임상병리검사과학회지 : 제 31 권제 2 호 1999. Potato Dextrose Corn meal Tween-80 agar 에서 Trichophyton mentagrophyte 아형의진균학적성상 대구가톨릭피부과의원부설진균의학연구소 대구보건대학임상병리과 * 방용준 이건섭검쌍용 * Gross and Microscopic Findings of subtype of Trichophyton mentagrophytes on Potato Dextrosε Com meal Tween-80 agar Bang, Young Jun., Lee, Gun Sup.,* Kim, Ssang Young* Institute 01 Medical Mν cology Catlwlic Skin Clinic. Taegu Dept. Clinical patlwlogκ Taegu health college* Gross and microscopic findings of their colonies were examined. The colonial morphology and microscopic appearance were compared with those of subtype Trichop 매 ton(t) mentagrophytes on potato dextrose corn meal Tween-80 agar (PDCT). The results were as fol1ows; T. mentagroph,ν tes was c1assified into 4 subtypes granular type, powdery typered purple type and cottony type, according to the color and surface morphology. The granular type showed a fawn brown color with coarse granular grossly, and many c1ub-shaped macroconida and grape shaped microconidia but many spiral hyphae microscopically. The powdery type showed a yellow brown colored, a fine powdeη surface, each colony being surrounded by a mild cottony border and c1ub-shaped macroconidia, round microconidia and spiral hyphae microscopically. The persicolor type showed a characteristic red purple color with cottony and powderγ surface, and microconidia and spiral hyphae but chlamydoconidia microscopically. The cottony type showed abundant whitish cottony surface and round microconidia and spiral hyphae microscopically. All strain showed positive hair perforation and urease test. Key Words : T. menfagrophyfes, Granular type, Powdery type, Persicolor type, Cottony type - 120 -
1. 서론 1 주, Microsporium persicolor 1 주, T. tonsurans 2 주를 J ansson Laboratoη 에서분양 진균의동정은전통적으로 Sabourand Dextrose agar (SDA) 에서의집락의육안적및현미경소 받아계대배양중인것을사용하였고환자에서분 리한전형적인 T. rubrum 과미착색주각각 2 주 견을기초로동정하고있다 (Elewski and 를사용하였다. 실험에사용한 T. mentagrophytes Hanzen, 1989). 그러나 SDA 배지는일반적으로 는환자에서분리된것을계대배양하여보관중인 배양균의분생자형성이불량하고오랫동안배양 4 가지형별로각각 20 주씩실험에사용하였다. 하면융모성변이 (pleomorphism) 가생기며사용한배지는 T. mentagrophytes 의집락의육 Trichophyton rubrum, T. mentagroph:νtes, T. 안적및현미경소견을관찰하기위하여 PDCT megninii, T. tonsurans 등동일한균종이라도 집락의모양이다양하게나타나며서로다른균 종이라도비슷하게나타나는경우가있다. 이러 한것을감별하기위하여 corn meal agar, urease 시험과모발천공시험 (Hair perforation test) 등을이용하여동정하고있다 (Elewski and Hanzen, 1989; George and Camp, 1957). 이러한 SDA 배지의단점을보완하기위하여 (potato dextrose agar 20g, corn meal agar 20g, peptone 4g, Tween 80 6ml, chloramphenicol 500mg) 에증류수 1000ml 넣어서사면 배지를만들어사용하였고영양분요구성을보기 위하여 Trichophyton media 1, II, lli, N, VI 과 Christensen urea agar 및모발천공시험을 위하여소아의머리카락을잘라고압증기멸균사 용하였다. 