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2 Ann Clin Microbiol 2018;21(1):1-7 기존의방법으로는모든원인균을진단하는데한계가있다. 우리나라대부분의병원검사실에서일상적으로시행되는변배양검사는비교적동정이용이한 Salmonella, Shigella 또는여름철에 Vibrio균에대해서만선택배지를사용하여검출하나, Salmonella, Shigella 또는 Vibrio균이외의감염성설사의흔한원인인세균들과바이러스들의검출이되지않아감염성설사의원인체에대한충분한정보를제공하지못하고있다 [5]. 급성설사환자의대변을배양하였을때균이배양될확률은 1.5-5.6% 로매우낮고균이동정되더라도검사결과가 3일이후에나와서많은경우환자가이미증상이좋아진이후이므로비용효과적인측면에서모든환자에대한대변배양이필요한지논란이있다 [1]. 최근에급성설사의원인체의진단에배양법에비해민감도가높은연쇄중합반응 (polymerase chain reaction, PCR) 검사가급여화되어바이러스성및세균성설사원인체의진단이용이해졌으며검사시간도단축되었다. 최근제주의기후가열대화가되고있으며바다로둘러쌓인섬이라는제주도의특성과함께지속적인내국인및외국인인구증가, 연간천이백만의관광객이왕래하는제주에서성인에서급성설사질환의원인체에대한역학적인분석에대해조사하여급성설사에대한효과적인진단, 치료및예방에필요한자료를제공하고자한다. 자 408명과외래환자에서세균성및바이러스성설사원인체검사를동시에의뢰한외래 129명을포함한총 537개의검체를대상으로하였다. 입원환자는집중치료실에입원한환자의검체와입원후 48시간이후에다중연쇄중합반응 (multiplex PCR) 에의한세균성및바이러스성설사원인체검사를의뢰한환자의검체는본연구에서제외하였다. 입원환자및외래환자의평균나이는각각 51.6세 (17-95세), 51.5세 (16-97세) 였다. 연령별분포는 70대가 18.1% 로가장많았으며 20대 (17.9%), 80 대 (12.5%), 50대 (11.9%), 40대 (11.7%), 60대 (13.0%), 30대 (9.1%), 10대 (5.0%) 및 90대 (0.7%) 순이었다 (Fig. 1). 2. 방법총 537개의대변검체를녹십자의료재단에의뢰하여설사원인체를검출하였다. 대변에서 Seeplex R Diarrhea ACE detection kits (Seegene, Seoul, Korea) 를이용하여다중연쇄중합반응 (multiplex PCR) 을통해 Group A Rotavirus, enteric Adenovirus, Norovirus GI/GII, Astrovirus 5종의바이러스와 Salmonella spp., Shigella spp., Vibrio spp., Campylobacter spp., Clostridium difficile Toxin B (CDB), Clostridium perfringens, Yersinia enterocolitica, Aeromonas spp., Escherichia coli O157:H7, verocytotoxin-producing E. coli (VTEC) 10종의세균검사를실시하여양성검체에대하여분석하였다. MATERIALS AND METHODS 1. 대상 2015년 3월부터 2017년 2월까지제주시에위치한제주한라병원소화기내과에서진료를받은 16세이상의성인중다중연쇄중합반응 (multiplex PCR) 에의한세균성및바이러스성설사원인체검사를입원후 48시간이내에동시에의뢰된입원환 RESULTS 1. 원인체별양성률 2015년 3월부터 2017년 2월까지 16세이상의급성설사변에서다중연쇄중합반응 (multiplex PCR) 검사를의뢰한 537개의분변검체중 221개의분변검체 (41.2%) 에서세균성또는바이러스성원인체에양성을보였다. 세균만양성을보인검체는 Fig. 1. Sample distribution of acute diarrheal disease test according to patient s ages. Jeju region, 2015.3-2017.2. Fig. 2. Composition of Bacterial-viral pathogens according to ages. Jeju region, 2015.3-2017.2.

