fm

Size: px

Start display at page:

Download "fm"

종준 반
5 years ago
Views:

pissn 1229-1153 J. Fd Hyg. Safety Vol. 29, No. 3, pp. 228~233 (2014) http://dx.doi.org

1 pissn J. Fd Hyg. Safety Vol. 29, No. 3, pp. 228~233 (2014) Journal of Food Hygiene and Safety Available online at 축산물과수산물에서분리된장구균의항생제감수성및유전형분석 김윤정 오미현 김용훈 김순한 박건상 주인선 * 식품의약품안전처미생물과 Monitoring of Antimicrobial Resistance and Genetic Analysis of Enterococcus spp. Isolated from Beef, Pork, Chicken and Fish in Korea Yoon Jeong Kim, Mi Hyun Oh, Yong Hoon Kim, Soon Han Kim, Kun Sang Park, and In Sun Joo* Food Microbiology Division, Ministry of Food and Drug Safety (Received October 24, 2013/Revised March 7, 2014/Accepted August 27, 2014) ABSTRACT - This study was performed to examine antimicrobial resistance of Enterococcus spp. strains from retail raw meat and fish products purchased in Enterococcus spp. strains were isolated from a total of 207 samples (beef, pork, chicken, fish) with contamination rate of 20.8%. The isolated strains were identified as E. faecalis (22 strains), E. gallinarum, E. hirae (5 strains), E. avium (4 strains), E. faecium (3 strains), E. duram, E. casseliflavus (2 strains). Susceptibility to 10 antibiotics was tested, and the highest resistance was observed to tetracycline. And antimicrobial resistance rates were presented below 20% with most of the other antimicrobial agents. The isolated Enterococci from chicken showed higher resistance also to ciprofloxacin and erythromycin, not only to tetracycline, compared to the isolated Enterococci from beef, pork and fish. Sixteen isolates (37.2%) were sensitive to all antibiotics. Four isolates (9.3%) were resistant to 3 or more antibiotics. Vancomycin-resistant enterococci (VRE) was not identified. According to the results of genetic similarity pattern analysis via PFGE and rep-pcr, Enterococci strains showed different patterns from these collected in This indicates that there is no genetic similarity among all the strains. Key words : Enterococci, antimicrobial resistance, raw meat, fish, VRE 서론 Enterococcus는인간의장내에서서식하는장내정상세균총중하나로흔하게식품, 식물, 물과토양에서도분리가된다 1). 전세계적으로분리가되는 Enterococcus spp. 는중요한병원감염균종의하나로알려져있다 2). Enterococcus spp. 는병원감염을야기시키는주요임상미생물로대부분의항생제에자연내성을지니고있으며, 획득내성으로 β-lactam항생제와아미노글리코사이드에저도내성을가지는경우가많다. E. faecium과 E. faecalis에서글리코펩타이드계열항생제의대부분이임상적으로내성을일으키며획득내성중아미노글리코사이드에대한고도내성과 vancomycin 내성이문제가되고있다 3,4). 여러유전자에의해내성을일으키는 vancomycin resistant enterococci (VRE) *Correspondence to: In Sun Joo, Osong Health Technology Administration Complex, 187, Osongsaengmyeong 2-ro, Osong-eup, Heungdeok-gu, Cheongju-si, Chungcheongbuk-do, , Korea Tel: , jis901@korea.kr 는감염치료에제한을두게되어주요한문제가되고있으며, vancomycin 내성의메카니즘으로는 acquired type (vana, vanb, vand, vane, vang, vanl) 또는 intrinsic type (E. gallinarum과 E. casseliflavus/flavescens 종과관련된 vanc) 중하나로설명이된다 5). 