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2 理學碩士學位論文 서해안돌기해삼, Stichopus japonicus 의생식주기와 씨뿌림양식에서의성장 Studies on the reproductive cycle and the growth in sowing culture of Stichopus japonicus 2008 年 8 月 仁荷大學校大學院 海洋科學科 金秀暻

3 理學碩士學位論文 서해안돌기해삼, Stichopus japonicus 의생식주기와 씨뿌림양식에서의성장 Studies on the reproductive cycle and the growth in sowing culture of Stichopus japonicus 2008 年 8 月 指導敎授洪在上 이論文을碩士學位論文으로提出함 仁荷大學校大學院 海洋科學科 金秀暻

4 이논문을김수경의석사학위논문으로인정함 년 8 월 주심 부심 위원

5 목 차 그림목차 Ⅲ 표목차 Ⅴ 국문요약 Ⅵ 영문요약 Ⅶ 제 1장서론 1 제 2장생식주기에관한조직학적연구 서론 재료및방법 환경조사 생식세포형성과정 생식주기 결과 환경요인 생식소중량지수 (GSI) 와소화관중량지수 (GI) 생식소의조직학적변화 난소 정소 생식주기 고찰 결론 23 - I -

6 제 3장씨뿌림양식에서해삼의성장 서론 재료및방법 실험방법 정기조사 분석방법 월별성장도 일간성장률 (SGR) 월별빈도 결과 환경조사 성장 월별성장도 일간성장률 (SGR) 월별출현빈도 고찰 결론 39 제 4장참고문헌 40 - II -

7 List of figures Fig. 1. Distribution of three types of Stichopus japonicus. 3 Fig. 2. Annual production of Stichopus japonicus from 1990 to 2007 in Korea. 4 Fig. 3. Annual variation of the amount of production and discharge of Stichopus japonicus. 5 Fig. 4. Sampling site of Stichopus japonicus. 8 Fig. 5. Monthly body size of wild sea cucumber, Stichopus japonicus in this experiment. 9 Fig. 6. Monthly variations of water temperature and salinity at the sampling area. 11 Fig. 7. Monthly changes of gonadosomatic index (GSI) in Stichopus japonicus. 13 Fig. 8. Monthly changes of gonadosomatic index (GSI) and Gastrointestinal index (GI) in Stichopus japonicus. 15 Fig. 9. Histological identification of internal morphology and developmental phases of ovary in Stichopus japonicus. 17 Fig. 10. Histological identification of internal morphology and developmental phases of testis in Stichopus japonicus. 19 Fig. 11. Monthly frequency in gonadal development stage of Stichopus japonicus III -

8 Fig. 12. Study site of Stichopus japonicus. 27 Fig. 13. Variations of water temperature, salinity and chlorophyll - a at the sampling area. 30 Fig. 14. Relationship between water temperature and total length. 32 Fig. 15. Relationship between water temperature and total weight. 32 Fig. 16. The causal relationship between water temperature and specific growth rate (SGR). 34 Fig 17. Frequency distribution of total lengths. 36 Fig 18. Frequency distribution of total weights IV -

9 List of tables Table 1. List of macrobenthos in subtidal flat of Bunyeo 26 - V -

10 요약 2004년 10월부터 2005년 9월까지서해안안면도해역에서채집한해삼 (Stichopus japonicus) 의생식소발달과생식주기에관하여조직학적방법을이용하여조사하였다. 서해안산해삼의배우자형성과정과생식주기를조사한결과주산란기는 6월인것으로나타났다. 생식소지수 (GSI) 는암 수모두각각 6월 (7.91, 7.21) 에가장높았으며, 10월 (0.42, 0.53) 에가장낮았다. 서해안해삼의주산란기는 6 ~ 8월이며, 생식주기는분열증식기 (1~3월), 성장기 (3~4월), 성숙기 (4~7월), 산란기 (6~8월) 및퇴화및휴지기 (8~1월 ) 로구분할수있었다. 2005년 4월자연산해삼이서식하는충남태안군안면읍승언리분여지선에평균전장 2.9 cm, 전중량 2.03 g인해삼종묘 30,000 마리를씨뿌림하였다. 성장도는격월잠수조사로채집한것을측정하였다. 조사결과해삼 (S. japonicus) 의성장은 4월에평균전중량 2.0 g에서 6월 38.9 g으로수온이증가함에따라크게증가하였다. 그러나수온이 20 이상이되는 8월에는평균전중량이 22.5 g으로감소하였다. 이후수온이하강하는 10월부터점차증가하여다음해 4월에는 48.5 g을나타내었고 6월에는 95.1 g으로전장과전중량이증가하였다. 성장률 (SGR) 에서도수온에따른성장기, 하면기, 회복기, 동면기, 성장기의단계를보였다. 성장기 (1.69%, 3.39%) 는실험시작인봄철에가장높았고, 하면기 (0.47%, 0.70%) 는수온이가장높은여름철로성장률도가장낮았다. 회복기 (0.99%, 1.49%) 는, 수온이가장낮은동면기 (0.56%, 1.01%) 로보다높은성장률을보였다. 이후봄철회복기 (1.17%, 1.79%) 를거치면서, 실험종료시에는 (1.29%, 2.64%) 로성장세를나타냈다. 월별개체출현은다음과같은분포를보였다. 실험시작시해삼종묘는전장이 7 cm이하, 전중량이 15 g이하인것이 100% 였으나, 6월에는전장이 7 cm이상인개체가 98.5%, 전중량이 15 g 이상인개체가 65.9% 로나타났 - VI -

11 다. 8월에는 88.5%, 65.5% 로낮아졌고, 10월에는 89.3%, 64% 로나타났다. 12월에는 93.4%, 96.6% 로전중량이 10월에비해 32% 증가하였다. 수온이가장낮은 2월에는 88.3%, 75.3% 로낮아졌지만, 실험종료시인 6월에는전장이 8 cm이상인개체가 100%, 전중량이 40 g 이상인개체가 100% 로나타났다. 이를통해인공종묘생산된어린돌기해삼의주성장기는 4~6월로평균수온이 11.9 에서성장이가장활발한것으로나타났다. Key Words : 해삼 (Stichopus japonicus), 생식주기, 씨뿌림양식 - VII -

