대하여최대잔류허용량을설정하여관리하고있다. 이러한곰팡이독소들중아플라톡신은땅콩, 호두, 면실등유지종자, 고추, 후추등향신료, 옥수수, 사탕수수, 수수, 기장등에서 Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus에의해주로발생하며, 따뜻하고습한지

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수한 연
6 years ago
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1 면역친화컬럼을이용한 12 종곰팡이독소동시다성분분석법정립 김동호 *, 조현정, 홍경숙, 안재민, 윤혜정, 김성연, 최정아, 김은옥, 김영환, 배혜리, 최명규 국립농산물품질관리원시험연구소안전성분석과 1. 서론 곰팡이독소는곰팡이에의해서발생하는 2차대사산물이다. 이러한대사산물은약리작용때문에항생제, 성장촉진제, 다른종류의약품으로사용되어지기도하나대부분유해물질임에틀림없다. 다른화학물질과는다르게아주낮은농도에서도세균, 식물, 동물에치명적인위해를가할수있으며, 결국사람이나동물에질병을일으키거나사망에이르게까지한다. 마이코톡신 (Mycotoxin) 이라는용어는 1962년영국에서발생한칠면조 100,000마리폐사사건이발생하면서만들어졌으며, 원인이땅콩박에오염된 Aspergillus flavus의 2차대사산물 (Aflatoxins) 로밝혀졌다. 이후수많은곰팡이유래 2차대사산물에대한연구가이루어져현재까지아플라톡신 (Aflatoxin, AFs), 오크라톡신 (Ochratoxin A, OTA), 푸모니신 (Fumonisin, FUM), 니발레놀 (Nivalenol, NIV), 데옥시니발레놀 (Deoxynivalenol, DON), 제랄레논 (Zearalenone, ZEN), T-2 toxin(t-2), HT-2 toxin(ht-2) 등약 400여종의곰팡이독소가밝혀졌다. 곡류, 두류, 서류같은농작물의생산, 수확, 저장과정에서주로발생하고, 열에매우안정하여가공과정에서도잘파괴되지않으며, 이들곰팡이독소가오염된농식품과사료를사람또는가축이섭취했을경우간장, 신장, 신경등에장애를일으키게된다. 기후온난화로최근식물의생산환경이곰팡이가번식하기좋은고온다습한조건으로변화되고있고, 옥수수등곡물의에너지화에따른곡물가상승으로곰팡이독소에오염된저급농산물이식품및사료원료로사용될가능성이높아지고있는실정이다. 따라서, 세계각국은이러한곰팡이독소에대하여그관리를강화하고있는추세이며, EU나 CODEX에서도공통된규격을도출하고자계속하여노력하고있다. 우리나라도사료관리법과식품위생법에따라주요곰팡이독소에

2 대하여최대잔류허용량을설정하여관리하고있다. 이러한곰팡이독소들중아플라톡신은땅콩, 호두, 면실등유지종자, 고추, 후추등향신료, 옥수수, 사탕수수, 수수, 기장등에서 Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus에의해주로발생하며, 따뜻하고습한지역에서주로발생한다. 자외선을조사하였을때아플라톡신 B 1 과 B 2 는푸른색을띠며 G 1 과 G 2 는녹색을띠며, B 1 과 B 2 의대사산물인 M 1 과 M 2 가있다. 아플라톡신은강력한발암물질, 유전독성물질로알려져있으며, 주요손상장기는간이다. 국제암연구소 (IARC) 에서도인체발암물질인 Group 1으로분류하고있으며, Aflatoxin M 1 은발암가능물질인 Group2B로분류하고있다. 아플라톡신에오염된곡물을재활용하기위한다양한방법들이시도되었으며, 고온고압의암모니아를가하거나오존을처리하여아플라톡신의락톤링을개열함으로써독성을저감시키는방법등이고안되었으나곡물의다른영양성분과도비특이적으로반응하여품질을저하시키거나다른독성물질을생성시키는등의부작용이알려지면서이러한화학적처리기술들은현장에서외면받게되었다. 이와같이대부분의무독화기술은심각한부작용이있어아플라톡신의생성을예방하거나최소화하는관리기술이최상의선택임이널리인식되고있다. 그림 1. 아플라톡신의구조 오크라톡신은주로 Penicillium verrucosum 과 Aspergillus ochraceus 종의곰팡 이가오염된옥수수, 보리, 밀, 호밀, 커피, 귀리등에서생성되며, 미숙과및그