항생제내성유전자의전이는유행성균주의단클론성전이나내성유전자의균주간수평전이로가능하다 6). 이러한이유로항생제내성의문제는사람뿐만아니라축산분야에서도내성증가로인한가축의질병치료의어려움을겪고있고내성균의사람에게로의전달가능성이있어공중보건학적으로중요하게대두되고있다 7). 국내에서는 Enterococci에관한연구로임상검체에서 VRE 분리빈도와분리된 VRE를대상으로항균제감수성양상과내성유전자형을규명하는연구 8) 및 VRE의전파에의한감염을막기위해감염관리연구 9) 등이진행되고있고, 식품검체에서는축산물 10,11), 수산물 12,13), 곡물 14), 원유 7), 샐러드 15) 등에서분리한 Enterococcus spp. 에대하여분리율및항생제내성양상및오염도조사에관한연구들이진행되고있다. 228

2 Antimicrobial Resistance and Genetic Analysis of Enterococcus spp. from Retail Food in Korea 229 본연구는시판되는축산물과수산물에서분리한 Enterococcus spp. 의항생제내성여부및다제내성실태를모니터링하고, 항생제내성률변화추세를분석하였다. 또한항생제내성에서중요시되고있는 VRE 유전자검출과 PFGE 및 rep-pcr 분석을통한유전적상관성을확인하여 Enterococcus spp. 오염관리와항생제내성위해평가의기초자료로제공하고자하였다. 재료및방법 재료수집실험에사용된재료들은 2012년 4월부터 7월동안기간내 7차례에걸쳐전국 5권역 ( 서울 / 경기권, 충청권, 경상권, 전라권및강원권 ) 의슈퍼마켓, 대형마트, 도매시장, 횟집등총 29곳에서구입을하여사용하였다. 구입한시료들은각각축산물인소고기 52건, 돼지고기 54건, 닭고기 51건과수산물인횟감류 50건 ( 광어, 우럭, 도미등 ), 총 207건을구입하여아이스박스에넣어 4 o C 이하로하여실험실로 5시간이내에운반한후 Enterococcus spp. 의오염도분석및항생제검사를실시하였다. Enterococcus spp. 분리및확인시험 Enterococcus spp. 를분리하기위하여멸균백에채취한검체 25 g을 6.5% NaCl을포함한 Azide dextrose broth (Merck, Germany) 225 ml에가하고균질기 (BagMixer 400W, Interscience TM, France) 에서 30초간균질화한후 37 o C에서 24시간동안증균배양하였다. 증균배양액을 Enterococcosel agar (BBL TM, USA) 에획선도말하여 37 o C 로 24시간배양하였다. 배양후검은색콜로니로자란집락을선택하여 5% laked horse blood (Oxoid, UK) 가함유된 blood agar에옮겨 37 o C에서 24시간배양하였다. 작은 gray 콜로니를선택하여 VITEK compact 2 (Biomerieux, Inc., France) 로생화학동정을하여최종확인을하였다. 항생제감수성시험항생제감수성시험을위해디스크확산법 (Disk diffusion method) 을사용하였으며방법은아래와같다. 순수분리된 Enterococcus spp. 를각각 Muller-Hinton agar (Oxoid) 에접종한후 37 o C에서 18시간배양하였다. 배양된콜로니를선택한후, 탁도기 (Biomerieux) 를사용하여 0.5 McFarland 가되도록멸균생리식염수에탁도를맞추고멸균면봉으로균액을묻혀미리조제된 4mm 두께의 Muller-Hinton agar (Oxoid) 의전표면에균액을고르게도말하였다. 평판을 3 분간말리고 15분이내에 disc dispenser (Oxoid) 를이용하여항생제디스크 (Oxoid) 를놓은후 37 o C에서 24시간배양한후생육저지환의직경을캘리퍼 (HANDO, Korea) 를사용하여측정하였다. 사용한항생제디스크로는 ampicillin (AMP, 10 µg, Oxoid), gentamycin (GM, 10 µg, Oxoid), amoxillin/clavulanic acid (AMC, 20/10 µg, Oxoid), ciprofloxacin (CIP, 5 µg, Oxoid), penicillin (P, 10 µg, Oxoid), rifampin (RD, 5 µg, Oxoid), erythromycin (E, 15 µg, Oxoid), vancomycin (VA, 30 µg, Oxoid), chloramphenicol (C, 30 µg, Oxoid), tetracycline (TE, 30 µg, Oxoid), 총 10종을사용하였다. 저지환직경에따른결과는 NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standard, 2004) 에준하여감수성여부를판독하였다. 