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생약학회지 Kor. J. Pharmacogn. 45(1) : 48 54 (2014) 증숙더덕추출물의인지능력개선효과 원진배 1 윤보라 1 이지우 1 엄민례 1 고현정 3 이현용 4 박동식 5 정희철 6 정재윤 6 마충제 1,2 * 1 강원대학교생물의소재공학과, 2 강원대학교생명공학연구소, 3 강원대학교약학대학, 4 서원대학교차학과 ( 식품공학과 ), 5 농촌진흥청국립농업과학원기능성식품과, 6 뉴트리 Effect of Steamed Codonopsis lanceolata on Spatial Learning and Memory in Mice Jin Bae Weon 1, Bo-Ra Yun 1, Jiwoo Lee 1, Min Rye Eom 1, Hyun-Jeong Ko 3, Hyeon Yong Lee 4, Dong-Sik Park 5, Hee-Chul Chung 6, Jae Youn Chung 6 and Choong Je Ma 1,2 * 1 Department of Medical Biomaterials Engineering, College of Biomedical Science, Kangwon National University, Chuncheon 200-701, Korea 2 Research Institute of Biotechnology, Kangwon National University, Chuncheon 200-701, Korea 3 Laboratory of Microbiology and Immunology, College of Pharmacy, Kangwon National University, Chuncheon 200-701, Korea 4 Department of Teaics, Seowon University, Cheongju 361-742, Korea 5 Functional food & Nutrition Division, Department of Agrofood Resources, Suwon 441-853, Korea 6 Newtree CO., LTD. 11F Tech Center, SKnTechno Park, 190-1, Sungnam 462-120, Korea Abstract Alzheimer s disease is progressive neurodegenerative disorder by the loss of memory and learning abilities. Codonopsis lanceolata (C. lanceolata) is traditional medicinal plant used for the treatment of inflammatory diseases. The aim of study was to evaluate the effect of steamed C. lanceolata on scopolamine-induced memory impairment in the Morris water maze test and passive avoidance test. In addition, this study investigated the neuroprotective effects of steamed C. lanceolata on glutamate-induced cell death in HT22 cells using MTT assay. The results showed that steamed C. lanceolata (500 mg/kg body weight, p.o.) reversed spatial memory impairment by scopolamine in Morris water maze test and passive avoidance test. Steamed C. lanceolata attenuated memory impairment by scopolamine compared with common C. lanceolata. In addition, administration of steamed C. lanceolata significantly also reduced cell death. We suggest that steaming process more improve cognitive enhancing and neuroprotective effect of C. lanceolata than common C. lanceolata. Key words Codonopsis lanceolata,cognitive enhancing effect, Neuroprotective effect, Steaming process 최근의학과생명과학의발달로인구의노령화가증가함에따라퇴행성질환에대한관심이집중되고있다. 