용어의정의 2.1 아조염료 as chromatograph/mass spectrometer 1.0 개요 1.1 목적 1.2 적용범위 간섭물질 내부표준물질 3 4

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묵원 초
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2 용어의정의 2.1 아조염료 as chromatograph/mass spectrometer 1.0 개요 1.1 목적 1.2 적용범위 간섭물질 내부표준물질 3 4

3 3.0 분석기기및기구 3.1 기체크로마토그래피 / 질량분석기 컬럼 μ 운반기체 : ml 마개달린시험관 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 tert-부틸메틸에테르 (tert-butyl methyl ether, 88.15) 운반기체의유속 : 온도 주입량 μ 구연산나트륨완충용액 티오황산나트륨용액 검출기 3.2 초음파장치 3.3 전자저울 3.4 항온수조 3.5 기체크로마토그래프용바이알 % 탄산칼륨용액 정제수 메탄올 (M ) 황산나트륨 (Sodium sulfate, Na 2SO 4, ) 헥산 (Hexane, C 6H 14, 86.06) 5 6

4 4.2 표준용액 6.0 품질보증 / 품질관리 (QA/QC) 아조염료표준원액 (1,000 mg/l) 아조염료표준용액 (100 μg/ml) μ 내부표준물질용액 μ 5.0 시료의채취및관리 5.1 시료의준비 방법검출한계 (MDL, Method Detection Limit) 6.2 방법바탕시료의측정 6.3 검정곡선의작성및검증 정확도관리 내부정도관리주기 7 8

5 분석절차 7.1. 전처리 시료가천인경우 시료가가죽인경우 시료가염료인경우 측정방법 μ 시료분석결과 정성분석 정량분석 내부표준법 [ A s A C s = is -b]c is a 9 10

6 μ 결과의표시 C T (¼g/g) = C s(¼g) ÜÌÉ (g) 9.0 참고자료 μ 결과보고 8.1 분석결과보고 시료채취관련자료 분석방법자료 분석결과자료

7 표 2. 분석대상물질의 선택 질량이온과 머무름 시간 10.0 부록 시료준비 2. 액액 추출 시료무게 측정 4. 질소농축 농축 6. GC/MS 분석 Retention time(min) CAS No MW M1(m/z) M2(m/z) Compound 아닐린(aniline) o-톨루이딘(o-toluidine) 2,6-다이메틸아닐린(2,6-dimethylaniline) o-아니시딘(o-anisidine) p-클로로아닐린(4-chloroaniline) 2-메톡시-5-메틸벤젠아민(p-cresidine) 4-메틸-1,3-벤젠다이아민(2,4-diaminotoluene) 4-메톡시-m-페닐렌다이아민(2,4-diaminoanisole) 2-나프틸아민(2-naphthylamine) 4-아미노다이페닐(4-aminobiphenyl) 4-아미노 아조벤젠(p-aminoazobenzene) 4,4 -옥시비스벤젠아민(p,p -oxydianiline) 벤지딘(benzidine) 4,4 -메틸렌다이아닐린 (p,p -diaminodiphenylmethane) p-다이메틸아미노아조벤젠 (p-(dimethylamino)azobenzene) 2-메틸-4-[(2-메틸페닐)아조]벤젠아민 (o-aminoazotoluene) 4,4 -메틸렌다이-o-톨루이딘 (3,3'-Dimethyl-4,4'-diaminodiphenylmethane) 다이메틸벤지딘(3,3 -dimethylbenzidine) 4,4 -티오다이아닐린(p,p -thiodianiline) 3,3 -다이클로로벤지딘(3,3 -dichlorobenzidine) 3,3 -다이클로로-4,4 -다이아미노다이페닐메탄 (4,4 -methylene bis[2-chloroaniline]) 3,3 - 그림 어린이 용품의 아조염료 함량 분석 절차 2. 3,3-13 다이메톡시벤지딘(3,3 -dimethoxybenzidine) , , , , , , , , , ,

8 μ 15 16

9 as chromatograph/mass spectrometer 용어정의 2.1 아조염료 1.0 개요 1.1 목적 1.2 적용범위 μ μ 1.3 간섭물질 내부표준물질 17 18

10 3.0 분석기기및기구 3.1 기체크로마토그래피 / 질량분석기 컬럼 μ 운반기체 : 운반기체의유속 : 온도 주입량 μ 3.6 회전증발농축기 3.7 질소농축기 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 tert-부틸메틸에테르 (, 88.15) 정제수 검출기 3.2 전자저울 3.3 진탕교반기 (vortex mixer) 3.4 원심분리기 3.5 유리또는폴리프로필렌컬럼 규조토 (Diatomaceous earth) 기체크로마그래피용바이알 % 탄산칼륨용액 4.2 표준용액 아조염료표준원액 (1,000 mg/l) 아조염료표준용액 (100 μg/ml) μ 19 20