디스크확산법을이용하여 VRE (Vancomycin-resistant enterococci) 로추정되는항생제내성균에대하여최저생육저해농도 (Minimum Inhibition Concentration, MIC) 를 VITEK compact 2 (Biomerieux) 용 AST- P580 card (Gram positive card, Biomerieux) 를사용하여측정하였다. Vancomycin 내성유전자확인디스크확산법에의한내성검사결과주요항생제내성균인 VRE로추정되는균주에대해서 vancomycin 내성균주에가장흔히분포하고있는획득내성유전자인 vana gene, vanb gene, vanc-1 gene 및 vanc-2,3 gene을 multiplex PCR을이용하여확인하였다 (Table 1) 16,17). DNA추출은 DNA 추출키트 (UltraClean Microbial DNA Isolation kit, MO BIO Laboratories Inc., CA, USA) 를사용하여유전자를추출한후 PCR template로사용하였다. Template 5 µl를 PCR premix (AccuPower, BIONEER, Korea) 15 µl와혼합하여 PCR system (PC818 PCR system, ASTEC, JAPAN) 으로 94 o C로 30초간 denaturation, 58 o C 로 1분 annealing, 72 o C 로 1분간 extension 하는반응을 35회반복시행하였다. 증폭산물 10 µl를 2% agarose gel에 30분간전기영동하여증폭산물의생성여부를확인하였다 18). 분리균주에대한유전자상동성확인 Pulsed-Fild Gel Electrophoresis (PFGE) 분리균주를 TSA (Difco) 에접종하여 35 o C에서 18시간배양하고 cell suspension TE buffer (100 mm Tris, 100 mm EDTA, ph 7.5) 에현탁시켜탁도가 MacFarland 15% 가되 Table 1. Sequence of oligonucleotide primers used for detecting van genes Gene Size (bp) Oligonucleotide sequence vana 732 vanb 635 vanc vanc-2,3 439 F 5'- GCATGGCAAGTCAGGTG -3' R 5'- GATTCCGTACTGCAGCCT -3' F 5'- ATGGGAAGCCGATAGTC -3' R 5'- GATTTCGTTCCTCGACC -3' F 5'- GGTATCAAGGAAACCTC -3' R 5'- CTTCCGCCATCATAGCT -3' F 5'- CTCCTACGATTCTCTTG -3' R 5'- CGAGCAAGACCTTTAAG -3'

3 230 Yoon Jeong Kim, Mi Hyun Oh, Yong Hoon Kim, Soon Han Kim, Kun Sang Park, and In Sun Joo 도록균농도를조절하여균현탁액 240 µl와 Lysozyme solution 60 µl를섞은후, 200 µl만취해 SSP solution (1.2% Seakem gold agarose, 10% sodium dodecyl sulfate, proteinase K) 를동량혼합시켜 disposable plug mold (BIO- RAD, USA) 에분주하여 plug를제작하였다. 제작한 plug는 cell lysis buffer (50 mm Tris, 50 mm EDTA, 1% sodiumlauroyl sarcosine) 1.5 ml과 proteinase K 11 µl가담긴 tube 에넣고 54 o C에서 2시간정치시키고반응종료후 plug는 TE buffer로 20분씩 5회세척하였다. plug를 2.5~3 mm 크기로잘라새로운 1.5 ml microcentrifuge tube에옮겨놓고, 20 units의 Sma I이첨가된제한효소용액을 200 µl를가한후 25 o C 항온수조에서 6시간반응시켰다. 반응이종료된 tube는 enzyme buffer를제거후 TE buffer로세척하였고 comb에순서대로 plug slice를붙이고겔을채워전기영동을실시하였다. 전기영동을위해사용된 gel은 Seakem gold agarose 1.3 g을 500 ml flask에넣고 0.5 TBE buffer 130 ml와 thiourea 325 µl를가하여만들어졌으며, Size Marker는 Salmonella breanderup ATCC BAA-664를사용하였다. 전기영동은 CHEF DR-III apparatus (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, USA) 으로 initial switch time 1.0s, final switch time 20.0s, run time 18h, voltage 6 V/ cm, angle 120 o 조건으로실행하였다. Repetitive Element Sequence-Based PCR (rep-pcr) 분석분리주에대한유전적상동성검사는 DiversiLab TM kit (Biomerieux) 를이용하여검사하였다. DNA추출은 microbial DNA isolation kit (MOBIO, CA, USA) 를이용하여추출하였으며추출된 DNA는 nanodrop 1000 (Nanodrop Tachnologies, USA) 으로정량하여사용하였다. PCR 반응액은 rep-pcr master mix (MM1) 18 µl, 10 GeneAMP PCR Buffer 2.5 µl, primer mix 2 µl, AmpliTaq DNA template 2 µl을섞어총 25 µl로하였다. PCR 반응조건은 initial denaturation은 94 o C에서 2분간반응후, 94 o C에서 30초 denaturation, 50 o C에서 30초 annealing, 70 o C에서 90초간 extension을 35회반복한후, final extension은 70 o C에서 3 분간반응하였다. 