목차 QuEChERS 페이지식품안전개요...4 QuEChERS란?...5 권장되는 Agilent Bond Elut QuEChERS 표준작업절차서 (SOP) 기존 QuEChERS 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS 키트로시료주입전정제후 GC

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1 새로운내용내용살펴보기» Agilent Bond Elut QuEChERS 식품안전응용자료제 2 권 최신식품분석문제에대한검증된분석법

2 목차 QuEChERS 페이지식품안전개요...4 QuEChERS란?...5 권장되는 Agilent Bond Elut QuEChERS 표준작업절차서 (SOP) 기존 QuEChERS 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS 키트로시료주입전정제후 GC/MS를이용한사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) EN 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS European Standard EN 키트를사용한 LC/MS/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를사용한 GC/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를사용한 LC/MS/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS Acrylamide 키트및 HPLC-DAD를사용한식용유내아크릴아미드검출 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS 추출키트및 Agilent 5975T LTM GC/MSD를사용한 Blind Study로과채류 (fruiting vegetables) 내농약분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로녹차내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Poroshell 120 LC 컬럼을사용한 Agilent 1290 Infinity LC와 Agilent Bond Elut QuEChERS 시료전처리법으로새우내호르몬측정 ( 발행물 EN) Bond Elut QuEChERS Extraction 키트및 Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한쌀내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) AOAC 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 GC/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 GC/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 톨루엔과 Graphitized carbon이들어있는 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한시금치중평면구조농약회수율의최적화 ( 발행물 EN) Agilent 1290 Infinity LC와 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS를이용한 UHPLC/MS/MS 검출로이유식내농약측정 ( 발행물 EN)...50 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트및 HPLC-FLD를이용한닭근육내설폰아미드잔여물측정 ( 발행물 EN)

3 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트와 HPLC-FLD 를이용한어류내다환방향족탄화수소분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS 및 LC/MS/MS 를이용한감자튀김내아크릴아미드분석 ( 발행물 EN) Agilent J&W DB-35ms 및 DB-XLB GC 컬럼을이용한어류조직내 PCB 의 GC/μECD 분석및확인 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트와 Universal Dispersive SPE 를이용한상추와사과시료내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) Agilent J&W DB-35ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한 GC/MS/FPD 검출로사과시료내유기인계농약분석 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로쌀내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) GC/MS/MS 를이용하여농산물및곡류내극미량수준농약에대해재현성있는정량분석수행 ( 발행물 EN) GC/MS 와 LC/MS 분석법의조합으로주스내농약의종합적분석수행 ( 발행물 EN)...70 기타식품분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로소간내퀴놀론계항생제측정 ( 발행물 EN) Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로소간내설폰아미드계항생제측정 ( 발행물 EN) 올리브유내 Contract Laboratory Protocol 농약에대한 GC-μECD 분석및확인 ( 발행물 EN)...78 Agilent Bond Elut QuEChERS 의수정된분석법을이용한레몬오일내농약측정 ( 발행물 EN)...81 Agilent Bond Elut QuEChERS dspe 시료전처리및고효율 DB-5ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한 GC/MS 검출로어류내다환방향족탄화수소 (PAH) 분석 ( 발행물 EN) Wool 이들어있는 Ultra Inert Liner 를이용한 GC/MS/MS 검출로식품내농약분석 ( 발행물 EN)...87 Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/MS 시스템을이용한바다갑각류내화학적오염물측정 ( 발행물 EN)...89 여러가지시료전처리법으로밀에포함된 Trichothecenes, Zearalenone 에대해 LC/MS/MS 분석수행 ( 발행물 EN) 최적화된추출 /cleanup 방법과 Agilent 7000 시리즈 Triple Quadrupole GC/MS 시스템을이용한건조차시료내여러잔류농약성분측정 ( 발행물 EN)...95 LC/MS/MS 와수정된 QuEChERS 분석법의조합으로동물성식품내 36 종동물용의약품측정 ( 발행물 EN)

4 식품안전개요 믿을수있는식품안전성테스트는믿을수있는시료전처리에서시작합니다 소중한고객님께, 오늘날의소비자들은식음료가높은안전성, 우수한품질및뛰어난영양소를갖추기를원합니다. 귀하의식품실험실은그러한요구충족을위한근본작업이이루어지는곳입니다. 애질런트의통합적인분석솔루션이이를도와드립니다 검수, 제품개발부터품질관리및포장에이르기까지애질런트의기기, 시스템, 컬럼및소모품은귀하의실험실이까다로운표준을충족시킬수있도록도와드립니다. 풍부한경험, 넓은지식, 창의적인사람들, 업계의동향및세계적규제에대한통찰력등이여러분들이부딪치는어려운일에길잡이가되어드릴수있습니다. Agilent Bond Elut QuEChERS 및 SPE 시료전처리제품 : 식품안전성분석의첫번째단계 Agilent Bond Elut 시료준비제품들은복합혼합물의시료를높은신뢰성으로추출하고농축하도록해빠르고정확하며재현성있는결과를보장합니다. Bond Elut 제품군은엄격한품질표준에의거해생산된다양한포맷및제품으로식품시료전처리에필요한여러요건을만족시켜드릴것입니다. Bond Elut QuEChERS Pre-Packed Extraction 및 Dispersive SPE 키트는다성분분석 (multiresidue), 다종 (multi-class) 유기오염물질분석을위한식품시료전처리를간단한몇단계로처리가능케하며, 키트는일관된품질과높은성능을갖추고있습니다. 서로다른 40 여종의폴리머및실리카기반의물질로구성된 Bond Elut SPE 제품은다양한카트리지및플레이트포맷으로제공됩니다. 벌크흡착제는 QuEChERS 시료전처리과정에서분석법개발및실험실수준의주문제작을지원합니다. 당사의과학자들은귀하의식품테스트요구를지속적으로지원하므로, 당사의 QuEChERS 페이지 (agilent.com/chem/quechers) 를방문해새로운응용및제품개발내용을확인하십시오. 정확성의출발점 Trisa Robarge 시료전처리제품매니저 4

5 QuEChERS 란? 미국농무부가 2003 년에개발한 QuEChERS( 캐쳐스 로발음 ) 의뜻은 Qu - 빠르다는의미의 Quick, E - 쉽다는의미의 Easy, Ch - 저렴하다는의미의 Cheap, E - 효과적이라는의미의 Effective, R - 견고한의미의 Rugged S - 안전하다는의미의 Safe 등이식품시료전처리법이갖춘요건을포함하고있습니다. 이기법은매우간단하고, 최소한의과정만을거치며, 복잡한시료의 cleanup 에효과적입니다. QuEChERS 는과일과채소내다종 (multi-class) 다성분 (mullti residue) 잔류농약분석을위해개발된방법으로, 최근에는채소외에육류와어류등다른식품내극미량오염물검출에까지그응용이확대되었습니다. 현재다양한과일, 채소, 육류는물론, 콩, 견과류등건조한시료에응용할수있는수백가지의농약검출법이공개되어있습니다. 현재 " 공식적인 " 분석법이명시되어있으며, 세계적범위에서기술의표준화가진행되고있습니다. 미국의국제분석화학자협회 (Association of Official Analytical chemists, AOAC) 에서는 Method 를편찬하였으며, 유럽에서는비슷한분석법을적용한 EN 이이와동일한기능을하고있습니다. QuEChERS 작업은 2단계로구성됩니다. 1. 추출단계는수용액층과유기층간의평형화를포함한 salting-out 추출을통한 partitioning에기반을둡니다. 2. 분산고체상추출 (Dispersive SPE) 단계에서는다양한염과다공성흡착제를함께이용해간섭물질을제거하는심화 cleanup 작업이이루어집니다. dispersive SPE 단계에서사용되는 1 차 -2 차아민 (PSA), C18, Graphitized carbon black 과같은다공성흡착제는다양한매트릭스화합물이 1 단계에서함께추출된방해성분을없애줍니다. 가장많이쓰이는분석법은추출된분석대상물질을 LC/MS 또는 GC/MS 또는이에상응하는기술로측정하는것입니다. 요령및방법 당사는광범위한 QuEChERS 제품옵션을지원하기위해 QuEChERS 접근법의다양한응용법을제공합니다. 이가이드는이러한응용법을포함하고있습니다. 응용은표준응용분석법에따라 AOAC 분석법, EN 분석법, 기존분석법으로분류되며기타접근법을소개하는별도의단원도함께포함되어있습니다. 매트릭스유형및분석대상물질등급분류에따라인덱스를이용해이가이드를편리하게검색하실수있습니다. 5

6 QuEChERS 추출키트 1 단계 : 추출 AOAC 또는 EN 의분석법기준으로추출염패킷을선택합니다. 완충처리된추출염은안정성이떨어지는농약을처리할수있습니다. 균질화된과일또는채소시료 (10g 또는 15g) 에용매를더한후염을추가하면유기층에밝히고자하는농약성분이추출됩니다. 애질런트는 QuEChERS 염과완충물질을무수패키지로제공합니다. QuEChERS 분석법에안내된것처럼시료에용매를더한후이들을추가할수있습니다. 아래표에나타난 CH 제품들은특정키트를위한적정수량의세라믹균질기 (ceramic homogenizer) 를포함하고있습니다. 세라믹균질기에대한더자세한내용은 13 페이지를참고하십시오. QuEChERS 추출키트는미리중량측정이완료된 MgSO 4, NaCl 및기타완충염을무수패킷형태로포함하고있으며, 50mL 원심분리용튜브도함께구매가능합니다. 세라믹균질기는추출소요시간을 70% 가량줄여주며, QuEChERS 키트와함께구매및별도구매가가능합니다. QuEChERS 추출키트 완충 50mL 튜브포함 분석법 처리됨 내용물 세라믹균질기 50/pk AOAC Yes 6 g MgSO 4 ; 1.5 g NaAcetate Yes CH 기존분석법 (10g 시료 ) No 4 g MgSO 4 ; 1 g NaCl Yes CH 기존분석법 (15g 시료 ) No 6 g MgSO 4 ; 1.5 g NaCl Yes CH EN Yes 4 g MgSO 4 ; 1 g NaCl; 1 g NaCitrate; 0.5 g disodium citrate sesquihydrate 패킷만포함 50/pk 200/pk No No No Yes CH Acrylamides* No 4 g MgSO 4 ; 0.5 g NaCl No 동물용의약품 No 4g Na2SO 4, 1 g NaCl No * 절차출처 : K. Mastovska, S. J. Lehotay, J. Agric. Food Chem. 2006, 54, No

7 QuEChERS dispersive 키트 2 단계 : dispersive SPE cleanup 분석대상식품의유형과선택한분석법에적합한 dispersive SPE 키트를선택하십시오. 이단계에서는 1 단계에서추출한분주 (aliquot) 시료를소량의 SPE 흡착제및 MgSO 4 가담긴 2mL 또는 15mL 의원심분리기용튜브에첨가합니다. 흡착제는시료의간섭물질을제거하고 MgSO 4 는수분을제거해분석물의분리를돕습니다. 이제키트에세라믹균질기 ( 튜브당 2 개 ) 를함께포함시킬수있으며이를포함한제품의부품번호에는 CH 가붙습니다. QuEChERS dispersive 키트, 과일및채소 키트용량단위 일반과일및채소 : 극성유기산, 일부당류및지질제거 AOAC 분석법 유럽분석법 EN 키트내용물부품번호 2 ml 100/pk 50 mg PSA 150 mg MgSO CH 키트내용물부품번호 25 mg PSA 150 mg MgSO CH 지방및왁스가함유된과일및채소 : 극성유기산, 일부당류, 다수의지질및스테롤제거 15 ml 50/pk 400 mg PSA 1200 mg MgSO CH 2 ml 100/pk 50 mg PSA 50 mg C18EC 150 mg MgSO CH 15 ml 50/pk 400 mg PSA 400 mg C18EC 1200 mg MgSO CH 150 mg PSA 900 mg MgSO CH 25 mg PSA 25 mg C18EC 150 mg MgSO CH 150 mg PSA 150 mg C18EC 900 mg MgSO CH 부품번호가 CH 로끝나는제품은세라믹균질기가포함된튜브라는뜻입니다. ( 계속 ) 7

8 QuEChERS dispersive 키트, 과일및채소 키트용량단위 색소가함유된과일및채소 : 극성유기산, 일부당류, 지질, 카로티노이드, 클로로필제거 ; 평면구조의농약검출에는사용불가 AOAC 분석법 유럽분석법 EN 키트내용물부품번호 2 ml 100/pk 50 mg PSA 50 mg GCB 150 mg MgSO CH 키트내용물부품번호 25 mg PSA 2.5 mg GCB 150 mg MgSO CH 15 ml 50/pk 400 mg PSA 400 mg GCB 1200 mg MgSO CH 150 mg PSA 15 mg GCB 885 mg MgSO CH 색소가다량함유된과일및채소 : 극성유기산, 일부당류및지질, 다량의카로티노이드및클로로필제거, 평면구조의농약검출에는사용불가 2 ml 100/pk 25 mg PSA 7.5 mg GCB 150 mg MgSO CH 15 ml 50/pk 150 mg PSA 45 mg GCB 855 mg MgSO CH 색소및지방이함유된과일및채소 : 극성유기산, 일부당류및지질, 카로티노이드및클로로필제거, 평면구조의농약검출에는사용불가 2 ml 100/pk 50 mg PSA 50 mg GCB 150 mg MgSO 4 50 mg C18EC CH 부품번호가 CH 로끝나는제품은세라믹균질기가포함된튜브라는뜻입니다. 15 ml 50/pk 400 mg PSA 400 mg GCB 1200 mg MgSO mg C18EC CH 8

9 QuEChERS dispersive 키트 : 기타식품분석법 키트용량단위 기타식품분석법 : 소수성물질 ( 지방, 지질 ) 과단백질을비롯한생물학적매트릭스간섭제거 AOAC 분석법 유럽분석법 EN 키트내용물부품번호 2 ml 100/pk 25 mg C mg MgSO CH 15 ml 50/pk 150 mg C mg MgSO CH 키트내용물부품번호 모든식품유형 : 극성유기산, 지질, 당류, 단백질, 카로티노이드, 클로로필등모든매트릭스간섭물제거 2 ml 100/pk 50 mg PSA 50 mg C mg GCB 150 mg MgSO CH 15 ml 50/pk 400 mg PSA 400 mg C18 45 mg GCB 1200 MgSO CH 동물성식품 : 극성유기염, 당류, 지질, 단백질과같은매트릭스간섭제거 15 ml 50/pk 50 mg PSA 150 mg C18EC 900 mg Na 2 SO 부품번호가 CH 로끝나는제품은세라믹균질기가포함된튜브라는뜻입니다. 9

10 식품유형및분석법별로권장되는 Bond Elut QuEChERS dispersive 키트 상품분류 상품 일반과일및채소, EN 또는 AOAC 지방및왁스가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가다량함유된과일및채소, EN 색소및지방이함유된과일및채소, AOAC 만해당 적용범위 밝은색상의시료 1% 이상의지방 / 지질이포함된시료 색소가포함된시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 짙은색상의시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 색소, 지방또는왁스가포함된시료 감귤류과일이과류 (Pome) 과일핵과류 (Stone fruits) 씨없는작은과일류기타과일 감귤류주스자몽레몬 / 라임오렌지오렌지껍질넥타린 ( 승도복숭아 ) 탄제린사과건조사과사과주스사과소스배마르멜로 (quince) 살구건조살구살구즙체리미라벨넥타린 ( 승도복숭아 ) 복숭아건조복숭아자두건조자두블랙베리블루베리크랜베리커런트엘더베리붉은구스베리청포도붉은포도건포도라즈베리딸기아보카도바나나건조무화과키위망고멜론올리브파파야파인애플 과일 ( 계속 ) 10

11 식품유형및분석법별로권장되는 Bond Elut QuEChERS dispersive 키트 상품분류 상품 일반과일및채소, EN 또는 AOAC 지방및왁스가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가다량함유된과일및채소, EN 색소및지방이함유된과일및채소, AOAC 만해당 적용범위 밝은색상의시료 1% 이상의지방 / 지질이포함된시료 색소가포함된시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 짙은색상의시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 색소, 지방또는왁스가포함된시료 채소 덩이뿌리류부추류과채류브로콜리류옆채류및허브줄기류채소콩류 사탕무블랙살시파이 (black salsify) 당근셀러리액 (celeriac) 고추냉이파슬리뿌리감자무골파 (chive) 마늘부추양파봄양파샬롯 ( 쪽파 ) 가지오이고추 ( 단맛, 녹색 ) 고추 ( 단맛, 적색 ) 단호박토마토애호박브로콜리방울양배추중국양배추빨간양배추사보이양배추백색양배추콜리플라워케일콜라비아르굴라 (arugular), 루콜라바질 (basil) 고수풀갓꽃상추마타리상추양상추류파슬리시금치아티초크 (artichokes) 아스파라거스셀러리부추루바브 ( 대황, rhubarb) 콩, 렌틸콩, 완두콩 ( 건조 ) 콩, 렌틸콩, 완두콩 ( 날것 ) ( 계속 ) 11

12 식품유형및분석법별로권장되는 Bond Elut QuEChERS dispersive 키트 상품분류 상품 일반과일및채소, EN 또는 AOAC 지방및왁스가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가함유된과일및채소, EN 또는 AOAC 색소가다량함유된과일및채소, EN 색소및지방이함유된과일및채소, AOAC 만해당 적용범위 밝은색상의시료 1% 이상의지방 / 지질이포함된시료 색소가포함된시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 짙은색상의시료 ( 클로로필, 카로티노이드 ), 평면구조의농약에는사용불가 색소, 지방또는왁스가포함된시료 동물성식품 쇠고기, 닭고기, 돼지고기, 송아지고기 육류 신장, 간 쌍각류조개, 갑각류 해산물 어류 유제품 유제품류 기타식품 옥수수, 쌀, 밀 곡류 밀가루, 곡물등 커피원두 차 / 커피 찻잎 커리, 고춧가루 부추류 건조식품 후추씨 카놀라유, 올리브유 오일 감귤류 이유식 이유식류 기타 코코아파우더 농산물제품 목화, 삼 ( 대마 ) 담배 토양 토양류 전혈 전혈 12

13 QuEChERS 세라믹균질기 세라믹균질기는전체적인실험실생산성을높이고더정확한결과를약속합니다. 다음과같은이점을통해한층쉽게분석물질을추출하십시오. 추출소요시간을 60초에서 20초로단축 - 시료당약 70% 의시간절약 기존에비해 1/3의시간으로재현성있는고품질의추출가능 작업자가바뀌어도변동성최소화 salting-out을방지하고시료를균일하게분산시킴 QuEChERS 키트에포함된것과동일한세라믹균질기를대량구매하실수있으며, 이역시놀라운시료분쇄능력을자랑합니다. QuEChERS 세라믹균질기 설명 단위 부품번호 Ceramic homogenizer for 50 ml tubes 100/pk Ceramic homogenizer for 15 ml tubes 100/pk Ceramic homogenizer for 2 ml tubes 200/pk QuEChERS 표준품 애질런트는업계선도적인 QuEChERS 키트뿐아니라가장광범위하게사용되는 AOAC 와 EN 의규제대상분석법에부합하는표준품을제공함으로써, 귀하의분석작업을쉽게만들어드립니다. 표준품제작에드는시간절약및번거로움해소 GC 및 LC 기기에사용가능 희석할필요없이 QuEChERS 추출에즉시사용가능 QuEChERS 표준품 설명 농도 키트내용물 부품번호 HPLC and GC Internal Standard, AOAC Method 1,000 μg/ml Parathion-d10 (diethyl-d10), alpha-bhc-d6 (alpha-hch-d6) QC Solution, AOAC Method 500 μg/ml Triphenyl phosphate HPLC Internal Standard, EN Method 100 μg/ml Tris (1,3-dichloroisopropyl) phosphate, nicarbazin GC Internal Standard, EN Method 5,000 μg/ml (2,2'5,5'-tetrachlorobiphenyl), triphenylmethane, tris (1,3-dichloroisopropyl) phosphate QC Surrogate for GC Standard, EN Method 500 μg/ml 1,000 μg/ml (2,2',3,4,4',5'-hexachlorobiphenyl) Anthracene-d