11 로 취하여 5 6개의 표준물질을 준비한다 염산(Hydrochloric acid, HCl, 36.46) 특급 이상의 것을 사용한다 내부표준물질 용액 내부표준물질(페난트렌-d10) 원액을 메탄올로 희석하여 10 μg/ml으로 제조하여 기기분석 시 첨가되도록 준비한다. 5.1 시료의 준비 4.3 인공침 용액 약 900 ml 증류수에 칼륨염과 나트륨염을 녹인 다음 칼슘염과 마그네슘염을 첨가한다. 희석된 염산용액(3 M)으로 ph 6.8가 되도록 조정한다. 용액을 1 L 부피플라스크에 옮기고, 증류수로 전체량을 1 L로 한다. 아래로 시약들을 물에 녹여서 용액을 준비한다. 표 2. 인공침 용액의 조성 화합물 염화 마그네슘 염화 칼슘 인산 수소 이칼륨 탄산 칼륨 염화 나트륨 염화 칼륨 5.0 시료의 채취 및 관리 구조식 mmol/l mg/l MgCl CaCl K2HPO K2CO NaCl KCl 섬유, 가죽, 목재, 종이, 점토, 풍선, 자국을 남기는 고체완구, 접착력 있는 모조 문신 시험시료를 확인하고 섬유의 어느 부분이 드러나고 접근가능한지 결정한다. 접근할 수 있는 부 분을 10 cm2 크기로 잘라 적당한 용기에 분리하여 보관한다. 동일 재료 중 다른 색상은 각각 다른 시료로 취급한다. [주 4] 시료의 두께가 1 2 mm 이상일 경우 옆면의 표면적을 측정하고 기록해 둔다. [주 5] 목재시료의 경우 접촉하는 표면만 면적으로 측정한다. 각 시료별 고유번호 또는 시료명 등 정보를 기록하고 상세한 정보는 별도의 기록지에 같이 기록한다 염화칼슘(Calcium chloride, CaCl2, ) 특급 이상의 것을 사용한다 염화마그네슘 (Magnesium chloride, MgCl2, 203.3) 특급 이상의 것을 사용한다. 그림 1. 시료의 준비 탄산칼륨(Potassium carbonate, K2CO3, 138.2) 특급 이상의 것을 사용한다. 6.0 품질보증/품질관리(QA/QC) 염화칼륨(Potassium chloride, KCl, 74.55) 특급 이상의 것을 사용한다 인산칼륨 (Potassium Phosphate, K2HPO4, 228.2) 특급 이상의 것을 사용한다 염화나트륨(Sodium chloride, dihydrate, NaCl, 58.44) 특급 이상의 것을 사용한다 방법검출한계(MDL, Method Detection Limit) 본 분석의 방법검출한계는 아조염료가 함유되어 있지 않은 매질에 아조염료 표준용액을 정량 한계 수준의 농도가 되도록 첨가하여 시료와 동일한 순서로 7회 반복 실험하여 측정값의 표준 편차에 3.14를 곱한 값으로부터 구한다. 6.2 방법바탕시료의 측정 시료군마다 1개의 방법바탕시료를 측정한다. 방법바탕시료는 아조염료가 없는 것으로 확인된 매질을 사용하여 시료와 동일하게 전처리 측정하며 측정값은 방법검출한계 이하 이어야 한다. 22

12 6.3 검정곡선의작성및검증 정확도관리 내부정도관리주기 분석절차 μ 7.2 측정방법 μ 시료분석결과 정성분석 7.1. 전처리

13 8.0 결과보고 정량분석 내부표준법 [ A s A C s = is -b]c is a 분석결과보고 시료채취관련자료 분석방법자료 분석결과자료 결과의표시 C M (¼g/cm² min) = C s(¼g/ml) \ aé (ml) A(cm 2 ) T(min) μ μ 참고자료

14 European Committee For Standardization, EN 71 "Safety of toys" part 11 : Organic chemical compounds Methods of analysis, 부록 시료준비 1. 어린이 용품 노출평가 시험방법 정립연구(Ⅰ), 진탕 교반기 Rapid Qualitative Pyrolysis GC-MS Analysis of Carcinogenic Aromatic Amins from Dyed Textiles 원심분리기 농 축 컬 럼 6. GC/MSD 분석 그림 어린이 용품의 아조염료 전이량 분석 절차

