셀프로그램에자료를입력하였다. 동정된참진드기는공원별, 월별, 참진드기의종별, 발육단계별분포를분석하였으며, 식생과야생동물분포및기상데이터와비교분석하였다. 3. 참진드기 RNA 유전자추출및 SFTSV 유전자검출국립공원별로참진드기 SFTSV의감염률을조사하기위하여성충 (adult

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영완 엽
6 years ago
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1 뒷면 주의 편집순서 기재 연구과제보고서 중자감증연염열환예성경방혈을소내판위감감한소염증실유후태용군조물사질바이및연러구스의 국립환경과학원 연구용역과제결과보고서 (Ⅰ) Survey of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus in natural environment and study on useful material for prevention of infection (Ⅰ) 서울대학교산학협력단 국립환경과학원 국립환경과학원장귀하 제출문 본보고서를 중증열성혈소판감소증후군 바이러스의자연환경내감염실태조사및감염예방을위한유용물질연구 용역결과보고서로제출합니다 연구기관명서울대학교산학협력단 연구책임자 연구원 채준석 강준구 연구개요 연구과제명 연구기관 요약문 중증열성혈소판감소증후군 바이러스의자연환경내국문감염실태조사및감염예방을위한유용물질연구 Survey of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus 영문 in natural environment and study on useful material for prevention of infection (Ⅰ) 서울대학교 산학협력단 연구책임자 소속 성명 서울대학교 채준석 연구기간 개월 연구비 원 참여연구원수총 명내부 명 외부 명 연구목적및필요성 2. 연구필요성중증열성혈소판감소증후군은 SFTSV에의한감염병으로발열, 피로감, 식욕저하, 소화기증상 ( 구토, 설사등 ), 림프절종창, 출혈등의증상과함께백혈구와혈소판이급격히감소하는것이특징이며, 주로산과들판의숲속에살고있는참진드기에의해매개된다. 중국과일본에이어 213년국내에서도 SFTSV가사람에서검출이되어국민건강을위협하고있으며, 국내에서 SFTSV에감염된환자는 213년에 36명의확진환자중에서 17명이사망, 214년에 55명의확진환자중에서 16명이사망하였으며, 215 년에는 79명의확진환자중 21명이사망하였다. 국내의국립공원은동물및식물등의자연보전이잘되어있는곳이며, 연간약 5,만명이이용하는장소로서참진드기의 SFTSV 감염실태조사와탐방로및비탐방로의감염실태조사를통해국립공원을이용하는국민의건강보호를위한적극적예방대책수립이필요하다. 또한현재사용되고있는유기인제살충성분의참진드기기피제의경우자연환경에대량사용시생태계에악영향을끼칠우려가있다. 따라서이를최소화하기위해참진드기의접근을효과적으로차단하는친환경적인천연참진드기기피제의개발이필요하다. 1. 연구목적 가. 중증열성혈소판감소증후군 (SFTS) 바이러스의자연환경내감염실태조사를위한기초자료확보자연환경내중증열성혈소판감소증후군 (severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS) 바이러스의감염실태조사를위하여전국권역별 5개국립공원 ( 북한산, 치악산, 주왕산, 덕유산, 월출산 ) 을선정해서연도별, 월별참진드기의변화추이및 SFTS virus(sftsv) 감염률자료를확보하고, 국립공원내탐방로및비탐방로별참진드기에감염된 SFTSV에대한감염실태조사를통해자연환경내로부터감염될수있는 SFTSV에대한예방대책을수립한다. 나. 중증열성혈소판감소증후군 (SFTS) 바이러스감염예방을위한유용물질연구 연구개발의내용및범위 1. 자연환경내 SFTSV 감염실태를조사를위한참진드기채집자연환경내 SFTSV의감염실태조사를위하여전국권역별 5개국립공원 ( 북한산, 치악산, 주왕산, 덕유산, 월출산 ) 을선정해서각채집지역별로참진드기활동시기 (3 월 ~11월 ) 에따라플래깅 (flagging) 과드래깅 (dragging) 방법을사용하여채집하였다. 채집지역에서채집활동을실시할때, 국립공원별로탐방로, 비탐방로를구분하여채집하였으며, 비탐방로는탐방로로부터 1-3m를숲으로들어가서채집을실시하였다. 모든참진드기는살아있는상태에서연구실로운반하여 SFTSV에대한감염실태를조사하였다. 자연환경내에서식하는참진드기가 SFTSV를야생동물및사람에전파시켜피해를일으키기때문에동물과인체에무해하고친환경적이며, 자연계에존재하는물질로서참진드기에대해기피효과가있는천연유용물질을발굴하여성분분석을통해진드기기피제개발의기초자료를제공한다. 2. 참진드기의종별, 발육단계별분류, 동정및분포조사 채집한참진드기는종별, 발육단계별로액침표본을제작하고사진을촬영하였다. 또한국립공원별로채집한모든참진드기는실체현미경하에서동정을실시하여엑 - i - - ii -

2 셀프로그램에자료를입력하였다. 동정된참진드기는공원별, 월별, 참진드기의종별, 발육단계별분포를분석하였으며, 식생과야생동물분포및기상데이터와비교분석하였다. 3. 참진드기 RNA 유전자추출및 SFTSV 유전자검출국립공원별로참진드기 SFTSV의감염률을조사하기위하여성충 (adult) 과약충 (nymph) 은개체별로 SFTSV 감염률 (infection rate, IR) 을조사하였으며, 유충 (larva) 은국립공원별, 채집일별, 참진드기종별로구분하여각각 1마리씩을 1개의풀 (pool) 로만들어서 SFTSV의감염여부를조사하여최소야외감염률 (minimum field infection rate, MFIR= 양성풀수 / 검사한총진드기마리수x1) 로계산하였다. SFTSV 증폭을위한 One-Step RT/Nested-PCR 방법과 RT real-time PCR 방법비교평가하여 SFTSV의 RNA 유전자추출및 SFTSV 유전자검출을위한표준분석절차를확립하였다. 4. 감염예방유용물질연구를위한참진드기기피효과천연물질발굴및성분분석참진드기기피효과가있을것으로추측되는천연물질의문헌조사를실시하고, 진드기기피효과가있는천연물의효과를확인하기위하여귤과레몬추출물을이용한예비실험을진행하였다. 연구결과 1. 참진드기채집결과자연생태계내에서서식하고있는참진드기조사를위하여전국 5개국립공원에서 215년 7월부터 11월까지총 9,766마리의참진드기가채집되었으며, 북한산에서 2,267마리, 치악산에서 1,76마리, 덕유산에서 1,357마리, 주왕산에서 2,797마리, 월출산에서 1,639마리가채집되었다. 이번조사에서채집한참진드기종은총 5종으로서작은소진드기 ( longicornis), 개피참진드기 ( flava), 일본참진드기 (Ixodes nipponensis), 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium), 한뿔엉에참진드기 ( japonica) 였다. 작은소진드기, 개피참진드기, 일본참진드기는성충암컷 (adult female), 성충수컷 (adult male), 약충 (nymph) 의발육단계에서모두채집되었으며, 뭉뚝참진드기는성충수컷과약충, 한뿔엉에참진드기는성충수컷의발육단계에서채집되었다. 유충단계의참진드기는동정에제한이있기때문에세부동정에서제외되었으며, 가시들피참진드기속 ( spp.) 과참진드기속 (Ixodes spp.) 의유충이채집되었다. 각국립공원별야생동물분포지역의수와채집된참진드기개체수와관계를단순회귀분석을실시한바반경 5m 및반경 1km 안에서출현하는야생동물빈도와채집된참진드기개체수와의관계는유의확률.1에서그리고반경 2km이내의야생동물출현빈도와채집된참진드기의개체수의관계는유의확률.5에서통계적으로유의한것으로나타났다. 각채집지역으로부터채집된참진드기의개체수에대한야생동물출현빈도는전체적으로야생동물의출현빈도가높을수록채집된참진드기의개체수는증가하는것으로나타났다. 2. 참진드기로부터 SFTSV 검출결과자연환경내에서식하는 5개국립공원에서채집한성충과약충총 1,47마리의참진드기로부터 SFTSV의검출을시도하였으며, 53마리로부터검출되어 3.61% 의감염률로나타났다. SFTSV의검출을시도한참진드기의성충과약충중에서 68.44%(1,47마리중 1,6마리 ) 는작은소진드기였으며, SFTSV의검출을위한실험결과각발육단계별 ( 성충수컷, 성충암컷, 약충 ) 에서모두 SFTSV가검출되었다. 개피참진드기는성충과약충총 436마리에서 SFTSV의검출을시도하였고, 성충수컷과암컷, 약충모두에서 SFTSV가검출되었다. 뭉뚝참진드기성충암컷은채집된개체가없었으며, 성충수컷 1마리와약충 4마리에서검출실험을진행하였고, 약충 1 마리에서 SFTSV가검출되었다. 일본참진드기에서는조사기간동안채집된모든성별, 발육단계에서 SFTSV가검출되지않았다. 유충단계의참진드기는크기가작아서개체별검사가제한되기때문에채집지역별로풀링하여 SFTSV 검사를진행하였으며, 총 8,284마리의참진드기를총 853풀로만들어 SFTSV의검출을시도하였으며, 26풀에서 SFTSV가검출되어.31% 의최소야외감염률로나타났다. 참진드기약충의전체감염률은 2.62% 였으며, 성충의전체감염률은 6.27% 로서성장발육단계별로감염률이높게나타났다. 유충으로부터 SFTSV가검출된참진드기종은모두가시들피참진드기속 ( spp.) 이었으며, 참진드기속 (Ixodes spp.) 에서는 SFTSV가검출되지않았다. 조사기간동안월별로성충과약충에서 SFTSV의검출결과 7월에 4.5%, 8월에 7.88%, 9월에 5.41%, 1월에 1.59%, 11월에 % 의감염률을나타내어 8월에가장높은감염률을보여주었다. 월별유충에서 SFTSV 검출결과 7월에 2.5%, 8월에.36%, 9월에.36%, 1월에.16%, 11월에 % 의최소야외감염률을나타내었다. 탐방로와비탐방로별검출결과를보면탐방로에서성충 161마리, 약충 353마리에대해서 SFTSV 검출을실시하였고, 감염률은성충에서 9.94%, 약충에서 2.55% 로확인되었다. 탐방로에서유충은 2,647마리서 1마리씩풀링하여 SFTSV 검출을실시하였으며, 최소야외감염률은.11% 로확인되었다. 비탐방로에서는성충 254마리, 약충 714마리에서 SFTSV 검출을실시하였고, 감염률은성충에서 3.94%, 약충에서 2.66% 로확인되었다. 비탐방로에서유충은 5,637마리에서 1마리씩풀링하여 SFTSV 검출 - iii - - iv - 을실시하였으며, 최소야외감염률은.41% 로확인되었다. 탐방로에서성충, 약충및유충의모든성장단계에서최소야외감염률은.89% 이었으며. 비탐방로에서채집된참진드기의모든성장단계에서는최소야외감염률이.79% 로확인되었다. 3. SFTS 바이러스의유전자염기서열분석결과본과제를통하여자연계에서서식하고있는참진드기로부터 SFTS 바이러스유전자양성 band를총 79개확인하였고, 이중 38개에서염기서열분석을실시하였다. 염기서열분석한 38개샘플중 33개에서는일본사람에서분리동정된 SFTSV strain과가장높은상동성을보였으며, 5개샘플은국내사람에서분리동정된 SFTSV strain과높은상동성을보였다. 이번연구에서국내야생생태계에서일본과국내에서분리된바이러스와유사성이높은 SFTSV가분포하고있음을알수있다. 감염률을파악함으로서자연환경내에서순환되는 SFTSV의순환을이해하는데도움이될수있다. 현재까지는실험적으로 SFTSV를실험동물에감염시킨후참진드기를감염동물로부터흡혈시켜감염률을평가하는실험이진행되지않아정확한전파정도를알기어려운상황이며, 난계대전염이어느정도가이루어지는지에대하여밝혀진바가거의없는상황이다. 따라서정확한감염률을산출함으로서참진드기의단계별바이러스의전파정도를유추할수있고, 참진드기에서의감염정도와야생동물에서의감염정도를비교평가할수있을것으로사료된다. 연구결과를토대로한 SFTSV 감염예방대책을마련하고, 국립공원탐방객대상으로 SFTSV 예방홍보자료에활용할수있을것으로판단된다. 또한자연환경내참진드기예방대책연구및자연계내에서순환되는 SFTSV의전파양상에관한연구의기초자료로쓰일것으로기대된다. 4. 감염예방유용물질연구결과 참진드기에기피효과가있는것으로알려진대표적인화합물 (DEET, Icaridin, Permethrin, Indalone, Deltamethrin) 들을이용한기피효과실험들의문헌조사를진행하였다. 참진드기에기피효과가알려져있는천연물들 (Tanacetum vulgare, Corymbia citriodora, Lavandula angustifolia, Pelargonium graveolens, Dianthus caryophyllum, Artemisia abrotanum, Chamaecyparis nootkatensis, Gynandropsis gynandra, BioUD, Methyl jasmonate, Rosmarinus officinalis, Citrus peel extract) 을이용한진드기의기피효과실험들의문헌조사를진행하였다. 귤과레몬 (Citrus unshiu, Citrus limon) 껍질추출물을이용한진드기기피효과예비실험을통해최대 98% 까지의기피율을확인하였으며, 이를통해귤과레몬껍질의기피효과가있다는가능성을확인하였다. 연구결과활용에대한건의 이연구에서는흡혈을하지않은참진드기성충과약충은개체별로 SFTSV 분석을실시하여감염률 (infection rate, IR) 을계산하였으며, 유충은풀링 (pooling) 하여최소야외감염률 (minimum field infection rate, MFIR) 로계산함으로써실제자연환경내에서서식하는참진드기에 SFTSV의감염정도를정확하게측정하고자하였다. 기존조사에서는대부분이참진드기를풀링하여조사한최소야외감염률로조사하여최소감염률을나타내었으므로자연환경내에서서식하는참진드기에서실제감염률을정확하게파악하기가어려운측면이있었다. 따라서동물이나사람으로부터흡혈하지않은참진드기에서 SFTSV의감염정도를정확히파악하고, 흡혈하지않은유충에서야외최소감염률의조사와야생동물의 - v - - vi -

3 Abstract To survey the distribution of Ixodid tick and infection of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV) in natural environment from 5 national parks (Bukhansna, Chiaksan, Deogyusan, Jumangsan, and Wolchulsan) in Korea, total of 9,766 ticks were collected from July to November in 215. In which, 2,267 ticks were collected from Bukhansan, 1,76 ticks from Chiaksan, 1,357 ticks from Deogyusan, 2,797 ticks from Juwangsan, and 1,639 ticks from Wolchulsan national parks. The current research was conducted and the collection was focused during the hatching season of Ixodid, so the collection of the larva is relatively high. Therefore, for better data collection, adult and nymph need to be collected starting on the month of March where it is the best season while the Ixodid tick is most active. Collected ticks from 5 national parks were 5 species, longicornis, H. flava, H. japonica, Amblyomma testudinarium and Ixodes nipponensis. The number of ticks were 1,9 H. longicornis, 443 H. flava, 1 H. japonica, 8,252 larval ticks of spp., 24 I. niponensis, 32 larva ticks of Ixodes spp., and 5 Amblyomma testudinarium. Tick species that showed positive for SFTSV were found in the three species of H. longicornis adult and nymph, H. flava adult and nymph, spp. larva, A. testudinarium nymph, and also the three developmental of adult, nymphal and larval ticks. The infection rate of SFTSV from individual adult and nymph ticks were 3.61% (53/1,47) from 5 national parks. Of the tested adult and nymph Ticks, H. longicornis (68.44%, 1,6/1,47) was the most abundant species, followed by H. flava (29.66%, 436/1,47), I. nipponenesis (1.56%, 23/147), A. testudinarium (.34%, 5/1,47), respectively. In terms of larval ticks from the investigated 5 national parks, among the entire pool of 853 (8,284 ticks), 26 pool showed positive for SFTSV, the minimum field infection rate (MFIR) of.31%. The overall infection rates (IR) of the nymph and adult are 2.62% and 6.27%, respectively. The infection rate of SFTSV from adult and nymph ticks in survey period (between July to November) were 4.5% in July, 7.88% in August, 5.41% in September, 1.59% in October, % in November, respectively. The minimum field infection rate of SFTSV from larva ticks in survey period were 2.5% in July,.36% in August,.36% in September,.16% in October, % in November, respectively. There is no statistical significance of infection rate of SFTSV from ticks between trail and non-trail in national parks. Examining the ticks that were collected domestically, the SFTSV data from ticks shows infection rate at under 1%. Prior research shows the result of collected ticks and the pool through MFIR numbers statistically. The reason behind high infection rate of ticks from SFTSV in current research is, because it investigates the individual infection rate of ticks from adult and nymph. Thus, it indicates actual adult and nymphal infection rate in the natural environment. However, due to larval size being really small, at least 1 ticks were pooled to indicate MFIR. From the collected ticks from the investigated national parks, amplified SFTSV nucleocapsid protein S segment sequences showed in 2 genotypes, which means that Korea s natural environment is also similar to the reported SFTSV genotypes of Japan and Korea. Literature review of the 5 known compounds and 12 natural plant extract that are excellent in tick repellent were completed, and preliminary research of lemon peel extract for tick repellent was conducted. During future research, it is expected to discover effective and beneficial tick repellent based on literature review and preliminary research. - vii - - viii - 요약문 ⅰ 목차 ⅸ 표목차 ⅹⅲ 그림목차 ⅹⅵ 1장서론 1 1절연구의배경및필요성 1 1. 중증열성혈소판감소증후군 1 2. 국외현황 1 3. 국내현황 4 4. 연구의필요성 8 2절연구목적 1 2장연구내용및방법 11 1절연구내용 11 2절연구추진체계 11 3절연구조사및분석방법 참진드기채집지선정및채집교육 13 가. 채집지역선정 13 나. 연구요원대상참진드기채집교육 참진드기채집방법및채집 참진드기의분류및동정 18 가. 참진드기의동정및분류방법확립 18 나. 참진드기동정및기록, 보관 SFTS 바이러스유전자검출및분석 3 가. 참진드기로부터 viral RNA 추출 3 나. 참진드기로부터 SFTS 바이러스검출 3 다. SFTS 바이러스감염률조사및분석 감염예방유용물질연구 37 3장연구결과및고찰 38 1절조사국립공원별참진드기채집결과 북한산국립공원채집결과 4 2. 치악산국립공원채집결과 덕유산국립공원채집결과 5 4. 주왕산국립공원채집결과 월출산국립공원채집결과 6 2 절 SFTSV 유전자검출결과 국립공원별 SFTSV 검출결과 71 가. 북한산국립공원검출결과 71 나. 치악산국립공원검출결과 76 다. 덕유산국립공원검출결과 79 라. 주왕산국립공원검출결과 82 마. 월출산국립공원검출결과 야생동물분포및식생분포도와비교분석 87 가. 북한산국립공원 87 나. 치악산국립공원 89 다. 덕유산국립공원 91 라. 주왕산국립공원 93 마. 월출산국립공원 95 바. 야생동물출현빈도에따른채집된참진드기개체수분포 97 3 절 SFTSV 유전자분석결과 1 1. 유전자염기서열분석결과 1 2. 아미노산 (amino acid) 서열분석결과 ix - - x -

4 4 절감염예방유용물질연구결과 참진드기기초연구조사 123 가. 참진드기감각기관 123 나. Haller's organ complex 123 다. 순판 ( 楯板, scutum) 124 라. Behavioral Studies 124 마. 참진드기생활사 참진드기에기피효과가있을것으로생각되는화합물 126 가. Diethyltoluamide (DEET) 126 나. Icaridin 129 다. Permethrin 132 라. Indalone 133 마. Deltamethrin 참진드기에기피효과가있을것으로예측되는천연유용물질 134 가. Tanacetum vulgare essential oil 134 나. Corymbia citriodora oil 136 다. Lavandula angustifolia oil 137 라. Pelargonium graveolens oil 138 마. Dianthus caryophyllum oil 139 바. Artemisia abrotanum 추출물 141 사. Chamaecyparis nootkatensis oil 143 아. Gynandropsis gynandra oil 144 자. BioUD 146 차. Methyl jasmonate 147 카. Rosmarinus officinalis essential oil 149 타. 레몬껍질추출액 15 파. 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질 참진드기기피물질예비실험결과 154 가. 재료및방법 154 나. 기피물질실험군 154 다. 진드기기피효과시험법 157 라. 실험결과 장참고문헌 장부록 장결론 장기대성과및향후계획 xi - - xii - Table 1-1 일본에서발생한 SFTS 확진환자 4 Table 1-2 국내지역및연도별 SFTS 환자발생건수 7 Table 1-3 국내연령별 SFTS 확진환자수 8 Table 2-1 SFTS 바이러스검출을위한 One-step RT/Nested-PCR primers 31 Table 2-2 SFTS 바이러스검출을위한 real-time PCR primers 31 Table 2-3 조사국립공원야생동물종및개체수 36 Table 3-1 국립공원별참진드기채집결과 38 Table 3-2 조사국립공원으로부터채집한전체참진드기의월별, 종별마리수 39 Table 3-3 조사국립공원으로부터탐방로, 비탐방로별채집결과 4 Table 3-4 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 43 Table 3-5 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 44 Table 3-6 북한산국립공원의참진드기채집날짜별기상데이터 45 Table 3-7 북한산국립공원의참진드기채집지역별식생분포 46 Table 3-8 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 48 Table 3-9 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 49 Table 3-1 치악산국립공원의참진드기채집날짜별기상데이터 49 Table 3-11 치악산국립공원채집지역별식생분포 5 Table 3-12 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 52 Table 3-13 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 53 Table 3-14 덕유산국립공원채집날짜별기상데이터 54 Table 3-15 덕유산국립공원채집지역별식생분포 55 Table 3-16 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 57 Table 3-17 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 58 Table 3-18 주왕산국립공원채집날짜별기상데이터 59 Table 3-19 주왕산국립공원채집지역별식생분포 59 Table 3-2 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 61 Table 3-21 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 62 Table 3-22 월출산국립공원채집날짜별기상데이터 63 Table 3-23 월출산국립공원채집지역별식생분포 64 Table 3-24 조사국립공원별참진드기성충및약충채집수및 SFTSV 감염률 66 Table 3-25 조사국립공원별참진드기유충채집수및 SFTSV 감염률 67 Table 3-26 참진드기성장단계별 SFTSV 감염률 67 Table 3-27 국립공원별 SFTSV 양성참진드기정보 ( 성충, 약충 ) 68 Table 3-28 참진드기성충, 약충에대한종별 SFTSV 검출결과 69 Table 3-29 참진드기유충에대한종별 SFTSV 검출결과 7 Table 3-3 참진드기로부터월별 SFTSV 검출결과 7 Table 3-31 탐방로와비탐방로별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 71 Table 3-32 북한산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 72 Table 3-33 북한산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 72 Table 3-34 북한산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 73 Table 3-35 치악산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 76 Table 3-36 치악산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 76 Table 3-37 치악산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 77 Table 3-38 덕유산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 79 Table 3-39 덕유산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 79 Table 3-4 덕유산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 8 Table 3-41 주왕산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 82 Table 3-42 주왕산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 82 Table 3-43 주왕산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 83 Table 3-44 월출산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 85 Table 3-45 월출산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 85 Table 3-46 월출산국립공원월별 SFTSV 검출결과 86 Table 3-47 진드기채집지로부터반경 5m이내야생동물출현빈도와진드기개체수의회귀분석결과 98 Table 3-48 진드기채집지로부터반경 1km이내야생동물출현빈도와진드기개체수의회귀분석결과 98 Table 3-49 진드기채집지로부터반경 2km이내야생동물출현빈도와진드기개체수의회귀분석결과 99 Table 3-5 작은소진드기 ( longicornis) 의생활사 125 Table 3-51 DEET의참진드기기피실험결과 (Human trap, Flag-dragging test) 127 Table 3-52 Icaridin의참진드기기피실험결과 (sprayed hair test) 13 Table 3-53 Icaridin의참진드기기피실험결과 (Lower human leg test) 131 Table 3-54 카네이션 (Dianthus caryophyllum) 추출물의 GC/MS를이용한성분분석결과및진드기기피효과측정 14 Table 3-55 쑥 (Artemisia abrotanum) 추출물의 GC/MS, TLC를이용한성분분석결과및진드기기피효과 142 Table 3-56 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (1) 151 Table 3-57 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (2) 152 Table 3-58 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (3) xiii - - xiv -

5 Table 3-59 귤, 레몬및시판중인제품에대한참진드기기피효과결과 159 Fig. 1-1 중국 SFTS 발생지역 2 Fig. 1-2 일본에서 SFTS 발생한 19개현 3 Fig. 1-3 일본에서발생한 SFTS 증례 3 Fig. 1-4 국내연도별 SFTS 환자발생현황 5 Fig. 1-5 국내월별 SFTS 확진환자보고 7 Fig. 1-6 야생동물에서천연기피물질의적용 9 Fig. 2-1 연구추진체계도 13 Fig. 2-2 전국권역별 5개국립공원위치 13 Fig. 2-3 참진드기채집현장교육 14 Fig. 2-4 참진드기채집, 기록, 보관, 리스트작성, 운송과정및동정 15 Fig. 2-5 참진드기채집을위한준비물 15 Fig. 2-6 참진드기채집방법 16 Fig. 2-7 탐방로와비탐방로의구분 16 Fig. 2-8 진드기로고들어간조끼준비 17 Fig. 2-9 국립공원별참여연구원및연구보조원의채집지역 17 Fig. 2-1 작은소진드기 ( longicotnis) 의형태 19 Fig 개피참진드기 ( flava) 의형태 2 Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 의형태 21 Fig 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 의형태 22 Fig 실체현미경 23 Fig 참진드기동정 24 Fig 작은소진드기 ( longicornis) 성충수컷 24 Fig 작은소진드기 ( longicornis) 성충암컷 25 Fig 작은소진드기 ( Longicornis) 약충 25 Fig 개피참진드기 ( flava) 성충수컷 26 Fig. 2-2 개피참진드기 ( flava) 성충암컷 26 Fig 개피참진드기 ( flava) 약충 27 Fig 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 27 Fig 한뿔엉에참진드기 ( japonica) 성충수컷 28 Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충수컷 28 Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충암컷 29 Fig 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 성충암컷 29 - xv - - xvi - Fig SFTS 바이러스유전자 (RNA) 추출장비 3 Fig 실시간유전자증폭기 32 Fig SFTS 바이러스양성샘플로부터유전자검출비교평가결과 33 Fig. 2-3 참진드기샘플로부터유전자검출비교평가결과 34 Fig 최소야외감염률계산방법 35 Fig 조사국립공원의야생동물상 37 Fig. 3-1 북한산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 ( 우이, 정릉, 구기, 불광, 산성지구 ) 41 Fig. 3-2 북한산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 ( 도봉, 송추지구 ) 42 Fig. 3-3 치악산국립공원의탐방안내도및참진드기채집지역 47 Fig. 3-4 덕유산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 51 Fig. 3-5 주왕산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 56 Fig. 3-6 월출산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 6 Fig. 3-7 참진드기성장단계별 SFTSV 감염률 67 Fig. 3-8 북한산국립공원 SFTSV 양성검출지역 ( 우이, 정릉. 구기, 불광, 산성지구 ) 74 Fig. 3-9 북한산국립공원 SFTSV 양성검출지역 ( 도봉, 송추지구 ) 75 Fig. 3-1 치악산국립공원 SFTSV 양성검출지역 78 Fig 덕유산국립공원 SFTSV 양성검출지역 81 Fig 주왕산국립공원 SFTSV 양성검출지역 84 Fig 월출산국립공원 SFTSV 양성검출지역 86 Fig 북한산국립공원참진드기채집지역및야생동물, 식생분포지도 88 Fig 치악산국립공원참진드기채집지역및야생동물, 식생분포지도 9 Fig 덕유산국립공원참진드기채집지역및야생동물, 식생분포지도 92 Fig 주왕산국립공원참진드기채집지역및야생동물, 식생분포지도 94 Fig 월출산국립공원참진드기채집지역및야생동물, 식생분포지도 96 Fig 진드기채집지로부터반경 5m이내야생동물출현빈도와진드기개체수관계 97 Fig. 3-2 진드기채집지로부터반경 1km이내야생동물출현빈도와진드기개체수관계 98 Fig 진드기채집지로부터반경 2km이내야생동물출현빈도와진드기개체수관계 99 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기서열의 MultAlin 분석결과 (1) 111 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기서열의 MultAlin 분석결과 (2) 112 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기서열의 MultAlin 분석결과 (3) 113 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV S DNA 유전자단편의계통발생학적관계도 114 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV S 유전자단편을 amino acid 로전환하여 MultAlin 분석결과 121 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터아미노산염기서열의계통발생학적관계도 122 Fig 암컷과수컷참진드기의형태 123 Fig 참진드기의첫번째다리의발목마디전자현미경사진 124 Fig. 3-3 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 의등부위그림 124 Fig DEET의참진드기기피실험결과 (Modified human bioassay) 128 Fig 사람아랫다리부분에서실험 설치사진 131 Fig 쑥국화 135 Fig 레몬유칼립투스 136 Fig 라반둘라 137 Fig 구문초 138 Fig 카네이션 139 Fig 카네이션 (Dianthus caryophyllum) 추출물의 GC/MS를이용한분석결과 14 Fig 쑥 141 Fig. 3-4 쑥 (Artemisia abrotanum) 추출물의 GC/MS를분석결과 142 Fig 노란색노송나무 143 Fig Vertical bioassay with host-attr-actant stimuli 를위한실험도구 144 Fig 풍접초 145 Fig 토마토 146 Fig 사람의피부와 filter paper를이용한진드기기피효과실험 147 Fig 자스민 148 Fig 로즈마리 149 Fig 진드기의기피평가를위한점수부여결과 15 Fig 참진드기분리동정 154 Fig. 3-5 레몬, 귤껍질추출물과회전진공농축기 155 Fig 귤, 레몬껍질추출물농축액과희석과정 155 Fig 진드기기피제상품 156 Fig 진드기기피효과측정 157 Fig 생물배양기및기피제별튜브 157 Fig 감귤실험군의시간별진드기움직임의변화 159 Fig 레몬실험군의시간별진드기움직임의변화 16 Fig 제품실험군의시간별진드기움직임의변화 16 Fig 각실험군중가장뛰어난실험군의비교 xvii - - xviii -

Fig. 3-59 대조군, 실험군의평균기피율비교 161 Fig. 3-6 실험군, 대조군의 1 시간째의기피현황비교 162 1 절연구의배경및필요성 1.