14 권장되는 Agilent Bond Elut QuEChERS 표준작업절차서 (SOP) 과일또는채소시료의 QuEChERS 분석법을진행하는기본단계는다음과같습니다. 단몇단계만으로다종 (multi-class) 다성분 (multi-residue) 잔류농약분석시료를준비할수있습니다. 추출키트선택 기존분석법 10g 시료 기존분석법 15g 시료 완충처리된 AOAC 분석법, 15g 시료 시료균질화 : 비어있는 50mL 튜브로옮김 아세토니트릴첨가 완충처리된 AOAC 분석법, 10g 시료 선택항목 : QuEChERS 분석법 검출대상화합물염기에민감한농약이있을경우, 완충처리된키트를사용하십시오. 애질런트는완충처리된키트사용을권장해드립니다. 사전에혼합되어있는추출염내용물첨가 ph 측정후 ph 를 5 ~ 5.5 로조절 내부표준물질첨가 흔들어준후원심분리기처리 dispersive SPE 키트선택 일반과일및채소 2mL 와 15mL 키트 AOAC 분석법 지방 / 왁스가함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 일반과일및채소 2mL 와 15mL 키트 EN 분석법 지방 / 왁스가함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 선택항목 : QuEChERS 분석법 분석할식품유형 분주 (aliquot) 시료용량 색소가함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 지방과색소가함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 색소가함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 색소가다량함유된과일및채소 2mL 와 15mL 키트 분주 (aliquot) 시료 : 1mL, 6mL 또는 8mL* 분석 흔들어준후원심분리기처리 * 분주 (aliquot) 시료용량은분석법에따라달라지며, 이러한특정량에알맞는키트가준비되어있습니다. 산성기 (phenoxyalcanoic acid) 가포함된농약은이단계에서 (dispersive SPE 단계없이 ) 바로 LC/MS/MS 분석으로진행됩니다. 이들산성기는 dispersive SPE 단계의일부인 PSA 와반응하게됩니다. 14

15 기존 QuEChERS 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS 키트로시료주입전정제후 GC/MS 를이용한사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 QuEChERS 를이용하여사과에서 15 가지의다종 (multi-class) 농약추출물을검출하기위한효과적인시료전처리방법을설명합니다. 농약은일반적인과일시료에서발견되는전형적인휘발성 / 준휘발성농약들로선정되었으며, 농도도이러한시료에일반적으로존재하는수준으로선택되었습니다. 완충처리를거치지않은 QuEChERS 추출법의원본내용발행시기는 2003 년입니다. 이분석에서는농약을 10ng/g 수준까지검출해내기위해 GC/MS 의 SIM(Selected Ion Monitoring) 모드를사용했습니다. 15

16 기기조건 GC/MS 조건컬럼 : 주입소스 : Inlet: 운반가스 : 오븐온도프로그램 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 UI) 수동주입 Splitless 헬륨, 일정유속모드 70 C (2 min), 25 C/min to 150 C (0 min), 3 C/min to 200 C (0 min), 8 C/min to 280 C (7 min) QuEChERS 절차 QuEChERS 추출절차 (1단계) 10g 균질화사과시료를 50mL 원심분리기용튜브에투입시료스파이킹후 1분간볼텍스처리 10mL ACN 첨가 4g MgSO 4 및 1g NaCl ( 부품번호 ) 주입량 : 1 µl MS 조건 Tune file: Atune.u 모드 : SIM Source, quad, transfer line 온도 : 각각 230 C, 150 C, 280 C 용매지연시간 : 4 min Multiplier 전압 : Autotune 전압 50µL 내부표준물질 (TPP) 30초동안볼텍스처리 5,000rpm에서 5분간원심분리 QuEChERS dispersive SPE(2단계 ) 및분석 상층액 1mL 를취하여 1.5mL 원심분리기용튜브에넣은후 50mg PSA, 150mg MgSO 4 ( 부품번호 ) 첨가 30 초동안볼텍스처리 5 분간원심분리 0.5mL 를취하여시료바이알로옮김 1.5µL 를취하여 GC/MS 에주입 그림 1. 일반과일및채소를위한 QuEChERS 추출절차 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Non-Buffered Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Dispersive Kit for General Fruits and Vegetables, 2 ml ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables, 15 ml ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Capillary Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 UI) 16

17 결과 일반과일및채소를위한 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction and Dispersive SPE 키트를이용해전처리한후의첨가사과추출물 (50ng/g) 일반과일및채소를위한 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction and Dispersive SPE 키트를이용해전처리한후의사과바탕시료 그림 2. 첨가사과추출물과사과바탕시료의비교크로마토그램 표 1. 기존 QuEChERS 분석법을이용한사과내농약분석의회수율및재현성 (n=4) Low-QC 10 ng/g Mid-QC 50 ng/g High-QC 200 ng/g 농약 회수율 RSD 회수율 RSD 회수율 RSD Dichlorvos o-phenylphenol Lindane Diazinone Methyl-chlorpyrifos Chlorpyrifos Dichlorobenzophenone Heptachlor-epoxide g-chlordane a-chlordane Dieldrin DDE Endosulfan sulfate Permethrin Coumaphos 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 17

18 EN 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS European Standard EN 키트를사용한 LC/MS/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 European Committee Standard(EN) 에기술된, 사과시료내 16 가지다종 (multi-class) 잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS 시료전처리방법을설명합니다. 사과추출물의분석대상농약은시료전처리절차후액체크로마토그래피와전자분무이온화 Tandem 질량분석법 (LC-ESI-MS/MS) 의 positive ion multiple reaction monitoring(mrm) 모드를통해측정됩니다. 18

19 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품 번호 ) 유속 : 0.3 또는 0.5 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : A: 5 mm Ammonium acetate, ph 5.0 in 20:80 MeOH/H 2 O B: 5 mm Ammonium acetate, ph 5.0 in ACN 니들세척 : 1:1:1:1 ACN:MeOH:IPA:H 2 O (0.2% FA.) 이동상변화도 : 유속 시간 (min) % B (ml/min) STOP Post run: 4 min 총주기시간 : 17 min MS 조건 양이온모드 가스온도 : 350 ºC 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi Capillary: 4,000 V QuEChERS 절차 분쇄된시료 10g(± 0.05g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를시료에스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 ACN 10mL 를첨가한후 1 분간흔들어줍니다 Bond Elut EN 추출키트를첨가하고손으로 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 층을 1mL 를취하여 Bond Elut EN dispersive SPE 2mL 튜브로옮기거나, 6mL 를취하여 Bond Elut EN dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리, 2mL 튜브의경우 13,000rmp 으로 2 분간원심분리, 15mL 튜브의경우 4,000rpm 으로 5 분간원심분리 200µL 의추출물을자동시료주입기바이알로옮김, 1% FA 의 ACN 용액 10µL 를첨가한후 800µL 물로희석 LC/MS/MS 분석을위한시료준비완료 그림 1. 사과내농약분석을위한 QuEChERS EN 시료전처리절차 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Method Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS EN Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 19

20 결과 x MRM ( & ) low QC -1.d Counts (%) vs. acquisition time (min) 그림 2. 10ng/g 첨가사과추출물의크로마토그램. 피크 ID: 1. Methamidophos, 2. Acephate, 3. Pymetrozine, 4. Carbendazim, 5. Imidacloprid, 6. Thiabendazole, 7. Dichlorvos, 8. Propoxur, 9. Thiophanate methyl, 10. Carbaryl, 11. Ethoprophos, 12. Penconazole, 13. Cyprodinil, 14. Dichlofluanid, 15. Kresoxim methyl, 16. Tolyfluanid. 그림 3. 1mL dispersive SPE 와 6mL dispersive SPE 의결과비교 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 20

21 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를사용한 GC/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 European Committee(EN) 에기술된, 사과내 17 가지 GC 처리가능한다종 (multi-class) 의잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS 시료전처리방법을설명합니다. 이분석법에는수용액 / 아세토니트릴시스템을이용한초기추출단계, 염추가후추출 / 분할단계, 분산고체상추출 (dispersive SPE) 을이용한 cleanup 단계가포함됩니다. 사과추출물내분석대상농약성분은시료전처리절차후가스크로마토그래피 / 질량분석법 (GC/MS) 의 selective ion monitoring(sim) 모드로분석됩니다. QuEChERS 절차 분쇄된시료 10g(± 0.1g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS(TPP) 용액 100µL 를스파이킹한후 ( 필요할경우 QC 스파이크용액스파이킹 ) 1 분간볼텍스처리 ACN 10mL 를첨가한후손으로 1 분간흔들어줍니다 Bond Elut EN QuEChERS 추출염키트첨가 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 기기조건 GC 조건 컬럼 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) Inlet: Splitless Inlet liner: Helix double-taper, deactivated ( 부품번호 ) 운반가스 : 헬륨 Inlet 압력 : 작동중에는 psi ( 일정압력모드 ), 백플러시중에는 1.0 psi Inlet 온도 : 250 ºC 주입량 : 1.0 µl Split 배출구퍼지유속 : 30 ml/min at 0.75 min 오븐온도프로그램 : 70 ºC (1 min), 50 ºC/min to 150 ºC (0 min), 6 ºC/min to 200 ºC (0 min), 16 ºC/min to 280 ºC (6 min) Post run: 3 min Capillary flow technology: Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) 분석용컬럼및 inlet 백플러시에사용 Aux EPC 가스 : 헬륨가스가 Purged Ultimate Union 통과 Aux EPC 압력 : 작동중에는 4.0 psi, 백플러시중에는 80.0 psi 연결 : Between inlet and Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) Restrictor: 65 cm x 0.15 mm x 0.15 µm DB-5ms Ultra Inert 연결 : Purged Ultimate Union과 MSD 사이의연결 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를취하여 Bond Elut EN dispersive SPE 2mL 튜브로옮기거나, 6mL 를취하여 Bond Elut EN dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리, 2mL 튜브의경우 13,000rmp 으로 2 분간원심분리, 15mL 튜브의경우 4,000rpm 으로 5 분간원심분리 500µL 의추출물을자동시료주입기바이알로옮김, 1% FA 의 ACN 용액 25µL 를첨가한후잘섞어줍니다 GC/MS 로분석 그림 1. 사과내잔류농약성분분석을위한 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 추출절차 MS 조건 Tune file: Atune.u 모드 : SIM( 세부설정은표 2 참조 ) Source, quad, transfer line 온도 : 각각 230 ºC, 150 ºC, 280 ºC 용매지연시간 : 2.30 min Multiplier 전압 : Autotune 전압 21

22 결과 A Abundance IS Time (min) B IS Abundance Time (min) 그림 2. 사과추출물의 GC/MS 크로마토그램. (A) 사과추출물바탕시료, (B) 50ng/g 첨가사과추출물. 피크 ID: 1. Dichlorvos, 2. o-phenylphenol, 3. Lindane, 4. Diazinon, 5. Chlorothalonil, 6. Chlorpyrifos-methyl, 7. Dichlofluanid, 8. Dichlorobenzophenone, 9. Heptachlor epoxide, 10. g-chlordane, 11. DDE, 12. a-chlordane, 13. Dieldrin, 14. Ethion, 15. Endosulfan sulfate, 16. Permethrin, 17. Coumaphos. IS: Triphenyl phosphate (TPP). 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Method Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS EN Method Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) 22

23 o g a 그림 3. Agilent Bond Elut Dispersive SPE 2mL 키트와 15mL 키트로각각 1mL, 6mL 시료를분석한회수율및정밀도결과 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 23

24 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를사용한 LC/MS/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는시금치내 13 가지다종의 (various classes) 잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS EN 시료전처리방법을설명합니다. 시금치는색소가다량으로포함되었기때문에, 색소가다량함유된과일및채소를위한 EN dispersive SPE 키트를사용해야합니다. 7.5mg/mL 의 ACN 추출키트에는 Graphitized carbon black (GCB) 이포함되어있습니다. 시금치추출물의분석대상농약은시료전처리절차후액체크로마토그래피와전자분무이온화 Tandem 질량분석법 (LC-ESI-MS/MS) 의 positive ion multiple reaction monitoring(mrm) 모드를통해측정됩니다. QuEChERS 절차 시금치시료 10g(± 0.1g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액을스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% HAc 이들어있는 ACN 15mL 를첨가하고 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트를첨가 뚜껑을닫고손으로 1 분간세게흔들어준후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 기존분석법 수정분석법 기기조건 HPLC 조건컬럼 : 유속 : 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 0.3 ml/min 이동상 : A: 5 mm Ammonium acetate, ph 5.0 in 20:80 MeOH:H 2 O B: 5 mm Ammonium acetate, ph 5.0 in ACN 니들세척 : 1:1:1:1 ACN:MeOH:IPA:H 2 O w/0.2% FA 이동상변화도 : 유속 시간 (min) % Acetonitrile (ml/min) STOP Post run: 4 min 총주기시간 : 17 min MS 조건 양이온모드 가스온도 : 350 ºC 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi Capillary: 4,000 V ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 에서분석 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 톨루엔 325µL 첨가 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 ACN 층을 825µL 를취하여다른튜브로옮김 30ºC 에서 N 2 흐름을통과시켜건조 0.1% FA 의 ACN 용액 600µL 로재용해 (Reconstitute) 볼텍스처리및초음파처리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 에서분석 그림 1. 시금치내잔류농약성분검사를위한 QuEChERS EN 절차 ( 기존및수정 dispersive SPE, 2mL) 24

25 결과 , IS Response units (%) vs. acquisition time (min) 그림 2. EN 분석법으로처리된 50ng/g 첨가시금치시료의 MRM 크로마토그램. 피크 ID: 1. Methamidophos, 2. Acephate, 3. Pymetrozine, 4. Carbendazim, 5. Imidacloprid 6. Thiabendazole, 7. Propoxur, 8. Carbaryl, 9. Ethoprophos, 10. Imazalil, 11. Penconazole, 12. Cyprodinil, 13. Kresoxim methyl, IS: 내부표준물질, TPP. 표 1. 6mL dispersive PSE 튜브 ( 부품번호 ) 의첨가시금치시료내농약의회수율및재현성 10 ng/g fortified QC 50 ng/g fortified QC 200 ng/g fortified QC 분석물 회수율 RSD (n=6) 회수율 RSD (n=6) 회수율 RSD (n=6) Methamidophos Acephate Pymetrozine* Carbendazim* Imidacloprid Thiabendazole* Propoxur Carbaryl Ethoprophos Imazalil Penconazole Cyprodinil* Kresoxim methyl * 평면구조의농약 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kits ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kits for Pigmented Fruits and Vegetables ( 부품번호 및 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 25

26 Agilent Bond Elut QuEChERS Acrylamide 키트및 HPLC-DAD 를사용한식용유내아크릴아미드검출 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 methacrylamide 를내부표준물질로이용해식용유내아크릴아미드를분석하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 아크릴아미드는조리과정및열처리된식품에서흔히발견되는부산물입니다. 아크릴아미드의회수율은 84 ~ 93.8% 입니다. 이분석은 binary 펌프와다이오드어레이검출기 (DAD) 가 210nm 으로설정된 Agilent 1200 Infinity 시리즈기기를이용해수행되었습니다. QuEChERS 절차 오일시료 1g 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 1,000μL 20ng/mL IS, 1,000μg/mL 스파이크용액을시료에스파이킹하고 1 분간세게흔들어줍니다 n-hexane 5mL 첨가 1 분간세게흔들어줍니다 9mL 물과 10mL ACN 을첨가하고 1 분간세게흔들어줍니다 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : 유속 : 컬럼온도 : 30 C 주입량 : Agilent ZORBAX HILIC Plus, mm, 3.5 μm 0.2 ml/min 5 μl 이동상 : 등용매용리 : A: 3% 5 mm Acetic acid B: 97% Acetonitrile 분석시간 : Post time: 검출 : 10 min 3 min DAD, 210 nm 아크릴아미드추출을위한 Bond Elut QuEChERS 염추출키트를첨가하고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 헥산상층액을폐기 CH 3 CN 층의분주 (aliquot) 시료 6mL 를 Bond Elut QuEChERS dispersive SPE 15mL 튜브 (PSA, C18EC, MgSO 4 가들어있음 ) 로옮기고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 1,000μL 를자동시료주입기바이알로옮김 HPLC-DAD 분석을위한시료준비완료 그림 1. 식용유내아크릴아미드분석을위한 QuEChERS 시료전처리절차 26

27 결과 그림 2. 오일추출물바탕시료의크로마토그램 그림 3. 스파이킹한오일추출물의크로마토그램 표 1. 오일시료내아크릴아미드분석의회수율및 RSD(n=6) 농도 (ng/ml) % 회수율 (n=6) %RSD(n=6) , , 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction Kit for Acrylamides ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS EN Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX HILIC Plus Column, mm, 3.5 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 27

28 Agilent Bond Elut QuEChERS 추출키트및 Agilent 5975T LTM GC/MSD 를사용한 Blind Study 로과채류 (fruiting vegetables) 내농약분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는과채류내잔류농약성분을식별하기위한 QuEChERS EN 시료전처리방법을설명합니다. 농약검출의시료로는방울토마토와오이가사용되었습니다. 이분석은 Agilent 7693 Automatic Liquid Sampler 가설치된 Agilent 5975T LTM GC/MSD 시스템을이용해수행되었습니다. RTL 소프트웨어는 Agilent MSD ChemStation 의일부입니다. QuEChERS 절차 균질화채소 5g을 50mL 원심분리기용튜브에투입 5mL 물을첨가한후 1분간세게흔들어줍니다 10mL ACN을첨가한후 30초동안세게흔들어둡니다 Bond Elut QuEChERS EN 추출키트를첨가 기기조건 기기컬럼 : 가드컬럼 : GCMS 시스템 : Inlet: Agilent J&W HP-5ms LTM, 30 m 0.25 mm, 0.25 μm 분석용컬럼과동일한상 (phase) 의 1m 컬럼, 주입기와연결 5975T LTM Split/splitless Autosampler: Agilent 7693 실험조건 : Inlet 온도 : 280 ºC 주입량 : 주입모드 : 운반가스 : 헤드압력 : 분석법 : LTM 오븐온도 : 1 μl Splitless 헬륨 psi, 일정압력모드 RT locked to chlorpyrifos methyl at min Transfer line 온도 : 270 ºC MSD 인터페이스 : 270 ºC 이온소스 : 230 ºC Quad 온도 : 150 ºC 이온화모드 : EI 스캔모드 : Full scan, u EMV 모드 : Gain factor Gain factor : 5.00 최종 EM 전압 : 1129 V 용매지연시간 : 3 min 70 ºC (2 min), 25 ºC/min, 150 ºC (0 min), 3 ºC/min, 200 ºC (0 min), 8 ºC/min, 280 ºC (10 min) 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 6mL 를 Bond Elut QuEChERS EN dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 시료를 0.22µm 필터로필터링한후 4mL 분주 (aliquot) 시료를취하여자동시료주입기바이알에넣습니다 GC/MSD 분석을위한시료준비완료 그림 1. 과채류내농약분석을위한 QuEChERS EN 절차 28