15 표 정도관리 목표값 3. 정도관리 항목 방법검출한계 정량한계 검정곡선의 직선성 바탕시료 정밀도 정도관리 목표 μ 결정계수 이상 정량한계 미만 2 ( g/cm /min) % 표 방향성아민류 분석을 위한 기체크로마토그래프 조건 4. 기기분석 조건 컬럼 운반기체 기체크로마토그래프 주입부 온도 주입방식 승온조건 이온원 온도 연결부 온도 질량분석기 이온화 방식 전자이온화법 선택이온방식 검출기 형식 사중극자형 검출 범위 DB-5ms (30 m 0.25 mm 0.25 그림 아조염료 표준용액의 분석 크로마토그램 3. μm) 표 5. 시료 분석결과보고 양식(예시) 어린이 용품 중 아조염료 분석결과 He( %) at 1.0 ml/min 시료번호 제품명 원산지 제조사 판매사 제조년월 제품 바코드 표시여부 확인기관 마크 신고필증번호 제품 재질 250 splitless 70 (2min) 5 /min 280 (2min) 한국 / / KC (EI) (SIM mode) (quadrapole) I-12-Y 본체 500 m/z < 시료조제사진 부분시료 붙임 분석크로마토그램 각 분석물질별 농도 결과 표 > 분쇄 후

16 as chromatograph/mass spectrometer 용어정의 2.1 아조염료 1.0 개요 1.1 목적 1.2 적용범위 μ μ 1.3 간섭물질 내부표준물질 31 32

17 3.0 분석기기및기구 3.1 기체크로마토그래피 / 질량분석기 컬럼 μ 3.5 회전증발농축기 3.6 질소농축기 운반기체 : 운반기체의유속 : 온도 주입량 μ 검출기 3.2 전자저울 3.3 와류진탕추출기 3.4 유리또는폴리프로필렌컬럼 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 tert-부틸메틸에테르 (tert-butyl methyl ether, 88.15) 정제수 규조토 (Diatomaceous earth) 기체크로마그래피용바이알 4.2 표준용액 아조염료표준원액 (1,000 mg/l) 아조염료표준용액 (100 μg/ml) μ 33 34

18 내부표준물질(페난트렌-d10) 원액을 메탄올로 희석하여 10 μg/ml으로 제조하여 기기분석 시 첨가되도록 준비한다. 각각 다른 시료로 취급한다. [주 4] 시료의 두께가 1 2 mm 이상일 경우 옆면의 표면적을 측정하고 기록해 둔다. [주 5] 목재시료의 경우 접촉하는 표면만 면적으로 측정한다. 4.3 인공땀 용액 (Artificial sweat solution) 수용성 액체 내부표준물질 용액 약 900 ml의 증류수에 요소 1±0.01 g, 염화나트륨 5±0.01 g, 젖산 940±20 μl를 녹인다. 희석 된 암모니아 용액(1 %)으로 ph 6.5±0.10이 되도록 조정한다. 용액을 1 L 부피플라스크에 옮기 고, 증류수로 전체량을 1 L로 하여 최종 인공땀 용액의 조성이 표 2.와 같이 되도록 조제한다. 표 2. 인공땀 용액의 조성 물 질 요소(urea) 염화나트륨(NaCl) 젖산(lactic acid) 시험시료에서 수용성 액체중 일정 양을 취한다. 채취한 시료는 전체 액체에 대해 대표성을 지 녀야하며 색깔이 다른 액체는 각각 다른 시료로 취급한다. 조 성 0.1 % 0.5 % 0.1 % 그림 1. 전이량 시료의 준비 요소(Urea, CH4N2O, 60.06) 특급 이상의 것을 사용한다. 6.0 품질보증/품질관리(QA/QC) 염화나트륨(Sodium chloride, dihydrate, NaCl, 58.44) 특급 이상의 것을 사용한다 젖산(Lactic acid, C3H6O3, 90.08) 특급 이상의 것을 사용한다. 6.1 방법검출한계(MDL, Method Detection Limit) 본 분석의 방법검출한계는 아조염료가 함유되어 있지 않은 매질에 아조염료 표준용액을 정량 한계 수준의 농도가 되도록 첨가하여 시료와 동일한 순서로 7회 반복 실험하여 측정값의 표준 편차에 3.14를 곱한 값으로부터 구한다. 6.2 방법바탕시료의 측정 시료군마다 1개의 방법바탕시료를 측정한다. 방법바탕시료는 아조염료가 없는 것으로 확인된 매질을 사용하여 시료와 동일하게 전처리 측정하며 측정값은 방법검출한계 이하 이어야 한다 암모니아 용액(Ammonia, NH3, 17.03) 특급 이상의 것을 사용한다. 5.0 시료의 채취 및 관리 6.3 검정곡선의 작성 및 검증 5.1 시료의 준비 검정곡선의 작성 및 검증은 정량범위 내의 5개 이상 농도에 대해 검정곡선을 작성하고, 얻어진 검정곡선의 결정계수(R2)가 0.98 이상 또는 감응계수(RF)의 상대표준편차가 15 % 이내 이어야 하며 결정계수나 상대표준편차가 허용범위를 벗어나면 재작성하도록 한다 시료의 준비 섬유, 가죽, 목재, 종이, 점토, 풍선, 자국을 남기는 고체완구, 접착력 있는 모조 문신 시험시료를 확인하고 섬유의 어느 부분이 드러나고 접근가능한지 결정한다. 접근할 수 있는 부 분을 10cm2 이상 크기로 잘라 적당한 용기에 분리하여 보관한다. 동일 재료 중 다른 색상은 35 검정곡선의 감응계수의 검증은 검정곡선의 중간 농도값을 갖는 표준용액의 농도를 측 정한다. 측정된 농도값과 표준용액의 농도값 간의 차이가 15 % 이내에서 일치하여야 한다. 만