, 213; Oh et al., 213). SFTS는 6 14일의잠복기를거쳐임상증상이발현되며, 발열, 피로감, 식욕저하, 소화기증상 ( 구토, 설사등 ), 림프절종창, 출혈등의증상이나타난다.

6 Fig 대조군, 실험군의평균기피율비교 161 Fig. 3-6 실험군, 대조군의 1 시간째의기피현황비교 절연구의배경및필요성 1. 중증열성혈소판감소증후군 중증열성혈소판감소증후군 (severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS) 바이러스 (SFTSV) 는 Bunyaviridae에속하는 Phlebovirus로서 group V (-)ssrna 바이러스이며참진드기 (Ixodidae) 에의해전파되는매개체전염병이다 (Cui et al., 213; Oh et al., 213). SFTS는 6 14일의잠복기를거쳐임상증상이발현되며, 발열, 피로감, 식욕저하, 소화기증상 ( 구토, 설사등 ), 림프절종창, 출혈등의증상이나타난다. 진단을위하여바이러스의분리및동정, 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR) 법, 효소면역측정법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 면역형광분석법 (immunofluorescence assay, IFA), 중화시험법 (neutralization test) 등이있으며, 감별진단을위하여신증후출혈열, 렙토스피라증, 쯔쯔가무시증, 아나플라스마증등과구별을해야한다. SFTSV를매개하는참진드기종은절지동물문 (Arthropoda), 협각강 (Chelicerata), 진드기아강 (Acari), 참진드기목 (Ixodida), 참진드기과 (Ixodidae) 에속하며, 인간과동물에게위해병원체를매개하고있는무척추동물이다 ( 이, 212). 2. 국외현황 중국에서 29년 3월 ~7월중순, 중국중앙지역 ( 호북성과하남성의산악지역 ) 에서원인불명의질환이집단발생하였다 (Jiang et al., 212). 211년원인체인 SFTSV가확인되어총 2,47건 (129명사망, 6%) 이발생하여중국조사결과 11개지역 ( 랴오닝성, 산둥성, 장쑤성, 안후이성, 허난성, 후베이성, 저장성, 산시성, 장시성, 광시성, 후난성 ) 에서환자발생이확인되었다 (Yu et al. 211; Deng et al., 213)<Fig. 1-1>. 최근중국내동물에서 SFTSV 항체가조사결과양에서 69.5%(328/472), 소에서 6.5%(59/842), 개에서 37.9%(136/359), 돼지에서 3.1%(26/839), 닭에서 47.4%(25/527) 로나타났으며, 1.7~5.3% 의동물에서 SFTSV RNA가검출되었다 (Niu et al., 213). 또한사람, 양, 소및개로부터병원체인바이러스를분리하였다. - xix Fig. 1-2 일본에서 SFTS 발생한 19 개현 ( 일본국립감염증연구소 ). Fig. 1-1 중국 SFTS 발생지역 ( 적색부분, Yu et al. 211). 일본에서는 213년 1월일본에서최초 SFTS 감염사례가확인된이후과거사례조사를통해 7명이추가로 SFTS로진단되었고 (Takahashi et al., 213), 25년 2명, 21년 1명, 212년 5명의발병이확인되었다. 일본에서조사된 SFTS 발병시기는참진드기가활발하게활동하는 4~11월로보고되었다. 일본의확인된지역은 213 년 1월까지나가사키현 (2명), 히로시마현 (1명), 마구치현 (1명), 히메현 (1명), 고치현 (1 명 ), 사가현 (1명), 미야자키현 (1명) 으로나타나 1월까지는서일본지역에서만환자가확인되었으나 ( 일본국립감염증연구소 )<Fig. 1-2> 매개체나야생동물의해북쪽으로계속하여확대되면서검출되고있다 ( 일본국립감염증연구소, 213년 8월 29 일 ). 일본에서 213년에총 4명, 214년에총 58명, 215년에총 59명이감염되었다고보고되었으며, 진단이확인된환자는 2세이상에서나타났지만, 사망자에있어서는모두 5세이상에서나타났다. Figure 8에월별발생건수를나타낸것을보면진드기의활동이왕성한 4월부터 9월사이에환자수가높게나타나는것으로보인다 <Fig. 1-3>. 중국과일본에서채집한 11종중 5종참진드기 ( longicornis, H. kitaokai, H. megaspinosa, H. flava, Amblyomma testudinarium) 에서바이러스유전자가검출되었다. 환자발생이없는현의동물에서도바이러스가검출되었다. 사슴, 멧돼지, 사냥개에서검출되었으며, 동물의종류와숫자를늘려연구조사중에있다. 사슴의항체가멧돼지보다더높게나타나고있다. 일본환자에서발견된 SFTSV는중국바이러스와유전자구조가조금달라이전부터존재하고있었던것으로추정하고있다 ( 厚生労働省健康局結核感染症課, 213 年 8 月 29 日 ). Fig. 1-3 일본에서발생한 SFTS 증례 ( 일본국립감염증연구소 )

Table 1-1 일본에서발생한 SFTS 확진환자 ( 일본국립감염증연구소 216. 1) 3. 국내현황 중국및일본에서 SFTSV 감염환자가발생하여사망자가보고되었으며, 국내에서 도질병관리본부에의해 213 년 5 월작은소진드기 (H. longicornis) 내 SFTSV 발견사 실이발표된바있고, 전국적으로감염의심환자가늘어나고있는상황이다.

또한가축에서 SFTSV 의감염실태검사결과 213 년 7 월 19 일농림식품검역본부로 부터국내사육가축 2,38 두 ( 소 747 두, 돼지 45 두, 염소 187 두, 닭 654 수, 이중방 목하는가축 469 두가포함 ) 에대하여 SFTSV 감염여부를조사하여전두수음성으 로나타났다고보고되었다 ( 농림축산식품부, 213. 7. 19).

7 Table 1-1 일본에서발생한 SFTS 확진환자 ( 일본국립감염증연구소 ) 3. 국내현황 중국및일본에서 SFTSV 감염환자가발생하여사망자가보고되었으며, 국내에서 도질병관리본부에의해 213 년 5 월작은소진드기 (H. longicornis) 내 SFTSV 발견사 실이발표된바있고, 전국적으로감염의심환자가늘어나고있는상황이다. 국내에 서는 213 년 5 월첫환자발생을보고한이후국내에서채집한작은소진드기 (H. longicornis) 에서 SFTSV 가.5% 검출되었다고보고되었다 ( 보건복지부, ). 또한가축에서 SFTSV 의감염실태검사결과 213 년 7 월 19 일농림식품검역본부로 부터국내사육가축 2,38 두 ( 소 747 두, 돼지 45 두, 염소 187 두, 닭 654 수, 이중방 목하는가축 469 두가포함 ) 에대하여 SFTSV 감염여부를조사하여전두수음성으 로나타났다고보고되었다 ( 농림축산식품부, ). 국내에서최근에사람에서확진된 SFTS 발병현황을살펴보면 213 년도에 36 명 확진환자중 17 명사망으로치사율 47.2% 를나타났으며, 214 년도에국내 SFTS 확 진환자 55 명중에서 15 명이사망하여치사율이 27.3% 로나타났다 ( 질병관리본부 ). 215 년도에 7 월까지 18 명이 SFRSV 감염으로확진되었고이중 5 명이 SFTSV 감염으로사망하였다 <Fig. 1-4>. Fig. 1-4 국내연도별 SFTS 환자발생현황 (215년 7월까지, 질병관리본부자료가공 ). SFTSV는매개진드기를통한전파이외에도감염환자의혈액, 체액과직접적접촉을통해의료진, 장의사, 가족들에게전파된사례도보고된바있다 (Bao et al., 211; Gai et al., 212). 국내에서는 215년 SFTS 환자의응급실심폐소생술과정에서의료진이 2차감염된사례를보도하였다. 214년 9월 3일정오경위중한상태의출혈증상환자가 OO의료기관 을방문하여심폐소생술을받았으나, 입원후 12시간후인 9월 4일새벽 2시경에사망하였다. 심폐소생술실시 8일후심폐소생술에직접참여한의료진 ( 의사 2명, 간호사 2명 ) 들이경미한감염증상을호소하여역학조사및혈청학적추적조사를실시한결과 2차감염을확인하였다 ( 질병관리본부보도자료, 215). 최근발표에의하면국내 SFTSV 감염에의한사망자평균연령의연령대 (73.3±14.세) 는생존자 (65.7±24.7세) 보다통계적으로유의미하게높게나타나고령자가감염될경우더위험할수있는것으로나타났으며, 감염자의평균연령은 69.1세이지만 4대환자도발생하였다 ( 연합뉴스, ). 국내에서참진드기바이러스에감염돼숨진환자는모두 62세이상이며, 감염자의 9% 이상은평소참진드기에자주노출되는직업에종사한것으로나타났다. 국내환자수는제주도가 6명으로가장많았으며서울, 대전, 광주, 경기, 충북, 전북에서는환자가보고되지않았으며, 전체환자 29명중 25명은평소농사와임업등으로지속적으로참진드기에노출될위험이큰경우였으나참진드기에물린자국이분명하게확인된환자는 8명에그쳤다. 실제로환자의 9% 는밭농사나임업에종사, 직업적으로참진드기에노출될위험이큰것으로보아 SFTS 감염을의심하는기준으로참진드기에물린자국보다는지속적으로참진드기에노출되는환경인지가더중요할것으로예측하고있다. 국내서식하는참진드기중가장많은분포를보이는작은소진드기 (H. longicornis) 에감염된 SFTSV 연구조사를보면, 213년 7월 31일서울시가 8개한강공원과월드컵공원등 14개도시공원 1여개지점에서작은소진드기분포실태를조사한결과, 일부한강공원에서작은소진드기 126마리가채집되었다. 해당참진드기에대해 SFTSV 검사를한결과, 바이러스가검출되지않았다고보고되었다 ( 서울시, ). 213년 9월 8일서울시보건환경연구원은 6월 17일부터 8월 27일까지한강공원및주요대형공원 22개소, 11개지점을선정해작은소진드기를채집하여 SFTSV 감염여부를검사한결과작은소진드기는한강공원 8개소 46개지점에서 95마리, 주요대형공원 14개소 64개지점에서 637마리등총732마리가채집되었으나이들작은소진드기에서 SFTSV는검출되지않았다고보고되었다 ( 서울시, ). 213년 1 월 15일부산시보건환경연구원은 SFTSV 예방및차단을위해관내 16개구 군의야산및공원등을중심으로지난 8월 5일부터 1월 2일까지작은소진드기 (H. longicornis) 생육실태조사를실시하였다. 부산지역작은소진드기서식지로예상되는숲과야산, 산기슭, 축사근처를비롯해시민들의왕래가잦은인근등산로, 체육공원, 생태공원등 16개구 군 89지점에대해폭넓게진행되었다. 조사결과 16개구 군의야산및공원등에서 7마리, 농촌지역에서생활하는동물 ( 개 ) 에서 34마리등모두 14마리의참진드기가채집되었다. 분류결과 12마리가작은소진드기로밝혀졌고, 발생단계별로는성충 32마리, 약충 3마리, 유충 4마리로확인되었다. 작은소진드기가많이채집된지점은사상구, 기장군, 해운대구, 사하구, 금정구, 중구등서식환경이용이한산기슭과축사근처풀이많은지역, 곤충및철새서식지등이며농촌지역의논과밭에서는 1 마리도채집되지않았다. 보건환경연구원은채집된작은소진드기를대상으로 SFTS바이러스감염여부확인을위한바이러스검사를실시하였으며, 검사결과 12마리모두에서바이러스가검출되지않았다고보고하였다 ( 부산시보건환경연구원, ). 국내에서 SFTS가처음보고된 213년이후질병관리본부의감염병통계시스템에서 213년에서 215년까지월별확진환자수를보면 213년 7월 1명, 214년 1월 12명, 215년 7월과 9월각각 16명으로연도별로 7월에서 1월사이에가장높은 SFTS 확진환자수를보고하였다 <Fig. 1-5.>. 연도별로는 213년 36명, 214년 55명, 215년 79명의 SFTS 확진환자수를보고하여처음보고된이후매년환자수가늘어났으며, 시도별확진환자수를비교했을때경북에서총 34명으로가장많은환자가발생하였다. SFTS 감염환자의연령대는 1세부터 7세이상까지발생하였지만 5대이상의고연령대에서 85.29%( 확진환자 17명중 145명 ) 를차지하였다 <Table 1-2, 1-3>. Fig. 1-5 국내월별 SFTS 확진환자보고 ( 자료 : 질병관리본부감염병웹통계시스템 ). Table 1-2 국내지역및연도별 SFTS 환자발생건수 ( 자료 : 질병관리본부감염병 웹통계시스템 ) 년도 213 년도 214 년도 215년도 시도 전국 서울 5 부산 1 대구 인천 1 4 광주 대전 2 울산 2 2 경기 8 7 강원 충북 2 충남 전북 2 전남 경북 경남 제주 세종 1 미상

Table 1-3 국내연령별 SFTS 확진환자수 ( 자료 : 질병관리본부감염병웹통계시스템 ) 감염 213-215 연령중증열성혈소판감소증후군 ~9세 1~19 세 2 2~29 세 9 3~39 세 4 4~49 세 1 5~59 세 29 6~69 세 42 7세이상 74 4.

8 Table 1-3 국내연령별 SFTS 확진환자수 ( 자료 : 질병관리본부감염병웹통계시스템 ) 감염 연령중증열성혈소판감소증후군 ~9세 1~19 세 2 2~29 세 9 3~39 세 4 4~49 세 1 5~59 세 29 6~69 세 42 7세이상 연구의필요성자연환경내에서순환하고있는 SFTSV의이해를돕기위하여자연환경이잘보존되어연간약 5,만명이이용하는국립공원을대상으로참진드기에감염된 SFTSV에대한자료를확보하지못하고있어국민보건을위한적극적예방대책을수립하지못하고있으므로국립공원을대상으로탐방로및비탐방로별위험분석 (risk analysis) 이필요하였다. 참진드기는국내에서지역에따라차이가있지만 3월부터활동을시작하여 11월정도까지동물또는사람으로부터흡혈을하며생존하고있으며, 참진드기의생활환 ( 알, 유충, 약충, 성충 ) 이 1년에서 3년에걸쳐나타나기때문에최소 3년정도의지속적인조사를통하여참진드기와 SFTSV의변화추이를파악할수있으며, 참진드기에감염된 SFTSV의자연환경계에서순환의이해를통해동물간의전파와사람에게감염되는순환의차단대책마련을위한기초자료확보가필수적이다. 또한 SFTS는치료법이아직개발되지않은상태에서참진드기매개질환인아나플스마증 (anaplsmosis) 의원인체인 Anaplasma phagocytophilum 병원체가발견되었다. 아나플라즈마균에의해나타나는질병으로항생제를이용해치료가가능하다는것이다른점이지만, 중국과일본에서발병후에우리나라에서발병되었다는점을고려하여볼때, 기후변화에따라외부의진드기들이들어오기시작하면서진드기를매개로한전염병원인체들역시증가하고있을것으로추정된다. 국내참진드기의종류및개체수가증가되고있고, 그에따라참진드기에의해나타나는질병역시증가하고있지만, 참진드기를기피할수있는기피제에대한 연구는많이이루어져있지않다. 시중에판매되고있는진드기기피제의경우, 야외에서접하게되는참진드기나털진드기와는다른집먼지진드기에주로효과가있는제품들이거나유기인제, N,N-Diethyl-meta-toluamide(DEET) 등의살충성분을이용한기피제가대부분이며, 이러한기피제의사용은인체와야생조류에악영향을미칠수있다. 때문에사람과동물의외부활동에사용될수있으며, 친환경적이고인체에무해하면서참진드기를기피함으로서매개질병감염예방을위한천연유용물질에대한연구가필요하다. 기존의연구에따르면감귤류의껍질에서추출한성분이꼬리소참진드기 (Boophilus microphilus) 에대해살비효과가있으며, 특히덜익은껍질에서그효과가뛰어난것으로밝혀져있다 (Narong et al, 1996). 코스트리카에서식하는 Capuchin Monkeys(Cebus capuciatus) 의경우, 레몬, 라임등의 Citrus 속의과일을몸에문지름으로써진드기퇴치와모기퇴치효과를얻고찌르레기와코아티 (Coati) 의경우에도레몬이나라임의껍질이나줄기혹은그것으로만든과즙을급여하면몸에문지르는것을볼수있다. 또한여러종류의감귤류의성숙단계별껍질에서추출한오일성분을분석한결과, 레몬에서성숙했을때, D-limonene 의함량이높아지는것을알수있으며, 이성분은꼬리소참진드기에서살비효과가있는것으로알려져있어미성숙한감귤과레몬에서추출한물질을이용할경우, 우리나라에서우점종의진드기로알려진작은소진드기 (H. longicornis) 에도적합한기피제를개발할수있을것으로생각된다 <Fig. 1-6>. A B C Fig. 1-6 야생동물에서천연기피물질의적용. A, 레몬조각을등에문지르고있는갈색꼬리감기원숭이 (Tufted capuchin monkey, Cebus apella); B, 레몬조각을몸통과날개에문지르고있는넓적꼬리찌르레기사촌 (Boat-tailed grackle, Quiscalus major); C, 꼬리에레몬조각을문지르고있는흰코코아티 (White nosed coati, Nasuanarica) ( 출처 : Narong et al, 1996) 절연구목적 본연구에서는자연환경내에서중증열성혈소판증후군바이러스의감염실태조사를위해질병전파의매개체로알려진참진드기를채집하여 SFTSV의감염실태조사를하였고, 감염예방을위한유용물질발굴을위한연구목적으로실시되었다. (1) 중증열성혈소판감소증후군 (SFTS) 바이러스의자연환경내감염실태조사를위한기초자료확보자연환경내 SFTSV의감염실태조사를위하여전국권역별 5개국립공원 ( 북한산, 치악산, 주왕산, 덕유산, 월출산 ) 을선정해서연도별, 월별참진드기류의변화추이및 SFTSV 감염률데이터를확보하고, 국립공원내참진드기 SFTS 감염실태를조사하여탐방로및비탐방로별위험분석 (risk analysis) 을통해 SFTS 예방대책을수립한다. (2) 중증열성혈소판감소증후군 (SFTS) 바이러스감염예방을위한유용물질연구인체에무해하고친환경적이며, 외부에존재하는참진드기에대해기피효과가있는천연유용물질을발굴하고성분분석을통해진드기기피제개발의기초자료를제공한다. 1 절연구내용 (1) 중증열성혈소판증후군 (SFTS) 바이러스의자연환경내감염실태조사자연환경내에서식하는참진드기종과 SFTSV의월별변화추이를파악하기위한조사및분석을진행하였다. 전국권역별 5개국립공원 ( 북한산, 치악산, 주왕산, 덕유산, 월출산 ) 으로부터참진드기를채집하였으며, 채집한참진드기는종별, 발육단계별분류및종의동정과분포조사를실시하였으며, 종동정이끝난참진드기로부터바이러스 RNA 유전자를추출하여 SFTSV 유전자를중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR) 방법에의하여검출하였다. 검출된 SFTSV의정보로부터유입경로추적을위한유전자염기서열분석및계통발생학적관계를규명하였다. 또한참진드기에의한 SFTSV 감염위험분석및 SFTSV 양성으로검출된지역의지도를탐방로및비탐방로를구분하여비교분석하였다. 조사국립공원의기상데이터, 식생분포도및야생동물분포자료와비교검토를실시하였다. (2) 감염예방을위한유용물질연구 참진드기에기피효과가있는천연유용물질발굴을위해문헌조사를실시하였으 며, 감귤및레몬추출물을이용한기피효과에대한예비실험을진행하였다. 2 절연구추진체계 연구추진을위해서각기관별로협조체계를마련하였으며, 기관별업무와연구 추진체계도는 Fig. 2-1 과같다. (1) 환경부국립환경과학원 과제관리업무및과제수행이잘수행될수있도록유관기관과협조체계를마련하며 과제수행평가및감독한다

(2) 서을대학교산학협력단 총괄연구책임을하면서연구추진수행에대한책임을갖는다. 북한산, 치악산및덕유산국립공원으로부터참진드기를채집하고조사지역에서채집된참진드기의동정및유전자추출과 SFTS 분석을진행한다. 또한참진드기천연기피물질발굴에대한연구를수행한다. 참진드기채집관련교육및결과보고서작성등은연구책임자가실시한다.

(4) 전남대학교연구수행이원활하게이루어질수있도록하기위하여전남대학교학부생을연구보조원으로참여시켜전남지역에위치한월출산으로부터참진드기채집을수행한다. (5) 경북대학교연구수행이원활하게이루어질수있도록하기위하여경북대학교학부생을연구보조원으로참여시켜경북지역에위치한주왕산으로부터참진드기채집을수행한다. Fig.

채집지역선정자연환경내참진드기에감염된 SFTSV의감염실태를조사하기위하여국내권역별로북부, 중부, 남부지역을고려하여 5개국립공원 ( 북한산국립공원, 치악산국립공원, 덕유산국립공원, 주왕산국립공원, 월출산국립공원 ) 을조사지역으로선정하였다. <Fig. 2-2>.

(7) 야생동물구조관리센터 야생동물로부터 SFTSV 의분리를위하여야생동물구조관리센터로부터야생동물혈청 을제공받을수있도록협조를받는다. Fig. 2-2 전국권역별 5 개국립공원 위치. - 12 - - 13 - 나.

2-4 참진드기채집, 기록, 보관, 리스트작성, 운송과정및동정. 채집시준비물로서는백색천 ( 융, 폭 6cm, 길이 1m, 스와핑용, 드래깅용 ), 나무, 로프, 글러브, 핀셋, 15ml 또는 5ml 튜브, 돋보기, 유성팬, 지퍼백, 국립공원지도, GPS 측정기를확보하였다 <Fig. 2-5>.

9 (2) 서을대학교산학협력단 총괄연구책임을하면서연구추진수행에대한책임을갖는다. 북한산, 치악산및덕유산국립공원으로부터참진드기를채집하고조사지역에서채집된참진드기의동정및유전자추출과 SFTS 분석을진행한다. 또한참진드기천연기피물질발굴에대한연구를수행한다. 참진드기채집관련교육및결과보고서작성등은연구책임자가실시한다. (3) 국립공원관리공단 북한산, 치악산, 덕유산, 주왕산, 워출산국립공원으로부터참진드기를채집할수있도록승인협조하고, 연구수행이원활히이루어질수있도록협조체계구축, 국립공원내야생동물분포및식생분포도자료를제공한다. (4) 전남대학교연구수행이원활하게이루어질수있도록하기위하여전남대학교학부생을연구보조원으로참여시켜전남지역에위치한월출산으로부터참진드기채집을수행한다. (5) 경북대학교연구수행이원활하게이루어질수있도록하기위하여경북대학교학부생을연구보조원으로참여시켜경북지역에위치한주왕산으로부터참진드기채집을수행한다. Fig. 2-1 연구추진체계도. 3 절연구조사및분석방법 1. 참진드기채집지선정및채집교육가. 채집지역선정자연환경내참진드기에감염된 SFTSV의감염실태를조사하기위하여국내권역별로북부, 중부, 남부지역을고려하여 5개국립공원 ( 북한산국립공원, 치악산국립공원, 덕유산국립공원, 주왕산국립공원, 월출산국립공원 ) 을조사지역으로선정하였다. <Fig. 2-2>. (6) 분석기관및안전성평가기관 연구에사용하기위한천연물질에대한독성평가, 농약평가등을농림축산검역본부 또는보건환경연구원등에의뢰하여검사를수행한다. 천연물질기피제발굴시독성 평가및안전성평가실시를위한공인기관에검사를의뢰하여연구를수행한다. (7) 야생동물구조관리센터 야생동물로부터 SFTSV 의분리를위하여야생동물구조관리센터로부터야생동물혈청 을제공받을수있도록협조를받는다. Fig. 2-2 전국권역별 5 개국립공원 위치 나. 연구요원대상참진드기채집교육 선정한조사국립공원에서채집을위한연구요원을대상으로 215년 7월 3일주왕산국립공원에서워크숍을통해참진드기에대한이해와참진드기채집을위한플래깅 (flagging) 및드래깅 (dragging) 방법을이용한채집교육을실시하였다 <Fig 2-3>. Fig. 2-4 참진드기채집, 기록, 보관, 리스트작성, 운송과정및동정. 채집시준비물로서는백색천 ( 융, 폭 6cm, 길이 1m, 스와핑용, 드래깅용 ), 나무, 로프, 글러브, 핀셋, 15ml 또는 5ml 튜브, 돋보기, 유성팬, 지퍼백, 국립공원지도, GPS 측정기를확보하였다 <Fig. 2-5>. 참진드기채집을위해확보한나무와융천으로채집용도구를제작하였으며, 제작한채집도구를사용하여플래깅 (flagging) 과드래깅 (dragging) 방법으로채집하여융천에붙은진드기를핀셋으로떼어내어튜브에넣어실험실로운반하였다 <Fig. 2-6>. Fig. 2-3 참진드기채집현장교육 ( 주왕산국립공원 ). 2. 참진드기채집방법및채집 각국립공원별로참진드기활동시기인 3월부터 (215년도는 7월부터시행 ) 11월말까지매월채집을수행하여각채집된참진드기는살아있는상태에서서울대학교연구실로운반해동정및실험을진행하였다. 채집시에는채집지의특성 ( 식생및야생동물서식조사및사진촬영, 주소, 고도및좌표 ) 를확인하여기록하였으며, 모든참진드기는살아있는상태에서연구실로운반하여실험을진행하였다. 채집한참진드기는튜브에풀잎 1개를넣어습도를유지하고, 밀봉하여채집목록에기록한후실온또는냉장상태에서실험실로운반하여현미경을통하여종을동정하였다 <Fig. 2-4>. Fig. 2-5 참진드기채집을위한준비물

Fig. 2-8 진드기로고들어간조끼준비. Fig. 2-6 참진드기채집방법 ( 좌측 : 플래깅, 중앙 : 드래깅, 우측 : 채집도구 ). 채집지역에서채집활동을실시할때, 국립공원별로탐방로, 비탐방로를구분하여채집하였다. 각공원별주탐방로를포함하여실시하였으며, 비탐방로는탐방로로부터 1-3m를숲으로들어가서채집을실시하였다 <Fig. 2-7>.

2-9 국립공원별참여연구원및연구보조원의채집지역. Fig. 2-7 탐방로와비탐방로의구분. - 16 - - 17-3. 참진드기의분류및동정 가.

longicornis Neumann), 개피참진드기 (H. flava Neumann) 와일본참진드기 (Ixodes nipponensis Kitaoka et Saito) 3종이다. 특히작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 는 Yamaguti et al.

longicornis Neumann), 개피참진드기 (H. flava Neumann) 와일본참진드기 (I. nipponensis Kitaoka et Saito) 3종으로알려져있다. 이세우점종의분류는 Yamaguti et al.

flava Neumann) 의차이점은성별에따라다른데, 수컷의경우, 네번째다리에서첫번째분절의모양을보고구분하게되고, 작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 의경우, spur가발달되어있지않은데, 개피참진드기 (H. flava Neumann) 의경우는매우잘발달되어있는것을확인할수있다. 암컷의경우는수컷과다르게, 첫번째다리의첫번째분절을보고판단한다.