12 Abstract Specimens were collected monthly in Anmyondo, west coast of Korea from October 2004 to September Sex of the sea cucumber, Stichopus japonicus was dioecious. The gonads are composed of a number of gametogenic follicles. The gonadosomatic index (GSI) was reached the maximum in June (7.91), and the minimum in October (0.42). The main spawning occurs between June and August. The reproductive cycle of the sea cucumber could be divided into five stages: multiplicative stage (January to March), growing stage (March to April), mature stage (April to July), spawning stage (June to August) and degenerative and resting stage (August to January). In the meantime, the results of mating processes and reproduction cycle of sea cucumber, produced in the West Sea of Korea, have shown that the main egg spawning period of the sea cucumber produced in the region is June. For the development sowing culture technology, we analyzed the growth rate, survival ratio, specific growth rate, and frequency by sowing seedlings in the coast near Anmyeon island of Tae-an-gun, Chungnam province. Also we clarified the spawning season of sea cucumber by examining the mating process and the reproduction cycle in the West Sea of Korea. Concerning the growth in sowing culture, the sea cucumbers grew from the overall weight 2.0 g in April 2004 to the average 38.9 g in June, and significantly decreased in weight to 22.5 g in August when the water temperature rose. And later on they gradually grew from October reaching 48.5 g in April, 2005, exhibiting rapid growth to 95.1 g (70~130 g) in June, and their - VIII -

13 final survival rate was inferred 66.7 %. Therefore, it appears to improve a survival rate and reduce commodity a production period, sowing of large seedling over at least the overall length of 4 cm is desirable. It is evaluated that in the fishing neighborhood, not only is the sowing culture in the field implemental in organizing and restoring resources, but also is the most economic and environment friendly method of sea cucumber culturing with low cost for facility. Key Words : Sea cucumber, Stichopus japonicus, Reproductive cycle, Sowing culture - IX -

14 제 1 장서론 돌기해삼 (Stichopus japonicus) 은순수목 (Aspiodchirotida), 돌기해삼과 (Stichopodidae), 돌기해삼속 (Stichopus) 에속하며, 전세계적으로약 1,500 종이분포하는것으로알려져있다. 우리나라해삼류는해삼 (Stichopus japonicus) 과광삼류 (Cucumariida) 등을포함한약 29종이알려져는데그중돌기해삼 (S. japonicus) 은채색에따라홍해삼, 청해삼, 흑해삼세가지로구분할수있다. 외형적차이외에도폴리낭주머니, 소골의형태 (Nishimura, 1995), 선호하는서식처의차이등생태적으로다른점이나타났다. 뿐만아니라, 유전자분석을통해청해삼과흑해삼은유전자거리가 로가까운반면, 홍해삼은 으로다른두해삼과거리가먼것으로나타났다 (Manami, 2003). 일반적으로알려진해삼 (S. japonicus) 은청해삼을말하는것으로우리나라대부분연안에서생산되는데, 종류에따른해삼분포를보면청해삼은외해쪽거의전연안에서식하고있으며, 흑해삼과홍해삼은동해안과남해안에일부지역에소량분포한다 (Fig. 1). 해삼 (S. japonicus) 은외해수의영향을강하게받는암초지대나작은돌, 사락질또는일부사니질에분포하며 ( 崔相, 他 1961,1963), 수심 3~15 m 내외의해조류가있는암반에서주로서식한다. 그러나어릴때는수심이낮은내만연안해조장의암반에서식하고, 성장함에따라좀더깊은암초지대로이동하며, 더성장하면외해저질이사니질인깊은곳으로이동하기도한다. 해삼 (S. japonicus) 은우리나라전연안에서연중어획되고있지만연안어장의환경오염과해안매립등으로인하여산란장과서식처가점차축소되고있다 (Lee and Park, 1999). 자연에서의해삼어획량 ( 해양수산부, 2006) 은 1998년이후 2002년까지는매년감소하고있는추세 (Fig. 2) 였다. 그러나 2002년부터 2004년까지총 1,059 천마리의해삼종묘가지방자치단체를통해연안에씨뿌림되고, 2005년부터 - 1 -

15 는지방자치단체뿐만아니라수협에서도씨뿌림양식을시도한결과어획량은 2002년 833톤에서 2007년 2,936톤으로 3.5배증가하여해삼의씨뿌림양식효과의효과가나타났다. 이에따라우리나라의해삼인공종묘생산량은연간 2천만마리내외로증가하였고, 씨뿌림량은 2004년이후 2007년까지 14,862천마리가씨뿌림되어 2004년이전에비해씨뿌림량은 14배증가하였다 (Fig. 3). 씨뿌림양식을효과적으로하기위해서는해삼종묘를자연에서수집하거나, 인공종묘생산에의해생산해야하는데, 그중에서도인공종묘생산은생산시기와생산되는양을예측, 조절할수있어자연에서해삼종묘를수집하는것보다안정적으로이용할수있다. 따라서인공종묘를생산하기위한해삼의기초생태인생식주기연구가선행되어야한다. 일본의경우에는형태, 생태및양식등에관한종합적인연구 ( 崔, 1963) 와해삼의채란법에대한연구 ( 石田, 1979) 등이보고되어있지만, 우리나라에서는 Lee and Park (1999) 의해삼유생의성장과생존에미치는먹이및수용밀도의영향에관한연구결과만있을뿐산란기조사를위한연구는이루어진바없다. 따라서, 본연구는해삼의기초생태자료인생식소의조직학적변화와생식주기조사를통해배우자형성과정과산란시기를예측하고자한다. 이와함께씨뿌림양식에서도축제식양식장에서의성장이나 (Chang, et al. 2000), 육상수조에서복합양식에서성장 (Pitt, et al. 2004) 은보고되어있으나현장실험인씨뿌림양식실험에대한성장이나, 효과조사에대한연구가미비하여, 본연구에서는인공종묘생산된해삼을이용한씨뿌림양식에서의성장도조사를통해자원회복의가능성을알아보고자한다

16 Fig. 1. Distribution of three types of Stichopus japonicus

17 Fig. 2. Annual production of Stichopus japonicus from 1990 to 2007 in Korea. (Ministry of maritime affairs & fisheries) - 4 -