19 6.4 정확도관리 내부정도관리주기 측정방법 분석절차 7.1. 전처리 μ 시료분석결과 정성분석 정량분석 내부표준법

20 [ A s A C s = is -b]c is a 분석결과자료 결과의표시 C M (¼g/cm² min) = C s(¼g/ml) \ aé (ml) A(cm 2 ) T(min) μ 결과보고 μ 참고자료 분석결과보고 시료채취관련자료 분석방법자료

21 표 아조염료 분석을 위한 기체크로마토그래프 조건 10. 부록 시료준비 2. 와류진탕 추출 기기분석 조건 컬럼 운반기체 기체크로마토그래프 주입부 온도 주입방식 승온조건 이온원 온도 연결부 온도 질량분석기 이온화 방식 전자이온화법 선택이온방식 검출기 형식 사중극자형 검출 범위 DB-5ms (30 m 0.25 mm 0.25 μm) He( %) at 1.0 ml/min 250 splitless ml vial 4. GC/MS 분석 (2min) 5 /min 280 (2min) (EI) (SIM mode) (quadrapole) m/z 그림 2. 아조염료의 전이량 분석 흐름도 표 정도관리 목표값 3. 정도관리 항목 방법검출한계 정량한계 검정곡선의 직선성 바탕시료 정밀도 정도관리 목표 μ 결정계수 이상 정량한계 미만 2 ( g/cm /min) % 그림 아조염료 표준용액의 분석 크로마토그램

22 표 5. 시료 분석결과보고 양식(예시) [ 11-I-12-Y 한국 / (Determination of colorants content in toys and childcare articales - Liquide chromatograph/diode array detector) / KC 본체 2] 어린이 용품 함유 착색제 함량 시험방법 액체크로마토그래피 어린이 용품 중 아조염료 분석결과 시료번호 제품명 원산지 제조사 판매사 제조년월 제품 바코드 표시여부 확인기관 마크 신고필증번호 제품 재질 별표 1.0 개요 시료조제사진 부분시료 1.1 목적 분쇄 후 이 시험방법은 어린이 용품에 함유되어 있는 착색제를 측정하기 위한 방법으로 초음파 추출기 를 이용하여 에탄올로 시료를 추출한 후 액체크로마토그래프/다이오드어레이검출기(Liquide chromatograph/diode array detector, LC/DAD)로 정성 및 정량하는 방법이다. 1.2 적용범위 < 이 시험 방법은 어린이 용품에 함유되어 있는 표 1에 나타나있는 착색제 5종을 측정하 는 액체크로마토그래프/다이오드어레이검출기이다 붙임 분석크로마토그램 각 분석물질별 농도 결과 > 각 착색제의 분석방법 검출한계는 3 mg/kg 이하의 값을 만족해야 한다 이 시험 방법에 따라 시험할 경우 정량한계는 9 mg/kg 이하의 값을 만족해야 한다. 1.3 간섭물질 분석결과에 오류를 가져올 수 있는 주요 오염원으로는 용매, 시약, 유리 기구 및 그 외 분석과정 중에 사용하는 모든 기구 등이다. 이들은 크로마토그램 상의 바탕선을 상승시키는 등 시료분석 과정에 영향을 줄 수 있으며, 분석자료의 질을 저하시킬 수 있다. 따라서 모든 시약 은 순도 및 불순물의 종류와 함량을 고려하여 엄선하고 필요한 경우 용매나 시약은 증류 및 정제하여 사용한다. 각 실험실에서는 오염원으로 인한 영향 유무나 수준에 대해 정제수 바탕시 료(Reagent blank)의 측정을 통한 평가가 필요하다 시약이나 용매는 특급 이상의 것을 사용하고, 필요한 경우 증류나 정제 과정을 통해 불 순물의 방해로 인한 문제를 최소화하도록 한다