대표적인퇴행성질환으로기억력장애를일으키는것을치매라고한다. 알츠하이머병이가장일반적인치매의유형이며사회적인문제로대두되고있다. 1) 알츠하이머병은인지능력저하및언어장애를통해일상생활에장애를일으키는특징을가지고있다. 2) 알츠하이머병의발생원인이정확하게밝혀지지않았으며, 통일된가설이없다. 여러원인이동시에일어날수있다. 보고된알츠하이머병의발병기전은산화적스트레스에의한뇌신경세포의사멸, 신경세포의 * 교신저자 (E-mail) : cjma@kangwon.ac.kr (Tel): +82-10-4344-7442 amyloid beta protein 로구성된 senile plaque 과 hyperphosphorylated tau protein 로구성된 neurofibrillary tangle 의축적그리고 acetylcholinesterase(ache) 에의한신경전달물질인 acetylcholine(ach) 의감소등이있다. 3-6) 현재비타민 E 와셀레질린 (Selegiline) 같은항산화제나 AchE 억제제인타크린 (Tacrine) 과아리셉트 (Aricept) 등이치매치료제로사용되고있다. 이들치료제는완벽하게치매를치료하는것이아니라치매를늦추거나예방하는정도의효과를나타낸다. 또한일시적인간독성, 위장관장애그리고심장서맥유발등의부작용을일으키기때문에새로운치료제들을개발하고요구되고있다. 7-9) 천연물의경우, 경험적으로안전성과유효성이입증되었 48

Vol. 45, No. 1, 2014 49 기때문에부작용이적고개발기간과비용을절감할수있다. 최근나팔꽃씨, 현호색, 참당귀그리고현삼등천연물을이용한치매치료제개발을위해연구가진행중이다. 10) 더덕 (Codonopsis lanceolata) 은초롱꽃과 (Campanulaceae) 더덕속에속하는다년생덩굴식물로, 사삼 ( 沙蔘 ) 이라고한다. 예로부터더덕은두통이나현기증치료, 강장, 해열에효과가있다고한다. 최근연구에따르면더덕은항산화효과, 향장활성증진그리고비장세포증식능과 cytokine 분비효과를이용한면역활성등이보고되었다. 11-13) 더덕의주요생리활성성분은대부분 triterpene saponin 의형태로존재하는 saponin 과 phenylpropanoid 이고 saponin 중 lancemaside A 는더덕에가장많이들어있는주요생리활성성분이다. 14,15) 본연구에서는일반더덕의활성을높이기위해증숙과정을거친더덕 ethanol 추출물의인지능개선효과와뇌신경세포보호활성을측정하였으며, 일반더덕 ethanol 추출물과활성을비교하였다. 인지능개선효과를측정하기위해 Morris water maze test( 수중미로실험 ) 과 passive avoidance test( 수동회피실험 ) 을진행하였으며, 뇌신경세포보호활성은마우스해마유래세포주인 HT22 cell line 을이용하여측정하였다. 재료및방법 시약및시료 세포배양액으로사용되는 Dulbecco s modified Eagle s medium(dmem) 과 fetal bovine serum (FBS) 은 Gibco BRL. Co.(Eggenstein, Germany) 으로부터구입하였다. 세포독성을일으키는 glutamate와 positive control 으로사용되는 6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman- 2-carbboxylic acid(trolox), 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromide(mtt), 치매유도제인 scopolamine, carboxymethyl cellulose는 Sigma(St. Louis, U.S.A.) 로부터구입하여사용하였다. Donepezil은삼진제약 (Seoul, Korea) 으로부터구입하여사용하였다. 더덕시료의제조 본연구에서사용된더덕은강원도횡성지역에서채취한것을사용하였고대전대학교서영배교수님을통해식물분류학적동정을실시하였다. 증숙더덕제조하기위해더덕을세정하여이물질을제거한후음건조건하에서 20~30 o C, 1~2일건조하였다. 증숙과정은예전연구를바탕으로페놀화합물및활성등을고려하여표준화된방법을이용하여제조하였다. 16,17) 건조된더덕을마하스팀기 (Daechang stainless, Korea) 를사용하여 90 o C에서 12 시간증숙한후, 12시간건조하였다. 이증숙건조과정을 5번반복하여진행하였다. 일반더덕과증숙더덕을 100 g 씩 8~10배수 (v/w) 의 70% 에탄올을사용하여수직환류냉각기가부착된추출 flask에서 80 o C에서 24시간추출하였다. 추출액은회전식감압농축기를사용하여농축시킨후동결 건조기를통해분말상태로준비하여실험에사용하였다. 최종수율은 12% 로측정되었다. 