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- 주옥 제갈
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1 주요유방염세균의검출및 항생제감수성검사 임숙경
2 1. 검사시료 1. 시료채취 유방염우유 2. 체세포수측정 3. 대상세균 - Staphylococcus aureus - Coagulase negative staphylococci -Escherichia coli
3 3. 균분리방법 E. coli CHEC Agar 직접도말 ( h) 보라색집락 EMB Agar 배양 금속성광택집락 MacConkey agar 순수분리 분홍색집락을 Vitek, IMViC, API S. aureus/cns Blood agar Gram S. Mannitol salt agar 또는 Baird Parker+RPF(Rabbit plasma fibrinogen 직접도말 ( h) MSA/ BPA TSA 순수분리 Coagulase test PCR 동정
4 Escherichia coli CHEC Agar 직접도말 ( h) 보라색집락 EMB Agar배양 금속성광택집락 MacConkey agar 순수분리 분홍색집락을 Vitek IMViC, API Chromogenic E. coli agar EMB agar MacConkey agar
5 Staphylococcus aureus Mannitol salt agar 또는 Baird Parker+RPF(Rabbit plasma fibrinogen 직접도말 ( h) MSA/ BPA TSA 순수분리 Coagulase test PCR 동정 Mannitol salt agar Baird-Parker agar Coagulase test
6 S. aureus : chroms. aureus agar
7 Coagulase negative staphylococci S. auricularis (mannitol : negative) S. haemolyticus (mannitol: negative)
8 Coagulase negative staphylococci S. xylose (mannitol : variable) S. simulans (mannitol : variable)
9 Staphylococcus spp.& S. aureus PCR Staphylococcus spp. PCR : 791bp Lane 1-10: S.aureus Lane 12: S. simulans Lane 13: S. auricularis Lane 14: S. xylosus Lane 15: S. haemolyticus S. aurueus PCR : 638bp Lane 3-10: S.aureus Lane 14,15: S.aureus
10 항생제감수성검사 Organism Method Medium Incubation Q/C strains E. coli Disk diffusion Mueller- Hinton agar 35 /16~18h - E. coli ATCC E. coliatcc35218 (β-lactam/ β-lactamase inhibitor) S. aureus /CNS Disk diffusion Mueller- Hinton agar 35 /16~18h oxacillin, methicillin, and vancomycin for 24h -S. aureusatcc E. coliatcc35218 (β-lactam/ β-lactamase inhibitor)
11 5. 항생제감수성검사 : 디스크확산법 검사방법 배지 : Mueller Hinton agar 접종 : 0.5 McFarland 현탁액 배양 : 호기조건에서 35±2 에 16-18시간배양 균접종액의준비
12 5. 항생제감수성검사 : 디스크확산법 판독기준 : CLSI(Clinical and Laboratory Standard Institute) Control 균주 : E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC S. aureus ATCC 29213
13 5. 항생제감수성검사 : S. aureus 판정기준 VA Vancomycin /23.75 SXT Trimethoprim/sulfamethoxazol TE Tetracycline PRL Pirlimycin unit P Penicillin NV Novobiocin OX Oxacillin GM Gentamicin E Erythromycin ENO Enrofloxacin CC Clindamycin C Chloramphenicol CF Cephalothin XNL Ceftiofur FOX Cefoxitin /10 AmC Amoxicillin/clavulanic acid S I R 농도 (ug) 약어항생제
14 5. 항생제감수성검사 : Coagulase negative Staphylococci 판정기준 - 15 VA Vancomycin /23.75 SXT Trimethoprim/sulfamethoxazol TE Tetracycline PRL Pirlimycin unit P Penicillin NV Novobiocin OX Oxacillin GM Gentamicin E Erythromycin ENO Enrofloxacin CC Clindamycin C Chloramphenicol CF Cephalothin XNL Ceftiofur FOX Cefoxitin /10 AmC Amoxicillin/clavulanic acid S I R 농도 (ug) 약어항생제
