사상체질의학회지

사상체질학회지 J o f S a s a n g C o n s t M e d V a l 1 5 N o 2 2 0 0 3 太陰 A 헤! 心풀子홉의抗 a l l e r g y 作用에對 훌톨융的 i f 뿔 박승천 l A b s t r a c t I E f f e c t s o f C h e o n g S i m Y e o n J a T a n g ( C S Y J T ) o n C o n t r o l o f I m m u n e - f u n c t i o n i n h i g h l y p u r i f i e d m o u s e B c e l l s a n d M a s t c e l l P a r k S e u n g C h a n * D e p t o f O r i e n t a l M e d i c i n e G r a d u a t e S c h o o l, T a e j o n U n i v e r s i t y I n o r d e r t o e v a l u a t e t h e a n t i a l l e r g i c e f f e e t s o f C : S Y J T, s t u d i e s w e r e d o n e W e m e a s u r e d t h e C Y W t a 잉 C a c t i v i t y f a r c y t o k i n e s t r a n s c r i p t e x p r e s s i o n, p r o d u c t i o n o f I L - 4, I g E, I F N - Y, p r o l i f e r a t i o n o f B c e l l i n H R F p l u s a n t i - C D 4 0 m A b p l u s r I L - 4 s t i m u l a t e d m u r i n e s p l e n i c B c e l l s a n d c y w k i n e s t r a n s c r i p t e x p r e s s i o n o f I g E i n M a s t c e l l 까 I e r e s u l t s w e r e o b t a i n e d a s f o l l o w s : 1 α Y J T d e e r 없, s e d t h e e x p r e s s i o n o f I L - 4 i n m a s t c e l l s i g n i f i c a n t l y 2 C S Y J T d e c r 얹 s e d t h e p r o d u C t i o n o f I L - 4 s i g n i f i c a n t l y 3 C : S Y J T d e c r e a s e d t h e e x p r e s s i o n O f I g E i n m a s t c e l l s i g n i f i c a n t l y 4 α Y J T d e c r e a s e d t h e p r o d u C t i o n o f I g E s i g n i f i c a n t l y 5 C S Y J T i n c r e a s e d t h e a p p e a r a n c e o f I F N - Y T h e f a 다 s a b o v e p r o v e t h a t α, Y J T i s e f f e C t i v e a g a i n s t t h e a l l e r g y T h u s, I t h i n k t h a t w e s h o u l d s t u d y o n t h i s c o n t i n u o u s l y I 績論 A l l e r g y 반응은무해한항원 즉 a l l e r g e n 에반응하여생성된 I m m u n o g l o b u l i n E ( 이하 I g E ) 항체를지닌개인이계속하여동일 a l l e r g e n 에노출되었을때일어나는것으로최근에는 여러다양하고무해한항왼에 대한연역계의반응으로발생하는질병 과같 대전대학교한의학과사상체질의학과학전공교신저자 : 박숭찬주소 ) 대전시동구판암동 6 7 8-2 8 박숭찬한의원천화 ) 여 2 ) 2 8 4-8 4 7 8 E - m 밍 J : i I 0 7 5 @ k o r e a c o m 1 6 6 -

- 太陰 A i 빼心훌子훌의抗 a l l e r g y 作用에휩힌 I 앓的 - 이보다제한된의미로정의되고있다 U I g E 매개 m a s t c e l l 활성화후일어나는 염증반응은 h i s t a m i n e p r o s t a g l a n d i n 등 의매개물질의활성에의해서일어나는데, 이 들매개물질들은혈관투과성을증가시키고 평활근을수축시킨다 또한활성화된 m a s t c e l l O ] l e u k o t r i e n e c h e m o k i n e 그리고 c y t o k i n e 동의매개물질을합성하고분비하 여호산구와 T h 2 ( T h e l p e r 2 ) c e l l 을포함한백혈구를염증장소로집합시킨다 이러한 과정을거쳐평활근수축, 지속적인부종 그 리고 a l l e r g y 천식의주요한증상중의하나 인 h i s t a m i n e 과같은비특이적기관지수축물질에대한기관지과민반응이발생한다 2 ) 過敏免授反應을말하는 a l l e r g y 에 대해서는 素問» 3 ) 四時刺遊從論 에 少陰有餘皮햄隱 형» 4 ) < t 짧病源候論 에 深有毒 A 有훌性없 毒 - 但見 r쫓便中其毒亦有性者耐者終日燒者境不 f 씌홈也하여皮 I협의過敏反應에對한言 及이있었다 며象醫學에서의흉病治했홀에대한觀點은 體質에따른職 R 府의相효關係를正常化하고 均衝을회복하는것이곧 A 댐 l 의抗病力을제 공하는根幹이된다고하여주로技正의方法을사용하여홍病을治標하고있다 5 ) 6 ) 淸心運子場은元의 東醫四象新編 에 治虛勞쫓뺀無度題痛 t 世 i 寫줌卷中風 食휴 8 힘 題痛 이라고主治證이처음으로記述된후많 은醫홉 7-1 0 ) 에서淸心運子場을太陰 A 의虛 勞와中風 心緣흉惠, 神經性흉惠, a l l e r g y 性算꽃동에활용됨을설명하고있다 이에 1 U 관련한鼎究로는朴의臨많的鼎究 洪등 1 2 ) 의抗스트레스效果에관한實顧긴돼究, 金퉁 1 3 ) 의免授反應과抗알러지效果에관한實顧성鼎究등이있었으나 抗 a l l e r g y 效果 의分子免흉學的인機轉에대한 R 究報告는접하지못하였다 이에저자는淸 ' L 鐘子場의抗 a l l e r g y 作用 에대한效能을實驗的으로쐐明하고자 생쥐 비장 B 세포에서 i n t e r l e u k i n - 4 ( 이하 I L - 4 ), i n t e r f e r o n - Y ( 이하 I F N - Y ) 의유전자발현그 리고정량적으로 I L - 4, I F N - Y, I g E 생성에 미치는효과및생쥐복강 m a s t c e l l 에서 I g E 의유전자발현등을측정한바, 유의한결과를얻었기에보고하는바이다 1 材料 1 ) 動物 l l 材합및方法 실험동물은 1 8-2 0 g 의 B A L B I c 생쥐를한국 화학연구소에서공급받아고형사료 ( 조단백질 2 2 1 % 이상 조지방 8 0 % 이하 조섬유 5 0 % 이하 조회분 8 0 % 이하, 칼숨 0 6 % 이 상 인 0 4 % 이상 삼양사 C o K o r e a ) 와 정제수를충분히공급하고 2 주일간실험실환 경 ( 온도 2 3 土 2 ' C, 상대습도 5 0 : t 1 0 %, 조명시 간 1 2 시간 ( 0 7 : 0 0-1 9 : 0 0 ), 조도 1 5 0-3 0 0 L u x ) 에적웅시킨후실험에사용하였다 2 ) 藥材 본실험에사용한약제는 東醫옳世保元 1 4 ) 에수록된淸, C, 運子場으로대전대학교부속 한방병원에서구입한것을정선하여사용하였으며처방내용과 1 첩의용량은다음과같다 P r e s c 끼 p t i o n o f α l e o n 횡 i m Y u r 니 a 돼 n g ( C S Y J T ) 빼成뺏物生쫓名用삶 ( g ) 훨子肉 Mι t m b i 짜 I S e m m 8 0 山藥 D i, ω ' < r J r r 4 l R h i z q m a 8 0 天門 A J p a r 쩡 & 찌 x 4 0 찢 r ' μ r i o p i s T u h t r 4 0 i 효흔 P 얘 I g a l a t & 짜 x 4 0 石흠짧 A r o r i G r 쩌 y μ ; R h i z q m a 4 0 앓껏 t : Z i z 써 ' i S p i 1 l O W l S t m m 4 0 龍眼肉 μ1 I g m 짜 A r i l L ω 4 0 혐 { 二 B i o l a l S e m m 4 0 월쪽 S a l t 뻐 i 4 l R A d i x 4 0 홈 1 - & 째찌 S t m m 4 0 t t 행花 α r y J t l 1 / l h e m i F I t n 2 0 Tα a l A m o u n t O 1 6 7 -