실험동물 ICR 마우스 (4 주령, 수컷 ) 를대한바이오링크 ( 충북음성군, 한국 ) 에서구입하여사용하였다. 마우스는사육실에서온도는 22±2 o C, 습도는 50±10% 를유지시키고, 명암은 12 시간을주기 (09:00~21:00) 로조절하였고, 일주일동안적응시킨후실험을진행하였다. 적응기간동안사료와물을제한없이자유공급하였다. 마우스는대조군, scopolamine 투여군, donepezil 투여군, 농도별일반더덕추출물과증숙더덕추출물투여군으로임의로나누었고각군당 7 마리씩구성하였다. 약물투여 수중미로실험과수동회피실험진행 120 분전에 0.5% CMC 에녹인양성대조군인 donepezil(1 mg/ kg), 일반더덕추출물과증숙더덕추출물 (100, 300 과 500 mg/kg) 을금속제경구투여용존대를이용하여경구투여하였다. 더덕추출물의농도는예전연구를참고하여정하였다. 18,19) 대조군은같은량의 0.5% CMC 만을투여하였다. 동물행동실험 30 분전에기억손상을유도하기위한생리식염수에녹인 scopolamine(1 mg/kg) 을피하투여하였다. 대조군은같은량의생리식염수만을투여하였다. 수중미로실험 (Morris Water Maze Test) 인지능개선효과를측정하기위해수중미로실험을진행하였다. 수중미로실험은공간기억력측정을위해보편적인실험으로 Morris 가제시한방법을응용하였다. 20) 직경 90 cm 와높이 40 cm 의 Water maze pool 안에 20±1 o C 의물을채우고흰우유를섞어불투명하게하여 platform 이보이지않게하였다. Pool 을 4 구역으로정확히나누고그중한구역의중간에 platform( 직경 10 cm, 높이 26 cm) 를수면아래 1cm 에위치하도록하였고실험기간동안고정하였다. 4 일동안 trial 사이에 20 분씩간격을두었고 2 번반복실험 (trial 1 과 trial 2) 을하였으며, 입수지점은매일구역별위치를달리하였다. 실험첫날은적응실험을위해 60 초동안 platform 없이수영을하도록하였다. 측정실험은 2 일째부터진행하였으며, 마우스가 platform 에도달하면 10 초동안 platform 에머물게하였다. 실험은 120 초동안진행하였고, platform 을찾지못하면실험을중단하고 10 초동안마우스를 platform 에올려놓고위치를기억시킨후다음실험을진행한다. Escape latency time 은마우스가입수지점에서 platform 을찾아가는시간을기록하여공간기억개선능력평가하였다. 6 일째 platform 을제거한상태에서마우스를 1 분동안수영하게하였다. Probe test 는 1 분동안 platform 이위치한구역에서수영한시간을측정 (s) 하여기록하여평가하였다. 수동회피실험 (Passive Avoidance Test) 기억력증진효과를측정하기위해수동회피실험을진행하였으며, 수동회피상자 (GEMINITM Avoidance System, San Diego Instruments, San Diego, CA, USA) 를통해 step- through

50 Kor. J. Pharmacogn. test를실시하였다. 수동회피상자는두개의상자가있고전기충격을가하기위한스테인레스막대가깔려있다. 상자사이에는마우스가이동할수있는자동문이설치되어있다. 상자적응을위해한쪽어두운상자에 1분간머무르게한후불빛과소음을일으키면가운데문이열리고, 마우스가회피상자로이동하게한다. 마우스를다시어두운상자에넣은후 20초후에다시불빛과소음을일으킨다. 마우스가회피상자로들어가고 2초뒤전기충격 (0.1 ma/10 g body) 을준다. 24시간후, 같은방법을통해측정실험을진행한다. 마우스가회피박스로이동하는시간을 step through latency으로측정하여기억력을평가한다. 불빛과소음을일으킨후, 180초동안움직임이없으면실험을중단하였다. HT22 세포배양및뇌신경세포보호활성측정 MTT assay를통해증숙발효더덕의뇌신경세포보호활성을측정하였다. 마우스해마유래세포주인 HT22 cells는서울대학교로부터분양받아사용하였다. HT22 cells는 10% FBS 가첨가된 DMEM 배지에 5% CO 2 와 37 o C 조건배양기내에서배양하였다. 뇌신경세포보호활성을측정하기위해배양된 HT22 cells 를 6.7 10 4 cells/300 µl씩 48-well plate에분주하여배양하였다. 24시간후, 증숙발효더덕 sample(100과 500 µg/ml), 50 µm Trolox(positive control) 와 2 mm glutamate를첨가한후, 5% CO 2 와 37 o C 조건배양기내에서 24 시간동안배양하였다. 배양후배지를제거하고 3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(mtt) 를처리한후, 570 nm에서흡광도를측정하였다. 뇌세포보호활성은 relative protection(%) 로나타냈다. 