RESEARCH ARTICLE Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을함유한화장료의안전성및인체효능평가연구 이보미 1,3, 이경록 2, 권승빈 1,3, 김지현 1, 윤정연 3, 김수연 3, 이유나 4, 안규중 4, 장현희 3,5 * 1 건국대학교한국피부임상과학연구소, 2 ( 주 ) 아미코스메틱, 3 건국대학교일반대학원생물공학과 4 건국대학교의학전문대학원피부과학교실, 5 경복대학교미용예술학부 The Safety and Human Efficacy Evaluation of Cosmetics Containing Extracts of Diospyros kaki, Castanea crenata, and Polygonum cuspidatum Bo Mi Lee 1,3, Kyung Rok Lee 2, Seung Bin Kwon 1,3, Jihyun Kim 1, Jeung Yeun Yoon 3, Soo-Yeon Kim 3, Yu Na Lee 4, Kyu Joong Ahn 4, Hyun Hee Jang 3,5 * 1 Korea Institute for Skin and Clinical Sciences, Konkuk University, 2 AMI Cosmetics Co., Ltd. 3 Department of Bioengineering, Graduate School of Konkuk University 4 Department of Dermatology, Konkuk University School of Medicine, 5 Department of Beauty Arts, Kyungbok University Abstract Skin lipids play a role as barrier function to control moisture loss to prevent dry skin and protect from external harmful substances or bacteria in order for providing sterilization. However, when there is excessive secretion of sebum due to abnormal action of hormones, it will cause black heads and expansion of the pores so that waste will be accumulated. Nose pack is an easy way to clean pores around nose with sebaceous glands, but due to characteristics of the fabric, the existing products can cause irritation and corneous. Thus, this study is to develop cosmetics for sebum removal and pore improvement that can improve limitations of the existing products. The ingredients for the formulations include Diospyros kaki (D. kaki), Castanea crenata (C. crenata), and Polygonum cuspidatum (P. cuspidatum) and to verify the safety and human efficacy evaluation. Based on the guidelines stated on ministry of food and drug safety, bacteria microbial limit test for 5 kinds of microorganisms, and human patch test with 31 men and women who do not have any skin diseases and skin hypersensitivity were executed. Also, with 23 men and women who have oily skin, human efficacy evaluation was performed. For control group, changes in the amount of sebum, moisture, dead skin condition, blackhead, skin roughness between before and after the