- 사상채질의획회지재 1 5 권제 2 효 2 0 0 3-3 ) 試料製造 상기한 C S Y J T 2 첩분량을각각 3 0 0 0 뼈 r o u n d f l a s k 에증류수 2 0 0 0 뼈와함께넣은다음냉각기를부착시키고 2 시간동안가열하 여여과한여액을 r o t a r y v a c c u m e v a p o r a t o r C B t i c h i B - 4 6 1, S w i t z e r l a n d ) 에서감압 농축하고 - 8 4 C d e e p f r e e z e r ( S a n y o, J a p a n ) 에서 2 4 시간동안방치한후 f r e e z e d r y e r { E y e l a J a p a n ) 로 1 2 시간을동결건조하 여 1 4 5 g 의분말을얻어 검액으로제조하여사용하였다 실험시에는증류수에용해시켜 s y r i n g e f i l t e r C O 2 2 μ m F a l c o n ) 로여과하여사용하였다 4 ) 試藥및機器 시약은 R P M I 1 6 4 0 f e t a l b o v i n e s e r u m ( F B S ) d u l b e c c o s p h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e ( O P B S - A ) 1 따 r u m u m e s s e n t i a l m e d i u m ( M E M ) s o d i u m d o d e c y l s u l f a t e ( S D S ) t r y p s i n E D T A p h o r b o l m y r i s t a t e a c e t a t e ( P M A ), A 2 3 1 8 7 r e d b l o o d c e l l l y s i s b u f f e r p e n i c i l l i n - s t r e p t o m y c i n, s o d i u m h y d r o x i d e, a c e t i c a c i d t r y p a n b l u e p h e n o l r e d, s o d i u m a z i d e 및 i s o p r o p a n o l 퉁은 S i g m a 제품 e t h a n o l H C l 은 M e r c k 제품 s o d i u m b i c a r b o n a t e 는 G i b c o 제풍을사용하였다 R N A z o l B 는 T e l - T e s t λ } 제품을 T a q p o l y r r ε r a s e 와 I R o x y n u c l e o t i d e t r i p h o s p h a t e ( d N T P ) 는 T a k a r a ( J a p a n ) 사제품을 역전 사효소 ( M o l o e y M u r i n e L e u k e m i a V i r u s R e v e r s e T r a n s c r i p t a s e : M - M L V R T ) 와 R N a s e i n h i b i t o r 는 p r o m e g a 사제풍을 그리고 a g a r o s e 는 F M C 사제품을사용하였으며 유세포분석에사용된 a n t i b o d y 는 p h a r r n i n g e n ( U S A ) 사의제품을사용하였다 기기는 C 0 2 i n c u b a t o r { v i s i o n s c i e n t i f i c C o M o d e l V S - 9 1 0 8 M S ) c l e a n b e n c h ( v i s i o n s c i e n t i f i cα K M C - l 4 0 0 D c e n t r i f u g e ( B e c k r n 킹 1 C o, G S - 6 R ), i n v e r t e d m i c r o s c o p e ( N i k o n C o J a p a n ), b r i g h t m i c r o s c o p e ( U F X - D X N i k o n ) i m a g e r s y s t e m ( K o d a k U S A ) m i c r o c e n t r i f u g e ( 한일과학 ), U V - V i s s p e c t r o - p h o t o m e t e r ( S h i m a z u e J a p a n ) T u r b o T h e r r n l c y c l e t I M C B i o n e e r C o, K o r e a ) E L I S A - r e a d e r ( E m a x U S A ) F A C S c 킹 1 ( B e c t o n d i c k i n s o n, U S A ), r o t a r y v a c c u m e v a p o r a t o r ( B t i c h i 4 6 1 ) a u t o c l a v e ( H i r a y a m a, J a p a n ), m i c r o - p i p e t ( G i l s o n, U S A ), t i t e r p l a t e s h a k e r C l a b l i n e I n s t U S A ), a u t o c l a v e ( H i r a y a m a J a p a n ) c u l t u r e f l a s k ( F a l c o n 3 0 2 4 ) m u l t i w e l l p l a t e ( 9 6 - w e l l F a l c o n ), c o n i c a l t u b e d i s p o s a b l e p i p e t ( 5 m e 1 0 m e, 2 5 m e F a l c o n ) 및 s y r i n g e f i l t e r ( 0 2 2 μ m, F a l c o n ) 등을使用하였다 2 方法 1 ) 세포의배양 R a t l e u k e m i a c e l l l i n e R B L - 2 H 3 세포 를한국세포주은행으로부터분양받아 M E M ( M i n i u m E s s e n t i a l M e d i u m ) 에 2 2 g / L s o d i u m b i c a r b o n a t e 1 0 % F e t a l b o v i n e s e r u m ( F B S ) 그리고 A n t i b i o t i c - A n t i m y c o t i c ( G i b c o B R L, 1 5 2 4 0-0 6 2 ) 을 1 % 가되게첨가하여 b o t t l e t o p f i l t e r 를사용하여멸균하여사용하였다 R B L - 2 H 3 c e l l 은 1 0 0 m m d i s h 와 T - 7 5 f l a s k 에 s e e d i n g 하여 5 % C 0 2 가포항된혼 합가스로채워진배양기에서배양하였다 배 양된세포는 1 주에 2 회씩계대배양을하였 다 2 ) I L - 4 발현분석을위한 R T - P C R ( 1 ) 약재의처리 R B L - 2 H 3 세포는 T r y p s i n - E D T A 를처 리하여배양용기에서떼어낸후 1 5 0 0 r p m 에서 5 분동안원심분리하여세포를수득하고 배지 5 m Q 에재현탁후 1 2 w e l l p l a t e 에 8 x l 0 4 c e l l s / 뼈로분주하여 o / n 배양하 1 6 8 -

- 太陰 A 쐐心훌子었의抗 a l l e r g y 作用에협한 1 앓的 m - 였다 o / n 배양 후 C S Y J T 의 농도가 O 1 0 0 2 0 0 3 0 0 4 0 0 μ g / m 이 되도록 처리하여 다 시 o / n 배양한후 1 0 0 0 n M A 2 3 1 8 7 과 5 0 n M P M A 를처리한다음 4 시간후에 c e l l s 를수득하였다 ( 2 ) T o t a l R N A 의추출 배양종료후상충액을제거한후 R N A z o l B 를이용하여생쥐 B 세포막을터트린후 m R N A 를추출하는방법을택하였다 를 1 / 1 0 양으로 c h l o r o f o r m 을넣은후 1 5 초 간 v o r t e x 로혼합하고얼음에서 1 5 분간방치 하였다 고속원심분리기 ( 4 ' C ) 로 1 5 0 0 0 r p m 에서 1 5 분간원심분리한후상층액을취하여 동량의 i s o - p r o p a n o l 과혼합하고천천히흔 들어주었다 그리고고속원심분리기로 1 5 0 0 0 r p m 에서 1 5 분간원심분리한후상층액을제 거하고 1 m Q 의 8 0 % E t O H / D E P C D W 를 넣고혼합한후 1 5 0 0 0 r p m 에서 1 5 분간원 심분리하고상층액을다시제거하고 s p e e d - v a c 으로건조시켰다 D E P C / D W ( O 0 5 % ) 추출 한 t o t a l R N A 는 D E P C 을처리한 2 0 뼈의증류수에녹여 R T - P C R 에사용하였다 ( 3 ) 역전사 - 중합효소연쇄반응 ( R T - P C R ) 역전사 ( R e v e r s e t r a n s c r i p t i o n ) 반응은 준비된 t o t a l R N A 3 μ g 을 7 5 ' C 에서 5 분동 안변성 ( d e n a t u r a t i o n ) 시키고, 이에 2 5 μ Q 1 0 m M e l l 아 P s m i x 1μ Q r a n d o m s e q u e n c e h e x a n 띠 t i 뾰 ( 2 5 p m o l e / 2 5 뼈 : ) R N A i 빼 b i t e r 로서 1 μ Q R N a s e i n h i b i t o r ( 2 0 U / 따 ) 1 μ e 1 0 0 m M D T T 4 5 μ Q 5 x R T b u f f e r ( 2 5 0 m M T r i s - H C! p H 8 3 3 7 5 m M K C! 1 5 m M M g C 1 2 ) 를가한후 1 μ g 의 M - M L V R T ( 2 0 0 U / 따 ) 를다시가하고 D E P C 처리된증류수로서최종부피가 2 0 μ M 가되도록하였다 이 2 0 μ e 의반응혼합액을 잘섞은뒤 2 0 0 0 r p m 에서 5 초간원심침강 하여 3 T C 항온수조에서 6 0 분동안반응시켜 f i r s t - s t r a n d c D N A 를합성한다음 9 R N A z o l B 5 ' C 에서 5 분동안방치하여 M - M L V R T 를 불활성화시킨후합성이완료된 c D N A 를 P C R 에사용하였다 ( 4 ) c D N A 의 P C R 증폭 P C R 은 P r i m u s 9 6 L e g a l P C R s y s t e m 을이용하여역전사 - 중합효소연쇄반응을수행하였다 반웅은이미합성된 3 μ M 의 c D N A 를주형으로사용하고, 주형에대한 p r i m e r 는 I L - 4 G A P D H 를증폭하기위하여 s e n s e p r i m e r O O p m o l e / μ ) 와 a n t i s e n s e p r i m e r ( l O p m o l e / μ ) 를혼합하여 1 μ M 를가하고 다 시 3 μ Q 2 5 m M d N T P s 3 μ Q 1 0 x P C R b u f f e r O O O m M T r i s - H C! p H 8 3 5 0 0 m M K C! 1 5 m M M g C 1 2 ) 그리고 0 1 8 따 T a q p o l y m e r a s e ( 5 U / 때 ) 를첨가한다음최종부 피가 3 0 μ M 가되도록멸균증류수를가하고 p r e - d e n a t u r a t i o n ( 9 5 ' C 5 분 ) d e n a t u r a t i o n ( 9 5 ' C 1 분 ) a n n e a l i n g ( 5 5 ' C 1 분 ) e l o n g a t i o n ( 7 2 ' C 1 분 ) 을 3 0 회한뒤 p o s t - e l o n g a t i o n 을 7 2 ' C 에서 3 분동안의조건으로 P C R 을 수행하였다 각 P C R p r o d u c t s 는 2 0 μ e 씩 1 2 % a g a r o s e g e l 에 l o a d i n g 하여 1 2 0 V 조 건에서 2 0 분간 전기영동을 통하여 분석하였 다 O l i g o n u c l e o t i d e 의 염기배열은 다음과 같 c H T a b l e I I ) T a b l e I I O l i g o n u c l e o t i d e S e q u e n c e s o f P r i m e r s U s e d f o r Q u a n t i t a t i v e R T - P C R G e n e P r i m e r S e q u e n c e I L - 4 G A P D H s e n s e S ' - A C C T T G C T G T C A C C C T G T T C - 3 a n t i s e n s e 5 - T T G T G A G C G T G G A C T C A T T C - 3 ' s e n s e S ' - C T G A C T T C A A C A G C G A C A - 3 a n t I S e n s e 5 - A C A T G A C A A G G T G C G G C G - 3 P C R p r o d u c t 의양은 W i n d o w s 1 D m a I n p r o g r a m 을이용하여최고값 ( h e i g h t : H t ) 으로측정하였다 1 6 9 -

- 사상채질의학회지제 1 5 권제 2 호 2 0 0 3-3 ) M a s t c e l l a c t i v a t i o n 표면 I g E 발현 분석 0 ) 복강 m a s t c e l l 의분리 B A L B / c 생쥐를치사시킨후 T y r o d e 용 액 ( N a C l 1 3 7 m M, K C l 2 7 m M, C a C l z 2 H z O 1 m M N a H z P 0 4 O A m M N a H C 0 3 1 2 m M, g l u c o s e S S m M B S A ) 을복강내 에주입하고, 9 0 초간복벽을가볍게마사지 한후복벽을소절개하여복강세척액을스포 이드로채취하여 3 0 0 0 r p m 에서 5 분간원 심분리하여얻어진 p e r i t o n e a l c e l l s 를 1 의 T y r o d e 용액에부유시킨다 P e r i t o n e a l c e l l s 로부터 m a s t c e l l 를얻는과정은 Y u r t e t a 1 ' 의방법을따랐다 P e r i t o n e a l c e l l s 를부유시킨 T y r o d e 용액 1 m e 를 0 2 2 S g / m e t r i a m i d e ( d e n s i t y 1 1 2 0 g / m ι S i g m a ) 2 뼈표연위에 l o a d i n g 하겨원심분리 ( 4 0 0 x g l S m i n R T ) 하였다 버퍼와 m e t r i z a m i d e 사이에있는 c e l l s 층을잘수거하여 T y r o d e b u f f e r 로 2-3 차례세척한후 1 에부유시 켜실험에사용하였다 ( 2 ) 생쥐복강 m a s t c e l l 에서 I g E 발현분석 생쥐복강비만세포를 2 4 w e l l s p l a t e 에 S x 1 0 5 세포 / w e l l 로분주하고 h i s t a m i n e - r e l e a s i n g - f a c t o r ( H R F ) ( S O O n g / m e ), P M A O O O n g / ) 그리고 C S Y J T 추출물 0 0 μ g j r 뼈 ) 을가하여 7 2 시간배양하였다 배양 후비만세포를인산완충생리식염수로 2 회수 세하였고 4 C 에서연역형광염색을실시하였 다 각각에 F I T C - a n t i - m o u s e I g E 를넣고 3 0 분간얼음에서반응시켰다 반응후 3 회 이상인산완충생리식염수로 수세한후유세포 형광분석기로생쥐복강비만세포에서 I g E 발현을분석하였다 4 ) 생쥐 B 세포분리및배양 B A L B / c 생쥐에서비장을분리하여비장세 포를채취하여 2 0 0 0 r p m 에서 5 분간원심분 리하여세포를회수하였다 이에적혈구용혈 액 2 을넣고 3 T C 항온수조에 5 분간방치 하였다 그후즉시 1 0 뼈의 D - P B S 를첨가 하여 2, O O O r p m 에서 5 분간원심분리하여사 용하였다 분리한비장세포에 J I J l O, O K 1 S 3, M 1 / 7 0 배양상층액 o 뼈 / 1 0 8 세포 ) 을처리한 후얼음에서 3 0 분간반응시켰다 ( T a b l e I ) 반응후 2 회 D - P B S 로수세하고 r a b b i t c o m p l e m e n t l y o p h i l i s e d O S m e 을처리한 후 3 7 C 항온수조에서 1 시간동안배양하였 다배양후 5 회 c o m p l e t e m e d i u m 으로수 세하고 S e p h a d e x 0-1 0 c o l u m n 에통과시 켜 B 세포를분리하였다 B 세포항량을측 정하기위하여 Q - B 2 2 0 - F I T C 를이용하여유 세포형광분석기로분석하였다 ( F i g 1 ) S ) I F N - Y, I L - 4, I g E 생산량측정 생쥐 B 세포를분리하여 9 6 w e l l s p l a t e 의각 w e l l 에 2 x 1 0 5 세포씩분주하고 C S Y J T 를농도별로처리하였고 약물처리 l 시간후 H R F ( S O O n g / 뼈 ), a n t i - C D 4 0 m A b ( S O O n g / m e ) 과 r m I L - 4 를 1 0 일과 7 2 시간동안동시 배양하였다 그리고 r m I L - 1 0 을처리하여양성대조군으로사용하였다 배양종료후전체 배양액을 2, O O O r p m 에서 5 분간원심분리하 여상등액을회수하여 E L I S A 에사용하였다 I F N - Y, I L - 4 I L - 1 0 E L I S A 를 7 2 시간, 그 리고 I g E E L I S A k i t 로분비량은 1 0 일동안 배양후측정하였다 각항체를 c o a t i n g 완 충용액에희석하여 m i c r o w e l l 에 c o a t i n g 한 후 4 C 에서 o v e r n i g h t 하였다 각 w e l l 을 3 회 w a s h i n g 완충용액으로세척한후 B 세포 배양상충액을 1 0 0 μ M 씩분주하였다 1 시간동 안실온에서방치한후 2 회 w a s h i n g 완충용 액으로세척한다음 a n t i b o d y a v i d i n - H R P c o n j u g e t e d 1 0 0 때를처리하고 1 시간실온 에서방치한후다시세척하였다 T M B 기질 을 1 0 0 따씩분주하고암소에서 3 0 분간방치 한후 S O μ e 의 s t o p 용액을처리한후 E L I S A r e a d e r 4 S 0 n m 에서홉광도를측정 하였다 - 1 7 0 -