10 Fig. 2-8 진드기로고들어간조끼준비. Fig. 2-6 참진드기채집방법 ( 좌측 : 플래깅, 중앙 : 드래깅, 우측 : 채집도구 ). 채집지역에서채집활동을실시할때, 국립공원별로탐방로, 비탐방로를구분하여채집하였다. 각공원별주탐방로를포함하여실시하였으며, 비탐방로는탐방로로부터 1-3m를숲으로들어가서채집을실시하였다 <Fig. 2-7>. 채집시에는진드기로고가들어간조끼를착용하고채집활동을실시하였다 <Fig. 2-8>. 본연구의참여연구원은 2인 1조가되어채집활동을실시하였으며, 지리적여건을고려하여북한산, 치악산, 덕유산국립공원은서울대학교소속연구원및연구보조원, 주왕산국립공원은경북대학교소속연구보조원, 월출산국립공원은전남대학교소속연구보조원이채집하였다 <Fig. 2-9>. Fig. 2-9 국립공원별참여연구원및연구보조원의채집지역. Fig. 2-7 탐방로와비탐방로의구분 참진드기의분류및동정 가. 참진드기의동정및분류방법확립 진드기 (tick) 는절지동물문 (Arthropoda) 중진드기목 (Acari 또는 Acarina) 에속하며, 물렁진드기 (soft tick, Argasidae) 와참진드기 (hard tick, Ixodidae) 가속해있다. 실험결과에따르면, 국내들판에서주로채집되는종은작은소진드기 (H. longicornis Neumann), 개피참진드기 (H. flava Neumann) 와일본참진드기 (Ixodes nipponensis Kitaoka et Saito) 3종이다. 특히작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 는 Yamaguti et al. (1971) 의 Ticks of Japan, Korea, and the Ryukyu Islands 에도한국반도의우점종으로알려져있다. Kim et al. (211), (213), Chong et al. (213) 의국내참진드기채집결과에따르면풀밭, 침엽수림, 활엽수림, 혼합림에서도역시국내에서우점종으로채집되는참진드기의종은작은소진드기 (H. longicornis Neumann), 개피참진드기 (H. flava Neumann) 와일본참진드기 (I. nipponensis Kitaoka et Saito) 3종으로알려져있다. 이세우점종의분류는 Yamaguti et al. (1971) 의 Ticks of Japan, Korea, and the Ryukyu Islands 에발육단계별진드기의형태적특징및차이점을관찰하여진행하였다. 같은속으로분류되고있는작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 와개피참진드기 (H. flava Neumann) 의차이점은성별에따라다른데, 수컷의경우, 네번째다리에서첫번째분절의모양을보고구분하게되고, 작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 의경우, spur가발달되어있지않은데, 개피참진드기 (H. flava Neumann) 의경우는매우잘발달되어있는것을확인할수있다. 암컷의경우는수컷과다르게, 첫번째다리의첫번째분절을보고판단한다. 수컷의 spur만큼의발달정도의차이를보이진않지만, 작은소진드기 (H. longicornis Neumann) 의첫번째다리의첫번째분절에는 spur가발달되어있는데비해, 개피참진드기 (H. flava Neumann) 는발달되지않았다. 일본참진드기 (I. nipponensis Kitaoka et Saito) 는산림진드기 {I. persulcatus (Schulze)} 와매우비슷하다고알려져있으며, 그구분또한쉽지않으나, 일반적으로구분하는방법은첫번째분절에있는 spur의발달정도가가장큰차이점이며, 일본참진드기 (I. nipponensis Kitaoka et Saito) 의경우, 첫번째다리의첫번째분절의 spur가매우발달하여두번째다리의첫번째분절을덮을정도로발달하여있지만, 산림진드기 {I. persulcatus (Schulze)} 의 spur는발달정도가두번째다리를덮을정도까지발달한것은아닌것으로구분한다. 또한멧돼지에서주로채집되는뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 의경우다른 Amblyomma spp. 들에비해특징적으로네번째다리의첫번째분절에서의 spur가두, 세번째다리에서의첫번째분절보다발달되어있는것으로구분할수있다 (Yamaguti et al, 1971)<Fig. 2-1, 2-11, 2-12, 2-13>. Fig. 2-1 작은소진드기 ( longicotnis) 의형태 (Yamaguti et al., 1971)

Fig. 2-11 개피참진드기 ( flava) 의형태 (Yamaguti et al., 1971). Fig.

참진드기동정및기록, 보관 참진드기는실체현미경 (SZH1과 SZ2-ST, Olympus, Japan)<Fig.

female)} 로분류하고속명 (genus), 종명 (species) 을확인해서엑셀데이터에기록하여각튜브에담아보관하였다.

11 Fig 개피참진드기 ( flava) 의형태 (Yamaguti et al., 1971). Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 의형태 (Yamaguti et al., 1971) 나. 참진드기동정및기록, 보관 참진드기는실체현미경 (SZH1과 SZ2-ST, Olympus, Japan)<Fig. 2-14> 을통하여개체별로분류하여동정 { 성충 (adult) 과약충 (nymph) 은개체별로보관및분석, 유충은 genus 단계까지동정하고, 채집지역단위로 1마리씩풀링하여보관및분석 } 을실시하였다. 채집한참진드기는실체현미경하에서동정키를활용하여종동정을실시한후, 발육단계별 { 유충 (larva), 약충 (nymph), 성충 (adult), 성별 (male, female)} 로분류하고속명 (genus), 종명 (species) 을확인해서엑셀데이터에기록하여각튜브에담아보관하였다. 각시료는채집일자, 채집지주소, GPS 좌표및고도, 채집지의식생상태등필요한내용을정리하여엑셀데이터에기록하였다. 모든참진드기시료는개체별로죽기전에냉동보관 (-2 ) 상태를유지하며 SFTS에대한검사전오염을방지하였다 <Fig. 2-15>. Fig 실체현미경 ( 좌 : SZH1, Olympus, Japan, 우 : SZ2-ST, Olympus, Japan). Fig 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 의형태 (Yamaguti et al., 1971)

Fig. 2-17 작은소진드기 ( longicornis) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ).

longicornis), 개피참진드기 (H. flava), 한뿔엉에참진드기 (H.

testudinarium) 의 5종이었으며종별, 발육단계별액침표본제작및사진을촬영하여기록하였다 <Fig.

2-18 작은소진드기 ( longicornis) 약충 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ).

2-16 작은소진드기 ( longicornis) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ).

2-19 개피참진드기 ( flava) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ).

12 Fig 작은소진드기 ( longicornis) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 참진드기동정. 채집된참진드기는작은소진드기 (H. longicornis), 개피참진드기 (H. flava), 한뿔엉에참진드기 (H. japonica), 일본참진드기 (I. nipponensis), 뭉뚝참진드기 (A. testudinarium) 의 5종이었으며종별, 발육단계별액침표본제작및사진을촬영하여기록하였다 <Fig ~ 2-26>. Fig 작은소진드기 ( longicornis) 약충 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 작은소진드기 ( longicornis) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm) Fig 개피참진드기 ( flava) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 개피참진드기 ( flava) 약충 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부 위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig. 2-2 개피참진드기 ( flava) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm)

Fig. 2-23 한뿔엉에참진드기 ( japonica) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig. 2-25 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배 부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig. 2-24 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배 부위 ).

참진드기로부터 viral RNA 추출참진드기로부터바이러스의 RNA를추출하기위하여 Viral Gene-spin DNA/RNA extraction kit(intron) 의 lysis buffer에넣고, Tungsten beads를사용하여 TissueLyser Ⅱ(Retsch R, Haan, Germany)<Fig.

Table 2-1 SFTS 바이러스검출을위한 One-step RT/Nested-PCR primers Items Name of primers Sequences Reference One-step RT-PCR (1st round PCR) primers One-step RT-nested PCR (2nd round PCR) primers SFTSV NP-2F

(21mer) 213 年 3 月 13 日 Designed in this study Table 2-2 SFTS 바이러스검출을위한 real-time PCR primers Fig. 2-27 SFTS 바이러스유전자 (RNA) 추출장비 ( 좌, TissuelyserⅡ; 우, Viral gene-spin DNA/RNA extraction kit). 나.

13 Fig 한뿔엉에참진드기 ( japonica) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배 부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 성충수컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배 부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm). Fig 뭉뚝참진드기 (Amblyomma testudinarium) 성충암컷 ( 좌측, 등부위 ; 우측, 배부위 ). 기준자 = 밀리미터 (mm) SFTS 바이러스유전자검출및분석가. 참진드기로부터 viral RNA 추출참진드기로부터바이러스의 RNA를추출하기위하여 Viral Gene-spin DNA/RNA extraction kit(intron) 의 lysis buffer에넣고, Tungsten beads를사용하여 TissueLyser Ⅱ(Retsch R, Haan, Germany)<Fig 좌측 > 에서 3Hz로 5분간참진드기분쇄하였다. 분쇄한참진드기시료로 Viral gene-spin DNA/RNA extraction kit<fig 우측 > 의 column method를이용하여개체별로 RNA를추출하였다. Table 2-1 SFTS 바이러스검출을위한 One-step RT/Nested-PCR primers Items Name of primers Sequences Reference One-step RT-PCR (1st round PCR) primers One-step RT-nested PCR (2nd round PCR) primers SFTSV NP-2F SFTSV NP-2R SFTSV N2-F SFTSV N2-R 5'-CAT CAT TGT CTT TGC CCT GA-3'(2mer) 下島등, 5'-AGA AGA CAG AGT TCA CAG CA-3' (2mer) 5'-AAC AAG ATC GTC AAG GCA TCA-3' (21mer) 5'-TAG TCT TGG TGA AGG CAT CTT-3' (21mer) 213 年 3 月 13 日 Designed in this study Table 2-2 SFTS 바이러스검출을위한 real-time PCR primers Fig SFTS 바이러스유전자 (RNA) 추출장비 ( 좌, TissuelyserⅡ; 우, Viral gene-spin DNA/RNA extraction kit). 나. 참진드기로부터 SFTS 바이러스검출 Countries Name of primers Sequences Reference China Japan Korea Ch-SFTS-S-F Ch-SFTS-S-R Ja-SFTS-S-F Ja-SFTS-S-R IM-SFTS-S-F IM-SFTS-S-R GGG TCC CTG AAG GAG TTG TAA A (22mer) TGC CTT CAC CAA GAC TAT CAA TGT (24mer) TGT CAG AGT GGT CAA GGA TT (2mer) ACC TGT CTC CTT CAG CTT CT (2mer) TGA GAT GAT GTG CAT GGC CT (2mer) GGC ATC TTG CCA CAG AGA GT (2mer) Chong, et al. 213 (1) Primer 및양성대조샘플준비 SFTSV의 S segment 유전자를검출하기위하여 reverse transcription(rt)-pcr을위한 forward/reverse primer를준비하였으며 <Table 2-1>, Real-time PCR 검사를진행하기위한 forward/reverse primer를준비하였다 <Table 2-2>. 또한양성대조를위한 SFTSV RNA 양성샘플은인천광역시보건환경연구원으로부터분리한바이러스로부터제공받아실험에사용하였다. (2) SFTS 바이러스유전자검출 ( 가 ) One-Step RT/Nested-PCR 참진드기에서추출한 RNA와준비한 Forward primer (NP-2F), Reverse primer (NP-2R), onestep RT-PCR premix(solgent) 로 RT-PCR을진행하여 First PCR 산물을얻었다. 그리고 First PCR 산물에 Forward primer(n2-f), Reverse primer (N2-R), Multi HS prime Taq premix(genet Bio) 로 Nested-PCR을진행하여최종산물을얻었다. Nested-PCR을진행하여얻은산물들을 agarose gel{redsafe TM (Nucleic Acid Staining Solution, 2,X, intron) 포함 } 에 loading하여 1 volt에서 3분간전기영동을실시한후 transiluminator 상에서관찰하여양성대조샘플과비교하였다

( 나 ) RT real-time PCR 실시간유전자증폭 (Real-time) 은 StepOnePlus Real-Time PCR Systems(Applied Biosystems) 을사용하였으며, Real-time PCR 방법중 SYBR R Green으로준비된 primer를사용해서진행하였다 (Table 2-2).

성밴드가확인된 BH 84, BH91, BH97, BH12 샘플과음성샘플로 Real-time PCR을진행하였으며, 실험결과 BH12샘플에서약한유전자증폭곡선이확인되었고다른샘플들에서는양성으로판정될수있는유전자증폭이확인되지않았다 <Fig 2-3>.

2-28 실시간유전자증폭기 ( 좌 : Applied Biosystems Real-time PCR system, 우 : 분석소프트웨어 ). One-step RT/Nested PCR 방법과 Real-time PCR 방법을비교분석하기위해양성대조를위한 SFTSV RNA 양성샘플을단계적으로희석하여각각의방법으로진행하였다.

14 ( 나 ) RT real-time PCR 실시간유전자증폭 (Real-time) 은 StepOnePlus Real-Time PCR Systems(Applied Biosystems) 을사용하였으며, Real-time PCR 방법중 SYBR R Green으로준비된 primer를사용해서진행하였다 (Table 2-2). Real-time-PCR을진행하면서양성대조샘플의값을이용해분석소프트웨어상에서양성 Threshold 값을설정하여실험하는샘플들의 SFTSV에대한양성을판정하였다. Real-time PCR 방법을이용해샘플에서양성확인시 One-step RT/Nested PCR 방법을쓴경우와비교평가및유전자염기서열을분석하였다 <Fig. 2-28>. 성밴드가확인된 BH 84, BH91, BH97, BH12 샘플과음성샘플로 Real-time PCR을진행하였으며, 실험결과 BH12샘플에서약한유전자증폭곡선이확인되었고다른샘플들에서는양성으로판정될수있는유전자증폭이확인되지않았다 <Fig 2-3>. 결과적으로위의실험은 SYBR R Green을이용한 real-time PCR방법이 conventional PC R(One-step RT/Nested PCR) 방법과비교해서 SFTSV를검출하기에감수성이떨어짐을보여주었다. Fig 실시간유전자증폭기 ( 좌 : Applied Biosystems Real-time PCR system, 우 : 분석소프트웨어 ). One-step RT/Nested PCR 방법과 Real-time PCR 방법을비교분석하기위해양성대조를위한 SFTSV RNA 양성샘플을단계적으로희석하여각각의방법으로진행하였다. 양성샘플 RNA는원액, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6 으로각각 elution buffer(v iral gene-spin DNA/RNA extraction kit) 에희석하였다. 희석된샘플을 Conventional PCR 방법으로실험을진행했을때 1-6 의희석배율까지 346bp에서밴드가확인되었다. Real-time PCR에서같은희석샘플로한국, 중국, 일본에서제작한 primer set<t able 2-2> 를각각적용하여실험을진행하였고, 모든샘플에서증폭이확인되었으나 Tm값을적용하였을때중국과일본의 primer set으로는 1-5 까지양성으로판정할수있었으며한국의 primer set로는 1-4 까지양성으로확인되었다. 위의실험결과는 Conventional PCR방법이 Real-time PCR방법과비교해서감수성이더높음을보여주었으며 Real-time PCR에서각primer set별비교결과에서일본에서제작한 primer set가감수성이가장높음을확인하였다 <Fig 2-29>. 북한산국립공원에서채집한참진드기로부터 Conventional PCR에서 SFTSV 양성검출된샘플을 Real-time PCR방법으로 SFTSV검출실험을진행하여비교해보았다. 양 Fig SFTS 바이러스양성샘플로부터유전자검출비교평가결과. SFTS 바이러스검출을위한중국, 일본, 한국에서제작한 real-time PCR primer set별 SYBR R Green을이용한 real-time PCR 반응 ( 그래프 3종 ). 이번연구에서사용한 nested PCR 반응 ( 우측상단전기영동사진 ) 참진드기월별발생추이및 SFTSV 발생지역을엑셀데이터에서분석하여위험지도작성에사용하였다. 국립공원별, 고도별 (1m 단위 ) 참진드기종별및발육단계별검출빈도를분석하여기록하고참진드기에감염된 SFTSV의양성률을분석하여기록하였다. 채집한성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서는 1마리씩 SFTSV에대한검사를통해감염률 (IR: infection rate) 을조사하였다. 유충 (larva) 은크기가작아개체별검사가제한되기때문에채집일자별, 채집지역별, 참진드기 genus별로풀링하여최소야외감염률 (minimum field infection rate, MFIR) 을조사하였다 <Fig. 2-31>. Minimum field infection rate (MFIR, %) Number of positive pools = X 1 Number of total tested ticks x 1 - 최소야외감염률 (Minimum field infection rate; MFIR, %) - 양성검출된풀수 (Number of positive pools - 검사한총참진드기마리수 (Number of total tested ticks) Fig. 2-3 참진드기샘플로부터유전자검출비교평가결과. 좌측, Conventional nested PCR (One-step RT/Nested PCR). 우측, Real-time PCR(SYBR R Green). ( 다 ) SFTSV 유전자염기서열분석 (DNA sequencing) 및계통발생학적관계규명중합효소연쇄반응에의하여증폭된 SFTSV 양성유전자단편들은 QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen) 을이용하여목표 DNA를추출하고, 자동염기서열분석기 (373xl capillary DNA Analyzer, Applied Biosystems) 를이용하여각샘플들의염기서열을분석하였다. 염기서열을확인한후에 Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.(MEGA6)[Tamura et al., 213] 소프트웨어를이용하여염기서열들을분석하고 NCBI의 nucleotide blast search에서상동성높은유전자들을찾아 Align을실시하였다. Align한염기서열들은 neighbor-hood joining method를이용하여 MEGA6 software에서계통발생학적관계 (phylogenetic analysis) 를보기위한 tree 작성하였다. 단백유전자의 DNA 염기서열은아미노산으로전환시킨후, DNA 염기서열분석과동일한방법으로 Align과바이러스의계통발생학적분석을실시하였다. 또한 SFTSV 증폭을위한 One-Step RT/Nested-PCR 방법과 RT real-time PCR 방법의민감도와특이도를비교평가하여효율적인진단체계를찾도록하였다. 다. SFTSV 감염률조사및분석 Fig 최소야외감염률계산방법. (1) 기상정보자료와참진드기및 SFTSV의비교분석기상청과국립공원관리공단으로부터채집일자별로조사공원또는인접지역의온도, 일조량및습도등의기상정보를확보하여기상정보자료와참진드기채집데이터를비교분석하였다. 또한기상정보자료와참진드기에 SFTSV 감염과비교분석하였다. (2) 식생정보자료와참진드기및 SFTSV의비교분석국립공원관리공단국립공원연구원으로부터조사공원의고도별식생에관한자료를확보하여식생정보자료와참진드기간의비교분석하였다. 또한식생정보자료와참진드기에 SFTSV 감염과비교분석하였다. (3) 야생동물서식지분포자료와참진드기및 SFTSV의비교분석국립공원관리공단국립공원연구원으로부터조사공원의야생동물서식지분포에관한자료를확보하여야생동물서식지분포자료와채집한참진드기를비교분석하였다 <Table 2-3, Fig. 2-32>. 또한야생동물서식지분포자료와참진드기에 SFTSV 감염과비교분석하였다

Table 2-3 조사국립공원야생동물종및개체수 ( 자료제공 : 국립공원관리공단국립 공원연구원, 1992 년 -215 년 ) 동물명 국립공원명 (n= 개체수 ) 북한산치악산덕유산주왕산월출산 합계 갈밭쥐 2 1 3 개 44 1 13 58 검은집박쥐 1 1 고라니 26 249 22 93 63 651 고슴도치 3 3 2 3 1 12 고양이 46 13 22 19

15 Table 2-3 조사국립공원야생동물종및개체수 ( 자료제공 : 국립공원관리공단국립 공원연구원, 1992 년 -215 년 ) 동물명 국립공원명 (n= 개체수 ) 북한산치악산덕유산주왕산월출산 합계 갈밭쥐 개 검은집박쥐 1 1 고라니 고슴도치 고양이 관박쥐 너구리 노루 늑대 다람쥐 담비 대륙밭쥐 두더지 뒤쥐 1 1 등줄쥐 땃쥐 멧돼지 멧박쥐 1 1 멧밭쥐 멧토끼 무산쇠족제비 2 2 반달가슴곰 붉은박쥐 비단털들쥐 비단털쥐 1 1 사향노루 산양 삵 생쥐 수달 시궁쥐 안주애기박쥐 애급쥐 1 1 여우 염소 1 1 오소리 우수리박쥐 3 3 작은땃쥐 족제비 집박쥐 집쥐 청설모 큰발윗수염박쥐 2 2 표범 하늘다람쥐 호랑이 흰넓적다리붉은쥐 총합계 464 1,629 1,559 1, ,991 Fig 조사국립공원의야생동물상 ( 자료제공 : 국립공원관리공단국립공원연구원 ). 5. 감염예방유용물질연구참진드기기피효과가있을것으로추측되는천연물질의문헌조사를실시하고진드기기피효과가있는천연물의후보를결정하였고, 천연물질후보결정시대량생산및상업화를고려하여선정하였으며, 인도등에현지조사와천연추출물을구매하였다. 레몬추출물등의천연물질을확보하여참진드기기피효과에대한예비실험을진행하였다 Table 3-2 조사국립공원 ( 북한산, 치악산, 덕유산, 주왕산, 월출산 ) 으로부터채집한 전체참진드기의월별, 종별마리수 1 절조사국립공원별참진드기채집결과 본연구용역사업에서 215년 7월부터 11월까지 5개국립공원에서참진드기를채집한결과총 9,766마리였다. 이중북한산에서 2,267마리, 치악산에서 1,76마리, 덕유산에서 1,357마리, 주왕산에서 2,797마리, 월출산에서 1,639마리가채집되었다 <Table 3-1>. Table 3-1 국립공원별참진드기채집결과 (215년 7월-215년 11월 ) 국립공원채집지점수총채집마리수북한산 17 2,267 치악산 8 1,76 덕유산 15 1,357 주왕산 1 2,797 월출산 13 1,639 합계 63 9,766 월별로채집된참진드기의종및개체수는 Table 3-2와같다. 7월부터 11월사이에채집한참진드기종은총 5종으로서 H. longicornis( 작은소진드기 ), H. flava( 개피참진드기 ), I. nipponensis( 일본참진드기 ), Amblyomma testudinarium( 뭉뚝참진드기 ), H. japonica ( 한뿔엉에참진드기 ) 가채집되었다. 유충의경우알에서깨어나서로뭉쳐있다가플래깅또는드래깅방법으로채집할때한꺼번에붙어서채집되기때문에채집된 9,696마리중 8,284 마리로비교적많은수의개체가채집되었다. 월별로는 9월에가장많은 3,716 마리가채집되었으나이시기에참진드기의유충이부화하여많은수의유충이채집되었기때문으로생각된다. 7월에마리수로는 591마리로적게채집된것으로보이나유충이많이잡히지않았기때문으로보이며작은소진드기 (H. longicornis) 성충및약충의경우가장많은 393마리가채집되었다. 11월이후로는급격하게채집되는개체수가줄어들었으며, 이는국내에서중증열성혈소판감소증후군 (SFTS) 및기타진드기매개질병의발생빈도가 4월에서 9월사이에집중되어있는것과깊은연관성이있는것으로추측된다. Species longicornis H. flava 채집지역에서채집활동을실시할때, 국립공원별로탐방로 (trail), 비탐방로 (non-trail) 를구분하여채집하였으며, 비탐방로는탐방로로부터 1-3m 를숲으로들어가서채집을 실시하였다. 탐방로에서는성충 (adult) 161 마리, 약충 (nymph) 353 마리, 유충 (larva) 2,647 마리로총 3,161 마리가채집되었으며, 비탐방로에서는성충 254 마리, 약충 714 마리, 유충 5,637 마리씩각각채집되어비탐방로에서약 2 배정도많은개체수의참진드기가 채집되었다 <Table 3-3>. JUL AUG SEP OCT NOV Total Male Female Nymph Subtotal ,9 Male Female Nymph Subtotal H. japonica Male 1 1 spp. Amblyomma testudinarium Ixodes nipponensis Larva 146 1,658 3,618 2, ,252 Male 1 1 Nymph 4 4 Subtotal Male Female Nymph 9 9 Subtotal Ixodes spp. Larva Total 591 1,958 3,716 2, ,

Juwangsan 55 49 67 711 58 6 1,968 2,86 Wolchulsan 43 79 952 1,74 62 188 315 565 Total 161 353 2,647 3,161 254 714 5,637 6,65 1.

16 Table 3-3 조사국립공원으로부터탐방로, 비탐방로별채집결과 National parks No. of collected ticks Trail Non-trail Adult Nymph Larva Total Adult Nymph Larva Total Bukhansan ,333 1,617 Chiaksan ,13 Deogyusan ,3 1,324 Juwangsan ,968 2,86 Wolchulsan , Total ,647 3, ,637 6,65 1. 북한산국립공원채집결과 북한산국립공원에서는우이, 정릉, 구기, 불광, 산성지구 8개지점과도봉, 송추지구 9개지점등총 17개채집지역에서탐방로주위를따라참진드기를채집하였다. 채집지역은북한산탐방지원센터의안내를따라야생동물이주로출몰하는지역과탐방객들이주로오가는길을선정하였다. 채집지역은국립공원탐방안내도에탐방로구간별로표시하였다 <Fig. 3-1, 3-2>. Fig. 3-1 북한산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 ( 우이, 정릉, 구기, 불광, 산성지구 ) (1) 북한산국립공원월별참진드기채집결과 북한산국립공원에서는 7월부터 11월까지총 2,267마리의참진드기가채집되었다. 작은소진드기 (H. longicornis) 와개피참진드기 (H. flava) 의두종류의참진드기가채집되었으며, 8월에 1,78마리로가장많은참진드기가채집되었고, 11월에채집을시도하였으나 마리로참진드기가채집되지않았다. 한번에채집활동에참여한연구원수또는채집하는일자에따라기상상태등의차이가있기때문에채집된개체수로월별참진드기의생태및서식상태를판단하기에는제한되는점이있지만, 실제북한산국립공원의각채집지역에서채집되는참진드기의개체수는 11월이후로급격하게줄어드는것이확인되었다 <Table 3-4>. Table 3-4 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis H. flava spp. JUL AUG SEP OCT NOV Total Male Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal Larva ,924 Total 12 1, ,267 (2) 북한산국립공원고도별참진드기채집결과 Fig. 3-2 북한산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역 ( 도봉, 송추지구 ). 북한산국립공원에서는채집된참진드기를고도별로종별분포를보면 1~2m 고도에서가장많은 1,436마리의참진드기가채집되었으며, 작은소진드기 (H. longicornis) 는 1~2m 고도구간에서성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 이 85마리로가장많이채집되었고고도가높아질수록적은개체수가채집되었다. 개피참진드기 (H.flava) 역시 1~2m의고도에서성충과약충 13마리로가장많이채집되었으며 3~4m 고도구간에서 22마리가채집되어그뒤를이었다 <Table 3-5>

17 Table 3-5 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis H. flava spp. ~ 1 Tick collect by altitude (meter) 1~ 2 2~ 3 3~ 4 Total Male Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal Larva 517 1, ,924 Total 56 1, ,267 (3) 북한산국립공원참진드기채집날짜별기상자료 북한산에서채집날짜별로기상청의자료에따라서기온, 강우량, 습도의일극값의 자료를추출하였다. 참진드기가서식하는데에있어서중요한기상지표는기온및습도로 알려져있다 (Sonenshine and Roe, 214). 따라서채집날짜의기온과습도의일극값및 강수여부는국내참진드기의서식생태를연구하는데지표가될것으로추측된다. 습도의 경우기상관측장비가설치되어있는장소에따라서측정되지않은채집지역이존재하였 다. 최저기온과최고기온이가장높은채집날짜인 에송추지구에서 877 마리로 가장많은참진드기를채집하였으며 1 월이후기온이낮아지면서적은개체수의참진드 기가채집되었다 <Table 3-6>. Table 3-6 북한산국립공원의참진드기채집날짜별기상데이터 ( 자료수집 : 국립공 원관리공단 ) 채집날짜채집지역최저기온 ( 시각 ) 정릉지구 북한산성 도봉지구회룡사 송추지구 송추지구원각사 구기지구북한산성 우이지구백운대 북한산성안골계곡 삼천사 석굴암삼천사 18.4 (5:34) 24. (23:13) 18.6 (4:53) 22.1 (5:17) 17.7 (5:4) 15.4 (23:45) 16.1 (6:23) 7.5 (6:3) 9.3 (6:5) 9.6 (6:25) 최고기온 ( 시각 ) 28.8 (15:8) 3.6 (14:4) 32.6 (15:15) 34.1 (14:57) 3.5 (14:39) 24.4 (11:45) 27. (15:1) 24.9 (15:42) 24.1 (15:15) 25.7 (14:21) 일강우량 최저습도 ( 시각 ) 49 (12:19) 최고습도 ( 시각 ) 75 (3:3) 채집마리수 (15:19) 1 (:1) (14:56) 78 (6:26) 합계 2,267 (4) 북한산국립공원참진드기채집지역식생분포 국립공원연구원으로부터제공받은식생자료를토대로채집지역별식생분포를기록하 였다. 북한산국립공원의동쪽지역 ( 정릉지구, 도봉지구, 회룡사 ) 은정릉지구일부지역을 제외하고대부분신갈나무 - 소나무군락이었으며, 서쪽및남쪽지역 ( 북한산성, 송추지구, 원각사, 삼천사, 석굴암, 구기지구, 우이지구, 백운대, 안골계곡 ) 은신갈나무 - 소나무군락 및침활혼효림낙엽활엽수림의혼합림으로확인되었다. 이는지역에따른일조량등의 영향으로보이며, 신갈나무 - 소나무군락에서는상대적으로적은개체수의참진드기가 채집되었다 <Table 3-7> Table 3-7 북한산국립공원의참진드기채집지역별식생분포 ( 자료수집 : 국립공원연 구원 ) 채집지역 식생분포 채집마리수 정릉지구 낙엽활엽수림 12 북한산성 신갈나무-소나무 532 도봉지구 신갈나무-소나무 31 송추지구 침활혼효림 953 원각사 신갈나무 93 구기지구 신갈나무-소나무 1 우이지구 낙엽활엽수림 55 백운대 낙엽활엽수림 45 안골계곡 신갈나무-소나무 259 삼천사 침활혼효림 237 석굴암 신갈나무-소나무 4 2. 치악산국립공원채집결과 치악산국립공원에서는황골지구, 금대지구, 부곡지구에서총 8개채집지역에서참진드기를채집하였다. 채집은치악산국립공원에서주로탐방객들이찾는탐방로를따라탐방로, 비탐방로를구분하여채집하였다. 채집지역은국립공원탐방안내도에탐방로구간별로표시하였다 <Fig. 3-3>. Fig. 3-3 치악산국립공원의탐방안내도및참진드기채집지역