test were compared. As a result of safety assessment, for microbial limit test, there was no aerobic bacteria, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerusinosa, Escherichia coli, yeast and fungi, and for human patch test, there was no skin reactions such as redness, blisters or allergic. For changes in the amount of sebum and black head from human efficacy evaluation, there were temporary improvement for the experimental group. For the amount of moisture, dead skin, and skin roughness, the experimental group showed improvement. This is expected to be used not only in deep cleanser, but also in lotion, emulsion, soap and foam cleanser and have the same effects. And for additional research on the treatment of acne and topical pharmaceutical formula, it can be utilized. And when being complemented with body application test for long-term usage, they can be used as natural ingredients when cosmetic manufacturers or sellers are developing new products, and also can be supplied as informative material to induce scientific and objective ads and displays properly. Keywords: Efficacy evaluation, Safety, Cosmetics, Diospyros kaki, Castanea crenata, Polygonum cuspidatum These authors contributed equally *Corresponding author: Hyun Hee Jang, Department of Cosmetology, Kyungbok University, 425 Kyeongbokdae-ro, Jinjeop-eup, Namyangju-si, Gyeonggi-do 472-948, Republic of Korea Tel.: +82 31 570 9741, E-mail: kjang@kbu.ac.kr Received March 22, 2014; Revised April 26, 2014; Accepted June 5, 2014; Published June 30, 2014 www.kosac.or.kr 361
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 최근보건복지부의화장품산업육성지원사업의일환으로대한화장품산업연구원에서수행한 국가별피부특성은행구축사업보고서 에의하면, 20세이상 59세이하의한국인성인남녀를대상으로피부고민에대한설문평가를실시한결과남성은 피지 가 2011년도에이어 2012년도에도각각 59.3% 와 41% 의비율로가장큰피부고민으로조사되었다 ( 대한화장품산업연구원, 2012). 또한여성의경우, 2011년도에는 잡티 다음으로 모공확장 이 54% 의높은비율을차지하였으며 2012년도에도 41% 의비교적높은비율을나타내었다. 그리고연령대별로비교해보았을때에도 20대성인남녀의가장큰피부고민으로높은비율을차지한것이, 성별에관계없이 피지, 뾰루지, 여드름, 모공확장 순인것으로조사되었다 ( 대한화장품산업연구원, 2012). 안면이전신에서차지하는부분은작지만사람의이미지로일차적인판단기준이되어, 신체어느부위보다미 ( 美 ) 에대한중심적위치를차지한다 ( 대한피부과학회교과서편찬위원회, 2001). 따라서안면에존재하는여드름이나블랙헤드, 피지, 주름등은이미지에부정적인결과를가져온다. 특히, 안면에서도중심부위에자리하고있는 T존의이마와코는피지선의발달로피지분비가왕성하여트러블이빈번하게발생한다. 