18 Fig. 3. Annual variation of the amount of production and discharge of Stichopus japonicus

19 제 2 장생식주기에관한조직학적연구 1) 2.1. 서론 해삼 (Stichopus japonicus) 은순수목 (Aspiodchirotida), 돌기해삼과 (Stichopodidae), 돌기해삼속 (Stichopus) 에속하며, 전세계적으로약 1,500 종이분포하는것으로알려져있다. 해삼은오래전부터수산식품으로서식생활에중요한위치를차지하고있으며, 우리나라의전연안에서연중어획되고있지만연안어장의환경오염과해안매립등으로인하여산란장과서식처가점차축소되고있어 (Lee and Park, 1999), 인공종묘생산에의한자원의조성및양식의필요성이요구되고있는유용수산물이다. 해삼의자원조성과씨뿌림양식을위해서는자연산어린해삼을수집하거나인공종묘생산에의한어린해삼의확보가선행되어야하며, 종묘생산의적정시기를예측하기위해서는산란기의파악이필수적이다. 지금까지해삼에관한연구로는일본의경우형태, 생태및양식등에관한종합적인연구 ( 崔, 1963) 와해삼의채란법에대한연구 ( 石田, 1979) 등이보고되었으나, 우리나라에서는 Lee and Park (1999) 의해삼유생의성장과생존에미치는먹이및수용밀도의영향에관한연구결과가있다. 제 2장에서는해삼의기초생태자료인, 생식소의조직학적변화와생식주기를조사를통해배우자형성과정과산란시기를알아보고자한다. 1) 한국서해안해삼, Stichopus japonicus 의생식주기에관한조직학적연구로발표 된논문임

20 2.2. 재료및방법 서해안내파수도는안면읍소재지에서 9.7 km 떨어져있는동경 126 5, 북위 에자리한낙도 ( 落島 ) 로, 섬주변에암반과자갈이잘발달되어있고, 분여지선은수심이 2~10 m로잘발달된해저암반을가지고있어해삼뿐만아니라전복, 성게등의서식밀도가높게나타나고있는지역이다. 이지역의해삼자원량은 1 m2당 1.8마리, 분포면적은 40.4 ha, 추정자원량은 28.1 mt 이다 ( 서해수산연구소, 2005). 본실험에사용한해삼은분여와내파수도근해 (Fig. 4) 에서어획된것으로 2004년 10월부터 2005년 9월까지잠수조사를통해매월 60 마리씩채포하였다. 실험에사용한해삼의크기는평균전장 9.1~19.0 cm, 평균체중 57.7~ g이었다 (Fig. 5). 채집된해삼은전중량, 생식소중량, 소화관중량을전자저울을이용하여 0.1 g 단위까지측정하고, 다음식에의하여 (1) 생식소중량지수 (Gonadosomatic index) 와 (2) 소화관중량지수 (Gastrointestinal index) 를구하였다. Gonadosomatic index (GSI) = Gonad Weight (g) / Body Weight (g) 100 (1) Gastrointestinal index (GI) = Digestive canal Weight (g) / Body Weight (g) 100 (2) - 7 -

21 Sampling site Fig. 4. Sampling site of Stichopus japonicus

22 20 18 TL (cm) BW (g) Oct. 04 Nov. Dec. Jan. 05 Feb. Mar. Apr. May Jun. Jul. Aug. Sep. Months Fig. 5. Monthly body size of wild sea cucumber, Stichopus japonicus in this experiment (N = 60)

23 환경조사 해삼서식해역에서해삼의성숙에영향을미칠수있을것으로생각되는물 리적환경을파악하기위하여수질측정기 (YSI model 85, USA) 를사용하 여해삼의채집수층인 5 m 수심의수온과염분을측정하였다 생식세포형성과정 생식소발달에따른조직학적변화를관찰하기위하여생식소부위를 5~8 mm크기로절단하여 Bouin 용액에 24시간고정한다음, paraffin 상법으로 5~6 μm두께의조직절편을제작하였다. 표본은 Harris haematoxylin 과 0.5 % eosin 으로염색한후, 광학현미경 (GALENⅢ. TA-120) 으로관찰하였다 생식주기 생식소의조직학적발달단계는암 수각각분열증식기 (Multiplicative stage), 성장기 (Growing stage), 성숙기 (Mature stage), 산란기 (Spawning stage), 퇴화및휴지기 (Degenerative and Resting stage) 의연속적인 5단계로구분하였다 결과 환경요인 2004년 10월부터 2005년 9월까지수온과염분의월변화는 Fig. 6 과같았다. 안면도연안의월평균수온은 2005년 2월에 3.3 로가장낮았으며, 8 월에 23.1 로가장높았다. 염분은 2005년 1월에 31.4 로가장높았으며, 6 월에 29.7 로가장낮았다

24 Fig. 6. Monthly variations of water temperature and salinity at the sampling area

25 생식소중량지수 (Gonadosomatic index GSI) 와 소화관중량지수 (Gastrointestinal index GI) 조사기간인 2004년 10월부터 2005년 9월까지서해안안면도연안에서채집된해삼 (S. japonicus) 암 수각각의체장및체중의월변화에서주산란기에는큰개체가출현하였다. 이지역에서해삼 (S. japonicus) 의주성장시기가 4~6월로특히 5월과 6월에는생식소가잘발달하고있었다. 한편, 해삼 (S. japonicus) 암 수각각의생식소중량지수 (GSI) 의월변화를보면, 해삼암컷의생식소중량지수는 1월과 2월에 ± 0.086, ± 0.359로비슷하였으며, 3월부터급속하게상승하여 6월에 ± 0.539로연중가장높은값을보였다. 7월에는 ± 0.359로감소하기시작하여 10 월에는 ± 0.096로가장낮은값을보였다 (Fig. 7). 수컷의생식소중량지수는암컷의생식소중량지수와비슷하게나타났는데, 6 월에 ± 0.392로연중가장높은값을보였으며 10월에 ± 0.047로가장낮은값을보였다

26 Fig. 7. Monthly changes of gonadosomatic index (GSI) in Stichopus japonicus. Vertical bar: SD

27 2004년 12월부터 2005년 8월까지채집된해삼 (S. japonicus) 의암, 수생식소중량지수 (GSI) 평균과소화관중량지수 (GI) 평균을비교해보았다 (Fig. 8). 그결과 12월휴지기로접어든생식소중량지수는 1.21로큰변화없이 2월 1.56까지유지되었으나소화관중량지수는 12월 4.15에서계속증가하여 3월 15.50으로가장높았다. 소화관중량지수가가장높아진 3월부터생식소중량지수는 4.25로크게증가하기시작하여 4월 6.86, 5월 8.34, 6월에 9.76으로가장높았다가 7월 4.07로감소하였고, 8월은 2.52로더낮아졌다. 반면소화관중량지수는 3월까지증가하던것이 4월부터 13.35로감소하기시작하면서 8월에 2.89로가장낮은값을보였다. 생식소는평균수온이 8.8 인 2월부터 6월동안발달하기시작하였고, 소화관은생식소보다평균수온이 4.1 로낮은 1월부터 3월까지발달하였다. 이결과 3월부터소화관중량은감소하고, 생식소중량은증가하는반비례관계를보였다

