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혜숙 목
5 years ago
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1 대한임상검사학회지 : 41권제2호, 52-56, 2009 ISSN 당뇨병환자의연조직염에서분리된 Arcanobacterium haemolyticum 1 예 서울대학교병원진단검사의학과 이현 1 이덕희 1 주세익 1 김의종 1,2 A Case Report of Arcanobacterium haemolyticum Isolated from Diabetic Patient with Cellulitis Hyun Lee 1, Deok-Hee Lee 1, Sae-Ick Joo 1, and Eui-Chong Kim 1,2 Department of Laboratory Medicine, Seoul National University Hospital, Seoul , Korea 1 Department of Laboratory Medicine, Seoul National University, College of Medicine, Seoul , Korea 2 Arcanobacterium haemolyticum was usually isolated from respiratory infection. Occasionally, the cases were reported to cause pharyngotonsillitis, cellutitis, and abscess. A. haemolyticum is V form gram-positive bacilli (coryneform bacilli), which isoften considered to be non-pathogenic normal flora or contaminants in respiratory, skin and wound infection. In order to discriminate from normal flora, incubation for at least 48 hours is recommended. We describe a case that A. haemolyticum was isolated from cellulitis with group G β-hemolytic Streptococcus, Klebsiella pneumoniae ssp. pneumoniae, and Prevotella disiens. Received 6 May 2009/Returned for modification 3 June 2009/Accepted 25 June 2009 Key Words : Arcanobacterium haemolyticum, CAMP inhibition test I. 서론 Corynebacterium haemolyticum 은 MacLean 등에의해 1946년처음분리되었고 36년후 Colllins 등 (1982) 에의해 Arcanobacterium haemolyticum으로분류되어명명되었다. 이세균은조건무산소성그람양성막대균으로호흡기감염을일으키며주로인후통을보이는환자에서분리된다. 피부궤양, 연조직염, 편도주위농양, 척추골수염, 패혈증등을일으킬수있으며이와관련된많은사례가이미보고되었다 (Funke 등, 1997; 김등, 2004 van 교신저자 : 이현, ( 우 ) , 서울시종로구대학로 101 번지, 서울대학교병원진단검사의학과, TEL : , snowman888@hanmail.net Loo 등, 2007; 이등, 2008). 보통다른세균과함께분리되며 24시간배양시면양혈액우무배지에서 0.5 mm 미만의아주작은무색집락을볼수있다. 그람염색에서다형태막대균으로보이고 V 모양의균배열을하고있어, 피부나호흡기가검물에서분리되었을경우, coryneform인정상균무리이나오염균으로판단하기쉽다. Corynebacterium spp. 와구별하기위해 catalase 검사와 CAMP 억제반응검사를시행하는것이동정에도움이된다 ( 김등, 2004). 저자들은당뇨병성족부연조직염에서다른세균들과함께 A. haemolyticum 1주를분리하면서문헌조사와함께동정에도움이되는 CAMP 억제반응검사의효율성을 S. aureus ATCC25923과 S. aureus ATCC33591를사용하여비교하였다. 52

2 Korean J. Clin. Lab. Sci. 41(2):52-56, 2009 II. 증례 1. 대상환자 63세남자로 2009년 1월왼쪽새끼발가락의통증과농성분비물이있어내원하였다. 환자는 20년전당뇨병진단을받고인슐린주사를맞아왔으며 10년전위암으로부분위절제술을, 9년전오른쪽대퇴골골절로고관절치환술을, 2년전협심증으로관동맥치환술을각각받았다. 입원후자기공명영상촬영으로연조직염, 골수염진단을받고병변부위조직에대한미생물배양검사가의뢰되었다. 미생물배양검사에서 A. haemolyticum과함께 group G β-hemolytic Streptococcus, Klebsiella pneumoniae ssp. pneumoniae, Prevotella disiens가분리되었다. 환자는입원다음날부터 6일간 piperacillin/tazobactam으로치료받았고이후 cephradine을투여받았다. 추적배양검사에대한의뢰는없었다. Table 1. MIC of the A. haemolyticum from this case by Etest method and comparison with MIC 90 data from a reference (Caelson P et al, 1994a) Antimicrobial agent MIC by E-test (μg/ml) MIC 90 from a reference* (μg/ml) Penicillin G Cephalothin Cefuroxime Cefotaxime Erythromycin Clindamycin Ciprofloxacin Azithromycin Doxycycline Vancomycin Trimethoprim/ sulfamethoxazole 0.032/0.6 >8/152 * These data from agar dilution method 2. 미생물학적동정환자의족부병변부위조직을면양혈액우무배지에접종하여 5% CO 2, 35 배양기에서 24시간배양하였다. β- 용혈대없이핀끝모양의작은집락이형성되었고 48시간배양후집락밑과주변에작은 β-용혈대가있고부드럽고매끄러운무색의집락이관찰되어그람염색과동정검사를시행하였다 (Fig. 1). 집락의그람염색에서비교적짧고불규칙한모양의그람양성막대균이 V 모양으로배열되었고 (Fig. 2), 생화학적성상은 glucose, ribose, maltose, lactose에양성반응을, xylose, mannitol, sucrose, glycogen에음성반응을보였으며 nitrate, urea, catalase test에음성이었다. CAMP 억제반응검사에서 S. aureus ATCC25923의주변용혈대가억제되었다. API Coryne kit(biomérieux Inc. Durham, USA) 를이용하여 99.9% A. haemolyticum으로동정되었다 (Fig. 3). 3. 항생제감수성검사 Etest(AB Biodisk, Sohna, Sweden) 를이용하여서항생제감수성검사를실시하였다. Muller-Hinton blood agar (KOMED, Co. 성남, 한국 ) 에균탁도는 0.5 McFaland로도포하여각항생제시험지를검사하였다. 5% CO 2, 35 에서 18시간배양한후관찰하였다. Table 1에서보는바 와같이 penicillin-g는 μg/ml, cephalothin μg /ml, cefuroxime μg/ml, cefotaxime μg/ml, erythromycin μg/ml, azithromycin μg/ml, doxycycline 0.19 μg/ml, ciprofloxacin 0.5 μg/ml, clindamycin μg/ml, trimethoprim/sulfomethoxazole 0.032/0.6 μg/ml, 그리고 vancomycin이 0.25 μg/ml로모두낮은농도에서억제를보였다. III. 고찰 A. haemolyticum에의한인두염증상이 group A streptococcal 성홍열, 디프테리아, 약물알레르기, 독성쇼크증후군과혼동될수있기때문에임상적관심을지속적으로받고있으며 group A streptococci에의한인두염발생빈도중약 5~13% 정도가 A. haemolyticum에의한인두염이라는보고가있었다 (Lisa 등, 1993). 연조직염이나피부궤양, 편도주위농양등에서분리되고당뇨병환자의괴사성근막염에서도분리되었다 ( 이등, 2008). A. haemolyticum은정상균무리와감별이어렵고, 다른세균들과동반되어집락을형성하는경우가많아서오염 53