29 결과 Abundance 2.2e+07 2e e e e e+07 1e Time 그림 2. 방울토마토에스파이킹된농약의양은 MA 0.2 ~ 1.0µg/g 이며, 모든분석대상성분은 2min 내에 DRS 소프트웨어에서찾을수있습니다 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kits ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS EN Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms LTM Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 29091S-433LTM) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 29

30 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로녹차내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는녹차내 12 가지다종의 (various classes) 잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS EN 시료전처리방법을설명합니다. 녹차는클로로필이높은수준으로포함되어있으므로색소가다량함유된시료로간주됩니다. MRM 모드로작동하는전자분무이온화기능의 Agilent 6410 Triple Quadrupole MS 시스템과 Agilent 1200 Infinity 시리즈액체크로마토그래피를통해분석대상농약을검출합니다. 평균회수율은 87% ~ 108%( 평균 93.5%) 입니다. QuEChERS 절차 균질화된시료 2g(± 0.1g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 시료에 100µL IS 용액 (10µg/mL 의 TPP) 을첨가해 50ng/g 의농도를만듭니다 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리 8mL 의물을각튜브에첨가하고뚜껑을닫은후 1 분간볼텍스처리 각튜브에 2 개의세라믹균질기를넣고 10mL ACN 첨가 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : 유속 : 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : 니들세척 : Agilent Poroshell 120 EC-C18, mm, 2.7 μm, ( 부품번호 ) 0.4 ml/min A: 5 mm FA in water B: 5 mm FA in ACN 1:1:1:1 ACN:MeOH:IPA:H 2 O w/0.2% FA 이동상변화도 : 시간 (min) % Acetonitrile 0 5 Post run: 총주기시간 : min 11 min MS 조건 양이온모드 가스온도 : 350 ºC 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi Capillary: 3,500 V 뚜껑을닫고 1 분간흔들어줍니다 Bond Elut EN 추출염키트의내용물첨가 20 초동안세게흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 층의분주 (aliquot) 시료 6mL 를 Bond Elut EN dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리를한후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물 1mL 를 10mL 튜브로옮긴뒤 40 C 이하질소로건조 일정한량의 1mL ACN/ 물 (1/9) 용액으로잔류물용해 잔류물을 0.45µm 멤브레인으로필터링처리 LC/MS/MS 로분석 그림 1. 녹차내농약분석을위한 QuEChERS EN 절차 30

31 결과 그림 2. EN 분석법으로처리된 50ng/g 첨가시료의 MRM 크로마토그램. 피크 ID: 1. Acephate, 2. Pymetrozine, 3. Carbendazim, 4. Thiabendazole, 5. Imidacloprid, 6. Imazalil, 7. Propoxur, 8. Carbaryl, 9. Cyprodinil, 10. Ethoprophos, 11. Penconazole, 12. Kresoxim-methyl, IS: TPP. 표 1. Agilent Bond Elut QuEChERS를이용한첨가녹차시료내농약의회수율및재현성 10 ng/g fortified QC 50 ng/g fortified QC 200 ng/g fortified QC 분석물 회수율 RSD (n=6) 회수율 RSD (n=6) 회수율 RSD (n=6) Acephate 80.5% 5.4% 91.7% 2.9% 88.9% 8.2% Pymetrozine 43.1% 3.0% 42.2% 3.4% 43.4% 9.8% Carbendazim 114.6% 11.6% 97.6% 2.0% 105.0% 6.2% Thiabendazole 98.1% 6.9% 90.4% 2.4% 81.7% 5.8% Imidacloprid 104.3% 11.7% 108.6% 2.5% 93.9% 7.9% Imazalil 97.5% 4.4% 87.8% 5.6% 92.4% 4.6% Propoxur 98.1% 2.4% 110.2% 1.7% 107.8% 3.9% Carbaryl 89.7% 11.4% 104.9% 3.3% 108.1% 5.2% Cyprodinil 84.9% 2.1% 92.5% 3.7% 93.9% 5.5% Ethoprophos 103.4% 3.1% 111.2% 3.2% 104.9% 5.7% Penconazole 108.7% 2.9% 94.3% 4.5% 89.8% 3.3% Kresoxim-methyl 105.7% 12.4% 96.4% 2.5% 99.2% 5.5% 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kits ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kits for Pigmented Fruits and Vegetables ( 부품번호 ) Agilent Poroshell 120 EC-C18 Column, 2.1 x 100 mm, 2.7 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 31

32 Agilent Poroshell 120 LC 컬럼을사용한 Agilent 1290 Infinity LC 와 Agilent Bond Elut QuEChERS 시료전처리법으로새우내호르몬측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는새우내 13 가지호르몬을추출하기위한 QuEChERS EN 시료전처리방법을설명합니다. 새우내의호르몬검출을위한분석법은 Agilent Poroshell 120 EC-C18 컬럼이장착된 Agilent 1290 Infinity LC 를이용해개발되었습니다. 이분석법의회수율은 91.6 ~ 107.2% 입니다. QuEChERS 절차 균질화된시료 5g(± 0.05g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 30 초동안원심분리를통해시료가튜브바닥에가라앉은다음적절한양의 QC 스파이크용액을첨가 뚜껑을닫고 30 초동안볼텍스처리후, 5mL 의물첨가 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 100 mm, 2.7 μm ( 부품번호 ) 기기 : DAD 검출기가장착된 Agilent 1290 Infinity LC 유속 : 0.8 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 검출파장 : 230 nm 이동상 : Water-acetonitrile gradient 이동상변화도 : 시간 (min) % Water % Acetonitrile 뚜껑을닫고 10 초동안볼텍스처리후, 10mL 의 ACN 을각튜브에첨가 뚜껑을닫고 30 초동안흔들어줍니다 Bond Elut EN 추출키트첨가 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 4 C 에서 5 분간원심분리 (4,000rpm) ACN 층의분주 (aliquot) 시료 6mL 를 Bond Elut dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리 4 C 에서 3 분간원심분리 (13,000rpm) 추출물 4mL 를다른튜브로옮긴뒤 35 C 질소로건조 2mL 의 1:4 ACN/H 2 O 로재용해 볼텍스처리후 10 분간초음파처리, 그후 0.2µm cellulose acetate spin filter 로필터링수행 필터링한시료를자동시료주입기바이알에넣고뚜껑을닫은뒤볼텍스처리를하여 HPLC 분석수행 그림 1. 새우내호르몬분석을위한 QuEChERS EN 절차 32

33 결과 그림 2. 바탕시료및바탕시료에 0.5ppm 의표준품을첨가했을때의크로마토그램 표 1. 새우내호르몬검출을위해개발된 QuEChERS 분석법의회수율및재현성 분석물농도회수율 (%) %RSD (n=6) Estriol Prednisone Dexamethasone Boldenone Hydrocortisone Fludrocortisone acetate Metandienone Estradiol Testosterone Methyltestosterone Estrone Diethylstilbestrol Hexestrol 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kits ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kits for Drug Residues in Meat, 15 ml ( 부품번호 ) Agilent Poroshell 120 EC-C18 Column, 3.0 x 100 mm, 2.7 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 33

34 Bond Elut QuEChERS Extraction 키트및 Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한쌀내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는쌀내 57 가지다종의 (various classes) GC 분석가능한농약을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS EN 시료전처리방법을설명합니다. 애질런트는 962 가지농약, 대사산물, 의심되는내분비계교란물질등을포함하는 GC 와 GC/MS RTL 데이터베이스 ( 부품번호 G1672AA) 를개발했습니다. 이실험은 5975C inert MSD 가설치된 Agilent 7890 GC, Agilent 7683 Automatic Liquid Sampler(ALS) 를이용해수행되었습니다. 화합물분리는 Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC 컬럼에서완수되었습니다. 대부분의경우회수율은 80 ~ 110% 입니다. QuEChERS 절차 분쇄된쌀 5g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에넣고 5mL 물추가 IS(TPP) 용액첨가 ( 필요할경우 GC 스파이크용액첨가 ) 한후 1 분간볼텍스처리 ACN 10mL 를더한후 1 분간볼텍스처리 Bond Elut EN QuEChERS 추출염키트첨가 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 기기조건 GC 조건 컬럼 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 30 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-433UI) Inlet 온도 : 250 C 운반가스 : 헬륨, 일정압력모드머무름시간 (RT) 고정 : Chropyrifos-methyl locked to min 주입모드 : Splitless, purge flow 50 ml/min at 0.75 min 주입량 : 1 μl 오븐 : 70 C (2 min), 25 C/min to 150 C (0 min), 3 C/min to 200 C, 8 C/min to 280 C (10 min), postrun: 320 C (5 min) MS 조건 용매지연시간 : 4 min MS 온도 : 230 C (source); 150 C (quad) Transfer line: 280 C MS 라이브러리 : Agilent RTL Pesticide Library (G1672AA) 및 NIST08 Mass Spec Library MS: EI, SIM/Scan 스캔모드 : 질량범위 ( amu) 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 6mL 를 Bond Elut dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물 0.5mL 를시료바이알로옮김 GC/MS 로시료분석 그림 1. 쌀내잔류농약성분분석을위한 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 추출절차 34

35 결과 Abundance , , , , , * 16, , , * 140, , , ,000 Time Methamidophos 2 Dichlorvos 3 Omethoate 4 Monocrotophos 5 BHC alpha isomer 6 Hexachlorobenzene 7 Dimethoate 8 BHC beta isomer 9 Lindane 10 Pentachloronitrobenzene 11 Phenanthrene-d10* 12 Diazinon 13 BHC delta isomer 14 Propanil 15 Methyl parathion 16 Chlorpyrifos methyl 17 Vinclozolin 18 Heptachlor 19 Metalaxyl 20 Fenitrothion 21 Pirimiphos-methyl 22 Aldrin 23 Malathion 24 Fenthion 25 Chlorpyrifos 26 Parathion 27 Triadimefon 28 Heptachlor exo-epoxide 29 Pendimethalin 30 Isofenphos 31 Quinalphos 32 Triadimenol 33 Methidathion 34 Butachlor 35 Dieldrin 36 Isoprothiolane 37 p,p -DDE 38 Myclobutanil 39 Endrin 40 p,p -DDD 41 o,p -DDT 42 Ethion 43 p,p -DDT 44 Triphenyl phosphate* 45 Iprodione 46 Phosmet 47 Bifenthrin 48 Fenpropathrin 49 Tetradifon 50 Phosalone 51 Lambda-cyhalothrin 52 Permethrin I 53 Permethrin II 54 Cypermethrin I 55 Fenvalerate 56 Cypermethrin II 57 Deltamethrin * 내부표준물질 그림 ng/mL 에서쌀내농약의총이온크로마토크램 (TIC) 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kits ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kits ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-433UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 35

36 AOAC 분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는사과내 16 가지잔류농약성분의추출및 cleanup 을위한 QuEChERS(Association of Analytical Communities(AOAC) 에서편찬한 Official Method 분석법 ) 시료전처리법을설명합니다. 본응용법의사과내농약의정량한계 (LOQ) 인 5ng/g 는농약잔류허용기준 (MRL) 보다훨씬낮습니다. 회수실험의스파이킹농도는 10, 50, 200ng/g 입니다. 평균회수율범위는 76 ~ 117%( 평균 95.4%), RSD 는 15% 이하 ( 평균 4.3%) 입니다. 36

37 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 유속 : 0.3 또는 0.5 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : A: 5 mm NH 4 OAc, ph 5.0 in 20:80 MeOH/H 2 O B: 5 mm NH 4 OAc, ph 5.0 in ACN 니들세척 : 1:1:1:1 ACN:MeOH:IPA:H 2 O (0.2% FA) 이동상변화도 : 유속 시간 (min) % B (ml/min) STOP Post run: 4 min 총주기시간 : 17 min MS 조건양이온모드가스온도 : 350 ºC 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi QuEChERS 절차 균질화된시료 15g(± 0.05g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를시료에스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% 아세트산이들어있는 ACN 용액을 15mL 첨가후 1 분간세게흔들어줍니다 Bond Elut QuEChERS AOAC 염추출키트첨가후뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 2mL 튜브로옮기거나, 8mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리뒤원심분리 추출물 200µL 를자동시료주입기바이알로옮기고, 필요한경우적절한용액 800µL 로희석 LC/MS/MS 분석을위한시료준비완료 Capillary: 4,000 V 그림 1. 사과내농약분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 37

38 결과 MRM ( & ) low QC -1.d Counts (%) vs. acquisition time (min) 그림 2. 10ng/g 첨가사과추출물의크로마토그램. 피크 ID: 1. Methamidophos, 2. Acephate, 3. Pymetrozine, 4. Carbendazim, 5. Imidacloprid, 6. Thiabendazole, 7. Dichlorvos, 8. Propoxur, 9. Thiophanate methyl, 10. Carbaryl, 11. Ethoprophos, 12. Penconazole, 13. Cyprodinil, 14. Dichlofluanid, 15. Kresoxim methyl, 16. Tolyfluanid. 그림 3. 1mL 와 8mL 시료량의 dispersive SPE 결과비교 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 38

39 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 GC/MS 검출로사과내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는사과내 17 가지 GC 처리가능한다종 (multiple classes) 의잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 사과추출물내분석대상농약성분은시료전처리절차후가스크로마토그래피 / 질량분석법 (GC/MS) 의 selective ion monitoring(sim) 모드로분석됩니다. QuEChERS 절차 분쇄된시료 15g(± 0.01g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS(TPP) 용액 100µL 를스파이킹한후 ( 필요할경우 QC 스파이크용액스파이킹 ) 1 분간볼텍스처리 1% 의 HAc 를포함한 ACN 15mL 첨가 기기조건 GC 조건 컬럼 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-433UI) Autosampler: Agilent 7683 Automatic Liquid Sampler Inlet: Splitless 운반가스 : 헬륨, 일정압력 머무름시간 (RT) 고정 : Chlorpyrifos-methyl locked to min (nominal column head pressure = 22.0 psi) 오븐온도 70 ºC (2 min), 25 ºC/min to 150 ºC (0 min), program: 3 ºC/min to 200 ºC (0 min), 8 ºC/min to 280 ºC (11.5 min) 주입량 : 1.0 µl MS 조건 Tune file: Atune.u 모드 : SIM( 세부설정은응용자료의표 2 참조 ) Source, quad, transfer line 온도 : 각각 230 ºC, 150 ºC, 280 ºC 용매지연시간 : 3 min Multiplier 전압 : Autotune 전압 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출염키트첨가 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 2mL 튜브로옮기거나, 8mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리, 2mL 튜브의경우 13,000rmp 으로 2 분간원심분리, 15mL 튜브의경우 4,000rpm 으로 5 분간원심분리 추출물 500µL 를시료바이알로옮김 GC/MS 로분석 그림 1. 사과내잔류농약성분분석을위한 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출절차 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-433UI) 39

40 결과 A Abundance IS Time (min) B Abundance IS Time (min) 그림 2. 사과추출물의 GC/MS 크로마토그램. (A) 사과추출물바탕시료, (B) 50ng/g 첨가사과추출물. 피크 ID: 1. Dichlorvos, 2. o-phenylphenol, 3. Diazinon, 4. Chlorothalonil, 5. Carbaryl, 6. Dichlofluanid, 7. Dichlorobenzophenone, 8. Folpet, 9. a-chlordane, 10. Endosulfan, 11. Dieldrin, 12. DDE, 13. Ethion, 14. Endosulfan sulfate, 15. Endrin ketone, 16. Permethrin, 17. Coumaphos. IS: Triphenyl phosphate (TPP). 그림 3. Agilent Bond Elut dispersive SPE 2mL 키트와 15mL 키트로각각 1mL, 8mL 시료를분석한회수율및정밀도결과 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 40

41 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 GC/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는시금치내 18 가지다종의 (multiple classes) GC 분석가능한농약을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS AOAC 시료전처리방법을설명합니다. dispersive SPE 내 Graphitized carbon black (GCB) 에의한평면구조농약의상당량손실을해결하기위해평면구조농약에톨루엔을추가하는수정방법이사용되었습니다. 시금치추출물내분석대상농약성분은시료전처리절차후가스크로마토그래피 / 질량분석법 (GC/MS) 의 selective ion monitoring(sim) 모드로분석됩니다. QuEChERS 절차 시금치시료 15g(± 0.1g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액을스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% HAc 이들어있는 ACN 15mL 를첨가하고 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트를첨가 뚜껑을닫고손으로 1 분간세게흔들어준후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 기기조건 기존분석법 수정분석법 GC 조건컬럼 : Inlet: Inlet liner: 운반가스 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) Splitless Helix double-taper, deactivated ( 부품번호 ) 헬륨 주입구압력 : 작동중에는 19.6 psi( 일정압력모드 ), 백플러시중에는 1.0 psi Inlet 온도 : 250 ºC 주입량 : 1.0 µl Split 배출구퍼지유속 : 30 ml/min at 0.75 min 오븐온도프로그램 : 70 ºC (1 min), 50 ºC/min to 150 ºC (0 min), 6 ºC/min to 200 ºC (0 min), 16 ºC/min to 280 ºC (6 min) Post run: 3 min Capillary Flow Technology: Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) 분석용컬럼및 inlet 백플러시에사용 Aux EPC 가스 : 헬륨가스가 Purged Ultimate Union 통과 Aux EPC 압력 : 작동중에는 4.0 psi, 백플러시중에는 80.0 psi 연결 : Between inlet and Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) Restrictor: 65 cm x 0.15 mm, 0.15 µm DB-5ms Ultra Inert 연결 : Purged Ultimate Union과 MSD 사이의연결 MS 조건 Tune file Atune.u 작업모드 SIM Source, quad, transfer line 온도각각 230 ºC, 150 ºC, 280 ºC 용매지연시간 2.30min Multiplier 전압 Autotune 전압 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 일정량을취하여 GC/MS 분석수행 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 톨루엔 325µL 첨가 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 ACN 상층액 825µL 를취하여다른튜브로옮김 30ºC 에서 N 2 흐름을통과시켜건조 0.1% FA 의 ACN 용액 600µL 로재용해 (Reconstitute) 볼텍스처리및초음파처리 일정량을취하여 GC/MS 분석수행 그림 1. 시금치시료를위한 QuEChERS AOAC 추출절차 ( 기존및수정 dispersive SPE, 2mL) 41

42 결과 A ,8 12 IS Time 2 B ,8 12 IS Time 그림 2. dispersive SPE 기존분석법 (A) 및 dispersive SPE 수정분석법 (B) 으로진행된 50ng/g 첨가시금치시료추출물의 GC/MS 크로마토그램. 피크 ID: 1. Diachlorvos, 2. o-phenylphenol, 3. Lindane, 4. Diazinon, 5. Chlorothalonil 6. Chloropyrifos methyl 7. Dichlorobenzophenone, 8. Chlorpyrifos, 9. Heptachlor epoxide, 10. Folpet, 11. a-chlordane, 12. DDE, 13. g-chlordane, 14. Dieldrin, 15. Ethion, 16. Endosulfan sulfate, 17. Permethrin, 18. Coumaphos. IS: 내부표준물질, TPP. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for Pigmented Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) 42