28 Fig. 8. Monthly changes of Gonadosomatic index (GSI) and Gastrointestinal index (GI) in Stichopus japonicus. Vertical bar: SD

29 생식소의조직학적변화 생식소의변화를조직학적방법으로조사하여다음과같은일련의과정으로 구분하였다 난소 해삼난소의조직학적변화를보면, 분열증식기의난소는소낭들이뚜렷하게형태를이루었으며, 소낭의생식상피에는난원세포들이분열증식하였다. 난원세포는인이뚜렷한둥근핵을가지고있었으나, 세포질은매우빈약하였다 (Fig. 9, A). 성장기의난소는소낭의생식상피에서분열증식중이던난원세포들은차츰그세포질이커지고내강쪽으로성장하기시작하였으며, 계속성장하게되면타원형의서양배모양을하게되어한쪽끝이가늘고긴난병을형성하며발달하였다. 이후난병이소실되고난모세포는생식상피로부터유리되어차츰원형으로되면서중앙내강으로분리되었다 (Fig. 9, B). 성숙기의난소내의각소낭에는유리된성숙한난모세포들로가득채워져있었으며, 조직학적상태는원형이었다. 완전히성숙한난모세포는세포질에충분한난황을축적하였으며, 커다란배포상이핵을포함하고있었으며, 핵막부근에큰인이존재하였다 (Fig. 9, C). 산란기의난소는성숙한난모세포가체외로방출되었고, 이로인하여난소소낭의중앙부는비어있었으며, 소낭에는미방출된난모세포들도존재하였다 (Fig. 9, D). 퇴화및휴지기의난소는난이방출되어위축되었고, 미방출된난모세포들은점점염색성이소실되면서퇴화또는흡수되는현상들이나타났으며, 그수는점차감소하였다 (Fig. 9, E)

30 Fig. 9. Histological identification of internal morphology and developmental phases of ovary in Stichopus japonicus. Scale bar: 100 μm. A: multiplicative stage, B: growing stage, C: mature stage, D: spawning stage, E: degenerative and resting stage

31 정소 해삼정소의조직학적변화를보면, 분열증식기의정소는소화맹낭에인접하여많은정소세관이발달하였으며이들정소세관상피는섬유성결체조직으로이루어져있다. 정소세관은두터운생식상피로이루어졌으며, 생식상피를따라미분화간충직과호산성과립세포들사이에정원세포가활발히분열증식하였다. 초기정원세포의핵은난원세포에비해핵상이뚜렷하지못하고, 핵내에망상구조가보다불규칙하고염색질이과립또는괴상으로나타났다 (Fig. 10, A). 성장기의정소는분열증식을마친정원세포가제 1차성숙분열을거쳐정모세포로발달하는성장기를나타내었다. 성장기정소세관은정원세포의수가감소하고정모세포, 정세포가증가하였으며, 이들은층상구조를나타내었다 (Fig. 10, B). 성숙기의정소에서는성숙분열을마친정세포가생식상피주변에위치하였고, 성숙 변태한정자는강한염기성을나타내며머리를생식상피로향하여정소세관의내부를가득채웠다 (Fig. 10, C). 산란기의정소는이후정자들이세관내에서배열상이흩어지며체외로방출되었으며, 이로인하여세관의일부는비어있었고, 방정이일어난정소의세관은점점위축되었고형태가변화되었다 (Fig. 10, D). 퇴화및휴지기의정소내방출되지않은잔존정자는퇴화또는흡수되고, 일정기간조직의변화없이유지되는휴지기를나타내었다 (Fig. 10, E)

32 Fig. 10. Histological identification of internal morphology and developmental phases of testis in Stichopus japonicus. Scale bar: 50 μm. A: multiplicative stage, B: growing stage, C: mature stage, D: spawning stage, E: degenerative and resting stage

33 2.3.4 생식주기 조직학적으로조사된생식세포형성과정및 GSI를종합하여이들의생식주기를분열증식기, 성장기, 성숙기, 방출기, 퇴화및휴지기등의연속적인단계로구별하였다. 해삼은생식소의발달단계를보면 (Fig. 11) 분열증식기는 1~3월까지관찰되었으며그중에서도 2월에출현빈도가암 수모두 100% 로가장높았다. 성장기는 3 ~4월까지관찰되었으며, 성숙기는 4 ~7월까지출현하였고, 주성숙기인 5월에는암 수모두 100% 로높은출현빈도를보였다. 방출기는 6~ 8월에관찰되었으며특히 7월에암 수각각 87.31%, 86.67% 로출현빈도가가장높았고일부퇴화및휴지기의개체도출현하였다. 퇴화및휴지기는 8 월부터다음해 1월까지장기간지속되었다. 암컷과수컷의발달단계는비슷한양상을나타내었으나 4월에성숙개체의비율이암 수각각 67.35%, 71.43% 로암컷보다수컷의성숙이빠르게진행되고있음을알수있었다. 이상의결과에따라해삼의생식주기를종합하면분열증식기는 1~3월, 성장기는 3~4월, 성숙기는 4~7월, 방출기는 6~8월, 퇴화및휴지기는 8~1월인것으로판단된다

34 (%) Frequency Oct. 04 Nov. Dec. Jan. 05 Feb. Mar. Apr. May Jun. Jul. Aug. Sep. Months Mu G M S R Fig. 11. Monthly frequency in gonadal development stage of Stichopus japonicus. Upper: Female, Lower: Male. Mu: multiplicative stage, G: growing stage, M: mature stage, S: spawning stage, R: degenerative and resting stage