- 太陰 A 淸心훌子훌의抗 a e r g v 作用에對한 I 앓的쩌 % - N o r m l l 5 8 1 2 0 0 1 4 8 2 9 C o n t r o l ( P M A j A 1 8 7 ) m 成績 1 P M A - A 2 3 1 8 7 로활성화시킨 R B L - 2 H 3 세포주에서 I L - 4 발현억제에 미치는효과 다양한 농도의 C S Y J T ( 4 0 0 g / m g, μ 3 O O g / μ m g, 2 0 0 μ g / m e, 1 0 0 μ g / 뼈 ) 을처리한실험군의 I L - 4 발현률이 대조군에 비하여 7 8 8 8, 9 7, 9 8 % 로 농도에 따라 억제되었다 ( T a b l e 1 F i g 1 ) T a b l e 1 E f f e c t s o n t h e c e l l s s t i m u l a t e d w i t h P M A a n d A 2 3 1 8 7 도노l L 4 ( H t ) G A P D H ( H t ) l L 4 / G A P D H % o f 깅c o n t r o I 8 9 1 l 5 l 6 4 l O O C I l 7 0 l 3 3 l 2 8 7 8 C 3 l 8 3 l 2 7 I 4 4 8 8 c, l 8 0 l l 3 1 5 9 9 7 C i l 9 0 l l 9 1 6 0 9 8 C 1 : 4 O O μ g / m Q C S Y J T + P M A - A 2 3 1 8 7 C 2 ; 3 O Oμ g / 뼈 C S Y J T + P M A - A 2 3 l 8 7 C 3 ; 2 0 0 μ g / m g C S Y J T + P M A - A 2 3 1 8 7 C 4 ; 1 0 0 μ g / m M C S Y J T + P M A - A 2 3 1 8 7 F i g l E f f e c t s o f c s η T o n t h e c e U s S t i m u l a t e d w i t h P M A a n d A 2 3 l 8 7 C e l l s w e r e l n Q l b a t e d o v e r n l g h t l n t h e p r e s e n c e o f v a r l O u s c o n c e n t r a t i o n s o f C S U T a n d w e r e s t m i l l l a t e d w i t h P M A - A 2 3 l 8 7 C e l l s w e r e h a r v e s t e d 4 h l a t e r f o r a s s e s s m e n r o f I L - 4 m R N A l e v e l s L a n e M ; l O O b p l a d d e r l a n e 1, m e d i a c o n t r o l l a n e 2 ; R I A - A 2 3 l 8 7 l a n e 3, 4 0 0 μ g / m e αy j T + P M A - A 2 3 l 8 7 l a n e 4 ; 3 O O μ g / m e c S Y ] T + P M A - A 2 3 l 8 7 l a n e 5, 2 0 0 μ g / m e αy j T + P M A - A 2 3 l 8 7 l a n e 6 ; m o l l g / I I l e α Y J T + P M A - A 2 3 1 8 7 2 C D 4 O 과 I L - 4 및 H R F 를함께처리한 B c e l l 에서 I L - 4 생성억제에미치는효과 실험군중 B c e l l 자극인자인 C D 4 O 과 I L - 4 및 H R F 를함께처리한경우아무것 도처리하지않은음성대조군에비해 1 5 배 가량증가됨으로 B c e l l 이충분히활성화되었 음을확인할수있으며, 또한 I L - 4 생산의 s u p p r e s s o r 로작용하는 I L - 1 O 과처리시 I L - 4 의생산은 1 0 3 7 ± 7 5 4 p g / m e 로현저히 감소하였다 또한본실험에사용한 C S Y J T 을 I L - 1 0 대신사용하여 I L - 1 O 과비교하였 을때농도에따른유의성 관찰되었다 ( T a b l e 2 ) 있는억제효과가 L 4 l G R } { i, ν 각 l M 2 3 4 5 6 l T a b l e 2 I n h i b 4 t i o n e f f E c t o f I L - 4 p r o d u c t i o n o n s p l e n i c B c e U s t h a t s t j m u l a t e d w i t h a n t i - C D 4 O m A b, a n d r I L - 4 G r o u p N o m a ( N ) C m t m! ( C ) d L - 1 0 ( r ) C S Y J T 1 ( C 1 ) C S Y J T 2 ( 띠 C S Y J T ( i 때 m l ) O O O 1 m 1 O L - 4 p r o d l x t m n 멜밴 L 2 1 3 ± 6 2 1 허 3 % 2 ± 1 6 1 O 1 0 3 7 ± 1 5 4 - - 1 8 9 7 ± 6 5 5 - - g l 3 8 ± 1 3 1 0 N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 t r e a t e d g r o u p r : A n t i - C D 4 O + H R F + r I L - 1 O t r e a t e d g r o u p + H R F r I L - 4 + - 1 7 I -

- 사상체질의학회지저 1 5 권제 2 호 2 0 0 3 - C 1 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 C S Y J T ( m o l l g / m M ) t r e a t e d g r o u p C 2 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 C S Y J T ( 1 O μ g / 뼈 ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s ± s t a n d a r d e r r o r * P - v a l u e : S t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t v a l u e c o m p a r e d w i t h c o n t r o l d a t a ( * : P 0 O 5, * * : P 0 O 1 * * * : P O D o u - F 1 g 2 I n h i b i t i o n e f f e c t o f I L - 4 p r o d u c t i o n o n s p l e n i c B c e I I s t h a t s t i m u l a t e d w i t h a n t i - C D 4 O m A b a n d r I L - 4 + + 쉴융 형 g 훌 $ r 에, t I 영 t f 1 t + r X i l 경 ; G암까 ( l q l l 잉 n i ) ( P F V h + f, 4 D 3 3 3 Å» X D ~ C i 으 2 E t 그 s a n 1 $ 1 - L 1 m $ F a 3 土 6 a a l o k x r T I( im 3 E 2 t 1 6 1 0 G 1 * d ( Q 1 m 7 t 7 % 1 8 8 7 t 6 E E m m r t - 1 0 ( r ) α ; Y J r 1 ( C 1 ) g f i 8 ± 1 3 1 @ g y m N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 + H R F t r e a t e d g r o u p r : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + r I L - 1 O t r e a t e d g r o u p C 1 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T ( m o l t g / m M ) t r e a t e d g r o u p + C 2 : A n t i - - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 C S Y J T ( 1 O μ g / 뼈 ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s 土 s t a n d a r d e r r o r * P - v a l u e : S t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t v a l u e c o m p a r e d w i t h c o n t r o l d a t a ( * : R 0 O 5, * * : R o m * * * : P 0 O m ) 3 M a s t c e l 1 표면 I g E 발현에미치는영향 ( c g C S Y J T 이 m a s t c e l l s u r f a c e I g E 발현에 미치는영향을알아본결과, C S Y J T 1 0 μ g / m e 농도로처리한실험군의 I g E 발현이대조 군에비해감소하였음을관찰할수있었다 ( F i g 2 ) F i g 3 I 띠 1 i b i t o r y I g E e x p r e s s i o n M a s t c e l l s f r o m h e a l t h y e f f e c t o n m a s t c e l l s u r f a c e B A L B / c n 1 I C e S t u n u l a t e d w i t h P M A a n d r e c o m b l n a n t H R F o r w i t h e i t h e r P M A a n d r e c o m b i n a n t H R F p l u s C S Y j T ( l O μ g / m l ) B l n d l n g o f I g E o n r n O l u e m a s t c e l l s f o r 2 4 h A f t e r 2 4 h, t h e c e l l s w e r e h a r v e s t e d, a n d a s s a y e d f b r l g E e x p r e s s i o n b y n o w c y t o m e t m e t h o d s f o r a s s a y w e r e p e I f o r m e d a s M a t e, i a h a r l d M e t k 찌 R 1 e r e t r e a t e d π, a n d t h e O t h e r d e s c r i b e d 4 B c e l l 의 I g E 생산에미치는효과 실험군중 B c e l l 자극인자인 C D 4 O 과 I L - 4 및 H R F 를함께처리한경우아무것 도 처리하지않은陰性대조군에비해 4 배 가량증가됨으로써 B c e l l 이충분히활성화 되었음을확인할수있으며, 또한 I g E 생산 의 s u p p r e s s o r 로작용하는 I L - l O 과처리시 I g E 의생산은현저히감소하였다 또한본 실험에사용한 C S Y J T 을 I L - 1 0 과비교하기 위하여 I L - 1 0 대신사용한결과농도에따 른유의성있는억제효과가관찰되었다 ( T a b l e 3 ) l n l 7 2

- 太陰 A i 홉心훌子혀의抗 a l l e r g y f F f f l 에훤한 앓的왜究 - T a b l e 3 I n h i b i t i o n e f f e c t o f I g E p r o d u c t i o n o n s p l e n i c B c e l l s t h a t s t i m u l a t e d w i t h a n t i - C D 4 0 m A b a n d r I L - 4 C S Y J T I g E p r 여 u c t i o n G r o u p 뼈에 ) 뻐메 ) N o r m a l ( N ) C o n t r o l ( C ) r I L - I O ( r ) C S Y J T l ( C n o 1 1 5 : 1 : 1 4 0 3 1 o 4 9 9 : 1 : 2 5 1 o 1 1 3 : t 1 3 0 " 5 0 2 4 4 : t 2 5 5 " C S Y J T 2 ( C 2 ) 1 0 2 6 5 : t 1 2 9 " N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 + H R F t r e a t e d g r o u p r : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + r I L - I O t r e a t e d g r o u p C l : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T ( S O μ g / m Q ) t r e a t e d g r o u p C 2 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T O O μ g / m Q ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s :! : s t a n d a r d e r r o r P - v a l u e S t a t i s t i c a l l y v a l u e c o m p a r e d w i t h c o n t r o l d a t a ( U P ( O O S : P ( O O l : P ( O O O U s i g n i f i c a n t r : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + r I L - I O t r e a t e d g r o u p C 1 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T ( S O μ g / m Q ) t r e a t e d g r o u p C 2 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T O O μ g / m Q ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s :! : s t a n d a r d e r r o r P - v a l u e S t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t v a l u e c o m p a r e d w i t h c o n t r o l d a t a ( : P ( O O S : P ( O O l : P ( O O O U S B c e l l 의 I F N - Y 생산에미치는효과 지나친 B c e l l 의활성화를억제하기위한 c y t o k i n e 으로작용하는 I F N - Y 의생산변 화를살펴보았다 앞서알아본 C S Y J T 에 의한 I g E 나 I L - 4 의억제효과와는다르게 I F N - Y 는증가되는것을관찰할수있었다 ( T a b l e 4 ) T a b l e 4 E f f e c t o n I F N - Y p r o d u c t i o n b y H R F p l u s a n t i - C D 4 0 m A b p l u s r I L - 4 s t i m u l a t e d m u r i n e s p l e n i c B c e l l s G r o u p C S Y J T I F N - Y p r o d u c t i o n ¼ t g J m l ) ( nºp m l ) N o r m a l ( N ) 0 4 1 : t O 4 2 "! 0 0 잉 4 9 9 : t : 2 S 1 C o n t r o l ( C ) o 1 5 5Í 2 3 1 r 1 L - 1 0 ( r ) 0 8 7 : t 1 4 3 1 I ~ 때 C ) c 2 6 5 < ; > g o o o 그; u 2 : t : 2 5 5 " 1 - ωm a 으 5 % 1 μ : 9 ) 1 3 : t : 1 3 ) o > 1 0 N o r m a t ( 씨 C o n t r o l ( C ) rι - 1 0 (, ) C S Y J T 1 ( C ' ) C S Y J T 2 ( C 2 ) F i g 4 I n h i b i t i o n e f f e c t o f I g E p r o d u c t i o n o n s p l e n i c B c e l l s t h a t s t i m u l a t e d w i t h a n t i - C D 4 0 m A b a n d r I L - 4 N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 + H R F t r e a t e d g r o u p C S Y J T l ( C n 1 0 0 1 7 4 : 1 : 2 2 5 C S Y J T 2 ( C 2 ) 1 0 1 5 2 : 1 : 1 3 4 N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 + H R F t r e a t e d g r o u p r : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + r I L - I O t r e a t e d g r o u p C l : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T ( l O O μ g / m Q ) t r e a t e d g r o u p C 2 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T ( l O μ g / 뼈 ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s :! : s t a n d a r d e r r o r 1 7 3 -