Kyutaeg Lee, et al. : Multiplex PCR Study for Adult Diarrhea in Jeju 3 162검체 (30.2%), 바이러스만양성을보인검체는 50검체 (9.3%), 바이러스와세균모두에서양성을보인검체는 9검체 (1.7%) 였다. 30대를제외한전연령대에서세균성원인균의양성률이바이러스성원인체의양성률보다높았으며세균성원인균의양성률이 30대를제외한전연령대에서 20% 이상을차지하였고 30대에서는바이러스원인체가 18.3%, 세균성이 16.3% 를차지하였다. 세균성원인체와바이러스성원인체의혼합감염은 10 대에서 7.4%, 50대에서 4.7% 였고그외의연령대에서는 2% 이하였다 (Fig. 2). 급성설사변에서바이러스 5종, 세균 10종에대한다중연쇄중합반응 (multiplex PCR) 검사에서바이러스및세균성원인체에대해양성을보인 221검체중중복감염을포함하여 255개의원인체가검출되었다. 원인체별로 Campylobacter spp. 68검체 (26.7%) 로가장높은빈도를보였고 C. perfringens 61검체 (23.9%), Norovirus GII 29검체 (11.4%), CDB 21검체 (8.2%), Aeromonas spp. 16검체 (6.3%), Group A Rotavirus 13검체 (5.1%), Salmonella spp., Astrovirus가각각 10검체 (3.9%), Norovirus GI 8검체 (3.1%), Vibrio spp. 7검체 (2.7%), enteric Adenovirus 4검체 (1.6%), Shigella spp. 와 VTEC가각각 3검체 (1.2%), Y. enterocolitica 1검체 (0.4%) 순이었으며 E. coli O157:H7는검출되지않았다. 입원환자 408명중중복감염을포함해서 209개의원인체가검출되었으며이중 Campylobacter spp. 63검체 (30.1%), C. perfringens 42검체 (20.1%), Norovirus GII 22검체 (10.5%) 등의순이었다. 외래환자 129명중중복감염을포함해서 46개의원 인체가검출되었으며이중 C. perfringens 19검체 (41.3%), Norovirus GII 7검체 (15.2%), Campylobacter spp. 5검체 (10.9%) 등의순이었다 (Fig. 3). 급성설사변에서세균및바이러스설사원인체에의한단독감염은 289검체 (85.5%) 였고 2개의원인체에의한중복감염은 30검체 (13.6%) 였으며 3개의원인체에의한중복감염은 2검체였다. 중복감염이검출된검체는 32검체 ( 입원환자 : 27, 외래환자 : 5) 였다. 입원환자의 32검체에서 56개의중복감염의원인체가검출되었고외래환자의 5검체에서 10개의중복감염의원인체가검출되었다. 입원환자는총 56개의원인체중 C. perfringens가 17개로가장많았으며 Campylobacter spp. 12개, Norovirus GII 10 개, Aeromonas spp. 8개, CDB 5개, Norovirus GI 4개, Group A Rotavirus 3개, enteric Adenovirus 및 Shigella spp. 각각 2개, Astrovirus, Vibrio spp. 및 VTEC는각각 1개씩이었다. 2. 원인체별계절에따른감염분포 3월-5월을 봄, 6월-8월을 여름, 9월-11월을 가을, 12월-2 월을 겨울 로정의하였다. 봄에 134검체가의뢰되었고세균성원인체는 40검체 (29.9%), 바이러스성원인체는 13검체 (9.7%) 이며세균성과바이러스성혼합감염은 1검체였다. 여름에 181 검체가의뢰되었고세균성원인체는 66검체 (36.5%), 바이러스성원인체는 7검체 (3.9%) 이며세균성과바이러스성혼합감염은 2검체였다. 가을에 127검체가의뢰되었고세균성원인체는 37검체 (29.1%), 바이러스성원인체는 11검체 (8.7%) 이며세균성과바이러스성혼합감염은 1검체였다. 겨울에 95검체가의뢰되었고세균성원인체는 19검체 (20.0%), 바이러스성원인체는 19검체 (20.0%) 이며세균성과바이러스성혼합감염은 5검체 (5.3%) 였다. 세균성감염은봄, 여름에증가되는양상을보이며, 바이러스성감염은겨울, 봄에증가되는양상을보였다. 세균성과바이러스성의혼합감염은겨울에나타나는양상을보 Fig. 3. Number of organisms causing to acute diarrhea (Inpatient vs Outpatient). Fig. 4. Composition of bacterial-viral pathogens according to seasons.