가톨릭피부과부설진균연구소에서고안한 PDCT 배지에 T, mentagrophν tes 4 가지아형 potato dextrose corn meal tween -80 agar 을접종하여배양 3 일, 7 일, 14 일에집락의육 (PD 띠를현재널리사용하고있다 ( 방등, 1995). 안적소견을관찰하였고현미경소견은슬라이드 PDCT 배지의장점은 SDA 구별이되지않는 T 배양을하여관찰하였다. rubrum 과 τ ηlentagrophν tes 를 KOH 흡수유 무로감별할수있고, τ mentagrophν tes 의아 형인과립형 (granuler), 분말형 (powdeη) 은 SDA 에서쉽게구별이되지않으며동정이어려 운도실형 (persicolor), 융모형 (downy) 을쉽 III. 실험결과 표준균주의시험소견 게구별할수있는장점이있다 ( 방등, 1995). 표준균주 T. megninii, M. persicolor, T. 이에저자들은 T, mentagroph.νtes 를아형별 tonsurans, T. rubrum 의영양요구성및모발 로 PDCT 배지에배양하여시간의경과에따른천공시험결과는다음과같다 (Table 1). 집락의변화를육안적소견및현미경소견을관 T. megninii 는 Trichophyton media 에서는 찰하고여러가지감별배지를사용하여비교관 찰하였다. W 을제외하고는집락의성장이좋았다. Urease 시험에서는처음에는음성에서 5 일부터연한분 홍색으로양성반응을보였다. 모발천공시험은음 II. 실험재료및방법성이었다. M persicolor 는 Trichophyton media 에서는전부발육이잘되었으며 urease 시험은 실험에사용한균주는표준균주 T. megninii 2 일부터강한분홍색으로변하였으며모발천공검 - 121 -
Table 1. Differentiation of T. mentagrophytes and other dermatphates Test M. persicolor T. tonsurans T. rubrum T. megninii (n=l) (n=2) (n=2) (n=l) Urease test Positive Positive Negative Negative Cornmeal with White White Red Red dextrose agar Hair perforation Positive Positive Negative Negative KOH absorption Negative Negative Positive Positive Trichophyton media ** H m W W /- * 1, caseim agar; 11, caseim agar with inositol; m, caseim agar with inositol 없 ld thiamine; N, caseim agar with thiamine **, no inhibition;, mi1d inhibition;, moderate inhibition. 사는모발을천공하였다. 집락의모양과영양요형, 도색형의각각 20주씩선택하여검사한소견구시험이비슷하여 37 에서배양한결과발육이은다음과같다. 과립형은 PDCT에서 2 일부터불량하였다 T. tonsurans는 Trichophyton 발육하기시작하여 3 일부터분말상태가되면서 media 1, II 에서는집락의발육이불량하였고배면에연한갈색의착색이나타나기시작하였으 m, N 에서는발육이잘되었다. Urease 시험에서며 7 일후미세한분말이담황색의과립으로변는모두양성을나타내었고모발천공검사는모발하였으며배지전면에균일하게분포하였고 14 을천공하였다. T. rubrum은 Trichophyton 일후에는과립이크게뭉쳐져표면은거칠며배 medin에서발육이잘되었으며 urease 시험은면은진한갈색의착색이나타난다. 현미경적소 음성이었고모발천공검사에서모발을천공하지않았고 corn meal agar with dextrose agar에서도다른균주는전부흰색의집락을볼수있었는데 T. rubrum은적색의착색을볼수있었 견에서대분생자는모든균주에서볼수있었으며배양 3 일부터관찰되었고 7 일에가장왕성하게형성되었으며 14 일후에는대분생자끝부분에서균사가생성되면서감소하기시작하였다. 다. 또한 PDCT 배지에서집락에 KOH 용액을떨 대분생자의표면은매끈하며 4-5 개의격벽을볼 어트려본결과 T. rubrum 만유일하게흡수하였 수있었고소분생자는원형으로포도송이처럼균 다 (Table 1). 사에양쪽에형성되었고코일모양의균사도볼수있었다. Trichophyton media전부에서잘발 T. mentagrophytes 아형별시험소견육되었고 urease 시험에서도 3 일부터강한양성반응을보였고모발천공시험에서도모발에왕성 T. mentagrophytes아형과립형, 분말형, 융모한천공을나타내었다 (Table 2, 3). - 122 -