3 종자보다는당함량이높은과숙과및그종자에쉽게감염된다. 그중오크라톡신 A는실험동물에서신장독성, 면역억제, 암발생및기형을유발하고, 발칸반도신장풍토병 (Balkan Endemic Nephropathy) 의원인으로추정되고있다. 국제암연구소 (IARC) 는인체발암가능물질인 Group 2B로분류하고있다. 오크라톡신은커피, 포도주등에서도오염빈도가높아선진국에서이에대한연구가많이되어있다. 특히커피는재배과정보다는수확후건조과정에오염된것으로알려져세계식량기구등의협력으로커피의수확후관리를철저히한결과오크라톡신의오염도가적은안전한커피제품을생산할수있게되었다는보고가있다. 반면오크라톡신을생성하는곰팡이중 Aspergillus niger는포도가공에이용하고있고아시아에서는일부식품을발효시키는데사용되기도하므로재평가해야한다는주장도제기되고있다. 최근우리나라일부농식품에대한오크라톡신모니터링결과고춧가루, 메주, 된장, 고추장등에서오크라톡신이자주검출되고있는것으로보아농식품의안전관리를위해서는체계적인조사가필요한것으로생각된다. 그림 2. 오크라톡신 A 의구조 푸모니신은 Fusarium 속에속하는다양한균류에의해생성되는곰팡이독소로서, 주로 F. verticillioides와 F. proliferatum에의해생산되지만, F. napiforme, F. dlamini, F. nygamai 등도생산할수있다. F. verticillioides와 F. proliferatum은열대기후에서중요한식물병인옥수수의 푸사리움씨알썩음병 과관련된흔한균류이다. 푸사리움씨알썩음병 은 F. graminearum에의해서도유발될수있으며, 곤충피해, 온도스트레스, 적응조건을벗어난생장환경등과강한연관성이있다. F. verticillioides와 F. proliferatum은넓은온도범위에서생장이가능하지만상대적으로높은습도가필요하다 (Aw>0.9). 따라서수확직전또는

4 보관초기에푸모니신이형성될가능성이크며, 극한조건을제외하고는보관도중에푸모니신농도가증가하지는않는다. 푸모니신은옥수수및옥수수가공식품에천연오염물질로존재한다. 캐나다, 남아프리카, 유럽등전세계적으로곡물 ( 주로옥수수 ) 및곡물가공식품의푸모니신오염이보고되고있다. 푸모니신은열에상대적으로안정하며, 150 이상에서분해되기시작하며, 발효과정에서는거의분해되지않는다. 푸모니신 B 1 은수용성이며, 화학식은 C 34 H 59 NO 15, 분자량은 이다. 2-amino- 12,16-dimethyl-penta-hydroxy-cosane과두분자의 propane -1,2,3-tricarboxylic acid가 diester 결합된구조를갖는푸모니신 B 1 을비롯하여 B 2, B 3, B 4 등의동족체가존재한다. 푸모니신의동족체중 B 1 은자연계와인공 (in vitro) 배양물에서생성비율이 70~80% 이상을차지하는주된형태로알려져있다. 푸모니신 B 1, B 2 의화학구조식은그림 3과 4와같다. 푸모니신 B 1 은말의뇌백질연화증 (equine leukoencephalomalacia, ELEM) 과돼지의폐수종 (porcine pulmonary edema, PPE) 을유발하며, 국제암연구소 (IARC) 에서는인체발암가능물질인 Group2B로분류하고있다. 푸모니신 B 1 의독성기작은명확하게규명되지는않았으나, 그구조가 sphingosine과유사하여이와관련한동물, 식물및미생물에서기작연구가현재활발히진행되고있다. 그림 3. Fumonsin B₁