4 Ann Clin Microbiol 2018;21(1):1-7 였다 (Fig. 4). 1) 바이러스성설사원인체들의계절에따른감염분포 : Group A Rotavirus는겨울에 5건 (38.4%), 봄과가을에 4건 (30.7%) 씩발생하였으나여름에는발생하지않았다. Norovirus GI은가을과겨울에각각 3건 (37.5%), 봄과여름에각각 1건 (12.5%) 씩발생하였다. Norovirus GII는겨울에 17건 (58.6%) 으로가장높았으며봄에 6건 (20.7%), 가을에 5건 (17.2%), 여름에 1건 (3.4%) 이었다. Astrovirus는봄과여름에각각 4건 (40.0%) 이었으며가을과겨울에각각 1건 (10%) 이었고 enteric Adenovirus 는여름에 3건 (60.0%) 이었고가을에 2건 (40.0%) 이었으나 Group A Rotavirus, Astrovirus 및 enteric Adenovirus는모두 10건미만이었다 (Fig. 5). 2) 세균성설사원인체들의계절에따른감염분포 : Vibrio spp. 에의한설사변은 2015년과 2016년 8월과 9월에관찰되었으며다른계절에는관찰되지않았다. Campylobacter spp. 에의한설사변은연중지속적으로관찰되며계절에따른특이한변화는관찰되지않았다. Shigella spp. 에의한설사변은 2015년 7월, 2016년 6월, 8월에각각 1건씩발생하여주로여름에관찰되었고다른계절에는관찰되지않았다. Salmonella spp. 에의한설사변은 2015년에는 9월에 1건, 2016년 3월, 7월, 8월, 9월및 11월, 12월그리고 2017년 1월에 1-2건씩관찰되었다. CDB 에의한설사변은 2015년과 2016년매년월별변이가크지않게빈번히관찰되었다. Y. enterocolitica에의한설사변은 2015 년에는관찰되지않았으며 2016년에는 12월에 1건이관찰되었고다른시기에는관찰되지않았다. Aeromonas spp. 에의한설사변은 2015년 3월, 4월, 5월, 7월, 9월, 10월에 1-2건씩관찰되었고겨울에는관찰되지않았다. 2016년에는 5월, 7월, 8월에 2-4건씩관찰되었으나 12월에 1건이관찰되었다. VTEC에의한설사변은 2015년에는관찰되지않았으나 2016년 2월, 5월및 2017년 1월에각각 1건씩산발적으로관찰되었다. C. perfringens 에의한설사변은매해산발적으로지속적으로관찰되었으며매년월별변이가크지않게빈번히관찰되었다 (Fig. 6). DISCUSSION Fig. 5. Number of each viral pathogens according to seasons. 본연구에서제주도내성인의 537개의설사변에서 41.2% 가세균성또는바이러스성원인체가검출되었으며이중세균성설사가 30.2%, 바이러스성설사가 9.3% 이며바이러스와세균의중복감염이 1.7% 였다. Lee 등 [2] 은전체설사변의 34.1% 에서세균또는바이러스성원인체가검출되었다고보고하였고이중세균성이 24.4% 로본연구와비슷한분포를보이나바이러스성원인체가 18.5% 로본연구보다약 10% 이상높은양성률을보고하였다. 이의원인으로첫째, 소아의설사변에서바이러스성설사가세균성설사보다많다 [6] 고알려져있는데 Lee 등 [2] 의연구는소아와성인의설사변이구분되지않아소아설사변이통계에더포함되었기때문으로판단되며둘째, 본연구뿐만아니라 Chikhi-Brachet 등 [7] 의연구에서겨울철에바이러스성설사가증가되는데 Lee 등 [2] 의연구는 16개월의연 Fig. 6. Detection rate of each bacterial pathogens according to seasons.