35 2.4. 고찰 해삼 (S. japonicus) 의생식소는구부석회환의바로뒤쪽에발달하고, 몸의맨끝바로앞의등부분정중선상에있는생식공에이어져있다. 생식소가발달하면근원에서부터수십개로분지되어서, 흡사나뭇가지모양이된다 ( 유, 1998). 해삼 (S. japonicus) 은외관상으로는암 수의구별을할수없고복부를절개하여생식소의색으로구분할수있는데, 정소는유백색이고난소는선명한홍색을띠어완연히구분된다. 생식소중량지수 (GSI) 와소화관중량지수 (GI) 를비교해본결과수온이내려가는 10월부터다음해 3월까지소화관중량지수가증가하는반면생식소중량지수는 3월부터증가하여산란기전인 6월까지증가하는반비례관계를보였다, 이러한경향은극피동물인북쪽말똥성게 (Strongylocentrotus intermedius, Son and Park, 1989), 아스테리아스불가사리 (Asterias vulgaris) 에서도확인할수있었다. 이것은제한된에너지를이용하는데있어환경이좋을때, 성장을위해에너지를저장해두었다가산란기에접어들면서생식소를발달시키는데이용하는것으로보인다 (Raymond, 2007). Brousseau (1995) 는배우자방출의제 1자극요인은수온이라고보고하고있는데, 본연구에서도해삼의생식소를조직학적으로조사한결과, 수온이낮은 1월부터난모세포의분열증식이관찰되었으며, 수온이상승하는 3월부터난모세포의성장이빨라짐으로써해삼의성숙을조절하는환경요인으로수온이가장큰영향임을확인할수있었다. 산란시기는지리적위치에따라다르게나타나는데 (Chung et al., 1998), 산란시기에따라늦가을부터다음해봄사이에산란하는동계산란종 (Winter breeders), 늦봄부터이른가을사이에걸쳐산란하는하계산란종 (Summer breeders), 연중산란하는연중산란종 (Year-round breeders) 으로구분되며 (Boolootian et al., 1962), 산란회수도연중 1회산란하는종 (Kim and Yoo, 2001; Lee, 2001), 2회산란하는종 (Kim et al., 1999; Lee, 1999) 및 3회산란하는종 (Sarasquete et al., 1990) 등다양한것으로알려져있

36 다. 해삼의산란시기는조사년도에따라수온등의해황이다를가능성이있어단정짓기는어렵지만조사해역에서는다른환경요인들은연주기성을보이지않았으며, 수온에서의계절적변화가인정됨으로써, 수온이해삼 (S. japonicus) 의배우자형성과정과산란시기결정에밀접한관련이있는것으로추정된다. 조직학적으로관찰한결과, 16 이상의수온이유지되는 6 ~ 8월사이에방란 방정을하는것으로보아이들은하계산란종이며연중 1 회의산란기이후고수온기에하면을하는것으로생각된다. 일반적으로해산무척추동물의생식소발달과생식주기는내부적인요인인연령과월령에의한내분비리듬, 그리고외부환경요인인수온, 빛, 염분및먹이의풍부도등에의하여조절되는것으로알려져있다 (Giese, 1959). Hamel (1999) 은월령에의해분비하는점액질양이증가함에따라생식소가발달하고, 점액질이매개가되어산란과방정이동시에일어나는전도체역할을하기도하며, Muthiga (2006) 외부적환경요인으로는플랑크톤의양이많아지기직전에산란하여부유유생이부화하는시기에먹이양이충분하도록하여, 생존율을높이는것으로알려져있다. 그러나해삼의생식세포형성과정에작용하는내적조절계는알려진바가거의없어, 이에대한다각적연구가선결되어야할것이며, 차후먹이의종류, 선호도그리고계절별생리적변화와관련한연구가필요할것으로보인다 결론해삼 (S. japonicus) 의생식소중량지수 (GSI) 는암, 수모두 6월 (7.91, 7.21) 에가장높았으며, 10월 (0.42, 0.53) 으로가장낮았다. 소화관중량지수 (GI) 는 12월 (4.17) 에서 3월 (15.50) 으로크게증가하였다가, 4월부터감소하여 8 월 (2.89) 로가장낮았다. 이것을통해조사기간채집된해삼의주산란기는 6월에서 7월임을확인할수있었다. 조직학적으로관찰한결과발달단계를분열증식기, 성장기, 성숙기, 산란기, 퇴화및휴지기의 5단계로구분할수있었다. 해삼 (S. japonicus) 의생식주기는분열증식기가 1 3월, 성장기는 3 4월, 성숙기는 4 7월, 산란기는 6 8월, 퇴화및휴지기는 8 1월로구분할수있었다

37 제 3 장씨뿌림양식에서해삼 (Stichopus japonicus) 의성장 3.1. 서론 해삼 (S. japonicus) 은전세계적으로건강에대한관심이증가함에따라우리나라는비롯한중국과일본등지에서약용식품으로수요가크게증가하고있다. 특히중국은경제발달과함께해삼의소비가급증하고있다. 그러나어업만으로소비를감당하기어려워중국에서는기존의축제식양식장에해삼과새우, 해삼과어류를함께길러내는복합양식이나, 육상수조양식등다양한양식방법과사료개발을통해대량양식생산을하고있다. 그러나수요가많아부족분을수입하고있는실정이다. 우리나라에서해삼은중국에비해그수요가적어양식을통해생산된해삼은중국으로수출할수있는유망품종이다. 그러나연안어장의오염과자원의남획으로산란및서식장이축소되고있어우리나라해삼어획량은해마다감소되고있는추세다. 이렇게감소하고있는해삼자원회복과생산성증대를위해서우리나라에서도다양한해삼양식개발이요구된다. 여러양식방법중에서씨뿌림양식방법은어린해삼종묘를바다에서길러재포획하는방법으로감소하고있는개체수회복과시설비와관리비가적어경제적이고, 친환경적인양식방법으로 1990년대인공종묘생산기술이개발됨에따라매년정부자치단체를중심으로이루어지고있다 ( 서등, 2008). 그러나씨뿌림이후개체성장이나가입에대한조사가이루어지지않아그효과가보고되어있지않다. 따라서본연구는인공종묘생산된어린해삼 (S. japonicus) 을자연산해삼 (S. japonicus) 이서식하는지역에씨뿌림하여, 격월로성장을관찰하였으며인공종묘에의한자원회복정도를예측해보고자한다

38 3.2. 재료및방법 실험방법 실험에이용한해삼 (S. japonicus) 은경상남도거제와전라남도완도에서생산된평균전장 3.9 cm, 전중량 2.03 g의인공종묘 30,000마리를 2005년 4 월자연산해삼이서식하는충남태안군안면읍승언리분여지선에씨뿌림하였다 (Fig. 12). 개체표지는실험시작하기전잠수조사로실험지역에서식하는해삼 (S. japonicus) 을모두제거하는것으로대체하였다. 실험지역인충남태안군안면읍분여지선은내파수도북서쪽에위치한곳으로잘발달된해저암반지형으로저서생물서식에천혜의공간을확보하고있으며, 수심은 2~10 m로무척추동물출현종이연체동물 2종, 극피동물 6 종 (Table 1.) 으로별불가사리가가장많이채집되었다. 유용생물로는참전복, 해삼, 말똥성게가서식하고있다 ( 서해수산연구소, 2005)

39 Table 1. List of macrobenthos in subtidal flat of Bunyeo (West Sea Fisheries Research Development Institute, 2005) Station St. 1 St. 2 St. 3 St. 4 Total Scientific name N W N W N W N W N W 2 species Haliotis discus hannai Omphalius rusticus species ,676 Hemicentrotus pulcherrimus Anthocidaris crassispina Stichopus japonicus Asterina pectinifera Asterias amurensis Ophiocoma imbricatus species ,