5 그림 4. Fumonsin B 2 푸사리움속곰팡이생성독소중니발레놀 (NIV), 데옥시니발레놀 (DON), T-2 toxin, HT-2 toxin 등은구조적으로비슷한 Trichothecenes계열의독소이다. 그림 5에서 R 4 의위치에 H가결합하고있으면 Type A로분류하고 OH가결합되어있으면 Type B로분류된다. A Type인 T-2 toxin이 B Type인 NIV, DON보다더독성이강한것으로알려져있다. Trichotecene류의화학적구조와그구조의차이에따라생성되는독소의종류는그림 5와표 1과같다. 그림 5. Trichothecenes 의구조

6 표 1. Trichothecenes 의종류 (Type A and B) Nivalenol(NIV) 은 B Type trichothecene으로수용성이며, DON의화학구조에서 4 번탄소에 -OH기가있는것이 Nivalenol(NIV) 로 DON보다그독성이더강하며, 보통다른푸사리움속곰팡이생성독소와같이나타난다. 외국에서는맥류에서 DON보다오염도는낮은것으로보고되고있으나우리나라에서는더높은오염도를보이는것으로보고되고있다. 그림 6. 니발레놀 (NIV) 의구조

7 데옥시니발레놀은아주흔한전형적인곰팡이인 F. graminearum (Gibberella zea) 과 F. culmorum에서주로발생하는 trichothecenes 계열에속하는곰팡이독소이다. C-8에 carbonyl 그룹을가진 B type trichothecenes이며화학적으로 12, 13-epoxy-3α, 7α, 15-trihydroxytrichothec-9-en-8-one(C15H20O6, MW: ) 으로설명된다. 무색으로결정화하고높은온도저항성을가져 120 에서도안정하며, 180 에서도어느정도안정하다. 물이나메탄올, 아세토니트릴, 에틸아세테이트같은극성유기용매에잘녹는다. 데옥시니발레놀의다른이름인 vomitoxin은섭취했을때구토를유발하는증상으로부터유래했으며화학구조는아래와같다. 이곰팡이들은온도와매우밀접한관계가있어서따뜻한기후대의지역에서주로발생하며, 밀에서붉은곰팡이병 (Fusarium head blight), 옥수수에서옥수수이삭썩음병 (Gibberella ear rot) 같은질병을야기시킨다. 데옥시니발레놀에의한밀의오염연구결과, 붉은곰팡이병의발생은개화기수분에의하여영향을주로받으며, 비의양보다는기간이독소생성의중요한요인으로작용한다. trichothecenes중에서데옥시니발레놀은가장자주발생하는독소이며밀, 옥수수, 보리, 귀리, 호밀같은작물에서광범위하게발견되며, 쌀, 수수, 라이밀에서는상대적으로적게발생한다. 자연조건하에서데옥시니발레놀의두가지 mono-acetylated derivatives인 3- 과 15-AcetylDON이비록상대적으로낮은농도이나같이발생하는경향이있다. 다른 trichothecenes에비하여식품과사료에서데옥시니발레놀의발생에대한많은자료가보고되어오고있다. 섭취후에데옥시니발레놀은잘흡수되고 de-epoxydation과 glucuronidation에의해독성을덜갖는물질로대사된다. 신장과담즙배출에의하여제거되며단지극미량만이우유와계란으로전이된다. 데옥시니발레놀의독성은상대적으로많이연구되어있다. 전형적인양 (dose) 의존형독소로서사료섭취의감소에의하여증체량의감소가뒤따르고, 더높은농도에서구토및사료거부증세를나타내게된다. 독소에오염된식품을섭취한환자에게서도복통, 복부팽만감, 어지럼증, 두통, 목자극, 매스꺼움, 구토, 설사, 혈변등의증상이나타났다. 돌연변이성이나발암성에대한실험적증거는없으며국제암연구소 (IARC) 는인간에게발암성이없는물질인 Group 3으로분류하고있다.