Kyutaeg Lee, et al. : Multiplex PCR Study for Adult Diarrhea in Jeju 5 구기간동안겨울철이두해를거쳐검체가수집되어바이러스성설사변이통계에더많이수집되었기때문으로판단된다. 본연구에서 16세이상의성인에서중복감염을포함해서 10 대, 20대에서세균또는바이러스성원인체에의한설사가전체설사변중 40% 이상이고, 30대에서 50대의연령에서는세균또는바이러스성원인체에의한설사가 40% 이하로감소되다가 60대이상에서다시세균또는바이러스성원인체에의한설사가 40% 이상으로증가되는양상을보였다. 또한세균성원인체에의한설사는 10대-20대에서약 35% 이상이다가 30대-50 대에서약 25% 이하로감소되다 60대이상의연령에서다시 30% 이상으로증가되는반면바이러스성원인체에의한설사는 20대-30대의연령에서증가되었다. 이는 20대, 30대에서세균성원인체에의한설사질환이바이러스성원인체에의한설사보다빈번하지만 20대, 30대에서타연령대보다바이러스성설사가상대적으로증가되는경향이라고판단되며이는 20-30 대에서사회활동이많아지는시기로바이러스성원인체의감염이타연령대에비하여상대적으로자주발생하는것으로추정되었다. 원인체별로 Campylobacter가 68건 (26.7%) 으로가장높은양성률을보인원인체였다. 이중 65건은입원환자에서 31.1% (65/209) 를, 5건은외래환자에서 10.9% (5/46) 를차지하여외래환자보다입원환자에서 Campylobacter원인체가더높은빈도로검출되었다. Campylobacter는동남아시아에서여행자설사로도잘알려져있으나 [8] 설사환자에서입원을요하는주요한원인체임을알수있었다. Campylobacter 다음으로 C. perfringens, Norovirus GII, CDB, Aeromonas spp., Group A Rotavirus, Salmonella spp., Astrovirus, Norovirus GI 등의순이었다. 이는 Cho 등 [9] 의보고에서도 Campylobacter가가장높은빈도를보인것과유사하나 Salmonella spp. 는본연구에서 3.9% 의분리율을보였다. Kim 등 [3] 이 2012년전국에서 415건의 Salmonella가분리되었으나제주에서는 72건 (17.3%) 이분리되어타지역에비해상대적으로높다고보고하였다. 본연구에서 2015년에 Salmonella가 9월에만 1건이관찰되었고 2016 년에는 3월, 7월, 8월, 9월 11월, 12월에서산발적으로 1건내지 2건이관찰되는현상으로보아제주도에서 Salmonella는 2016 년에일시적인유행하는시기가있었음을추정할수있어 2015 년에는유행이적어전체적인 Salmonella의양성률은낮았다고판단된다. Campylobacter와 C. perfringens는본연구기간동안매월연중고르게분리되었다. Campylobacter는설사를야기하는원인체이며 [10] 설사유발원인체중설사변에서분리율이높은균일뿐만아니라동물의배설물, 토양, 수질등에두루분포할수있어타원인체와중복감염으로측정되어질수있다고판단된다. 중복감염이임상증상을악화시킨다는보고 [11] 도있고큰영향이없다는보고 [12] 도있어중복감염이환자의임상증 상의변화가있는지는더연구할필요가있겠다. Norovirus GII의분리율이 Campylobacter, Clostridium perfringens 다음으로다수분리되었는데 Norovirus는대부분겨울철소아에서자주분리되는바이러스이나 [13] 본연구에서 16 세이상의성인에서세번째로설사를자주유발하는원인체이고주로겨울철에유행하였다. 본연구에서 Norovirus GII에양성인환자의 37.9% (11/29) 가 60대이상의고령의환자이며이중 91% (10/11) 가입원치료를받았다. 이는겨울철에소아뿐만아니라노인의설사환자에서 Norovirus에대한주의를기울여야함을시사한다고할수있다. CDB도계절에관계없이연중관찰되었다. 본연구에서 CDB 양성인 21명의환자의의무기록을조사한결과 14명 (66.6%) 가응급의학과를통해내원하였고 7명은외래를통해내원하였다. 또한, 검사전에항생제의투약기록이있는환자는총 17명으로약 80.9% 가항생제치료를받은사실이있었으며이중 16명 (94%) 은입원치료를받았으며이중 76.5% 가 70 세이상의고령의환자였다. 이는고령의환자에서설사를주소로내원할경우 CDB를유념하여환자주위에전파방지에힘써야하겠다. Aeromonas는봄철, 여름철에분리되며겨울철에는자주분리되지않았다. Aeromonas는 Cho 등 [9] 의연구에서설사원인균중중복감염으로자주나타나고이들은병원균으로의의를판단할수없다고하였는데그이유로 Kang 등 [14] 의보고에서우리나라사람들은생선회나익히지않은해산물의섭취가많아성인에서 Aeromonas의장내집락률이높은것으로추정한다고보고하였고 Thornley 등 [15] 도건강한정상인의대변에서 0.4-2.1% 로분리된다고보고하였다. 