Fig. 2. Gram stain morphology of A.haemolyticum. 1000. Fig. 3.

CAMP inhibition test for A. haemolyticum (2). S.

agalactiae ATCC27956 (3) for CAMP positive, and Corynebacterium

3 대한임상검사학회지 41(2):52-56, 2009 Fig 1. A. haemolyticum on BAP after 48 hours of incubation at 5% CO 2, 35. Fig. 2. Gram stain morphology of A.haemolyticum Fig. 3. API Coryne kit inoculated with A. haemolyticum. Fig 4. CAMP inhibition test for A. haemolyticum (2). S. aureus ATCC25923 (1) is used as β-hemolysin producer, S. agalactiae ATCC27956 (3) for CAMP positive, and Corynebacterium species (4) for CAMP negative. Fig. 5. CAMP inhibition test for A. haemolyticum using two S. aureus standards, ATCC25923 (1) and ATCC33591 (2). Strain 3 is Corynrbacterium species for CAMP negative, 4 is A. haemolyticum, and 5 is S. agalactiae ATCC27956 for CAMP positive reaction. 54

4 Korean J. Clin. Lab. Sci. 41(2):52-56, 2009 균으로간과하기쉽다. 48시간이상배양시 β-용혈대가형성되는 A. haemolyticum은집락의형태와 β-glucuronidase 에따라서 smooth type과 rough type으로나눠지며주로기도감염에서는 rough type이, 창상감염에서는 smooth type이분리된다고보고되었다 (Carlson 등, 1994b). 본증례에서도배양초기에 A. haemolyticum이 group G β-hemolytic Streptococcus, K. pneumoniae ssp. pneumoniae와함께자라작은베타-용혈대가있는무색의부드럽고매끄러운집락을발견하지못하고배양 48시간경과후전형적인집락이관찰되었다 (Fig. 1). A. haemolyticum은독립적으로분리되어보고되기보다는다른균종과의혼합감염의형태로많이분리보고되었는데, β-용혈성연쇄구균이흔하고 (10%), Fusobacterium species, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Propionibacterium acnes, 그리고 Finegoldia magna 등이보고되었다 (Funke 등, 1997; 김등, 2004; 이등, 2008). van Loo 등 (2007) 은생검조직에서단독감염원으로보고하기도하였다. A. haemolyticum을동정하는데중요한단서는집락성상, 그람염색, catalase, 그리고 CAMP 억제반응검사이다 (Funke 등, 1997; Funke와 Bernard, 2007). 집락주변에약한용혈대가나타나면서그람양성의 coryneform 막대균이관찰되는데 catalase 음성이면 CAMP 억제반응검사를실시하여 A. haemolyticum을예측할수있다. 생화학적반응검사로는대부분의연구자에서 API Coryne kit를사용하였다 (Funke 등, 1997; 김등, 2004; 이등, 2008). CAMP 억제반응검사는 A. haemolyticum에의해용혈대가억제되는특징적인현상을말하는데, 일부연구자는 "reverse CAMP" 라는용어를사용하기도하였다 ( 김등, 2004; Goyal R 등, 2005). S. aureus ATCC25923과 S. agalactiae ATCC27956으로검사하면 β-용혈억제반응과향상반응을동시에볼수있어동정에도움이된다 (Fig. 4; 김등, 2004). 그러나 β-용혈억제반응은 Fig. 4에서보는바와같이매우주의해서관찰하거나밝은불빛밑에서관찰해야만한다. CAMP 반응검사를위한표준균주로 S. aureus ATCC 을권장하고있으나 (Funke와 Bernard, 2007), 저자들은 CAMP 억제반응을관찰하기위해서는 S. aureus ATCC33591이보다효과적인것으로관찰되었다 (Fig. 5). 이는 ATCC25923 균주가 β-hemolysin을분비하여균집락주변에불완전한용혈대를형성하고, 여기에 CAMP factor가반응하여용혈현상이협동효과를나타냄으로써 CAMP factor 양성균을관찰하기에는좋은반면 (Max- Faddin, 1984), CAMP 억제반응은이 β-hemolysin의작용을억제하여용혈현상을보이지않게하는것이므로오히려용혈이완전하게일어나는 ATCC33591 균주가억제반응을관찰하기에용이하였다 (Fig. 5). 