중에유통되는상용화된키트를사용할수있다. 용액조성 - CTAB 완충액 0.5 M EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid ph 8.0 8 ml 1 M Tris-Cl ph 8.0 20 ml 5 M NaCl 56 ml를넣고증류수로약 150 ml가되도록한후 CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide 4 g 을가하여완전히용해시킨다. 그리고증류수를넣어전체양을 200 ml로조정한후멸균한다. - DNA Extraction buffer 100 mm Tris ph 8.0 500 mm NaCl 50 mm EDTA 1.2% SDS w/v β-mercaptoethanol 0.2% w/v 단 β-mercaptoethanol 은사용하기전에첨가. - TE buffer 10 mm Tris ph 8.0 1 mm EDTA - P C I 용액 Phenol Chloroform Isoamylalcohol = 25 24 1 - C I 용액 Chloroform Isoamylalcohol = 24 1 14

Ⅱ. Ⅰ. 시료전처리및유전자추출 3. 추출유전자확인 제 1 장 3-1 DNA의농도및순도확인 DNA 원액의농도는 TE 완충액 ph 8.0 또는멸균증류수로적절히희석한후분광광도계를사용하여 260 nm에서흡광도 Absorbance A 를측정하고 그값이 1일때 DNA 농도가 50 ng/ μl인것으로하여계산한다. 한편 추출된 DNA의순도를확인하기위하여 230 260 280 nm에서흡광도를각각측정한다. A 260 /A 280 과 A 260 /A230이 1.7~2.0일경우 PCR에적합한 DNA로판단한다. 다만 가공식품의경우이러한순도적용이어려운경우가있으므로반드시적용되는것은아니다. 만일 A 260 /A 280 이낮아단백질유래불순물의혼입이우려되는경우단백질분해효소 protease 로처리한후 DNA를회수하며 A 260 /A 230 이낮을경우전분분해효소 amylase 로처리한후 DNA를회수하여 PCR에 사용할수있다. DNA 원액에대한 DNA 농도로부터 PCR에필요한 DNA 농도가되도록 TE 완충액 ph 8.0 또는멸균증류수로희석하여 PCR용 DNA로하고 20 μl씩 0.5 ml튜브에분주하여 -20 이하에서냉동보존한다. 소분보관중인 PCR용 DNA는사용전실온에서서서히녹여사용한다. 3-2. 추출 DNA의농축 DNA 원액의농도가 PCR에필요한농도보다낮을경우재추출하고 그래도 PCR에필요한농도보다낮을경우원액을 PCR용 DNA로사용하거나아래와같은농축과정을실시하여사용할수있다. 추출 DNA 원액의농축은시중에판매되고있는 DNA 농축키트를사용하거나 다음과같은방법에의한다. 3M 초산나트륨 ph 5.2 을 DNA 용액량의 1/10배 10 M 초산암모늄을사용할경우에는 1/5배를첨가 를첨가하고차게한에탄올을 2배량가한후 12 000 rpm에서 15분간원심분리한다 이소프로판올을사용할경우에는 1배량을첨가한후상온에서원심분리한다. 원심분리후상층액은버리고염 salt 을제거하기위하여침전물을 70% 에탄올로세척하고 TE 완충액 ph 8.0 또는멸균증류수적당량으로녹인후사용한다 최초의 DNA 원액이소량일경우에는멸균증류수를사용하여시작하는양을 300~400 μl로한후농축할수있다. 15

- 유전자분석법활용 - ⅡChapter 종특이프라이머를 이용한유전자증폭 (PCR) Ⅱ Ⅰ. 동물성원료

- 유전자분석법활용 - Ⅱ 종특이프라이머를이용한유전자증폭 (PCR) Ⅱ Ⅰ. 동물성원료 1 가축류 소 돼지 양 염소 사슴 말 캥거루 토끼 여우 1.1. 종 種 특이프라이머서열 소등종특이프라이머는아래표 1 에명시된것과같다. 표 1. 소등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 소 SFI11-Cow-F SFI11-Cow-R TAT CTT GAA CTA GAC CTA GCC CAA TG GGT ACT TTC TCT ATA GCG CCG TAC 131 16S 1 돼지 SFI11-Pig-F SFI11-Pig-R CAA CCT TGA CTA GAG AGT AAA ACC GGT ATT GGG CTA GGA GTT TGT T 136 16S 양 SFI11-Lam-F SFI11-Lam-R GTA CAA CCT TCA CTA GAG AGT AAG ATC CCA GTA TTA AAT CTA GGA GTT GGC TAA TG 144 16S 염소 SFI11-Goa-F SFI11-Goa-R CAA CCT TCA CTA GAG AGT AAG ACT CT ATT GCT TCT ATT TAA TAA TAG AGC G 167 16S 사슴 SFI11-Dee-F SFI11-Dee-R TCA AGC ACA CAT CCG TAG CTC A CTT TAA CAC ACT TTA CGC CGT ATG 191 12S 2 말 SFI11-Hor-F SFI11-Hor-R TAC AAC CTT CAT TAG AGA GTA AGA ACA AG CAG TAT GAG ATT AGG AGT TAG TT 142 16S 캥거루 SFI12-Kanga-F SFI12-Kanga-R CAA CAA CCC ATC AGG AAT CAA CCC C GTG GGT TGG CAG GAG AGA AGT TGT C 170 Cytb 3 토끼 SFI13-Rabbit-F SFI13-Rabbit-R CAA CTT TAG TCT TAA TTC ACC TCC TC AAA TAA GGA GGA GAA GAA TGG CTA CA 156 Cytb 여우 SFI13-Fox-F SFI13-Fox-R CTT CCC GCA CCA TCA AAT ATT T AGA TGC TCC GTT TGC ATG TAT GTA 204 Cytb 18 1 16S 16S rdna 2 12S 12S rdna 3 Cytb Cytochrome b

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 1. 2. PCR 반응액의조성 PCR 을위한반응액의조성은아래표 2 와같다. 표 2. PCR 반응액의조성 성분 Stock 용액농도 최종농도 튜브 1회분량 Taq DNA polymerase 5 U/ μl 1.0 U 0.2 μl 완충액 10 x 1 x 2.0 μl MgCl 2 25 mm 2.0 mm 1.6 μl dntps 2.5 mm 200 μm 1.6 μl 프라이머 각 10 pmol 각 10 pmol 각 1.0 μl 주형DNA 50 ng/ μl 50 ng 1.0 μl 멸균증류수 전체량 11.6 μl 20.0 μl 반응액의조성은모든항목에공통으로적용되며경우에따라 MgCl 2 의농도를 1.0~2.5 mm 로조정할수있다. 1. 3. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 3 ~ 표 6 와같다. 표 3. PCR 반응조건 소 돼지 양 염소 사슴 말 초기변성 Initial denaturation 95 10 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 59 10 초 40 신장 extension 72 40 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 19

- 유전자분석법활용 - 표 4. PCR 반응조건 캥거루 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - - 표 5. PCR 반응조건 토끼 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 65 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 6. PCR 반응조건 여우 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 65 15 초 35 신장 extension 72 45 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 20