통계처리는 ANOVA test를적용하였으며, 각각 3회반복실험치를이용하여계산하였다. 페놀성화합물함량측정 HPLC를이용해증숙더덕추출물의페놀성화합물, gallic acid, 4-hydroxybenzoic acid, caffeic acid, vanillic acid, 4-coumaric acid, trans-feulic acid 그리고 caffecine 함량을분석하였다. HPLC system은 Aglient 1260 series(aglient technologies, California, USA) 을사용하였고, UV/VIS detector을통해측정하였다. 분석은 ZORBAX Eclipse XDB-C 18 (250 4.60 mm i.d., 5 µm) column을통해 35 o C에서실시하였다. Mobile phase는 10% acetonitrile with 0.1% formic acid (A) 과 0.1% formic acid in 40% acetonitrile and 40% methanol (B) 로구성하였다. 분리능을높이기위해 gradient system(0-15 min, 95% A; 15-23 min, 60% A; 23-33 min, 60% A; 33-42 min, 0% A; 42-45 min, 95% A; 45-50 min, 95% A) 을사용하였으며, 유속은 1 ml/min로설정하였다. UV/VIS detector의파장은 280 nm에서확인하였다. 총페놀함량분석 더덕추출물의총페놀함량은 Folin- Denis법에의해측정하였다. 더덕추출물 1ml에증류수 3ml 과 Folin & Ciocalteau 시약을첨가한후, 5분간반응시켰 다. 반응용액에 10% Na2OH3 용액 1ml 을가한후, 실온에서 1 시간방치시킨후 640 nm 에서 UV-vis spectrophotometer 를통해흡광도를측정하였다. 통계처리 모든실험결과는 mean±sd 로나타내었고통계처리는 SPSS 통계 (IBM SPSS statistics 20) 을이용하였다. 수중미로실험의 escape latency(s) 는이원분석방법 (two-way ANOVA) 을실시하였다. 수중미로실험의 the probe trial test, 수동회피실험그리고 MTT assay 결과는일원분석방법 (one-way ANOVA) 을실시하였다. 각결과의유의성은 p<0.05, 0.01 그리고 0.001 의수준으로검정하였다. 결과및고찰 수중미로실험에서증숙더덕추출물의효과 공간기억력개선효과를측정하기위해수중미로실험을실시하 Fig. 1. The effect of steamed C.lanceolata extract (SC) and common C.lanceolata extract (CC) (100, 300 and 500 mg/kg) in the Morris water maze test. (A) The escape latency in trial sessions during 4 days. The values shown are the mean escape latency ± SD (n=7). *p<0.05, significant in comparison to scopolamine treated group (vehicle). (B) The swimming time in the quadrant where the platform was once placed in the probe trial. The values shown are the mean escape latency ± SD (n=7). *p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 significant in comparison to scopolamine treated group (vehicle).

Vol. 45, No. 1, 2014 51 였다. Scopolamine 은기억력을손상을유도시키는데사용되었다. 21) 실험기간동안 trial 1 과 2 의평균 escape latency(s) 를통해증숙더덕추출물의효과를확인하였다. 대조군은실험 4 일동안 escape latency 가실험이진행됨에따라감소하였다. Scopolamine 처리군은실험기간동안 platform 을찾아가지못하였다 [F(1, 64)=2.93, p<0.05]. 증숙발효더덕추출물처리군 (100 과 300 mg/kg) 은 scopolamine 에의해증가된 escape latency 을 3 일째부터감소하는경향을나타내었으며, 500 mg/kg 의증숙더덕추출물처리군은 2 일째부터감소하였으며, 4 일째유의적으로감소하였다 [F(1, 64)= 2.87, p<0.05] (Fig. 1A). Probe test 에서대조군은 platform 이설치된구역을 37.1±1.9 초동안머물렀고, scopolamine 처리군은 24.0±3.4 초로머무름시간을줄였다. 