40 Fig. 12. Study site of Stichopus japonicus

41 정기조사 환경조사는격월로해삼 (S. japonicus) 의성장에영향을미치는것으로알려진 (Kato, 1990) 물리적환경을파악하기위하여수질측정기 (YSI model 85, USA) 를사용하여해삼의채집수층인 10 m 수심의수온, 염분을측정하였다. Chlorophyll - a의계절별변화관찰을알아보기위해 2005년 5월, 8 월, 11월, 2006년 2월, 5월다항목수질측정기 (Hydrolab MS5, USA) 를사용하여측정하였다. 해삼 (S. japonicus) 의채집은격월잠수조사를통해 150마리씩채집하였다 분석방법 월별성장도 성장조사를위해격월로전장은 0.1 cm 단위까지, 전중량은 0.1 g 단위까지 측정하였다 일간성장률 (Specific Growth Rate SGR) 일간성장률은 (specific growth rate, SGR) 은다음식을이용하여산출하였다. Specific growth rate (% / day) = ln (Final X) - ln (Initial X) 100 / number of days X= length or weight 성장률과계절에따른수온변화와의관계를통해성장기, 하면기, 회복기, 동면기, 회복기, 성장기단계로나누어볼수있었다

42 월별빈도 채집된개체의출현빈도분석을통해계절별수온변화에따라채집되는 해삼크기와관계를알아보았다 결과 환경조사 조사기간동안서식지역의평균수온은 12.4, 평균염분은 31.1 로월별수온변화는 Fig.13 과같이나타났다. 수온은처음실험이실시된 4월에는 7.1 였으며, 6월에는 16.7 로상승하였고, 8월에 23.1 로가장높게나타났다. 이후 10월부터수온이하강하여 2월에 3.9 로가장낮게나타났다. 다음해 4월부터다시수온이상승하기시작하여실험종료시인 6월에는 16.5 를나타내었다. Dong (2008) 보고에따르면해삼 (S. japonicus) 의성장에있어적정염분범위는 20 이상으로 20 이하인경우에는해삼의성장률을저해할수있지만 20 ~ 40 범위내에서는성장에큰영향을미치지않는다고하였다. Chlorophyll - a는수온과유의한경향을보였는데 2005년 5월에는 4.27 μ g/l, 8월에는 7.66 μg/l로가장높았으며, 11월에는 2.01 μg/l, 2006년 2월에는 0.45 μg/l로가장낮았고, 5월에는 2.85 μg/l로전년보다 1.42 μg/l 낮았다. 조사지역에서염분은여름장마철인 6월 29.9 로낮았지만, 월별평균 31.1 로생존범위에영향을미치지않는범위에있었고, 계절적으로큰변화를보이지않았다

43 Fig. 13. Variations of water temperature, salinity and chlorophyll - a at the sampling area

44 성장 월별성장도 씨뿌림양식에서해삼 (S. japonicus) 의성장은 2005년 4월실험시작시수온은 7.1 였고, 실험에사용된인공종묘해삼 (S. japonicus) 의평균전장 3.9 cm, 전중량 2.0 g이었다. 이후 6월에는수온 16.7, 평균전장 11.5 cm, 평균전중량 48.1 g으로성장하였다. 8월에는수온이 18 이상으로상승하면서하면 (aestivation) 에의하여평균전장 7.7 cm, 전중량 22.5 g으로 6월에비해전장과전중량평균의크게감소하였다. 이후 10월부터수온이 18 이하로낮아지면서평균전장 8.2 cm, 평균전중량 25.2 g으로증가하였다. 겨울철수온이 4 이하로낮아지는 12월부터 2월의성장값은평균전장이 0.5 cm, 평균전중량 5 g 내외로작아졌다. 2006년 4월수온이 6.5 로다시상승하면서평균전장 9.2 cm, 평균전중량 38.9 g으로회복되었다. 실험종료시기인 2006년 6월수온은 16.5, 평균전장 12.6 cm, 전중량 95.1 g으로실험시작인 2005년 4월보다 47.5배의성장을나타냈다 (Fig.14, 15)

45 Fig. 14. Relationship between water temperature and total length. Fig. 15. Relationship between water temperature and total weight

46 일간성장률 (Specific Growth Rate SGR) 해삼 (S. japonicus) 의성장률 (SGR) 을계절별수온과관계를통해성장기, 하면 (aestivation) 기, 회복기, 동면 (hibernation) 기, 회복기, 성장기 6 단계로나누어볼수있었다 (Fig. 16). 실험시작 69일동안수온이 7.1 에서 16.7 로높아지면서전장과전중량의성장률이 1.69%, 3.39% 로높게나타나는성장기를보였다. 이후수온은계속높아지면서 133일후여름철 23.1 의고수온기로접어들면서전장과전중량의성장률은각각 0.47%, 0.70% 로급감하는하면기를보였다. 187일후수온이 17.4 로낮아지면서 8월에서 10월전장과전중량의성장률은각각 0.99%, 1.49% 로회복기를보였다. 259일후인 10월에서 12월수온이 8.1 로내려감에따라전장성장률이 0.67%, 전중량성장률이 1.38% 로하면이후의회복기보다낮았다. 실험시작 325일후수온이가장낮은 3.9 에서전장과전중량의성장률은 0.56%, 1.01% 로하면기보다높았지만대체적으로낮은성장률의동면기를보였다. 379일후인 2월에서 4월수온이 6.5 로높아지면서전장과전중량성장률도각각 1.17%, 1.79% 로동면후회복기를보였다. 실험종료시인 434일후처음실험실시 69일이후성장률보다는낮았지만전장성장률은 1.29%, 전중량성장률은 2.64% 로두번째성장기를보였다

47 Fig. 16. The causal relationship between water temperature and specific growth rate (SGR)

48 월별출현빈도 월별개체출현은다음과같은분포를보였다 (Fig. 17, 18). 실험에사용된해삼 (S. japonicus) 은전장이 7 cm이하, 전중량이 15 g이하인것이 100% 였으나, 실험시작후 2개월인, 6월에는전장이 7 cm이상인개체가 98.5%, 전중량이 15 g 이상인개체가 65.9% 로나타났다. 고수온기인 8월에는전장이 7 cm이상인개체가 88.5%, 전중량이 15 g 이상인개체가 65.5% 로낮아졌다. 10월전장이 7 cm이상인개체는 89.3%, 전중량이 15 g 이상인개체는 64% 로나타났다. 12월에는전장이 7 cm이상인개체가 93.4%, 전중량이 15 g 이상인개체가 96.6% 로전중량이 32% 증가하였다. 수온이가장낮은 2월에는전장이 7 cm이상인개체가 88.3%, 전중량이 15 g 이상인개체가 75.3% 로낮아졌다. 실험종료시인 6월에는전장이 8 cm이상인개체가 100%, 전중량이 40 g 이상인개체가 100% 로나타났다