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 1. 4. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 그림 1. 소프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 S 1 2 3 4 5 6 그림 2. 돼지프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 21

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 그림 3. 양프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 S 1 2 3 4 5 6 그림 4. 염소프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 22

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 그림 5. 사슴프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 S 1 2 3 4 5 6 그림 6. 말프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소 lane 2 돼지 lane 3 양 lane 4 염소 lane 5 사슴 lane 6 말 23

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 그림 7. 캥거루프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 캥거루 lane 2 소 lane 3 돼지 S 1 2 3 4 그림 8. 토끼프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 토끼 lane 2 닭 lane 3 오리 lane 4 칠면조 24

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 9. 여우프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 여우 lane 2 돼지 lane 3 개 lane 4 토끼 lane 5 소 25

- 유전자분석법활용 - 2 가금류 닭 오리 칠면조 타조 거위 꿩 집비둘기 멧비둘기 메추리 참새 제비 2.1. 종 種 특이프라이머서열 닭등종특이프라이머는아래표 7 에명시된것과같다. 표 7. 닭등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 닭 SFI11-Chi-F SFI11-Chi-R CCT AAA GAC ACC CAC CTT TGT CCG TAG GAG GAT AGG TTC CAG A 281 16S 오리 SFI11-Duc-F SFI11-Duc-R CCC AGA ACC ACA ATG AGA TGA TTA AG GTA AGG GAT TCA TCT TGT TTT GGC 185 16S 칠면조 SFI11-Tur-F SFI11-Tur-R TGC CCT AAC CCC TTA AGA AAA GAA GGC ACA AGA TTT ACC AAC CCT AAA G 174 12S 타조 SFI11-Ost-F SFI11-Ost-R CCT CTA GCT CAT CCA CCC ACT TG CGG GAT GGC AAG CTT AAA TTC 239 16S 거위 SFI12-Goose-F SFI12-Goose-R GGT CAA GGT ATA GCC TAT GGA GTG GAA GA CTG CTA AAT CCG CCT TCC AGA AGT G 103 12S 꿩 SFI13-Pheasant-F SFI13-Pheasant-R CGT AAT CAC AGG CAT CAC CAT CAC T GGG TGA GTA TCA GTG CTA AGC CTA GG 152 Cytb 집비둘기 SFI13-Domestic-F SFI13-Domestic-R TTA TAG CCA CTG CAT TCG TAG GA GTT AAT GTA GGG TTA TCT ACG GAA 160 Cytb 멧비둘기 SFI13-Rufous-F SFI13-Rufous-R ATA ACC CGC TCG GTA TTT C AGC TAG GGT TAT TAG AGG AAG GAA 113 Cytb 메추리 SFI13-Quail-F SFI13-Quail-R CAC TAA TAG CCA CTG CTT TCG TAG GA GTT AGG GTA GGA TTG TCA ACT GAA 163 Cytb 참새 SFI13-Passer-F SFI13-Passer-R ATT CCT CAT CGT AGG CCT CAC ACT A GGG AGA CTA GTA GGG AGA GTA TTA ATA 167 Cytb 제비 SFI13-Barn-F SFI13-Barn-R ACT GAC CCT AGT ACA CTT AAC CCT A GGG AAG CTA GAT CGA TGA GTA GTA TA 152 Cytb 26

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 2. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 8 표 15 와같다. 제 2 장 표 8. PCR 반응조건 닭 초기변성 Initial denaturation 95 10 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 62 5 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 9. PCR 반응조건 오리 칠면조 타조 초기변성 Initial denaturation 95 10 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 63 7 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 10. PCR 반응조건 거위 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 58 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 27

- 유전자분석법활용 - 표 11. PCR 반응조건 꿩 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 68 5 초 35 신장 extension 72 20 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 12. PCR 반응조건 집비둘기 참새 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 13. PCR 반응조건 멧비둘기 초기변성 Initial denaturation 95 5 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 28

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 표 14. PCR 반응조건 메추리 제 2 장 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 62 5 초 35 신장 extension 72 20 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 15. PCR 반응조건 제비 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 29

- 유전자분석법활용 - 2. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 그림 10. 닭프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 닭 lane 2 오리 lane 3 칠면조 lane 4 타조 S 1 2 3 4 그림 11. 오리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 닭 lane 2 오리 lane 3 칠면조 lane 4 타조 30

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 그림 12. 칠면조프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 닭 lane 2 오리 lane 3 칠면조 lane 4 타조 S 1 2 3 4 그림 13. 타조프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 닭 lane 2 오리 lane 3 칠면조 lane 4 타조 31

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 14. 거위프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 거위 lane 2 오리 lane 3 닭 lane 4 칠면조 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 15. 꿩프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 꿩 lane 2 닭 lane 3 오리 lane 4 칠면조 lane 5 메추리 lane 6 집비둘기 lane 7 멧비둘기 32

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 16. 집비둘기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 집비둘기 lane 2 멧비둘기 lane 3 닭 lane 4 오리 lane 5 칠면조 lane 6 메추리 lane 7 꿩 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 17. 멧비둘기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 멧비둘기 lane 2 집비둘기 lane 3 닭 lane 4 오리 lane 5 칠면조 lane 6 메추리 lane 7 꿩 33

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 7 그림 18. 메추리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 메추리 lane 2 닭 lane 3 오리 lane 4 칠면조 lane 5 꿩 lane 6 집비둘기 lane 7 멧비둘기 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 19. 참새프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 참새 lane 2 메추리 lane 3 닭 lane 4 집비둘기 lane 5 멧비둘기 lane 6 꿩 lane 7 칠면조 34

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 20. 제비프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 제비 lane 2 메추리 lane 3 닭 lane 4 집비둘기 lane 5 멧비둘기 lane 6 참새 lane 7 오리 35

- 유전자분석법활용 - 3 민물어류 잉어 향어 붕어 미꾸라지 미꾸리 가물치 메기 쏘가리 3.1. 종 種 특이프라이머서열 잉어등종특이프라이머는아래표 16 에명시된것과같다. 표 16. 잉어등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 향어 SFI12-Carpio-R GTG CTA GTA GTG TAA GAG CTA GGA G 잉어및 SFI12-Carpio-F ATT TGT TAT TGC CGC CGC AAC CAT CAT 173 Cytb 붕어 SFI12-Crucian-F SFI12-Crucian-R CAA TGT AAT TGT TAC CGC CCA CGC CTT C GTA GTA ACA GGA ATG ATG GGG GAA GA 176 COI 4 미꾸라지 SFI12-Mozo-F SFI12-Mizo-R TCG GAG TTG TTC TCC TAC TTT TAG T TCC CCA GAT TCA TTG AAC CAG GGT A 155 Cytb 미꾸리 SFI12-Angui-F SFI12-Angui-R TTG GGG TAG TCC TTC TCC TGC TTG T GCC TCA AAT TCA TTG AAC TAA AGT G 155 Cytb 가물치 SFI12-Snakeh-F SFI12-Snakeh-R CCC TAT TAG GAC TCT GCC TAA TAG CAC GAG GCC TCG CCC AAT GTG TAG GTA GA 203 Cytb 메기 SFI13-Catfish-F SFI13-Catfish-R ATT CGC CAT TGT AGC CGC TAC ATT A GCC GTA AGG GCT GTG AGT AAA ACA A 165 Cytb 쏘가리 SFI13-Mandarin-F SFI13-Mandarin-R ATA CAT CGG AAA CAC CCT CGT CCA A CAC TGT TGC AGC TGC AAT GAT GAA C 121 Cytb 잉어와향어는동시검출용프라이머임. 4 COI Cytochrome Oxidase Subunit 1 36