증숙더덕추출물 (500 mg/kg) 의 platform 이위치한구역의머무름시간은 33.2±4.0 초이며, scopolamine 처리군의머무름시간을유의적으로증가시켰다 [F(1, 8)=5.98, p<0.05] (Fig. 1B). 수중미로실험의결과, 증숙더덕추출물은 scopolamine 에의해유도된기억력손상을회복시키는효과를나타내었다. 또한일반더덕추출물처리군과비교한결과, 증숙공정이더덕의기억력개선효과를높였다. 수동회피실험에서증숙더덕추출물의효과 수동회피실험의마우스의단순기억력증진효과를측정하기위해실시하였다. 대조군의 step-through latency 는 176.0±3.4 초을나타내었고, scopolamine 투여군은 (31.0±5.3 초 ) 대조군에비해 step-through latency 가감소되어치매가유발된것을확인할수있었다. 증숙더덕추출물처리군의경우, 100, 300 그리고 500 mg/kg 에서각각 42.7±2.5 초 67.1±8.2 초와 76.13±8.0 초를나타내어 scopolamine 에의해감소된 stepthrough latency 를유의적으로증가시켰다 [F(1, 8)=5.31, p<0.05]. 증숙더덕추출물은수동회피실험에서도일반더 덕추출물보다증가된 step-through latency을나타내었다 (Fig. 2). 위의결과를바탕으로, 증숙더덕추출물은 scopolamine 처리군보다유의적으로증가하였음을확인하여기억력개선효과가있음을나타내었다. 증숙더덕추출물의뇌신경세포보호활성 마우스해마유래세포주 HT22 cell에서 glutamate에의한세포사멸에대한증숙더덕추출물의세포보호활성을측정하였다. Glutamate는산화적스트레스를통해 HT22 cell의사멸을일으킨다. 증숙더덕추출물은 500 µg/ml에서 relative protection(%) 가 41.3±2.4% 를나타내었다 [F(1, 4)=7.71, p< 0.05]. 일반더덕추출물 (31.8±5.1%) 보다증숙더덕추출물의뇌신경세포보호활성이높게나타났다 (Fig. 3). 증숙더덕추출물의페놀성화합물함량 증숙더덕추출물의페놀성화합물함량을측정하기위해 HPLC-DAD 를이용하였다 (Fig. 4A). 증숙더덕추출물의 gallic acid, 4- hydroxybenzoic acid, caffeic acid, vanillic acid, 4-coumaric acid, trans-feulic acid 그리고 caffecine 함량을분석하였고일반더덕추출물과비교하였다. 페놀성화합물중에 gallic acid(4,900 µg/g) 이가장큰함량을나타내었다. 4-hydroxybenzoic acid, vanillic acid, 4-coumaric acid, trans-feulic acid 그리고 caffecine 함량은각각 313 µg/g, 90 µg/g, 37 µg/g, 275 µg/g 그리고 11 µg/g을나타내었다. Caffeic acid는나타나지않았다 (Fig. 4B). 일반더덕추출물과비교하여 gallic acid, vanillic acid 그리고 trans-ferulic acid의함량이증가하였다. 증숙더덕추출물의총페놀함량 증숙더덕추출물의총페놀함량을측정한결과, 15.23 µg/ml의함량을나타내었다. 일반더덕추출물의경우, 7.42 µg/ml의함량을나타내어, 증숙과정을통해더덕추출물의총페놀함량이증 Fig. 2. Effect of steamed C.lanceolata extract (SC) and common C.lanceolata extract (CC) (100, 300 and 500 mg/kg) on scopolamine-induced memory impairment mice in passive avoidance test. The values shown the mean latency time (s) ± SD (n=7). *p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 compared with scopolamine group (vehicle). Fig. 3. The neuroprotective effects of steamed C.lanceolata extract (SC) and common C.lanceolata extract (CC) against glutamate-induced cytotocixity in neuronal HT22 cells. Each bar represents the Mean ± SD of three independent experiments. *p<0.05 and **p<0.01 vs. glutamate-injured cells (vehicle).