이에저자들은 CAMP 억제반응검사에이두가지용혈성을보이는 S. aureus 표준균주를모두사용하여 Fig. 5와같이시험하는것이 β-용혈억제반응과향상반응을동시에확실하게관찰할수있기에시험방법의보안을제안한다. A. haemolyticum의항생제감수성검사는 CLSI 기준이아직마련되어있지않았다. Carlson 등 (1994a) 은 138균주를대상으로 11종의항생제에대한최소억제농도를구하였는데본증례의항생제감수성은이를기준으로보면모두감수성범위에있는것으로관찰되었다 (Table 1). Carlson 등 (1994a) 이분석한 138균주는모두 trimethoprim/ sulfamethoxazole에서 >8/132 μg/ml의내성을보였는데본증례의균주는낮은농도에서억제되어국내분리주의항생제감수성조사가필요함을시사하였다. 참고문헌 1. Carlson P, Kontiainen S, Renkonen OV. Antimicrobial susceptibility of Arcanobacterium haemolyticum. Antimicrob Agents Chemother 38(1): , 1994a. 2. Carlson P, Lounatmaa K, Kontiainen S. Biotypes of Arcanobacterium haemolyticum. J Clin Microbiol 32: , 1994b. 3. Collins MD, Jones D, Schofield GM. Reclassification of Corynebacterium haemolyticum in the genus Arcanobacterium gen. nov. as Arcanobacterium haemolyticum nom. Rev., comb. Nov. J General Microbiol 128: , Funke G, Bernard KA. Coryneform Gram-Positive Rods. In Murray PR et al. (eds). Manual of Clinical Microbiology. 9 th edition, p ASM Press, 55

5 대한임상검사학회지 41(2):52-56, 2009 Washington DC, USA, Funke G, von Graeventiz A, Clarridge JE Ⅲ, Bernard KA. Clinical microbiology of coryneform bacteria. Clin Microbiol Rev 10: , Goyal R, Singh NP, Mathur M. Septic arthritis due to Arcanobacterium haemolyticum. Indian J Med Microbiol 23(1):63-65, Lisa AC, Whei-Kuo W, Ann M, Sue EG, James SF, Marie BC. Effects of media, atmosphere, and incubation time on colonial morphology of Arcanobacterium haemolyticum. J Clin Microbiol 31: , van Loo IH, van den Wildenberg WJ, van Huijstee PJ, Roukema JA, Apperloo AJ, Peeters MF. Pelvic abscess caused by Arcanobacterium haemolyticum mimicking a soft tissue tumour. J Med Microbiol 56(Pt 12): , MacLean PD, Liebow AA, Rosenberg AA. A hemolytic corynebacterium resembling Corynebacterium ovis and Corynebacterium pyogenes in man. J Infect Dis 79: MaxFaddin JF. Biochemical tests for identification of medical bacteria. 2 nd edition, p18-35, Williams & Wilkins, Baltimore, USA, 김영철, 김재석, 박지영, 강성하, 조현찬, 방지환, 김의종. 피부궤양과편도주위농양에서분리된 Arcanobacterium haemolyticum 5예. 대한진단검사의학회지 24: , 이성실, 노경호, 김창기, 용동은, 최준용, 이진우, 이경원, 정윤섭. 개에게물린당뇨환자의 Streptococcus agalactiae, Arcanobacterium haemolyticum과 Finegoldia magna에의한과사성근막염 1예. 대한진단검사의학회지 28: ,

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Microsoft PowerPoint - PDFCoTemp.PPT 주요유방염세균의검출및 항생제감수성검사 임숙경 1. 검사시료 1. 시료채취 유방염우유 2. 체세포수측정 3. 대상세균 - Staphylococcus aureus - Coagulase negative staphylococci -Escherichia coli 3. 균분리방법 E. coli CHEC Agar 직접도말 (37 18-24h) 보라색집락 EMB Agar