18 (1) 치악산국립공원월별참진드기채집결과 치악산국립공원에서연구조사기간동안총 1,76 마리의참진드기를채집하였다. 채집 된참진드기는작은소진드기 (H. longicornis), 개피참진드기 (H. flava), 일본참진드기 (I. nipponenesis) 의 3 종으로 9 월에가장많은 1,46 마리가채집되었으나, 참진드기의산란하 여부화하는시기이기때문에유충이 1,375 마리의높은비율로채집되었다. 1 월이후로는 기상조건등채집여건이좋지않아참진드기채집활동이진행되지못하였다 <Table 3-8>. Table 3-8 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis JUL AUG SEP OCT NOV Total Male Female Nymph Subtotal H. flava Nymph spp. Ixodes nipponensis Larva 81 1,375 1,456 Nymph 4 4 Ixodes spp. Larva Total ,46 1,76 (2) 치악산국립공원고도별참진드기채집결과 치악산국립공원의고도별로채집된참진드기를보면 4~5m 고도상에서가장많은 582 마리의참진드기가채집되었다. 다른조사국립공원과는다르게치악산국립공원은 기본해발고도가높기때문에전체채집지역의고도는 3~6m 구간에형성되어있었으 며각고도구간별로채집된참진드기의개체수에큰차이는확인되지않았다 <Table 3-9>. Table 3-9 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis Tick collect by altitude (meter) 3~4 4~5 5~6 Total Male Female Nymph Subtotal H. flava Nymph spp. Ixodes nipponensis Larva ,456 Nymph Ixodes spp. Larva Total ,76 (3) 치악산국립공원참진드기채집날짜별기상자료 치악산국립공원에서참진드기채집날짜별로기상청의자료에따라서기온, 강우량, 습도의일극값을추출하였다. 치악산의기상관측소에습도의자료는없었으며, 일일최저 기온, 최고기온의일극값과일강우량의자료를얻을수있었다. 9 월 12 일에 5.mm 의 일강우량에도불구하고 832 마리의가장많은참진드기가채집되었으며, 대부분유충이 채집된것으로강우시간을피하여채집하였기때문으로추측된다 <Table 3-1>. Table 3-1 치악산국립공원의참진드기채집날짜별기상데이터 ( 자료수집 : 국립 공원관리공단 ) 채집날짜채집지역최저기온 ( 시각 ) 황골지구세렴폭포구룡사 금대지구 부곡지구 황골지구구룡사 18.2 (5:5) 2. (4:59) 17.8 (4:36) 13.7 (22:52) 최고기온 ( 시각 ) 34.2 (12:41) 32.6 (14:55) 27.3 (13:15) 19.8 (13:3) 일강우량 최저습도 ( 시각 ) 최고습도 ( 시각 ) 채집마리수 합계 1, (4) 치악산국립공원참진드기채집지역식생분포 국립공원연구원으로부터제공받은식생자료를토대로치악산국립공원의채집지역별 식생분포를기록하였다. 치악산에서채집활동을했던탐방로지역은전체지역이소나무 - 기타낙엽활엽수림군락의혼합림이었다 <Table 3-11>. Table 3-11 치악산국립공원채집지역별식생분포 ( 자료수집 : 국립공원연구원 ) 채집지역 식생분포 채집마리수 황골지구 소나무-기타낙엽활엽수림군락 547 세렴폭포 소나무-기타낙엽활엽수림군락 5 금대지구 소나무-기타낙엽활엽수림군락 141 부곡지구 소나무-기타낙엽활엽수림군락 574 구룡사 소나무-기타낙엽활엽수림군락 덕유산국립공원채집결과 덕유산국립공원에서는안성지구, 적상지구, 삼공리, 남덕유산등에서총 15개채집지역에서참진드기를채집하였다. 채집지역은주요탐방로외에탐방객또는피서객들이많이들르는세심대, 덕유대야영장등이포함되었다. 채집은주로탐방로와비탐방로를실시하였으며, 채집지역은국립공원탐방안내도에탐방로구간별로표시하였다 <Fig. 3-4>. Fig. 3-4 덕유산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역

19 (1) 덕유산국립공원월별참진드기채집결과 (2) 덕유산국립공원고도별참진드기채집결과 덕유산국립공원에서 7월부터 11월까지총 1,357마리의참진드기를채집하였다. 1월에 712마리로가장많은참진드기가잡혔으나, 대부분이유충으로덕유산에서식하는참진드기의산란기간이이시기일것으로생각된다. 1월이후부터작은소진드기 (H. longicornis) 의채집개체수가줄어들면서개피참진드기 (H. flava) 및일본참진드기 (I.nipponensis) 성충의채집개체수가늘어나는것을확인하였다 <Tabla 3-12>. Table 3-12 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 (215년 7월 -215년 11월 ) 덕유산국립공원에서채집한참진드기의고도별분포를보면덕유산의기본해발고도가비교적높은곳에형성되어있는것을확인할수있다. 고도별로종별및개체수가비교적고르게채집되었으나, 7m 이상의높은고도에서는작은소진드기 (H. longicornis) 와개피참진드기 (H. flava) 의채집개체수가줄고일본참진드기 (I. nipponensis) 의채집개체수가늘어나는것을확인할수있었다. 또한국내에서서식이확인은되어있으나거의발견되지않는종인한뿔엉에참진드기 (H. japonica) 가 6~7m 고도에서성충수컷한마리채집되었다. 한뿔엉에참진드기가덕유산에서주요서식지를형성하고있는지확인하기위해서는좀더깊은연구가필요할것으로보인다 <Table 3-13>. Species JUL AUG SEP OCT NOV Total Male Table 3-13 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) longicornis H. flava H. japonica spp. Ixodes nipponensis Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal Male 1 1 Subtotal 1 1 Larva ,3 Male Female Nymph 5 5 Subtotal Total ,357 Species longicornis H. flava Tick collect by altitude (meter) 3~4 6~7 7~8 Over 1, Total Male Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal H. japonica Male 1 1 spp. Ixodes nipponensis Larva ,3 Male Female Nymph Subtotal Total , (3) 덕유산국립공원참진드기채집날짜별기상자료 (4) 덕유산국립공원참진드기채집지역식생분포 덕유산국립공원의채집날짜별로기상청의자료에따라서기온, 강우량, 습도의일극값 을추출하였다. 치악산국립공원의경우와마찬가지로습도에관한자료를추출할수 없었다. 일강우량이많을때혹은전날강우량이많았을때는참진드기가적게채집되는 경향을보였다. 또한기온이낮아짐에따라채집개체수가줄어들었으며, 최저기온보다는 최고기온의수치에더민감한것으로보아일최고기온이참진드기의식생에미치는 영향이더클것으로추측된다 <Table 3-14>. Table 3-14 덕유산국립공원채집날짜별기상데이터 ( 자료수집 : 국립공원관리공 단 ) 채집날짜채집지역최저기온 ( 시각 ) 덕유대야영장 향적봉 - 중봉 안성지구용추폭포 적상지구 19.9 (1:21) 16.5 (19:6) 19. (4:37) 22.4 (:1) 최고기온 ( 시각 ) 3.5 (13:4) 25.5 (9:31) 29.8 (13:12) 3. (13:14) 일강우량 최저습도 ( 시각 ) 최고습도 ( 시각 ) 채집마리수 국립공원연구원으로부터제공받은식생자료를토대로덕유산국립공원의채집지역별 식생분포를기록하였다. 주로참진드기가많이채집된지역은소나무및신갈나무군락이 었으며, 해발 1,m이상의향적봉-중봉의구상나무-주목군락에서도참진드기가채집되 었다 <Table 3-15>. Table 3-15 덕유산국립공원채집지역별식생분포 ( 자료수집 : 국립공원연구원 ) 채집지역 식생분포 채집마리수 덕유대야영장 소나무-신갈나무군락 8 향적봉-중봉 구상나무-주목군락 3 안성지구 소나무군락 9 용추폭포 잣나무식재림 3 적상지구 신갈나무군락 315 삼공리 신갈나무군락 265 세심대 소나무-굴참나무군락 11 남덕유산 신갈나무군락 삼공리세심대 남덕유산 삼공리 16.8 (6:15) 15.7 (5:37) 9.8 (6:2) 3.8 (14:1) 29.3 (15:32) 24.7 (13:48) 주왕산국립공원채집결과주왕산국립공원에서는공원길등주요탐방로를따라서총 1개채집지역에서참진드기를채집하였다. 채집은탐방객들이주로다니는탐방로및주변비탐방로를포함하여 남덕유산 적상지구 6.2 (6:35) 3.6 (5:11) 21.5 (11:) 18.9 (12:21) 실시되었으며, 채집지역은국립공원탐방안내도에탐방로구간별로표시하였다 <Fig. 3-5> 남덕유산 적상지구 6. (23:17) 7.7 (23:1) 1.3 (15:54) 12.7 (1:53) 합계 1,

20 Table 3-16 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species JUL AUG SEP OCT NOV Total Male longicornis Female Nymph Subtotal Male H. flava Female Nymph Subtotal spp. Ixodes nipponensis Larva 1,51 1, ,575 Male 6 6 Female 2 2 Subtotal 8 8 Fig. 3-5 주왕산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역. Total ,61 1, ,797 (1) 주왕산국립공원월별참진드기채집결과 (2) 주왕산국립공원고도별참진드기채집결과 주왕산에서 7월부터 11월까지총 2,797마리의참진드기가채집되었다. 9월과 1월에유충이많이채집되었으며, 1월이후로작은소진드기 (H. longicornis) 의채집개체수가줄고개피참진드기 (H. flava) 의채집개체수가늘어나는것을확인할수있었다. 1월에주왕산국립공원에서연구조사기간동안유일하게일본참진드기 (I. nipponensis) 가채집되었는데이는국립공원입구의경작지주변에서채집된것으로확인되었다 <Table 3-16>. 주왕산국립공원의고도별참진드기채집결과를보면 2~4m 구간까지참진드기가채집되다가 5~6m 구간에서채집개체수가줄어들고 6~7m 구간에서다시채집개체수가늘어나는것을확인할수있었다. 이는주왕산국립공원의 5~6m 고도에서주로바위나암석지대로구성되어야생동물이상대적으로적은개체수가서식하기때문으로생각된다. 또한개피참진드기 (H. flava) 의경우 3m 이상의고도부터채집되는것으로보아다른조사국립공원에서와같이작은소진드기 (H. longicornis) 와비교해서더높은고도에서식하는경향을나타내는것으로확인되었다 <Table 3-17> Table 3-17 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis Tick collect by altitude (meter) 2~3 3~4 5~6 6~7 Total Male Female Nymph Table 3-18 주왕산국립공원채집날짜별기상데이터 ( 자료수집 : 국립공원관리공단 ) 채집날짜채집지역최저기온 ( 시각 ) 상의리주왕암 대전사교리 상의리공원길 21.4 (23:59) 18.9 (4:41) 12.7 (1:32) 최고기온 ( 시각 ) 32.3 (14:44) 3.6 (14:7) 25.1 (14:7) 일강우량 최저습도 ( 시각 ) 57 (14:7) 54 (14:7) 51 (14:11) 최고습도 ( 시각 ) 97 (:1) 97 (:1) 97 (:1) 채집마리수 H. flava spp. Ixodes nipponensis Subtotal Male Female Nymph 6 6 Subtotal Larva 257 1, ,51 2,575 Male 6 6 Female 2 2 Subtotal 용추폭포 대전사 공원길 공원입구 1.8 (6:2) 3.4 (22:7) -4.6 (6:3) -4.1 (5:34) 21.5 (13:56) 14.1 (14:11) 12.1 (15:4) 9.6 (15:42) (14:26) 27 (11:46) 23 (15:52) 46 (15:19) 97 (3:2) 97 (3:46) 95 (16:57) 95 (15:45) 합계 2,797 (4) 주왕산국립공원참진드기채집지역식생분포 Total 344 1, ,92 2,797 (3) 주왕산국립공원참진드기채집날짜별기상자료 국립공원연구원으로부터제공받은식생자료를토대로주왕산국립공원의참진드기채 집지역별식생분포를기록하였다. 주왕산은주로소나무및굴참나무군락으로이루어져 있었으며, 공원입구의경작지주변에서도참진드기가채집되었다 <Table 3-19>. 주왕산국립공원의참진드기채집날짜별로기상청의자료에따라서기온, 강우량, 습도의일극값을추출하였다. 1월 1일에일강우량이 4.5mm일때참진드기채집개체수가줄어들었으며, 타조사국립공원지역과마찬가지로기온이낮아짐에따라채집개체수가줄어드는경향을보였다 <Table 3-18>. Table 3-19 주왕산국립공원채집지역별식생분포 ( 자료제공 : 국립공원연구원 ) 채집지역 식생분포 채집마리수 상의리 소나무-굴참나무군락 1,126 주왕암 소나무군락 7 대전사 굴참나무군락 672 교리 소나무-굴참나무군락 31 공원길 소나무군락 466 용추폭포 소나무-굴참나무군락 135 공원입구 경작지

21 5. 월출산국립공원채집결과월출산국립공원에서는천황사, 도갑리, 회문리. 월곡리등총 13개채집지역에서참진드기를채집하였다 (Fig. 42). 채집지역은주요탐방로를포함하여주로탐방로주변에서이루어졌으며회문리, 월곡리등월출산북쪽에서접근할수있는탐방로이외지역도포함되었다. 채집지역은국립공원탐방안내도에탐방로구간별로표시하였다 <Fig. 3-6>. Table 3-2 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 월별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis H. flava spp. Amblyomma testudinarium JUL AUG SEP OCT NOV Total Male Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal Larva ,267 Male 1 1 Nymph 4 4 Subtotal Total ,639 (2) 월출산국립공원고도별참진드기채집결과 Fig. 3-6 월출산국립공원탐방안내도및참진드기채집지역. (1) 월출산국립공원월별참진드기채집결과 월출산국립공원의고도별채집결과를보면 1~2m 구간에서참진드기의채집개체수가집중되어있는것을확인할수있다. 이는월출산의야생동물서식과연관성이있을것으로생각된다. 다른조사국립공원처럼월출산국립공원에서도저고도 (~1m) 에서개피참진드기 (H. flava) 는채집되지않았다 <Table 3-21>. 월출산국립공원에서 7월부터 11월까지총 1,639마리의참진드기가채집되었다. 월출산국립공원은대한민국의남단에위치하여타지역에비교해기온이높기때문에 11월까지도참진드기가고르게채집되는경향을보였다. 다른조사국립공원지역과마찬가지로개피참진드기 (H. flava) 는 1월이후부터많은개체수가채집되었다. 또한주로멧돼지를숙주로한다고알려져있는뭉뚝참진드기 (A. testudinarium) 가소수 (5마리) 채집되었다 <Table 3-2> Table 3-21 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의종별, 고도별분류 (215 년 7 월 -215 년 11 월 ) Species longicornis H. flava spp. Amblyomma testudinarium Tick collect by altitude (meter) ~1 1~2 2~3 5~6 Total Male Female Nymph Subtotal Male Female Nymph Subtotal Larva ,267 Male 1 1 Nymph 4 4 Subtotal Total ,639 (3) 월출산국립공원참진드기채집날짜별기상자료 월출산국립공원의참진드기채집날짜별로기상청의자료에따라서기온, 강우량, 습도 의일극값을기록하였다. 월출산국립공원역시기온이낮아지면서참진드기가적게채집 되는경향을보였지만, 평균기온이높은대한민국남단에위치하기때문에늦가을까지도 계속참진드기가채집되는것을확인할수있었다. 8 월 11 일월출학생야영장주변에서 채집할때많은강우가있었지만숲이우거져비를피할수있었고아직지면이완전히 젖은상황이아니어서적지않은수의참진드기를채집할수있었다 <Table 3-22>. Table 3-22 월출산국립공원채집날짜별기상데이터 ( 자료수집 : 국립공원관리공 단 ) 채집날짜채집지역최저기온 ( 시각 ) 7.26 천황사 8.1 천황사야영장 8.2 천황사 경포대야영장 월출학생야영장 8.19 천황사 9.6 도갑리 9.13 도갑리 1.1 회문리월곡리도갑사 1.26 도갑사 11.1 월하리 11.7 천황사 천황사 22.6 (4:24) 22.8 (4:44) 23.7 (1:34) 21. (6:3) 2.3 (2:16) 21.2 (5:41) 18.6 (6:9) 12.3 (6:11) 6.7 (3:2) 12.1 (5:54) 1.9 (2:44) 14.6 (8:48) 6.8 (5:29) 최고기온 ( 시각 ) 32.6 (13:59) 32.2 (14:29) 32.1 (14:37) 31.3 (14:45) 25.5 (1:44) 28.9 (1:47) 27.2 (14:54) 25.1 (12:54) 23.2 (13:26) 21.2 (14:24) 1.8 (14:34) 18.8 (23:43) 15.4 (15:8) 일강우량 최저습도 ( 시각 ) 67 (14:26) 77 (13:31) 79 (13:58) 64 (13:46) 88 (15:47) 75 (1:49) 73 (15:44) 54 (13:23) 59 (1:59) 58 (12:55) 77 (16:38) 92 (2:4) 74 (15:23) 최고습도 ( 시각 ) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 1 (:1) 91 (1:2) 1 (:1) 1 (6:29) 1 (:1) 채집마리수 합계 1,

22 (4) 월출산국립공원참진드기채집지역식생분포 2 절 SFTSV 유전자검출결과 국립공원연구원으로부터제공받은식생자료를토대로월출산국립공원의참진드기채 집지역별식생분포를기록하였다. 월출산국립공원내채집지역에서천황사의상수리나 무군락과천황사야영장및경포대야영장에인위적으로만든것으로생각되는굴참나무- 졸참나무군락을제외하면모든참진드기채집지역은소나무군락으로이루어져있었다 <Table 3-23>. Table 3-23 월출산국립공원채집지역별식생분포 ( 자료제공 : 국립공원연구원 ) 채집지역 식생분포 채집마리수 천황사 상수리나무군락 316 천황사야영장 굴참나무-졸참나무군락 91 경포대야영장 굴참나무-졸참나무군락 13 월출학생야영장 소나무군락 12 도갑리 소나무군락 81 회문리 소나무군락 85 월곡리 소나무군락 66 월하리 소나무군락 48 조사대상 5개 ( 북한산, 치악산, 덕유산, 주왕산, 월출산 ) 국립공원지역에서채집한참진드기로부터 SFTSV의검출을위한 One-step RT/Nested PCR과 RT real-time PCR을실시하였으며, 성충 (adult) 과약충 (nymph) 에대해서는 1마리씩개체별로, 유충 (larva) 에대해서는채집지역별로 1마리씩풀링을하여유전자증폭을실시하였다. 조사국립공원전체에서채집한참진드기의성충및약충에대한 SFTSV 감염률은 3.61% 로나타났다. 주왕산국립공원에서 222마리채집한참진드기의성충및약충에서 16마리가 SFTSV가검출되어 7.21% 로가장높게나타났으며, 치악산에서채집한약충참진드기 218마리중에서 4마리가검출되어 1.83% 로가장낮은감염률을나타내었다 <Table 3-24>. 참진드기성충에있어서주왕산국립공원에서채집한 113마리중에서 12마리가양성 1.62% 로가장높은감염률을나타내었으며, 월출산에채집한성충에있어서는 15마리중에서 3마리가양성이나와 2.86% 의감염률을나타내었다 <Table 3-24>. 약충에있어서는주왕산에서채집한참진드기 19마리에서 4마리가 SFTSV가검출되어 3.67% 로나타났으며, 약충에서최저감염률은치악산에서채집한참진드기에서 186마리중에서 2마리에서양성이나와 1.8% 의감염률을나타내었다 <Table 3-24>. 조사국립공원에서채집집한전체유충 (8,274마리, 852풀 ) 으로부터 SFTSV 검출결과 26풀에서양성이나와최소야외감염률은.31% 로나타났다 <Table 3-25>. 북한산국립공원에서는 21풀 (1,924마리) 중에서 7풀에서양성이나타나.36% 의최소야외감염률로서가장높게나타났으며, 치악산은 152풀 (1,488마리) 중에서 3개풀에서양성이나타나가장낮은.2% 의최소야외감염률을나타내었다 <Table 3-25>. 본연구에서는기존연구결과보고와달리성충과약충에서감염률 (infection rate, %) 로계산을하여자연계내에서식하는참진드기에실제 SFTSV가얼마나감염되었는지에대한정확한계산을할수있었다. 기존에최소야외감염률 (MFIR, %) 은풀링을한것이므로몇마리를풀링을했느냐에따라서최대야외감염율로계산을하면감염률은더높이나타나보일수있다. 따라서최소야외감염률은대표성이없으며, 워낙작은참진드기에서감염률을조사를해야하는입장에서초기에최소야외감염률로서계산을했던것이다. 그러나검사방법의효율적인개선으로인하여성충과약충에서는개체별로검사가가능해젖기때문에유충을제외한성충과약충에서는참진드기의개체별감염률 (%) 을계산할수있었다. 결과에서보면조사국립공원전체의약충감염률이 2.64% 로서성충감염률 6.11% 보다낮게나타났다. 성충과약충의개체별총감염률을보면 3.61% 로나타났다. 또한유충에있어서는최소야외감염률이.31% 로서나타났으며, 이수치를감염률 ( 최대야외감염률 ) 로환산을할경우 1마리씩풀링 ( 총 852풀 ) 을하였으니약 3.5% 로추정할수있다 국내의 Yun 등 (214) 이보고한자료에의하면사람으로부터채집한참진드기로부 터 SFTSV 감염여부를조사한결과에서 261 마리참진드기를 189 풀로만들어 SFTSV 를조사한결과 18 개풀에서양성이검출되었다. 따라서채집된참진드기전체에서 최소감염률 (minimum infection rate) 6.9% 로나타났으며, H. longicornis 12 풀에서 SFTSV 의검출이되어 5.7% 의감염률을나타냈으며, A. testudinarium 은 4 개풀에서 양성이나타나 23.5% 의감염률을보였고, I. nipponensis 13.3% 를나타내었다. 이중 흡혈참진드기에서는 4 개풀에서양성이나타나 18.2% 의감염률이나타났으며, 비흡 혈참진드기에서는 5.9% 의감염률을나타내었다. Yun 등 (214) 이보고한사람으로부터채집한참진드기로부터 SFTSV 감염여부를 조사한결과와자연계에서식하고있는참진드기에감염된 SFTSV 의감염여부를 비교하여볼때자연계에서서식하는참진드기는흡혈을하지않은경우로서감염 률이사람으로부터흡혈을한참진드기에서최소감염률로계산한것보다감염률이 낮게나타난것을알수있다. 이러한결과는아마도감염된참진드기가흡혈을하 면서바이러스가참진드기내에서증폭이되어검출이될확률이높을것으로유추 를할수도있다. 따라서이번연구에서참진드기개체에서 SFTSV 를검출할수있는시스템의 개발은앞으로 SFTSV 의자연계내에서생활사를이해하는연구에있어서매우중 요하게활용할수있을것으로예측된다. Table 3-24 조사국립공원별참진드기성충및약충채집수및 SFTSV 감염률 National parks No. positive (No. of tested ticks) Adult Nymph Total SFTSV IR (%) No. positive (No. of tested ticks) SFTSV IR (%) No. positive (No. of tested ticks) SFTSV IR (%) Bukhansan 4 (78) (255) (333) 3.6 Chiaksan 2 (32) (186) (218) 1.83 Deogyusan 4 (81) (244) (325) 3.69 Juwangsan 12 (113) (19) (222) 7.21 Wolchulsan 3 (15) (267) (372) 2.42 Total 25 (49) (1,61) (1,47) 3.61 IR, infection rate Table 3-25 조사국립공원별참진드기유충채집수및 SFTSV 감염률 National parks No. of collected ticks No. of tested pools Larva No. of positive pools SFTSV MFIR (%) Bukhansan 1, Chiaksan 1, Deogyusan 1, Juwangsan 2, Wolchulsan 1, Total 8, MFIR, minimum field infection rate 참진드기로부터 SFTSV 감염률을성장단계별로살펴보면, 유충 (larva) 에서 8,284 마 리중 26 개풀 (pool) 에서 SFTSV 를검출하여.31%(MFIR), 약충 (nymph) 1,67 마리중 28 마리에서검출되어 2.62%(IR), 성충 (adult) 415 마리중 26 마리에서검출되어 6.27%(IR) 로성장단계가높아질수록감염률도높아지는것이확인되었다 <Table 3-26, Fig 3-7>. Table 3-26 참진드기성장단계별 SFTSV 감염률 Larva Nymph Adult Total No. of ticks No. of positive Infection rate(%).31* *, 최소야외감염율 (minimum field infection rate: MFIR) Infection rate(%) 2 1 Larva* Nymph Adult Fig. 3-7 참진드기성장단계별 SFTSV 감염률. *, 최소야 외감염율 (minimum field infection rate: MFIR)

23 조사공원에서채집된참진드기의종은총 5 종으로나타났으나이중에서 SFTSV 에 대해양성이확인된참진드기는총 3 종으로작은소진드기 (H. longicornis), 개피참진 드기 (H. flava), 뭉뚝참진드기 (A. testudinarium) 이었다. 북한산국립공원에서는성충과 약충 12 마리에서 SFTSV 양성이검출되었다 ( 작은소진드기성충과약충 (H. longicornis adult and nymph), 개피참진드기성충과약충 (H. flava adult and nymph). 치악산국 립공원에서는작은소진드기성충과약충 4 마리에서 SFTSV 양성이검출되었다. 덕유 산국립공원에서는작은소진드기성충과약충 12 마리에서 SFTSV 양성이검출되었다. 주왕산국립공원에서는작은소진드기성충과약충 16 마리에서 SFTSV 양성이검출되 었다. 월출산국립공원에서는작은소진드기성충과약충그리고뭉뚝참진드기약충 (A. testudinarium nymph) 9 마리에서 SFTSV 양성이검출되었다 <Table 3-27>. Table 3-27 국립공원별 SFTSV 양성참진드기정보 ( 성충, 약충 ) National parks No. of positive Bukhansan 12 Chiaksan 4 Deogyusan 12 Juwangsan 16 Wolchulsan 9 Total 53 Information of tick species with positive SFTSV longicornis longicornis flava flava longicornis longicornis longicornis longicornis longicornis longicornis longicornis longicornis Amblyomma testudinarium Nymph Adult Nymph Adult Nymph Adult Nymph Adult Nymph Adult Nymph Adult Nymph 조사국립공원 ( 북한산, 치악산, 덕유산, 주왕산, 월출산 ) 전체로부터성충 (adult) 과 약충 (nymph) 실험결과를진드기종별로분류해보면 1,6 마리의작은소진드기 (H. longicornis) 로부터 48 마리에서 SFTSV 양성 ( 감염율 4.77%), 436 마리의개피참진드기 (H. flava) 로부터 5 마리에서 SFTSV 양성 ( 감염율 1.15%), 5 마리의뭉뚝참진드기 (A. testudinarium) 로부터 1 마리에서 SFTSV 양성 ( 감염율 : 2%), 23 마리의일본참진드기 (I. nipponensis) 로부터는 SFTSV 가검출되지않아총 1,47 마리의참진드기성충과약충 중 53 마리에서 SFTSV 양성을확인하였다 ( 감염율 : 3.67%)<Table 3-28>. Table 3-28 참진드기성충, 약충에대한종별 SFTSV 검출결과 Tick species longicornis H. flava Amblyomma testudinarium Ixodes nipponensis IR, infection rate. No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) Adult female Adult male Nymph Subtotal 1, Adult female Adult male Nymph Subtotal Adult male 1 Nymph Subtotal Adult female 5 Adult male 9 Nymph 9 Subtotal 23 Total 1, 조사국립공원 ( 북한산, 치악산, 덕유산, 주왕산, 월출산 ) 전체로부터채집한유충 (larva) 은채집일자별, 채집지별, 종별로풀링하여 SFTSV 검출실험을실시하였다. 총 8,274 마리의유충은 852 풀 (pool) 이었으며, 그중 spp. 유충이 8,242 마리로 849 풀이였고이중에서 26 개풀에서 SFTSV 양성이검출되어최소야외감염률 (MFIR).32% 를나타내었으며, Ixodes spp. 유충은 32 마리로서 3 풀었으나 SFTSV 는 검출되지않았다. 따라서유충전체의최소야외감염률 (MFIR) 은.31% 로나타났다 <Table 3-29> Table 3-29 참진드기유충에대한종별 SFTSV 검출결과 Tick species No. of tested ticks (No. of tested pools) SFTS positive pools MFIR (%) spp. 8,242 (849) Ixodes spp. 32 (3) Total 8,274 (852) MFIR, minimum field infection rate 월별 SFTSV 검출결과성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서 8 월에감염률 (infection rate, IR) 이 7.88%, 유충에서 7 월에최소야외감염률 (minimum field infection rate, MFIR) 이 2.5% 로가장높았다 <Table 3-3>. Table 3-3 참진드기로부터월별 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Test results JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks ,47 No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) 146 (16) 1,666 (178) 3,642 (37) 2,45 (251) 37 (37) 8,274 (852) SFTS positive pools MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. 본연구에서조사국립공원별로탐방로와비탐방로 ( 탐방로로부터 1m 이상떨어진 숲속 ) 를구분하여채집된참진드기로부터 SFTSV 검출을시도하였다. 탐방로와비탐 방로별검출결과를보면탐방로에서성충 161 마리, 약충 353 마리에대해서 SFTSV 검출을실시하였고, 감염률은성충에서 9.94%, 약충에서 2.55% 로나타났다. 탐방로 에서유충은 2,647 마리서 1 마리씩풀링하여 SFTSV 검출을실시하였으며, 최소야외 감염률은.89% 로나타났다. 탐방로에서성충, 약충및유충의모든성장단계에서 총 3,161 마리에대한 SFTSV 검출을실시하였으며. 탐방로에서의최소야외감염률은.89% 로확인되었다. 비탐방로에서는성충 254 마리, 약충 714 마리에서 SFTSV 검출 을실시하였고, 감염률은성충에서 3.94%, 약충에서 2.66% 로나타났다. 비탐방로에 서유충은 5,637 마리에서 1 마리씩풀링하여 SFTSV 검출을실시하였으며, 최소야외 감염률은.41% 로나타났다. 비탐방로에서채집된참진드기의모든성장단계에서 최소야외감염률이.79% 로확인되었고, 탐방로에서채집된참진드기와비교해서낮 은감염률을나타내었다 <Table 3-31>. 성장단계별로살펴보면성충에서덕유산국립공원을제외한모든국립공원에서더 높은감염률이나타났다. 약충에서는탐방로에서 2.55%, 비탐방로에서 2.66% 의감염 률로비슷한결과를보였으며, 유충에서는탐방로에서.11%, 비탐방로에서.41% 의 최소야외감염률을나타내어비탐방로에서더높은감염률을확인하였다. 본연구에 서각국립공원별로채집된성충과약충채집개체수가수십에서백마리내외로 적다. 따라서연구결과에서참진드기의성충과약충에서의 SFTSV 감염률이실제야 생참진드기의감염률과는차이가있을것으로추측되며, 보다정확한결과를도출 하기위해서는같은지역에서더오랜연구가진행되고데이터가축적되어야할것 으로사료된다 <Table 3-31>. Table 3-31 탐방로와비탐방로별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 National parks Adult (IR, %) Bukhansan 2 (8.33) Chiaksan 2 (6.45) Deogyusan () Juwangsan 9 (16.36) Wolchulsan 3 (6.98) Total 16 (9.94) No. of SFTS positive ticks Trail Non-trail *Larva Total (MFIR, (MFIR, Adult Nymph *Larva (MFIR, %) %) (IR, %) (IR, %) %) Nymph (IR, %) 3 (8.57) 1 (.61) () 2 (4.8) 3 (3.8) 9 (2.55) 1 (.17) () () () 2 (.21) 3 (.11) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. 1. 국립공원별 SFTSV 검출결과 가. 북한산국립공원검출결과 6 (.92) 3 (.43) () 11 (1.55) 8 (.74) 28 (.89) 5 (3.45) () 4 (5.33) 4 (6.9) () 13 (3.94) (1) 북한산국립공원종별, 발육단계별 SFTSV 검출결과 2 (2.21) 1 (4.76) 8 (3.65) 2 (3.33) 3 (1.6) 16 (2.66) 6 (.45) 3 (.3) 3 (.29) 9 (.46) 2 (.63) 23 (.41) Total (MFIR, %) 13 (.8) 4 (.39) 15 (1.13) 15 (.72) 5 (.88) 52 (.79) *No. of SFTS positive pool (larva) 북한산국립공원에서채집된성충 (adult), 약충 (nymph) 발육단계의참진드기 333 마리 중에서 12 마리의참진드기에서 SFTSV 가검출되어 3.6% 의감염률을나타내었다. 작은소 진드기 (H. longicornis) 의경우성충 (adult) 27 마리중 2 마리, 약충 (nymph) 14 마리중 6 마리 에서 SFTSV 가검출되어감염률이 4.79% 로나타났다. 개피참진드기 (H. flava) 에서는성충 51 마리중 2 마리, 약충 115 마리중 2 마리에서 SFTSV 가검출되어 2.41% 의감염률로작은소