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 3. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 17 표 22 와같다. 제 2 장 표 17. PCR 반응조건 잉어및향어 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 18. PCR 반응조건 붕어 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 50 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - - 표 19. PCR 반응조건 미꾸라지및미꾸리 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 37

- 유전자분석법활용 - 표 20. PCR 반응조건 가물치 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 21. PCR 반응조건 메기 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 68 10 초 35 신장 extension 72 45 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 22. PCR 반응조건 쏘가리 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 45 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 38

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 3. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 21. 잉어및향어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 잉어 lane 2 향어 lane 3 붕어 lane 4 가물치 lane 5 메기 lane 6 송어 lane 7 쏘가리 S 1 2 3 4 5 6 그림 22. 붕어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 붕어 lane 2 잉어 lane 3 가물치 lane 4 향어 lane 5 연어 lane 6 메기 39

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 그림 23. 미꾸라지프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 미꾸라지 lane 2 미꾸리 lane 3 꽁치 lane 4 고등어 lane 5 뱀장어 lane 6 갈치 S 1 2 3 4 5 6 그림 24. 미꾸리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 미꾸리 lane 2 미꾸라지 lane 3 꽁치 lane 4 고등어 lane 5 뱀장어 lane 6 갈치 40

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 그림 25. 가물치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 가물치 lane 2 향어 lane 3 잉어 lane 4 붕어 lane 5 송어 lane 6 쏘가리 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 26. 메기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 메기 lane 2 붕어 lane 3 잉어 lane 4 가물치 lane 5 향어 lane 6 송어 lane 7 쏘가리 lane 8 동자개 41

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 7 그림 27. 쏘가리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 쏘가리 lane 2 붕어 lane 3 잉어 lane 4 송어 lane 5 향어 lane 6 메기 lane 7 동자개 42

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 4 해양어류 대구 청대구 명태 틸라피아 꽁치 고등어 다금바리 자바리 능성어 날치 열빙어 청어 까나리 멸치 참조기 광어 조피볼락 홍어 가오리 말쥐치 농어 성게 제 2 장 4.1. 종 種 특이프라이머서열 대구등종특이프라이머는아래표 23 에명시된것과같다. 표 23. 대구등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 대구 SFI10-D-F SFI10-D-R AAA ATA TGA GAG GTC CCG CC TAT CAC TAA GTT TTC GCT GTT ATC A 271 16S 청대구 SFI10-D-F SFI10-BD-R AAA ATA TGA GAG GTC CCG CC TAT CAC TAA GTT TTT ACT ATT ATC GT 271 16S 명태 SFI10-D-F SFI10-M-R AAA ATA TGA GAG GTC CCG CC TAT CAC TAA GTT TTC GCT GTT ATT T 271 16S 틸라피아 SFI11-Til-F SFI11-Til-R TTT AAA TTC TTT ACC CCC ATT GGC CTG CTT TTA GGC CCA CTA GAA CAT TAG 167 16S 꽁치 SFI12-Saury-F SFI12-Saury-R CTG AGG GGC AAC CGT GAT TA CTG CAA TGA TGA AGG GAA AT 152 Cytb 고등어 SFI12-Masaba-F SFI12-Masaba-R CTG CTC CTG TCT TCT TCG GCA TTT GGT ATT GGG ACA CAC CTG 211 COI 다금바리 SFI12-Spino-F SFI12-Spino-R GGA CCA AAC CAA ATG AGT GGT CAG AAA TTC TGT TGA C 136 16S 자바리 SFI12-Brune-F SFI12-Brune-R GCG CAA TCA CTT GTC TTT TAA ATA ATG TTC AGG GTA TTA ATG C 181 16S 능성어 SFI12-Septem-F SFI12-Septem-R CAT CCC CAA CAA CAG GAC AT TCG CTC TTG GTT GTG AAT GTT 123 16S 43

- 유전자분석법활용 - 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 날치 SFI13-Flying-F SFI13-Flying-R CTG CAA GCA GAC CAT GCT AAT TAG A TTC TGG GAG AAA AGT TCT CCT GCT 136 16S 열빙어 SFI13-Mallotus-F SFI13-Mallotus-R ATT GTG ACT CCT GTC TCT CCT GTC T TAA TCG GCA TGT GCC GGA TCA TTT 151 16S 청어 SFI13-Clupea-F SFI13-Clupea-R TTA TGC CTA GCG GCA CAA ATC TTA A TAT GTG CAT AAA TGC AGA TGA AGA A 178 Cytb 까나리 SFI13-Ammody-F SFI13-Ammody-R CTC TGT CTT ATC GCA CAA ATT CTT A TGT GCA TGT AAA GGC AAA TAA AGA A 178 Cytb 멸치 SFI13-Anchovy-F SFI13-Anchovy-R ACT AGC CAA CTG TGA ATA AGC GAC T GTT GCA ACT CTC GGC TTA AGG GTT T 146 16S 참조기 SFI13-Larimic-F SFI13-Larimic-R TGC TTT CAT TAT GCT CGC AGC CTC A TAA GAA TCG TTG TGA TGA AGT TGA T 188 COI 광어 SFI13-Halibut-F SFI13-Halibut-R ATG TTT AAT CAC CCA GAT TTT AAC C ATG TGG AGG TAA ATG CAG ATA AAG A 177 Cytb 조피볼락 SFI13-Sebastes-F SFI13-Sebastes-R ACC AAA GAA GAT CCT GTC AAG TAA C AGA TAT TCT GTT AAT TAG AGC TGC G 166 16S 홍어 SFI13-Raja-F SFI13-Raja-R CTC CAT TAA CTT CAT CAC CAC AAT T AGA AAG TTG TGT TGA GAT TAC GAT C 179 COI 가오리 SFI13-Ray-F SFI13-Ray-R CAT CGT TAT ATA TGA ATT ACC CC GGA GGG AAC CCA TTT GGC TTA CT 218 COI 말쥐치 SFI13-File-F SFI13-File-R CAC TAA AAC TGA TCA TGT AAA AGA C TAA CGC CGG ATC AGT AAG GTC AGA A 188 16S 농어 SFI13-SeaBass-F SFI13-SeaBass-R TGC TTG ATT ACT CAA ATC CTC ACA G CCC CGC CCA ATA TGT ATG TAA ATG C 185 Cytb 성게 SFI13-SeaUrchin-F SFI13-SeaUrchin-R GCA GGG ATA ACA GCG TTA TCT TT GAC TTT AAT GGT CGA ACA GAC C 127 16S 44