52 Kor. J. Pharmacogn. Fig. 4. HPLC chromatogram of 7 phenolic compounds in steamed C.lanceolata extract (A). (GA: Gallic acid, 4-HA: 4- hydroxybenzoic acid, CA: Caffeic acid, VA: Vanillic acid, 4- CA: 4-Coumaric acid, t-fa: trans-ferulic acid, C: Caffeine). Content of 7 phenolic compounds in steaned C. lanceolata extract compared with common C. lanceolata extract (B). Fig. 5. Total phenol contents of steamed C.lanceolata extract. SC: steamed C.lanceolata extract; CC: common C.lanceolata extract. 가된것을확인할수있었다. 페놀화합물의경우, 다양한생물학적효능을나타내고있어, 증숙과정이더덕의생리활성을증가시킬수있을것으로판단된다. 결 본연구에서는증숙더덕추출물의기억력개선효과와뇌신경세포보호활성을측정하였다. 기억력개선효과측정 론 을위해가장보편적인행동실험인수중미로실험과수동회피실험을진행하였다. 수중미로실험은공간기억능력을평가하였고, 수동회피실험은단순기억능력을평가하는데사용되었다. 마우스의기억력손상은 muscarinic 수용체의길항체인 scopolamine 을통해유도하였다. Scopolamine 은신경전달물질인 Ach 과 muscarinic receptor 와결합을억제하여기억력및인지능을감퇴시켰다. 22) 수중미로실험에서증숙더덕추출물은실험기간동안 scopolamine 에의해증가된 escape latency 를감소시켰으며, probe test 에서도 platform 이위치한구역의머무름시간이 scopolamine 투여군보다증가하였다. 이를통해증숙더덕추출물의공간기억력개선효과를확인하였다. 또한, 수동회피실험에서도증숙더덕추출물은 scopolamine 처리군에비해 step-through latency 을유의적으로증가시켜단순기억력개선효과를나타내었다. 이와같은동물행동실험의결과, 증숙더덕추출물은 scopolamine 에의해기억력손상을일으킨마우스모델에서활성을나타내었으며, 대부분 scopolamine 행동모델에서활성을나타낸약물의경우, 콜린성신경계의기능저하와관련이있으며, positive control 로사용되어활성을나타낸 donepezil 도콜린성신경계와관련있는대표적인 AchE 활성억제제이다. 23,24) 따라서증숙더덕추출물은콜린성신경계의기능과관련이있을것으로사료된다. 뇌의해마부위는기억과학습에대단히중요한역할을수행한다. 뇌신경세포사멸은기억력및인지능기능손상의또다른원인중하나이다. 3) 따라서마우스해마유래세포주인 HT22 cell 을이용하여증숙더덕추출물의신경세포보호활성을측정하였다. HT22 cell 은뇌신경세포보호활성을측정하기위해널리사용되고있는 in vitro model 이다. 25) 흥분성신경전달물질인, glutamate 는신경세포의성장과이동을조절하고, 학습이나기억에관련된뇌기능수행에중요한역할을한다. 높은농도에서산화적스트레스를일으켜세포사멸을유도한다. 고농도의 glutamate 는세포막의 cystine 을억제하여세포내 cysteine 을감소시킨다. 이는세포내 glutathione 의양을감소시켜산화적스트레스를일으킨다. 26) 또한, 세포내칼슘이온 (Ca 2+ ) 과 reactive oxygen species (ROS) 생성을증가시켜세포사멸을일으킨다. 27) 증숙더덕추출물은 HT22 cell 에서 glutamate 에의해유도된세포사멸에대해보호하였다. 이를통해증숙더덕추출물의뇌신경세포보호활성이기억력개선과관련이있을것으로판단된다. HPLC 분석을통해증숙더덕추출물의페놀성화합물의함량을측정하였으며, 측정결과, gallic acid 가가장많이포함되어있었으며, gallic acid, vanillic acid 그리고 trans-ferulic acid 가일반더덕에비해함량이증가하였다. 세가지화합물은최근연구에서뇌신경세포보호활성과 AchE 억제활성이보고되었으며, trans-ferulic

Vol. 45, No. 1, 2014 53 acid 의경우, 항산화활성과콜린성기능향상을통해기억력및학습능력을개선하였다. 28-32) 추가적으로총페놀함량또한증숙과정을거친더덕의함량이일반더덕의함량보다높았다. 증숙을통한 gallic acid, vanillic acid 그리고 trans-ferulic acid, 3 가지페놀성화합물을포함한총페놀함량증가는일반더덕화합물의활성을향상시킨것을판단되며, 세가지화합물이더덕인지능개선활성의기전관련있을것으로사료된다. 결론적으로증숙더덕추출물은 scopolamine 으로유도된기억력손상에대해인지능개선활성과 glutamate 에의한산화적스트레스에의한세포사멸에대해보호활성을나타내었다. 또한증숙공정은더덕의활성을향상시켜주는것으로확인되었으며, 증숙더덕의활성은콜린성시스템과항산화적활성과관련이있는것으로판단된다. 사 본논문은농촌진흥청공동연구사업 ( 과제번호 : PJ009001) 의지원에의해이루어진것임. 사 인용문헌 1. Crapper, D. R. and DeBoni, U. (1978) Brain aging and Alzheimer s disease. Can. Psychiatr. Assoc. J. 23: 229-233. 2. Citron, M. (2002) Alzheimer s disease: treatments in discovery and development. Nat. Neurosci. 5: 1055-1057. 3. Coyle, J. T. and Puttfarcken, P. (1993) Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders. Science 262: 689-695. 