15 5. 항생제감수성검사 : E. coli 항생제 약어 농도 (ug) R 판정기준 I S Amikacin AN Amoxicillin-clavulans acid AmC 20/ Ampicillin AmC Cefepime FEP ceftazidime CAZ Ceftiofur XNL Cephalothin CF Chloamphenicol C Enrofloxacin ENO Gentamicin GM Kanamycin KM Nalidixic acid NA Neomycin NA Streptomycin SM Tetracycline TE Trimethoprim/sulfamethoxazol SXT 1.25/
16 Disc diffusion 에영향을미치는요소 1. MH agar - sulfonamide, trimethoprim, tetracycline의 inhibitor 적다 - 대부분의세균이잘자람 2. Thymidine, thymine 의농도 - 농도가높을경우 zone size 작아지고불명확하게나타나 false-resistant 결과초래 3. cations 의농도 -Mg 2+, Ca 2+ 의농도는 P. aeroginosa의 aminoglycoside, 많은균주의 tetracycline의결과에영향을미침 ( 농도가높은경우 zone size가작아지고농도가낮을경우 zone size가커짐 ) - Control 균주를사용하여각lot 별 MH agar 검사 ( 허용범위여부 )
17 Disc diffusion 영향을미치는요소 4. MH agar 준비 - 배지두께 : 4mm(100mm:25-ml) - ph : 수분 : 과도한수분이있을때에는 분방치 5. 디스크보존 - 제조사의지시에따라보관 6. 접종균의탁도 McFarland - 증균 : 모든균주는증균배지에서배양, 검사전날접종 : APP,HPS, S.suis, C. jejuni는 agar에서증균 7. 접종 - 탁도를조정한후 15 분이내에접종
18 판독시주의사항 1. 오염여부확인 2. 증균여부확인 3. 항생제감수성검사표준균주 : 허용범위내유무확인
19 항생제감수성검사 Too close
20 항생제감수성검사 Too close to edge Disc push into agar
21 항생제감수성검사 Bacterial growth is less dense Disc was moved after it touch agar
22 주요항생제내성균 메티실린내성황색포도상구균 : Oxacillin, Cefoxitin 반코마이신내성황색포도상구균 : vancomycin 최종확인 : MIC 측정 (E-test)/disc diffusion 내성유전자확인
23 내성균보관및관리 1. 동결보관 - bead 이용 - Skim milk, glycerol 이용 - Campylobacter spp. : TSBGB 이용 * deef freezer : -70 를일정하게유지 2. 내성균관리번호 고유번호체계 : 기관명 - 년도 - 기원 - 균종 - 각기관에서분리되는 일련번호 * 각기관고유번호저장 항생제감수성검사시고유번호체계로정정 * 모든균주는 3 년이상보관
24 실습 ( 금 ) 오전 (10:-12:00) 균종별선택배지 colony 관찰 Colony PCR 수행 ( 금 ) 오후 (13:10-14:50) Disc diffusion 검사 - 탁도조정, spread( 장비이용 ) - 판독 : 장비, 육안판독 균stock 방법 표준균주수령 : 광역시
25 토의 년검사계획 ( 안 ) - 농가당 3 개이하로입력할것 2. 개선내용 3. 건의사항
26 감사합니다!
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대한임상검사학회지 : 38 권제 1 호, 38-44, 2006 포도구균의 Erythromycin 유도성 Clindamycin 내성검출을위한간편한디스크확산법의유용성 서울대학교병원진단검사의학과 1, 서울대학교의과대학검사의학교실 2 주세익 1 이현 1 임규상 1 김의종 1, 2 An Easy Method of Disk Diffusion Antibiotic Susceptibility
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Ann Clin Microbiol Vol. 19, No. 2, June, 2016 http://dx.doi.org/10.5145/acm.2016.19.2.48 pissn 2288-0585 eissn 2288-6850 Distribution and Antimicrobial Resistance of Streptococcus pneumoniae at Four University
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제출문 질병관리본부장 귀하 이보고서를 균혈증과요로감염원인균의내성실태및내성기전연구 ( 서울대학교의과대 학 / 김의종 ) 과제의연구결과보고서로제출합니다. 2006. 1. 25 주관연구기관명 : 서울대학교의과대학 주관연구책임자 : 김의종 제 1세부과제명 : 균혈증및요로감염을일으키는주요원인균의내성실태 ( 제1세부연구기관 / 세부과제책임자 ): 서울대학교의과대학 /
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理 葉 CNFH-88-04 行 87 年 9 1 88 年 6 30 類 葉 Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus mutans Streptococcus sanguis Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Candida
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