49 Fig. 17. Frequency distribution of total lengths. Fig. 18. Frequency distribution of total weights

50 3.4. 고찰 해삼 (S. japonicus) 의성장률은일년동안두번의성장기와하면 (aestivation) 과동면 (hibernation) 그리고두번의회복기로계절적수온변화에따라성장률의증가와감소가뚜렷하게나타났다. 특히여름철고수온에서의해삼 (S. japonicus) 의성장률이크게감소하는것이특징이었다. Yunwei (2006) 의수온별어린해삼의성장을보면 22 에서 0.99% 로가장낮은성장률을보였고, 15~18 에서 1.48% 로가장높은성장률을보였다. 본연구에서도수온이 23.1 인 8월전장과전중량의성장률이각각 0.47%, 0.70% 로가장낮았고, 16.7 에서전장과전중량의성장률이 1.69%, 3.39% 로가장높았는데, 이러한성장률의변화원인으로서식환경에의한외적요인과, 해삼 (S. japonicus) 체내내분비적요인이보고되어있다. 외적환경요인으로 Xiutang (2007) 의논문에따르면수온이 20 이상인실험구에서해삼 (S. japonicus) 전중량이감소하였는데, 감소원인으로서식환경내에한정된먹이를효율적으로이용하고저장하기위해서대사활동을억제하거나휴지기를갖는것이라고하였다. 내분비적요인으로수온이증가하여 17.5~19 이상이되면소화효소인 protease, amylase, algalase 분비양이적어지면서, 소화관길이가줄어들고 (Wang, 2007), 이것이소화관을위축시켜섭이하는먹이양이줄어들게된다 ( 崔相, 1963). 본연구에서도수온이 18 이상되는 6월 (1.69%, 3.39%) 에서 8월 (0.47%, 0.70%) 전장과전중량의성장률이 1/3 감소하다가수온이내려가는 10월중순에서하순사이에회복기를거쳐성장기를갖는것으로보인다. 본실험에서여름철해삼이돌틈사이로잠입하여채집에어려움을겪었다. Zhou (1996) 는여름철암반지역에서의해삼밀도가높은이유로모래바닥보다상대적으로적은조류흐름을받아안정적인환경에서하면하기위해서암반틈에서의서식량이높고, 성숙한개체의경우 6월에서

51 7월초여름에산란을하기위해몸을수직으로세우는습성때문이라고하였다. Yang (2006) 는개체크기별산소소비 OCR (oxygen consumption rate) 와관련하여수온이 10 에서 20 로증가하는동안산소소비량 (OCR) 은전중량이 69 g인개체는 400 ~ 600 mg g -1 h -1 로증가하지만, 전중량이 21 g인개체는 300 ~ 325 mg g -1 h -1 로산소소비가적어작은개체가더오래고수온에서섭식활동을할수있는것으로보고되고있다. 본연구에서도위와같은생태가채집시해삼의개체크기별월별출현빈도에나타났는데, 처음실험에사용된해삼은전장이 7 cm이하, 전중량이 15 g이하인것이 100% 였으나, 실험시작후 2개월인, 6월에는전장이 7 cm이상인개체가 98.5%, 전중량이 15 g 이상인개체가 65.9% 로나타났다. 이후고수온기인 8월에는 6월에는출현하지않은전장 7 cm이하, 전중량 15 g이하의작은개체들을볼수있었는데이것은큰개체들은이미하면에들어가채집이되지않고, 활동중에있는작은개체가채포되어, 작은개체의빈도가나타난것으로보인다. 성장률과개체별출현빈도관찰을통해실험종료시채포된 100 g이상의개체가 45% 로, 씨뿌림양식 1년후 100 g이상으로성장한 45% 가산란에가입할것으로보인다. 현재해삼의표지기간이긴실험의경우실험이종료될때까지표지가남아있지않는것이문제가되고있는데, Lokani (1992) 에의해해삼의근육내 coded wire를삽입하는방법이효율적인표지방법으로연구되고있으나, 섭취하였을때인체에미치는영향에대한자료조사가이루어지지않아국내에서는사용이금지되고있는실정이다. 따라서해삼의성장및생존에미치는영향을최소화하면서재포획시까지남아있는인체에무해한표지법이개발될경우씨뿌림종묘에표지방류를통한재포획율산출은물론자원회복을위한적정방류량과어획량산출에유용할것으로사료된다

52 3.5. 결론 해삼 (S. japonicus) 의인공종묘는 4월 6월까지평균전장이 3.9 cm에서 9.12 cm로, 평균전중량은 2..0 g에서 38.9 g으로크게성장하였다. 그러나수온이 18 이상인 8월에는평균전장 7.44 cm, 전중량 22.5 g으로감소하였다. 10월수온이 17.4 로내려가면서재성장하다가, 겨울철저수온기 (3.9 ) 에성장이낮아졌다. 실험종료인 2006년 6월수온상승과함께두번째성장이나타났고, 평균전장 12.7 cm, 전중량 95.5 g으로처음실험때크기보다 47.5배의성장을보였다. 성장률 (SGR) 도수온에따라성장기, 하면기, 회복기, 동면기, 회복기, 성장기의성장단계를보였다. 전장과전중량성장률은실험시작시기인봄철에성장기 (1.69%, 3.39%) 로가장높았고, 하면기 (0.47%, 0.70%) 는수온이가장높은여름철로성장률도가장낮았다. 회복기 (0.99%, 1.49%) 는하면기보다성장률이높았고, 수온이가장낮은동면기 (0.56%, 1.01%) 보다더높은성장률을보였다. 이후봄철회복기 (1.17%, 1.79%) 를거치면서, 실험종료시인 6월에 1.29%, 2.64% 로높은성장률을보였다. 월별개체출현은다음과같은분포를보였다. 실험시작시해삼종묘는전장이 7 cm이하, 전중량이 15 g이하인것이 100% 였으나, 6월에는전장이 7 cm이상인개체가 98.5%, 전중량이 15 g 이상인개체가 65.9% 로나타났다. 8월에는 88.5%, 65.5% 로낮아졌고, 10 월에는 89.3%, 64% 로나타났다. 12월에는 93.4%, 96.6% 로전중량이 10월에비해 32% 증가하였다. 수온이가장낮은 2월에는 88.3%, 75.3% 로낮아졌지만, 실험종료시인 6월에는전장이 8 cm이상인개체가 100%, 전중량이 40 g 이상인개체가 100% 로나타났다