Table 2. Comparison of urease, corn meal dextrose agar and hair perforation test against T. metagrophν tes Subtypes of T. mentagroph,ν tes Test Granular Powdery Persicolor Cottony (n=20) (n=20) (n=20) (n=20) Urease test Positive Positive Negative Positive Hair perforation test Positive Positive Negative Negative Trichophyton media ** H m W * 1, caseim agar; 11, caseim agar with inositol; m, caseim agar with inositol and thiamine; IV, caseim agar with thiamine. **, no inhibition;, mild inhibition;, moderate inhibition. Table 3. Characteristies of grossand microscopic finding in granular T. mentagroph,ν tes Characteristics Gross Surface texture Surface color Reverse color Microscopic morphology* Macroconidia Microconidia Coi1ed hyphae Chlamydoconidia Colong on potato dextrose cornmeal-tween 80 agar Day3 Day7 Day 14 Powdeη Y el10w -brown - absent, small amounts, intermediate, abundant Granular Fawn-brown Yel1ow-brown Granular Fawn-brown Dark-brown 분말형은 PDCT배지에서 2 일부터발육하기시작하여배양 3 일부터융모상태의백색이 6 일까지계속되고 7 일부터집락의중앙부위부터미세한연한황색의분말을형성하고배면에연갈색의착색이나타나기시작하였고 14 일후에는배지전변에분포하면서집락의가장자리는희색의융모상띠를볼수있었다. 현미경소견은코일모양의균사와소분생자는 3 일후부터볼수있었고소분생자형성모양은균사의양쪽에단일성 으로형성되었고모양은원형이었다. 대분생자는 6 일부터극소수가형성되면서과립형의모양과같았다. Trichophytes media전부에서잘발육하였고 urease 시험에서는 4 일부터양성반응을나타내었고 7 일에강한양성을나타내었으며모발천공도과립형보다적은수의모발을천공하였다 (Table 2, 4). 융모형은 PDCT에서배양 2 일부터발육하기 - 123 -
Table 4. Characteristies of grossand microscopic finding in powdery T. mentagrophν tes Characteristics Gross Surface texture Surface color Reverse color Day3 Potato dextrose commeal-tween 80 agar Cottony Colorless Day7 R w M 뻐c R 빼w B m m 빼때m v n R M 써ω% ιd ω떼day14 빼따때뼈Y m v w n m 1 Macroconidia morphology* Macroconidia Microconidia Coiled hyphae Chlamydoconidia absent;, small amounts;, intermediate;, abundant Table 5. Characteristies of grossand microscopic finding in cottony T. mentagrophν tes Characteristics Gross Surface texture Surface color Reverse color Colony on potato dextrose cornmeal-tween 80 agar Day3 Day7 Day 14 Cottony Colorless C 따M 따1씨삐 m빼얹αcottony Colorless or Y ellow -brown Macroconidia morphology* Macroconidia Microconidia Coiled hyphae Chlamydoconidia absent;, small amounts;, intermediate;, abundant 시작하여배양 3 일후융모양의집락을볼수있었고 7 일이후에는전체적으로흰색의융모상으로뒤덮였다. 집락의성장속도는보통이며배면의착색은 7 일부터연갈색이나타나는균주와착색이나타나지않는균주가 6주가있었다. 현미경소견은과립형과분말형에비해소분생자생성이적었으며대분생자는볼수없었다. 소분 생자는균사의양쪽에단순성으로배열된형태이고모양은원형과타원형을볼수있었다. Trichophyton media전부에잘발육하였고 urease 시험은 4 일부터약한양성반응을나타내다가 7 일이후에중정도의양성반응을나타내었다. 모발천공검사에서는모발전변에많은균사를볼수있었으나모발천공은적었다 (Table 2, 5). - 124 -