43 표 1. AOAC dispersive SPE를사용한시금치 LC/MS/MS 분석결과 ( 시료량 1mL, 2mL 튜브 ) Low QC (10 ng/g) Mid QC (50 ng/g) High QC (200 ng/g) 농약 회수율 RSD 회수율 RSD 회수율 RSD Dichlorvos o-phenylphenol Lindane Diazinon Chlorothalonil* Chlorpyrifos methyl Dichlorobenzo phenone* Chlorpyrifos Heptachlor epoxide Folpet* NA NA g-chlordane DDE a-chlordane Dieldrin Ethion Endosulfan sulfate Permethrin Coumaphos* *dispersive SPE 수정분석법의결과 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 43

44 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로시금치내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는시금치내 13 가지다양한종 (class) 의잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS AOAC 시료전처리방법을설명합니다. dispersive SPE 내 Graphitized carbon black (GCB) 에의한평면구조농약의상당량손실을해결하기위해평면구조농약에톨루엔을추가하는수정방법이사용되었습니다. 기존및수정 dispersive SPE 의조합은모든분석대상물질의회수율및재현성관점에서증명되었습니다. QuEChERS 절차 시금치시료 15g(± 0.1g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액을스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% HAc 이들어있는 ACN 15mL 를첨가하고 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트첨가 뚜껑을닫고손으로 1 분간세게흔들어준후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 기기조건 기존분석법 수정분석법 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Solvent Saver Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 유속 : 0.3 또는 0.5 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : A: 5 mm NH 4 OAc, ph 5.0 in 20:80 MeOH/H 2 O B: 5 mm NH 4 OAc, ph 5.0 in ACN 니들세척 : 1:1:1:1 ACN:MeOH:Isopropyl alcohol (IPA):H 2 O w/0.2% FA 이동상변화도 : 유속 시간 (min) % B (ml/min) STOP Post run: 4 min 총주기시간 : 17 min MS 조건 양이온모드 가스온도 : 350 ºC 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi Capillary: 4,000 V ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 에서분석 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 톨루엔 325µL 첨가 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 ACN 상층액 825µL 를취하여다른튜브로옮김 30ºC 에서 N 2 흐름을통과시켜건조 0.1% FA 의 ACN 용액 600µL 로재용해 (Reconstitute) 볼텍스처리및초음파처리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 에서분석 그림 1. 시금치시료를위한 QuEChERS AOAC 추출절차 ( 기존및수정 dispersive SPE, 2mL) 44

45 결과 그림 2. dispersive SPE 기존분석법 (A) 및 dispersive SPE 수정분석법 (B) 으로진행된 50ng/g 첨가시금치시료추출물의 LC/MS/MS 크로마토그램. 피크 ID: 1. Methamidophos, 2. Acephate, 3. Pymetrozine, 4. Carbendazim, 5. Imidacloprid 6. Thiabendazole, 7. Propoxur, 8. Carbaryl, 9. Ethoprophos, 10. Imazalil, 11. Penconazole, 12. Cyprodinil, 13. Kresoxim methyl IS: 내부표준물질, TPP. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for Pigmented Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 45

46 120 1 ml 8 ml Recovery (%) Methamidophos Acephate Pymetrozine Carbendazim Imidacloprid Thiabendazole Propoxur Carbaryl Ethoprophos Imazalil Penconazole Cyprodinil Kresoxim methyl 그림 3. 1mL 의 dispersive SPE 와 8mL dispersive SPE 의회수율및정밀성결과비교 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 46

47 톨루엔과 Graphitized carbon 이들어있는 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한시금치중평면구조농약회수율의최적화 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는색소가다량함유된과일및채소를위한 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용해시금치내농약을분석할때분산고체상추출 (SPE) 단계에서톨루엔의첨가가어떤영향을미치는지를설명하고있습니다. AOAC 수정분석법을통해 8 가지문제농약의회수율에뚜렷한영향을미쳤습니다 (50% 에서 300% 로상승, < 10% RSD). 이분석법은 GC/MS 및 LC/MS/MS 를이용해색소가다량함유된식품의까다로운농약성분을밝히는대안적인추출절차를포함하고있습니다. 기존분석법 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 분석수행 QuEChERS 절차 첫추출 / 분할단계이후 ACN 추출 수정분석법 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 톨루엔 325µL 첨가 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 ACN 상층액 825µL 를취하여다른튜브로옮김 30ºC 에서 N 2 흐름을통과시켜건조 0.1% FA 의 ACN 용액 600µL 로재용해 (Reconstitute) 볼텍스처리및초음파처리 일정량을취하여 LC/MS/MS 또는 GC/MS 분석수행 그림 1. dispersive SPE 절차의기존분석법 ( 톨루엔무첨가 ) 및수정분석법 ( 톨루엔첨가 ) 기기조건 HPLC 조건컬럼 : 유속 : 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 0.3 또는 0.5 ml/min A: 5 mm ammonium acetate, ph 5.0 in 20:80 MeOH/H 2 O B: 5 mm ammonium acetate, ph 5.0 in ACN 니들세척 : 1:1:1:1 ACN/MeOH/IPA/H 2 O w/0.2% FA 이동상변화도 : 시간 (min) % B 유속 (ml/min) STOP Post run: 4 min 총주기시간 : 17 min GC 조건컬럼 : Inlet: Inlet liner: Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC, 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) Splitless Helix double-taper, deactivated ( 부품번호 ) 헬륨 운반가스 : Inlet 압력 : 작동중에는 19.6 psi ( 일정압력모드 ), 백플러시중에는 1.0 psi Inlet 온도 : 250 ºC 주입량 : 1.0 µl Split 배출구퍼지유속 : 30 ml/min at 0.75 min 오븐온도프로그램 : 70 ºC (1 min), 50 ºC/min to 150 ºC (0 min), 6 ºC/min to 200 ºC (0 min), 16 ºC/min to 280 ºC (6 min) Post run: 3 min Capillary Flow Technology: Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) 분석용컬럼및 inlet 백플러시에사용 Aux EPC 가스 : 헬륨가스가 Purged Ultimate Union 통과 Aux EPC 압력 : 작동중에는 4.0 psi, 백플러시중에는 80.0 psi 연결 : Between inlet and Purged Ultimate Union ( 부품번호 G3186B) Restrictor: 65 cm x 0.15 mm, 0.15 µm DB-5ms Ultra Inert 연결 : Purged Ultimate Union과 MSD 사이의연결 47

48 결과 그림 2. dispersive SPE 의수정분석법 ( 톨루엔첨가 ) 과기존분석법 ( 톨루엔무첨가 ) 에서시료를각각 1mL, 8mL 주입했을때의결과비교 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for Pigmented Fruits and Vegetables (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 15 m x 0.25 mm x 0.25 µm ( 부품번호 19091S-431UI) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 48

49 표 1. 톨루엔을첨가한수정 dispersive SPE cleanup 을이용했을때일부농약에끼치는영향 기존분석법 ( 톨루엔무첨가 ) 수정분석법 ( 톨루엔첨가 ) 분석물회수율 RSD (n=6) 회수율 RSD (n=6) 수정분석법의영향 검출방법 Carbendazim Positive LC/MS/MS Thiabendazole Positive LC/MS/MS Pymetrozine Positive LC/MS/MS Cyprodinil Positive LC/MS/MS Chlorthalonil Positive GC/MS Coumaphos Positive GC/MS Dichlorobenzophenone Positive GC/MS Folpet Positive GC/MS Dichlorvos Greatly negative GC/MS o-phenylphenol Slightly negative GC/MS Diazinon Slightly negative GC/MS Chlordane None GC/MS Permethrin None GC/MS Acephate None LC/MS/MS Carbaryl None LC/MS/MS Propoxur None LC/MS/MS 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 49

50 Agilent 1290 Infinity LC 와 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 를이용한 UHPLC/MS/MS 검출로이유식내농약측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 EC Regulation 396/2005에서규정한농약잔류허용기준 (MRL) 이하 ( 과일또는채소에서 10μg/kg) 로존재하는이유식내 40가지농약을추출및 cleanup하기위한 QuEChERS 시료전처리방법을설명합니다. UHPLC와 triple quadrupole MS를이용한이유식시료내극미량수준농약에대한정성분석과정량분석방법에대해설명할것입니다. 이분석법및추출작업은재현성, 직선성, 감도등의관점에서평가되었으며 dispersive SPE cleanup의영향에대한연구도추가로진행되었습니다. 검출한계는 500 ~ 10ng/kg(ppt) 로, 이는 EU에서규정한 MRL인 10μg/kg(ppb) 보다훨씬낮은수치입니다. QuEChERS 절차 시료 15g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 100μL TPP 용액첨가 필요한경우스파이킹용액첨가 30 초동안볼텍스처리 아세토니트릴에 1% v/v 아세트산 15mL 를첨가한후 Bond Elut AOAC 추출염키트 ( 부품번호 ) 첨가 기기조건 분석법파라미터 컬럼 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus RRHD C18, 2.1 x 150 mm, 1.8 µm 이동상 : A: 0.05% (w/v) Ammonium formate % (v/v) Formic acid in water B: Methanol 유속 : 0.5 ml/min 이동상변화도 : 시간 (min) % B 0 to 5 10 to 65 5 to to to to 온도 : 45 C 주입 : 2 μl, 니들세척 (flushport, 5 s, water/methanol 1/1) 검출 : MS/MS 이온화 : 전자스프레이, 양이온화 Jet Stream Proteomics 건조가스온도 : 250 C 건조가스유속 : 10 L/min Nebulizer 압력 : 30 psig Sheath 가스온도 : 340 C Sheath 가스유속 : 11 L/min 캐필러리전압 : 4500 V 노즐전압 : 500 V 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 1mL 의시료를시린지필터 (pore 크기 0.2μm, 재생셀룰로오스, 부품번호 ) 로필터링한뒤 SPE 없이직접분석하거나추가 cleanup 수행 원심분리된추출액 8mL 를지방질시료용 15mL Bond Elut AOAC dispersive SPE 튜브로옮김 ( 부품번호 ) 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 1mL 의시료를시린지필터 (pore 크기 0.2μm, 재생셀룰로이드, 부품번호 ) 로필터링한뒤직접분석 그림 1. 이유식내잔류농약성분분석을위한 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출절차 수집 Dynamic MRM 응용자료의표 1 참조 Delta EMV: 50 주기시간 : 200 ms 50

51 결과 10 1 * Quantifier > *5.972 Qualifier > Counts Counts Acquisition time (min) Acquisition time (min) Relative responses Calibration R 2 = _ Concentration (ppb) 그림 2. LOD(0.5ppb 표준용액 ) 에서 2 회 transition 의이온유동을나타내는크로마토그램및이유식내 fluazifop 에대한검량선 51

52 ,5 1 0, Counts vs. acquisition time (min) 그림 3. 1Ppb 농도로스파이킹된이유식시료 2 추출물의 MRM 결과 (quantifier transition 만표시됨 ). 시료에 dispersive SPE 처리를수행하지않으며내부표준물질의 transition 은여기에표시되지않습니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut AOAC Dispersive SPE Tube for Fatty Samples ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Eclipse Plus RRHD C18 Column, 2.1 x 150 mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 52

53 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트및 HPLC-FLD 를이용한닭근육내설폰아미드잔여물측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 fluorescamine을이용한컬럼전유도체화후 HPLC-FLD로닭근육내의설폰아미드약물을검출하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 회수율은 76.8 ~ 95.2% 이며, HPLC-Fluorescence detection(fld) 분석법은 9종의설폰아미드검출을위한방법으로개발및인증되었습니다. 이분석은 binary 펌프가설치되고형광검출기 (FLD) 가 λ ex = 405nm, λ em = 495nm로설정된 Agilent 1200 Infinity 시리즈기기를이용해수행되었습니다. 화합물분리는 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 컬럼에서완수되었으며데이터처리는 HPLC 2D ChemStation Software에서진행되었습니다. QuEChERS 절차 균질화된닭근육 2g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에넣고 1,000μL 20μg/mL IS, 1,000μL 10μg/mL 스파이킹용액으로시료를스파이킹한후 1 분간세게흔들어줍니다 물 8mL 를첨가하고 30 초동안세게흔들어줍니다 1% HOAc 를함유하는 ACN 10mL 를첨가하고 1 분간세게흔들어줍니다 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출염키트를첨가하고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, mm, 3.5 μm 유속 : 1 ml/min 컬럼온도 : 25 C 주입량 : 5 μl 이동상 : A: 0.05 M Sodium acetate ph 4.5 B: MeOH 이동상변화도 : 시간 (min) % B 검출 : Ex = 405 nm Em = 495 nm 분주 (aliquot) 시료 6mL 를 Bond Elut QuEChERS dispersive SPE 15 ml 튜브로옮기고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물 4mL 를다른튜브로옮기고 N 2 를사용해 35 C 에서건조 추출액 200μL 를 600μL 0.05M NaOAc ph 3.5 로재용해함, 0.02% fluorescamine 200μL 추가하고 1 분간흔들어준뒤, 60min incubation HPLC-FLD 분석을위한시료준비완료 그림 1. 닭근육내설폰아미드분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 53

54 0.155 결과 Intensity (LU) Intensity (LU) Time (min) Time (min) 그림 2. 닭근육추출물바탕시료의크로마토그램 LU LU Time (min) 그림 3. 50ng/g 농도로스파이킹된닭근육추출물크로마토그램 : 1. Sulfadiazine ; 2. Sulfathiazole; 3. Sulfapyridine (IS); 4. Sulfamerazine; 5. Sulfamethazine; Sulfamethizole; 7. Sulfamethoxypyridazine; 8. Sulfachloropyridazine; 9. Sulfamethoxazole; 10. Sulfadimethoxine Time (min) 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 Column, 4.6 x 75 mm, 3.5 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 54

55 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트와 HPLC-FLD 를이용한어류내다환방향족탄화수소분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는생선살에함유된 16가지다환방향족탄화수소 (PAH) 의검출을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리법을설명합니다. 3개첨가농도에서의분석물회수율범위는 83.4 ~ 101%, 상대표준편차의범위는 0.6 ~ 1.9% 입니다. 이분석은 binary 펌프와형광검출기 (FLD) 가설치된 Agilent 1200 Infinity 시리즈기기를이용해수행되었으며, 데이터는 HPLC 2D ChemStation 소프트웨어에서처리되었습니다. 이분석법은탁월한정밀성과높은회수율을달성하였으며, 실제 PAH 시료의품질관리테스트에매우적합합니다. QuEChERS 절차 균질화된어류시료 5g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 2,000μL 스파이킹용액을시료에스파이킹하고 1 분간세게흔들어줍니다 8mL ACN 을첨가하고 1 분간세게흔들어줍니다 1% HOAc 를함유하는 ACN 10mL 를첨가하고 1 분간세게흔들어줍니다 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출염키트를첨가하고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Eclipse PAH C18, mm, 1.8 μm 유속 : 0.8 ml/min 컬럼온도 : 18 C 주입량 : 5 μl 이동상 : A: Deionized H 2 O B: CH 3 CN 이동상변화도 : 시간 (min) % B 검출 : 230nm(Acy) 의 UV, 변화하는형광 들뜸 (Ex) 파장및방출 (Em) 파장 파장 : Ex/Em 시간 (min) 파장 (nm) 검출된 PAH 0-5( 짙은푸른색 ) 260/352 Nap, Ace, Flu, Phe, Chr 0-14( 적색 ) 260/420 Ant, Pyr, BeP, DahA, BghiP 0-14( 옅은푸른색 ) 260/460 Fln, 1,2-BaA,BeA, BkF, InP 분주 (aliquot) 시료 6mL 를 Bond Elut QuEChERS dispersive SPE 15 ml 튜브로옮기고 1 분간흔들어준뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 0.45µm PVDF 시린지필터로필터링 추출물 1mL 를자동시료주입기바이알로옮김 HPLC-FLD 분석을위한시료준비완료 그림 1. 어류내 PAH 분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 55

56 결과 0.4 LU Time (min) 그림 2. 어류추출물바탕시료의크로마토그램. 크로마토그래피조건은응용자료의표 1 에서확인가능합니다. Baseline 크로마토그램의들뜸 / 방출파장은 260-nm/352-nm 을사용하였으며기타들뜸 / 방출파장조건에서는간섭이나타나지않았습니다 LU Time (min) 그림 3. 다음을함유하는스파이킹된어류시료의중첩 HPLC - FLD 크로마토그램 : 1. Nap; 2. Acy; 3. Ace; 4. Flu; 5. Phe; 6. Ant; 7. Fln; 8. Pyr; 9. BaA; 10. Chr; 11. BeP; 12. BeA; 13. BkF; 14. DahA; 15. BghiP; 16. InP. 이시료의스파이킹농도는레벨 1 입니다 ( 응용자료의표 3 참조 ). 크로마토그램의푸른색부분의들뜸 / 방출파장은 260-nm/352-nm; 붉은색부분의들뜸 / 방출파장은 260-nm/420-nm; 옅은푸른색부분의들뜸 / 방출파장은 260-nm/440-nm 입니다. Acenaphthylene 의경우, 230-nm 의자외선검출이사용됩니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut AOAC Fatty Dispersive SPE Kit (15mL) ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Eclipse PAH C18 Column, mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 56

57 Agilent Bond Elut QuEChERS 및 LC/MS/MS 를이용한감자튀김내아크릴아미드분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는검출기법으로 LC/MS/MS 를, 내부표준물질로 13 C 3 -acrylamide 를이용해감자튀김내아크릴아미드를분석하는 QuEChERS 아크릴아미드추출단계와 AOAC dspe cleanup 시료전처리법을설명합니다. 아크릴아미드의회수율은 97 ~ 116% 입니다. 이분석에는 Agilent 1200 Infinity LC 시리즈기기와 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 시스템이사용되었습니다. 아크릴아미드추출및 cleanup 을위한 Agilent Bond Elut QuEChERS 에기반하여개발한빠르고간편한 LC/MS/MS 분석법은높은추출률과탁월한정밀성을제공합니다. QuEChERS 절차 감자튀김 1g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 500μL 1,000ng/mL 13 C 3 -acrylamide 를시료에스파이킹함 헥산 5mL 첨가후볼텍스처리 물 10mL, ACN 10mL, Bond Elut QuEChERS 아크릴아미드추출염키트를첨가하고 1 분간세게흔들어줍니다 5,000rpm 에서 5 분간원심분리 기기조건 LC/MS/MS 조건 컬럼 : Reversed C18, mm, 3 μm 컬럼온도 : 30 C 등용매모드 (%B): 유속 : 주입량 : 분석시간 : 2.5% Methanol/97.5% of 0.1% Formic acid 0.2 ml/min 10 μl 7 min Post run 시간 : 3 min 질량분석기 : Positive electrospray ionization mode with jet stream technology 캐필러리전압 : 4,000 노즐전압 : 500 V Sheath 가스온도 : 325 C at 5 L/min 건조가스온도 : 350 C at 11 L/min 헥산층폐기 ACN 상층액 1mL 를취하여 50mg PSA 및 150mg MgSO 4 로충진된 2mL 마이크로원심분리바이알에첨가 30 초동안볼텍스처리 5,000rpm 에서 1 분간원심분리 추출물 500μL 를자동시료주입기바이알로옮김 LC/MS/MS 로분석 그림 1. 감자튀김내아크릴아미드분석을위한 QuEChERS 시료전처리절차 57