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 4. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 24 표 36 과같다. 제 2 장 표 24. PCR 반응조건 대구 청대구 명태 초기변성 Initial denaturation 94 4 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 61 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 3 분 1 보존 4 - - - 표 25. PCR 반응조건 틸라피아 초기변성 Initial denaturation 94 10 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 30 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 26. PCR 반응조건 꽁치 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 45

- 유전자분석법활용 - 표 27. PCR 반응조건 고등어 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 20 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 28. PCR 반응조건 다금바리 초기변성 Initial denaturation 95 5 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 57 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 29. 반응조건 자바리및능성어 초기변성 Initial denaturation 95 5 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 60 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 46

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 표 30. PCR 반응조건 날치 청어 까나리 멸치 홍어 말쥐치 제 2 장 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 31. PCR 반응조건 열빙어 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 32. PCR 반응조건 참조기 조피볼락 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 58 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 47

- 유전자분석법활용 - 표 33. PCR 반응조건 광어 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 64 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 34 PCR 반응조건 가오리 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 35. PCR 반응조건 점농어 초기변성 Initial denaturation 95 3 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 58 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 48

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 표 36. PCR 반응조건 성게 제 2 장 초기변성 Initial denaturation 95 3 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 55 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 49

- 유전자분석법활용 - 4. 3. PCR 반응결과 A B C S 1 2 3 1 2 3 1 2 3 그림 28. 대구 A 청대구 B 및명태 C 프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 대구 lane 2 청대구 lane 3 명태 S 1 2 3 4 5 6 그림 29. 틸라피아프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 2 틸라피아 lane 3 옥돔 lane 4 참도미 lane 5 뱀꼬돔 lane 6 고등어 50

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 30. 꽁치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 꽁치 lane 2 미꾸라지 lane 3 미꾸리 lane 4 고등어 lane 5 갈치 S 1 2 3 4 5 그림 31. 고등어특이프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 고등어 lane 2 미꾸라지 lane 3 미꾸리 lane 4 꽁치 lane 5 갈치 51

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 그림 32. 다금바리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 다금바리 lane 2 자바리 lane 3 능성어 lane 4 우럭 lane 5 도미 S 1 2 3 4 5 그림 33. 자바리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 자바리 lane 2 다금바리 lane 3 능성어 lane 4 우럭 lane 5 도미 52

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 34. 능성어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 능성어 lane 2 다금바리 lane 3 자바리 lane 4 우럭 lane 5 도미 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 35. 날치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 날치 lane 2 청어 lane 3 열빙어 lane 4 명태 lane 5 연어 lane 6 은연어 lane 7 멸치 lane 8 성게 53

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 그림 36. 열빙어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 열빙어 lane 2 날치 lane 3 청어 lane 4 멸치 lane 5 까나리 S 1 2 3 4 5 그림 37. 청어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 청어 lane 2 날치 lane 3 열빙어 lane 4 멸치 lane 5 까나리 54

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 38. 까나리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 까나리 lane 2 날치 lane 3 열빙어 lane 4 멸치 lane 5 청어 S 1 2 3 4 5 그림 39. 멸치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 멸치 lane 2 날치 lane 3 열빙어 lane 4 까나리 lane 5 청어 55

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 그림 40. 참조기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 참조기 lane 2 청어 lane 3 가자미 lane 4 보구치 백조기 lane 5 부세 조구 S 1 2 3 4 5 그림 41. 광어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 광어 lane 2 조피볼락 우럭 lane 3 도다리 lane 4 말쥐치 lane 5 가자미 56

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 그림 42. 조피볼락프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 조피볼락 lane 2 광어 lane 3 도다리 lane 4 말쥐치 S 1 2 3 4 5 그림 43. 홍어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 홍어 미국산 lane 2 홍어 중국산 lane 3 홍어 칠레산 lane 4 흰가오리 lane 5 전기가오리 57

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 그림 44. 가오리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 흰가오리 lane 2 전기가오리 lane 3 홍어 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 45. 말쥐치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 말쥐치 lane 2 명태 lane 3 꽁치 lane 4 고등어 lane 5 도다리 lane 6 광어 lane 7 조피볼락 우럭 58

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 46. 농어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 농어 lane 2 가자미 lane 3 우럭 lane 4 광어 lane 5 도미 lane 6 민어 lane 7 숭어 S 1 2 3 4 5 그림 47. 성게프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 성게 lane 2 멍게 lane 3 연어 lane 4 날치 lane 5 열빙어 59

- 유전자분석법활용 - 5 회유어류 연어및송어 5.1. 종 種 특이프라이머서열 연어및송어종특이프라이머는아래표 37 에명시된것과같다. 표 37. 연어및송어종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 연어 SFI12-Salmon-F TTC GTA GGC TAC GTT CTT CCA TGA SFI12-Salmon-R TAA AAA TAG AAG ATG GAG TAC TGT G 219 Cytb 송어 SFI12-Trout-F SFI12-Trout-R GCC ATA CTC CTA GGC CTA ACA TCC TT AGA AGT GTG TAG GAT GGG GAC AAC C 231 Cytb 은연어 Onchorhynchus kisutch 에서는 band 확인이되지않음. 60

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 5. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 38 및표 39 와같다. 제 2 장 표 38. PCR 반응조건 연어 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 30 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 39. PCR 반응조건 송어 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 61

- 유전자분석법활용 - 5. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 6 그림 48. 연어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 연어 lane 2 송어 lane 3 향어 lane 4 잉어 lane 5 붕어 lane 6 쏘가리 S 1 2 3 4 5 6 그림 49. 송어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 송어 lane 2 연어 lane 3 향어 lane 4 잉어 lane 5 붕어 lane 6 쏘가리 62

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 6 다랑어류및새치류 제 2 장 6.1. 종 種 특이프라이머서열 다랑어류및새치류종특이프라이머는아래표 40 에명시된것과같다. 표 40. 다랑어류및새치류종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 다랑어류 SFI12-Tuna-F SFI12-Tuna-R TTG CCG GCA ATC TGG CCC ACG CAG G TGT TTG ATA CTG AGA AAT AGC TGC A 149 COI 새치류 SFI12-Marlin-F SFI12-Marlin-R GTC ACC AAT GAT ACT GAA GC GTT CAG TTT TCA AAG TGT TC 367 COII 5 5 COII Cytochrome Oxidase Subunit Ⅱ 63

- 유전자분석법활용 - 6. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 41 및표 42 와같다. 표 41. PCR 반응조건 다랑어류 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 63 5 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 42. PCR 반응조건 새치류 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 50 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 64

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 6. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 50. 다랑어류프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 참다랑어 lane 2 황다랑어 lane 3 황새치 lane 4 돛새치 lane 5 청새치 lane 6 고등어 lane 7 꽁치 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 51. 새치류프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 돛새치 lane 2 녹새치 lane 3 청새치 lane 4 황새치 lane 5 황다랑어 lane 6 참다랑어 lane 7 꽁치 65