Table 6. Characteristics of gross and microscopic finding in persicolor T. mentagrophν tes Characteristics Colony on potato dextrose commeal-tween 80 agar Day3 Day7 Day14 Gross Surface texture Surface color Reverse color Cottony Color1ess Powdeη Or cottony Ligh t purple Red wine to browm Powdeη Or cottony Red purple Dark red brown Macroconidia morphology* Macroconidia Microconidia Coiled hyphae Chlamydoconidia absent;, small amounts;, intermediate;, abundant 도실형은 PDCT 배지에서 2 일부터발육이시작 되었고 3 일부터융모형태의흰색의균사를형성 1986). T. mentagrophytes 는사람과동물에감 염을일으키는동물친화성균과사람에게만감염 하였다. 배양 7 일부터연한자주색의착색과조을일으키는사람친화성으로구분할수있으며 밀한융모가형성되었고, 배면에는자주색의착 과립형은동물친화성이고나머지는분말형, 도실 색을보여 T.rubrum 과흡사한착색을나타내었 형, 융모형은사람에게만병을일으키는사람친 다. 배양 14 주에는짧은융모에미세한분말이 형성되면서집락의색깔은진한자주색으로변하 화성으로발생부위에따라균의 형태도차이가 였다. 현미경소견은다른 3 형보다소분생자의생 있다 ( 김, 1990; 서와김, 1984). T. mentagroph,ν tes 의아형의분류는 Georg (1954) 는 성이적으며균사는폭이넓은것이특정이며균사양쪽에단순성소분생자를형성하였다. Trichophyton media에서는전부에서발육이양호했으나다른 3 형보다는발육이늦었다. Urease 시험에서는양성반응이다른형보다늦었다. 모발천 융모형과과립형으로분류하고이들사이에가역적으로변화할수있다고하였고서와김은 (1984) 우리나라에서분리된 T. mentagrophν tes 의완전형의에대한조사에서 1/10 희석 Sabouraud 배지에서과립형, 분말형, 융모형으 공도다른형보다적고천공양상도뚜렷하지않 로구별하였다. T. mentagroph,νtes는 SDA 에 았다 (Table 2, 6). 배양시배변의착색이 T. rubrum가유사할때가 흔히 있으며, 현미경소견도각각의특징적인소 IV. 고 찰 분생자와균사가나타나지않아서정확학동정이어렵다. 이런경우에 corn meal dextrose agar T. mentagroph,ν tes는동불과사람에감염을와같은감별배지를사용하여 T. rubrum의경우잘일으키는균이며우리나라에서는 T. rubrum 집락의착색유무에따라서감별하기도하며그다음으로많이분리된다 ( 김, 1990; 김등, 외에도 urease시험이나모발천공시험으로 Tricho- - 125 -
phyton 균속을동정하는배지를사용하여동정하수있다. 본실험에서집락의모양및현미경소 기도한다 (Elewski and Hazen, 1989; George and Camp, 1957; George, 1954; Ajello and 견은 T. rubrum 과홉사하였으나 KOH 흡수시험 결과 T. rubrum 은 KOH 용액을흡수하였고융모 George, 1957; Rebell and Taplin, 1970; 형은흡수하지않아쉽게구별할수있었다. 또 Merz et al., 1972; Merz et al., 1974). PDCT 한 urease 시험과모발천공시험에서융모형은 배지는이러한검사를하지않고초대분리집락 양성반응을나타내었으나 T. rubrum 은음성반응 에 KOH 용액홉수유무로간단하게 T. ruburm 을나타내었다. 도실형은집락의양상이 T. 과 T. mentagrophytes 를동정할수있고또한 rubrum 의전형적인형과 T. tonsurans 와비슷 SDA 배지에서동정이불가능한 C. albicans 가한양상의집락으로연한자주색의조밀한짧은 후막포자를형성함으로동정이가능하며 SDA 배균사를나타내어구별이어렵지만 ( 김, 1991) T. 지성분중 dextrose 의양때문에생기는융모성 rubrum 과의구별은 KOH 흡수가되지않아쉽게 변이를억제할수있는배지로현재널리사용하 구별할수있었고 T. tonsurans 는 Tichophyton 고있는배지이다 ( 방동, 1995). media 의 1, II 에서현저하게억제되어구별할 본연구에서는 SDA 배지에서구별이되지않수있었다. SDA 배지에서는 T. mentagrophytes 는 T. mentagrophytes 의아형을 PDCT 배지에아형중도실형과융모형은 T. rubrum 의무색주 서는 4 가지의아형으로분류할수있었으며이와황색주는모발천공검사및 urease 시험을병 들은과립형, 분말형, 도실형및융모형으로집 행해야정확한구별이가능하였으나 PDCT 배지 락의형태상비교적용이하게구별이되었으며에서는 KOH 홉수유무로간단히구별할수있 현미경소견또한비교적특정적인소견을나타었다. PDCT 배지에서는 T. mentagrophytes 의 4 내었다. 과립형은빨리성장하며표면은연황색가지아형의구별이뚜렷하였고, 집락이 KOH 용 내지등황색의과립으로덮여있고배면은진한액을흡수하지않아 KOH 용액을홉수하는 T 갈색을나타내며대분생자는표면에돌기가없어 rubrum 을동정하기위하여 urease 시험, 모발 집락의성상이비슷한 Microsporum 균속의대분 천공시험없이 KOH 홉수유무로간단히동정할 생자표면에돌기가있는 M. 9νrpseum 과 M. 