본연구는사면이바다로둘러쌓인제주도의특성과해산물의섭취가용이하여타지역보다성인의장내집락률이더높을것으로추정할수있다. VTEC는 2015년에검출되지않았고 2016년 2월, 5월그리고 2017년 1월에각각 1건씩검출되어낮은양성률을보였다. 2010년질병관리본부국내급성설사질환실험실감시사업 (EnterNet-Korea) 통계자료에의하면병원성대장균 (enterotoxigenic E. coli와 enterohemorrhagic E. coli) 의분리율이 0.5% 로 Salmonella와 Campylobacter 다음으로분리되었다는보고하였고 Lee 등 [2] 은 enteropathogenic E. coli, enteroaggregative E. coli 등이각각 2.7% 이며 enterohemorrhagic E. coli가 0.2% 라는보고를토대로판단할경우본연구에서는낮은검출률이대장균에서 enteropathogenic E. coli, enteroaggregative E. coli 등이검사에서제외되었기때문에설사원인체중이들대장균까지검출된다면더높은세균성원인체가검출될것으로판단된다. 본연구에서세균성및바이러스성설사의원인체만검출되었으나감염성급성설사는세균및바이러스이외에기생충, 진균등에의한설사는검출하지못한단점이있다. 이들의검

6 Ann Clin Microbiol 2018;21(1):1-7 사도급성설사의원인으로파악된다면설사의원인체규명에도움이되리라판단된다. 본연구의 5가지바이러스성및 13가지세균성설사원인체들은제주도성인의설사의주요한원인체들이었고이들원인체들에대한정확한진단으로이들의원인체에따른전파경로차단및예방에주의를기울여야하겠다. 제주도성인에서세균성설사가바이러스성설사보다자주관찰되었으며봄, 여름, 가을에자주관찰되었다. 바이러스성설사는 20-30대성인에서, 겨울에자주관찰되었다. 본연구의결과는제주도성인의설사원인체에대한기초적인자료로활용되어성인의설사의치료및전파방지에도움이될것이다. REFERENCES 1. Pai H. Acute infectious diarrhea. Korean J Med 2007;73:114-8. 2. Lee S, Park YJ, Lee HK, Kim SY, Kim JY, Lee SY, et al. Detection of 13 enteric bacteria and 5 viruses causing acute infectious diarrhea using multiplex PCR from direct stool specimens. Ann Clin Microbiol 2013;16:33-8. 3. Kim NO, Cha I, Kim JS, Chung GT, Kang YH, Hong S. The prevalence and characteristics of bacteria causing acute diarrhea in Korea, 2012. Ann Clin Microbiol 2013;16:174-81. 4. Riddle MS, DuPont HL, Connor BA. ACG clinical guideline: diagnosis, treatment, and prevention of acute diarrheal infections in adults. Am J Gastroenterol 2016;111:602-22. 5. Choi WH, Byun JH, Kim S. Prevalence of bacteria in the nationwide survey of stool culture performed in 2015, Korea. Ann Clin Microbiol 2016;19:105-9. 6. Ma SH. Acute infectious diarrhea in pediatirc patients. Korean J Pediatr 2005;48:235-50. 7. Chikhi-Brachet R, Bon F, Toubiana L, Pothier P, Nicolas JC, Flahault A, et al. Virus diversity in a winter epidemic of acute diarrhea in France. J Clin Microbiol 2002;40:4266-72. 8. Steffen R, Hill DR, DuPont HL. Traveler's diarrhea: a clinical review. JAMA 2015;313:71-80. 