- 유전자분석법활용 - 7 심해성어류 기름갈치꼬치및흑갈치꼬치 7.1. 종 種 특이프라이머서열 기름갈치꼬치및흑갈치꼬치종특이프라이머는아래표 43 에명시된것과같다. 표 43. 기름갈치꼬치및흑갈치꼬치종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 기름갈치꼬치 SFI12-pretio-F SFI12-pretio-R GGG CTT AAC TGT CTC CTT TTT CA CCA AAG ACA TTA GGG CAT ACG 178 16S 흑갈치꼬치 SFI12-flavo-F SFI12-flavo-R TGC AAA AGC GGG GAT ACC C AGT TTG GTC AGA AAT TCT GTT TGC 238 16S 기름갈치꼬치및흑갈치꼬치는일반적으로기름치 Oilfish 로알려져있음. 66

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 7. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 44 및표 45 와같다. 제 2 장 표 44. PCR 반응조건 기름갈치꼬치 초기변성 Initial denaturation 95 5 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 60 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 45. PCR 반응조건 흑갈치꼬치 초기변성 Initial denaturation 95 5 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 62 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 67

- 유전자분석법활용 - 7. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 52. 기름갈치꼬치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 기름갈치꼬치 lane 2 흑갈치꼬치 lane 3 참다랑어 lane 4 황다랑어 lane 5 눈다랑어 lane 6 청새치 lane 7 황새치 lane 8 녹새치 lane 9 돛새치 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 53. 흑갈치꼬치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 흑갈치꼬치 lane 2 기름갈치꼬치 lane 3 참다랑어 lane 4 황다랑어 lane 5 눈다랑어 lane 6 청새치 lane 7 황새치 lane 8 녹새치 lane 9 돛새치 68

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 8 갑각류 게 새우 바닷가재 제 2 장 8.1. 종 種 특이프라이머서열 게등종특이프라이머는아래표 46 에명시된것과같다. 표 46. 게등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 게 SFI12-Crab-F SFI12-Crab-R TTA CAA TGT TGT AGT CAC AGC TCA T AGA GTT AAT GAA GGA GGA AGA AGT C 174 COI 새우 SFI12-Shrimp-F SFI12-Shrimp-R CAC ATT ATT GGA TCC TAA GTC CA GGT ATC CTT ATA ATG CAG CAG TT 231 NADH 6 바닷가재 SFI13-Lobster-F SFI13-Lobster-R AAG CCT CAT TGG TGA CGA TCA AAT AAA TCT TAT ATT GTT CAT ACG GGG 172 COI 6 NADH NADH Dehydrogenase Subunit 69

- 유전자분석법활용 - 8. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 47 ~ 표 49 와같다. 표 47. PCR 반응조건 게 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 45 30 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 48. PCR 반응조건 새우 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 49. PCR 반응조건 바닷가재 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 64 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 70

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 8. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 54. 게프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 게 lane 2 새우 lane 3 가재 lane 4 고등어 lane 5 꽁치 S 1 2 3 4 5 그림 55. 새우프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 새우 lane 2 게 lane 3 고등어 lane 4 꽁치 lane 5 가재 71

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 56. 바닷가재프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 바닷가재 lane 2 게 lane 3 새우 lane 4 킹크랩 72

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 9 패류 전복 백합 소라 제 2 장 9.1. 종 種 특이프라이머서열 전복등종특이프라이머는아래표 50 에명시된것과같다. 표 50. 전복등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 전복 SFI12-Abalone-F SFI12-Abalone-R ACT CTG CTC TTA ACA TCA GGC GCA TGA GAT TCC GGC TAG GTG TAG GGA G 141 COI 백합 SFI12-Baekhap-F SFI12-Baekhap-R GGT GCT TCT TCT ATT ATG TCT GGT A TGT GTT AAA ATT ACG ATC TGT CAA A 192 COI 소라 SFI12-Sora-F SFI12-Sora-R GAG CTT TAG TGA TTT GAT AAA T CAT AAA TTA ATG GAT TGA CTT CCA 161 16S 73

- 유전자분석법활용 - 9. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 51 및표 52 와같다. 표 51. PCR 반응조건 전복및백합 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 표 52. PCR 반응조건 소라 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 74

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 9. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 57. 전복프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 전복 lane 2 백합 lane 3 가리비 lane 4 키조개 lane 5 논우렁이 lane 6 백고동 lane 7 다슬기 lane 8 홍합 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 58. 백합프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 백합 lane 2 전복 lane 3 가리비 lane 4 키조개 lane 5 논우렁이 lane 6 백고동 lane 7 다슬기 lane 8 홍합 75

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 그림 59. 소라프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 소라 lane 2 전복 lane 3 백합 lane 4 가리비 lane 5 키조개 76

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 10 두족류 오징어 한치 주꾸미 낙지 제 2 장 10.1. 종 種 특이프라이머서열 오징어등종특이프라이머는아래표 53 에명시된것과같다. 표 53. 오징어등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 오징어 SFI13-Cuttle-F SFI13-Cuttle-R GTA GTT ACT GGC TCA CGG ATT CAT AAA TTC CTA GAT AAA GGG GGA TA 239 COI 한치 SFI10-S-F SFI10-H-R GCG GTA TTT TAA CTG TAC TAA GGT AGC ATA A CCC CAA TTA AAA TTT ATA GAA CAC A 234 COI 주꾸미 SFI12-Jjuccu-F SFI12-Jjuccu-R GCT CAT ATA GGA CCC TCC GTC G GTG ATT GCA CCA GCA AGT ACT GG 212 COI 낙지 SFI12-Minor-F SFI12-Minor-R CTG AAT TAG GTC AAC CAG GTT CAC AAG GTT AGG GAA GGA GGA AGA AGT C 217 COI 77

- 유전자분석법활용 - 10. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 54 표 57 과같다. 표 54. PCR 반응조건 오징어 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 55. PCR 반응조건 한치 초기변성 Initial denaturation 94 15 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 52 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 56. PCR 반응조건 주꾸미 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 50 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 78

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 표 57. PCR 반응조건 낙지 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 58 15 초 30 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 10 분 1 보존 4 - - 79

- 유전자분석법활용 - 10. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 그림 60. 오징어프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 오징어 lane 2 한치 lane 3 주꾸미 lane 4 낙지 lane 5 문어 S 1 2 3 4 그림 61. 한치프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 2 한치 lane 3 4 오징어 80

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 그림 62. 주꾸미프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 주꾸미 lane 2 오징어 lane 3 낙지 lane 4 한치 lane 5 꼴뚜기 lane 6 문어 S 1 2 3 4 5 그림 63. 낙지프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 낙지 lane 2 오징어 lane 3 주꾸미 lane 4 한치 lane 5 꼴뚜기 81