53 제 4 장참고문헌 유성규, 천해양식. 제 4 절해삼. 구덕출판사. 부산, pp 서주영, 최진, 김근업, 조성수, 박흠기, 이상민 배합사료의단백질및 지질함량이어린돌기해삼 Stichopus japonicus 의성장및체조성에 미치는영향. 한국양식학회지, 21 (1), 서해수산연구소, 태안바다목장해역갯벌및조하대무척추동물현존 량조사. 국립수산과학원보고서. 손용수, 박영제, 강원연안산북쪽말똥성게의생태와이식에관한연 구. 수진연구보고, 43 (108), 해양수산부, 해양수산통계연보. pp 崔相, 他 ナマコにみられる アオ と アカ の形態および生態的差 異について. 崔相, ナマコの硏究. 海文堂. 東京, pp 石田雅俊, ナマコの種苗生産. 栽培技硏. 8, Beirne. L., K. Fitzmier, M. Miller, "Holothuroidea". Biological Diversity Accessed January 28, 2005 at

54 Bicego - Nahas, K. C., L. H Gargaglioni, L. G. S. Branco, Seasonal changes in the preferred body temperature, cardiovascular, and respiratory responses to hypoxia in the toad, Bufo paracnemis. J. Exp. Zool. 289, Boolootian, R. A., A. Farmanfarmaina and A. C. Giese, On the reproductive cycle and breeding habits of two western species of Haliotis. Biol. Bull., 122, Brousseau, D. J., Gametogenesis and spawning in intertidal oysters (Crassostrea virginica) from western Long lsland Sound. J. Shellfish Research, 14, Chang, Y., C. Yu, and Songxin, Pond culture of sea cucumber, Apostichopus jaopnicus, in Dalian. FAO Fisheries Technical paper, 463, Chung, E. Y., G. M. Park and B. S. Kim, Ultrastructure of germ cell development and sexual maturation of the short necked clam, Ruditapes philippinarum (Bivalvia: Veneridae), on the west coast of Korea. The Yellow Sea, 4, Euler, U. S. von and H. Heller, Comparative endocrinology. Ⅱ. Academic Press, New York and London, 282 pp. Giese, A. C Comparative physiology; Annual reproductive cycle of marine invertebrate. Annual Review of Physiology, 21,

55 Yang H., Y. Zhou, T. Zhang,X. Yuan,X. Li, Y. Liu, F. Zhang, Metabolic characteristics of sea cucumber Apostichiopus japonicus (Selenka) during aestivation. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology 330, Yunwei D., D. Shuanglin, T. Xiangli, W. Fang, Z. Meizhao, Effect of diel temperature fluctuations on growth, oxygen consumption and proximate body composition in the sea cucumber Apostichopus japonicus Selenka. Aquaculture 255, Jean-Francois Hamel and Annie Mercier, Mucus as a mediator of gametogenic synchrony in the sea cucumber Cucumaria frondosa (Holothuroidea : Echinodermata). J. Mar. Biol. Ass. U. K.79, Jean-Francois Raymond, Himmelman, Guderley, Biochemical content, energy composition and reproductive effort in the broadcasting sea star Asterias vulgaris over the spawning period. Marine Biology and Ecology, 341, Kato. A. and H. Hirata, Effects of water temperature on the circadian rhythm of the sea cucumber Stichopus japonicus in the culture. Suisanzoshoku, 38, Kim, D. H., H. K. Lim., Y. J. Chang and T. I. Kim Reproductive cycle of surf clam (Tresus keenae) in southern coast of Korea. J. Kor. Fish. Soc., 32,

56 Lee, C. S. and Y. J. Park, Influence of food and density on the growth and survival of sea cucumber, Stichopus japonicus. J. Aquaculture, 12, Lee, J. H., Histological study on the reproductive cycle of Potamocarbula amurensis (Bivalvia: Carbulidae). J. Kor. Fish. Soc., 32, Lee, J. H., Gonadal development and reproductive cycle of the top shell, Omphalius rusticus(gastropoda: Trochidae). Kor. J. Biol. Sci., 5, Manami, K., A. Kijima, Genetic differentiation among three color variants of japanese sea cucumber Stichopus japonicus. Fisheries science. 69, McKee, P. M., G. L. Mackie, Respiratory adaptations of the fingernail clams Sphaerium occidentale and Musculium securis to ephemeral habitats. Can. J. Fish. Aquat. Sci. 40, Muthiga, N. A The reproductive biology of a new species of sea cucumber, Holothuria arenacava in a Kenyan marine protected area the possible role of light and temperature on gametogenesis and spawning. Marine Biology, 149, Nishimura S. Guide to seashore Animals of Japan with Color Pictures and Keys, Vol. 2. Hoikusha, Osaka

57 Pitt, R., N. D. Q. Duy, T. V. Duy and H. T. C. Long, Sandfish (Holothuria scabra) with shrimp (Peanesu monodon) co-culture tank trials. SPC Beche-de-mer Information Bulletin #20, Sarasquete, M. C., S. Gimeno and M. L. Gonzalez de Canales Cycle reproducteur de la palourde Ruditapes phlilippinarum (Adams and Reeve, 1850) de la cote sud ouest atlantique (Espagne) Rev. Int. Oceanogr. Med., LXXXXXⅦ, Shijie Zhou and Shirley Thomas C., Habitat and depth distribution of the red sea cucumber Parastichopus californicus in a Southeast Alaska Bay. Alaska Fishery Research 3 (2), Wang Ji-Qiao, Li Tang, Chong Xu, Jun-Chi Gheng, Histological observation of alimentary tract and annual changes of four digestive enzymes in sea cucumber (Aspostichopus japonicus). Fisheries Science/ Shuichan Kexue 9, Xiutang. Y, Y. Hongsheng, W. Lili, Zhou Yi, Z. Tao, L. Ying, Effects of aestivation on the energy budget of sea cucumber Apostichopus japonicus (Selenka) (Echinodermata: Holothuroidea), Acta Ecologica Sinica, 27 (8), Yunwei Dong, Dong Shuanglin, Meng Xianliang, Effects of thermal and osmotic stress on growth, osmoregulation and Hsp70 in sea cucumber (Apostichopus japonicus Selenka), Aquaculture, 276,