4. Brion, J. P. (1998) Neurofibrillary tangles and Alzheimer's disease. Eur. Neurol. 40: 130-140. 5. Collerton, D. (1986) Cholinergic function and intellectual decline in Alzheimer s disease. Neurosci. 19: 1-28. 6. Coyle, J. T., Price, D. L. and DeLong, M. R. (1983) Alzheimer's disease: a disorder of cortical cholinergic innervations. Science 219: 1184-1190. 7. McGleenon, B. M., Dynan, K. B. and Passmore, A. P. Acetylcholinesterase inhibitors in Alzheimer s disease. Br. J. Clin. Pharmacol. 48: 471-480. 8. Dawson, G. R. and Iversen, S. D. (1993) The effects of novel cholinesterase inhibitors and selective muscarinic receptor agonists in tests of reference and working memory, Behav. Brain Res. 57: 143-153. 9. Ballard, C. G. (2002) Advances in the treatment of Alzheimer s disease: benefits of dual cholinesterase inhibition. Eur. Neurol. 47: 64-70. 10. Dastmalchi, K., Damien, D. H. J., Vuorela, H. and Hiltunen, R. (2007) Plants as potential sources of drug development against Alzheimer's disease. Int. J. Biomed. Pharmaceut. Sci. 1: 83-104. 11. Wang, L., Xu, M. L., Hu, J. H., Rasmussen, S. K. and Wang, M. H. (2011) Codonopsis lanceolata extract induces G0/G1 arrest and apoptosis in human colon tumor HT-29 cells-- involvement of ROS generation and polyamine depletion. Food Chem. Toxicol. 49: 149-154. 12. Ryu, H.-S. (2009) Effect of Codonopsis lanceolatae Extracts on mouse IL-2, IFN-, IL-10 cytokine production by peritoneal macrophage and the ratio of IFN-, IL-10 cytokine. Korean J. Food Nutr. 22: 69-74. 13. Han, C., Li, L., Piao, K., Shen, Y. and Piao, Y. (1999) Experimental study on anti-oxygen and promoting intelligence development of Codonopsis lanceolata in old mice. Zhong. Yao. Cai. 22: 136-138. 14. Ushijima, M., Komoto, N., Sugizono, Y., Mizuno, I., Sumihiro, M., Ichikawa, M., Hayama, M., Kawahara, N., Nakane, T., Shirota, O., Sekita, S. and Kuroyanagi, M. (2008) Triterpene glycosides from the roots of Codonopsis lanceolata. Chem. Pharm. Bull. 56: 308-314. 15. Li, J. P., Liang, Z. M. and Yuan, Z. (2007) Triterpenoid saponins and anti-inflammatory activity of Codonopsis lanceolata. Pharmazie. 62: 463-466. 16. Kim, J. S., Choi, W. S., Chung, J. Y., Chung, H. C. and Lee, H. Y. (2013) Enhancement of cosmeceutical activity from Codonopsis lanceolata extracts by stepwise steaming process. Kor. J. Med. Crop. Sci. 21: 204-212. 17. Song, C. H., Seo, Y. C., Choi, W. Y., Lee, C. G., Kim, D. U., Chung, J. Y., Chung, H. C., Park, D. S., Ma, C. J. and Lee, H. Y. (2012) Enhancement of antioxidative activity of Codonopsis lanceolata by stepwise steaming process. Kor. J. Med. Crop. Sci. 20: 238-244. 18. Park, S. J., Park, D. S., Kim, S. S., He, X., Ahn, J. H., Yoon, W. B. and Lee, H. Y. (2010) The effect of fermented Codonopsis lanceolata on the memory impairment of mice. J. Kor. Soc. Food. Sci. Nutr. 39: 1691-1694. 