24 진드기과비교해서낮은감염률을나타내었다 <Table 3-32>. Table 3-32 북한산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 Tick species longicornis flava 북한산국립공원에서채집된가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 (larva) 1,924 마리는채집일별, 채집지역별, 참진드기종별로풀링하여 21 개의풀에서 SFTSV 검출을시도하였으며 7 개풀에서 SFTSV 가검출되어.36% 의최소야외감염률을나타내었 다 <Table 3-33>. No. of tested ticks No. of SFTSV positive Infection rates (%) Adult female Adult male Nymph Subtotal Adult female 21 Adult male Nymph Subtotal Total Table 3-33 북한산국립공원참진드기유충으로부터 SFTSV 검출결과 Tick species stage No. of tested ticks SFTS positive (No. of tested pools) pools MFIR (%) Table 3-34 북한산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Items JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) (14) 51 (53) 441 (44) - 1,924 (21) SFTS positive pools MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. (3) 북한산국립공원 SFTSV 양성검출지역 북한산국립공원의참진드기채집지역중정릉지구, 북한산성, 송추지구, 원각사, 백운 대, 석굴암, 삼천사에서채집된참진드기로부터 SFTSV 가검출되었다. 북한산국립공원에 서채집한참진드기로부터 SFTSV 검출율이가장높은지역은송추지구이며, 채집지역이 탐방객들이주로다니는길과인접해있기때문에주의가필요할것으로보인다. 북한산에 서 SFTSV 가검출된지역은탐방로와비탐방로로구분하여북한산국립공원탐방안내도상 에표시하였다 <Fig. 3-8, 3-9>. spp. Larva 1,924 (21) 7.36 MFIR, minimum field infection rate. (2) 북한산국립공원월별 SFTSV 검출결과 북한산국립공원에서채집된참진드기의 SFTSV에대한월별검출결과를보면 7월에성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서 13마리중 2마리양성으로 15.38% 의감염률로가장높게나타났으며, 9월에채집한참진드기에서는양성이검출되지않았다. 월별로참진드기에서검출되는 SFTSV에대한유의적인통계자료를얻기위해서는더욱많은표본이필요할것으로생각된다. 유충에서는발견되기시작하는 8월에서가장높은.61% 의최소야외감염률을나타내고있었다 <Table 3-34> 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) Fig. 3-8 북한산국립공원 SFTSV 양성검출지역 ( 우이, 정릉. 구기, 불광, 산성지구 ). Fig. 3-9 북한산국립공원 SFTSV 양성검출지역 ( 도봉, 송추지구 )

25 나. 치악산국립공원검출결과 (2) 치악산국립공원월별 SFTSV 검출결과 (1) 치악산국립공원참진드기종별, 발육단계별 SFTSV 검출결과 치악산국립공원에서채집된성충, 약충발육단계의참진드기 218 마리중에서 4 마리의 참진드기에서 SFTSV 가검출되어 1.83% 의감염률을나타내었다. 작은소진드기 (H. longicornis) 에서만 22 마리중 4 마리에서 SFTSV 가검출되었으며다른종의참진드기에서 는바이러스가검출되지않았다 <Table 3-35>. Table 3-35 치악산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 Tick species longicornis flava Ixodes nipponensis No. of tested ticks 치악산국립공원에서가시들피참진드기속 (Haemaphysali spp.) 유충 1,456 마리, 참진드 기속 (Ixode spp.) 유충 32 마리가채집되어채집지역별로각각 149 풀, 8 개풀로풀링되어 SFTSV 검출을시도하였으며, 가시들피참진드기속의유충풀에서만 3 개의양성이검출되 어.2% 의최소야외감염률을나타내었다 <Table 3-36>. No. of SFTSV positive Infection rates (%) Adult female Adult male 2 Nymph Subtotal Nymph 12 Nymph 4 Total 치악산국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 의월별검출결과를보면 8 월에 성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서 52 마리중 3 마리로 5.77% 의가장높은감염률을나타내었 다. 유충에서는 9 월에 141 개풀 (1,399 마리 ) 중 3 개풀에서양성으로.21% 의최소야외감염 률을나타내었다 <Table 3-37>. Table 3-37 치악산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Items JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) - 89 (11) 1,399 (141) - - 1,488 (152) SFTS positive pools MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. (3) 치악산국립공원 SFTSV 양성검출지역 치악산국립공원의참진드기채집지역중구룡사, 금대지구, 부곡지구에서 SFTSV 의 검출이확인되었다. 치악산에서 SFTSV 가검출된지역은구룡사지역과부곡지구이며, 탐방로와비탐방로로구분하여지도상에표시하였다 <Fig. 3-1>. Table 3-36 치악산국립공원참진드기유충의 SFTSV 검출결과 Tick species stage No. of tested ticks (No. of tested pools) SFTS positive pools MFIR (%) spp. Larva 1,456 (149) 3.21 Ixodes spp. Larva 32 (3) Total 1,488 (152) 3.2 MFIR, minimum field infection rate 다. 덕유산국립공원검출결과 (1) 덕유산국립공원참진드기종별, 발육단계별 SFTSV 검출결과 덕유산국립공원에서채집된성충, 약충발육단계의참진드기 32마리중에서 12마리의참진드기에서 SFTSV가검출되어 3.75% 의감염률을나타내었다. 덕유산에서는작은소진드기 (H. longicornis) 에서만 247마리중 12마리에서 SFTSV가검출되어 4.86% 의감염률을나타내었으며, 다른종의참진드기에서는바이러스가검출되지않았다 <Table 3-38>. Table 3-38 덕유산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) Tick species longicornis flava Ixodes nipponensis No. of tested ticks No. of SFTSV positive Infection rates (%) Adult female Adult male 11 Nymph Subtotal Adult female 6 Adult male 7 Nymph 54 Subtotal 67 Adult female 3 Adult male 3 Nymph 5 Subtotal 11 Total 덕유산국립공원에서채집된유충 1,3 마리는채집지역별로풀링하여 11 개의풀에서 SFTSV 검출을시도하였으며, 3 개풀에서 SFTSV 가검출되어.29% 의최소야외감염률을 나타내었다 <Table 3-39>. Table 3-39 덕유산국립공원참진드기유충의 SFTSV 검출결과 Fig. 3-1 치악산국립공원 SFTSV 양성검출지역. Tick species stage No. of tested ticks SFTS positive (No. of tested pools) pools MFIR (%) spp. Larva 1,3 (11) 3.29 MFIR, minimum field infection rate

26 (2) 덕유산국립공원월별 SFTSV 검출결과 덕유산국립공원에서채집한참진드기로부터월별 SFTSV 검출결과를보면 8월에성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서 31마리중 4마리양성으로가장높은 12.9% 의감염률을나타내었다. 유충에서는 1월에만 69개풀 (674 마리 ) 중 3개풀에서 SFTSV가검출되어.45% 의최소야외감염률 (MFIR) 을나타내었다 <Table 3-4>. Table 3-4 덕유산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Items JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) 15 (3) 249 (29) 82 (8) 674 (69) 1 (1) 1,2 (19) SFTS positive pools 3 3 MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. (3) 덕유산국립공원 SFTSV 양성검출지역 덕유산국립공원의참진드기채집지역중안성지구, 세심대, 삼공리, 남덕유산에서채집한참진드기로부터 SFTSV가검출되었다. 남덕유산에서가장높은비율로 SFTSV가검출되었으며, 안성지구가뒤를이었다. 덕유산에서 SFTSV 가검출된지역은탐방로와비탐방로로구분하여지도상에표시하였다 <Fig. 3-11>. 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) Fig 덕유산국립공원 SFTSV 양성검출지역 라. 주왕산국립공원검출결과 (2) 주왕산국립공원월별 SFTSV 검출결과 (1) 주왕산국립공원참진드기종별, 발육단계별 SFTSV 검출결과 주왕산국립공원에서채집된성충 (adult), 약충 (nymph) 발육단계의참진드기 222 마리 중에서 17 마리의참진드기에서 SFTSV 가검출되어 7.66% 의감염률을나타내었다. 작은소 진드기 (H. longicornis) 에서는 135 마리중 16 마리에서 SFTSV 가검출되어 11.85% 의감염률 을나타내었다. 작은소진드기성충암컷, 성충수컷, 약충에서는각각 13.92%, 14.29%, 8.16% 의감염률을나타내었다. 개피참진드기 (H. flava) 에서는 79 마리중에서 1 마리에서 SFTSV 가검출되어 1.27% 의감염률을나타내었다 <Table 3-41>. Table 3-41 주왕산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 Tick species longicornis flava Ixodes nipponensis No. of tested ticks No. of SFTSV positive Infection rates (%) Adult female Adult male Nymph Subtotal Adult female Adult male 8 Nymph 6 Subtotal Adult female 2 Adult male 6 Subtotal 8 Total 주왕산국립공원에서채집한참진드기의월별 SFTSV 검출결과를보면 8 월에성충 (adult) 과약충 (nymph) 52 마리중 6 마리에서양성이검출되어 11.54% 로가장높은감염률 을나타내었다. 유충 (larva) 에서는 9 월에만 16 개풀 (1,51 마리 ) 중 9 개풀에서 SFTSV 가 검출되어.86% 의최소야외감염률 (MFIR) 을나타내었다 <Table 3-43>. Table 3-43 주왕산국립공원월별참진드기로부터 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Items JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) - - 1,51 (16) 1,174 (12) 34 (34) 1,988 (21) SFTS positive pools MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. (3) 주왕산국립공원 SFTSV 양성검출지역 주왕산국립공원의참진드기채집지역중상의리 ( 지하교쉼터및공원길지역 ), 대전사, 교리, 공원입구에서채집한참진드기로부터 SFTSV 가검출되었다. 주왕산에서 SFTSV 가 검출된지역은상의리와용추폭포지역으로, 탐방로와비탐방로로구분하여지도상에 표시하였다 <Fig. 3-12>. 주왕산국립공원에서채집된가시들피참진드기속유충 2,565 마리는채집지역별로풀링 하여 26 개의풀에서 SFTSV 검출을시도하였으며 9 개풀에서 SFTSV 가검출되어.35% 의 최소야외감염률을나타내었다 <Table 3-42>. Table 3-42 주왕산국립공원참진드기유충의 SFTSV 검출결과 Tick species stage No. of tested ticks SFTS positive (No. of tested pools) pools MFIR (%) spp. Larva 2,565 (26) 9.35 MFIR, minimum field infection rate

27 Table 3-44 월출산국립공원참진드기성충및약충의종별 SFTSV 검출결과 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) Tick species longicornis flava Amblyomma testudinarium No. of tested ticks No. of SFTSV positive Infection rates (%) Adult female Adult male 12 Nymph Subtotal Adult female 16 Adult male 32 Nymph 62 Subtotal 112 Adult male 1 Nymph Subtotal Total Fig 주왕산국립공원 SFTSV 양성검출지역. 마. 월출산국립공원검출결과 (1) 월출산국립공원참진드기종별, 발육단계별 SFTSV 검출결과월출산국립공원에서채집된성충 (adult), 약충 (nymph) 발육단계의참진드기 372마리중에서 9마리의참진드기에서 SFTSV가검출되어 2.42% 의감염률을나타내었다. 작은소진드기 (H. longicornis) 255마리중 8마리에서 SFTSV가검출되어 3.14% 의감염률을나타내었으며, 작은소진드기성충암컷은 7.14% 의감염률을나타내었으고, 약충에서는 2.49% 의감염률을나타내었다. 뭉뚝참진드기 (A. testudinarium) 에서도 5마리중 1마리 ( 약충 ) 에서 SFTSV가검출되었다 <Table 3-44>. 월출산국립공원에서채집된가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 (larva) 1,267 마리는채집지역별로풀링하여 129 개의풀에서 SFTSV 검출을시도하였으며 4 개 풀에서 SFTSV 가검출되어.32% 의최소야외감염률을나타내었다 <Table 3-45>. Table 3-45 월출산국립공원참진드기유충의종별 SFTSV 검출결과 Tick species spp. Larva 1,267 (129) 4.32 MFIR, minimum field infection rate. (2) 월출산국립공원월별 SFTSV 검출결과 No. of tested ticks (No. of tested pools) SFTS positive pools MFIR (%) 월출산국립공원에서채집한참진드기로부터월별 SFTSV 검출결과를보면성충 (adult) 과약충 (nymph) 에서 7월에 1마리중 3마리양성으로 3% 의가장높은감염률을나타내었다. 유충 (larva) 에서는 7월에 13개풀 (131마리) 중 3개풀에서, 1월에 18개풀 (161마리) 중 1개풀에서 SFTSV가검출되었고최소야외감염률 (MFIR) 은 7월과 1월에각각 2.29%,.62% 로나타났다 <Table 3-46> Table 3-46 월출산국립공원월별 SFTSV 검출결과 Adult & Nymph Larva Items JUL AUG SEP OCT NOV Total No. of tested ticks No. of SFTSV positive IR (%) No. of tested ticks (No. of tested pools) 131 (13) 346 (34) 69 (62) 161 (18) 2 (2) 1,267 (127) SFTS positive pools MFIR (%) IR, infection rate; MFIR, minimum field infection rate. (3) 월출산국립공원 SFTSV 양성검출지역 월출산국립공원의참진드기채집지역중천황사, 경포대야영장, 도갑리, 월곡리에서 채집한참진드기로부터 SFTSV 가검출되었다. 이중천황사에서가장높은비율로 SFTSV 가검출되었다. 월출산에서 SFTSV 가검출된지역은탐방로와비탐방로로구분하여지도 상에표시하였다 <Fig. 3-13>. 채집지역 SFTS 양성검출지역 ( 탐방로 ) SFTS 양성검출지역 ( 비탐방로 ) Fig 월출산국립공원 SFTSV 양성검출지역. 2. 야생동물분포및식생분포도와비교분석가. 북한산국립공원북한산국립공원의식생분포도에따른채집지역별참진드기채집개체수를살펴보면, 북한산국립공원에서채집된 2,267마리의참진드기중침활혼효림 ( 송추지구, 삼천사 ) 에서 1,19마리 (52.49%), 신갈나무-소나무군락 ( 북한산성, 도봉지구, 구기지구, 안골계곡, 석굴암 ) 에서 872마리 (38.46%), 낙엽활엽수림 ( 정릉지구, 우이지구, 백운대 ) 에서 112마리 (4.94%), 신갈나무군락 ( 원각사 ) 에서 93마리 (4.1%) 가각각채집되었다. 식생분포에따른채집지역별로종별참진드기채집결과를보면, 채집된참진드기의성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 중침활혼효림에서작은소진드기 ( longicornis) 89마리, 개피참진드기 ( flava) 125마리, 신갈나무-소나무군락에서작은소진드기 65마리, 개피참진드기 32마리, 낙엽활엽수립에서작은소진드기 12마리, 신갈나무군락에서작은소진드기 4마리, 개피참진드기 16마리가각각채집되었다. 국립공원관리공단으로부터수집한북한산국립공원의야생동물출현빈도에따른야생동물분포상과채집지역별채집된참진드기의개체수를살펴보면, 채집지역별로송추지구에서 953마리 (42.4%), 북한산성에서 532마리 (23.47%), 안골계곡에서 259마리 (11.42%), 삼천사에서 237마리 (1.45%), 원각사에서 93마리 (4.1%), 우이지구에서 55마리 (2.43%), 백운대에서 45마리 (1.99%), 석굴암에서 4마리 (1.76%), 도봉지구에서 31마리 (1.37%), 정릉지구에서 12마리 (.53%), 구기지구에서 1마리 (.44%) 가각각채집되었으며, 북한산에서참진드기채집을실시한채집지역전체에서반경 1km 이내에야생동물분포지도상에서야생동물의출현이확인되었다. 북한산국립공원에서채집한참진드기의채집지역별로종별채집결과를살펴보면, 채집된참진드기의성충과약충중송추지구에서작은소진드기 31마리, 개피참진드기 2마리, 북한산성에서작은소진드기 26마리, 개피참진드기 1마리, 안골계곡에서작은소진드기 2마리, 개피참진드기 11마리, 삼천사에서작은소진드기 58마리, 개피참진드기 15마리, 원각사에서작은소진드기 4마리, 개피참진드기 16마리, 석굴암에서작은소진드기 32마리, 개피참진드기 8마리, 도봉지구에서작은소진드기 3마리, 개피참진드기 2마리, 정릉지구에서작은소진드기 12마리, 구기지구에서작은소진드기 2마리, 개피참진드기 1마리가각각채집되었다. 북한산국립공원의채집지역별, 종별, 성장단계별로참진드기로부터 SFTSV 양성검출결과를살펴보면, 송추지구에서작은소진드기성충 1마리, 약충 2마리, 개피참진드기성충 1마리, 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 5개풀 (pool), 북한산성에서작은소진드기성충 1마리, 삼천사에서작은소진드기약충 1마리, 개피참진드기약충 2마리, 정릉지구에서작은소진드기약충 2마리, 원각사에서개피참진드기성충 1마리, 가시들피참진드기속유충 1개풀, 백운대에서가시들피참진드기속유충 1개풀, 석굴암에서작은소진드기약충 1마리에서 SFTSV 양성이검출되었다 <Fig. 3-14>

나. 치악산국립공원 치악산국립공원에서총 1,76마리의참진드기가채집되었으며치악산국립공원의식생분포도에따른채집지역별참진드기채집결과를살펴보면, 치악산에서참진드기채집을실시한총 8개채집지역은모두소나무-기타낙엽활엽수림 ( 소나무-신갈나무, 굴참나무, 졸참나무, 잣나무 ) 군락의혼합림으로구성되어있었다.

29%) 가채집되었으며, 채집지역반경 5m 이내에서야생동물분포지도상높은야생동물출현빈도를보였다. 반면채집지역중황골지구에서참진드기가 547마리 (32.6%) 채집되었지만, 채집지역주변 2km 이내에야생동물출현이확인되지않았다. 치악산국립공원의참진드기채집지역별로종별채집결과를보면, 참진드기성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 중부곡지구에서작은소진드기 (H.

flava) 1마리, 황골지구에서작은소진드기 135마리, 개피참진드기 3마리, 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 1마리, 구룡사에서작은소진드기 9마리, 개피참진드기 4마리, 일본참진드기 3마리, 금대지구에서작은소진드기 5마리, 개피참진드기 2마리, 세렴폭포에서작은소진드기 3 마리, 개피참진드기 2마리가각각채집되었다.

덕유산국립공원 덕유산국립공원의식생분포도에따른채집지역별참진드기채집결과를살펴보면, 덕유산국립공원에서총 1,357마리의참진드기가채집되었으며, 신갈나무군락 ( 적상지구, 삼공리, 남덕유산 ) 에서 1,215마리 (89.54%), 소나무군락 ( 안성지구 ) 에서 9마리 (6.63%), 잣나무식재림 ( 용추폭포 ) 에서 3마리 (2.

longicornis) 153마리, 개피참진드기 (H. flava) 36마리, 일본참진드기 7마리 (I.

28 나. 치악산국립공원 치악산국립공원에서총 1,76마리의참진드기가채집되었으며치악산국립공원의식생분포도에따른채집지역별참진드기채집결과를살펴보면, 치악산에서참진드기채집을실시한총 8개채집지역은모두소나무-기타낙엽활엽수림 ( 소나무-신갈나무, 굴참나무, 졸참나무, 잣나무 ) 군락의혼합림으로구성되어있었다. 치악산국립공원에서채집지역별참진드기채집개체수와국립공원연구원으로부터수집한야생동물출현빈도에따른야생동물분포지도를살펴보면, 치악산국립공원의참진드기채집지역중부곡지구에서 574마리 (33.65%), 구룡사에서 439마리 (25.73%), 금대지구에서 141마리 (8.26%), 세렴폭포에서 5마리 (.29%) 가채집되었으며, 채집지역반경 5m 이내에서야생동물분포지도상높은야생동물출현빈도를보였다. 반면채집지역중황골지구에서참진드기가 547마리 (32.6%) 채집되었지만, 채집지역주변 2km 이내에야생동물출현이확인되지않았다. 치악산국립공원의참진드기채집지역별로종별채집결과를보면, 참진드기성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 중부곡지구에서작은소진드기 (H. longicornis) 5마리, 개피참진드기 (H. flava) 1마리, 황골지구에서작은소진드기 135마리, 개피참진드기 3마리, 일본참진드기 (Ixodes nipponensis) 1마리, 구룡사에서작은소진드기 9마리, 개피참진드기 4마리, 일본참진드기 3마리, 금대지구에서작은소진드기 5마리, 개피참진드기 2마리, 세렴폭포에서작은소진드기 3 마리, 개피참진드기 2마리가각각채집되었다. 채집지역별로종별, 성장단계별 SFTSV 검출결과를살펴보면, 부곡지구에서가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 2개풀 (pool), 금대지구에서작은소진드기성충 2마리, 약충 1마리, 구룡사에서작은소진드기성충 1마리, 가시들피참진드기속유충 1개풀에서 SFTSV 양성검출되었다 <Fig. 3-15> 다. 덕유산국립공원 덕유산국립공원의식생분포도에따른채집지역별참진드기채집결과를살펴보면, 덕유산국립공원에서총 1,357마리의참진드기가채집되었으며, 신갈나무군락 ( 적상지구, 삼공리, 남덕유산 ) 에서 1,215마리 (89.54%), 소나무군락 ( 안성지구 ) 에서 9마리 (6.63%), 잣나무식재림 ( 용추폭포 ) 에서 3마리 (2.21%), 소나무-굴참나무군락 ( 세심대 ) 에서 11마리 (.81%), 소나무-신갈나무군락 ( 덕유대야영장 ) 에서 8마리 (.59%), 구상나무- 주목군락에서 3마리 (.22%) 가채집되었다. 식생분포에따른채집지역별참진드기종별채집결과를보면, 채집된참진드기의성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 에서신갈나무군락에서작은소진드기 (H. longicornis) 153마리, 개피참진드기 (H. flava) 36마리, 일본참진드기 7마리 (I. nipponensis), 소나무군락에서작은소진드기 67마리, 개피참진드기 11마리, 일본참진드기 1마리, 한뿔엉에참진드기 ( japonica) 1마리, 잣나무식재림에서작은소진드기 9마리, 개피참진드기 2마리, 일본참진드기 1마리, 소나무-굴참나무군락에서작은소진드기 1마리, 소나무-신갈나무군락에서작은소진드기 8마리, 구상나무-주목군락에서일본참진드기 3마리가각각채집되었다. 덕유산국립공원에서채집한채집지역별참진드기와국립공원연구원으로부터수집한덕유산국립공원의야생동물출현빈도에따른야생동물분포지도를살펴보면, 채집지역별로남덕유산에서 635마리 (46.79%), 적상지구에서 315마리 (23.21%), 삼공리에서 265마리 (19.53%), 안성지구에서 9마리 (6.63%), 용추폭포에서 3마리 (2.21%), 세심대에서 11마리 (.81%), 덕유대야영장에서 8마리 (.59%), 향적봉-중봉에서 3마리 (.22%) 가각각채집되었으며채집지역별, 종별채집결과를보면, 참진드기의성충과약충에서남덕유산에서작은소진드기 34마리, 개피참진드기 5마리, 일본참진드기 5마리, 적상지구에서작은소진드기 81마리, 개피참진드기 31마리, 일본참진드기 2마리, 삼공리에서작은소진드기 38마리, 안성지구에서작은소진드기 67마리, 개피참진드기 11마리, 일본참진드기 1마리, 한뿔엉에참진드기 1마리, 용추폭포에서작은소진드기 9마리, 개피참진드기 2마리, 일본참진드기 1마리, 세심대에서작은소진드기 1마리, 덕유대야영장에서작은소진드기 8마리, 향적봉-중봉에서일본참진드기 3마리가각각채집되었다. 덕유산국립공원에서채집한참진드기에대한 SFTSV 양성검출결과를채집지역별, 참진드기종별, 성장단계별로살펴보면, 남덕유산에서작은소진드기약충 2마리, 유충 3개풀 (pool), 안성지구에서작은소진드기약충 4마리, 삼공리에서작은소진드기약충 2마리, 세심대에서작은소진드기성충 4마리에서 SFTSV 양성검출되어총성충과약충에서 12마리, 유충 3개풀에서 SFTSV가검출되었다. 출현빈도에따른야생동물분포지도를채집지역별로살펴보면, 남덕유산을제외한모든채집지역에서반경 5m이내에다수의야생동물의출현이관찰되었다 <Fig 3-16>

라. 주왕산국립공원 주왕산국립공원에서는총 2,797마리의참진드기가채집되었으며, 주왕산국립공원의식생분포도에따른채집지역의식생분포별참진드기의채집개체수를살펴보면, 소나무-굴참나무군락 ( 상의리, 교리, 용추폭포 ) 에서 1,292마리 (46.19%), 굴참나무군락 ( 대전사 ) 에서 672마리 (24.

flava) 6마리, 굴참나무군락에서작은소진드기 25마리, 개피참진드기 6마리, 일본참진드기 (I. nipponensis) 8마리, 소나무군락에서작은소진드기 1마리, 개피참진드기 3마리, 경작지에서개피참진드기 1마리가각각채집되었다.

7마리가각각채집되었다. 주왕산국립공원에서채집한참진드기에대한 SFTSV 양성검출결과를채집지역별, 참진드기종별, 성장단계별로살펴보면, 상의리에서작은소진드기성충 6 마리, 약충 3마리, 가시들피참진드기속 ( spp.

채집지역중상의리, 대전사, 공원길, 용추폭포에서는채집지역에서밀접한거리 (5m 이내 ) 에서야생동물분포지도상야생동물의출현빈도가높게나타났으며, 공원입구와교리의채집지역에서는주변반경 1km 이내에서야생동물의출현이확인되지않은것으로나타났다 <Fig 3-17>. - 92 - - 93 - 마.

28%), 굴참나무-졸참나무군락 ( 천황사야영장, 경포대야영장 ) 에서 194마리 (11.83%) 가각각채집되었다. 참진드기종별로채집된결과를보면, 소나무군락에서성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 중작은소진드기 (H. longicornis) 18마리, 개피참진드기 (H.