증폭산물의분석을위해 micro-fluidic chip 과 Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, France) 를사용하여전기영동하고결과는 DiversiLab software (ver. 3.4) 로상동성을분석하였다. 결과및고찰 Enterococcus spp. 분포및분리율분리결과, 소고기, 돼지고기, 닭고기를포함하는축산식품 157건과수산식품 50건, 총 207건의축 수산식품에서장구균 43주를분리하여 20.8% 의분리율을나타내었다 (Table 2). 이결과는 Sung 등 (2013) 11) 과 Cho 등 (2013) 20) 의실험과비교하였을때보다낮은분리율을보여주었고, Kim 등 (2013) 10) 의실험과비교했을때는비슷한분리율을보여주었다. 이들연구마다다른분리율을보여주는이유는실험에사용한시료의구입위치, 구입시기와시험자가사용한부위 ( 내장부위, 근육부위등 ) 에의한차이로보여진다. 시료별분리균주는축산식품중닭고기 51 건에서분리한균주가 17주 (33.3%) 로가장많았고, 다음으로소고기 52건에서분리된균주가 13주 (25.0%), 돼지고기 54건에서분리한균주가 7주 (13.0%), 횟감 50건에서분리한균주가 6주 (12.0%) 의순으로분리되었다. 분리된균종중에는 E. faecalis가가장많이분리되어 22주 (10.6%) 가분리되었고다음으로 E. gallinarum, E. hirae이 5주 (2.4%), E. avium이 4주 (1.9%), E. faecium이 3주 (1.4%), E. duram, E. casseliflavus가 2주 (1.0%) 로축산물과수산물에서다양한종이분리되었다. Günter 등 (1998) 21) 은갈은소고기 (51.7%) 와갈은돼지고기 (48.3%) 시료에서 E. faecalis 와 E. faecium, E. casseliflavus, E. gallinarum, E. duram, E. hirae, E. avium를다양하게분리하였고, Naci 등 (2013) 22) 은닭고기 (13.3%) 시료에서 Enterococci를분리하였다. 또한 Oh 등 (2008) 23) 은넙치, 조피볼락, 참돔, 농어와사육용수등에서 E. faecalis(44.1%), E. faecium(32.4%), E. gallinarum(11.8%), E. duram(5.9%), E. avium(8.8%) 을분리하였다. 분리균주에대한항생제감수성시험축산물과수산물시료에서분리된 43주의 Enterococcus spp. 에대해항생제별내성률양상을알아본결과는 Table Table 2. The distribution of Enterococcus spp. isolated from raw meats and fish Samples (No. of samples) Number of Enterococcus spp. Isolate (%) E. faecalis E. faecium E. avium E. gallinarum E. hirae E. duram E. casseliflavus Total Beef (n = 52) 5 (9.6) ND 1) 1 (1.9) 2 (3.8) 5 (9.6) ND ND 13 (25.0) Pork (n = 54) 5 (9.3) 1 (1.9) 1 (1.9) ND ND ND ND 7 (13.0) Chicken (n = 51) 11 (21.6) ND 2 (3.9) 2 (3.9) ND 2 (3.9) ND 17 (33.3) Fish (n = 50) 1 2.0) 2 (4.0) ND 1 (2.0) ND ND 2 (4.0) 6 (12.0) Total (n = 207) 22 (10.6) 3 (1.4) 4 (1.9) 5 (2.4) 5 (2.4) 2 (1.0) 2 (1.0) 43 (20.8) 1) ND, not detected

4 Antimicrobial Resistance and Genetic Analysis of Enterococcus spp. from Retail Food in Korea 231 Table 3. Antibiotics resistance patterns of Enterococcus spp. isolated from raw meats and fish Antimicrobial agents Number of antibiotic-resistance Enterococcus spp. Isolate (%) Beef (n = 13) Pork (n = 7) Chicken (n = 17) Fish (n = 6) Total (n = 43) Ampicillin 1 (7.7) ND 1) ND ND 1 (2.3) Gentamicin 1 (7.7) 1 (14.3) ND 1 (16.7) 3 (7.0) Amoxicillin/clavulanic acid 1 (7.7) ND ND ND 1 (2.3) Ciprofloxacin ND ND 4 (23.5) ND 4 (9.3) Penicillin 1 (7.7) ND ND ND 1 (2.3) Rifampin 2 (15.4) 1 (14.3) ND ND 3 (7.0) Erythromycin 1 (7.7) 1 (14.3) 6 (35.3) 1 (16.7) 9 (20.9) Vancomycin 1 (7.7) ND ND ND 1 (2.3) Chloramphenicol ND ND 1 (5.9) 1 (16.7) 2 (4.7) Tetracycline 3 (23.1) 4 (57.1) 12 (70.6) ND 19 (44.2) 1) ND, not detected Table 4. Multiple antimicrobial resistance rates of Enterococcus spp. isolated from raw meats and fish Antimicrobials No. of resistance isolates (%) Beef (n = 13) Pork (n = 7) Chicken (n = 17) Fish (n = 6) Total (n = 43) No resistance detected 7 (53.8) 3 (42.9) 2 (11.8) 4 (66.7) 16 (37.2) Resistance 1 CLSI subclasses 5 (38.5) 3 (42.9) 10 (58.8) 1 (16.7) 19 (44.2) Resistance 2 CLSI subclasses 0 (0.0) 0 (0.0) 3 (17.6) 1 (16.7) 4 (9.3) Resistance 3 CLSI subclasses 0 (0.0) 0 (0.0) 1 (5.9) 0 (0.0) 1 (2.3) Resistance 4 CLSI subclasses 0 (0.0) 1 (14.3) 1 (5.9) 0 (0.0) 2 (4.7) Resistance 5 CLSI subclasses 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) Resistance 6 CLSI subclasses 1 (7.7) 0 (0.0) 0 (0.0) 0 (0.0) 1 (2.3) 3과같다. 주요항생제별내성률은 tetracycline이 44.2% 로제일높은내성률을나타내었고, erythromycin에서 20.9% 의내성률을나타내었다. 장구균의축종별항생제내성률은대부분의항생제에대해 20% 이하의내성률을나타내고있으나, tetracycline의내성률은닭고기및돼지고기유래장구균에서내성률이각각 70.6% 와 57.1% 로높은결과를나타내었다. Tetracycline외에도닭고기유래장구균은 ciprofloxacin, erythromycin에대한내성이다른식품유래미생물에비해높은결과를보여주었다. E. faecalis 는 tetracycline에서 54.6% 의내성을보였고, erythromycin 에서 22.7% 의내성을보였으며, E. faecium은 tetracycline, erythromycin, rafampin, gentamycin에서내성을보인균주가 1주씩발견되었다. E. avium은 vancomycin에대해 1 주가내성을나타내어 VRE로추정되었다. Hayes 등 (2003) 24) 의연구에서는축산물에서분리한 E. faecalis와 E. faecium 가돼지고기와소고기보다칠면조와닭고기에서 erythromycin, bacitracin, penicillin과 quinupristin/dalfopristin의항생제에대해서더높은내성을나타내었고, tetracycline에서는닭고기보다돼지고기에서더높은내성률을나타내었다. Kim 등 (2013) 10) 의연구에서는소고기와돼지고기에서분리한 E. faecalis는 tetracycline에서 55.7%, erythromycin에서 50.0% 의내성률을나타내었고, E. faecium은 erythromycin에서 53.8%, rifampin에서 46.1% 의내성률을 보여준결과와비교했을때내성률의수치는연구마다다르지만높은내성을보이는항생제는유사하였음을알수있다. 분리된 Enterococcus spp. 의항생제다제내성현황을알아본결과 (Table 4), 모든항생제에감수성이있는균주는 16주 (37.2%) 인반면 3개이상의항생제에내성을나타내는다제내성균주는 4주 (9.3%) 로나타났다. 균종별에따른다제내성양성은 E. faecalis에서 E-TE가 2주 (4.7%) 였으며, CIP-E가 1주 (2.3%), CIP-E-TE가 1주 (2.3%), CIP-E- C-TE가 1주 (2.3%) 였다. E. faecium에서는 GM-RD-E-TE가 1주 (2.3%) 였으며, E. gallinarum에서는 GM-E가 1주 (2.3%), E. avium에서는 AMP-AMC-P-RD-E-VA 가 1주 (2.3%) 를나타내었다. 이번연구에서는항생제다제내성을나타내는항생제중모두가 erythromycin (E) 와연관된내성양상을보여주었고, 다음으로는 tetracycline (TE) 과연관된내성양상을보여주었다. Park 등 (2010) 27) 연구에서는다제내성양상의대부분이 tetracycline (TE) 과연관된내성양상을보여주었다. Enterococcus spp. 의경우지역에따라약간의차이가있으나 erythromycin, tetracycline, gentamycin에내성을나타내는균주의비율이높은것으로보고되고있다 28). 디스크확산법에의한내성검사결과주요항생제내성균인 VRE로추정되는균주에대해서최저생육저해농도 (MIC) 검사를실시하였다. 미량희석법에의해 VRE의 MIC