8 그림 7. 데옥시니발레놀 (DON) 의구조 제랄레논은 F. graminearum (Gibberella zeae), F. culmorum, F. cerealis, F. equiseti and F. semitectum을포함하는 7~8종의야생곰팡이 (field fungi) 에생산되는곰팡이독소이다. 푸사리움종은수확전개화기 (for blooming) 곡류를감염시킨다. 그러나곰팡이의성장과독소생산은열악한저장조건하에서수확후발생할수있다. 독소는옥수수에서일반적이나푸사리움은어디에나분포하기때문에, 따뜻한기후대에서보리, 귀리, 밀, 쌀, 수수, 대두같은작물또한제랄레논오염에노출되어있다. 제랄레논은화학적으로 6-(10-hydroxy-6-oxo-trans-1-undecenyl)-β-resorcyclic acid lactone(c18h22o5, MW: ) 으로설명되어지는 resorcyclic acid lactone 이다. 최대 UV흡광대는 236nm이다. 물에녹지않고수용성알칼리나다양한유기용매에녹는다. 제랄레논은저장 (storage), 분쇄 (milling), 가공 (processing), 요리과정에서매우안정하며, 높은온도에서도줄어들지않는다. 제랄레논의구조는포유류의에스트로겐어셉터 (oestrogen receptors) 와결합하도록되어있다. 따라서, 포유류에서에스트로제닉영향 (oestrogenic effects ) 을초래하여임신 (conception), 배란 (ovulation), 착상 ( implantation), 태아발생 (foetal development) 과새끼의생존력 (viability of newborn animals) 에교란을일으킨다. 제랄레논은국제암연구소 (IARC) 에서다른푸사리움독소와마찬가지로 Group 3 으로사람에게발암성이없는물질로분류하고있다.

9 그림 8. 제랄레논 (ZEN) 의구조 T-2 toxin은 A Type trichothecene으로 B Type보다독성이더강한것으로보고되고있다. 2차대전전후소련에서겨울이지난곡물로만든빵을섭취한사람들이장기에서내출혈을일으키고, 무백혈구증 (alimentary toxic alenkia, ATA) 과관련있는물질이 T-2 toxin으로밝혀졌다. T-2 toxin은대부분가금류에서급 만성독성을일으키며, 소에서는추위 (4번째위 ) 손상, 설사, 심장박동이상, 눈깜빡임, 소화기손상등이나타난다. 그림 9. T-2 toxin(t-2) 의구조 이와같은곰팡이독소는한가지만선택적으로오염되는것이아니라동시에 여러가지성분에노출되는경향이있다. 또한, 여러가지독소가동시에오염되 었을때독성의상승작용을일으킬수있다. 하지만, 현재곰팡이독소는단일성