29 라. 주왕산국립공원 주왕산국립공원에서는총 2,797마리의참진드기가채집되었으며, 주왕산국립공원의식생분포도에따른채집지역의식생분포별참진드기의채집개체수를살펴보면, 소나무-굴참나무군락 ( 상의리, 교리, 용추폭포 ) 에서 1,292마리 (46.19%), 굴참나무군락 ( 대전사 ) 에서 672마리 (24.3%), 소나무군락 ( 주왕암, 공원길 ) 에서 473마리 (16.91%), 경작지 ( 공원입구 ) 에서 36마리 (12.87%) 가각각채집되었다. 식생분포에따른채집지역별로참진드기종별채집결과를살펴보면, 채집된성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 의참진드기중소나무-굴참나무군락에서작은소진드기 (H. longicornis) 1마리, 개피참진드기 (H. flava) 6마리, 굴참나무군락에서작은소진드기 25마리, 개피참진드기 6마리, 일본참진드기 (I. nipponensis) 8마리, 소나무군락에서작은소진드기 1마리, 개피참진드기 3마리, 경작지에서개피참진드기 1마리가각각채집되었다. 주왕산국립공원에서참진드기채집지역별채집결과와국립공원연구원으로부터수집한출현빈도에따른야생동물분포지도를살펴보면, 주왕산에서채집을실시한채집지역중상의리 1,126마리 (4.26%), 대전사 672마리 (24.3%), 공원길 466마리 (7.32%), 공원입구 36마리 (12.87%), 용추폭포 135마리 (4.83%), 교리 31마리 (1.11%), 주왕암 7마리 (.25%) 가각각채집되었으며, 채집지역별, 참진드기의종별채집결과를보면, 참진드기성충과약충중상의리에서작은소진드기 69마리, 개피참진드기 6마리, 대전사에서작은소진드기 25마리, 개피참진드기 6마리, 일본참진드기 8마리, 공원길에서작은소진드기 3마리, 개피참진드기 3마리, 공원입구에서개피참진드기 1마리, 교리에서작은소진드기 31마리, 주왕암에서작은소진드기 7마리가각각채집되었다. 주왕산국립공원에서채집한참진드기에대한 SFTSV 양성검출결과를채집지역별, 참진드기종별, 성장단계별로살펴보면, 상의리에서작은소진드기성충 6 마리, 약충 3마리, 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 9개풀 (pool), 대전사에서작은소진드기성충 2마리, 약충 1마리, 공원입구에서개피참진드기성충 1마리, 교리에서작은소진드기성충 4마리에서각각 SFTSV가검출되어주왕산국립공원에서채집된참진드기의성충과약충에서총 17마리, 유충에서총 9개풀에서 SFTSV 양성으로검출되었다. 채집지역중상의리, 대전사, 공원길, 용추폭포에서는채집지역에서밀접한거리 (5m 이내 ) 에서야생동물분포지도상야생동물의출현빈도가높게나타났으며, 공원입구와교리의채집지역에서는주변반경 1km 이내에서야생동물의출현이확인되지않은것으로나타났다 <Fig 3-17> 마. 월출산국립공원 월출산국립공원의식생분포와참진드기가채집된개체수를살펴보면, 월출산국립공원에서총 1,639마리의참진드기가채집되었고, 그중소나무군락 ( 월출학생야영장, 도갑리, 회문리, 월곡리, 월하리 ) 에서 1,129마리 (68.88%), 상수리나무군락 ( 천황사 ) 에서 316마리 (19.28%), 굴참나무-졸참나무군락 ( 천황사야영장, 경포대야영장 ) 에서 194마리 (11.83%) 가각각채집되었다. 참진드기종별로채집된결과를보면, 소나무군락에서성충 (Adult) 과약충 (Nymph) 중작은소진드기 (H. longicornis) 18마리, 개피참진드기 (H. flava) 66마리, 뭉뚝참진드기 (Amblyoma testudinarium) 1마리가채집되었고, 상수리나무군락에서성충과약충중작은소진드기 56마리, 개피참진드기 45마리, 뭉뚝참진드기 4마리가채집되었으며, 굴참나무-졸참나무군락에서작은소진드기 19마리, 개피참진드기 1마리가각각채집되었다. 월출산국립공원에서참진드기의채집지역별채집결과와국립공원연구원으로부터수집한출현빈도에따른야생동물분포지도를살펴보면, 월출산에서채집을실시한채집지역중도갑리 81마리 (49.42%), 천황사및천황사야영장 47마리 (24.83%), 월출학생야영장 12마리 (7.32%), 경포대야영장 13마리 (6.28%), 회문리 85마리 (5.19%), 월곡리 66마리 (4.3%), 월하리 48마리 (2.93%) 가각각채집되었으며, 채집지역별로동일한시간을투자하여참진드기를채집하였다고가정할때도갑리지역에서다른채집지역과비교해서가장높은밀도의참진드기가서식하고있다고추측할수있다. 채집지역별, 참진드기의종별채집결과를보면, 참진드기성충과약충중도갑리에서작은소진드기 138마리, 개피참진드기 39마리, 뭉뚝참진드기 1마리, 천황사및천황사야영장에서작은소진드기 56마리, 개피참진드기 46마리, 뭉뚝참진드기 4마리, 월출학생야영장에서작은소진드기 8마리, 경포대야영장에서작은소진드기 19마리, 회문리에서개피참진드기 7마리, 월곡리에서작은소진드기 3마리, 개피참진드기 3마리, 월하리에서작은소진드기 31마리, 개피참진드기 17마리가각각채집되었다. 월출산국립공원에서채집한참진드기에대한 SFTSV 양성검출결과를채집지역별, 참진드기종별, 성장단계별로살펴보면, 천황사에서작은소진드기약충 3마리, 뭉뚝참진드기약충 1마리, 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 3개풀 (pool), 도갑리에서작은소진드기약충 2마리, 경포대야영장에서작은소진드기성충 3마리, 월곡리에서가시들피참진드기속유충 1개풀에서각각 SFTSV가검출되었다. 야생동물분포지도에서참진드기채집지역중천황사및도갑리지역의반경 1km 이내에서많은야생동물의출현빈도를보였으며, 경포대야영장, 월출학생야영장, 회문리, 월곡리, 월하리의채집지역에서는반경 2km 이내에서야생동물의출현이확인되지않았다 <Fig 3-18>

바. 야생동물출현빈도에따른채집된참진드기개체수분포 각국립공원의참진드기채집지역으로부터반경 5m, 1km, 그리고 2km 이내에포함되는야생동물분포지역의수와채집된참진드기개체수와관계를단순회귀분석하였다. 반경 5m 및반경 1km 안에서출현하는야생동물빈도와채집된참진드기개체수와의관계는유의확률.

각채집지역으로부터채집된참진드기의개체수에대한야생동물출현빈도의설명력은 1% 미만으로낮으나, 전체적으로야생동물의출현빈도가높을수록채집된참진드기의개체수는증가하는것으로나타났다 <Fig. 3-19~3-21>.

3-19 진드기채집지로부터반경 5m 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수관계 ( 가로축 : 야생동물출현빈도, 세로축 : 참진드기채집개체수 ). - 96 - - 97 - Table 3-47 진드기채집지로부터반경 5m 이내야생동물출현빈도와진드기개 체수의회귀분석결과 항목 β 표준오차 t 값 유의확률 통계량 R =.

3-21 진드기채집지로부터반경 2km 이내야생동물출현빈도와진드기개체수 관계 ( 가로축 : 야생동물출현빈도, 세로축 : 참진드기채집개체수 ). Table 3-49 진드기채집지로부터반경 2km 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수의회귀분석결과 항목 β 표준오차 t 값유의확률통계량 Fig.

30 바. 야생동물출현빈도에따른채집된참진드기개체수분포 각국립공원의참진드기채집지역으로부터반경 5m, 1km, 그리고 2km 이내에포함되는야생동물분포지역의수와채집된참진드기개체수와관계를단순회귀분석하였다. 반경 5m 및반경 1km 안에서출현하는야생동물빈도와채집된참진드기개체수와의관계는유의확률.1에서통계적으로유의한것으로나타났다 <Table 3-47, 3-48>. 반경 2km이내의야생동물출현빈도와채집된참진드기의개체수의관계는유의확률.5에서통계적으로유의한것으로나타났다 <Table 3-49>. 각채집지역으로부터채집된참진드기의개체수에대한야생동물출현빈도의설명력은 1% 미만으로낮으나, 전체적으로야생동물의출현빈도가높을수록채집된참진드기의개체수는증가하는것으로나타났다 <Fig. 3-19~3-21>. 위데이터로부터얻는통계결과는야생동물의출현만으로그지역에서식함을증명하기는불가능하다는점과참진드기를채집한개체수는채집자의숙련도, 채집한날의기상상태등여러가지요인에의해변동될수있다는점으로인하여신뢰도가떨어진다. 그러나앞으로본연구와같은분야에서연구를지속해나갈때이번연구를통해얻은결과는축적된데이터로써의미를가지게될것으로예측된다. Fig 진드기채집지로부터반경 5m 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수관계 ( 가로축 : 야생동물출현빈도, 세로축 : 참진드기채집개체수 ) Table 3-47 진드기채집지로부터반경 5m 이내야생동물출현빈도와진드기개 체수의회귀분석결과 항목 β 표준오차 t 값 유의확률 통계량 R = 상수야생동물출현빈도 R 2 =.4249 수정된 R 2 = F = ( 반경 5m 이내 ) p = Fig 진드기채집지로부터반경 2km 이내야생동물출현빈도와진드기개체수 관계 ( 가로축 : 야생동물출현빈도, 세로축 : 참진드기채집개체수 ). Table 3-49 진드기채집지로부터반경 2km 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수의회귀분석결과 항목 β 표준오차 t 값유의확률통계량 Fig. 3-2 진드기채집지로부터반경 1km 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수관계 ( 가로축 : 야생동물출현빈도, 세로축 : 참진드기채집개체수 ). Table 3-48 진드기채집지로부터반경 1km 이내야생동물출현빈도와진드기개체 수의회귀분석결과 항목 β 표준 오차 t 값유의확률통계량 상수 야생동물 출현빈도 ( 반경 1km 이내 ) R =.2953 R 2 = 수정된 R 2 = F = p = 상수 야생동물 출현빈도 * ( 반경 2km 이내 ) R = R 2 = 수정된 R 2 = F = p =

31 3 절 SFTSV 유전자분석결과 1. 유전자염기서열분석결과각공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV가검출된유전자는공원별, 진드기종별, 발육단계별로유전자분석을실시하여비교분석하였다. 지역별로종이나발육단계가중복되어 SFTSV가검출된샘플은유전자염기서열분석에서제외하였다. 샘플명은북한산 (BH), 치악산 (CA), 덕유산 (DY), 주왕산 (JW), 월출산 (WC) 으로표시하였고각샘플마다참진드기종및발육단계를표시하였다. 분석한 SFTSV의유전자염기서열은 SFTSV S segment의 346bp이다. 북한산국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV가검출된샘플을종별, 채집지역별로 1샘플에대하여유전자염기서열을분석하였다. 같은방법으로치악산에서 4개샘플, 덕유산 5개샘플, 주왕산 9개샘플, 월출산 1개샘플로총 38개양성샘플에대하여유전자염기서열을분석하였으며각샘플별참진드기종및채집지역과분석결과는다음과같다. (1) 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 유전자염기서열분석 >BH1 (H. longicornis Nymph), 정릉지구 ( 명상길 ) 탐방로 >BH2 (H. longicornis Nymph), 정릉지구 ( 신성천 ) 탐방로 GGCTCTCAAT CACTCCT GT GAGGGCT GCACAGAGCCTT CCCACTT GGACA >BH31 (H. longicornis Adult Female), 북한산성 ( 둘레길 ) 탐방로 >BH56 (H. longicornis Nymph), 송추지구 ( 송추계곡 ) 탐방로 >BH84 (H. longicornis Adult Male), 송추지구 ( 송추계곡 ) 비탐방로 GGCTCTCAAT CACCCCTGTGAGGGTT GCACAGAGCCTT CCCACTT GGACA >BH91 ( spp. Larva), 송추지구 ( 송추계곡 ) 비탐방로 >BH97 ( spp. Larva), 송추지구 ( 송추계곡 ) 비탐방로 GTTGATGGCACTCCAAGAGAAATATGGGCTGGTTGAGAGGGCAGAAACCG >BH12 ( spp. Larva), 송추지구 ( 송추계곡 ) 비탐방로 TTGGGT CCCTGATTCCAACTGCAGGGGTAT CTGGAGCCACAACGAAGACC >BH188 (H. flava Adult Male), 원각사 ( 입구 ) 비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAGATGTCAAACTCAGGGTCTAAGAGGTTGATGG CGCTCCAGGAGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAGACCAGGCTCTCAATCACCCC TGTAAGGGTAGCGCAGAGCCTCCCCACTTGGACATGTGCTGCAGCAGCAGCCTTAAAG GAGTATCTCCCAGTGGGGCCAGCCGTCATGAACCTGAAGGTCGAGAATTATCCCCCTG AGATGATGTGCATGGCCTTCGGGTCCCTGATTCCAACTACAGGGGTATCTGAAGCCAC GACCAAGACCCTGATGGAGGCTTACTCCTTGTGGCAAGATGCCTTCACCAAGACTA >BH421 (H. flava Nymph), 삼천사비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACTCAGGGTCTAAGAGGTTGATGG CACTTCAAGAGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAAACCAGGCTCTCAATCACTCC TGTGAGGGTAGCACAGAGCCTTCCCACTTGGACATGTGCTGCAGCTGCAGCCTTAAAG GAGTATCTCCCAGTGGGCCCAGCTGTCATGAACCTGAAGGTCGAGAATTACCCCCCTG AGATGATGTGCATGGCCTTTGGGTCCCTGATTCCAACTGCAGGGGTGTCAGAAGCCAC AACGAAGACC (2) 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 유전자염기서열분석 >CA81 (H. longicornis Nymph), 구룡사비탐방로 CATGAACCTGAAGGTCGAAGATTAT CCCCCTGAGATGATGTGCATGGCCT >CA94 (H. longicornis Adult Female), 금대지구탐방로 >CA15 (H. Adult Female), 금대지구탐방로 >CA368 ( spp. Larva), 구룡사비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACTCTGGGTCTAAGAGGTTGATGG CACTCCAAGAGAAATATGGGCTGGTTGAGAGGGCAGAAACCAGGCTCTCAATCACTCC TGTGAGGGTTGCACAGAGCCTTCCCACTTGGACATGTGCTGCAGCAGCAGCCCTAAAG GAGTATCTCCCAGTGGGGCCAGCTGCCATGAACCTGAAGGTCGAAAATTATCCCCCTG AGATGATGTGCATGGCCTTTGGGTCCCTGATTCCAACTGCAGGGGTATCTGAAGCCAC AACGAAGACC

32 (3) 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 유전자염기서열분석 >DY65 (H. longicornis Nymph), 안성지구 ( 안성탐방지원센터 ) 비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACTCAGGGT CTGAGAG GTTGATGGCACTT CAAGAGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAAACCA GGCTCTCAATCACT CCTGT GAGGGTAGCACAGAGCCT TCCCACTT GGACA TGTGCTGCAGCTGCAGCCTT AAAGGAGTAT CTCCCAGTGGGCCCAGCT GT CATGAACCTGAAGGTCGAGAATTACCCCCCT GAGATGATGT GCATGGCCT TTGGGTCCCTGATTCCAACT GCAGGGGTGTCAGAAGCCACAACGAAGACC >DY135 (H. longicornis Adult Female), 세심대비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACTCTGGGTCTAAGAGGTTGATGG CACTCCAAGAGAAATATGGGCTGGTTGAGAGGGCAGAAACCAGGCTCTCAATCACTCC TGTGAGGGTTGCACAGAGCCTTCCCACTTGGACATGTGCTGCAGCAGCAGCCCTAAAG GAGTATCTCCCAGTGGGGCCAGCTGTCATGAACCTGAAGGTCGAAAATTATCCCCCTG AGATGATGTGCATGGCCTTTGGGTCCCTGATTCCAACTGCAGGGGTATCTGAAGCCAC AACGAAGACC (4) 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 유전자염기서열분석 >DY66 (H. longicornis Nymph), 안성지구 ( 안성탐방지원센터 ) 비탐방로 AATAAGAT CGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACT CAGGGTCTAAGAG GTTGATGGCACTT CAAGAGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAAACCA GGCTCTCAATCACT CCTGT GAGGGTAGCACAGAGCCT TCCCACTT GGACA TGTGCTGCAGCTGCAGCCTT AAAGGAGTAT CTCCCAGTGGGCCCAGCT GT CATGAACCTGAAGGTCGAGAATTACCCCCCT GAGATGATGT GCATGGCCT TTGGGTCCCTGATTCCAACT GCAGGGGTGTCAGAAGCCACAACGAAGACC >JW1 (H. longicornis Adult Female), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >DY7 (H. longicornis Nymph), 안성지구 ( 안성탐방지원센터 ) 비탐방로 AATAAGAT CGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACT CAGGGTCTAAGAG GTTGATGGCACTTCAAGGGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAAACCA GGCTCTCAATCACT CCTGT GAGGGTAGCACAGAGCCT TCCCACTT GGACA TGTGCTGCAGCTGCAGCCTT AAAGGAGTAT CTCCCAGTGGGCCCAGCT GT CATGAACCTGAAGGTCGAGAATTACCCCCCT GAGATGATGT GCATGGCCT TTGGGTCCCTGATTCCAACT GCAGGGGTGTCAGAAGCCACAACGAAGACC >JW11 (H. longicornis Adult Female), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 TTGGGT CCCTGATTCCAACTGCAGGGGCATCTGAAGCCACAACGAAGACC >DY86 (H. longicornis Nymph), 안성지구 ( 칠연폭포 ) 비탐방로 AATAAGAT CGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACT CAGGGTCTAAGAG GTTGATGGCACTT CAAGAGAAATATGGACTGGTTGAGAGGGCAGAAACCA GGCTCTCAATCACT CCTGT GAGGGTAGCACAGAGCCT TCCCACTT GGACA TGTGCTGCAGCTGCAGCCTT AAAGGAGTAT CTCCCAGTGGGCCCAGCT GT CATGAACCTGAAGGTCGAGAATTACCCCCCT GAGATGATGT GCATGGCCT TTGGGTCCCTGATTCCAACT GCAGGGGTGTCAGAAGCCACAACGAAGACC >JW17 (H. longicornis Nymph), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >JW18 (H. longicornis Nymph), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >JW42 (H. longicornis Adult Male), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >JW32 (H. longicornis Adult Female), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >JW196 ( spp. Larva), 상의리 ( 공원길 ) 비탐방로 AATAAGATCGTCAAGGCATCAGGGAAAATGTCAAACTCTGGGTCTAAGAGGTTGATGG CACTCCAAGAGAAATATGGGCTGGTTGAGAGGGCAGAAACCAGGCTCTCAATCACTCC TGTGAGGGTTGCACAGAGCCTTCCCACTTGGACATGTGCTGCAGCAGCAGCCCTAAAG GAGTATCTCCCAGTGGGGCCAGCTGTCATGAACCTGAAGGTCGAAAATTATCCCCCTG AGATGATGTGCATGGCCTTTGGGTCCCTGATTCCAACTGCAGGGGTATCTGAAGCCAC AACGAAGACC >JW34 (H. longicornis Adult Female), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 >JW39 (H. longicornis Adult Female), 상의리 ( 지하교쉼터 ) 탐방로 (5) 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 유전자염기서열분석 >WC3 (H. longicornis Nymph), 천황사탐방로 >WC5 (H. longicornis Nymph), 천황사탐방로

33 >WC7 ( spp. Larva), 천황사탐방로 >WC52 (H. longicornis Adult Female), 경포대야영장탐방로 >WC12 (H. longicornis Nymph), 천황사비탐방로 >WC54 (H. longicornis Adult Female), 경포대야영장탐방로 CTGATGGAGGTCTACTCTCTGTGGCAAGATGCCTTCACCAAGACTA >WC13 ( spp. Larva), 천황사비탐방로 >WC55 (H. longicornis Adult Female), 경포대야영장탐방로 >WC2 ( spp. Larva), 천황사비탐방로 >WC87 (A. testudinarium Nymph), 천황사비탐방로 (6) 유전자염기서열분석결과 지금까지알려진바로는 SFTSV의염기서열정보는크게중국유전자형과일본유전자형으로나눌수있다. 우리나라는이두가지의유전자형이혼재하는양상을보이고있다. 본연구에서 RT-PCR을통하여 SFTSV의 "S" segment 유전자를증폭한결과, 346 bp의염기서열정보를획득하였다. 346 bp의염기서열을대상으로계통분석학적인분석을실시한결과, 확인된염기서열들은크게두개의 sub-clade로나뉘는것을확인할수있었다. 한 sub-clade 그룹은일본염기서열과유사성이가장높으나독립적인그룹을형성한것을알수있다. 다른그룹은국내에서분리동정된 SFTSV와동일하거나매우높은유사성을보이는것을확인하였다. 비록진드기에서 RT-PCR을이용한데이터라는한계가있지만우리나라야생생태계에서중국과일본에서분리된바이러스와유사성이높은 SFTSV가분포하고있음을추측할수있다 <Fig. 3-22~25>. 본과제를통하여총 79개의양성밴드를확인하였고, 이중 38개에서염기서열분석을실시하였다. 염기서열분석한 38개샘플중 33개에서는일본사람에서분리동정된 SFTSV strain과가장높은상동성을보였으며, 5개샘플은국내사람에서분리동정된 SFTSV strain과높은상동성을보였다. 국립공원별로살펴보면, 북한산에서는총 19개의양성밴드를확인하였고이중 1개샘플에대하여염기서열분석을실시하였다. 그중 1개 (BH 421) 가일본사람에서분리동정된 SFTSV strain과가장높은상동성을보였으며, 나머지 9개 (BH 1, 2, 31, 56, 84, 88, 91, 97, 12) 는일본과국내사람에서분리동정된 strain과유사함을확인하였다. 치악산에서는총 7개의양성샘플중 4개 (CH 81, 94, 15, 368) 의샘플에서염기서열분석을실시하였다. 분석한치악산의 4개의샘플은모두일본의사람에서분리동정된 SFTSV strain과가장높은상동성을보였다. 덕유산에서는 15개의양성샘플중 5개에서염기서열분석을실시하였고이중 4개 (DY 65, 66, 7, 86) 가일본사람에서분리동정된 SFTSV strain과유사하였고, 1개 (DY 135) 가국내사람에서분리동정된 SFTSV strain과유사함을확인하였다. 주왕산에서는 25개양성샘플중 9개 (JW 1, 11, 17, 18, 32, 34, 39, 42, 196) 에서, 월출산에서는 13개양성샘플중 1개 (WC 3, 5, 7, 12, 13, 2, 52, 54, 55, 87) 에서유전자염기서열분석을실시하였다. 주왕산과월출산에서유전자염기서열을분석한 19개샘플은모두일본사람에서분리동정된 SFTSV strain과가장높은유사성을보임을확인하였다 <Fig. 3-25>. Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기 서열의 MultAlin 분석결과 (1)

Fig. 3-23 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기 서열의 MultAlin 분석결과 (2). Fig. 3-24 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기 서열의 MultAlin 분석결과 (3). - 112 - - 113-2.

분석샘플은염기서열분석하였던양성샘플들과동일하며 ( 총 38개양성샘플 ), 분석한 SFTSV의아미노산서열은다음과같다. (1) 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 >BH1 (H. longicornis Nymph) >BH2 (H.

34 Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기 서열의 MultAlin 분석결과 (2). Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV 유전자단편이증폭된염기 서열의 MultAlin 분석결과 (3) 아미노산 (amino acid) 서열분석결과 각공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV가검출된유전자는아미노산 (amino acid) 서열로전환하여표시하였으며, MultiAlin을통하여비교분석하였다. 샘플명은북한산 (BH), 치악산 (CA), 덕유산 (DY), 주왕산 (JW), 월출산 (WC) 으로표시하였고각샘플마다참진드기종및발육단계를표시하였다. 분석샘플은염기서열분석하였던양성샘플들과동일하며 ( 총 38개양성샘플 ), 분석한 SFTSV의아미노산서열은다음과같다. (1) 북한산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 >BH1 (H. longicornis Nymph) >BH2 (H. longicornis Nymph) NKIVKASGKM SNSGSKRLMA LQEKYGLVER AETRLSITPV RAAQSLPTWT >BH31 (H. longicornis Adult Female) >BH56 (H. longicornis Nymph) Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV S DNA 유전자단편의계통발생학적관계도 (Nucleotide, Neighbor-Joining tree). 적색글자는국립공원으로부터채집된진드기로부터의샘플을의미함 (BH: 북한산, CA: 치악산. DY: 덕유산, JW: 주왕산, WC: 월출산 ). >BH84 (H. longicornis Adult Male)

35 >BH91 ( spp. Larva) >CA15 (H. longicornis Adult Female) >BH97 ( spp. Larva) NKIVKASGKM SNSGSKRLMA LQEKYGLVER AETGLSITPV RVAQSLPTWT >CA368 ( spp. Larva) CAAAAALKEY LPVGPAAMNL KVENYPPEMM CMAFGSLIPT AGVSEATTKT >BH12 ( spp. Larva) CAAAAALKEY LPVGPAVMNL KVENYPPEMM CMAFGSLIPT AGVSGATTKT >BH188 (H. flava Adult Male) CAAAAALKEY LPVGPAVMNL KVENYPPEMM CMAFGSLIPT TGVSEATTKT >BH421 (H. flava Nymph) (2) 치악산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 (3) 덕유산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 >DY65 (H. longicornis Nymph) NKIVKASGKM SNSGSERLMA LQEKYGLVER AETRLSITPV RVAQSLPTWT >DY66 (H. longicornis Nymph) >DY7 (H. longicornis Nymph) NKIVKASGKM SNSGSKRLMA LQGKYGLVER AETRLSITPV RVAQSLPTWT >CA81 (H. longicornis Nymph) CAAAAALKEY LPVGPAVMNL KVEDYPPEMM CMAFGSLIPT AGVSEATTKT >DY86 (H. longicornis Nymph) >CA94 (H. longicornis Adult Female) >DY135 (H. longicornis Adult Female) (4) 주왕산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 >JW1 (H. longicornis Adult Female) >JW11 (H. longicornis Adult Female) CAAAAALKEY LPVGPAVMNL KVENYPPEMM CMAFGSLIPT AGASEATTKT >JW17 (H. longicornis Nymph) >JW18 (H. longicornis Nymph) >JW32 (H. longicornis Adult Female) >JW34 (H. longicornis Adult Female) >JW39 (H. longicornis Adult Female) >JW42 (H. longicornis Adult Male) >JW196 ( spp. Larva) (5) 월출산국립공원으로부터채집한참진드기의 SFTSV 아미노산염기서열분석 >WC3 (H. longicornis Nymph) >WC5 (H. longicornis Nymph) >WC7 ( spp. Larva) >WC12 (H. longicornis Nymph) >WC13 ( spp. Larva)

>WC2 ( spp. Larva) >WC52 (H. longicornis Adult Female) >WC54 (H. longicornis Adult Female) LMEVYSLWQD AFTKTX >WC55 (H. longicornis Adult Female) >WC87 (A.

(6) 아미노산서열분석결과해석 DNA 유전자염기서열을아미노산염기서열로전환 (translation) 된 116개의염기정보를대상으로계통분석학적으로분석한결과에서는유의적인차이점을발견하지는못하였다. 이러한이유는크게세가지로추측해볼수있다.

3) 본실험을통하여증폭된 "S" segment 염기서열에서 translation된 NP 단백질들은 SFTSV의단백질중에서 conserved region에포함될가능성있다 <Fig. 3-26, 3-27>. - 12 - - 121-4 절감염예방유용물질연구결과 1.

scutum) 의 4 개의위치에 존재한다고알려져있다 (Sonenshine and Roe, 214)<Fig. 3-28>. Fig. 3-28 암컷 ( 좌측 ) 과수컷 ( 우측 ) 참진드기의형태 (Sonenshine and Roe, 214). 나.

36 >WC2 ( spp. Larva) >WC52 (H. longicornis Adult Female) >WC54 (H. longicornis Adult Female) LMEVYSLWQD AFTKTX >WC55 (H. longicornis Adult Female) >WC87 (A. testudinarium Nymph) Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터 SFTSV S 유전자단편을 amino acid 로전환하여 MultAlin 분석결과. (6) 아미노산서열분석결과해석 DNA 유전자염기서열을아미노산염기서열로전환 (translation) 된 116개의염기정보를대상으로계통분석학적으로분석한결과에서는유의적인차이점을발견하지는못하였다. 이러한이유는크게세가지로추측해볼수있다. 1) 염기서열정보에서는다르다할지라도 translation되는단계에서는동일한단백질 codon으로전환이된다. 2) 분석된아미노산서열숫자가적다. 3) 본실험을통하여증폭된 "S" segment 염기서열에서 translation된 NP 단백질들은 SFTSV의단백질중에서 conserved region에포함될가능성있다 <Fig. 3-26, 3-27> 절감염예방유용물질연구결과 1. 참진드기기초연구조사 가. 참진드기감각기관 참진드기가숙주를찾을때관여하는감각기관은발목마디 ( 부절, 跗節, tarsi of the first pair of legs), 촉수 (palps), 협각 (( 鋏角, chelicerae), 순판 ( 楯板. scutum) 의 4 개의위치에 존재한다고알려져있다 (Sonenshine and Roe, 214)<Fig. 3-28>. Fig 암컷 ( 좌측 ) 과수컷 ( 우측 ) 참진드기의형태 (Sonenshine and Roe, 214). 나. Haller's organ complex 참진드기의첫번째다리의발목마디 ( 부절, Tarsi) 에존재하는 Haller's organ complex 는후각및화학수용 (Olfactory chemoreceptor) 기관으로숙주탐색 (Host hunting) 에관여한다고알려져있다 (Sonenshine and Roe, 214)<Fig. 3-29>. Fig 국립공원에서채집한참진드기로부터아미노산염기서열의계통발생학적관계도 (Amino acid, Neighbor-Joining tree). 적색글자는국립공원으로부터채집된진드기로부터의샘플을의미함 (BH: 북한산, CA: 치악산. DY: 덕유산, JW: 주왕산, WC: 월출산 )

사냥 (Active hunting of hosts) 방법으로주로 CO₂에반응하여직접숙주를탐색하는방법이다. 활동적인사냥 (Active hunting) 으로숙주를찾는참진드기종들은상대적으로높은숙주특이성을가지고있다. 또다른참진드기가숙주를찾기위한전략은 숙주를기다리는매복 (Preparing an ambush) 방법으로지나가는숙주의움직임에반응하여붙는방법이다.

3-29 참진드기의첫번째다리의발목마디 ( 부절, Tarsi) 전자현미경사진 (Sonenshine and Roe, 214). 다. 순판 ( 楯板, scutum) 몇종의참진드기는눈을가지고있다 ( 뭉뚝참진드기 : Amblyomma testudinarium 등 ). 눈이발달된종의참진드기는시각을통해숙주를탐색하기도한다.