58 결과 MRM transitions: TIC 12C-AA C-AA C-AA C-AA C A i i i Ti ( i ) 그림 2. 10ng/mL 아크릴아미드표준품및 500ng/mL 내부표준물질 13 C 3 -acrylamide의크로마토그램 표 1. 스파이킹된감자튀김시료내아크릴아미드및 1:1 물 : 아세토니트릴의회수율및 RSD(n=3) 매트릭스 아크릴아미드스파이크농도 (ng/ml) % 회수율 (n=3) %RSD (n=3) 1:1 물 :ACN :1 물 :ACN 감자튀김 (blank로보정후 ) 5.04 감자튀김 (blank로보정후 ) 2.55 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction Kit for Acrylamides ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut AOAC Dispersive SPE Kit, 2 ml ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 58

59 Agilent J&W DB-35ms 및 DB-XLB GC 컬럼을이용한어류조직내 PCB 의 GC/μECD 분석및확인 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는어류조직내 19 종 PCB(polychlorinated biphenyl) 를추출및 cleanup 하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 스파이크회수율범위는 72 ~ 116% 입니다. dual μecd 검출기와 dual capillary GC 컬럼이장착된 Agilent 7890A GC 시스템이사용되었으므로, 한번의주입으로분석물을동시에식별및확인할수있습니다. 여기에사용된 GC 는또한 unpurged two-way splitter capillary flow technology(cft) 장비가장착되어있습니다. QuEChERS 절차 어류시료 3g(± 0.1g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 대용표준품 /IS 용액을첨가하고필요한경우 QC 스파이크용액을추가한후 1 분간볼텍스처리 시료에 12mL 탈이온수와 2 개의세라믹균질기를첨가하고 ( 부품번호 ) 1 분간볼텍스처리 1% 의 HAc 를포함한 ACN 15mL 첨가 기기조건 HPLC 조건컬럼 1: 컬럼 2: GC: Sampler: CFT 장비 : 운반가스 : 주입 : Agilent J&W DB-35 ms, 30 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-XLB, 30 m 0.25 mm, 0.50 μm ( 부품번호 ) dual μecd 검출기가장착된 Agilent 7890A Agilent 7873B 5.0 μl 시린지 ( 부품번호 ) 2-way unpurged splitter capillary flow technology ( 부품번호 G3181B) 수소 85 cm/s, 일정유속모드 3.5 ml/min 1.0 μl splitless; 250 C, Purge flow 50 ml/min at 0.3 min, Gas saver 50 ml/min at 2 min 오븐 : 110 C (0.1 min), 25 C/min to 200 C (0.5 min), 10 C/min to 240 C (0.5 min), 30 C/min to 325 C (1.5 min) 주입 : 1 μl, 250 C splitless, purge 50 ml/min at 0.3 min, gas saver 50 ml/min on at 2 min Dual μecd: 350 C, N 2 makeup; constant column + makeup = 30 ml/min 1 분간볼텍스처리 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출염키트첨가 ( 부품번호 ) 뚜껑을닫은후 Geno/Grinder 에서 1,500rpm 으로 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를취하여 Bond Elut Bond Elut AOAC fatty dispersive SPE 2mL 튜브 ( 부품번호 ) 로, 또는 8mL 를취하여 Bond Elut AOAC fatty dispersive SPE 15 ml 튜브 ( 부품번호 ) 로옮김 1 분간볼텍스처리, 2mL 튜브의경우 13,000rmp 으로 2 분간원심분리, 15mL 튜브의경우 4,000rpm 으로 5 분간원심분리 추출물 500μL 를자동시료주입기바이알로옮김 유동경로 (Flow Path) 소모품 바이알 : Amber screw top glass vials ( 부품번호 ) 바이알캡 : Blue screw cap ( 부품번호 ) 바이알삽입튜브 (Insert): 100 μl glass/polymer feet ( 부품번호 ) 시린지 : 5 μl ( 부품번호 ) Septum: Advanced Green ( 부품번호 ) Inlet seal: Gold plated inlet seal ( 부품번호 ) Inlet liners: Deactivated dual-taper direct connect ( 부품번호 G ) Ferrules: 0.4 mm id short; 85/15 Vespel/graphite ( 부품번호 ) CFT 피팅 : Internal nut ( 부품번호 G ) CFT ferrules: SilTite ferrules, 0.25 mm id ( 부품번호 ) 20x Magnifier: 20x Magnifier loop ( 부품번호 ) GC μecd 로분석 그림 1. 어류분석을위한수정된 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출절차 59

60 결과 1. IUPAC 1 2. Trichloro-m-xylene (SS) 3. IUPAC 5 4. IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC IUPAC Decachlorobiphenyl (SS) 그림 2. Agilent J&W DB-35ms 및 DB-XLB GC 컬럼으로분석된 50ng/mL 첨가어류추출물의 GC/µECD 크로마토그램. 크로마토그래피조건은응용자료의표 1 에서확인가능합니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Fatty Sample Dispersive SPE, (2mL 튜브, 부품번호 ) 또는 (15mL 튜브, 부품번호 ) Agilent J&W DB-35ms Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-XLB Column, 30 m x 0.25 mm, 0.50 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 60

61 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트와 Universal Dispersive SPE 를이용한상추와사과시료내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는양상추와사과시료내잔류물 GC/MS 분석을위해 AOAC buffered 추출법과 universal dispersive SPE 분석법으로시료를전처리하는방법을설명합니다. 이분석에서는다양한종 (class) 의 26 가지농약을연구하였으며, Agilent 7890 GC 시스템과 Agilent 5975C 시리즈 GC/MSD 의 selective ion monitoring(sim) 모드를이용하여수행되었습니다. 모든화합물에서간섭물질이검출되지않았으며탁월한직선성을나타냈습니다. QuEChERS 절차 시료 15g 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 및스파이킹용액을시료에스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 ACN(1% 아세트산 ) 15mL 를첨가하고 30 초동안세게흔들어줍니다 AOAC buffered 추출염키트를첨가하고 1 분간흔들어준뒤 3,000rpm 에서 2 분간원심분리 기기조건 GC 조건컬럼 : 주입소스 : Inlet: 운반가스 : 오븐온도프로그램 : 주입량 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) Agilent 7683 Automatic Liquid Sampler with 100 sample tray Splitless 헬륨, 일정유속모드 70 C (2 min), 25 C/min to 150 C (0 min), 3 C/min to 200 C (0 min), 8 C/min to 280 C (7 min) 1 μl ACN 층의분주 (aliquot) 시료 1mL 를 universal dispersive SPE 튜브 (MgSO 4, PSA, C18, GCB 포함 ) 로옮기고 30 초동안볼텍스처리후 2 분간원심분리 추출물 0.5mL 를자동시료주입기바이알로옮김 그림 1. 양상추와사과내농약분석을위한 QuEChERS 시료전처리절차 MS 조건 Tune file: Atune.u 모드 : SIM Source, quad, transfer line 온도 : 각각 230 C, 150 C, 280 C 용매지연시간 : 4 min Multiplier 전압 : Autotune 전압 61

62 결과 1. Dichlorvos 2. α-bhc 3. Hexachlorobenzene 4. β-bhc 5. γ-hch 6. Disulfoton 7. Chlorpyrifos methyl 8. Methyl parathion 9. Heptachlor 10. Fenitrothion 11. Aldrin 12. Malathion 13. Chlorpyriphos 14. Parathion 15. Procymidone 16. Endosulfan I 17. Dieldrin 18. 4,4 -DDE 19. Endosulfan II 20. 4,4 -DDD 21. Endosulfan sulfate 22. 4,4'-DDT IS *TPP 23. Bromopropylate 24. γ-cyhalothrin 25. Fenvalerate 26. Deltamethrin 그림 2. (a) 양상추추출물바탕시료및 (b) QuEChERS 시료전처리를거친스파이킹양상추추출물의 GC/MS 분석결과 1. Dichlorvos 2. α-bhc 3. Hexachlorobenzene 4. β-bhc 5. γ-hch 6. Disulfoton 7. Chlorpyrifos methyl 8. Methyl parathion 9. Heptachlor 10. Fenitrothion 11. Aldrin 12. Malathion 13. Chlorpyriphos 14. Parathion 15. Procymidone 16. Endosulfan I 17. Dieldrin 18. 4,4 -DDE 19. Endosulfan II 20. 4,4 -DDD 21. Endosulfan sulfate 22. 4,4'-DDT IS *TPP 23. Bromopropylate 24. γ-cyhalothrin 25. Fenvalerate 26. Deltamethrin 그림 3. (a) 사과추출물바탕시료와 (b) QuEChERS 시료전처리를거친스파이킹사과추출물의 GC/MS 분석결과 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive Kit for All Food Types ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 62

63 Agilent J&W DB-35ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한 GC/MS/FPD 검출로사과시료내유기인계농약분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는사과추출물내낮은 ppm 농도및극미량수준의유기인계 (OP) 농약잔류물을분석하는빠르고효과적인방법에대해설명합니다. 중간극성의 ultra-inert GC 컬럼 ( 백플러싱기능의비활성경로 ), QuEChERS 시료 cleanup 을이용해극성이강한 OP 농약잔류물에서도좋은결과를얻을수있습니다. 이실험에서는 flame photometric detector 가내장된 Agilent 5975C MSD, Agilent 7890 GC, Agilent 7683B Automatic Liquid Sampler 가사용되었습니다. QuEChERS 절차 균질화된시료 15g(± 0.1g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 대용표준품 /IS 용액을첨가하고필요한경우 QC 스파이크용액을추가한후 1 분간볼텍스처리 시료에 15mL ACN 과 2 개의세라믹균질기첨가 ( 부품번호 ) 기기조건 GC 조건컬럼 : Agilent J&W DB-35ms Ultra Inert, 20 m 0.18 mm, 0.18 μm ( 부품번호 UI) GC/MSD: Agilent 7890 GC/Agilent 5975C 시리즈 GC/MSD Sampler: Agilent 7683B Automatic Liquid Sampler, 5.0 μl 시린지 ( 부품번호 ) CFT 장비 : Purged 2-way splitter ( 부품번호 G3180B) 분할비 3:1 MSD:FPD MSD restrictor: 1.2 m 0.15 mm id deactivated fused silica tubing FPD restrictor: 1.4 m 0.15 mm id deactivated fused silica tubing PCM 1: 3.8 psi, 일정압력모드 Inlet: 1 μl splitless; 250 C, purge flow 60 ml/min at 0.25 min, gas saver on at 2 min 20 ml/min 운반가스 : 헬륨, 95 C에서일정압력 43.5psi 유지오븐 : 95 C (1.3 min), 15 C/min to 125 C, 5 C/min to 165 C, 2.5 C/min to 195 C, 20 C/min to 280 C (3.75 min) Postrun backflush: 5 min at 280 C, PCM 1 pressure 70 psi during backflush, 2 psi inlet pressure during backflush MSD: 310 C transfer line, 310 C source, 150 C quad 1 분간볼텍스처리 Agilent Bond Elut QuEChERS 추출염키트첨가 ( 부품번호 ) Geno/Grinder 에서 1,500rpm 으로 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 8mL 를일반과일및채소용 AOAC dispersive SPE 15 ml 튜브로옮김 ( 부품번호 ) 1 분간볼텍스처리뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물을자동시료주입기바이알로옮김 유동경로 (Flow Path) 소모품 바이알 : Amber crimp top glass vials ( 부품번호 ) 바이알캡 : Crimp caps ( 부품번호 ) 바이알삽입튜브 (Insert): 250 μl glass/polymer feet ( 부품번호 ) 시린지 : 5 μl ( 부품번호 ) Septum: Advanced Green ( 부품번호 ) Inlet liner: Deactivated dual-taper helix liner ( 부품번호 ) Ferrules: 0.4 mm id short; 85/15 Vespel/graphite ( 부품번호 ) PCT 피팅 : Internal nut ( 부품번호 G ) PCT ferrules: SilTite ferrules, 0.25 mm id ( 부품번호 ) 20x Magnifier: 20x Magnifier loop ( 부품번호 ) GC/MS/FPD 로분석 그림 1. 사과시료분석을위한 Agilent QuEChERS 추출절차 63

64 결과 1. Oxydemeton-methyl 2. Methamidophos 3. Mevinphos 4. Acephate 그림 2. Agilent J&W DB-35ms Ultra Inert 캐필러리컬럼에서분석된보다까다로운극성농약분석의 GC/MS/SIM 및 FPD 크로마토그램의확대된부분. 크로마토그래피조건은응용자료의표 1 에서확인가능합니다. 용출분할비는 MSD:FPD = 3:1 입니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction Salt Packet ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS General Fruits and Vegetables Dispersive SPE, 15mL Tube ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-35ms Ultra Inert Column, 20 m x 0.18 mm, 0.18 μm ( 부품번호 UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 64

65 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로쌀내잔류농약성분분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는쌀내 12 가지다양한종 (class) 의잔류농약성분을추출및 cleanup 하기위한효과적인 QuEChERS AOAC 시료전처리방법을설명합니다. 이분석은 Agilent 1200 Infinity 시리즈기기, 전기분무이온화기능을갖춘 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 를이용해수행되었습니다. 평균회수율범위는 76 ~ 108%( 평균 97.8%) 입니다. QuEChERS 절차 균질화된시료 5g(± 0.1g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 control blank 를제외한모든시료에 50µL IS 스파이킹용액 (10µg/mL TPP) 을첨가해 100ng/g 의농도를만듭니다 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리후, 10mL 의물을각튜브에첨가 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리후, 각튜브에세라믹균질기첨가 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent Poroshell 120 EC-C18, mm, 2.7 μm ( 부품번호 ) 유속 : 0.4 ml/min 컬럼온도 : 30 C 주입량 : 5 μl 이동상 : A: 0.1% FA in water B: 0.1% FA in ACN 이동상변화도 : 시간 (min) %B Post run: 2 min 총주기시간 : 11 min MS 조건양이온모드가스온도 : 350 C 가스유속 : 10 L/min Nebulizer: 40 psi Capillary: 3,500 V 각튜브에 15mL ACN(0.1% AA) 첨가 뚜껑을닫고 1 분간흔들어준후 Bond Elut 추출염키트첨가 뚜껑을닫고 20 초동안세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 층의분주 (aliquot) 시료 8mL 를 Bond Elut AOAC dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리를한후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물 1mL 를 10mL 튜브로옮긴뒤 40 C 이하질소로건조 ACN: 물 (1:9) 용액을이용해잔류물을녹여 1mL 용액을얻습니다 0.45µm 멤브레인을이용해필터링한뒤 LC/MS/MS 로분석 그림 1. 쌀시료분석을위한 Agilent QuEChERS 추출절차 65

66 결과 그림 2. AOAC 분석법으로처리된 10ng/g 첨가시료의 MRM 크로마토그램. 피크 ID: 1. Pymetrozine, 2. Acephate, 3. Carbendazim, 4. Thiabendazole, 5. Imidacloprid, 6. Imazalil, 7. Propoxur, 8. Carbaryl, 9. Cyprodinil, 10. Ethoprophos, 11. Penconazole, 12. Kresoxim-methyl, IS: TPP. 120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% Pymetrozine Acephate Carbendazim Thiabendazole Imidacloprid Imazalil Propoxur Carbaryl Cyprodinil Ethoprophos Penconazole Kresoxim-methyl 그림 3. 쌀내 12 가지농약성분에대한회수율및정밀성결과 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kits for Fruits and Vegetables with Fats and Waxes ( 부품번호 ) Agilent ceramic homogenizers, 50 ml tubes ( 부품번호 ) Agilent Poroshell 120 EC-C18 Column, mm, 2.7 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 66

67 GC/MS/MS 를이용하여농산물및곡류내극미량수준농약에대해재현성있는정량분석수행 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는배, 오렌지, 딸기, 밀가루, 고추, 시금치등을포함한 6 가지유형의농산물및곡류내 33 가지대표적농약성분추출을위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 이분석은 Pesticides and Environmental Pollutants MRM 데이터베이스가포함된 Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/MS/MS Analyzer 와 Agilent 7890 GC 를이용해수행되었습니다. QuEChERS 절차 시료 15g(± 0.1g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액을스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% HAc 이들어있는 ACN 15mL 를첨가하고 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출키트를첨가 뚜껑을닫고손으로 1 분간세게흔들어준후 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 추출물 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 30 초동안볼텍스처리 13,000rpm 에서 2 분간원심분리 일정량을취하여 GC/MS/MS 분석수행 그림 1. 농산물및곡류를위한 QuEChERS AOAC 추출절차 기기조건 GC 조건분석컬럼 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) 컬럼연결 : Between inlet and Purged Ultimate Union ( 부품번호 G ) GC: Agilent 7890 시리즈 GC Autosampler: Agilent 7693 Autosampler 및시료트레이 5μL 시린지 ( 부품번호 ), 1μL 주입량주입후용매 A (acetone) 세척 : 3 주입후용액 B (acetonitrile) 세척 : 3 시료펌프 : 3 운반가스 : 헬륨, 일정압력모드 Inlet: Multimode Inlet (MMI) Inlet 온도 : 280 C 주입모드 : Pulsed splitless 모드주입펄스압력 : 36 psi until 1 min Split 배출구퍼지유속 : 50 ml/min at 1 min Inlet 압력 : 작동중에는 psi (RT locked), 백플러시중에는 1.0 psi 머무름시간 (RT) 고정 : Chlorpyrifos methyl at min 오븐프로파일 : 100 C for 2 min, to 150 C at 50 C/min, to 200 C at 6 C/min, to 280 C at 16 C/min and hold for 6 min Post run: 2 min at 280 C Capillary Flow Technology: Purged Ultimate Union ( 부품번호 G ) 분석컬럼및 inlet의백플러시에사용 Aux EPC 가스 : 헬륨가스가 Purged Ultimate Union 통과 Bleed line: in od in id 100 cm, 316 SS 튜브, 오븐위에놓임 Aux 압력 : 작동중에는 4 psi, 백플러시중에는 75 psi Restrictor: Inert fused silica tubing, 0.65 m 0.15 mm ( 부품번호 ) Restrictor 연결 : Purged Ultimate Union과 MS 사이연결 MS: Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/MS 모드 : MRM 데이터베이스 : Agilent Pesticides and Environmental Pollutants 데이터베이스 ( 부품번호 G9250AA) Transfer line 온도 : 280 C 소스온도 : 300 C Quad 온도 : Q1 및 Q2 = 150 C 용매지연시간 : 2.3 min 충돌가스유속 : Helium quench gas at 2.35 ml/min, N 2 collision gas at 1.5 ml/min MS 분리능 : MS1 및 MS2 = 1.2 amu ( 낮은분리능또는광범위한설정 ) 67

68 결과 Orange matrix blank Counts versus acquisition time (min) ng/ml spiked in orange matrix Counts versus acquisition time (min) 그림 2. 오렌지매트릭스바탕시료및 1ng/mL 농약을스파이킹한오렌지매트릭스의 GC/QQQ MRM 크로마토그램. 피크 ID 에관한정보는응용자료의표 3 을참조하실수있습니다. 오렌지매트릭스내의 Deltamethrin(33) 은 1ng/mL 에서낮은반응성으로인해검출되지않았습니다. 68