10 분단위로독성평가및위해평가가이루어지고있으며, 이에따라허용기준치가설정되어있다. 또한분석법도단일독소법이개별적으로식품공전에등재되어있다. 따라서, 이러한다양한독소를빠르고효율적으로분석하기위한적합한분석법의개발이필요하며, 본연구를통하여 12종주요곰팡이독소를동시에전처리하여한번에분석할수있는분석법을정립하고자하였다. 그간의연구를통하여 12종곰팡이독소를동시에분석할수있는기기분석법은정립되었으나전처리방법이수용성독소와지용성독소를분리하여추출하는방식으로이루어져있어추출에많은시간과노력이소요되는단점이있었다. 따라서, 본연구를통하여추출단계를 70% 메탄올만을이용하여한번에추출할수있도록개선함으로써일반분석자들이쉽고빠르게전처리할수있는분석법을정립하고자하였다. 2. 실험재료및방법가. 실험재료 1) 시료대표적인주곡인쌀을대상시료로사용하였다. 쌀의매트릭스 (matrix) 가단순한것처럼보이지만다른곡류에비해서회수율이떨어진다거나, 쌀의품종에따라서회수율의차이가보인다는보고가있어, 정확한분석법정립을위하여대상시료로우리나라의자포니카종백미를선정하였다. 2) 기기및장치정제를위한면역친화컬럼은바이캠 (VICAM) 사의 1/6 컬럼을사용하였다. 전처리와농축장비로 Agilent사의 manifold와 Interface사의농축기를사용하였다. 증류수는 Millipore사의증류시스템 (Mili-Q RiOs/Elix water purification system(usa) 을이용한 3차증류수를사용하였다. 시료정제후농축시유리관대신에코니컬튜브 (Conical tube) 를사용하였으며, Imtakt사의 Sherzo SM-C 18 컬럼 (2 150, 3um) 을장착하여 12종독소를분리하였다. 분석은 Agilent 사의 HPLC(1200series) 가연결된질량분석기 (AB, Applied Biosystem 4000) 을사용하였다.

11 2) 표준물질및시약분석을위한표준물질은모두 12종이었다. 니발레놀과데옥시니발레놀 (B-trichothecenes mix 2, 100ug/ml, 5ml), 아플라톡신 (Aflatoxins mix 1, 2ug/ml for AFB 1 AFG 1 & 0.5ug/ml for AFB 2 AFG 2, 5ml), 오크라톡신 A(Ochratoxin A, 10ug/ml, 5ml) 과푸모니신 B 1 & B 2 (Fumonisins mix 3, 50ug/ml, 5ml ) 는 Biopure사의표준물질을사용하였고, 제랄레논 (zearalenone, 100ug/ml, 2ml) 과 T-2 toxin(t-2, 100ug/ml, 1ml) 과 HT-2 toxin(ht-2, 100ug/ml, 1ml) 은시그마 (Sigma) 사의제품을사용하였다. 정제와추출을위하여시그마 (Sigma) 사의 PBS(Phosphate Buffered Saline, ph, 7.4) 와머크 (Merck) 사의메탄올 (4L) 을사용하였다. 복합표준물질은질량분석기의감도 (Sensitivity) 를고려하여아래와같은농도로제조하였으며, 저장표준액 (Stock solution) 은아세토니트릴로, 사용표준액 (Working solution) 은 50% MeOH(containing 1% acetic acid) 로제조하여사용하였다. 표 2. 표준물질농도 Toxins STOCK Solution STD s5 s4 s3 s2 s1 s0 concentrations (ug/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) NIV DON AFB AFB AFG AFG FB1, 50% ACN FB2, 50% ACN HT T ZEN OTA

12 나. 전처리시료 25g을정밀히달아 100ml의 70% 메탄올을넣은후 1시간동안강하게진탕하여 12종곰팡이독소를추출하였다. 이추출액을여과지로로여과한후여액 10ml와 PBS 90ml를혼합한후정제를위한시액으로사용하였다. 시액 20ml를면역친화컬럼에초당 1~2방울의속도로천천히흘려주었으며, 이어서똑같은속도로 10ml의 PBS와 10ml의증류수를흘려세척하였다. 주사기나감압장치를이용하여천천히컬럼에남아있는물을제거한후메탄올 5ml를이용하여컬럼에잔류하고있던모든독소를용출시켰다. 추출한액을질소로 50 에서건고하였으며최종적으로 0.5ml의 50% MeOH(containing 1% acetic acid) 으로재용융하여질량분석을위한시액으로사용하였다. 표 3. 분석절차도 sample 25g+100ml 70% MeOH Filter(Whatman 6) filtrate 10ml+90ml PBS Filter(Whatman 6) 20ml loading Washing(10ml PBS 10ml DW) Extraction(5ml MeOH) Dry(50, N2) using 15ml conical tube Reconcentration(50% MeOH containing 1% acetic acid, 0.5ml)