- 유전자분석법활용 - ⅡChapter 종특이프라이머를 이용한유전자증폭 (PCR) Ⅱ Ⅱ. 식물성원료

- 유전자분석법활용 - Ⅱ Ⅱ. 식물성원료 1 곡류 쌀 밀 메밀 1.1. 종 種 특이프라이머서열 쌀등종특이프라이머는아래표 58 에명시된것과같다. 표 58. 쌀등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 쌀 SFI11-Ric-F SFI11-Ric-R CAA CGC AAC GTC TTG TAT GG TGA ACC CTG AGT TCC TCT CG 123 센트로미어 밀 wheat-its-f wheat-its-r PRP8F PRPds6R TCG GGA TGC GGC A ATT GAT AAA GCG AGG A GCA CCC ATG ATG AGT ACT ACT ATT CTG TA TGC AAA CGA ATA AAA GCA TGT G 111 ITS 117 GMO 7 메밀 SFI11-Buc-F SFI11-Buc-R GAG CCC TCT CGT AGA GTC CG GGA GTA GGA AGG AAG CAA GAG 138 알러젠관련 7 논문참조밀종특이프라이머 target gene proline-rich protein PRP An Endogenous Reference Gene of Common and Durum Wheat for Detection of Genetically Modified Wheat Food Hyg. Saf. Sci. Vol. 53 No. 5 pp.203-210 2012 84

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 1. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 59 표 62 와같다. 제 2 장 표 59. PCR 반응조건 쌀 초기변성 Initial denaturation 94 2 분 1 변성 denaturation 94 10 초 결합 annealing 60 10 초 32 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 3 분 1 보존 4 - - - 표 60. PCR 반응조건 밀 -ITS 초기변성 Initial denaturation 94 10 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 50 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - - 표 61. PCR 반응조건 밀 -GMO 초기변성 Initial denaturation 94 10 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 35 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - - 85

- 유전자분석법활용 - 표 62. PCR 반응조건 메밀 초기변성 Initial denaturation 94 12 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 20 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 2 분 1 보존 4 - - - 86

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 1. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 그림 64. 쌀프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 쌀 lane 2 밀 lane 3 메밀 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 65. 밀프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 밀 lane 2 찹쌀 lane 3 현미 Lane 4 점정현미 lane 5 찰현미 Lane 6 검정찰현미 lane 7 메밀 87

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 7 그림 66. 밀프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 밀 lane 2 찹쌀 lane 3 현미 Lane 4 점정현미 lane 5 찰현미 Lane 6 검정찰현미 lane 7 메밀 S 1 2 3 그림 67. 메밀프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 쌀 lane 2 밀 lane 3 메밀 88

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 2 서류 고구마및타피오카 제 2 장 2.1. 종 種 특이프라이머서열 고구마및타피오카종특이프라이머는아래표 63 에명시된것과같다. 표 63. 고구마및타피오카종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 고구마 ib-286-f ib-286-r AGC CAC TCC AAC AGC ACA TA GGT TTC CCA ATC AGC AAT TC 105 SSR 타피오카 SSRY26-F SSRY26-R TGC TAA TTG CAG GAA ATA GGA T GCA GCT TTT TAG CAT AAC AAT CAA 121 SSR 89

- 유전자분석법활용 - 2. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 64 및표 65 과같다. 표 64. PCR 반응조건 고구마 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 30 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 65. PCR 반응조건 타피오카 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 60 초 결합 annealing 55 60 초 35 신장 extension 72 120 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 단 PCR 반응액조제시 MgCl 2 의농도는 2.5 mm 로함. 90

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 2. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 68. 고구마프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 고구마 lane 2 밀 lane 3 옥수수 lane 4 감자 lane 5 도토리 S 1 2 3 4 5 그림 69. 타피오카프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 타피오카 lane 2 고구마 lane 3 감자 lane 4 현미 lane 5 옥수수 91

- 유전자분석법활용 - 3 콩류 검정콩 3.1. 종 種 특이프라이머서열 검정콩등종특이프라이머는아래표 66 에명시된것과같다. 표 66. 검정콩등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 검정콩 SFI12-Blackbe-F SFI12-Blackbe-R CGT AAC TGC ACA GAG CTT AAG TTA TTA AGT CCA ATG TGG CTT AAC TTT TAG A 297 F3'H 8 녹두 SFI13-Mung bean-f SFI13-Mung bean-r KSG CAA CAA CTT GTG TGA GAT GCA AGA GCC GAG ATA 201 ITS 팥 SFI13-Red bean-f SFI13-Red bean-r TCA CCT CTC CAG GCA AAA C ACA CCA AGT ATC GCA TTT 202 ITS 8 F3'H Flavonoid 3'Hydroxylase 92

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 3. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 67 ~ 표 69 와같다. 제 2 장 표 67. PCR 반응조건 검정콩 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 65 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 68. PCR 반응조건 녹두 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 65 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 69. PCR 반응조건 팥 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 15 초 35 신장 extension 72 45 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 93

- 유전자분석법활용 - 3. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 6 그림 70. 검정콩프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 검정콩 lane 2 흰콩 lane 3 강남콩 lane 4 팥 lane 5 흑미 lane 6 찰흑미 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 71. 녹두프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 녹두 lane 2 옥수수 lane 3 감자 lane 4 고구마 Lane 5 팥 lane 6 밀 lane 7 완두 94

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 8 그림 72. 팥프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 팥 lane 2 옥수수 lane 3 감자 lane 4 고구마 Lane 5 녹두 lane 6 밀 lane 7 완두 95

- 유전자분석법활용 - 4 견과종실류 땅콩 참깨 들깨 올리브 아몬드 해바라기 밤 잣 호두 4.1. 종 種 특이프라이머서열 땅콩등종특이프라이머는아래표 70 에명시된것과같다. 표 70. 땅콩등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 땅콩 PM53-F PM53-R CCT ATC CTA TGG GTC ACT AGC C GCT TGT GCT CAT CTT GAG TTT T 120 SSR 참깨 ZM-25-F ZM-25-R CCT GAA CCT TCT CTC TCT CTC ACT GAC AGT ACG AAT TCA CCA 220 SSR 들깨 GBPFM75-F GBPFM75-R CAT AGT TCA TGG CTT CCA CC CCT GAG CAC AGA AAC AGA TCA 150 SSR 올리브 UD099-014-F UD099-014-R TTC CCC TTA TTC AAT GTG AAC C ACT GCA GTT TGG GAA TCA AA 103 SSR 아몬드 SFI12-Almond-F SFI12-Almond-R AAA GAA ACC ACT AAA GCA GCT ATG CAT AGA GGG TGT GCA CAT GG 103 CYP79D16 해바라기 SFI12-Sunflow-F SFI12-Sunflow-R GCC GGG ACC GAA GCA TTT GT ATT TTG TCA ACA TGA CAT CC 104 ITS2 9 밤 SFI13-Chestnut-F SFI13-Chestnut-R TAG AAC ATT TTG CCG AAG TC CAT TSC CAT AAA TTG ACA AGG 181 matk 잣 SFI13-Pine nut-f SFI13-Pine nut-r TTC TCG TCG AAA TTC ACT GA GGA TAA TTG ATG AGA ACA GAC 211 matk 호두 SFI13-Juglans-F SFI13-Juglans-R CTT TTT GAG CGA ATT TA TAT ATC TAA GAA GGG TT 245 matk 9 ITS2 Internal Transcribed Spacer 2 96

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 4. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 71 표 78 과같다. 제 2 장 표 71. PCR 반응조건 땅콩 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 67 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 72. PCR 반응조건 참깨 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 67 20 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 73. PCR 반응조건 들깨 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 65 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 97