69 Pear Orange Strawberry Flour Pepper Spinach Rsponse Factors RSD (%) of 10 injections 그림 3. 여러매트릭스내 10 회주입의재현성 ( 반응계수 % RSD) 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS General Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 부품번호 UI) Agilent Pesticides and Environmental Pollutants MRM Database ( 부품번호 G9250AA) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 69

70 GC/MS 와 LC/MS 분석법의조합으로주스내농약의종합적분석수행 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 GC/MS, GC/MS/MS, LC/MS/MS의 3가지질량분석법으로채소주스내 39가지잔류농약성분을효과적이고종합적으로분석하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. GC/MS 실험에서는 triple axis 검출기가장착되고전자이온화 (EI) 모드에서작업하는 Agilent 5975C 시리즈 GC/MS inert XL MSD와 Agilent 7890A 시리즈 GC가사용되었습니다. GC/MS/MS 실험에서는 EI 모드에서작업하는 Agilent 7000B Triple Quadrupole GC/MS와 Agilent 7890A 시리즈 GC가사용되었습니다. LC/MS/MS 실험은 Jet Stream technology가적용된 Agilent 6460 시리즈 Triple Quadrupole LC/MS 시스템과 Agilent 1200 Infinity 시리즈기기를이용해수행되었습니다. 이종합실험을통해보다많은유형의농약을검출할수있어채소주스내 39가지농약의스크리닝과확인을확신있게수행할수있습니다. 주의 : 아래절차는 QuEChERS 추출및 dspe cleanup 단계를이용한음료추출물의일반적분석법을나타냅니다. QuEChERS 절차 채소주스 15g(± 0.05g) 을빈 50mL 원심분리기용튜브에투입 1% 의아세트산 15mL 를아세토니트릴및내부표준물질에첨가하고뚜껑을닫은뒤 1 분간강하게섞어줍니다 AOAC Buffered 추출염키트 ( 부품번호 ) 의내용물을첨가하고뚜껑을닫은뒤 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 1mL 의상층액을 2mL 의 dspe 튜브 ( 부품번호 ) 로옮기고뚜껑을닫은뒤세게흔들어섞거나 1 분간볼텍스처리합니다 GC/MS 조건 GC 조건컬럼 : Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) 주입량 : 1 μl 주입모드 : Cold splitless using a Multimode Inlet Inlet 온도프로그램 : 60 C (0.35 min hold); 900 C/min to 280 C (15 min hold); 900 C/min at 300 C. 오븐프로그램 : 스캔모드 70 C for 1 min 70 C to 150 C at 50 C/min 150 C to 200 C at 6 C/min 200 C to 280 C at 16 C/min, 5 min hold 4 min added on to the run at 290 C for column backflush SIM 모드 60 C for 1.5 min 60 C to 150 C at 50 C/min 150 C to 240 C at 8 C/min 240 C to 280 C at 50 C/min, 2.5 min hold 280 C to 290 C at 100 C/min, 2.05 min hold 4 min added on to the run at 290 C for column backflush SIM 유속 : 1 ml/min, 일정유속모드 스캔모드하의초기유속 : 머무름시간 (RT) 고정 : Restrictor: 2.7 ml/min (nominal, 일정압력모드 ) 스캔모드에서 Chlorpyrifos-methyl 8.298min 에고정 0.7 m x 0.15 mm deactivated, ( 부품번호 ) Transfer line 온도 : 280 C 백플러시설정 : Multimode Inlet과 Purged Ultimate Union 사이에는분석컬럼이연결되어어있고 Purged Ultimate Union과 MSD 사이에는 0.7m restrictor가연결되어있으며 Purged Ultimate Union의압력은 aux EPC 모듈을통해 4psi로설정되어있습니다. MSD 조건스캔모드 : 스캔및 SIM 모드별도로실행모드 : 전자이온화 (EI) 모드소스온도 : 300 C Quadrupole 온도 : 200 C 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 상층액 200µL 를취하여 GC/MS, GC/MS/MS 또는 LC/MS/MS 기기로분석 그림 1. Agilent QuEChERS 추출절차. 주의 : 이절차는 QuEChERS 추출및 dispersive SPE cleanup 단계를이용한음료추출물의일반적분석법을나타냅니다. 70

71 GC/MS/MS 조건 GC 조건 컬럼 : 2개의 Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) Purged Ultimate Union으로컬럼연결주입량 : 1 μl 주입모드 : Cold splitless using a Multimode Inlet Inlet 온도프로그램 : 60 C (0.35 min hold); 600 C/min to 270 C 오븐프로그램 : 60 C for 1 min 60 C to 170 C at 40 C/min 170 C to 310 C at 10 C/min, 1.25 min hold 유속 : ml/min ( 일정유속모드 ) 용매지연시간 : 2.3 min 유속모드 : 일정유속모드, chlorpyrifos methyl 머무름시간은 9.143min으로고정 Transfer line 온도 : 300 C 분석시간 : 19 min 백플러시설정 : A Purged Ultimate Union(PUU) 으로 2개의 15m 분석컬럼을연결합니다. 컬럼 1은실행막바지에 310 C GC 오븐에서백플러싱을 4분간수행하며, inlet 압력은 1psi, PUU 압력은 60psi로고정됩니다. Triple Quadrupole MS 조건모드 : 전자이온화 (EI) 모드, MRM 소스온도 : 300 C Quadrupole 온도 : 둘다 180 C LC/MS/MS 조건 LC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) 컬럼온도 : 40 C 주입량 : 5 μl 이동상 : A: 0.1% Formic acid in H 2 O B: 0.1% Formic acid in acetonitrile 분석시간 : 15 min 유속 : 0.3 ml/min 이동상변화도 : Initial 5% B; 10 min gradient to 95% B, then step to 100% B for 5 min Triple Quadrupole MS 조건 모드 : ESI, positive, MRM Sheath 가스 : 350 C, 11 L/min 건조가스유속 : 11 L/min Nebulizer 압력 : 40 psi 캐필러리전압 : 4,000 V 노즐전압 : 1,000 V 71

72 결과 A B Counts Counts Acquisition time (min) Acquisition time (min) 그림 2. GC/MS/MS( 그림 2A) 와 LC/MS/MS( 그림 2B) 분석법으로채소주스혼합매트릭스내 10ppb(ng/mL) 농약성분을분석하여얻은 MRM transitions 크로마토그램 ( 중첩 ) 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for Fruits and Vegetables ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 Column, 2.1 x 100 mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 72

73 기타식품분석법 Agilent Bond Elut QuEChERS 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로소간내퀴놀론계항생제측정 ( 발행물 EN) 소개 소간내 11 가지퀴놀론계항생제를측정하기위한분석법은다음과같습니다. Agilent Bond Elut QuEChERS 키트로소간을처리하여분석물을추출및 cleanup 합니다 Bond Elut EN 추출키트와 5% 포름산 (FA) 아세토니트릴용액을이용해분석물을추출합니다 Bond Elut dispersive SPE 키트 ( 부품번호 , 25mg C18 및 150mg MgSO 4 ) 를이용해 Cleanup 을수행합니다 추출된시료는 LC/MS/MS 로분석합니다 정량한계 (LOQ) 는 5.0ng/g 입니다 검량선은 5.0 ~ 400ng/g 측정범위에서직선성을띠는것으로나타났습니다 미리첨가된시료의회수율범위는 62.0 ~ 113.1%, RSD(n=6) 값은 2.2 ~ 13.4% 입니다 73

74 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 유속 : 0.3 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : A: 5 mm Ammonium acetate in H 2 O, ph 3.0 B: 1:1 Methanol:acetonitrile Post time: 4 min 이동상변화도 : 유속 시간 (min) % B (ml/min) STOP MS 조건 극성 : Positive 가스온도 : 325 ºC 가스유속 : 8 L/min Nebulizer: 50 psi Capillary: 4,000 V QuEChERS 절차 균질화된간시료 2g(± 0.05g) 을 50 ml 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액 50µL 를스파이킹한후 30 초동안볼텍스처리 30mM KH 2 PO 4, ph 7.0 완충용액 8mL 를추가하고볼텍스처리 5% FA 를함유하는 ACN 10mL 를첨가하고 30 초동안세게흔들어줍니다 Bond Elut EN QuEChERS 추출키트를더하고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를 Bond Elut QuEChERS dispersive SPE 2mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리하고마이크로원심분리기에서 13,000rpm 으로 3 분간원심분리 추출물 800mL 를다른튜브로옮기고, N 2 를사용해 40 C 에서건조 1:9 MeOH:H 2 O(0.1% FA) 800μL 로재용해하고, 볼텍스처리후초음파처리 0.22μm cellulose acetate spin filter( 부품번호 ) 로시료를필터링 LC/MS/MS 분석을위한시료준비완료 그림 1. 항생제분석을위한 Agilent QuEChERS 작업절차 74

75 결과 그림 2. 소간의 11 가지퀴놀론계항생제의회수율및재현성 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Dispersive SPE Kit (2mL, 부품번호 ) 또는 (15mL, 부품번호 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver Plus Eclipse Plus Phenyl-Hexyl LC Column, 3.0 x 150 mm, 3.5 µm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 75

76 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 키트를이용한 LC/MS/MS 검출로소간내설폰아미드계항생제측정 ( 발행물 EN) 소개 소간내 11 가지설폰아미드계항생제를측정하기위한분석법은다음과같습니다. Agilent Bond Elut QuEChERS 키트로소간을처리하여분석물을추출및 cleanup 합니다 Bond Elut EN 추출키트와 1% 아세트산 (AA) 아세토니트릴용액을이용해분석물을추출합니다 Bond Elut EN fatty dispersive SPE 키트, 6mL(150mg PSA, 150mg C18, 900mg MgSO 4 ) 를이용해 Cleanup 을수행합니다 추출된시료는 LC/MS/MS 로분석합니다 정량한계 (LOQ) 는 2.0ng/g 입니다 검량선은 2.0 ~ 400ng/g 측정범위에서직선성을띠는것으로나타났습니다 미리첨가된시료의회수율범위는 53.0 ~ 92.8%, RSD(n=6) 값은 2.1 ~ 16.8% 입니다. 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : Agilent ZORBAX Eclipse Rapid Resolution HT Plus C18, 3.0 x 50 mm, 1.8 µm ( 부품번호 ) 유속 : 0.3 ml/min 컬럼온도 : 30 ºC 주입량 : 10 µl 이동상 : A: 5 mm Ammonium acetate in H 2 O, ph 3.0 B: 1:1 Methanol:acetonitrile Post time: 3.5 min 이동상변화도 : 시간 % B (min) STOP MS 조건 극성 : Positive 가스온도 : 325 ºC 가스유속 : 8 L/min Nebulizer: 50 psi Capillary: 4,000 V QuEChERS 절차 균질화된간시료 2g(± 0.05g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 50µL 를, 필요하면 QC 스파이크용액 50µL 를스파이킹한후 30 초동안볼텍스처리 물 8mL 를첨가후볼텍스처리 1% AA 가들어있는 ACN 10mL 를추가하고 30 초동안세게흔들어줍니다 Bond Elut EN QuEChERS 추출키트를더하고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 6mL 를 Bond Elut EN QuEChERS fatty dispersive SPE 2mL 튜브로옮김 2 분간볼텍스처리뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 추출물 4mL 를다른튜브로옮기고, N 2 를사용해 40 C 에서건조 1:9 MeOH:H 2 O(0.1% FA) 800μL 로재용해하고, 볼텍스처리후초음파처리 0.22μm cellulose acetate spin filter 로시료를필터링 ( 부품번호 ) LC/MS/MS 분석을위한시료준비완료 그림 1. 소간내설폰아미드계항생제를측정하기위한 Agilent QuEChERS 절차 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS EN Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS EN Fatty Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Eclipse Rapid Resolution HT Plus C18 LC Column, 3.0 x 50 mm, 1.8 µm ( 부품번호 ) Agilent Spin Filters, 0.22 μm Cellulose Acetate ( 부품번호 ) 76

77 결과 x MRM ( > ) std 5-2.d IS 그림 ng/g 첨가간추출물의 LC/MS/MS 크로마토그램. 피크 ID: 1. Sulfadizine, 2. Sulfathiazole, 3. Sulfamerazine, 4. Sulfamethizole, 5. Sulfamethazine, 6. Sulfamethoxypyridazine, 7. Sulfachloropyridazine; 8. Sulfamethoxazole, 9. Sulfadimethoxin, IS( 내부표준물질 ) 표 1. 정량결과 - 회수율및재현성 (n=6) Low QC (5 ng/g) Mid QC (100 ng/g) High QC (400 ng/g) 화합물 회수율 RSD 회수율 RSD 회수율 RSD Sulfadizine Sulfathiazole Sulfamerazine Sulfamethizole Sulfamethazine Sulfamethoxypyridazine Sulfachloropyridazine Sulfamethoxazole Sulfadimethoxin 그림 3. 소간내 9 가지설폰아미드의회수율및재현성 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 77

78 GC-µECD 를이용한올리브유내 Contract Laboratory Protocol 농약의분석및확인 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는현지매점에서구입한올리브유내 20 가지 contract laboratory protocol(clp) 농약을분석하기위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. dual μecd 와 dual capillary GC 컬럼을이용하면오일시료내 endosulfan sulfate 및 endosulfan 1 에대한기본분석과확인분석을동시에수행할수있습니다. 본응용자료에서는날로준엄해지고있는식품안전트렌드에부응하고자, 올리브유내 CLP 농약을모니터링하는안정적이고경제적인분석법을개발했습니다. 이분석법은일상적인올리브유스크리닝에서 GC/MS 의대안으로 dual column μecd 분석법을채택하였습니다. QuEChERS 절차 올리브유시료 3g(± 0.1g) 과탈이온수 7.0g 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 10mL ACN 첨가 * Agilent Bond Elut Original QuEChERS 추출염키트첨가 ( 부품번호 , 4g MgSO 4, 1g NaCl 포함 ) 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 3,000rpm 에서 2 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를지방시료용 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC ( 부품번호 ) dispersive SPE 2 ml 튜브로옮김 기기조건 GC 조건 컬럼 1: 컬럼 2: GC/dual μecd: Agilent J&W DB-35 ms 30 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-XLB 30 m 0.25 mm, 0.50 μm ( 부품번호 ) dual μecd 검출기및 7873B auto sampler 를장착한 7890A CFT 장비 : 2-way unpurged splitter capillary flow technology ( 부품번호 G3181B) 운반가스 : 수소, 56 cm/s 오븐 : 110 C (1.4 min), 21 C/min to 285 C (1 min), 30 C/min to 300 C (2 min) 주입 : 1 μl, 250 C splitless, purge 50 ml/min at 0.3 min, gas saver 50 ml/min on at 2 min Dual μ-ecd: 350 C, N 2 makeup; constant column + makeup = 30 ml/min 유동경로 (Flow Path) 소모품 바이알 : Amber screw top glass vials ( 부품번호 ) 바이알캡 : Screw caps ( 부품번호 ) 바이알삽입튜브 (Insert): 100 μl glass/polymer feet ( 부품번호 ) 시린지 : 5 μl ( 부품번호 ) Septum: Advanced Green ( 부품번호 ) Inlet seal: Gold-plated inlet seal ( 부품번호 ) Inlet liners: Dual-taper direct connect liner ( 부품번호 G ) Ferrules: 0.4 mm id short, 85/15 Vespel/graphite ( 부품번호 ) CFT 피팅 : Internal nut ( 부품번호 G ) CFT ferrules: SilTite ferrules, 0.25 mm id ( 부품번호 ) 20x Magnifier: 20x Magnifier loop ( 부품번호 ) 1 분간볼텍스처리하고 2mL 튜브를 3,200rpm 에서 3 분간원심분리 추출물 500μL 를자동시료주입기바이알로옮김 μgc-ecd 로분석 그림 1. 올리브유내농약분석을위한 Agilent QuEChERS 절차 * 시료스파이크첨가 78

79 결과 Hz min 1. Tetrachloro-m-xylene ( 대용표준품 ) 2. α-bhc 3. g-bhc 4. b-bhc 5. Heptachlor 6. d-bhc 7. Aldrin 8. Heptachlor epoxide 9. g-chlordane 10. α-chlordane 11. Endosulfan I 12. Dieldrin 13. p,p-dde 14. Endrin 15. p,p-ddd 16. Endosulfan II 17. p,p-ddt 18. Endrin aldehyde 19. Endosulfan sulfate 20. Methoxychlor 21. Endrin ketone 22. Decachlorobiphenyl ( 대용표준품 ) 그림 2. 80ng/mL CLP 농약및 20ng/mL 대용표준품으로스파이킹된올리브유시료의 GC-µECD 크로마토그램 79

80 Hz min 1. Tetrachloro-m-xylene ( 대용표준품 ) 2. α-bhc 3. g-bhc 4. b-bhc 5. Heptachlor 6. d-bhc 7. Aldrin 8. Heptachlor epoxide 9. g-chlordane 10. α-chlordane 11. Endosulfan I 12. p,p-dde 13. Dieldrin 14. Endrin 15. p,p-ddd 16. Endosulfan II 17. Endrin aldehyde 18. p,p-ddt 19. Endosulfan sulfate 20. Methoxychlor 21. Endrin ketone 22. Decachlorobiphenyl ( 대용표준품 ) 그림 3. 80ng/mL CLP 농약및 20ng/mL 대용표준품으로스파이킹된올리브유시료의 GC-µECD 크로마토그램 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut Original QuEChERS Extraction Salt Packet ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS, Fatty Samples, AOAC Dispersive SPE, 2 ml Tube ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-35ms Column, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-XLB Column, 30 m x 0.25 mm, 0.50 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 80

81 Agilent Bond Elut QuEChERS 의수정된분석법을이용한레몬오일내농약측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 Agilent Bond Elut QuEChERS 추출키트, dispersive SPE 수정분석법, 애질런트가스크로마토그래피, Agilent 5975C 시리즈 GC/MSD 등을이용한레몬에센셜오일내잔류농약성분의빠르고간편한추출절차를설명합니다. 에센셜오일내농약추출물은오일매질의복잡한특성상까다로운작업으로간주됩니다. 여기에서설명된방법은최초추출단계에서헥산과다중 dispersive SPE 단계를활용해전자이온화모드의 selected ion monitoring(sim) 을사용하는 GC/MS 분석에적합한깔끔한추출물을생성하도록합니다. QuEChERS 절차 레몬오일시료 3g(± 0.5g) 을 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 스파이크용액을첨가하고필요한경우 QC 표준품을추가한후 1 분간볼텍스처리하여혼합함 물 12mL 첨가후 10mL 의 ACN 과 2mL 의헥산첨가 1 분간세게흔들어줍니다 Bond Elut QuEChERS EN 추출염키트첨가 1 분간세게흔들어준후, 5 분간원심분리 피펫으로상부헥산층과오일층을폐기 기기조건 GC 조건컬럼 : Inlet: Inlet liner: Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm, 0.25 μm Splitless Helix double-taper, deactivated ( 부품번호 ) 헬륨 운반가스 : 주입구압력 : 19.6 psi ( 일정압력모드 ) Inlet 온도 : 250 ºC 주입량 : 1.0 μl Split 배출구퍼지유속 : 오븐온도프로그램 : 30 ml/min at 0.75 min 70 ºC (1 min) 50 ºC/min to 150 ºC (0 min) 6 ºC /min to 200 ºC (0 min) 16 ºC/min to 280 ºC (6 min) MS 조건 Tune file: Atune.u 모드 : SIM( 세부설정은응용자료의표 3 참조 ) Source, quad, transfer 온도 : 각각의라인온도 230 ºC, 150 ºC, 280 ºC 용매지연시간 : 2.30 min Multiplier 전압 : Autotune 전압 ACN 상층액 1.6mL 를 AOAC fatty and pigmented dispersive SPE 1mL 튜브로옮김 2-3 분간볼텍스처리뒤 13,000rpm 에서 2-5 분간원심분리 ACN 추출물을다른 AOAC fatty pigmented 1mL dispersive SPE 튜브로옮김 2-3 분간볼텍스처리뒤 13,000rpm 에서 2-5 분간원심분리 위쪽의투명층을옮겨 GC/MS 로분석 그림 1. 레몬오일내농약분석을위한 Agilent QuEChERS EN 수정추출절차 81