그리하여주기적으로관리하지않고방치할경우, 모공속에박혀있는피지가쌓이면서모공의확장을유발할수있다. 또한이로인해블랙헤드가생성되면피부톤이칙칙해보이고미관상청결하지못한이미지를줄뿐만아니라, 여성들의경우피부에대한색조화장을함에있어어려운문제점들이있다. 모공의양상은성별, 유전, 노화, 여드름, 만성자외선노출등의내인성과외인성요인에의해개인차가있으며, 모공확장의대표적인원인으로는피지의과잉분비, 피부의노화, 모공속노폐물의축적등이제시되고있다 ( 유화정등, 2002). 과다생성된피지는분비과정에서그통로인모공을확장시키며, 피부의노화는각질형성세포 (keratinocyte) 와진피섬유아세포 (dermal fibroblast) 의활성을저해하고콜라겐 (collagen) 과엘라스틴 (elastin) 의합성능력및수분보유능력을감소시켜피부의탄력을저하시킴으로써모공의확장을유발한다 ( 이태숙, 2005). 화장품산업은일반소비제품과달리인간의미와신체에관련한소비자의욕구를충족시켜주는특수한가치성을지닌다 ( 명영찬, 2009). 따라서화장품산업에서는소비자의욕구에따라이를충족시키기위한신제품개발에주력하고있으며, 특히피지제거및모공관리등에관한다양한화장품들이출시되고있다. 코팩은피지분비가왕성한코부위의모공내피지를제거할수있는마스크의일종이다. 그러나기존에보편적으로사용되고있는필름패치용부직포마스크의경우, 원단의특 성상사용감에있어피부자극을유발한다는단점이있으며 ( 손채영, 2013), 인위적으로피지를뽑아내는것으로일시적인효과만존재하는단점이있다 ( 이영순, 2007). 이외에도화장수를이용한시트마스크의경우, 피부에대한부착성이낮아피지제거효율이낮다는단점이있다 ( 손채영, 2013). 이에본연구는기존의제품들이지니고있는한계점을극복하기위해, 피부의자극을최소화하며피지관리및모공개선에우수한물질을개발하고자하였다. 인공적인것에서탈피하여생약추출물을대상으로하였으며, 기존에보고된논문들의분석을통해 ( 김재길, 1984; 농림수축산신문, 1992; 동의보감편수간행위원회, 1993; 이유미, 2005; 주영승등, 2004; 한방약리학교재편찬위원회, 1992) 최종적으로감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을유효성분으로하는화장료조성물을제조하였다. 그리고일차적으로미생물한도시험과인체첩포시험을통해시험물질과피부에대한안전성을조사하고검증하였으며, 이차적으로기기평가를통해인체효능에대한수분량, 유분량, 블랙헤드, 각질량, 피부거칠기변화를포함한다양한유효성을검증하였다. 1. 화장료조성물의제조건조된감나무잎과율피를분쇄후, 감나무잎과율피각 1 kg에 3차증류수 5 L를가하고 85 에서 3시간동안 3회가열하여추출하였다. 그리고이를 400 메쉬여과포로여과하고 0.45 μm의필터로여과하여감압증류기 (Eyela, Japan) 를이용하여농축후동결건조하여 12.6% 의수율로감나무잎추출물 126 g을, 8.9% 의수율로율피추출물 89 g을각각얻었다. 잘분쇄된건조호장근 500 g에 3차증류수 5 L에첨가하여, 75 표 1. 시험에사용한화장료조성물의성분및함량 ( %),, 4.0 (dipropylene glycol) 3.5 (hydrolyzed algin) 2.5 (sodium hyaluronate) 0.1 (panthenol) 2.5 (disodium EDTA) 1.0 (triethanolamine) 0.01 (sodium lauroyl sarcosinate) 0.03 (zinc sulfate) (distilled water) up to 100 ml 362 www.kosac.or.kr
감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을함유한화장료의인체효능평가연구 에서 24시간동안중탕가열을하였다. 이를종이필터로여과하여고형분을제거한후, 이여과액을감압증류기를이용하여감압건조하여 9.6% 의수율로호장근추출물 48 g을얻었다. 제조된모든추출물은 60 Co 감마선 (10 kgy/h, 25 kgy) 으로조사멸균하여사용하였다. 시험에사용한화장료조성물은다음과같이준비되었다. 화장료는정제수에디프로필렌글라이콜, 하이드롤라이즈드알진, 소듐하이알루로네이트, 판테놀, 디소듐이디티에이, 트리에탄올아민, 소듐라우로일사코시네이트, 징크설페이트를첨가하여교반한후용해시킨다음, 혼합물을첨가하였다. 감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물의혼합추출물을충분히교반한후숙성시켜딥클렌징화장료조성물을 100 ml이되도록제조하였다. 