- 유전자분석법활용 - 표 74. PCR 반응조건 올리브 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 75. PCR 반응조건 아몬드 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 60 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 76. PCR 반응조건 해바라기 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 98

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 표 77. PCR 반응조건 밤 제 2 장 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 20 초 결합 annealing 62 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 78. PCR 반응조건 잣 호두 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 62 30 초 35 신장 extension 72 1 분 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 99

- 유전자분석법활용 - 4. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 그림 73. 땅콩프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 땅콩 lane 2 올리브 lane 3 포도 lane 4 옥수수 lane 5 들깨 lane 6 호박 lane 7 콩 lane 8 현미 lane 9 해바라기 lane 10 야자 lane 11 고추 lane 12 참깨 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 그림 74. 참깨프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 참깨 lane 2 고추 lane 3 호박 lane 4 올리브 lane 5 포도 lane 6 옥수수 lane 7 들깨 lane 8 콩 lane 9 현미 lane 10 해바라기 lane 11 야자 lane 12 땅콩 100

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 그림 75. 들깨프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 들깨 lane 2 올리브 lane 3 포도 lane 4 옥수수 lane 5 참깨 lane 6 호박 lane 7 콩 lane 8 현미 lane 9 해바라기 lane 10 땅콩 lane 11 야자 lane 12 고추 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 그림 76. 올리브프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 올리브 lane 2 포도 lane 3 옥수수 lane 4 들깨 lane 5 참깨 lane 6 호박 lane 7 콩 lane 8 현미 lane 9 해바라기 lane 10 땅콩 lane 11 야자 lane 12 고추 101

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 그림 77. 아몬드프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 아몬드 lane 2 살구 lane 3 복숭아 lane 4 앵두 lane 5 땅콩 lane 6 올리브 lane 7 체리 lane 8 자두 lane 9 블루베리 lane 10 수박 lane 11 호박 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 그림 78. 해바라기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 해바라기 lane 2 포도 lane 3 옥수수 lane 4 참깨 lane 5 들깨 lane 6 호박 lane 7 콩 lane 8 현미 lane 9 땅콩 lane 10 야자 lane 11 고추 102

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 79. 밤프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 밤 lane 2 고구마 lane 3 울금 lane 4 호두 lane 5 잣 lane 6 도토리 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 80. 잣프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 잣 lane 2 호두 lane 3 포도 lane 4 호박 lane 5 해바라기 lane 6 땅콩 103

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 5 그림 81. 호두프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 호두 lane 2 잣 lane 3 아몬드 lane 4 땅콩 lane 5 밤 104

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 5 과실류 복숭아 딸기 앵두 포도 대추 제 2 장 5.1. 종 種 특이프라이머서열 복숭아등종특이프라이머는아래표 79 에명시된것과같다. 표 79. 복숭아등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 복숭아 UDP96-015-F UDP96-015-R CCT TGA CCT ATT TGT TCG TCA ACT AGT CAA ACA ATC CCC CG 174 SSR 딸기 ARSFL-27-F ARSFL-27-R GCG AAG CCC AGA CTC AAT TAC C GCG TAC CCG CCA TTG TTA C 164 SSR 앵두 SFI12-Sweetch-F SFI12-Sweetch-R ATC CTT GGC CAA CAC TTC AG GAG AGT CGT TTT AGA CTT TAC ATT G 236 ITS1 포도 SFI12-Grape-F SFI12-Grape-R ATG GAA GCT GTT CTA ACA AAA ACA TAG GTT TAT CCT TCA TCC TTT CTG G 104 trnltrnf 10 대추 SFI13-date-F SFI13-date-R AAA CCG CGC CAA GGA ACA CCT GAT GGT TCA CGG GAT TCT GC 196 ITS 10 trnl-trnf trna-leu trnl -trna-phe trnf 105

- 유전자분석법활용 - 5. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 80 표 84 와같다. 표 80. PCR 반응조건 복숭아 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 55 20 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 81. PCR 반응조건 딸기 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 82. PCR 반응조건 앵두 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 61 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 106

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 표 83. PCR 반응조건 포도 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 68 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 84. PCR 반응조건 대추 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 68 30 초 35 신장 extension 72 1 분 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 107

- 유전자분석법활용 - 5. 3. PCR 반응결과 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 82. 복숭아프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 복숭아 lane 2 아몬드 lane 3 살구 lane 4 앵두 lane 5 땅콩 lane 6 올리브 lane 7 체리 lane 8 자두 lane 9 블루베리 S 1 2 3 4 5 6 그림 83. 딸기프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 딸기 lane 2 복분자 lane 3 블루베리 lane 4 포도 lane 5 체리 lane 6 당근 108

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 84. 앵두프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 앵두 lane 2 땅콩 lane 3 복숭아 lane 4 살구 lane 5 아몬드 lane 6 올리브 lane 7 체리 lane 8 자두 lane 9 블루베리 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 그림 85. 포도프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 포도 lane 2 땅콩 lane 3 올리브 lane 4 옥수수 lane 5 들깨 lane 6 참깨 lane 7 호박 lane 8 콩 lane 9 현미 lane 10 해바라기 lane 11 야자 lane 12 고추 lane 13 블루베리 109

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 86. 대추프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 대추 lane 2 포도 lane 3 블루베리 110

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 6 채소류 배추 파 쪽파 토마토 호박 알로에 미나리 부추 오이 고추냉이 겨자 제 2 장 6.1. 종 種 특이프라이머서열 배추등종특이프라이머는아래표 85 에명시된것과같다. 표 85. 배추등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 배추 SFI12-Cabbage-F SFI12-Cabbage-R ATC CTT GGC CAA CAC TTC AG GAG AGT CGT TTT AGA CTT TAC ATT G 173 ITS1 쪽파 SFI12-Spronion-R TGT GTT AAC TCG ATA CAC CAT T 파및 SFI12-Spronion-F ACC CAC CTA CGG TAA ACT TAC AC 136 ITS1 토마토 TGS1543-F TGS1543-R GAG GTG GTT GGT AAG TGG TGG TTC AAG TTT CAA GGC TGG CT 132 SSR 호박 CMTm48-F CMTm48-R AAG CCT TTG GGG ACC TTT AC TTG AAA CCT TCA AAC AAG AAA TTG 101 SSR 알로에 SFI13-Aloe-F SFI13-Aloe-R AAG GAC GAC CGC GAA CCA TT CCT CCG ACC GWT GTG TTC CTT 175 ITS 미나리 SFI13-Water parsley-f SFI13-Water parsley-r ACG ACC CGC TAA CGT GTA AAC TAC AYG AAG CGC GCG YGC ATT 193 ITS 부추 SFI13-Chives-F SFI13-Chives-R TAT TGT TTA GAA GGG TTT CC AAG TGT CGC ATT TCG CTA 235 ITS 오이 SFI13-Cucumber-F SFI13-Cucumber-R TCG TAC CGG CCT CGG TGG TGC TTC AAA GAC TCG GTG GTT CAC 178 ITS 고추냉이 SFI13-Wasabi-F SFI13-Wasabi-R GTY TYG GTY GGA TCG TRC GCA TTG CCG AGA GTC GTT TTA GAC T 166 ITS 겨자 SFI13-Mustard-F SFI13-Mustard-R TAT CTC GGC TGG GTC ATG CGT G TTG CCG AGA GTC GTT TTA GAC T 167 ITS 파및쪽파는동시검출용프라이머임. 111