- 사상채질의학회지제 1 5 권제 2 효 2 0 0 3 - F i g 5 E f f e c t o n I F N - Y p r o d u c t i o n b y H R F p l u s a n t i - C D 4 0 m A b p l u s r I L - 4 s t i m u l a t e d m u r i n e s p l e n i c B c e l l s N : N o n - t r e a t e d g r o u p C : A n t i - C D 4 0 + r I L - 4 + H R F g m 1 g 흥 1 g g - i s 1 0 중 4 I t 0 4 2 < 1 ) 1 7, 4 1 2 2 5, " - 2 J 1 1 2 t 1 3 4 8 7 H 4 3 N o r m a l I N ) C o o u o l I C ) < 1 - ' 0 I, ) t r e a t e d g r o u p C S Y J T ' I C ' ) C S Y J T 2 1 C 2 ) r : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + r I L - 1 0 t r e a t e d g r o u p C 1 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T C l O O μ g J 뼈 ) t r e a t e d g r o u p C 2 : A n t i - C D 4 0 + H R F + r I L - 4 + C S Y J T C l O μ g / m e ) t r e a t e d g r o u p a ) : M e a n s t s t a n d a r d e r r o r N 考察 A l l e r g y 라는용어는 1 9 0 6 ' 년 C l e m e n s V o n P i r Q u e t 에의해최초로 이물질에대한 신체의잘못변화된능력 이라하여모든면 역학적반응을포함하는극히광범위한정의 였으나최근에는 다양하고무해한항원에대 한면역계의반응으로발생하는질병 과같이 보다제한된의미로정의되며 종종제 1 형 과민반응 ( I g E 에의하여매개되는즉시형과민반응 ) 과동일시된다 1 1 5 ) A l l e r g y 반응은무해한항원, 즉 a l l e r g e n 에반웅하여생성된 I g E 항체를지닌개인이 계속하여동일 a l l e r g e n 에노출되었을때일 어난다 A l l e r g e n 은이미노출된조직에있는 I g E 결합 m a s t c e l l 을활성화시켜 a l l e r g y 의특징적인반응들을연속적으로일 어나게한다 1 6 1 7 ) A l l e r g y 반응은연역글로불린이항원과 반응하여방출하는화학전달물질이나 T 세포에의한각종화합물에의해혈관의확장 모 세혈관의투과성항진 평활근의수축과경 련 점액의증가및점막의부종과염증등이 유발되는것으로 a l l e r g y 성기관지염 a l l e r g y 성기관지천식 a l l e r g y 성비염등의질환을 일으키는데특히호홉기계에심각한영향을주어기침과객담의분비 호흡곤란 발열 흉통 흉민감 천명등을일으킨다 1 8 1 9 ) 최근 a l l e r g y 연구가세포의염증발현에 관여하는세포와분자수준의기전에초점이 맞추어지고있다 즉세포단계의염증면역반 응에서각종 c y t o k i n e 이어떻게관여하고역 할하고있는지를계속적으로보고하고있으 며 각종치료제제를투여함으로서그러한 m e c h a n i s m 에변화를초래하는기전들을구체적으로제시하고있다 W I A l l e r g y 질환에서의염증반응은 I g E 의과 도한생성과백혈구 특히호산구의대량유입으로특징지워진다 I g E 를발현시키는 B 세포의분화는세가지종류의신호에의한 다 첫째로 B 세포의항원수용체를통하여 이루어지는데항왼특이적반응을결정하는데 중추적인역할을한다 둘째는 T h 2 세포에서 유래된 I L - 4 I L - 1 3 같은 c y t o k i n e 에의하 여제공된다 셋째는 B 세포와 T 세포의 i n t e r a c t i o n 에의하여제공된다 2 1 9 ) I n t e r l e u k i n ( I L ) 이란항원과반응하여활 성화된림프구가생성 방출하는물질로서 다른세포에작용하게하는활성물질이며 l y m p h o k i n e 으로칭하기도하며 m a c r o p h a g e 가생성하는통일한활성물질인 m o n o k i n e 은 m o n o c y t e 의억제작동물질을의미하는데 이 둘을합하여 c y t o k i n e 이라고부른다 1 9 ) 이런 c y t o k i n e 은어떤한가지항원에특이적인 적은수의립프구로하여금그항원을제거하 는다양한실행기전을활성화시키도록하는 증폭기전을제공하므로 c y t o k i n e 의과도한 - 1 7 4 -

- 太陰 A 쩌心홉子훌의抗 a l l e r g y 作用에휩한 앓的 - 생성및작용은조직상해를유발하거나괴사 를일으킬수있다 그러므로 c y t o k i n e 이나 저해제를투여하는것은질병과연관된생물 학적반응을변화시킬잠재적인접근방법이될수있다 2 1 2 2 ) T h 세포는 c y t o k i n e 을분비하여기도의 염증반응을조절하는중요한역할을하고있 다 T h 세포는 c y t o k i n e 의분비양상에따 라 T h l r h 2 세포로나뉘어진다 T h l 세 포는주로 I L - 2 I L - 1 2 I F N - Y 를생산하며 지연형과민반응 결핵균이나바이러스에대 한방어작용 종양에대한숙주반응에관여한 다 T h 2 세포는 I L - 4 I L - 5 I L - 6 I L - I O 등을생산하며즉시형과민반응 기관지천식 과같은 a l l e r g y 성질환, 기생충감염에대한 방어작용에관여한다 T h l 세포와 T h 2 세 포는서로길항작용을나타내어기능이억제 되는현상이관찰되며 a l l e r g y 성기관지천식 환자의기관지폐포세척액에서는 T h 2 세포 의기능이활성화됨이관찰되고있다 즉, 항 원에의한 I g E 생성에필수적인요소인 I L - 4 를분비하는 T h 2 세포는 n a i v e C D 4 + T 세포가 I L - 4 의영향으로 a l l e r g e n 과반응시 분화되고이때 I g E 생성을방해하는 I F N - Y 를분비하는 T h l 세포는그발달이저해된 다 2 1 2 3 2 4 2 5 ) 그러므로 I L - 4 의생성이억제되면 T h 2 세포의분화가억제되고 B 세포에의한 I g E 의생성이역시억제되어 m a s t c e l l 의표면 에 I g E 항체의발현이적어질것이며 I F N - v 의생산의증가는곧 T h l 세포의발달을촉 진하여 T h O 세포가 r h 2 세포로분화되는것 을저해시켜알레르기반응이일어나지않게될것으로예상이된다 太陰 A 에게나타나는흉病의特徵은表病證 인氣浪之氣의中 i 뭘證과짧病證인 ; 操熱證으로 나누어볼수있다 表病證인氣滾之氣의中 i 뭘證은發散 i 댐操補뼈하는治法을사용하며훌 病證인操熱證은淸 J J f 熱 j 댐操하는治法을사용 한다 太陰 A 의病證은表夏를막론하고呼散 之氣를保命之氣로調節해야한다 2 6 ) 太陰 A 의특성상府爆熱의病證이發生하면 뼈局에영향을미쳐뼈의챈廳組織을乾操하 게하여진드기의배설물, 미세먼지, 꽃가루 등의이물질에과민한반응을일으킬가능성 이커지게되어 a l l e r g y 性氣管支갖이나 a l l e r g y 性氣짤支댐息이발생하게된다 淸心違子場은 東醫옳世保元 ) 1 4 ) 草本 1 # < 에는기술되어있지않지만甲午本과辛표版 本에處方의構成만기록되었다가후대학자 6 ) 인元의 東聲四象新編 에 治虛勞夢뺀無 度 8 훌痛 t 世 i 寫좀卷中風食漂 8 떼題 1 홈이라기록 되어있으며, 많은醫홉 7-1 0 ) 에서淸 J e 運子場 을太陰 A 의虛勞와中風 心 R 훌훌뽕, 神經性 흉愚 a l l e r g y 性웰갖둥에활용됨을설명하 