각성분의함량은표 1과같으며, 비중은 1.018 g/ml이며, ph는 8.31±0.01로측정되었다. 또한액상은묽은제형으로사용의편의성을위해분사형펌프타입의용기에담아보관하였다. 2. 미생물한도시험을통한제품의안전성평가호기성세균은 Nutrient agar (Sigma-Aldrich, USA), 대장균 (Escherichia coli, E. coli) 은 EMB agar (Sigma-Aldrich), 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus, S. aereus) 은 Vogel- Johnson agar (Sigma-Aldrich), 녹농균 (Pseudomonas aerusinosa, P. aerusinosa) 은 Centrimide agar (Sigma- Aldrich), 진균류로효모 (Saccharomycetes cerevisiae, S. cerevisiae) 와곰팡이 (Filamentous fungi, F. fungi) 는 Potato dextrose agar (Sigma-Aldrich) 를사용하였다. 평판배지를제조하기위하여삼각플라스크에증류수 1 L 와 Nutrient agar 2.3 g, 증류수 1 L에 EMB agar 37.5 g, 증류수 1 L에 Vogel-Johnson agar 6.1 g, 증류수 990 ml에 Centrimide agar 46.7 g과글리세롤 10 ml에 Potato dextrose agar 4.67 g 넣고혼합하여 stirrer를사용하여잘섞어준후 121, 1.5 기압의 autoclave에서약 20분간증기멸균하여직경 10 cm의 petri dish에 15 ml씩 20개를분주하여상온에서응고시켰다. 시료는멸균된증류수에제품을 10% 로희석하여제조하였고, 각배지에시료 1 ml을도말한후관찰하고자하는미생물들의존재여부를확인하였다. E. coli, S. aureus, P. aerusinosa는 37 배양기에서약 18시간배양하였으며, S. cerevisiae와 F. fungi는 25 에서약 2 3일간배양하였다. 3. 인체첩포시험을통한피부의안전성평가인체첩포시험은식품의약품안전처에서고시한가이드라인 ( 식품의약품안전청, 2011; 2012a; 2012b) 에따라 30명이상의피시험자를모집하였다. 이는피부질환및피부과민반응이없는 20세 50세의성인남녀로, 연구내용에대한설명을충 분히숙지한후자발적으로동의서를작성한자에한에서 31명을최종선정하였다. 본인체첩포시험의모든절차는항온항습실 ( 온도 : 22±1, 습도 : 45±5%) 에서진행되었으며, 첩포부위는피시험자의상등부로 70% 에탄올로소독하여건조시킨후진행되었다. Finn Chamber (Finland) 에화장료조성물 20 µl를적하하여시험부위에부착시켰으며, 24시간후제거하였다. 첩포제거후마킹펜 (Skin marker pen, DeRoyal, Inc., USA) 으로시험부위를표시하였다. 첩포제거후 30분, 24시간, 48시간경과후국제접촉피부염연구회 (International Contact Dermatitis Research Group: ICDRG) 의판정기준에따라피부과전문의가육안평가하여자극정도를관찰하였다. 평균피부반응도는평균피부반응계산공식에따라산정하였으며, 인체첩포시험의결과판정표에따라시험물질의자극정도를최종판정하였다. 4. 기기측정을통한인체효능평가본연구는 20세이상 50세이하의성인남녀를대상으로지성피부로고민하는피시험자를모집하여다음과같은선정기준에부합하고제외기준에해당되지않는사람들을최종선정하여진행하였다 ( 이보미등, 2013; 정호정등, 2014). 1) 피시험자선정기준본연구에대한목적과개요, 연구방법및참여에따른유의사항에대해충분한설명을듣고자발적으로동의서를작성하고서명한자, 피부질환을포함하는급 만성신체질환이없는건강한자, 시험기간동안추적관찰이가능한자를피험자선정기준으로하였다. 2) 피시험자선정제외기준임신또는수유중인여성과임신가능성이있는여성, 피부질환치료를위해스테로이드가함유된피부외용제를 1개월이상사용하는자, 민감성, 과민성피부를가진자, 시험부위에점, 여드름, 홍반, 모세혈관확장등의피부이상소견이있는자, 연구시작전 3개월내에시험부위에피지관리및모공개선용화장품을사용한자, 연구시작전 6개월내에시험부위에시술을받은자는피시험자에서제외시켰다. 3) 피시험자중도탈락기준시험부위에소양감이나홍반등의유해사례가발생한경우, 피시험자가시험진행과정중시험부위에의학적처치, 타제품의적용, 과도한자외선노출, 지나친음주및흡연등으로결과의평가에장애가발생할경우, 피시험자가시험진행과정중개인사정에의해추적관찰이어려운경우, 특별한이유없이 www.kosac.or.kr 363