13 다. 분석조건 다양한독소의분리를위하여구배 (Gradient) 조건을이용하였다. A용액은 20%ACN/2mM ammonium acetate, B용액은 ACN/0.3% formic acid를사용하였다. 유속은 0.25ml/min로하였으며주입량은 10ul이었다. 표 4. 액체크로마토그래피분석조건 Total Time(min) Flow Rate(ml/min) A(%) B(%) 질량분석을위한이온화조건과 MRM쌍은아래와같다. 표 5. 질량분석기이온소스 (Ion source) 조건 Curtain Gas(CUR) 20.0 Collision Gas(CAD) Medium Ion Spray Voltage(IS) ± Temperature(TEM) Ion Source Gas 1(GS1) 50.0 Ion Source Gas 2(GS2) 50.0 Interface Heater(ihe) ON

14 ID (toxins) type Q1 (parent ion) 표 6. 질량분석조건 Q3 (daughter ion) TIME (msec) DP (volts) EP (volts) CE (volts) NIV [M+CH 3 COO - ] DON [M+CH 3 COO - ] AFB 1 [M+H] AFB 2 [M+H] AFG 1 [M+H] AFG 2 [M+H] FB 1 [M+H] FB 2 [M+H] HT-2 [M+NH 4 ] T-2 [M+NH 4 ] ZEN [M-H] OTA [M+H] CXP (volts) 3. 결과및고찰가. 분석법검증 1) 검량선작성검량선작성에는내부표준법 (internal standard method), 외부표준법 (External standard method), 표준물질주가법 (standard addition method), 매트릭스매치법 (Matrix match method) 등의다양한방법이있다. 본실험에서는전처리시면역친화컬럼의사용으로질량분석기에서이온화 (ionization) 를방해하는간섭물질이최소화될뿐아니라, 일상적인분석을위하여외부표준법을사용하여검량선을

15 작성하였다. 아플라톡신 B 1, 푸모니신 B 1 과제랄레논은상관계수 (r) 가 이 었으며, 나머지독소들도 ~ 로매우양호하게나타났다. 각각의독소에대한크로마토그램 (TIC, EIC) 은아래와같이나타났다. 그림 종곰팡이독소크로마토그램 (TIC) : NIV&DON(100ng/ml), AFB 1 & AFG 1 (5ng/ml), AFB 2 &AFG 2 (1.24ng/ml), FB 1 &FB 2 (50ng/ml), T-2&HT-2(5ng/ml), ZEN(5ng/ml), OTA(5ng/ml) 그림 종곰팡이독소크로마토그램 (EIC)

16 2) 정확성 (Accuracy) 12종의곰팡이독소가검출되지않은쌀시료에개별독소의허용기준치와감도를고려하여 1.24~100 ng/g의농도가되도록주가한후정립한방법에따라분석하여회수율을측정하였다. 전체적으로 70.6~105.2% 의회수율을보였으며, 제랄레논이 70.6% 로가장낮은회수율을나타내었다. 데옥시니발레놀, 푸모니신B 2 과오크라톡신 A의 80.8~88.9% 의회수율을나타내었으며, 아플라톡신 B 1 B 2 와푸모니신 B 1 은 97.0~99.9% 를나타내었다. 나머지 4종의곰팡이독소는 100.8~105.2% 로 100% 이상의회수율을나타내었다. 모두코덱스나 AOAC에서추천하고있는회수율범위를만족하는양호한결과를나타내었다. 코덱스에서는 1~10 ug/kg 수준에서 60~120% 를추천하고있으며, AOAC 회수율가이드라인은 10 ug/kg 수준에서 70~125% 이다. 자세한회수율결과는표 9와같다. 표 7. Recommended Recovery(%) AOAC CODEX(veterinary drugs, 1993) Concentration(ug/g) Recovery limit(%) 100% % % % % ug/g(ppm) ug/g ug/kg(ppb) Concentration(ug/g) Acceptable range(%) 100 ug/kg <100 ug/kg <10 ug/kg ug/kg ) 정밀성 (Precision) 정밀성은크게반복성 (repeatability precision) 과재현형 (reproducibility precision) 으로구분된다. 반복성은한실험실내에서한실험자가동일시료를동일방법으로반복실험하여얼마나잘분석할수있는지를나타내는척도이다. 재현성은서로다른실험실에서서로다른분석자가동시에또는서로다른때에동일시료를동일분석방법으로얼마나잘분석할수있는지를나타내는척도이다. 일반적으로상대표준편차 (RSD, Relative Standard Deviation) 로나타내며,