- 유전자분석법활용 - 6. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 86 표 94 와같다. 표 86. PCR 반응조건 배추 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 67 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 87. PCR 반응조건 파및쪽파 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 68 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 88. PCR 반응조건 토마토 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 67 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 112

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 표 89. PCR 반응조건 호박 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 90. PCR 반응조건 알로에 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 10 초 35 신장 extension 72 45 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 91. PCR 반응조건 미나리및부추 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 30 초 35 신장 extension 72 1 분 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 113

- 유전자분석법활용 - 표 92. PCR 반응조건 오이 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 15 초 결합 annealing 53 5 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 93. PCR 반응조건 고추냉이 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 15 초 결합 annealing 53 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 94. PCR 반응조건 겨자 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 53 15 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 114

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 6. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 그림 87. 배추프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 배추 lane 2 무 lane 3 마늘 lane 4 양파 S 1 2 3 4 5 그림 88. 파및쪽파프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 파 lane 2 쪽파 lane 3 양파 lane 4 마늘 lane 5 생강 115

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 89. 토마토프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 토마토 lane 2 고추 lane 3 적파프리카 lane 4 청피망 S 1 2 3 4 5 그림 90. 호박프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 호박 lane 2 당근 lane 3 현미 lane 4 옥수수 lane 5 밀 116

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 91. 알로에프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 알로에 lane 2 오이 lane 3 양파 lane 4 배추 lane 5 마늘 Lane 6 호박 lane 7 수박 lane 8 참외 S 1 2 3 4 5 6 7 그림 92. 미나리프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 미나리 lane 2 배추 lane 3 녹차 lane 4 시금치 lane 5 클로렐라 Lane 6 스피루리나 117

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 93. 부추프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 부추 lane 2 파 lane 3 쪽파 S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 그림 94. 오이프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 오이 lane 2 알로에 lane 3 양파 lane 4 배추 lane 5 마늘 Lane 6 호박 lane 7 수박 lane 8 참외 118

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 그림 95. 고추냉이프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 고추냉이 lane 2 겨자 lane 3 후추 lane 4 무 S 1 2 3 4 5 그림 96. 겨자프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 겨자 lane 2 고추냉이 lane 3 후추 lane 4 무 119

- 유전자분석법활용 - 7 근채류 인삼 더덕 도라지 마 마늘 양파 무 생강 당근 7.1. 종 種 특이프라이머서열 인삼등종특이프라이머는아래표 95 에명시된것과같다. 표 95. 인삼등종특이프라이머정보 구분프라이머명염기서열 5`-3` 예상크기 bp 비고 인삼 SFI11-Gin-F SFI11-Gin-R GAT CCC GGA CGT AAT CCT G TTT ATT TCT CTT TCA AAT TTC GCC 150 광합성관련 더덕 SFI11-Deo-F SFI10-Deo-R CCT GGA CGT GAA GAA TAA TCA AC AAT TTA GAA AAC CCC TTT TCC TAT T 113 광합성관련 도라지 SFI11-Bal-F SFI11-Bal-R GTA ATC CTG GAC GTG AAG AAT AAT AT AAT TTA GAA AAC CCC TTT TCC TAT T 137 광합성관련 마 SFI11-Hem-F SFI11-Hem-R GAT CCC GGA CGT AAT CCT G TGC TTA TGA TCA CTT GAT AGT TTT GAA 181 광합성관련 마늘 GB-ASM-080-F GB-ASM-080-R AAT CTC CCT CCA AAG TCC C CTG TAT TTT GTG TAA AGC ATC A 180 SSR 양파 API73-F API73-R GTT TCT TGG ATG CGA TTT TG GCA ACT GTA TAA TCA GCA TAT GC 280 SSR 무 A137-F A137-R GGG AGA GCT ATT CCC GAC TT CTC CCC AAG TCC AAC CAG TA 266 및 또는 333 생식관련 생강 SFI12-Ginger-F SFI12-Ginger-R CTC GGA ATC AAT CAA TCA ACC TCA CGA GAT TCT GCA ATT CAC AC 113 ITS1 당근 SFI12-Carrot-F SFI12-Carrot-R CTA GAT GCG CCA AGG AAG TAA AAC TTG CGT TCA AAG ACT CG 194 ITS1 120

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 7. 2. PCR 반응조건 PCR 을위한반응조건은아래표 96 표 101 과같다. 제 2 장 표 96. PCR 반응조건 인삼 마 초기변성 Initial denaturation 95 10 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 55 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 3 분 1 보존 4 - - - 표 97. PCR 반응조건 더덕 도라지 초기변성 Initial denaturation 95 10 분 1 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 57 15 초 40 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 3 분 1 보존 4 - - - 표 98. PCR 반응조건 마늘 양파 초기변성 Initial denaturation 94 10 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 50 10 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 단 PCR 반응액조제시 MgCl 2 의농도는 1.5 mm 로함. 121

- 유전자분석법활용 - 표 99. PCR 반응조건 무 초기변성 Initial denaturation 95 4 분 1 변성 denaturation 결합 annealing 신장 extension 95 67 72 30초 30초 2분 10 결합 cycle 은 0.8 씩감소 변성 denaturation 95 30 초 결합 annealing 59 30 초 30 신장 extension 72 2 분 최종신장 elongation 72 7 분 1 보존 4 - - 표 100. PCR 반응조건 생강 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 66 30 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 표 101. PCR 반응조건 당근 초기변성 Initial denaturation 94 5 분 1 변성 denaturation 94 30 초 결합 annealing 67 5 초 35 신장 extension 72 30 초 최종신장 elongation 72 5 분 1 보존 4 - - 122

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 7. 3. PCR 반응결과 제 2 장 S 1 2 3 4 그림 97. 인삼프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 인삼 lane 2 더덕 lane 3 도라지 lane 4 마 S 1 2 3 4 그림 98. 더덕프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 인삼 lane 2 더덕 lane 3 도라지 lane 4 마 123

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 4 그림 99. 도라지프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 인삼 lane 2 더덕 lane 3 도라지 lane 4 마 S 1 2 3 4 그림 100. 마프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 인삼 lane 2 더덕 lane 3 도라지 lane 4 마 124

Ⅱ. 종특이프라이머를이용한유전자증폭 PCR 제 2 장 S 1 2 3 4 5 6 그림 101. 마늘프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 2 마늘 lane 3 4 양파 lane 5 6 마늘및양파혼합물 S 1 2 3 4 5 6 그림 102. 양파프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 2 마늘 lane 3 4 양파 lane 5 6 마늘및양파혼합물 125

- 유전자분석법활용 - S 1 2 3 그림 103. 무프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 마늘 lane 2 양파 lane 3 무 S 1 2 3 4 5 그림 104. 생강프라이머를이용한 PCR 결과. Lane 1 생강 lane 2 강황 lane 3 마늘 lane 4 양파 lane 5 파 126