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 피시험자가사용방법이나일정을어긴경우가발생시, 연구참여를중지시키고, 이를연구결과산정에서제외하고기록하기로하였다. 4) 시험조건및화장료조성물의적용, 시험측정부위피시험자는동일한세안제로세안을하고일정한온도와습도의항온항습실 ( 온도 : 22±1, 습도 : 45±5%) 에서실내환경에순응해얼굴의혈색이안정될때까지 30 분간안정을취한후기기측정을하였다. 화장료조성물의사용은다음과같은방법으로진행되었다. 온습포를이용하여콧대를중심으로양쪽콧방울을포함한코피부의모공을유연하게만들어준다음, 화장료조성물을화장솜에충분히적신후피시험자의콧대를중심으로양쪽콧방울과경계면까지밀착시켰다. 밀착시킨상태로 20분경과후화장솜을제거하여모공밖으로올라온피지를일정한압을이용해면봉으로부드럽게걷어내었다. 이때피시험자의화장솜이건조되지않도록화장료조성물을 3회씩나누어분사하여적용하였다. 유분량과수분량의측정은피시험자의오른쪽콧방울에서이루어졌으며, 블랙헤드평가는전안촬영시스템을이용하여안면의정면에서이루어졌다. 각질량의평가는실험처치전오른쪽콧방울에서이루어졌으며, 실험처치후에는왼쪽콧방울에서평가하였다. 피부거칠기평가또한피시험자의왼쪽콧방울에서이루어졌다. 5) 수분량평가피부의수분량변화를평가하기위해 Dermalab USB moisture probe (Cortex Technology, Inc.) 를적용하였고, Dermalab USB 전용프로그램인 Application software version 1.09를이용하여피부수분량의변화를분석하였다. 피부표면의수분량측정은대조군과실험군모두오른쪽콧방울부위에서실험처치전과실험처치후의시점에이루어졌으며, 5회연속으로측정하여최고값과최저값을제외한측정치의평균값을분석에적용하였다. 6) 유분량평가피부의유분량변화를평가하기위해대조군과실험군모두실험처치전과실험처치후의시점에서 Dermalab USB sebum probe (Cortex Technology, Inc., Denmark) 를적용하였고, 분석은전용 Application software version 1.09를이용하였다. 측정방법은유분도수집스트립을피시험자의오른쪽콧방울부위에동일한압력으로 30초간지그시눌러유분을흡착시킨후, Tape reader기에유분도수집스트립을삽입하여유분도수집스트립이유분에의해반투명화된정도를계산하 여양을측정하였다. 7) 블랙헤드평가블랙헤드모공의변화를평가하기위해전안촬영시스템인 Robo Skin Analyzer CS50 (Inforward, Inc., Japan) 을이용하여안면전체를촬영한후특정부위를확대하여분석하였다. 일관된촬영을위해균일한조명과동일한포지션에서피시험자의얼굴을케이지아래에있는툴바의상단에고정시킨채정면을측정하였다. 기기의측정은대조군과실험군모두실험처치전과실험처치후의시점에서이루어졌으며, 정확한재현성을위하여실험처치전안면촬영결과물의특징점들과오버랩시켜실험처치후촬영결과물을비교하였다. 또한실험처치가이루어진시험부위인코영역의사진을확대편집하여블랙헤드모공에대하여육안평가하였다. 8) 각질량평가피부의각질량변화를평가하기위해 Keratin sticker ( 한국피부임상과학연구소, Korea) 와 Digital light microscope (Advanced Microscopy Group Inc., USA) 를적용하였다. 대조군과실험군모두실험처치전에는피시험자의오른쪽콧방울에서 Keratin sticker를이용하여각질을채취하였으며, 실험처치후에는왼쪽콧방울부위에서각질을채취하여 Coomassie brilliant blue G (Sigma-Aldrich) 를이용하여 24 시간동안염색한뒤, 탈염색및수세하여각질세포만이염색되도록하였다. 염색된각질세포는 microscope에내장된카메라로 100배확대한이미지를촬영한뒤, 한국피부임상과학연구소의 표준각질분석표 (standard keratin score) 를이용하여각질개선도를 score 1 5 (score: 1= very mild, 2= mild, 3= moderate, 4= severe, 5= very severe) 로육안평가하였다. 9) 피부거칠기평가피부의거칠기변화룰평가하기위해 PRIMOS Lite (field of view 45x30-simple, flexible 3D measuring, GFMesstechnik Gmbh) 를적용하였으며, 피시험자의왼쪽콧방울부위를 3회연속하여촬영하였다. 기기의측정은대조군과실험군모두실험처치전과실험처치후의시점에서이루어졌다. 촬영된이미지는 PRIMOS 전용소프트웨어인 PRIMOS Lite software (PRIMOS Lite version 5.6E) 를이용하여측정값들을매칭시켜일치된측정부위를분석에사용하였다. 피부거칠기분석은 Star roughness 를이용하여측정변수값인 Ra (average of all heights and depths to the reference plane) 값을계산하였다. 이는국제적으로가장많이사용되는표면거칠기표시방법으로, 이는전체측정범위안에서프로파일최고치들의산술평균값이다. 364 www.kosac.or.kr