17 측정농도가작을수록오차요인이많다고할수있다. AOAC 에서는아래와같이 가이드라인을제시하고있다. 표 8. 상대표준편차가이드라인, AOAC Concentration(ug/g) repeatability(rsdr, %) reproducibility(rsdr, %) 100% % % % % ug/g(ppm) ug/g ug/kg(ppb) 본분석법에서 12개성분에대한반복실험결과상대표준편차 (RSDr, %) 가 2.6~16.5% 로나타났다. 아플라톡신 (B1, B2), 푸모니신 (B1, B2), T-2, HT-2, ZEN, OTA는 10 ug/kg 이하의농도에서상대표준편차 15% 이하의양호한정밀성을나타내었으며, 니발레놀과데옥시니발레놀은 100 ug/kg 수준에서 12.3과 16.5% 의상대적으로높은상대표준편차를나타내었다. 자세한결과값은표 9와같다. 4) 감도 (Sensitivity) 신호 (Signal) 과노이즈 (Noise, base line) 의비를계산하여정성한계 (Limit of detection) 와정량한계 (Limit of quantitation) 를측정하였다. S/N=3일때를정성한계로정하였으며, S/N=10을정량한계로설정하였다. 정성한계범위는 0.2~2.0 ug/kg이었으며, 정량한계범위는 0.6~6.0 ug/kg이었다. 자세한결과값은아래표와같다.

18 표 9. 시료에따른회수율, 상대표준편차와검출한계 Toxins NIV DON AFB 1 AFB 2 AFG 1 AFG 2 FB 1 FB 2 HT-2 T-2 ZEN OTA Spiked level(ng/g) Recovery (mean, %) SD* % RSD** LOD (S/N=3) LOQ (S/N=10) * : repeatability standard deviation (s r ) ** : repeatabilityrelative standard deviations (RSDr %) 4. 결론 우리나라의주곡인백미에서 12종주요곰팡이독소 (NIV, DON, AFB 1 B 2 G 1 G 2, FB 1 B 2, T-2, HT-2, ZEN, OTA) 동시분석법을정립하였다. 6 in 1 면역친화컬럼을이용하여간섭물질을최소화할수있었으며, 모든독소를한번의전처리로추출하여시간과노력을절약할수있었으며, 질량분석기 (LC/MS/MS) 를이용하여효율적으로분석하고자하였다. 회수율은 70.6~105.2% 의결과값을나타내코덱스나 AOAC 가이드라인에만족하는정확성을보였으며, 상대표준편차또한 2.6~17.6% 로전체적으로양호한결과를나타내었다. 정성한계 (LOD) 는 0.2~2.0 ug/kg의범위로나타났으며, 정량한계는 0.6~6.0 ug/kg이었다. 현재 12종곰팡이독소중곡류에설정되어있는허용기준치가 5.0~4,000 ug/kg 범위임을감안했을때농산물의곰팡이독소오염실태조사등에충분히적용할수있는수준의감도이었다. 향후본연구를통하여정립된분석법을이용하여좀더효율적으로다양한곡류에서곰팡이독소동시오염실태조사사업을수행하여농산물안전관리에활용되기를기대한다.

환경중잔류의약물질대사체분석방법확립에 관한연구 (Ⅱ) - 테트라사이클린계항생제 - 환경건강연구부화학물질연구과,,,,,, Ⅱ 2010

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