82 결과 1e+08 TIC: CB 3X FP 2 ml HEX SIM: CB 3X FP 2 ml HEX 8e+07 4 TIC: CB 2X FP 2 ml HEX SIM: CB 2X FP 2 ml HEX 6e e+07 TIC: CB 1X FP 2 ml HEX 2 SIM: CB 1X FP 2 ml HEX 2e 그림 2. 헥산추가및다중 dispersive SPE 단계가포함된실험개발을통해최적화된추출법. CB (control blank), FP (AOAC fatty pigmented dispersive SPE), HEX ( 헥산 ). 82

83 IS 200 ng/ml pre spiked QC , ,13, IS 200 ng/ml post spiked std 3 7, , Dichlorvos 2. α-bhc 3. Hexachlorobenzene 4. β-bhc 5. γ-hch 6. Disulfoton 7. Chlorpyrifos methyl 8. Parathion methyl 9. Heptachlor 10. Fenitrothion 11. Aldrin 12. Malathion 13. Chlorpyrifos 14. Parathion 15. Procymidone 16. Endosulfan I 17. Dieldrin 18. 4,4 -DDE 19. Endosulfan II 20. 4,4 -DDD 21. Endosulfan sulfate 22. 4,4'-DDT 23. Bromopropylate 24. λ-cyhalothrin 25. Fenvalerate 26. Deltmethrin 그림 ng/mL 의 prematrix, postmatrix 첨가시료의 GC/MS 크로마토그램. 이결과는 prespiked, postspiked 레몬오일추출물의크로마토그램을보여줍니다. 26 가지농약성분중 25 가지가평균 RSD 5% 미만의재현성있는결과를나타냈습니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered EN Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for Fatty and Pigmented Produce ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5MS Ultra Inert Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 83

84 Agilent Bond Elut QuEChERS dspe 시료전처리및고효율 DB-5ms Ultra Inert GC 컬럼을이용한 GC/MS 검출로어류내다환방향족탄화수소 (PAH) 분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는어류에포함된미량및극미량의다환방향족탄화수소 (PAH) 의검출을위한 QuEChERS dispersive 고체상추출 (dspe) 시료전처리법을설명합니다. 이분석은 Agilent 7693 Automatic Liquid Sampler 와 Multimode Inlet(MMI) 이설치된 Agilent 5975B GC/MS 시스템과 Agilent 7890 GC 를이용해수행되었습니다. 또한 GC 에는자동화된백플러시를위한 pressure controlled tee (PCT) post-column 도설치되어있습니다. 회수율범위는 80 ~ 139% 입니다. QuEChERS 절차 시료 3g(± 0.05g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 대용표준품 /IS 용액을첨가하고필요한경우 QC 스파이크용액을추가한후 1 분간볼텍스처리 시료에 12mL 탈이온수첨가후 2 개의세라믹균질기추가 ( 부품번호 ) ACN 15mL 를더한후 1 분간볼텍스처리 15g 시료에기존 Agilent Bond Elut QuEChERS 추출염키트첨가 ( 부품번호 ) Geno/Grinder 에서 1,500rpm 으로 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 층 8mL 를지방시료용 Agilent AOAC dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 ( 부품번호 ) 기기조건 GC 조건 컬럼 : GC/MSD: Agilent J&W DB-5ms UI 20 m 0.18 mm, 0.18 μm ( 부품번호 UI) Agilent 7890 GC/Agilent 5975B GC/MS 시스템 Sampler: Agilent 7693 Automatic Liquid Sampler, 5.0 μl 시린지 ( 부품번호 ) PCT 장비 : Purged Ultimate Union ( 부품번호 G ) 운반가스 : 헬륨, 일정압력모드, 1.7mL/min Restrictor: 0.7 m 0.15 mm id deactivated silica tubing PCM 1: 3.8 psi, 일정압력모드 MMI: 0.5 μl splitless; 320 C, purge flow 50 ml/min at 0.8 min; Gas saver 30 ml/min at 2 min 오븐 : 50 C (0.4 min), 25 C/min to 195 C (1.5 min), 8 C/min to 265 C, 20 C/min to 315 C (1.25 min) Postrun backflush: 7 min at 315 C, backflush pressure 70 psi, 2 psi inlet pressure during backflush MSD: 340 C transfer line, 340 C source, 150 C quad 유동경로 (Flow Path) 소모품 바이알 : Amber screw top glass vials ( 부품번호 ) 바이알캡 : Blue screw cap ( 부품번호 ) 바이알삽입튜브 (Insert): 100 μl glass/polymer feet ( 부품번호 ) 시린지 : 5 μl ( 부품번호 ) Septum: Advanced Green ( 부품번호 ) Inlet liners: Deactivated dual-taper helix liner ( 부품번호 G ) Ferrules: 0.4 mm id short, 85/15 Vespel/graphite ( 부품번호 ) PCT 피팅 : Internal nut ( 부품번호 G ) PCT ferrules: SilTite ferrules, 0.25 mm id ( 부품번호 ) 20x Magnifier: 20x Magnifier loop ( 부품번호 ) 1 분간볼텍스처리뒤 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 GC/MS 로분석 그림 1. 어류시료를위한 Agilent Bond Elut QuEChERS 수정추출절차 84

85 1. Naphthalene 2. Acenaphthylene 3. Acenaphthene 4. Fluorene 5. Phenanthrene 6. Anthracene 7. Fluoranthene 8. Pyrene 9. Benz[a]anthracene 10. Chrysene 11. Benzo[b]fluoranthene 12. Benzo[k]fluoranthene 13. Benz[a]pyrene 14. Indeno[1,2,3-c,d]pyrene 15. Dibenz[a,h]anthracene 16. Benzo[g,h,i]perylene 그림 2. Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert GC 캐필러리컬럼 ( 부품번호 UI) 에서 500ng/mL PAH 표준품을포함한시료매트릭스를분석한 GC/MS 크로마토그램. 크로마토그래피조건은응용자료의표 1 에서확인가능합니다. 85

86 1. Naphthalene 2. Acenaphthylene 3. Acenaphthene 4. Fluorene 5. Phenanthrene 6. Anthracene 7. Fluoranthene 8. Pyrene 9. Benz[a]anthracene 10. Chrysene 11. Benzo[b]fluoranthene 12. Benzo[k]fluoranthene 13. Benz[a]pyrene 14. Indeno[1,2,3-c,d]pyrene 15. Dibenz[a,h]anthracene 16. Benzo[g,h,i]perylene 그림 3. Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert GC 캐필러리컬럼으로어류추출물바탕시료와 25ng/mL 의스파이크어류추출물을분석한 GC/MS SIM 크로마토그램. 크로마토그래피조건은응용자료의표 1 에서확인가능합니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Extraction Salt Packet ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Fatty Sample Dispersive SPE, 15 ml Tubes ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Ceramic Homogenizers, 50 ml Tubes ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert Column, 20 m 0.18 mm, 0.18 μm ( 부품번호 UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 86

87 Wool 이들어있는 Ultra Inert Liner 를이용한 GC/MS/MS 검출로식품내농약분석 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는농약의다성분잔류농약분석을위한 QuEChERS 시료전처리방법을설명합니다. 이실험을위해흰색꽃, 바나나, 딸기, 배, 양상추등의 5 가지과일및채소가선정되었습니다. Agilent Ultra Inert liner 의평가를위해서는대표성을띠는 33 가지의서로다른농약이선택되었습니다. 농약표준품 QuEChERS AOAC 분석법에의해추출된과일및채소매트릭스바탕시료에스파이킹되었습니다. 모든실험은 7693B Autosampler 가설치된 Agilent 7890A GC 와 7000 시리즈 Triple Quadrupole MSD 시스템에서이루어졌습니다. 추출된시료는 Agilent Wool 이들어있는 Ultra Inert Liner 의우수한성능을입증하기위한목적으로사용되었습니다. QuEChERS 절차 균질화된시료 15g(± 0.05g) 을측정해 50mL 원심분리기용튜브에투입 IS 용액 100µL 를시료에스파이킹한후 1 분간볼텍스처리 1% 아세트산이들어있는 ACN 용액을 15mL 첨가후 1 분간세게흔들어줍니다 Bond Elut QuEChERS AOAC 추출염키트첨가후뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어줍니다 4,000rpm 에서 5 분간원심분리 ACN 상층액 1mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 2mL 튜브로옮기거나, 8mL 를취하여 Bond Elut AOAC dispersive SPE 15mL 튜브로옮김 1 분간볼텍스처리뒤원심분리 추출물을자동시료주입기바이알로옮김 GC/MS/MS 분석을위한시료준비완료 그림 1. 식품내농약분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 기기조건 GC 조건분석컬럼 : GC: Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) Agilent 7890A 시리즈 Autosampler: Agilent 7693 Autosampler 및시료트레이, 5μL 시린지 ( 부품번호 ), 1μL 주입량. 주입후용매 A (acetone) 세척 : 3 시료펌프 : 3 주입후용매 B (acetonitrile) 세척 : 3 운반가스 : 헬륨, 일정압력모드 Inlet: MMI inlet, pulsed splitless 모드 : 280 C, 주입펄스압력 : 36 psi until 1 min Split 배출구퍼지유속 : 50 ml/min at 1 min Inlet 압력 : 작동중에는 psi (RT locked), 백플러시중에는 1.0 psi 머무름시간 (RT) 고정 : Chlorpyrifos methyl at min 오븐프로파일 : 100 C for 2 min, then to 150 C at 50 C/min, to 200 C at 6 C/min, to 280 C at 16 C/min and hold for 6 min ( 시료분석의경우 ); 100 C for 1 min, then to 280 C at 100 C/min and hold for 5.2 min (matrix blank 분석의경우 ) Post run: 2 min at 280 C Capillary flow technology: Aux EPC 가스 : Bleed line: Aux 압력 : 연결 : Restrictor: 연결 : MSD: 진공펌프 : 모드 : Tune file: Purged Ultimate Union ( 부품번호 G ) 분석컬럼및 inlet의백플러시에사용헬륨가스가 Purged Ultimate Union 통과 in od in id 100 cm, 316 SS 튜브, 오븐위에놓임작동중에는 4 psi, 백플러시중에는 75 psi Between inlet and Purged Ultimate Union ( 부품번호 G ) Inert fused silica tubing, 0.65 m 0.15 mm ( 부품번호 ) Purged Ultimate Union과 MSD 사이의연결 Agilent 7000 Triple Quadrupole Inert with performance electronics Performance turbo MRM Atune.u Transfer line 온도 : 280 C 소스온도 : 300 C Quad 온도 : Q1 및 Q2, 150 C 용매지연시간 : 2.3 min 충돌가스유속 : He quench gas at 2.35 ml/min, N 2 collision gas at 1.5 ml/min MS 분리능 : MS1, MS2, 1.2 u 87

88 Methamidophos 2. Dichlorvos 3. Mevinphos 4. Acephate 5. σ-phenylphenol 6. Omenthoate 7. Dimenthoate 8. Altrazine 9. Lindane 10. Diazinon 11. Chlorothalonil 12. Chloropyrifos methyl 13. Vinclozolin 14. Carbaryl 15. Tolclofos methyl 16. Dichlorfluanid 17. Aldrin 18. Malathion 19. Dichlorobenzophenone 20. Pirimiphos ethyl 21. Tolyfluanid 22. Procymidone 23. Endrin 24. Ethion 25. Endosulfan sulfate 26. DDT 27. Endrin ketone 28. Iprodione 29. Phosmet 30. Phosalone 31. Permethrin isomers 32. Coumaphos 33. Deltamethrin isomers 그림 2. Wool 이들어있는 Ultra Inert Liner 를이용한 10ppb 스파이킹 QuEChERS 시료의 GC/MS/MS 크로마토그램 (MRM) 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC Dispersive SPE Kit for General Fruits and Vegetables, 2 ml ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert GC Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 88

89 Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/MS 시스템을이용한바다갑각류내화학적오염물측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는선택된바다홍합조직내유기염소계농약, 다환방향족탄화수소, 폴리염화바이페닐물질의검출을위한 QuEChERS 시료전처리법을설명합니다. 이분석은이산화탄소냉각방식 Multimode Inlet(MMI) 과 Agilent 7693A Automatic Liquid Sampler 가설치된 Agilent 7890 GC 및 Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/ MS 시스템을이용해진행되었습니다. 이응용법에서는 QuEChERS 추출법과튜브기반 SPE cleanup 단계를결합하여 GC/QQQ 로표적분석물을확인할수있는최종추출물을생성합니다. 기기조건 GC 조건컬럼 (1): 컬럼 (2): 주입모드 (1): Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm id, 0.25 μm ( 부품번호 UI) Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert, 0.65 m 0.15 mm id, 0.15 μm (Cut from Part No ) 1 μl cold pulsed splitless using CO2 cooled Multimode Inlet (MMI), 10μL 시린지 Inlet 온도프로그램 : 50 C (0.05 min), 600 C/min to 325 C Inlet pressure pulse: 13.0 psig for 0.75 min Split 배출구퍼지유속 : 50 ml/min at 1.0 min 주입포트라이너 : 2 mm id, multi-baffled ( 부품번호 ) 주입모드 (2): 10 μl solvent vent using CO 2 -cooled Multimode Inlet (MMI), 25μL 시린지 Inlet 온도 프로그램 : 40 C (0.31 min), 600 C/min to 325 C Inlet vent 압력 : 5.0 psig Inlet vent 유속 : 100 ml/min Inlet vent 시간 : 0.31 min Outlet 압력 : 0 psig 주입속도 : 100 μl/min Split 배출구퍼지유속 : 50 ml/min at 1.0 min 주입포트라이너 : 2 mm id, multi-baffled ( 부품번호 ) 운반가스 : 헬륨, 일정압력모드, 1.2mL/min 오븐온도프로그램 : 50 C (1 min), C/min (0 min), 10 C/min, 300 C (1.5 min) PCB 118, locked at min RTL 화합물 : Pressure controlled tee: G3186B, 2.0 psig 고정압력에서작동백플러시조건 : Inlet 압력 MC 조건 MS transfer line 온도 : 325 C MS 소스 : 300 C MS quad 1, 2 온도 : 150 C, 150 C Collision cell gases: 질소 1.5 ml/min, 헬륨 2.25 ml/min MS1/MS2 분리능 : Wide/wide MRM 설정 : 응용자료의표 3 참조 전자에너지 : -70 ev 이온화모드 : Electron impact (EI) EI Autotune: Gain normalized Gain factor: 5 89

90 QuEChERS 절차 균질화된홍합조직 2g 을 QuEChERS 추출튜브에투입 labelled ISTD( 아세톤에서준비됨 ) 첨가 시료를 30 초동안볼텍스혼합한후 13mL 탈이온수와 2 개의세라믹균질기첨가 시료를 1 분간볼텍스혼합처리하고 15mL 의추출용매 (1% 아세트산을함유한아세토니트릴 ) 를첨가하고 1 분간볼텍스처리하여혼합 피펫을이용해투명한추출액 10mL 를깨끗한 turbovap 튜브로옮기고 0.5mL 가될때까지증발 20mL 의 dichlorometheane(dcm) 첨가하고 0.5mL 가될때까지증발시킨후, 10mL DCM 을첨가하고 0.5mL 가될때까지증발 10mL 의헥산을첨가하고 0.5mL 가될때까지증발 밤새 180 C 에서실리카를활성화시킨후 1g 을취하여빈 15mL SPE 튜브에첨가 QuEChERS AOAC 염혼합물 ( ) 첨가하고튜브를손으로 1 분간흔든후, 1 분간볼텍스혼합처리 SPE 튜브안에든 1g 의실리카를 10mL DCM 및 20mL 헥산으로컨디셔닝 튜브를 3,900rpm 에서 5 분간원심분리후냉동고에서 -20 C 로 30 분간냉각 농축된추출액을실리카 SPE 튜브에넣고 13mL 40:60 DCM:hexane 으로용출 아세토니트릴층을 1g 의무수황산나트륨이포함된깨끗하고잘건조된원심분리기용튜브로옮김 0.5mL 가될때까지추출액을증발 13 단계와 14 단계를반복 손으로 1 분간흔든후튜브를밤새 -20 C 의냉동고에보관 추출액을 0.5mL 가될때까지증발시킨후 2mL 자동시료주입기바이알로옮김 그림 1. 갑각류내오염물질분석을위한 QuEChERS 시료추출및 clean-up 절차 Naphthalene 2. Acenaphthylene 3. Acenaphthene 4. Fluorene 5. Dibenzothiophene 6. Phenathrene 7. Anthracene 8. Fluoranthene 9. Pyrene 10. Benzo[a]anthracene 11. Chrysene+triphenylene 12. Benzo[b+j]fluoranthene 13. Benzo[k]fluoranthene 14. Benzo[e]pyrene 15. Benzo[a]pyrene 16. Perylene 17. Indeno[1,2,3-cd]pyrene 18. Dibenz[a,h]anthracene 19. Benzo[g,h,i]perylene Counts vs acquisition time (min) 그림 2. PAH 분석물의 TIC MRM 크로마토그램 90

91 (A) % Recovery HCBD a-hch HCB b-hch g-hch d-hch Aldrin Isodrin op-dde p,p-dde Dieldrin op-ddd Endrin pp-ddd o,p-ddt p,p-ddt (B) % Recovery Naphthalene Acenaphthylene Acenaphthene Fluorene Dibenzothiophene Phenanthrene Anthracene Fluoranthene Pyrene Benzo(a)anthracene Chrysene+Triphenylene Benzo(b)fluoranthene Benzo(k)fluoranthene Benzo(e)pyrene Benzo(a)pyrene Perylene (Indeno(123-cd)pyrene Dibenz(a,h)anthracene Benzo(g,h,i)perylene (C) % Recovery PCB28 PCB52 PCB101 PCB118 PCB153 PCB138 PCB180 그림 3. 스파이킹된홍합조직내 (a) OCP, (b) PAH, (c) PCB 분석물회수율에대한시각화결과 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Buffered AOAC Extraction Kit ( 부품번호 ) Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 UI) Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert Column, 0.65 m x 0.15 mm, 0.15 μm (Cut from Part No ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 91