19. Weon, J. B., Lee, B. H., Yun, B. -R., Lee, J., Lee, H. Y., Park, D. S., Chung, H. C., Chung, J. Y. and Ma, C. J. (2013) Memory enhancing effect of Codonopsis lanceolata by high hydrostatic pressure process and fermentation. Kor. J. Pharmacogn. 44: 41-46. 20. Morris, R. (1984) Developments of water-maze procedure for studying spatial learning in rats. J. Neurosci. Methods. 11: 47-60. 21. Ebert, U. and Kirch, W. (1998) Scopolamine model of dementia: electroencephalogram findings and cognitive performance. Eur. J. Clin. Invest. 28: 944-949. 22. Izquierdo, I. (1989) Mechanism of action of scopolamine as an amnestic. Trends Pharmacol. Sci. 10(5): 175-177. 23. Klinkenberg, I. and Blokland, A. (2010) The validity of scopolamine as a pharmacological model for cognitive impairment: a review of animal behavioral studies. Neurosci. Biobehav. Rev. 34: 1307-1350.

54 Kor. J. Pharmacogn. 24. Rodrigues Simoes, M. C., Dias Viegas, F. P., Moreira, M. S., Freitas Silva Md, Riquiel, M. M., da Rosa, P. M., Castelli, M. R., Dos Santos, M. H., Soares, M. G. and Viegas, C. (2014) Donepezil: an important prototype to the design of new drug candidates for Alzheimer's disease. 25. Liu, J., Li, L. and Suo, W. Z. (2009) HT22 hippocampal neuronal cell line possesses functional cholinergic properties. Life Sci. 84: 267-271. 26. Fukui, M., Song, J. H., Choi, J., Choi, H. J. and Zhu, B.T. (2009) Mechanism of glutamate-induced neurotoxicity in HT22 mouse hippocampal cells. Eur. J. Pharmacol. 617: 1-11. 27. Murphy, T. H., Miyamoto, M., Sastre, A., Schnaar, R. L. and Coyle, J. T. (1989) Glutamate toxicity in neuronal cell line involves inhibition of cystine transport leading to oxidative stress. Neuron 2: 1547-1558. 28. Yena, G.-C., Duhb, P.-D. and Tsaia, H.-L. (200) Antioxidant and pro-oxidant properties of ascorbic acid and gallic acid. Food Chem. 79: 307-313. 29. Kumar, S., Prahalathan, P. and Raja, B. (2011) Antihypertensive and antioxidant potential of vanillic acid, a phenolic compound in L-NAME-induced hypertensive rats: a dosedependence study. Redox Rep. 16: 208-215. 30. Ban, J. Y., Nguyen, H. T., Lee, H. J., Cho, S. O., Ju, H. S., Kim, J. Y., Bae, K., Song, K. S. and Seong, Y. H. (2008) Neuroprotective properties of gallic acid from Sanguisorbae radix on amyloid beta protein (25--35)-induced toxicity in cultured rat cortical neurons. Biol. Pharm. Bull. 31: 149-153. 31. Weon, J. B., Kim, C. Y., Yang, H. J. and Ma, C. J. (2012) Neuroprotective compounds isolated from Cynanchum paniculatum. Arch. Pharm. Res. 35: 617-621. 32. Luo, Y., Zhao, H. P., Zhang, J., Wang, J., Yang, W. L., Yang, M. and Liao, Z. G. (2012) Effect of ferulic acid on learning and memory impairments of vascular dementia rats and its mechanism of action. Yao. Xue. Xue. Bao. 47: 256-260. (2014. 1. 15 접수 ; 2014. 1. 29 심사 ; 2014. 2. 25 게재확정 )