감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을함유한화장료의인체효능평가연구 10) 유해사례평가유해사례평가는시험물질을적용하는실험군에서이루어졌으며, 실험군의피시험자가시험물질사용후홍반 (erythema), 부종 (edema), 인설생성 (scaling), 가려움 (itching), 자통 (stinging), 작열감 (burning), 뻣뻣함 (tightness), 따끔거림 (prickling) 이나피부에다른이상반응이발생하는지의여부를설문평가를통한문진과연구자에의한육안평가로이루어졌다. 이상반응의정도가약한정도인지중간정도인지, 심한정도인지를구분하여기록하였다. 5. 통계분석본연구의통계처리결과는 Microsoft Office Excel version 2007 프로그램을이용하여분석하였다. 통계적유의수준은 p<.05을원칙으로하였다. 개선율은다음의공식을이용하여계산하였다. 실험처치후측정값 - 실험처치전측정값 개선율 (%) = 100 실험처치전측정값 1. 미생물검사총호기성세균의수는눈화장용제품류및어린이용제품류의경우 500 개 /g 이하, 기타화장품의경우 1000 개 /g 이하이고, E. coli, P. aerusinosa, S. aureus은검출되지않아야한다 ( 식품의약품안전청, 2011; 2012a; 2012b). 본연구에서사용한감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을유효성분으로포함하는화장료조성물에대한유해미생물균인호기성세균, E. coli, S. aureus, P. aerusinsa, S. cerevisiae, F. fungi 유무를실험하였으며, 그결과모든균들에대해미검출로나타났다 ( 표 2). 2. 인체첩포시험을통한피부의안전성평가인체첩포시험을통한피부의안전성평가연구에참여한피시험자는총 31명 ( 여성 13명, 남성 18명 ) 이었으며, 연령분포는 20세이상 48세이하로평균연령은 29.77±7.76세였다 (data not shown). 피시험자 31명을대상으로감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을유효성분으로포함하는화장료조성물을상등부에폐쇄첩포후제거하여육안평가를실시한결과, 30분, 24시간, 48시간경과후자극이관찰되지않았다 (data not shown). 평균피부반응도는 0.00으로 ICDRG 판정기준에따라무자극으로판정되었으며, 시험물질은홍반, 수포, 알러지를유발시키지않는것으로나타났다. 3. 기기측정을통한인체효능평가 1) 수분량평가화장료조성물을무도포한대조군과화장료조성물도포한실험군의코부위수분량변화량차이에대해실험처치전과실험처치후의수분량개선도를평가한결과는표 3, 그림 1과같다. DermaLab USB moisture probe를이용하여코부위의피부수분량을분석한결과, 대조군의경우실험처 표 2 미생물한도시험결과 100 cfu/ml E. coli S. aureus P. aerusinosa S. cerevisiae F. fungi 그림 1. 수분량개선율. 표 3. 수분량평가 ( ) ( ) 583.79 118.79 541.99 110.86 571.64 101.15 1050.86 133.07 p value.01*.000*** *p<.05, ***p<.001 www.kosac.or.kr 365