5 232 Yoon Jeong Kim, Mi Hyun Oh, Yong Hoon Kim, Soon Han Kim, Kun Sang Park, and In Sun Joo ( 32 µg/ml) 를측정한결과, vancomycin에내성을나타내는 E. avium 1주 (VRE 추정균주, 소고기유래 ) 는감수성균주로판정되었다. 이에따른결과는실험시디스크확산법과미량희석법의실험방법에의한차이로보이며, 재현성이높은미량희석법결과가더정확한것으로사료된다. 주요항생제내성균유전자확인본연구에서디스크확산법에의한내성검사결과주요항생제내성균인 VRE로추정되는균주에대해 multiplex PCR을이용하여내성유전자를확인한결과, Cho 등 20) 의연구에서분리되었던장구균중 VRE 유전자가검출되었던균주는 4주 (vana, vanb가검출 ) 였으나본연구에서는 vana gene, vanb gene, vanc-1 gene 및 vanc-2,3 gene을보유한균주는없는것으로확인이되었다. PCR법에의한 VRE유전자검출은가장특이도가높은검사법이고저도내성을갖는 VRE 검출에도유용하다고알려져있어 28), 최종적으로 VRE 추정균주인 E. avium은 VRE가아닌것으로판명하였다. 분리균주에대한유전자상동성확인 VRE로판정되지는않았으나디스크확산법에서 vancomycin 에내성을나타내는장구균분리주 1주와 Cho 등 20) 의연구에서분리된장구균중 VRE로최종판정되지는않았으나디스크확산법에서 vancomycin에내성을보였던 8주와각각의유전자상동성을 PFGE 및 rep-pcr을수행하여비교분석하였다. 그결과, VRE로추정되는 Cho 등 20) 의분리균주와본연구분리균주모두다른패턴을나타내어유전적연관성이없는것으로나타났다 (Fig 1). PFGE수행결과, PFGE에서는 9주모두 < 80% 의상동성을보여상관성이없는균주로판정되었다 ( 자료는제시하지않음 ). rep-pcr수행결과는 92.2% 의상동성으로유전적상동성이낮았다. 유래식품이서로다른균주로연관성이부족 한것으로분석되었다. 이를통해디스크확산법에서 vancomycin에내성을가지는균주의유래를밝히는데는아직어려움이있으므로지속적인유전자상동성분석을통하여자료의축적이필요할것으로생각이된다. 결론 유통식품중항생제내성균모니터링의일환으로 2012 년유통식품의항생제내성실태조사를실시하였다. 소고기, 돼지고기, 닭고기를포함하는축산식품 157건과횟감인수산식품 50건, 총 207건의축 수산식품에서 Enterococcus spp. 43주 (20.8%) 를분리하였다. 닭고기에서 17주 (33.3%), 소고기 13주 (25.0%), 돼지고기 7주 (13.0%), 수산물에서 6 주 (12.0%) 를분리하였으며, 분리된균주중 E. faecalis가 22주 (10.6%) 로가장많이분리가되었고다음으로 E. gallinarum, E. hirae 5주 (2.4%), E. avium 4주 (1.9%), E. faecium 3주 (1.4%), E. duram, E. casseliflavus 2주 (1.0%) 의순으로축산물과수산물에서다양한종이분리되었다. 분리균주에대한항생제감수성실험결과, 주요항생제별내성률은 tetracycline이 44.2% 로제일높은내성률을나타내었고축종별항생제내성률은대부분의항생제에대해 20% 이하의내성률을나타내었다. Tetracycline외에도닭고기유래장구균은 ciprofloxacin, erythromycin에대한내성이다른식품유래미생물에비해높은결과를나타내었다. 항생제다제내성현황은모든항생제에감수성이있는균주는 16주 (37.2%) 인반면 3개이상의항생제에내성을나타내는다제내성균주는 4주 (9.3%) 로나타났다. 항생제내성균유전자확인결과, vancomycin 내성균주는검출되지않았다. 항생제내성분리균주에대해 PFGE와 rep- PCR을이용해유전자상동성패턴을분석한결과 VRE 로추정되는균주모두다른패턴을나타내어유전적연관성이없는것으로나타났다. 감사의말 이연구는 2013년식약처항생제내성안전관리연구 (13161 소비자 107) 의연구비지원을받아수행되었으며이에감사드립니다. 참고문헌 1) :isolated from beef, 2) :isolated from chicken, 3) :isolated from chicken, 4) :isolated from fish, 5) : isolated from chicken, 6) :isolated from beef, 7) :isolated from fish, 8) :isolated from fish, 9) :isolated from beef Fig. 1. Dendrogram generated after cluster analysis of rep-pcr fingerprints of Enterococcus spp. 1. Giraffa G.: Enterococci from foods. FEMS Microbiology Reviews. 26(2), (2002). 2. Kwon O.M., Kim M.N.: Antibiotics resistance and molecular analysis of Enterococcus isolated from the Han-river in Korea. Korean J. Microbiology. 48(2), (2012). 3. Yoon S.W.: Vancomycin resistant Enterococci (VRE) infection control. The korean nurse. 46(2), (2007).