23 2.0 용어의정의 2.1 착색제 3.3 전자저울 3.4 실린지필터 μ 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 에탄올 (Ethanol, C 2H 5OH, 46.07) 3.0 분석기기및기구 정제수 3.1 액체크로마토그래피 / 다이오드어레이검출기 4.2 표준용액 컬럼 μ 착색제표준원액 (1,000 mg/l) 이동상 이동상의유속 : 온도 주입량 μ 착색제표준용액 (100 mg/l) 5.0 시료의채취및관리 5.1 시료의준비 검출기 3.2 초음파장치 섬유, 가죽, 종이, 점토, 풍선, 자국을남기는고체완구, 접착력있는모조문신 45 46

24 5.1.2 목재 수용성액체 정확도관리 내부정도관리주기 6.0 품질보증 / 품질관리 (QA/QC) 6.1 방법검출한계 (MDL, Method Detection Limit) 6.2 방법바탕시료의측정 6.3 검정곡선의작성및검증 분석절차 7.1. 전처리

25 측정방법 μ 7.3 시료분석결과 정성분석 결과보고 분석결과보고 정량분석 절대검량선법 시료채취관련자료 분석방법자료 분석결과자료 결과의표시

26 10.0 부록 9.0 참고자료 9.1 지식경제부 기술표준원, 자율안전확인기준 부속서 36 완구, 시료준비 2. 시료무게 측정 European Committee For Standardization, EN 71 "Safety of toys" part 11 : Organic chemical compounds Methods of analysis, KS K 0736, 섬유제품의 알러지성 염료 함유량 시험방법, 2007 Danish EPA, Survey, migration and health evaluation of chemical substances in toys and childcare products produced from foam plastic, 초음파 추출 여과 농축 6. HPLC/DAD 분석 그림 어린이 용품의 착색제 함량 분석 절차

27 μ μ 53 54

28 1.0 개요 1.1 목적 chromatograph/diode array detector 1.2 적용범위 용어의정의 2.1 착색제 3.0 분석기기및기구 μ μ 1.3 간섭물질 액체크로마토그래피 / 발광다이오드어레이검출기 컬럼 μ 이동상 이동상의유속 온도 주입량 μ 검출기 3.2 전자저울 55 56

29 3.3 와류진탕추출기 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 정제수 4.2 표준용액 착색제표준원액 (1,000 mg/l) 착색제표준용액 μ 4.3 인공침용액 염화칼슘 (Calcium chloride, CaCl 2, ) 염화마그네슘 (Magnesium chloride, MgCl 2, 203.3) 탄산칼륨 (Potassium carbonate, K 2CO 3, 138.2) 염화칼륨 (Potassium chloride, KCl, 74.55) 인산칼륨 (Potassium Phosphate, K 2HPO 4, 228.2) 염화나트륨 (Sodium chloride, dihydrate, NaCl, 58.44) 염산 (Hydrochloric acid, HCl, 36.46) 5.0 시료의채취및관리 5.1 시료의준비 섬유, 가죽, 목재, 종이, 점토, 풍선, 자국을남기는고체완구, 접착력있는모조문신