92 여러가지시료전처리법으로밀에포함된 Trichothecenes, Zearalenone 에대해 LC/MS/MS 분석수행 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는 QuEChERS 수정분석법과 Agilent Bond Elut Mycotoxin SPE 로시료를전처리하고 LC/MS/MS 로 Trichothecenes, Zearalenone 을검출하는방법을설명합니다. 이분석에는 MassHunter Optimizer 소프트웨어가설치된 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 가사용되었습니다. 면역친화도추출대비회수율범위는 72 ~ 105% 입니다. QuEChERS 방법과마이코톡신컬럼을사용한전통적인 SPE cleanup 모두우수한회수율을나타냈습니다. SPE cleanup 을이용한시료는더깨끗하고더낮은검출한계를보였으며, QuEChERS 방법으로전처리한시료는보다빠른진행이가능했습니다. QuEChERS 절차 5g 의곡류제품을빻은후빈 50mL 원심분리기용튜브에투입 10mL 의 MeOH:acetonitrile (85:15 v:v) 을첨가한후뚜껑을닫고혼합 Bond Elut non-buffered 추출키트 ( 부품번호 ) 를첨가한후뚜껑을닫고흔들어원심분리 상층액 1mL 를 2mL dispersive SPE 튜브로옮김 ( 부품번호 ) 뚜껑을닫고볼텍스처리로혼합한후원심분리 0.2µm 멤브레인으로필터링 기기조건 HPLC 조건 컬럼 : 기기 : 유속 : 컬럼온도 : 30 C 주입량 : 이동상 : Agilent ZORBAX Rapid Resolution HT Eclipse Plus C18, mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS, Agilent 1290 Infinity LC 0.25 ml/min 10 μl A: 물 + 0.2% acetic acid, 5 mm ammonium acetate B: 물 + 0.2% acetic acid, 5 mm ammonium acetate MS/MS 조건 Agilent Jet Stream이설치된 ESI 파라미터, 양 / 음극성의빠른전이 건조가스온도 : 200 C 건조가스유속 : 8 L/min Nebulizer 압력 : 45 psi Sheath 가스온도 : 400 C Sheath 가스유속 : 12 L/min 캐필러리전압 : ± 3,000 V 노즐전압 : ± 500 V Delta EMV: 500 V 분리능 : Unit, unit N 2 하에서건조후 1mL H 2 O:ACN (80:20 v:v) 으로재용해 그림 1. 곡물분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 Bond Elut Mycotoxin 분석법 25g 의곡물제품을빻아 100mL 의 MeOH:acetonitrile (85:15 v:v) 을첨가한후뚜껑을닫고 1 시간동안흔들어줍니다 8mL 의분주 (aliquot) 시료를 Bond Elut Mycotoxin 튜브 ( 부품번호 ) 에넣고여과물을수집 N 2 하에서건조후 1mL H 2 O:ACN (80:20 v:v) 으로재용해 0.2µm 멤브레인으로필터링 그림 2. 곡류마이코톡신분석을위한 Bond Elut Mycotoxin SPE 시료전처리 92

93 표 1. trichothecenes, zearalenone 분석을위한 MS 조건 Mycotoxin Precursor ion Product ion Fragmentor Collision energy 극성 15-acetyl Deoxynivalenol Positive 15-acetyl Deoxynivalenol Positive 15-acetyl Deoxynivalenol Positive 3-acetyl Deoxynivalenol Negative 3-acetyl Deoxynivalenol Negative Diacetoxyscirpenol (DAS) Positive Diacetoxyscirpenol (DAS) Positive Deoxynivalenol (DON) Negative Deoxynivalenol (DON) Negative Fusarenone-X Negative Fusarenone-X Negative HT-2 toxin Positive HT-2 toxin Positive Neosolaniol Positive Neosolaniol Positive Nivalenol Negative Nivalenol Negative Nivalenol Negative T-2 toxin Positive T-2 toxin Positive Zearalenone Negative Zearalenone Negative Zearalanone Negative Zearalanone Negative 표 2. QuEChERS 수정분석법과카트리지 SPE 방법으로전처리한 50µg/kg (n=9) 스파이킹밀시료의회수율데이터비교 분석물 분석물머무름시간 (min) 수정 QuEChERS 회수율 (%) 수정 QuEChERS RSD(%) BE Mycotoxin SPE 회수율 (%) Nivalenol Deoxynivalenol Fusarenon-X Neosolaniol acetyl Deoxynivalenol acetyl Deoxynivalenol Diacetoxyscirpenol HT T-2 toxin Zearalenone BE Mycotoxin SPE RSD(%) 93

94 x Nivalenol Deoxynivalenol Fusarenon-X Neosolaniol 15-acetyl deoxynivalenol 3-acetyl deoxynivalenol Diacetoxyscirpenol HT-2 Toxin T-2 Toxin Zearalenone Relative Abundance Acquisition Time (min) 그림 ppb 밀매트릭스표준품 : 1 차 transition 의표준화크로마토그램. 이방법에서는 15-acetyl DON 과 3-acetyl DON 이두이성질체에대해크로마토그래피분리를진행하지않습니다. 이들은서로다른스펙트럼극성을통해구분되기때문입니다. 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERS Nonbuffered Extraction Packet ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Dispersive SPE Kit ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut Mycotoxin SPE Cartridge, 500mg, 3mL ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Rapid Resolution HT Eclipse Plus C18 Column, 2.1 x 100 mm, 1.8 μm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 94

95 최적화된추출 /cleanup 방법과 Agilent 7000 시리즈 Triple Quadrupole GC/MS 시스템을이용한건조차시료내여러잔류농약성분측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는차에서농약성분을효과적으로추출하는최적화된 QuEChERS 시료전처리법을설명하며, 동시에크로마토그래피피크모양과분석물머무름시간을변화시키고감도를잃게만드는카페인및기타공동추출물질의추출을최소화할수있는방법을설명합니다. 차추출물은 MRM 모드에서 GC/MS/MS 분석을거쳤으며, Agilent 7890 GC 와 Agilent 7000B Triple Quadrupole GC/MS 시스템으로분석되었습니다. 이새로운방법은 QuEChERS 추출과그뒤에이어지는액체추출물의 clean-up 을통해일관된결과를약속합니다. QuEChERS 절차 50mL 플라스틱원심분리기용튜브에 2g 의건조찻잎을넣고 10mL 의물을넣은후 30 초동안흔들어줍니다. 매트릭스가용해될때까지 30 분간기다립니다 10mL 아세토니트릴첨가, 1 분간흔들고 4g 의 MgSO 4 에 1g 의 NaCI 을첨가한후 1 분간흔들어줍니다. TPP(ISTD) 를첨가후 10,000rpm 에서 5 분간원심분리 1mL 의아세토니트릴층을취하여 15mL 의플라스틱원심분리기용튜브에넣고 1mL 의 n-hexane 및 5mL 20% 염화나트륨수용액을첨가한뒤 1 분간흔들어줍니다 10,000rpm 에서 1 분간원심분리 n-hexane 층의일부를 2mL 의자동시료주입기바이알로옮김 그림 1. 차분석을위한 QuEChERS 시료추출및 clean-up 방법 기기조건 GC 조건컬럼 (1): Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert, 15 m 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) 컬럼 (2): Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert, 0.50 m 0.15 mm, 0.15 μm (Cut from Part No ) Capillary flow 장치 : Pressure controlled tee (PCT) 와 pneumatics control module (PCM) Auto-sampler: Agilent 7693A Automatic Liquid Sampler 주입 : 2 μl cold splitless using CO 2 -cooled Multimode Inlet (MMI) Splitless 지속시간 : 1 min 주입 : Port liner 2 mm id dimpled deactivated liner ( 부품번호 ) Inlet 온도프로그램 : 50 C (0.1 min), 600 C/min to 300 C Split 배출구퍼지유속 : 50 ml/min at 1.0 min RTL 화합물 : Trifluralin, locked to min 운반가스 : 헬륨 Inlet 압력 : psig 일정압력모드 ( 작동중 ) PCM 압력 : 2.0 psig 일정압력모드 ( 작동중 ) 오븐프로그램 : 50 C (1.0 min), 50 C/min to 150 C, 6 C/min to 200 C, 16 C/min to 280 C (4.07 min) Post-run 시간 : 2.0 min Post-run 온도 : 280 C Post-run 압력 : Inlet 1.0 psig, PCM 60.0 psig MS transfer line 온도 : 280 C MS 조건 이온화모드 : 전자이온화 전자에너지 : -70 ev 튠 : EI autotune EM gain: 10 MS1 분리능 : 1.2 amu full width at half maximum MS2 분리능 : 1.2 amu full width at half maximum Transitions: 응용자료의참고문헌 [2] 참조 Collision energies: 응용자료의참고문헌 [2] 참조 Dwell time: 2-28 ms( 매시간창당 transition 횟수에 따름 ), 5주기 /s Collision cell gas 유속 : 질소 1.5 ml/min, 헬륨 2.25 ml/min MS 온도영역 : Ion source 280 C, Q1 150 C, Q2 150 C 95

96 그림 2. 아세토니트릴추출후 QuEChERS 추출액의전체스캔 MS 크로마토그램에는매우높은존재비의카페인과기타공동추출물이표시되었으며 (1 푸른색 ), 이와반면에액체 - 액체추출법을적용했을경우최종추출액의카페인과기타공동추출물은현저히감소된다는것을볼수있습니다 (2 노란색 ). Number of pesticides (1) 0.01 mg/kg 0.1 mg/kg Black tea 1 mg/kg 0.01 mg/kg 0.1 mg/kg Green tea 1 mg/kg <50% 50-70% % Number of pesticides 160 (2) mg/kg 0.1 mg/kg Black tea 1 mg/kg 0.01 mg/kg 0.1 mg/kg Green tea 1 mg/kg <20% 20-30% >30% 160 (2) 그림 3. 스파이크농도가각각 0.01, 0.1, 1mg/kg일때녹차와홍차시료내잔류농약성분의 (1) 전체적인회수율및 (2) RSD 분포도 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut QuEChERs Nonbuffered Extraction Packet ( 부품번호 ) Agilent J&W HP-5ms Ultra Inert Column, 15 m x 0.25 mm, 0.25 μm ( 부품번호 19091S-431UI) Agilent J&W DB-5ms Ultra Inert Column, 0.50 m x 0.15 mm, 0.15 μm (Cut from Part No ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 96

97 LC/MS/MS 와수정된 QuEChERS 분석법의조합으로동물성식품내 36 종동물용의약품측정 ( 발행물 EN) 소개 이응용에서는식품에서 sulfanilamides, macrocyclic lactones, quinolones, clopidols 등 4 가지종류의동물용의약품을검출하기위한 QuEChERS 수정방법을설명합니다. 이방법으로 4 가지종류의동물용의약품모두에서만족할만한회수율이달성되었습니다. 기기분석은 Diode Array Detector 가설치된 Agilent 1260 Infinity LC, Agilent Jet Stream technology 전기분무이온화소스기능이있는 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 를이용해이루어졌습니다. 이방법은육류매질뿐아니라, 달걀, 우유, 꿀시료에서도성공적으로사용할수있었습니다. QuEChERS 절차 시료 ( 필요한경우균질화함 ) 2g(± 0.05g) 을빈 50mL 원심분리기용튜브에투입 4mL 의물을첨가하고뚜껑을닫은후 1 분간볼텍스처리 1% 아세트산이들어있는 ACN 용액을 10mL 첨가한후뚜껑을닫고 1 분간볼텍스처리 기기조건 HPLC 조건컬럼 : 유속 : 컬럼온도 : 30 C 주입량 : 5 μl 이동상 : Agilent ZORBAX Solvent Saver HD Eclipse Plus C18, mm, 1.8 μm 0.5 ml/min A: H 2 O 0.1% formic acid B: ACN 이동상변화도 : 시간 (min) %A %B MS 조건극성 : Positive 가스온도 : 300 C 가스유속 : 7 L/min Nebulizer: 50 psi Capillary: 3,000 V Sheath 가스온도 : 350 C Sheath 가스유속 : 10 L/min 스캔모드 : DMRM QuEChERS 추출염키트내용물첨가 ( 부품번호 ) 뚜껑을닫고 1 분간세게흔들어준뒤 4ºC 로온도가통제되는원심분리기에서 5,000rpm 으로 5 분간원심분리하고 30 분간놓아둡니다 위층의분주 (aliquot) 시료 6mL 를 15mL dispersive SPE 튜브 ( 부품번호 ) 에넣고뚜껑을닫은뒤 1 분간볼텍스처리 5,000rpm 으로 5 분간원심분리 상층액 4mL 를깨끗한튜브로옮김 40ºC 에서 N 2 흐름을통과시켜건조 1mL 의 2:8 ACN:H 2 O 로재용해한뒤 10,000rpm 으로 10 분간원심분리 상층액을자동시료주입기바이알로옮김 그림 1. 동물성식품내동물용의약품분석을위한 QuEChERS AOAC 시료전처리절차 97

98 그림 2. 동물용의약품의 MRM 추출물크로마토그램 98

99 표 1. 추출단계의최적화결과. 더우수한회수율을위해선택된 Na 2 SO 4 를포함한추출염혼합물 분석법 추출염 MgSO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl dispersive-spe 혼합물 C18EC+MgSO 4 C18EC+Na 2 SO 4 C18EC+Na 2 SO 4 C18EC+Na 2 SO 4 추출용매 1% 포름산아세토니트릴 1% 포름산아세토니트릴 1% 포름산아세토니트릴 1% 포름산아세토니트릴 물 8mL 8mL 4mL 4mL macrocyclic lactone의평균회수율 22.95% 43.66% 45.12% 70.46% sulfanilamide의평균회수율 10.86% 25.96% 33.25% 54.35% quinolone의평균회수율 86.79% 47.69% 62.69% 64.44% clopidol의평균회수율 55.12% 38.02% 49.89% 65.37% Zearalenone 표 2. dispersive SPE 파라미터최적화결과. 보다우수한융통성을위해선택된 PSA 포함 dspe 혼합물 분석법 추출염 Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl Na 2 SO 4 +NaCl dispersive-spe 혼합물 50 mg PSA+ 150 mg C18EC+ 100 mg PSA+ 150 mg C18EC+ 50 mg SAX+ 150 mg C18EC+ 100 mg NH mg C18EC+ 300 mg C18EC+ 900 mg Na 2 SO mg Na 2 SO mg Na 2 SO mg Na 2 SO mg Na 2 SO 4 추출용매 1% 아세트산 1% 아세트산 1% 아세트산 1% 아세트산 1% 아세트산 아세토니트릴 아세토니트릴 아세토니트릴 아세토니트릴 아세토니트릴 물 4mL 4mL 4mL 4mL 4mL macrocyclic lactone의평균회수율 54.57% 42.23% 59.87% 33.70% 66.10% sulfanilamide의평균회수율 % % 77.35% 51.71% 71.80% quinolone의평균회수율 73.88% % 76.82% 97.03% 84.66% clopidol의평균회수율 85.12% % 71.57% 70.27% 91.17% 위의응용법에쓰인제품들 Agilent Bond Elut Extraction Tubes ( 부품번호 ) Agilent Bond Elut QuEChERS Dispersive SPE Kits for Drug Residues ( 부품번호 ) Agilent ZORBAX Solvent Saver HD Eclipse Plus C18 Column, 3.0 x 100 mm, 1.8 µm ( 부품번호 ) 이응용자료의전문을보시려면 agilent.com/chem 에서 EN 을검색하십시오. 99

100 애질런트 LC 및 GC 기기로추출된분석물을빠르고정확하게측정하십시오 LC 및 LC/MS 기기 어려운정량및정성분석에서발휘되는독보적인성능 최고의 LC 기술에서부터, MS 스펙트럼의정확성과정밀도및스펙트럼라이브러리없이실험식을식별할수있는 TOF-MS 시스템에이르기까지, 애질런트 LC/ MS 기기는미지성분확인, 정량분석및대상화합물분석을확실하게수행하도록도와드립니다. Agilent 6230 TOF LC/MS Agilent 1290 Infinity LC GC/MS 기기 복잡한매트릭스시료와까다로운환경에서도높은감도와선택성을제공 기체상 (phase) 분석의목표가목적성분의정량분석이든미지성분의발견이든, 획기적인검출한계와고속측정을동시에모두완벽하게달성할수있는가장좋은방법은 GC/MS/MS 전용시스템을사용하는것입니다. 7000B Triple Quadrupole GC/MS 100

101 어려운분석에는애질런트컬럼과소모품이필수적입니다 식품의안전성테스트는그어느때보다도중요해졌으며, 분석의어느단계에서도결과및생산성에차질이빚어져서는안됩니다. 이러한이유로애질런트의컬럼과소모품은복잡한식품응용분석에서핵심적인가치인기기성능을최상으로유지하면서도타사제품에비해긴수명을보장하도록제작되었습니다. 결과의정확성을최대로끌어내기위한컬럼과표준품 : HPLC와 UHPLC용 Agilent ZORBAX 및 Poroshell 120 컬럼 GPC/SEC 컬럼및표준품 PLgel, PL aquagel-oh, 특화된컬럼및 EasiVial 표준품포함 Agilent J&W GC 컬럼 Ultra Inert 컬럼, 고효율컬럼, 고선택성컬럼, PoraBOND PLOT 컬럼포함 GC, LC, MS용테스트및성능검증표준품 특수한목적을위한사용자맞춤형 GC, LC 컬럼 최고의기기성능발휘를위한애질런트설계의소포품 : Agilent Inert Flow Path 부품들 (Ultra Inert liner, gold seal, UltiMetal Plus Flexible Metal ferrule 등 ) 을이용해식품내에극미량으로포함된까다로운활성화합물의 GC 분석성능을향상시켜보십시오. 폭넓은 GC, LC, MS, 원자및분자분광기포트폴리오 Agilent CrossLab, 주요분석장비에사용할수있는 GC, LC 소모품포트폴리오 MS 분석바이알키트, Ultra Inert inlet liner, 기타혁신적인소모품 크로마토그램전문가들이크로마토그램분석가를위해특별히설계한애질런트 ph 측정기및전극 101

102 색인 분석물아크릴아미드...26, 57 항생제...53, 73, 76, 97 호르몬...32 마이코톡신...92 농약...15, 18, 21, 24, 28, 30, 34, 36, 39, 41, 44, 47, 50, 61, 63, 65, 67, 70, 78, 81, 87, 95 다환방향족탄화수소 (PAH)... 55, 84, 89 폴리염화바이페닐 (PCB)... 59, 89 다환방향족탄화수소 (PNA)...84, 89 trichothecenes...92 동물용의약품...97 zearalenone...92 매트릭스페이지사과...15, 18, 21, 36, 39, 61, 63 이유식...50 바나나...87 닭...53 오이...28 달걀...97 어류...55, 59, 84 밀가루...67 꿀...97 양상추...61, 87 간...73, 76 우유...97 식용유...26 레몬오일...81 올리브유...78 오렌지...67 배...67, 87 고추...67 돼지고기...97 감자...57 쌀...65 갑각류, 홍합 갑각류, 새우 시금치...24, 41, 44, 47,

103 딸기...67, 87 차...30 토마토...28 채소주스...70 밀...92 흰색꽃...87 QuEChERS 정의...5 QuEChERS dispersive 키트 QuEChERS 추출키트...6 QuEChERS 세라믹균질기...13 QuEChERS 분석법, AOAC QuEChERS 분석법, EN QuEChERS 분석법, 기존...15 QuEChERS 분석법, 기타 QuEChERS 분석법, 표준...14 QuEChERS 선택가이드 QuEChERS 제품을위한표준품