6 Antimicrobial Resistance and Genetic Analysis of Enterococcus spp. from Retail Food in Korea Charles M.A.P. Franz, Wilhelm H. Holzapfel, Michael E. Stiles: Enterococci at the crossroads of food safety. Int. J. Food Microbiol. 47, 1-24 (1999). 5. Figen CETINKAYA. Tülay ELAL MUS, Gül Ece SOY- UTEMIZ, Recep CIBIK: Prevalence and antibiotic resistance of vancomycin-resistant enterococci in animal originated foods. Turk Vet Anim Sci. 37, (2013). 6. Kwon O.M., Kim M.N.: Antibiotics resistance and molecular analysis of Enterococcus isolated from the Han-river in Korea. Korean J. Microbiology. 48(2), (2012) 7. Kim J.H., Choi S.S.: Prevalence and molecular characterization of tetracycline resistance in Enterococcus isolated from raw milk samples in Korea. J. Fd Hyg. Safety. 27(1), (2012). 8. Lee W.G., Jung M.K., Kwak Y.S.: Vancomycin-resistant Enterococci: Incidence, antimicrobial susceptibility, and resistance genotypes. Korean J. Clin. Pathol. 18(1), (1998). 9. Seo J., Kang J.Y.: Effects of infection control education for families of VRE patients. J. Korean Acad Fundam Nurs. 19(2), (2012). 10. Kim J.Y., Park M.A., Kim J.E., Chae H.S., Park Y.J., Son J.W., Yang Y.M., Choi T.S., Lee J.H.: Isolation frequency and antimicrobial resistance of Escherichia coli & Enterococcus spp. isolated from beef & pork on sale in Seoul, Korea. Korean J. Vet Serv. 36(2), (2013). 11. Sung C.H., Chon J.W., Kwak H.S., Kim H.S., Seo K.H.: Prevalence and antimicrobial resistance of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolated from beef, pork, chicken and sashimi. Korean J. Food Sci. An. 33(1), (2013). 12. Ham H.J.: Enterococcus faecalis and E. faecium isolated in dried marine products. J. Fd Hyg. Safety. 22(4), (2007). 13. Musarrat Jahan, Denis O. Krause, Richard A. Holley: Antimicrobial resistance of Enterococcus species from meat and fermemted meat products isolated by a PCR-based rapid screening method. Int. J. Microbiol. 163, (2013). 14. Kim S.H., Kim J.S., Park J.H.: Antibiotic resistance of Enterococcus isolated from the processed grain foods, Saengsik and Sunsik. Food Sci. Biotechnol. 16(3), (2007). 15. Kang T.M., Cho S.K., Park J.H.: Antibiotic resistances of Enterococcus isolated from salad and sprout. Kor. J. Microbiol. Biotechnol. 36(2), (2008). 16. Dutka-Malen S., Evers S., Courvalin P.: Detection of Glycopeptide Resistance Genotypes and Identification to the Speices Level of Clinically Relevant Enterococci by PCR. J. Clin. microbiol. 33(1), (1995). 17. 식품의약품안전청 : 가축축산물내주요항생제내성실태조사및평가, 2008 년도식품의약품안전청연구보고서 (2008). 18. 식품의약품안전청 : 식품유래미생물의항생제내성스펙트럼및유전형분석연구 년도식품의약품안전청 연구보고서 (2012). 19. 식품의약품안전청 : 식품중미생물의항생제내성실태조사연구 년도식품의약품안전청연구보고서 (2011). 