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 치전 583.79 μs에서실험처치후 541.99 μs로 7.16% 감소되는변화를나타내었고, 통계적으로유의한변화를보였다 (p<.01). 반면실험군은실험처치전 571.64 μs에서실험처치후 1050.86 μs로크게증가하여 83.83% 의개선율을보였으며, 통계적으로유의한변화를나타내었다 (p<.001). 따라서화장료조성물이일시적으로피부수분량개선에도움을주는것으로판단된다. 그림 2. 유분량개선율. 2) 유분량평가 화장료조성물을무도포한대조군과화장료조성물도포 그림 3. 피지및블랙헤드평가. 표 4. 유분량평가 7.06 3.17 6.16 3.08 6.19 3.15 1.40 1.78 p value 0.000*** 0.000*** ***p<.001 표 5. 각질량평가 4.04 0.93 4.00 0.85 4.00 0.90 2.35 0.98 p value 0.833.000*** ***p<.001; Score 1 = very mild, 2 = mild, 3 = moderate, 4 = severe, 5 = very severe 366 www.kosac.or.kr
감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을함유한화장료의인체효능평가연구 한실험군의실험처치전과실험처치후의피부유분량을평가한결과는표 4, 그림 2와같다. DermaLab USB sebum probe를이용하여피부유분량을분석한결과, 대조군은실험처치전 7.06에서실험처치후 6.16으로유분이감소하여 12.70% 의개선율을보였으며통계적으로유의한변화 (p<.000) 를나타냈다. 또한실험군은실험처치전 6.19에서실험처치후 1.40으로크게감소하여 77.32% 의개선율을보였으며, 시험물질도포전과비교하여사용후통계적으로유의한변화를나타냈다 (p<.000). 대조군과실험군모두유분이감소하고유의성을보였으나, 개선율에서집단간의큰차이를보였다. 따라서화장료조성물이일시적으로피부의유분량개선에도움을주는것으로판단된다. 3) 피지및블랙헤드평가전안촬영시스템을이용한화장료조성물을무도포한대조군과화장료조성물도포한실험군의실험처치전과실험처치후의블랙헤드모공을평가한결과는그림 3과같다. 블랙헤드모공수를분석한결과, 대조군의경우실험처치전과비교하여실험처치후블랙헤드모공이나피지량의뚜렷한변화가나타나지않았다. 그러나실험군의경우실험처치전과비교하여화장물조성물을사용하였을때, 블랙헤드의감소와많은양의피지가피부표면으로노출된것이육안으로확인되었다. 4) 각질량평가 Keratin sticker와 Digital light microscope를이용한화장료조성물을무도포한대조군과화장료조성물도포한실험군 그림 4. 각질량개선율. 그림 6. 피부거칠기개선율. 그림 5. 각질량개선도이미지. 표 6. 피부거칠기평가 20.04 4.61 19.29 4.72 21.30 4.65 14.65 3.76 p value 0.004** 0.000*** **p<.01, ***p<.001 www.kosac.or.kr 367
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 의실험처치전과실험처치후의각질량개선도를평가한결과는표 5, 그림 4, 그림 5와같다. 피부각질개선도 score를분석한결과, 대조군은실험처치전 4.04에서실험처치후 4.00 으로평균값이감소되며 0.99% 의개선율을나타냈다. 또한실험군은실험처치전 4.00에서실험처치후 2.35로감소하여시험물질도포후 41.25% 의각질개선율변화를나타내었으며통계적으로도유의하게나타났다 (p<.01). Microscope에내장된카메라로피부각질을접사촬영하여이미지화한자료와 Image J software를이용하여나타낸자료는그림 5와같다. 5) 피부거칠기평가 PRIMOS Lite를이용한화장료조성물을무도포한대조군과화장료조성물을도포한실험군의실험처치전과실험처치후의피부거칠기값 (Ra) 을측정한결과는표 6, 그림 6, 그림 7과같다. 대조군의경우실험처치전 20.04에서 19.29로감소하 여실험처치전과비교하여도포후 5.43% 의개선율을보이며통계적으로유의하게나타났다 (p<.01). 그러나실험군은실험처치전 21.30에서실험처치후 14.65로크게감소하여시험제품사용전과비교하여 31.22% 의개선율을보이며통계적으로유의하게나타났다 (p<.001). 6) 유해사례평가인체효능평가연구에참여한 23명의피시험자들에게감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을유효성분으로포함하는화장료조성물을도포하였을때알러지성접촉피부염이나자극성접촉피부염에대한이상반응은관찰되지않았다 (data not shown). 연구자에의한이상반응평가와는별도로, 피시험자들을대상으로실시한설문조사에서도시험물질도포전과도포후에특별한피부이상반응이관찰되지않았다 (data not shown). #1 #2 #1 #2 그림 7. 피부거칠기개선도이미지. 368 www.kosac.or.kr