30 6.5 내부정도관리 주기 방법검출한계, 정량한계, 정확도는 연 1회 이상 산정하는 것을 원칙으로 하며, 분석자의 교체, 분석 장비의 수리 및 이동 등의 주요 변동사항이 생길 경우에는 다시 실시한다. 단, 장비 의 청소 및 측정 장비의 감도가 의심될 때에는 언제든지 측정하여 확인하여야 한다 그림 1. 입에 넣고 빠는 행위 전이량 시료의 준비 6.0 품질보증/품질관리(QA/QC) 검정곡선 검증은 각 시료군마다 실시하며, 고농도의 시료 다음에는 방법바탕시료를 측정 하여 오염여부를 점검한다 분석절차 6.1 방법검출한계(MDL, Method Detection Limit) 본 분석의 방법검출한계는 착색제가 함유되어 있지 않은 매질에 착색제 표준용액을 정량한계 수준의 농도가 되도록 첨가하여 시료와 동일한 순서로 7회 반복 실험하여 측정값의 표준편차 에 3.14를 곱한 값으로부터 구한다. 6.2 방법바탕시료의 측정 시료군마다 1개의 방법바탕시료를 측정한다. 방법바탕시료는 착색제가 없는 것으로 확인된 매 질을 사용하여 시료와 동일하게 전처리 측정하며 측정값은 방법검출한계 이하 이어야 한다. 6.3 검정곡선의 작성 및 검증 검정곡선의 작성 및 검증은 정량범위 내의 5개 이상 농도에 대해 검정곡선을 작성하고, 얻어진 검정곡선의 결정계수(R2)가 0.98 이상 또는 감응계수(RF)의 상대표준편차가 15 % 이내 이어야 하며 결정계수나 상대표준편차가 허용범위를 벗어나면 재작성하도록 한다 검정곡선의 감응계수의 검증은 검정곡선의 중간 농도값을 갖는 표준용액의 농도를 측 정한다. 측정된 농도값과 표준용액의 농도값 간의 차이가 15 % 이내에서 일치하여야 한다. 만 약 이 범위를 넘는 경우, 검정곡선을 재작성한다 정확도 관리 미리 잘라둔 시료 10 cm2를 100 ml 인공침 용액이 담긴 250 ml 유리병에 옮겨 담는 다. [주 5] 인공침 용액은 사용하기 전 37 온도로 유지되어야 한다. 와류진탕추출기(Head over heel rotator)안에 유리병을 넣고 고정한 뒤 37, 60 rpm, 4 시간의 조건으로 추출한다. 추출이 끝나면 시편은 핀셋을 사용하여 시료용기에서 제거하고 인 공땀 추출액을 2 ml 바이알에 담아 시험용액으로 한다 측정 방법 시험 용액 5 50 μl를 액체크로마토그래피에 주입한다. 따로 착색제 표준용액에 대하여 동일 조건에서 액체크로마토그래피로 측정한다. 표준물질의 피크 면적으로부터 검정곡선을 작성하여 절대검량선법으로 정량한다. 7.3 시료분석결과 정성분석 유사한 매질의 인증표준물질 (CRM, Certified Reference Material) 또는 이에 상당하는 표준물질을 사용하여 시료와 동일한 방법으로 전처리 및 분석하여, 4회 이상 반복한 평균 회수 율이 인증값 범위 또는 % 내에 있어야 한다 전처리 모든 시험에서 바탕시험을 실시하여 시료 측정결과를 보정해 주어야 한다. 59 각 분석물질 별 두 개의 선택 이온이 정해진 머무름 시간에서 나타나야 한다. 각 분석물질들을 검출하기 위해서 크로마토그램 피크에 대한 신호 대 잡신호 비(S/N, signal/noise)는 2.5보다 커야한다 정량분석 60

31 절대검정곡선법 분석결과자료 C M (¼g/cm² min) = C s(¼g/ml) \ aé (ml) A(cm 2 ) T(min) μ 결과보고 결과의표시 μ 참고자료 분석결과보고 시료채취관련자료 분석방법자료 61 62

32 표 착색제 분석을 위한 액체크로마토그래프 조건 10.0 부록 시료준비 2. 와류진탕 추출 기기분석 조건 컬럼 Xterra MS C18(3.5 μm, mm) A : acetonitrile, B : 20mM acetic acid(ph 6.5) 이동상 B(%) = 70%(0 min), 70%(2.5 min), 0%(15min), gradient mode 3. 2ml vial 4. HPLC/DAD 분석 액체크로마토그래프 유량 오븐 온도 주입량 선택 파장 0.3 ml/min μl Basic violet : 600nm, Acid violet 49 : 600nm, Disperse orange 3 : 440nm, Disperse yellow 3 : 360nm 그림 어린이 용품의 착색제 전이량 분석 절차 2. 표 정도관리 목표값 3. 정도관리 항목 방법검출한계 정량한계 검정곡선의 직선성 바탕시료 정밀도 정도관리 목표 μ μ μ 결정계수 이상 정량한계 미만 2 ( g/cm /min) 2 g/cm /min 2 g/cm /min % 63 그림 착색제 표준용액의 분석 크로마토그램 3. 64