20. Cho J.I., Joo I.S., Choi J.H., Jung K.H., Choi E.J., Han M.K., Jeong S.J., Son N.R., Lee S.H. Hwang I.G.: Prevalence and antimicrobial resistance of Enterococcus spp. isolated from meat and fishery production in Korea. Food Sci. Biotechnol. 22(1), (2013). 21. GÜNTER KLEIN, ALEXANDER PACK, GERHARD REU- TER: Antibiotic resistance patterns of Enterococci and occurrence of vancomycin-resistant Enterococci in raw minced beef and pork in Germany. Appl. Environ. Microbiol. 64(5), (1998). 22. NACI ERHAN YURDAKUL, ZERRIN ERGINKAYA, EMEL ÜNAL: Antibiotic resistance of Enterococci, coagulase negative Staphylococci and Staphylococcus aureus isolated from chicken meat. Czech J. Food Sci. 31, (2013). 23. Oh E.G., Son K.T., Yu H.S., Kim J.H., Lee T.S., Lee H.J.: Antimicrobial susceptibility pattern of Enterococcus faecalis and E. faecium from fish farms in the southern coast of Korea. J. Kor. Fish. Soc. 41(6), (2008). 24. Hayes J.R., English L.L., Carter P.J., Proescholdt T., Lee K.Y., Wagner D.D., White D.G.: Prevalence and antimicrobial resistance of Enterococcus species isolated from retail meats. Appl. Environ. Microbiol. 69(12), (2003). 25. Park S.H., Kim K.S., Yoo Y.A., Lee J.K., Jung S.K., Han K.Y., Kim M.S.: Antibiotic resistance patterns of Enterococcus spp. isolated from commercial frozen food. J. Fd Hyg. Safety. 25(2), (2010). 26. Lee H.I., Jung J.H., Lee S.J., Choi S.S.: Analysis of genotype and phenotype of erythromycin resistance in Enterococcus spp. isolated from raw milk samples. Kor. J. microbiol. 46(2), (2010). 27. Hong K.S., Kang E.S., Lee M.A.: Investigation of prevalence of vancomycin-resistant Enterococci and genotypes of glycopeptide resistance using polymerase chain reaction. Korean J. Clin. Pathol. 18(3), (1998). 28. Kwon P.S.: The effects of photodynamic theraph for vancomycin-resistant Enterococci. Korean J. clin lab sci. 43(3), (2011). 29. Rene te Witt, Vikash Kanhai, Willem B. van Leeuwen: Comparison of the DiversiLab TM system, Pulsed-Field Gel Electrophoresis and Multi-Locus Sequence typing for the characterization of epidemic reference MRSA strains. J. Microbiol. Methods. 77, (2009). 30. Choi J.E., Lee E.Y.: An investigation on the antibiotic resistant condition and label-stated of domestically distributed livestock-environment improving agents. Kor. J. Microbiol. Biotechnol. 37(3), (2009).

Microsoft PowerPoint - PDFCoTemp.PPT

Microsoft PowerPoint - PDFCoTemp.PPT 주요유방염세균의검출및 항생제감수성검사 임숙경 1. 검사시료 1. 시료채취 유방염우유 2. 체세포수측정 3. 대상세균 - Staphylococcus aureus - Coagulase negative staphylococci -Escherichia coli 3. 균분리방법 E. coli CHEC Agar 직접도말 (37 18-24h) 보라색집락 EMB Agar