고있다 淸 J e 運子場의橫成과效能을살펴보면, 運 子肉은開뼈之몹氣하고, 山쫓은싼뼈而有內守 하고 天門쪽은開皮毛하고 껑충門쪽은補 뼈和 뻐하고 ) 좋志는醒師之합氣하고, 石홈演는錯 琮뼈氣하고, 醒훌仁은安神定意하고, 龍 D I 肉 은開皮毛 相子仁은補 心益氣하고, 黃측은 收敬뼈元하고 * i j 훨子는 P 뽑섰下氣하고 i 호쨌 은開皮毛하여 補 H i l i 和뼈! t f : R 며, 收敬뼈元 安피輪혐 ι 1 4 ) 등으로師元을補하고和하는樂物 과心神을安定시키는 獲物로構成된處方으 로 a l l e r g y 性氣짤支꽃 a l l e r g y 性氣管支 n 밟 息 에사용될수있을것으로사료된다 淸心運子楊에대한다양한연구 1 1-1 3 ) 가있 어왔으나 淸心運子場의抗 a l l e r g y 효과의 分子免흉學的인機轉에대한賢驗的 1 i J f 究는아직접해보지못했다 이에저자는淸心連子場의抗 a l l e r g y 에대 한效能을實驗的으로쐐明하기위해 B 세포 에서 I L - 4 의유전자발현과 I L - 4 I g E 의생 성및 m a s t c e l l 에서 I g E 발현 I F N - Y 생성에미치는효과등을측정하였다 淸 J e 鐘子場의抗 a l l e r g y 효과를측정하기 위해 淸 J e 鍾子場을투여한실험군과 I L - I O 을투여한양성대조군과아무것도투여하지 - 1 7 5 -

- 사상채질의학회지제 1 5 권제 2 호 2 0 0 3 - 않은대조군을만들어 I L - 4 I g E 의생성과 발현에대한실험과 I F N - Y 의생성에대한비 교실험을수행하였다 실험결과와의의는 다음과같다 淸心運子港의 효능을비교하기위한양성대 조군은 I L - I O 을이용하여만들었다 양성대 조군으로쓰인 I L - I O 은분자량이 3 6 k D a 인 h o m o d i m e r i c c y t o k i n e ( 동종이량체 c y t o k i n e ) 으로활성화된대식세포 및림프구에서분비 되며 c y t o k i n e s y n t h e s i s i n h i b i t o r y f a c t o r ( c y t o k i n e 합성억제인자 ) 로알려져왔다 T h l 세포에서의 I F N - Y I L - 2 의생성을억 제하고단핵식세포에서 I L - l I L - 6 I L - 8 등의염증성 c y t o k i n e 생성을억제할뿐아 니라 T h 2 세포에서의 I L - 4 I L - 5 I L - 1 3 분비를억제시키기때문에 a l l e r g y 성염증반 응을방해하기도한다 1 8 2 7 2 8 ) 또한호산구에 대한 a p o p t o s i s 를유도하고 I g E 항체형성 을억제한다 실제로천식환자에있어서는 I L - I O 의합성이감소하는경향을보이며 2 9 3 0 ) 이와 대조적으로천식의치료제인 c o r t i c o s t e r o i d 홉입시 I L - I O 은증가한다 이러한 I L - I O 의면역억제및항염증효과를 감안한다면 a l l e r g y 질환의치료에유용할것 이라는예상이가능해진다 실제로 m u n n e m o d e l 내에서재조합된 I L - I O 의비강내투 여로염증을억제하는효파를얻은것으로보 고되었다 2 9 3 1 J 이에따라淸, l, 鐘子場의효능 을비교측정하기위한양성대조군을만들기 위해 I L - I O 을사용했다 P M A - A 2 3 1 8 7 로활성화시킨 R B L - 2 H 3 세포주에서淸, ( 행子場이 I L - 4 발현억제에 미치는효과와 C D 4 0 과 I L - 4 및 H R F 를함 께처리한 B c e l l 에서淸, ( 앓子場 1 I L - 4 생 성억제에미치는효과를측정하였다 I L - 4 는여러종류의세포에다양한기능을 나타내는분자량 2 0 k D 의 c y t o k i n e 이다 활 성화된 C D 4 + T 세포가주된 I L - 4 생성세 포이나활성화된 m a s t c e l l 도생성한다 또 한 I L - 4 는 T 세포와 m a s t c e l l 의증식을촉 진하며대식세포의식작용을항진시킨다 I g E 는제 I 형과민면역반응을일으키는중요 한인자이므로 I L - 4 생산의항진은 a l l e r g y 반응에중요한역할을하게된다 I L - 4 는 T 세포에대해서도작용을하며항원과반응한 T 세포의증식을보조하기도한다 1 8 ) P M A - A 2 3 1 8 7 로활성화시킨 R B L - 2 H 3 세포주에서 j 춤, ( 뽑子 i 易 1 I L - 4 발현억제에 미치는효과에서다양한농도의淸心速子楊 ( 4 0 0 μ g i n 냉 3 0 0 μ g f m 2 0 0 μ g f m 1 0 0 μ g f 뼈 ) 을처리한실험군의 I L - 4 발현률이대조 군에비하여 7 8 8 8 9 7 9 8 % 로농도에따 라억제되었다 ( T a b l e 1 F i g I ) C D 4 0 과 I L - 4 및 H R F 를함께처리한생쥐비장의 B c e l l 에서 i 줌, e, 還子場이 I L - 4 생성억제에미 치는효과에서실험군중 B c e l l 자극인자인 C D 4 0 과 I L - 4 및 H R F 를함께처리한경우 아무것도처리하지 않은음성대조군에비해 1 5 배가량증가됨으로 B c e l l 이충분히활성 화되었음을확인할수있으며, 또한 I L - 4 생산의 s u p p r e s s o r 로작용하는 I L - I O 과처 리시 I L - 4 의생산은 1 0 3 7 土 7 5 4 p g / m 로 현저히감소하였다 또한본실험에사용한淸, e, 逢子場을 I L - I O 대신사용하여 I L - I O 과 비교하였을때농도에따른유의성있는억 제효과가관찰되었다 ( T a b l e 2 ) i 좁아 運子場이 B c e l l 의 I g E 생산에미치는 효과와 m a s t c e l l 표면에서 I g E 발현에미치는영향을측정하였다 I g E 항체가제 I 형과민반응의중심역할 을한다 I g E 가결합하는 F c 수용체 ( F C E R ) 는여러세포에서발현되는데주로 m a s t c e l l 호염기구에서현저하다 이들세포의 F C E R 에 I g E 가결합된다음에항원이결합되면활성화 탈과립을거쳐과민반응매개인자를분비한다 1 7 1 8 ) M a s t c e l l 표면에 I g E 가결합되어있는 상태에서 a l l e r g e n 이교차결합하게되면탈 과립화가발생하며, 다양한종류의염증성매 개물질들이분비된다 H i s t a m i n e 은대표적 1 7 6 -

- 太陰 A ; 룸心훌子훌의抗 a l l e r g y 作甲에협한 앓的 O J! : i t - 인매개불질로서국소적인혈류량과혈관투과 성을즉시증가시키며 조직의세포간질을깨 뜨려서조직을파괴시키고, 평활근을수축시키고, 혈관투과성과점액분비를증가시키며 백혈구의유입과활성화를유도한다 A l l e r g y 에서 m a s t c e l l 의활성화에의해서유발되는 급성그리고만성염증반응은환경항원에대 한 a l l e r g y 반응과관련된질병들에서보는 것처럼중요한병리생리학적결과를가져올수있다 J ) H i s t a m i n e 은즉시형 a l l e r g y 반응을주도 하며 m a s t c e l l 과 b a s o p h i l 에서유래하는 c y t o k i n e 이다 H i s t a m i n e 은혈관투과성을 증대시키며평활근을수축시켜 a l l e r g y 를일 으키는작용을한다 H i s t a m i n e 을피부에주사하면 a l l e r g y 반응이일어날수있는데 이것은 h i s t a m i n e 이평활근을수축시키고 혈관의투과성을높이는작용이있기때문이 다 이평활근은내장이외에기관이나기관 지 피부의입모근에도있다 - 따라서기관지 에서 h i s t a m i n e 이작용하면기관지벽이붓 고분비볼도증가되어더욱더기관지가좁아 지게되고평활근이수축되어서천식발작등 이일어나는것이다 3 2 ) B c e l l 의 I g E 생산과 m a s t c e l l 표면 I g E 발현이억제되면 h i s t a m i n e 의 분비도 감소할 것으로 예상이 된다 淸 ' L 運子場 1 B c e l l 의 I g E 생산과 m a s t c e l l 표면 I g E 발현에미치는효과를알아본 결과 淸 ι 連子場이 B c e l l 의 I g E 생산에미 치는효과는 I L - 1 0 과비교하여농도에따른 유의성있는억제효과가관찰되었다 ( T a b l e 3 ), 淸 ' L 運子場을 1 0 μ g / m 농도로처리한 실험군의 I g E 말현이대조군에비해감소하였음을관찰할수있었다 ( F i g 2 ) 淸 ' L 運子楊 1 B c e l l 의 I F N - Y 생산에미치는효과를측정하였다 I F N - Y 는세포매개 T h 1 면역반응의유도 에서결정적매개인자로작용하고 B 세포의 분화와증식을억제하는데 T h 1 과 r h 2 분화 의주요조절인자이다 따라서 I L - 4 작용과 길항작용을보여 I L - 4 에의한 I g E 생성을억제한다 3 3 ) I F N - Y 의생성을증가시키면 T H 2 세포의분화를억제하여 I L - 4 의생성이억제 되고 따라서 B 세포의 I g E 생성이 함께억제 된다 J ) 淸 ' L 運子場이 B c e l l 의 I F N - Y 생산에미 치는효과를측정한결과, 대조군에비해 I L - 1 0 처리군과 1 0 0 μ g / m 1 0 μ g / m 의淸 ' L 運子場투여군모두 I F N - Y 발현이증가되었 q ( T a b l e 4 ) 이상의결과를종합해보면 I 좁아 運子場은 생쥐비장 B 세포와복부 m a s t c e l l 의유전 자수준과세포분자수준에서 I L - 4 의발현을 억제하고 I F N - Y 의발현을증가시켜 B 세포 의 I g E 합성억제와 m a s t c e l l 에서의 h i s t a m i n e 의생산을저해함으로써염증매 개물질의분비를저해하여, 기도점막의과증 식과이상분비물증가를감소시키는抗 a l l e r g y 효과를갖는것으로사료된다 따라서淸心運子場은 a l l e r g y 性氣管支갖 a l l e r g y 性氣管支 n 밟息 등의질환에대한예 방과치료제로활용될수있을것으로판단되 며, 향후지속적인관련연구가이루어져야 할것으로사료된다 1 7 7 -