37 사냥 (Active hunting of hosts) 방법으로주로 CO₂에반응하여직접숙주를탐색하는방법이다. 활동적인사냥 (Active hunting) 으로숙주를찾는참진드기종들은상대적으로높은숙주특이성을가지고있다. 또다른참진드기가숙주를찾기위한전략은 숙주를기다리는매복 (Preparing an ambush) 방법으로지나가는숙주의움직임에반응하여붙는방법이다. 본연구조사에서사용한플래깅 (flagging) 및드래깅 (dragging) 방법에의해주로채집되는종류가매복 (ambush) 방법으로숙주를탐색한다 (Ixodes spp. 등 ). 매복하는참진드기종은상대적으로낮은숙주특이성을가지고있다 (Sonenshine and Roe, 214). Fig 참진드기의첫번째다리의발목마디 ( 부절, Tarsi) 전자현미경사진 (Sonenshine and Roe, 214). 다. 순판 ( 楯板, scutum) 몇종의참진드기는눈을가지고있다 ( 뭉뚝참진드기 : Amblyomma testudinarium 등 ). 눈이발달된종의참진드기는시각을통해숙주를탐색하기도한다. 눈이존재하지않는참진드기종들도빛에반응하는감각기관을순판 (scutum) 에가지고있다 (Sonenshine and Roe, 214)<Fig. 3-3>. Fig. 3-3 뭉뚝참진드기 (Ambly omma testudinarium) 의등부위그림 (Sonenshine and Roe, 214). 라. Behavioral Studies 참진드기가숙주에게반응하는두가지전략이있다. 하나는 활동적인숙주의 마. 참진드기생활사 참진드기종들은알 (egg), 유충 (larva), 약충 (nymph), 성충 (adult) 의 4 단계의성장단 계를거치며종에따라수년간생존하기도한다. 일본에서 Yamaguchi 등은작은소 진드기를실험실에서사육하는방법을구축하여생활사에대한연구를진행하였다 (Yamaguchi et al. 1971)<Table 3-5>. Table 3-5 작은소진드기 ( longicornis) 의생활사 ( 실험실사육조건, Yamaguchi et al. 1971) 발달기간 소요일 ( 일 ) 최소최대평균 단위생식유성생식단위생식유성생식단위생식유성생식부화기간 ( 알 유충 ) 유충휴식기간 유충흡혈기간 유충탈피기간 ( 숙주에서떨어진후 ) 약충휴식기간 약충흡혈기간 약충탈피기간 ( 숙주에서떨어진후 ) 성충휴식기간 성충흡혈기간 암컷알의성숙기간 ( 숙주에서떨어진후 ) 암컷의산란기간 합계 알수 2,24 2,74 부화율 (%) 참진드기에기피효과가있을것으로생각되는화합물가. Diethyltoluamide (DEET) Chemical name DEET (Diethyltoluamide) IUPAC name N,N-Diethyl-3-methylbenzamide / N,N-Diethyl-m-toluamide Chemical formula C12H17NO Molar mass g/mol (1) 기피제실험 (Repellency test) ( 가 ) Human trap test와 Flag-dragging test (Ogawa et al., 215) 1 Human trap test 흰천을준비한후, 다리양쪽의앞면에부착하여한쪽에만스프레이형태로된시중의제품 (Mushi-Pale PS, DEET, 12%) 을뿌린다. 모든면에골고루뿌려지게하고, 같은부분이 3초이상뿌려지지않게제품을처리한후, 진드기가서식하기좋은 1 m 정도의대나무숲을정해진시간에 5분동안통과한다. 실험은반복적으로 13번진행되었으며, 실험이진행될때마다외부의온도, 습도를측정하였다. 실험결과, 총 189마리의진드기가채집되었으며, 그종은 I. persulcatus와 I. ovatus였다. DEET를처리한쪽에서는 26마리, DEET를처리하지않은쪽에서는 163 마리의진드기가채집되었고, 그결과기피효과는 84% 였다 <Table 3-51>. 2 Flag-dragging test 흰천두개를준비한후, 스프레이형태로된시중의제품 (Mushi-Pale PS, DEET, 12%) 을한개의천에만처리한다. 길이 85cm, 지름 2cm의나무막대에 DEET 를처리한천과처리하지않은천을부착한후, 같은장소에서채집을진행한다. 채집은수풀에서 5분정도진행후, 1분정도공중에천을방치한후, 각각의천에붙어있는진드기의마리수를비교한다. 실험결과, 총 293마리의진드기가채집되었으며, 그종은 I. persulcatus와 I. ovatus였다. DEET를처리한쪽에서는 1마리, DEET를처리하지않은쪽에서는 292 마리가채집되었고, 그결과기피효과는 99.7 % 였다 <Table 3-51> Table 3-51 DEET의참진드기기피실험결과 (Human trap, Flag-dragging test) Human trap Flag-dragging Species DEET Control % Repellency DEET Control % Repellency Ixodes persulcatus Adult female Adule male Nymph Ixodes ovatus Adult female Adult male Nymph Total ( 나 ) Modified human bioassay (Jensenius et al., 25) DEET를주성분으로하는 4개의시중의제품 [Amazon Mozzie(2% DEET), Tabard (19.5% DEET), Ultrathon(31.6% DEET), Bushman(8% DEET)] 으로실험을진행하였 다. 실험을시작하기 24시간전에진드기가기피되는것으로알려진마늘 (Allium sativum) 의섭취를금지하였으며, 실험시적 1분전 2ul의제품들을실험자의검 지손가락의첫마디부터세번째마디까지 4ul/cm 2 로처리하였다. 1마리의 Amblyomma hebraeum을페트리디쉬에올려놓고제품들이처리된손가락을페트리 디쉬에올려서실험을진행하였다. 실험은 5분동안진행되었으며, 한시간단위로 반복되어 4시간까지진행되었다. 실험결과, 시간이지날수록모든물질들의효과가감소되었다. Amazon Mozzie의 경우, 2% DEET를주성분으로하는제품으로, 제품적용후 1시간이지났을때 59% 의기피효과를나타내었고, 나머지는 9% 이상의효과를확인하였다. 3시간이지났 을땐, 모든제품모두 7% 이하의기피효과를나타내는것을확인할수있다 <Fig. 3-31>

나. Icaridin Chemical name Icaridin (= picaridin, KBR 323) 1-piperidinecarboxylic acid 2 - (2 - hydroxyethyl) - 1 IUPAC name -methylpropylester Chemical formula C12H23NO3 Fig.

, 214) 반원의 filter paper를준비하여, 25ul의 15% DEET를처리한후, 충분히말려패트리디쉬에올려놓았다. 패트리디쉬에올려놓은후, 필드에서잡은성별을구분하지않은 A.

38 나. Icaridin Chemical name Icaridin (= picaridin, KBR 323) 1-piperidinecarboxylic acid 2 - (2 - hydroxyethyl) - 1 IUPAC name -methylpropylester Chemical formula C12H23NO3 Fig DEET 의참진드기기피실험결과 (Modified human bioassay). Molar mass g/mol (1) 기피제실험 (Repellency test) ( 다 ) Two-choice laboratory repellency bioassay(bissinger et al., 214) 반원의 filter paper를준비하여, 25ul의 15% DEET를처리한후, 충분히말려패트리디쉬에올려놓았다. 패트리디쉬에올려놓은후, 필드에서잡은성별을구분하지않은 A. americanum, Rhipicephalus sanguineus adult 6마리를올려놓고, 뚜껑을 O-ring으로막아서밖으로나가지못하게한다음, 3, 습도 6% 에서 3분마다분포를확인하였다. 실험은총 3번진행되었다. 그결과, 2.5 시간에서확인한결과, R. sanguineus에선 1% 의기피효과를확인하였고, A. americanum에선 87.5% 의효과를확인하였다. 또다른실험에서는 Dermacentor variabilis와 I. scapularis을이용하여같은실험이진행되었는데, 98.11% 의 DEET를처리한 filter paper에서 D. variabilis와 I. scapularis에서각각 97.7%, 7.8% 의기피율을나타내었다. 대조군의결과가약 5% 전후인것에비하면 I. scapularis에서의기피효과는다른진드기종에비해떨어지는것으로확인되었다. ( 가 ) Hand test와 Sprayed hair test (Abdel-Ghaffar et al., 215) 1 Icaridin을주성분으로하는 3개의물질을이용하였다. 가 KBR 323 All Fa. Insect Repell Spray 2% 나 Saltidin R (Ethanol과 5/5, 3/7 희석 ) 다 Viticks R (1% Icaridin) 2 진드기의준비가 I. persulcatus 독일의실험실로부터확립된 1마리의 Nymph와 12마리의성충수컷, 그리고 238마리의성충암컷이실험에이용되었다. 나 I. ricinus 25마리의성충암컷이이용되었다. 3 Hand test : 2명의지원자의손등에진드기를올린후, 진드기가떨어지지않고계속붙어있거나피실험자의팔위로올라갈시도를할경우에실험을진행하였다. 각실험자들은준비된 4가지용액을처리한후, 진드기의움직임을판단하였다. 진드기가 5초이상움직이지않을경우, 피실험자의손을 7도이상올려서진드기가팔을타고올라가는지또는피실험자의팔또는손등으로부터벗어나는지확인하였다. 이실험은진드기의종류, 그리고 1시간마다진행되었고총 5번의반복실험을진행하였다. 그결과처음 4시간까지는진드기가모두떨어짐으로써진드기의기피효과가 % 라고판단하였다. 하지만, 5시간째에 KBR323, 비율을다르게희석한 Saltidin R 에서는어느정도의진드기가손에남아있었고, Viticks R 에서는단지 1마리의진드기만남아있었다. 진드기의종을다르게하여실험하였으나, 역시 4시간까지는진드기의기피효과가 1% 였으며, 5시간째부터기피효과가조금떨어졌다. 그결과.5% 까진농도가증가될수록영향을받는진드기의마리수가증가하였으나,.81% 에서는영향을받은진드기가감소하였다. 또한.1% 이후로는위로올라가는진드기가존재하지않았으며,.5% 에떨어지는진드기가가장많은것으로확인되었다 <Table 3-53>. 4 Sprayed hair test : 개의털을채취하여 4종류의물질을처치한다음지름 4.5cm의원을만들었다. 그원가운데에는아무것도처리하지않고, 두종류의성충암컷의진드기를가운데두고, 어느방향으로가서본인들의거처를만드는지확인하였다. 이실험은 1시간씩총 5시간동안진행되었고, 반복실험은총 3번진행되었다. 실험결과, KBR 323, Saltidin R 에서는 4시간째까지는진드기의기피효과가어느정도확인이되었으나, 5시간째에진드기의기피효과가확연히떨어지는것을확인할수있었다. 그에비해 Viticks R 에서는 5시간모두기피효과가지속되는것으로확인되었다 <Table 3-52>. Table 3-53 Icaridin의참진드기기피실험결과 (Lower human leg test) 농도 (mg/cm 2 ).5%.1%.5%.1%.5%.81% Affected Falling off Walking down Not leaving Walking up Table 3-52 Icaridin의참진드기기피실험결과 (sprayed hair test) Time KBR323 Saltidin R Saltidin R Viticks R Unsprayed 1h h h h h ( 나 ) 사람아랫다리부분에서실험 (Kröber et al., 213) 직경 13mm의원을연구참여자의아랫다리부분 (lower human leg) 에그린후, 그부분을면도하였다. 면도한부분의원에 Icaridin과 KBR323을 1:1로섞은물질을처리한후, 농도를각각.1%,.5%,.1%,.5%,.1%,.5%,.81% 로나누어 15분동안충분히말렸다. 물질을처리한원가운데에아무것도처리하지않은알루미늄 disc를붙인후, 12개의 I. ricinus 약충을올려놓았다. 올려놓은약충을 5분동안놓고, 진드기의움직임을확인하여기피효과를확인하였다 <Fig. 3-32>. 진드기의움직임이알루미늄 disc에서떨어졌거나, 위또는아래로움직인경우, 기피효과가있다고판단하였고, 기피물질을처리한부분을기준으로평행하게움직인경우, 기피효과가아닌다른행동으로판단하여물질에의한영향이아닌것으로판단하였다. Fig 사람아랫다리부분에서실험 설치사진

다. Permethrin Chemical name IUPAC name Chemical formula Permethrin (±)-3-Phenoxybenzyl 3-(2,2-dichlorovinyl)-2,2- dimethylcyclopropanecarboxylate C21H2Cl2O3 그결과, 4시간, 12시간, 24시간으로시간이지날수록, 진드기의기피효과가각각

29 g/mol Chemical name IUPAC name Chemical formula Indalone butyl 2,2-dimethyl-4-oxo-3,4-dihydro-2H-pyran-6- carboxylate C12H18O4 (1) 기피제실험 (Repellency test) ( 가 ) Sock assay(bissinger et al.

진드기에게물리는것을방지하기위해, 진드기양말에확인될경우바로떼어내고보관하였다. 그결과아무것도처리하지않았던양말과 permethrin을처리한양말에서의차이는있었지만, 알코올과 permethrin을처리한양말의결과를비교하였을때, 큰차이를보이지는않았다. ( 나 ) Spot-on formulation with dogs(dumont et al.

39 다. Permethrin Chemical name IUPAC name Chemical formula Permethrin (±)-3-Phenoxybenzyl 3-(2,2-dichlorovinyl)-2,2- dimethylcyclopropanecarboxylate C21H2Cl2O3 그결과, 4시간, 12시간, 24시간으로시간이지날수록, 진드기의기피효과가각각 65.7%, 84.%, 91.9% ( 실험결과의평균 ) 으로점차증가하였고, 진드기가개에게붙는숫자도매우감소하였으며, 진드기의살충효과시간이지남에따라점차적으로증가하는것을확인할수있었다. 라. Indalone Molar mass g/mol Chemical name IUPAC name Chemical formula Indalone butyl 2,2-dimethyl-4-oxo-3,4-dihydro-2H-pyran-6- carboxylate C12H18O4 (1) 기피제실험 (Repellency test) ( 가 ) Sock assay(bissinger et al., 211) 기피실험을위하여.5% 의 permethrin을 1% ethanol과 1:1로희석하여용액을준비한후, 한쌍의양말을준비하여우선세탁을했다. 실험을시작하기전에양말의표면적을계산한후, 한쌍의양말중한짝에만용액을골고루처리하여말렸다. 피실험자는그양말을신고주변의풀밭을돌아다니면서진드기가붙는것을확인하였다. 진드기에게물리는것을방지하기위해, 진드기양말에확인될경우바로떼어내고보관하였다. 그결과아무것도처리하지않았던양말과 permethrin을처리한양말에서의차이는있었지만, 알코올과 permethrin을처리한양말의결과를비교하였을때, 큰차이를보이지는않았다. ( 나 ) Spot-on formulation with dogs(dumont et al., 215) 실험시작하기 12주이상동안외부기생충에노출되지않은 1마리의암컷과수컷개를준비하였고, 그개들은실험이진행되는동안개별적으로키워졌다. 매실험마다 1마리의강아지는아무것도처리하지않은대조군이었고, 나머지 1마리의개는최소용량인.1 ml/kg의양으로대략 6.76mg/kg의 fipronil과 5.48mg/kg의 permethrin의합제가목의털부분에처리되었다. 실험실에서길러진 D. reticulatus 5마리를이용하여실험하였다. 각 crates에진정된개들이있고, 각 crate의바닥에 5마리의진드기를놓고 2시간후에개들을다른 crates에옮겨놓고다시두시간동안진드기가붙을수있는시간을제공하였다. 실험이끝난후에는다시원래그들의 cage로돌아갔다. 실험결과는진드기의생존과개의붙어있는진드기의개수를실험시작후 4시간, 12시간 24시간후에확인하였으며, 대조군과실험군의진드기개수를비교하여기피효과를확인하였다. (1) 기피제실험 (Repellency test) Indalone은일반적으로 DEET를포함한다른합성기피물보다효과가좋은것으로알려져있었으나, 몇몇연구들에서는효과가없는것으로확인되었다. Indalone을처리한군복에서는 A. americanum 성충과약충에서 7% 이상의진드기기피효과가확인되었다. Indalone을처리한양말에서처리후 3주동안진드기기피효과가 1% 유지되는것을확인하였고, acetone을용매로하여 indalone을녹인용액을이용한섬유를이용한 repellent 실험에서도 9% 이상의기피효과가확인되었다. 하지만다른실험에서 Indalone을처리한유니폼과 drag 천을이용한실험에서 D. variabilis에대하여각각 49% 와 76% 의기피효과가확인되었다. 진드기의종류에따라기피효과가달라지지만, 다른물질들에비해진드기의종류가기피효과에영향을많이받는것으로판단되었다 (Boca Raton, 27) 마. Deltamethrin Chemical name IUPAC name Chemical formula Deltamethrin, Decamethrin [(S)-Cyano-(3-phenoxyphenyl)-methyl] (1R,3R)-3-(2,2-dibromoethenyl)-2,2-dimethyl-cyclopropane-1 -carboxylate C22H19Br2NO3 은 1번씩반복되었으며, 각실험사이에실험자의손가락은냄새가나지않는비누로깨끗이닦았다. 이때, 실험용액들이증발하면서생기는기체들이 tube에가득차는것을방지하기위하여진드기가통과할수없을정도의구멍을 3개를뚫어놓았다. Steam distillation 방법을이용하여구간별로추출한물질들중에서 3, 6번째구간에서의추출물, 줄기에서추출한구간물질중 3번째에서추출한물질, 그리고크로마토그래피를이용한구간추출물중에서 3번째에서가장강한기피효과가나타났으며, 이들구간추출물들을모두성분분석하였고그결과 α-pinene, β-pinene, pinocamphone, 1,3,3-tri-methylcyclohex-1-ene-4-carboxaldehyde,1,8-cineole, 6,6-di -methyl-2-methylene bicyclo(2.2.1)heptane-3-one, pinocarveol, 1-terpineol 등여러물질들이검출되었으며, 이중 17개의기피역할을하는성분들을발견하였다. (1) 기피제실험 (Repellency test) 기피제실험을위하여 4마리의 4kg 체중을가지는양들의귀, 복부, 다리, 등에 1ml, 4kg의체중을가지는소의다리와등에 4ml의 Deltamethrin 7.5g/L 농도의제품을적용한후, 7일, 14일, 21일, 28일때의약품을처리한털과대조군의털을채취하였다. 채취후에는 Eppendorf snap vials에 I. ricinus와 Rhipicephalus sanguineus를한마리씩털과함께넣고살충, 기피효과를측정하였다. 그결과, 양과소의털을이용한모든진드기에서 7일에서 28일째로갈수록점점살충시간이 3 시간부터 ~ 17시간까지의시간이길어지는것을확인할수있었고, 기피효과는 7일과 14일째의소의다리를제외한나머지부위에서진드기의기피효과가확인되었다 (Mehlhorn et al., 211). 3. 참진드기에기피효과가있을것으로예측되는천연유용물질 가. Tanacetum vulgare essential oil (Palsson et al., 28) 쑥국화 (Tanacetum vulgare)<fig. 3-33> 의꽃부분을전통적인 steam distillation 방법을이용하여추출한추출액과쑥국화의줄기를이용하여추출한추출액을크로마토그래피를이용하여성분별로추출하여기피효과를측정하였다. 기피효과는 5마리의흡혈하지않은 I. ricinus를 5ml의 centrifugal tube에넣어놓고, 천에추출액과대조군인 Hexane을 1μl적용하여 1분동안말린후, centrifugal tube 위를고무줄을이용하여덮는다. Host 자극을위해실험자의손가락을천위에올린후, 5분동안진드기의움직임을관찰하였으며, 천에붙어있는진드기는 attracted" 로판단, 붙어있지않은진드기는 "repelled" 로판단하여기피효과를측정하였다. 각실험 Fig 쑥국화 (T. vulgare, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service)

나. Corymbia citriodora oil (Jaenson et al., 26) 다. Lavandula angustifolia oil (Jaenson et al., 26) 레몬유칼립투스 (C. citriodora)<fig. 3-34> oil에대한참진드기기피효과를보기위하여 I.

3-25> oil을용질로 1,2-propanediol을용매로하여 3% 를맞춘후에 5μl를천위에떨어뜨린후 1분동안말린천을이용하여진드기를넣은 tube의마게부분을막은후에천위에실험자의손을올려서진드기에게 host의자극을주고 2분과 5분에진드기의위치를파악한다.

이실험은추가로용액을처리하지않고, 최대 6일까지실험을진행한다. 실험결과는용액을처리한천과처리하지않는천의진드기마리수를비교하여기피효과를확인하였다. 기피효과를확인해보면실험실의결과에서는 2분과 5분모두한마리도 "Attracted" 가되지않았다. 따라서기피효과가 1% 로확인되었다. 또한야외실험에서는첫번째날 85.

ricinus 참진드기를채집하여실험전까지습도 8-95% 와 4 에보관되었다가실험이시작되기전날진드기를 22 에놓고빛과어둠을 12:12로주어실험실환경에적응시킨후기피효과의실험을이용하였다. 실험실안에서의기피효과측정법은다음과같다. 진드기한마리를 5ml 원심분리기용 tube에넣는다.

40 나. Corymbia citriodora oil (Jaenson et al., 26) 다. Lavandula angustifolia oil (Jaenson et al., 26) 레몬유칼립투스 (C. citriodora)<fig. 3-34> oil에대한참진드기기피효과를보기위하여 I. ricinus를채집하여실험전까지습도 8-95% 와 4 에보관되었다가실험이시작되기전날진드기를 22 에놓고빛과어둠을 12:12로주어실험실환경에적응시킨후기피효과의실험을이용하였다. 실험실안에서의기피효과측정법은다음과같다. Centrifugal tube에진드기한마리를 5ml 원심분리용 tube에넣는다. Corymbia citriodora<fig. 3-25> oil을용질로 1,2-propanediol을용매로하여 3% 를맞춘후에 5μl를천위에떨어뜨린후 1분동안말린천을이용하여진드기를넣은 tube의마게부분을막은후에천위에실험자의손을올려서진드기에게 host의자극을주고 2분과 5분에진드기의위치를파악한다. 천위에있거나천으로부터 3mm 이하로가깝게있을경우, attracted 로판단하고그이외의경우를 repelled 로판단하여기피효과를측정한다. 야외실험 (field test) 의경우, 1m x 1m 의천에 1,1ml의용액을처리한후하루정도보관하여완전히말린상태로만든후에 dragging 방법을이용하여 1m 마다진드기가잡힌마리수를확인하고 6m 까지실험을진행한다. 이실험은추가로용액을처리하지않고, 최대 6일까지실험을진행한다. 실험결과는용액을처리한천과처리하지않는천의진드기마리수를비교하여기피효과를확인하였다. 기피효과를확인해보면실험실의결과에서는 2분과 5분모두한마리도 "Attracted" 가되지않았다. 따라서기피효과가 1% 로확인되었다. 또한야외실험에서는첫번째날 85.2% 의기피효과를보였으나, 날짜가지나갈수록점점감소하는경향을보였으며, 최종적으로 6일째에는 42% 의기피효과를나타내었다. 라반둘라 (L. angustifolia)<fig. 3-35> oil에대한참진드기기피효과를보기위하여 I. ricinus 참진드기를채집하여실험전까지습도 8-95% 와 4 에보관되었다가실험이시작되기전날진드기를 22 에놓고빛과어둠을 12:12로주어실험실환경에적응시킨후기피효과의실험을이용하였다. 실험실안에서의기피효과측정법은다음과같다. 진드기한마리를 5ml 원심분리기용 tube에넣는다. Lavender를용질로 1,2-propanediol을용매로하여 1% 와 3% 를맞춘후에 5μl를천위에떨어뜨린후 1분동안말린천을이용하여진드기를넣은 tube의마개부분을막은후에천위에실험자의손을올려서진드기에게 host의자극을주고 2분과 5분에진드기의위치를파악한다. 천위에있거나천으로부터 3mm 이하로가깝게있을경우, attracted 로판단하고그이외의경우를 repelled 로판단하여기피효과를측정한다. 기피효과를확인해보면실험실의결과에서는 1% 의경우, 2분과 5분에서각각 37.7%, 51% 의기피효과를나타내었으며, 3% 의경우 2분과 5분모두 1% 의기피효과를나타내었다. 특히 3% 에서모든 I. ricinus의위치가모두천과매우떨어진곳에위치한것으로보아매우강하게기피된것을확인할수있다. Fig 레몬유칼립투스 (C. citriodora, Picture from Cookies on Invasive Species Compendium). Fig 라반둘라 (L. angustifolia, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service) 라. Pelargonium graveolens oil (Jaenson et al., 26) 마. Dianthus caryophyllum oil (Tunon et al., 26) 구문초 (P. graveolens)<fig. 3-36> oil에대한참진드기기피효과를보기위하여 I. ricinus 참진드기를채집하여실험전까지습도 8-95% 와 4 에보관되었다가실험이시작되기전날진드기를 22 에놓고빛과어둠을 12:12로주어실험실환경에적응시킨후기피효과의실험을이용하였다. 실험실안에서의기피효과측정법은다음과같다. Centrifugal tube에진드기한마리를 5 ml Centrifugal tube에넣는다. Geranium oil을용질로 1,2-propanediol을용매로하여 1%, 3% 를맞춘후에 5μl를천위에떨어뜨린후 1분동안말린천을이용하여진드기를넣은 tube의뚜껑부분을막은후에천위에실험자의손을올려서진드기에게 host의자극을주고 2분과 5분에진드기의위치를파악한다. 천위에있거나천으로부터 3 mm 이하로가깝게있을경우, attracted 로판단하고그이외의경우를 repelled" 로판단하여기피효과를측정한다. 기피효과를확인해보면실험실의결과에서는 1% 의경우, 2분과 5분에서각각 42.3%, 57.6% 의기피효과를나타내었으며, 3% 의경우 2분과 5분모두 1% 의기피효과를나타내었다. 카네이션 (D. caryophyllum)<fig. 3-37> 의 oil의참진드기에대한기피효과를보기위하여 1% 의용액을만들어 Gas Chromatography와 Total liquid Chromatography를이용하여성분을분석한후, 성분별로진드기의기피효과와독성효과를측정하였다 <Table 3-54, Fig. 3-38>. 진드기의기피효과측정은다음과같다. 직경 9.5cm의 Petri -dishes에실험에사용할용액.5ml이처리된 3 조각의 filter paper를놓고공기중에충분히말렸다. 그후, 6마리의약충 I. ricinus를 filter paper의가운데에놓고실험에사용된용액이처리된부분으로부터벗어나려고하는경향이있는지를확인하였다. 실험은 5분동안진행되었고, Petridish는뚜껑을덮지않은채공기중에노출시켜진행하였다. 기피가된진드기는처리된지역으로부터벗어나려고하는행동을보이는진드기로정의하였다. Fig 카네이션 (Dianthus caryophyllum, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service). Fig 구문초 (P. graveolens, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service)

Table 3-54 카네이션 (Dianthus caryophyllum) 추출물의 GC/MS를이용한성분 분석결과및진드기기피효과측정 Peak No. Compounds Tick repellency(4h) Tick repellency(8h) 1 α-pinene 83.4 75. 11 α-terpineol 66.7 <5 14 2-Phenyl-ethanol 95.

Artemisia abrotanum 추출물 (Tunon et al., 26) 쑥 (A. abrotanum)<fig. 3-39> 의줄기와잎은수집된즉시물로씻은후에.5cm 이하로작게조각낸후에 2 에서 toluene에서 24-48기간동안성분을추출하였다. 추출된용액은진드기의기피효과를측정하기위해직경 9.5cm의 Petri dishes에실험에사용할용액.

41 Table 3-54 카네이션 (Dianthus caryophyllum) 추출물의 GC/MS를이용한성분 분석결과및진드기기피효과측정 Peak No. Compounds Tick repellency(4h) Tick repellency(8h) 1 α-pinene α-terpineol 66.7 < Phenyl-ethanol β-citronellol Geraniol Cinnamyl alcohol Eugenol Coumarin ( 참고, 진드기기피효과가실험 4시간후에서 6% 이상인성분만표시하였음.) 바. Artemisia abrotanum 추출물 (Tunon et al., 26) 쑥 (A. abrotanum)<fig. 3-39> 의줄기와잎은수집된즉시물로씻은후에.5cm 이하로작게조각낸후에 2 에서 toluene에서 24-48기간동안성분을추출하였다. 추출된용액은진드기의기피효과를측정하기위해직경 9.5cm의 Petri dishes에실험에사용할용액.5ml이처리된 3 조각의 filter paper를놓고공기중에충분히말렸다. 그후, 6마리의약충 I. ricinus를 filter paper의가운데에놓고실험에사용된용액이처리된부분으로부터벗어나려고하는경향이있는지를확인하였다. 실험은 5분동안진행되었고, Petridish는뚜껑을덮지않은채공기중에노출시켜진행하였다. 기피가된진드기는처리된지역으로부터벗어나려고하는행동을보이는진드기로정의하였다. 그결과진드기의기피효과는 4시간에서 69.1%, 8시간에서 56.8% 의진드기기피효과를나타내었다. 이러한결과를정밀하게관찰하기위해 Gas chromatography와 Mass spectrometry(gc/ms), Thin layer chromatography(tlc) 를이용하여성분을추출하였고, 성분별로진드기의기피효과를측정하였다 <Table 3-55, Fig. 3-4>. Fig 카네이션 (Dianthus caryophyllum) 추출물의 GC/MS 를이용한분석결 과. Fig 쑥 (A. abrotanum, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service) Table 3-55 쑥 (Artemisia abrotanum) 추출물의 GC/MS, TLC 를이용한성분분석 결과및진드기기피효과 Extraction method Compounds Tick repellency 4 hours 8 hours GC/MS Acetophenone (Peak 5a) 83.4 <5 GC/MS Cinnamyl aldehyde (Peak 6b) 93.8 <5 GC/MS α-copaene (Peak 6c) 68.8 <5 GC/MS Eugenol (Peak 8a) TLC Coumarin TLC Thujyl alcohol ( 참고, 진드기기피효과가실험 4 시간후에서 6% 이상인성분만표시하였음.) 사. Chamaecyparis nootkatensis oil (Dietrich et al., 26) 알라스카노란색노송나무 (C. nootkatensis)<fig. 3-41> 는 steam-distilled 방법을이용한후, 각각의 fraction은 gas liquid chromatography를이용하여추출하였다. 추출된결과물은진드기의실험에사용되기전까지실험실에보관되었다. 진드기는 I. scapularis를실험실적으로키워진동일한 2세대, 3세대의진드기가사용되었고, 실험전까지 21, 습도 9% 이상, 광주기를 16시간과 8시간으로보관되었다. 실험은 Vertical bioassay with host-attractant stimuli 라는이전에사용되었던방법을응용하여진행되었다. 우선준비된 fraction은물을용매로하여농도를 8개로나누어실험을진행하였다 (.4-5.%). 윗부분이뚫려있는플라스틱통안에바닥에세로로면봉을고정시키고, 윗부분은우리가실험하고자하는용액을 1μl처리한후충분히말린천으로윗부분을막은뒤에진드기들의 host attraction을위해사람의손바닥을천위에올려놓고실험을진행하였다 <Fig. 3-42>. 통의중간부터윗부분까지를 "Repellent zone" 으로지정하고진드기가 repellent zone에 5초이상있을경우, 기피가되지않는것으로판단하였고실험은 5분동안진행되었다. 그결과 Valencene-13-ol, Carvacrol, Nootkatone(Grape fruit oil) 순으로진드기의기피효과가강한것으로나타났으며, 특히 Valencene-13-ol의경우, 기피효과가 97% 의좋은효과를확인하였다. Fig. 3-4 쑥 (Artemisia abrotanum) 추출물의 GC/MS 를분석결과. Fig 노란색노송나무 (C. nootkatensis, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service)

G. gynandra의 oil 자체를.1μl를처리한실험의경우, 기피효과가약 99% 로대조군으로사용되었던 DEET가나타낸 89% 보다진드기의기피효과가뛰어나는것을확인하였다. 하지만농도가낮아진.1μl에서는 G. gynandra와 DEET가각각 89.8%, 82.8%,.1μl를사용한실험에서는 7.5%, 75.