감나무잎추출물, 율피추출물, 호장근추출물을함유한화장료의인체효능평가연구 청결한모공을유지하고관리하기위해불필요한각질세포들을제거하고피지분비를유도하는것이중요하다. 코팩은피지분비가왕성한코부위의모공을청결하게관리할수있는방안으로가정에서손쉽게사용할수있는장점이있으나, 기존의보편적인제품들은원단의특성상사용감에자극과각질을유발하거나사용편의성이떨어진다는단점이있다. 따라서본연구에서는기존의제품들이지니고있는한계점을개선할수있는피지관리및모공개선용화장품을개발하고자하여, 선행연구자료를바탕으로감나무잎, 율피, 호장근등의생약추출물을유효성분으로포함하는화장료조성물을제조하였다. 그리고미생물한도시험과인체첩포시험을통해안전성을평가하였으며, 인체효능에대한기기평가를통해유효성을검증하였으며, 일차적으로미생물한도시험을통해화장료조성물에대한안전성평가를수행한결과, 호기성세균, E. coli, Staph. aureus, P. aerusinosa, S. cerevisiae, F. fungi 등의질병유발가능성이있는병원성미생물균들은모두미검출로나타났다. 이차적으로인체첩포시험을통한안전성평가결과에서는첩포제거후 30분, 24시간, 48시간경과후피부에대한이상반응이관찰되지않아홍반이나수포, 알러지등을유발시키지않는것으로나타났다. 코피지제거와블랙헤드및모공개선에관한선행연구를조사한결과, 이영순 (2007) 은수분량과피지량, 모공의크기, 블랙헤드수를측정하였고, 박미영 (2007) 은모공의수와블랙헤드의수를평가하였다. 또한김진아 (2009) 는기기평가를통해피지량을측정하고피부사진을촬영하여피지량및블랙헤드를평가하였으며, 신혜원 (2009) 은수분량과유분량및각질두께변화를평가하였다. 본연구에서는화장료조성물의다양한인체효능을검증하기위해보다세부적으로수분량, 유분량, 블랙헤드, 각질량, 피부거칠기의변화를평가하였다. 그결과, 일시적으로수분량이증가하였고, 유분량이감소되었으며, 블랙헤드가감소하였다. 또한각질량과피부거칠기가개선되었다. 이로써피지에의한피부번들거림을방지해주고, 모공의노폐물을제거하여모공상태를개선시켜주며, 수분과영양을공급하여피부건조함을예방해주고, 피부의거칠기를개선해주는임상적효과를확인할수있었다. 본연구를통해감나무잎, 율피, 호장근추출물을이용한화장료조성물은미생물한도시험과인체첩포시험을수행하여안전성이확보되었기때문에화장료로제조하여사용하여도독성이나부작용은극히미약하다고사료된다. 또한블랙헤드개선용딥클렌저로서유효성이우수한것으로확인되었기에, 화장수및에멀젼, 비누, 폼클렌저등보다다양한제형으로제조 하여효능및효과를기대할수있을것으로보며, 추가적인연구로여드름개선및치료용피부외용약학적조성물로도활용이가능할것이라사료된다. 지속적인사용후의효능및효과에대한인체적용시험을보완한다면화장품이나제약산업현장에서제조업자나판매자가상품개발시매우유용한천연소재의조성물로서사용될수있을것이라판단되며, 본연구를통한연구결과또한과학적이고객관적인표시 광고를적정하게유도함에있어유익한자료로제공될수있을것이라사료된다. 감사의글본연구는보건복지부보건의료연구개발사업 ( 과제고유번호 : NH13C0075) 의지원에의하여이루어진것이며, 이에감사드립니다. 김재길. 천연약물대사전. 남산당, 1984. 김진아. 코블랙헤드및피지분비에대한메디컬스킨케어의억제효과. 중앙대학교석사학위논문, 2009. 농림수축산신문편집부. 한국식품연감. 농림수축산신문, 1992. 대한피부과학회교과서편찬위원회. 피부과학. 여문각, 2001. 대한화장품산업연구원. 2012 국가별피부특성은행구축사업보고서. ( 재 ) 대한화장품산업연구원, 2012. 동의보감편수간행위원회. 동의보감탕액편. 민중서원, 1993. 명영찬. KATS 기술보고서제 14호 ( 화장품산업및표준화동향 ). 산업통상자원부기술표준원, 2009. 박미영. 모공축소팩과아로마오일을이용한모공축소효과의분석. 건국대학교석사학위논문, 2007. 손채영. 화장품소재로서의 Chitosan/PVA Hydrogel Mask Sheet 제조와특성평가. 을지대학교석사학위논문, 2013. 식품의약품안전청. 화장품표시 광고관리가이드라인, 2011. 식품의약품안전청. 화장품표시 광고실증을위한시험방법가이드라인, 2012a. 식품의약품안전청. 화장품의화장품표시 광고실증에관한규정, 2012b. 신혜원. 레티놀이모공각화증에미치는영향. 건국대학교석사학위논문. 2009. 유화정, 유동수, 김일환, 송해준, 오칠환. 모공화장품의모공축소효과평가. 대한피부과학회지, 40: 72, 2002. 이보미, 권승빈, 안성관, 안규중, 안인숙. 국내화장품표시광고가이드라인및실증에관한규정. 대한피부미용학회지, 11: 11-15, 2013. www.kosac.or.kr 369
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