33 표 5. 시료 분석결과보고 양식(예시) 어린이 용품 함유 착색제 전이량 시험방법 경피노출 액체크로마토그래피 어린이 용품 중 착색제 분석결과 시료번호 제품명 원산지 제조사 판매사 제조년월 제품 바코드 표시여부 확인기관 마크 신고필증번호 제품 재질 11-I-12-Y 한국 / 2012 ) - (Determination of release of colorants in sweat simulant from toys and childcare articles - Liquide chromatograph/diode array detector) / KC 본체 ( 1.0 개요 시료조제사진 부분시료 1.1 목적 분쇄 후 이 시험방법은 어린이 용품에 함유되어 있는 착색제가 노출경로 중 경피노출에 의해 전이되는 농도를 측정하기 위한 방법이다. 경피노출에 의한 전이는 착색제를 와류진탕추출기(Head over heel rotator)를 이용하여 인공침으로 시료를 추출한 후 액체크로마토그래피/다이오드어레이 (HPLC/DAD)로 정성, 정량하는 방법이다. 1.2 적용범위 < 이 시험 방법은 어린이 용품에 함유되어 있는 표 1에 나타나있는 착색제 5종을 측정하 는 액체크로마토그래프/다이오드어레이검출기법이다. 붙임 분석크로마토그램 각 분석물질별 농도 결과 표 > 각 착색제의 분석방법 검출한계는 μg/cm2/min 이하의 값을 만족해야 한다 이 시험 방법에 따라 시험할 경우 정량한계는 μg/cm2/min 이하의 값을 만족해야 한다. 1.3 간섭물질 분석결과에 오류를 가져올 수 있는 주요 오염원으로는 용매, 시약, 유리 기구 및 그 외 분석과정 중에 사용하는 모든 기구 등이다. 이들은 크로마토그램 상의 바탕선을 상승시키는 등 시료분석 과정에 영향을 줄 수 있으며, 분석자료의 질을 저하시킬 수 있다. 따라서 모든 시약 은 순도 및 불순물의 종류와 함량을 고려하여 엄선하고 필요한 경우 용매나 시약은 증류 및 정제하여 사용한다. 각 실험실에서는 오염원으로 인한 영향 유무나 수준에 대해 정제수 바탕시 료(Reagent blank)의 측정을 통한 평가가 필요하다 시약이나 용매는 특급 이상의 것을 사용하고, 필요한 경우 증류나 정제 과정을 통해 불 순물의 방해로 인한 문제를 최소화하도록 한다

34 2.0 용어의정의 2.1 착색제 3.3 와류진탕추출기 4.0 시약및표준용액 4.1 시약 정제수 4.2 표준용액 3.0 분석기기및기구 3.1 액체크로마토그래피 / 발광다이오드어레이검출기 착색제표준원액 (1,000 mg/l) 컬럼 μ 착색제표준용액 μ 이동상 이동상의유속 : 온도 주입량 μ 검출기 4.3 인공땀용액 (Artificial sweat solution) μ 3.2 전자저울 요소 (Urea, CH 4N 2O, 60.06) 67 68

35 4.3.2 염화나트륨(Sodium chloride, dihydrate, NaCl, 58.44) 특급 이상의 것을 사용한다. 6.0 품질보증/품질관리(QA/QC) 6.1 방법검출한계(MDL, Method Detection Limit) 본 분석의 방법검출한계는 착색제가 함유되어 있지 않은 매질에 착색제 표준용액을 정량한계 수준의 농도가 되도록 첨가하여 시료와 동일한 순서로 7회 반복 실험하여 측정값의 표준편차 에 3.14를 곱한 값으로부터 구한다 젖산(Lactic acid, C3H6O3, 90.08) 특급 이상의 것을 사용한다 암모니아 용액(Ammonia, NH3, 17.03) 특급 이상의 것을 사용한다. 6.2 방법바탕시료의 측정 시료군마다 1개의 방법바탕시료를 측정한다. 방법바탕시료는 착색제가 없는 것으로 확인된 매 질을 사용하여 시료와 동일하게 전처리 측정하며 측정값은 방법검출한계 이하 이어야 한다. 5.0 시료의 채취 및 관리 5.1 시료의 준비 6.3 검정곡선의 작성 및 검증 5.1 시료의 준비 검정곡선의 작성 및 검증은 정량범위 내의 5개 이상 농도에 대해 검정곡선을 작성하고, 얻어진 검정곡선의 결정계수(R2)가 0.98 이상 또는 감응계수(RF)의 상대표준편차가 15 % 이내 이어야 하며 결정계수나 상대표준편차가 허용범위를 벗어나면 재작성하도록 한다 섬유, 가죽, 목재, 종이, 점토, 풍선, 자국을 남기는 고체완구, 접착력 있는 모조 문신 시험시료를 확인하고 섬유의 어느 부분이 드러나고 접근가능한지 결정한다. 접근할 수 있는 부 분을 10 cm2 이상 크기로 잘라 적당한 용기에 분리하여 보관한다. 동일 재료 중 다른 색상은 각각 다른 시료로 취급한다. [주 3] 시료의 두께가 1 2 mm 이상일 경우 옆면의 표면적을 측정하고 기록해 둔다. [주 4] 목재시료의 경우 접촉하는 표면만 면적으로 측정한다. 검정곡선의 감응계수의 검증은 검정곡선의 중간 농도값을 갖는 표준용액의 농도를 측 정한다. 측정된 농도값과 표준용액의 농도값 간의 차이가 15 % 이내에서 일치하여야 한다. 만 약 이 범위를 넘는 경우, 검정곡선을 재작성한다 정확도 관리 수용성 액체 시험시료에서 수용성 액체중 일정 양을 취한다. 채취한 시료는 전체 액체에 대해 대표성을 지 녀야하며 색깔이 다른 액체는 각각 다른 시료로 취급한다. 각 시료별 고유번호 또는 시료명 등 정보를 기록하고 상세한 정보는 별도의 기록지에 같이 기록한다 유사한 매질의 인증표준물질 (CRM, Certified Reference Material) 또는 이에 상당하는 표준물질을 사용하여 시료와 동일한 방법으로 전처리 및 분석하여, 4회 이상 반복한 평균 회수 율이 인증값 범위 또는 % 내에 있어야 한다 모든 시험에서 바탕시험을 실시하여 시료 측정결과를 보정해 주어야 한다. 6.5 내부정도관리 주기 방법검출한계, 정량한계, 정확도는 연 1회 이상 산정하는 것을 원칙으로 하며, 분석자의 교체, 분석 장비의 수리 및 이동 등의 주요 변동사항이 생길 경우에는 다시 실시한다. 단, 장비 의 청소 및 측정 장비의 감도가 의심될 때에는 언제든지 측정하여 확인하여야 한다 그림 경피 전이량 시료의 준비