$3-43> 를채집하여잘개잘라서 hydrostilled를통해 essential oil을얻은후 Gas-liquid chromatography(gc) 와 Gas chromatograpy -mass spectrometry(gc-ms) 를통해각성분별로 fraction별로물질을획득후, 성분을분석하였다.$ 진드기는실험실안에서유지되고있는 Rhipicephalus appendiculatus를이용하였으며, 진드기가올라가는습성을이용한실험을진행하였다. 5마리의진드기를 Petridish 바닥에놓고가운데올라가는 15cm의유리막대를설치해놓은뒤, 그기둥끝에위의 GC와 GC-MS를이용하여얻은물질들을 filter paper에각각.1μl,.

진드기는실험실안에서유지되고있는 Rhipicephalus appendiculatus를이용하였으며, 진드기가올라가는습성을이용한실험을진행하였다. 5마리의진드기를 Petridish 바닥에놓고가운데올라가는 15cm의유리막대를설치해놓은뒤, 그기둥끝에위의 GC와 GC-MS를이용하여얻은물질들을 filter paper에각각.1μl,.

42 G. gynandra의 oil 자체를.1μl를처리한실험의경우, 기피효과가약 99% 로대조군으로사용되었던 DEET가나타낸 89% 보다진드기의기피효과가뛰어나는것을확인하였다. 하지만농도가낮아진.1μl에서는 G. gynandra와 DEET가각각 89.8%, 82.8%,.1μl를사용한실험에서는 7.5%, 75.6% 로 DEET의기피효과에비해급격하게떨어지는것도확인하였다. 성분들을이용한실험에서는 m-cymene, nonanal, 1-α-terpenol, α-cyclocitral, β-cyclocitral, nerol, trans-geraniol, carveol 의성분들이 DEET보다높은진드기기피효과를나타내었다. Fig Vertical bioassay with host-attractant stimuli 를위한실험도구. Repellent zone에 5초이상진드기가있을경우, 기피가되지않는것으로판단함. 아. Gynandropsis gynandra oil (Malonza et al., 1992) 풍접초 ( 風蝶草, Gynandropsis gynandra)<fig. 3-43> 를채집하여잘개잘라서 hydrostilled를통해 essential oil을얻은후 Gas-liquid chromatography(gc) 와 Gas chromatograpy -mass spectrometry(gc-ms) 를통해각성분별로 fraction별로물질을획득후, 성분을분석하였다. 진드기는실험실안에서유지되고있는 Rhipicephalus appendiculatus를이용하였으며, 진드기가올라가는습성을이용한실험을진행하였다. 5마리의진드기를 Petridish 바닥에놓고가운데올라가는 15cm의유리막대를설치해놓은뒤, 그기둥끝에위의 GC와 GC-MS를이용하여얻은물질들을 filter paper에각각.1μl,.1μl,.1μl를처리후말린다음유리막대끝에붙여놓은후, filter paper까지올라오는진드기의마리수를확인하는방법으로실험물질들의진드기기피효과를측정하였다. 실험은각각 1번씩진행되었으며, 기피효과의수치는평균값을나타내었다. Fig 풍접초 (Gynandropsis gynandra, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service) 자. BioUD (Witting-Bissinger et al., 28) BioUD는 27년미국환경보호협회에서등록한새로운절지동물기피제로써토마토 (Lycopersicon hirsutum)<fig. 3-44> 로부터추출한 2-undercanone을주성분으로하고있다. 진드기는흡혈하지않은성충암, 수컷의 D. variabilis를실험실적으로 26, 92% 의습도와광주기를 14:1를유지한것을이용하였다. 실험은 3가지로진행되었는데, 우선진드기를 12.6cm 2 정도의원형의선을 cheesecloth에올려놓고그위에진드기를올려놓은후에알루미늄을덮어진드기가밖으로빠져나가지못하고직접관찰할수있으면서진드기가피험자를무는것을방지하였다. 6마리의진드기가한번의실험에이용되었으며각실험은 1번반복하였다. 2번째방법으로는 petridish안에 25μl의 BioUD를절반만처리하고나머지절반에 15% DEET를처리후 2시간동안말린 filter paper를설치하였다. 그후 6마리의진드기를그안에넣고 3분후진드기의위치를확인하는방식의실험을진행하였다. 이실험은 3번반복되었다 <Fig. 3-45>. 3번째방법으로는 2번째방법과비슷하지만 filter paper를이용하지않고그대신두겹의 cheese cloth를사용하였다. 첫번째실험의결과로 BioUD를사용한경우, 8~85% 이상의진드기기피효과를확인하였고, 두번째실험에서도 BioUD의방향이 DEET의방향보다월등히적은진드기가있는것을확인하였다. 또한세번째실험역시 BioUD의 Repellency는 DEET와증류수를이용하여실험한결과보다월등한진드기기피효과를확인하였다. Fig 사람의피부와 filter paper를이용한진드기기피효과실험. 차. Methyl jasmonate (Garboui et al., 27) Chemical name Methyl jasmonate Methyl (1R,2R)-3-Oxo-2-(2Z)-2- IUPAC name pentenyl-cyclopentaneacetate Chemical formula C13H2O3 Molar mass Origins g/mol 자스민 (Fig. 61, Jasminum grandiflorum) Fig 토마토 (Lycopersicon hirsutum, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service). 자스민 (Jasminum grandiflorum)<fig. 3-46> 으로부터추출한 methyl jasmonate의참진드기에대한기피효과를보기위하여 I. ricinus 약충을초지에서 flagging 방법을이용하여채집하였으며, 채집된진드기는실험실에서 4, 8-95% 의상대습도에서실험전까지실험실에서보관되었다. Methyl jasmonate의기피효과를측정하기위하

여두가지실험이진행되었다. 우선실험실에서는 5ml의 Falcon tube에흡혈하지않는 I. ricinus 한마리를넣고면적이 6.6cm 2 의천에.5%, 1.%, 2.%, 5.% 의 Methyl jasmonate를 1, 2-propanediol을녹인용액을 1μl처리하여충분히말린후에 Falcon tube의입구에놓고고무줄을이용하여출구를막아놓았다.

실험은각농도별로 5개의천이이용되었으며, 실험은각각 1회씩진행되었다. 야외에서진행된실험의경우, 1m x 1m의천에 Methly jasmonate를 acetone에녹인.5,.1.2 mg/cm 2 농도의용액을 1ml 처리한후, 충분히말린다음실험이이용하였다.

43 여두가지실험이진행되었다. 우선실험실에서는 5ml의 Falcon tube에흡혈하지않는 I. ricinus 한마리를넣고면적이 6.6cm 2 의천에.5%, 1.%, 2.%, 5.% 의 Methyl jasmonate를 1, 2-propanediol을녹인용액을 1μl처리하여충분히말린후에 Falcon tube의입구에놓고고무줄을이용하여출구를막아놓았다. 또한실험도중, 용액이증발하여발생할수있는오차를줄이기위해 Falcon tube에진드기가통과할수없는작은구멍들을뚫어놓았다. 또한진드기의숙주자극을위하여천위에실험자의손바닥을올려놓고실험을진행하였다. 실험은 5분동안진행되었으며, 진드기의모든발이 Falcon tube에서떨어져있을경우, Attracted 로그렇지않을경우에는 Repelled 로판단하였다. 실험은각농도별로 5개의천이이용되었으며, 실험은각각 1회씩진행되었다. 야외에서진행된실험의경우, 1m x 1m의천에 Methly jasmonate를 acetone에녹인.5,.1.2 mg/cm 2 농도의용액을 1ml 처리한후, 충분히말린다음실험이이용하였다. 실험은정해진 1m 2 초지에서용액을처리한천을이용하여 dragging 방법을수행하여진드기가채집되는마리수를비교하여기피효과를측정하였다. 채집은총 3회가진행되었다. 실험실에서진행된실험의기피효과결과는.5%, 1.%, 2.%, 5.% 의농도에서각각 57%, 71%, 92%, 99% 의진드기기피효과를나타내어농도가증가할수록기피효과가증가하는것을확인하였고, 야외에서실험된.5,.1,.2 mg/cm 2 의결과는 51%, 55%, 8.9% 의기피효과를나타내었다. 카. Rosmarinus officinalis essential oil (Martinez-Velazquez et al., 211) 로즈마리 (R. officinalis)<fig. 3-47> 의잎으로부터 semipilot extractor를이용한 steam distillation방법으로 Essential oil을추출한후, Gas Chromatography를통해성분분석을진행하였다. 성분분석과함께진드기의살충효과를확인하기위해 Larval packed test를진행하였다. 실험실에서동일세대에서길러진 1일된 Boophilus microplus를준비한후, 뽑아놓은 Essential oil of R. officinalis를 trichloethylene과 olive oil을 2:1로섞은용액을용매로하여농도를 2, 1, 5, 2.5, 1.25% 로준비하여이용하였다. 준비된용액을처리한 filter paper packet에 1마리의준비된진드기를넣고 27, 85% 의온도, 습도로유지되고있는배양기에광주기를 12:12시간으로 24시간동안유지하였다. 살충효과의결과는진드기가살아있는정도의마리수를비교하였다. 그결과 2, 1, 5, 2.5, 1.25% 에서살충효과는각각 1%, 89%, 4%, 1%, % 의효과를나타내었다. 농도가 2% 에서는 1% 의살충효과를나타낼정도로효과적이었지만, 농도가떨어질수록급격하게감소하는것을확인하였다. 또한성분분석결과, α-pinene, Camphene, 1,8-Cineol, Verbenol 등이주요성분들이었으며이들성분모두진드기기피효과가있는것으로알려져있다. Fig 로즈마리 (R. officinalis, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service). Fig 자스민 (Jasminum grandiflorum, Picture from USDA Natural Resources Conservation Service) 타. 레몬껍질추출액 (Citrus peel exudate)(weldon et al., 211) 레몬껍질추출액 (Citrus peel exudate) 의참진드기에대한기피효과를확인하기위해실험실적으로유지된 A. americanum 약충들을실험에이용하였다. 실험실안에서진행된실험은진드기가중력의반대방향으로움직이려한다는성질을이용하여 8cm 높이의종이를설치한후, 끝에 2cm에만 12μl의 lemon peel exudate를처리하였다. 또한바닥으로부터 2cm, 3cm의높이에도선을표시한뒤에진드기의움직임에따라점수를부여하였다. 2cm의선아래에존재하는지, 2~3cm의사이에존재하는지, 3~6cm에존재하는지, 6cm 이상의높이에존재하는지, 2cm의선을지나갔는지, 2cm, 3 cm의선모두지나갔는지, 6cm의선을지나갔는지에따라점수를부여하여기피효과를판단하였다 <Fig. 3-48>. Table 3-56 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (1) Essential oil used as repellent Plant sources Family plants Part used Countries References Menthapiperita Lamiaceae Fresh leaves India Ansari et al. (2) Z. piperitum Rutaceae Dried Fruits Thailand Choochote et al. (27) Pimpinellaanisum Umbelliferae Seed Turkey Erler et al. (26) O. basilicum Lamiaceae Dried foliageturkey Erler et al. (26) Eucalyptus camaldulensis Mirtaceae Dried fruits Turkey Erler et al. (26) Baccharisspartioides Compositae N.I. Argentina Gillij et al. (28) Aloysiacitriodora Verbenaceae N.I. Argentina Gillij et al. (28) Eucalyptus maculate citriodon Mirtaceae Leaves Ethiopia Hadis et al. (23) Croton pseudopulchellus Annonaceae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Mkiluafragrans Annonaceae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Endostemontereticaulis Labiateae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Ocimumforskolei Labiateae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Ocimumfischeri Labiateae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Plectranthuslongipes Labiateae N.I. Kenya Odalo et al. (25) Conyzanewii Compositae N.I. Kenya Omolo et al. (24) Tarchonanthuscamphoratus Compositae N.I. Kenya Omolo et al. (24) Fig 진드기의기피평가를위한점수부여결과. 파. 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질참진드기가아닌모기등기타절지동물에서기피효과가있다고알려진천연유용물질에대한문헌조사를하였으며조사내역은아래와같다 <Table 3-56~58>. 아직참진드기에서기피효과가확인되지는않았지만다른절지동물에서기피효과가확인되었기때문에참진드기에서도어느정도기피효과를가질것으로예측된다. Tetradeniariparia Labiatae N.I. Kenya Omolo et al. (24) Lippiajavanica Verbenaceae N.I. Kenya Omolo et al. (24) Lippiaukambensis Verbenaceae N.I. Kenya Omolo et al. (24) Plectranthusmarrubioides Labiatae N.I. Kenya Omolo et al. (24) C. citratus Poaceae Fresh aerial parts O. selloi Lamiaceae Leaves Brazil O. basilicum Lamiaceae Leaves India Rosmarinusofficinalis Lamiaceae Shoot India Cinnamomumzeylanicum Lauraceae Bark India C. citratus Graminae N.I. India Zingiberofficinalis ZingiberaceaeRhizomes India Moschosmapolystachyum Lamiaceae Fresh leaves India Nigeria Oyedele et al. (22) Padilha de Paula et al. (23) Prajapati et al. (25) Prajapati et al. (25) Prajapati et al. (25) Pushpanathan et al. (26) Pushpanathan et al. (28) Rajkumar and Jebanesan (25)

Table 3-57 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (2) Essential oil used as repellent Plant sources Family plants Part used Countries Solanumxanthocarpum Solanaceae Fresh leavesindia References Rajkumar and

(21) Z. limonella Rutaceae Leaves Thailand Pogostemoncablin Lamiaceae Commercial Thailand Syzygiumaromaticum Myrtaceae Commercial Thailand Z. limonella Rutaceae Leaves Thailand C.

(25) Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Yang and Ma (25) Caryophyllacea e Flowers Sweden Tunon et al.

salicifolia Asteraceae Aerial parts Argentina Garcia et al. (25) Artemisia annua Asteraceae Root India Goel et al.

Leaves Japan Hori (23) Cinnamomumcasia Lauraceae Bark Japan Hori (23) Litseacubeba Lauraceae Fruits Japan Hori (23) Perillafrutesncens Labiatae Leaves Japan Hori (23) Laurusnobilis Lauraceae

44 Table 3-57 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (2) Essential oil used as repellent Plant sources Family plants Part used Countries Solanumxanthocarpum Solanaceae Fresh leavesindia References Rajkumar and Jebanesan (25) Curcuma longa L Zingiberaceae Rhizomes Thailand Tawatsin et al. (21) C. winterianus Poaceae Leaves Thailand Tawatsin et al. (21) O. americanum Lamiaceae Leaves Thailand Tawatsin et al. (21) Z. limonella Rutaceae Leaves Thailand Pogostemoncablin Lamiaceae Commercial Thailand Syzygiumaromaticum Myrtaceae Commercial Thailand Z. limonella Rutaceae Leaves Thailand C. nardus Poaceae Leaves Thailand E. globulus Myrtaceae D. caryophyllum Commercial Product Commercial Product Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Trongtokit et al. (25) Yang and Ma (25) Caryophyllacea e Flowers Sweden Tunon et al. (26) Nigella sativa Ranunculaceae Dried fruits India Chaubey (27) Trachyspermumammi Umbelliferae Dried fruits India Chaubey (27) Anethumgraveolens Umbelliferae Dried fruits India Chaubey (27) B. salicifolia Asteraceae Aerial parts Argentina Garcia et al. (25) Artemisia annua Asteraceae Root India Goel et al. (27) Perillafrutesncens Labiatae Leaves Japan Hori (23) Thymus vulagris Labiatae Leaves, Flowers and Japan Hori (23) Stem Satureiahortensis Labiatae Spike Japan Hori (23) Menthapiperita Labiatae Leaves Japan Hori (23) Cinnamomumcasia Lauraceae Bark Japan Hori (23) Litseacubeba Lauraceae Fruits Japan Hori (23) Perillafrutesncens Labiatae Leaves Japan Hori (23) Laurusnobilis Lauraceae Rosmarinus officinalis Labiatae Immature fruits Flowering shoots N.I. N.I. Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Table 3-58 기타절지동물에기피효과가있는천연유용물질문헌조사내역 (3) Essential oil used as repellent Plant sources Family plants Part used Countries E. globulus Myrtaceae Leaves N.I. Juniperus oxycedrus CupressaceaeLeaves Lavandula hybrida Labiatae Menthamicrophylla Labiatae Mentha viridis Apium graveolens Labiatae N.I. Whole flowering plants N.I. Whole flowering plants N.I. Whole flowering plants N.I. Umbelliferae Stems and leaves N.I. O. basilicum Lamiaceae Fresh leaves Turkey References Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Papachristos and Stamopoulos (22) Pascual and Ballesta (23) Artemisia vulgaris Asteraceae Fresh leaves China Wang et al. (26) Ruta graveolens Rutaceae N.I. USA Landolt et al. (1999) Allium sativum Alliaceae N.I. USA Landolt et al. (1999) Pogostemom cablin Laminaceae N.I. USA Landolt et al. (1999) Tanacetum vulgare Asteraceae N.I. USA Landolt et al. (1999) Mentha pulegium Labiatae Dried Leaves Argentina Toloza et al. (26) Calocedrus macrolepis Cryptomeria japonica Chamaecyparis obtusa Rosmarinus officinalis CupressaceaeHeartwood Taiwan Cheng et al. (27) CupressaceaeSapwood Taiwan Cheng et al. (27) CupressaceaeLeaves Taiwan Cheng et al. (27) Lamiaceae N.I. N.I. Koschier and Sedy (23) 참진드기기피물질예비실험결과 가. 재료및방법 (1) 진드기 (tick) BUCHI Inc., USA) 를이용해플라스크에 2ml의추출물을넣고중탕가열하여농축시킨뒤다시추출물을추가로 2ml씩넣고농축하는것을반복하여총 1L의추출물이 5ml가되도록농축하였다 <Fig. 3-5>. 농축액은실온에서 4,rpm에서 5분간원심분리한뒤상층액만분리하여 4 에서냉장보관하였다. 농축액을 ethyl alcohol로 5%, 1%, 2% 의비율로희석하여실험에사용하였다. 실험에사용하기위한진드기를경상북도영천시, 광주광역시, 경기도양평군, 전라북도완주군, 인천광역시강화도군에서각각채집하였다 <Fig. 3-49>. 채집한진드기는 1ml 튜브에수분유지를위한풀잎과함께 4 에서냉장보관하였다. 충분한개체수가확보된유충단계의개체들만실험에사용하였다. 진드기는실체현미경을통해분리동정하여 spp. 의개체만사용하였다. (2) 레몬껍질추출물농축액레몬은시중판매점으로부터구입후껍질만분리한뒤분리한껍질 2,71g을 ethyl alcohol 8L에 6시간동안추출하였다. 그후, 추출물을거름망을통해거른뒤회전진공농축기를이용해플라스크에 2ml의추출물을넣고중탕가열하여농축시킨뒤다시추출물을추가로 2ml씩넣고농축하는것을반복하여총 1L의추출물이 5ml가되도록농축하였다. 농축액은실온에서 4,rpm에서 5분간원심분리한뒤상층액만분리하여 4 에서냉장보관하였다. 농축액을 ethyl alcohol로 5%, 1%, 2% 의비율로희석하여실험에사용하였다 <Fig. 3-51>. Fig 참진드기분리동정 { 좌측사진 : 진드기동정에사용된실 체현미경 (SZH1, Olympus, Japan), 우측사진 : 가시들피참진드기속 ( spp.) 유충 }. 나. 기피물질실험군 Fig. 3-5 레몬, 귤껍질추출물 ( 좌 ) 과회전진공농축기 ( 우 ). 진드기기피제는실험군으로써감귤 (Citrus unshiu) 껍질추출물, 레몬 (Citrus limon) 껍질추출물을사용하였으며, 대조군으로는증류수와용매제인 ethyl alcohol(extra pure grade, Duksan pure chemical Co.) 을사용하였으며, 시중에서진드기기피제로판매되고있는제품을주성분별로 4가지상품 (A~D제품) 을구입하여실험에사용하였다. (1) 귤껍질추출물농축액 귤은제주특별자치도서귀포시남원읍에위치한농장에서노지감귤 1kg 구입 후껍질만분리한뒤, 분리한껍질 1,8g 을 ethyl alcohol 5L 에 6 시간동안추출하 였다. 추출물을거름망을통해거른뒤, 회전진공농축기 (rotary vacuum evaporator, Fig 귤, 레몬껍질추출물농축액과희석과정

( 가 ) A 제품 : 주성분 N,N-Diethyl-meta-toluamide(DEET) 다. 진드기기피효과시험법 제품 1 ml중 DEET 24.g, 보존제 Methyl ρ-hydroxybenzoate.1g이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입하였다 <Fig. 3-52 A>.

( 다 ) C제품 : 주성분 Icaridin(Hydroxyethyl isobutyl piperidine carboxylate) 제품 1g중 Icaridin 7.g이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입하였다 <Fig. 3-52 C>. 진드기기피효과의측정을위해 8.

그리고이튜브를생물배양기 (growth chamber, Vision Scientific Co., Korea) 에서 27 8% 의습도에서눕힌상태로배양하였다 <Fig. 3-54>. 기피효과를측정하기위해 12시간동안매시간마다관찰, 기록하였다.

45 ( 가 ) A 제품 : 주성분 N,N-Diethyl-meta-toluamide(DEET) 다. 진드기기피효과시험법 제품 1 ml중 DEET 24.g, 보존제 Methyl ρ-hydroxybenzoate.1g이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입하였다 <Fig A>. ( 나 ) B제품 : 주성분계피유 (Cinnamon oil) 제품 1g중계피유 2.g이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입하였다. 계피는육개나무 (Cinnamomum cassia) 껍질로만든향신료이다. 계피유의주성분은 Cinnamaldehyde로 9% 이상을차지하고있다 <Fig B>. ( 다 ) C제품 : 주성분 Icaridin(Hydroxyethyl isobutyl piperidine carboxylate) 제품 1g중 Icaridin 7.g이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입하였다 <Fig C>. 진드기기피효과의측정을위해 8.5cm의너비, 5cm의높이의사각형여과지 (GE Healthcare) 에기피제로사용할물질을 5μl묻힌뒤실온에 3분간건조시켜완전히증발시켰다 <Fig A>. 이사각형의여과지를 5ml 튜브 (Nest Biotechnology Co.) 의위쪽부분에부착시킨뒤, 1마리의유충단계의진드기를 5ml 튜브에넣었다 <Fig B>. 그리고이튜브를생물배양기 (growth chamber, Vision Scientific Co., Korea) 에서 27 8% 의습도에서눕힌상태로배양하였다 <Fig. 3-54>. 기피효과를측정하기위해 12시간동안매시간마다관찰, 기록하였다. 진드기가육안상으로여과지가없는곳에모인진드기는기피효과가있는것으로, 반대로위쪽기피제를묻힌부분에모인진드기는기피효과가없는것으로판정하여계산하였다 ( 기피율 = 여과지위에있지않은진드기 / 전체진드기 ). 재현성을보기위해본실험을 2 회반복수행하였다. ( 라 ) D 제품 : 정향유 (Clove Oil) 제품 1g 중정향유.63g 이함유되어있는제품으로시판되고있는상품을구입 하였다. 정향유는정향나무 (Syzygium aromaticum) 잎, 줄기, 뿌리에서추출한기름으 로주성분은 Eugenol 로잎, 줄기, 뿌리모든부위에서발견된다 <Fig D>. Fig 진드기기피효과측정. 진드기기피효과실험각기피제를 5μl씩여과지에적신후말리는과정 ( 좌측사진 ). 기피제를묻힌여과지를원통형으로말아튜브에넣은뒤진드기 1마리를투입 ( 우측사진 ). Fig 진드기기피제상품 ( 좌측부터 A, DEET; B, 정향유 ; C, Icaridin; D, 계피유를주성분으로 함 ). Fig 생물배양기 ( 좌측 ) 및기피제별튜브 ( 우측 ) 라. 실험결과 spp. 에대한감귤껍질의농축액, 레몬껍질의농축액, 그리고시판되고있는주성분이다른 4개의기피제제품의기피효과평가를실시하였다. 대조군으로이용된 3차증류수를이용한실험군과 ethyl alcohol을이용한실험군의기피효과결과값의평균은각각 2.67마리, 3.67마리로확인하였다 <Table 3-59>. 감귤껍질의농축액을이용한 5%, 1%, 2% 실험군의결과는각각 1.8마리, 1.54마리, 1.58 마리였다 <Table 3-59>. 감귤의껍질농축액의농도가증가할수록기피되지않은진드기의평균수가증가하는경향을확인하였다 <Fig. 3-55>. 레몬껍질의농축액을이용한 5%, 1%, 2% 실험군의결과는각각 1.42마리,.63마리,.17마리였다 <Table 3-59>. 레몬의껍질농축액의농도가증가할수록기피가안되는진드기의평균수가감소하는경향을확인하였다 <Fig. 3-56>. 시판되고있는제품 A, B, C, D 실험군의결과는각각.58마리, 1.83마리, 1.29마리,.29마리였다 <Table 3-59>. 제품 A와제품 D가제품 B와제품 C보다기피효과가뛰어났다. 하지만 2% 레몬실험군과비교하였을때, 2% 레몬실험군이기피효과가더뛰어났다 <Fig. 3-57>. 감귤껍질의농축액, 레몬껍질의농축액, 제품을이용한실험군들의결과중, 가장기피효과가좋은실험군을비교하였을때, 2% 레몬실험군, 제품 D, 5% 감귤실험군순으로기피효과의결과를확인하였다 <Fig. 3-58>. 실험군들의결과에대한기피율 (%) 은 [(1 평균값) 1] 으로계산하였다. 대조군의경우, 기피율은 3차증류수는 73.33%, ethyl alcohol은 63.33% 로나타났으며, 감귤껍질의농축액을이용한실험군은농도가 5%, 1%, 2% 증가함에따라기피율이 89.17%, 84.58%, 84.17% 로낮아지는것을확인하였다. 레몬껍질의농축액을이용한실험군은농도가 5%, 1%, 2% 증가함에따라기피율이 85.83%, 93.75%, 98.33% 로증가하였다. 제품 A, B, C, D의기피율은각각 94.17%, 81.67%, 87.8%, 97.8% 로나타났다 <Fig. 3-59>. 전체적인경향은 1시간째의결과에서가장잘나타나는데, 대조군인 3차증류수군과 ethyl alcohol군은기피가되지않은진드기가각각 3.5마리와 3마리에비해실험군은전체적으로기피가되지않은진드기의수가낮은것을확인하였다. 또한감귤실험군의경우, 농도가증가함에따라기피가되지않은진드기의숫자가증가하는경향을확인하였고, 레몬실험군의경우, 농도가증가함에따라기피되지않은진드기의숫자가감소하는경향을확인하였다. 제품실험군의경우에도대조군에비해기피가되지않은진드기의숫자가낮은것을확인할수있었다 <Fig. 3-6>. Table 3-59 귤, 레몬및시판중인제품에대한참진드기기피효과결과 Time Water Alcohol 5% 귤 1% 귤 2% 귤 5% 레몬 1% 레몬 2% 레몬 A B C D 1시간 3* 시간 시간 시간 시간 시간 시간 시간 시간 시간 시간 시간 평균 * 기피되지않은진드기평균마리수 감귤실험군 마리수 기피가안된 2 진드기 시간 5% 귤 1% 귤 2% 귤 Fig 감귤실험군의시간별진드기움직임의변화. 각실험군마다 1 마리 의진드기유충을사용하였으며 2 회반복실험후, 결과에대해평균값을낸 것임

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Æ¯ÇãÃ» '' - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - ' - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - Super-Bio Co., Ltd. KWON, Suk-Tae Thermostable DNA Polymerase-encoding Gene from Thermus sp. X-1 an d Amino Acid Sequence