- 사상채질의학회지재 1 5 권제 2 효 2 0 0 3 - v 結論 淸, ( 鐘子場의抗 a l l e r g y 작용을규명하기 위하여 I L - 4 生成과發顯 t f I J 制에미치는效 果와 I g E 生成과發顯에미치는影響및 I F N - Y 의分泌동을觀察한바, 다음과같은 結論을얻었다 1 淸心運子場은 I L - 4 발현을유의성있게 억제하였다 2 淸, ( 행子場은 I L - 4 분비를유의성있게 억제하였다 3 淸 ' L 鐘子楊은 I g E 발현을유의성있게 감소시켰다 4 淸 ' L 鐘子場은 I g E 분비를유의성있게 감소시켰다 5 淸心運子場은 I F 켰다 N - Y 의분비를증가시 以上의結果로보아淸心運子場은抗 a l l e r g y 效果가認定되며앞으로이에대한 持續的인 1 i f f 究가必要하리라몽 料된다 V I 參考文廠 1 김태규외 1 0 인역 : 연역생물학 5 판, 서울, 라이프사이언스, p p 4 9 3-5 2 4, 2 0 0 2 2 金周德, 金뿔 1 t 역 : 免훌學入門 서울 醫홉휠學社, p p 4 7-8 1 1 9 8 3 3 洪元植 : 黃帝內經짧뚫 서울 고문사 p 2 3 6, 3 5 8, 1 9 7 4 4 뿔元方 : 諸病源候論校釋, 북경 인민위생출판사, p p 1 8-2 0 1 7 0-1 7 2, 1 9 8 3 5 朴性植외 : 太陰 A 萬根解 J I J L 場과元持常의萬根解 J I J L 場이免훔反應에미치는影響 四象醫學會誌 9 ( 1 ) p p 3 1 5-3 3 7, 1 9 9 7 6 元持常 : 東醫四象新編, 서울 文友社 太 陰 A 要藥 齊 l 方 p 2 1 9 2 9 7 李泰浩 : 東醫四象쓸標醫典 서울 행립출 판 p 1 8 7, 1 9 7 8 8 朴寅相 : 改訂版東醫며象要짧 서울, 소 : 나무 p 1 5 5, 9 李廷燦 1 9 9 7 新四象醫學論 서울 목과토 p p 2 6 4-2 6 5, 2 0 0 1 1 0 韓東錫 : 東醫홉世保元註釋 서울 성리 회출판사, p p 3 0 0-3 0 2 1 9 6 7 1 1 朴性植 : 淸心運子楊의效能과活用에 대한臨味的鼎究 四象뽑學會誌, l O ( 1 ), p p 2 3 5-2 5 2, 1 9 9 8 1 2 洪錫喆 高炳熙 宋 - 炳 : 太陰 A 淸心運 子場의抗스트레스效果에관한實驗的 l i f f 究, 며象醫學會誌 7 ( 2 ), p p 2 2 7-2 4 0 1 9 9 5 1 3 金達來 高炳熙, 宋 - 炳 : 太 I 쫓 A i 품心 팬 子場과淸 R i P i 寫 J J H 易의免 1 흥反應과抗알레 르기效果에관한實驗的附究 慶맺얻햄醫 大論文集, 1 4 ( 2 ), p p 1 3 1-1 6 0 1 9 9 1 1 4 젠炳 - 李濟馬造作 X 廠集 서울, 파 란들 p 1 7 0 p p 7-1 8 2, 2 3 5-2 3 7, 2 0 0 2 1 5 김하원 : 면역학사전, 서울 서울시립대학교출판부, p 1 3, 2 0 0 1 1 6 서울대학교의과대학 : 연역학 서울 서 울대출판부, p p 1 2 3-1 4 l 1 9 8 7 1 7 이연태 : 최신연역학 서울 집문당 p p 2 6-3 5, 3 6 7-3 8 8 1 9 8 5 1 8 김세종 : I M M U N O L O G Y, 서울, 고려의학, P l 6 5 P P 1 5 4-1 5 6, 2 6 0-2 6 5, 2 0 0 0 1 9 文希柱 : 免授血淸學 서울, 대학서립, p p 6 7-7 4, 1 9 8 8 2 0 윤형구, 신윤 이상학외 : 알레르기성 천식환자에있어서투베르쿨린피부반응 검사와 C y t o k i n e 의변화 결핵및호홉 기질환 4 6 ( 2 ), p p 1 7 5-1 8 4, 1 9 9 9 1 7 8

- 太陰 A i 휩心훌子훌의抗 a l l e r g y 作用에훤한를앓的뻐 - 2 1 A b b a s A K L i c h m a n A H P o b e r J S : C e l l u l a r a n d m o l e c u l a r i m m u n o l o g y P h i l a d e l p h i a S a u n d e r s p p 2 5 0-2 7 7 1 9 9 7 2 2 P a l m a C a r l o s A G P a l m a C a r l o s M L C o n c e i c a o S M A l c i n d a M : C y t o k i n e s a n d a s t h m a J I n v e s t A l l e r g o l C l i n I m m u n o l 7 ( 5 ) p p 2 7 0-2 7 3 1 9 9 7 2 3 조상헌 송숙희, 김윤근, 지영구, 최동철, 윤호주등 아토피환자에서의 I g E 항체 생성조절기전 : 말초혈액림프구의 I L - 4 I F N - Y 생성의불균형 알레르기 1 5 ( 2 ), p p 2 1 0-2 1 2 1 9 9 5 2 4 어수택 정성환, 이상우, 김현태, 김용훈, 박춘식 : 천식환자의기도내 c y t o k i n e s 표현에대한연구 결핵및호흡기질환 4 2 ( 1 ) p p 2-3 1 9 9 5 2 5 박수영, 조영주 : 내인성천식및외인성 천식환 c A } 의 C D 8 양성세포에서 n t e r l 따십 n - 4 및 i n t e r f e r o n g a m m a 생산, 천식및 알레르기 2 1 ( 1 ) p p 6 6-6 7 2 0 0 1 2 6 宋 - 炳 : 誠꼈宋一炳敎授華며紀念論 X 集, 서울 誠흉宋一炳敎授華甲紀念論 X 集주 l 府委 f t 會 p 4 5 1-4 6 3 2 0 0 0 2 7 R o i t t 1 M : E s s e n t i a l i m m u n o l o g y C h i c a g o B l a c k w e l l p p 1 9 3-1 9 9 1 9 8 8 2 8 이숙영 윤형규 신윤외 : 기관지천식에, 서기관지폐포세척액내 I L - 1 0 과기도 염증정도의연관성 결핵및호홉기질환, 4 6 0 ), p p 4 4-5 2 1 9 9 9 2 9 차은수 정회재 정승기, 이형구 : 소청 룡탕이 A s t h m a m o d e l 내의 y t o k i n e 에미치는영향 경희한의대논문집 2 3 ( 1 ) p p 7 1-8 8 2 0 0 0 3 0 B a r n e s P J L i m S : I n h i b i t o r y c y t o k i n e s i n a s t h m a M o l M e d T o d a y 4 ( 0 ) : 4 5 2-4 5 8 1 9 9 8 3 1 Z u a n y - A m o r i m C H a i l e S L e d u c D e t a l : I L - l O i n h i b i t s a n t i g e n - i n d u c e d c e l l u l a r r e c r u i t m e n t i n t o t h e a i r w a y s o f s e n s i t i z e d m i c e J C l i n I n v e s t 9 5 : 2 6 4 4-2 6 5 1 1 9 9 5 3 2 鄭奎萬 : 알레르기와韓方, 서울, 第一 路 p 1 5 3 1 1 9 9 0 3 3 O ' N e i l D S w a n t o n C J o n e s A M e d d P G R a y m e n t N C h a i n B : I F N - g a m m a d o w n - r e g u l a t e s M H C e x p r e s s i o n a n d a n t i g e n p r o c e s s i n g i n a h u m a n B c e l l l i n e J I m m u n o l 1 6 2 ( 2 ) : 7 9 1-7 9 8 1 9 9 9 1 7 9 -