36 분석절차 7.1. 전처리 측정방법 μ 7.3 시료분석결과 정성분석 C M (¼g/cm² min) = C s(¼g/ml) \ aé (ml) A(cm 2 ) T(min) μ 결과보고 정량분석 절대검정곡선법 분석결과보고 시료채취관련자료 분석방법자료 분석결과자료

37 방법검출한계, 방법정량한계 및 산출근거를 보고한다 분석결과 농도를 보고한다 부록 1. 시료준비 2. 와류진탕 추출 8.2 결과의 표시 농도 측정 결과는 μg/cm2/min으로 표기하며 유효숫자 넷째자리까지 구하고 반올림하여, 결과는 셋째자리로 표시한다 모든 농도결과는 방법검출한계를 적용하여 나타내고 방법검출한계 미만은 불검출로 표 시하며 방법검출한계값을 같이 제시한다 ml vial 4. HPLC/DAD 분석 9.0 참고자료 9.1 지식경제부 기술표준원, 자율안전확인기준 부속서 36 완구, 2007 European Committee For Standardization, EN 71 "Safety of toys" part 10 : Organic chemical compounds Sample preparation and extraction, European Committee For Standardization, EN 71 "Safety of toys" part 11 : Organic chemical compounds Methods of analysis, 2005 그림 어린이 용품의 착색제 전이량 분석 절차 RIVM report , Children's Toy Fact Sheet, 2002 Danish EPA, Survey, migration and health evaluation of chemical substances in toys and childcare products produced from foam plastic, 표 정도관리 목표값 3. 정도관리 항목 방법검출한계 정량한계 검정곡선의 직선성 바탕시료 정밀도 정도관리 목표 μ μ μ 결정계수 이상 정량한계 미만 2 ( g/cm /min) 2 g/cm /min 2 g/cm /min % 74

38 표 착색제 분석을 위한 액체크로마토그래프 조건 표 5. 시료 분석결과보고 양식(예시) 4. 기기분석 조건 컬럼 Xterra MS C18(3.5 μm, 어린이 용품 중 착색제 분석결과 시료번호 제품명 원산지 제조사 판매사 제조년월 제품 바코드 표시여부 확인기관 마크 신고필증번호 제품 재질 mm) A : acetonitrile, B : 20mM acetic acid(ph 6.5) 이동상 B(%) = 70%(0 min), 70%(2.5 min), 0%(15min), 0.3 ml/min 한국 / gradient mode 액체크로마토그래프 유량 오븐 온도 주입량 선택 파장 11-I-12-Y / KC μl Basic violet : 600nm, Acid violet 49 : 600nm, 본체 Disperse orange 3 : 440nm, Disperse yellow 3 : 360nm < 시료조제사진 부분시료 붙임 분석크로마토그램 각 분석물질별 농도 결과 표 > 그림 착색제 표준용액의 분석 크로마토그램 분쇄 후

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- 1 - - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - 장비구성 : - 5 - - 6 - 치 - 7 - μ - 8 - - 9 - 고체흡착관의안정화방법및기기 (Tube conditioner) - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - 전기냉각저온농축장치 (TD) GC/FPD - 18 - GC/FID Headspace