수있어진균동정에적합한배지로사료된다. persicolor 로구별할수있다. 분말형은 SDA 초 기발육에서는과립형과분말형의구별이집락의 가장자리에융모성균사의유무와과립의형태로 V. 결론 구별할수있으나 14 일이상배양하면과립형우리나라에서많이분리되는 T. mentagrophν tes 과구별이어렵지만 PDCT 배지에서는집락이과아형별로 potato dextrose com mea1 Tween -80 립형과분말형간에뚜렷한차이를나타내었으며 agar 에배양하여균집락의형태및현미경적소 현미경소견으로소분생자가덩어리모양을나타견을비교관찰한것은다음과같다. 내는과립형과다른단일로형성되어차이가있과립형은 PDCT 에서 3 일부터분말상태가되 었다. 융모형은집락의모양이 T. rubrum 의미면서배면에연한갈색의착색이나타났고 7 일 착색균주와비슷하여 SDA 배지에서구별이어후미세한분말의담황색의과립으로변하였고 려운경우가있어 urease 시험양성유무, com 14 일후에는과립이크게뭉쳐져표면은거칠며 meal dextrose agar 에서집락의색으로구별할배면은진한갈색의착색이나타난다. 현미경소 - 126 -
견으로대분생자는모든균주에서배양 7 일에가장많이볼수있었다. 대분생자의표면은매끈하며소분생자는원형으로포도송이처럼형성되었고코일모양의균사도볼수있었다. 분말형은 PDCT배지에서 7 일부터집락의중앙부위부터미세한연한황색의분말을형성하고가장자리는융모성띠를볼수있었고배면에연갈색의착색이나타나기시작하였다. 현미경소견은코일모양의균사와소분생자를볼수있었 에서진균학적동정에관한연구. 임상병리검사학회지, pp27-1, 1995. 4. 김기홍 : 우리나라의백선균. 영남의대학술지 7: 13-26, 1990. 5. 김영표, 전인기, 김승훈 T. verrucosum에의한두부독창과역학적관찰. 대피지 24: 687-691, 1986. 6. 서순봉, 김기홍, 방용준 : 의진균학, 대학서렴, pp 28-62, 1994. 고소분생자형성모양은균사의양쪽에단일상으 7. 서순봉, 김상원 T. mentagrophytes의완전형로형성되었고대분생자는 6 일부터극소수가과그감염증. 대피지 22: 610-618, 1984. 형성되었다 8. George LK The reiationship between 융모형은 PDCT에서 7 일이후에전체적으로 the downy and granular forms of 흰색의융모상과배면에 연갈색의착색이나타 났다. 현미경소견은소분생자생성이적었으며 대분생자는볼수없었다. 도실형은 PDCT배지에서 배양7 일부터 연한 T. πtentagrophytes. J Invest Dermatol 23: 123-141. 1954. 9. Ajello L, George LK In vitro hair culture for differentiating between 자주색의착색과조밀한융모가형성되었고, 배변에는자주색의착색을보여 T. rubrum과흡사한착색을나타내었다. 현미경소견은다른 3 형보다소분생자의생성이적으며균사는폭이넓은것이특정이였다. T. mentagrophytes의모든형이 Trichophyton media에서발육이되었으며 urease 시험에서도양성반응을보였고모발천공시험에서도모발을천공하였다. 참고문헌 1. Elewski BE, Hazen PG : The superficial mycoses and the dermatophytes. J Am Acad Dermatol 21: 655-673, 1989. 2. George LK, Camp LB: Routine nutritional tests for the identification of dermatophytes. J Bacteriol 74: 113-121, 1957. 3. 방용준, 이건업, 노병의 : 새로고안한배지 atypical isolates of T. mentagroph,νtes and T. rubrum. Miνcopath ~ν col Appl 8: 3-17, 1957. 10. Rebell G, Taplin D Dermatophytes Their Recognition and Identification. 2nd ed, University of Miami Press, Coral Gables, Florida, pp 1-118, 1970. 11. Merz WG, Llord KO, Silva-Hunter M Characterization of T. mentagroph,ν tes and its diffusible pigment. Sabouraudia 10: 86-93, 1972. 12. Merz WG, Irena W, Silva-Hunter M characterization and reactions of c1inica1 isolates of T. mentagrophytes and T. rubrum which produce a diffusible brownish pigment. Sabouraudia 12: 7-11, 1974. 13. 김기홍 T. tonsurans 의진균학적소견. 영남의대학술지 8: 45-51, 199 1. - 127 -