9. Cho MC, Noh SA, Kim MN, Kim KM. Direct application of multiplex PCR on stool specimens for detection of enteropathogenic bacteria. Korean J Clin Microbiol 2010;13:162-8. 10. Liu J, Gratz J, Maro A, Kumburu H, Kibiki G, Taniuchi M, et al. Simultaneous detection of six diarrhea-causing bacterial pathogens with an in-house PCR-luminex assay. J Clin Microbiol 2012;50: 98-103. 11. Hori H, Akpedonu P, Armah G, Aryeetey M, Yartey J, Kamiya H, et al. Enteric pathogens in severe forms of acute gastroenteritis in Ghanaian children. Acta Paediatr Jpn 1996;38:672-6. 12. Unicomb LE, Faruque SM, Malek MA, Faruque AS, Albert MJ. Demonstration of a lack of synergistic effect of rotavirus with other diarrheal pathogens on severity of diarrhea in children. J Clin Microbiol 1996;34:1340-2. 13. Hwang PJ, Kwak JH, Lee TJ, Jeong SJ. Clinical features of acute noroviral gastroenteritis in children: comparison with rotaviral gastroenteritis. Korean J Pediatr 2009;52:453-7. 14. Kang JM, Kim BN, Choi SH, Kim NJ, Woo JH, Ryu J, et al. Clinical features and prognostic factors of Aeromonas bacteremia. Infect Chemother 2005;37:161-6. 15. Thornley JP, Shaw JG, Gryllos IA, Eley A. Virulence properties of clinically significant Aeromonas species: evidence for pathogenicity. Rev Med Microbiol 1997;8:61-72.

Kyutaeg Lee, et al. : Multiplex PCR Study for Adult Diarrhea in Jeju 7 = 국문초록 = Multiplex PCR 을이용한제주도성인의급성설사원인체에관한역학조사 1 제주한라병원진단검사의학과, 2 제주한라병원감염관리실, 3 제주한라대학교임상병리과이규택 1, 김대순 2, 정무상 3 배경 : 급성설사원인체의동정을위해다중연쇄중합효소가유용한방법으로사용되고있다. 이에저자는제주도성인에서각각의설사원인체, 계절, 연령에따른특징에대해조사하여제주도성인에서설사원인유발체에대한역학적인기초적인자료를제공하고자하였다. 방법 : 2015년 3월부터 2017년 2월까지 2년동안 16세이상의성인에서다중연쇄중합효소를이용한 5가지바이러스성설사원인체 (Group A Rotavirus, enteric Adenovirus, Norovirus GI/GII, Astrovirus), 10가지세균성설사원인체 (Salmonella spp., Shigella spp., Vibrio spp., Campylobacter spp., Clostridium difficile toxin B (CDB), Clostridium perfringens, Yersinia enterocolitica, Aeromonas spp., Escherichia coli O157:H7, verocytotoxin-producing E. coli (VTEC)) 검사를의뢰한 537명의결과를토대로조사하였다. 결과 : 설사원인체는 537검체중 221검체 (41.2%) 에서양성을보였고 9.3% 는바이러스에서, 30.2% 는세균에서, 1.7% 는중복감염을보였다. 세균성원인균은봄, 여름, 가을에, 바이러스성원인체는겨울에자주관찰되었다. 원인체별로는 Campylobacter spp. (26.7%), C. perfringens (23.9%), Norovirus GII (11.4%), CDB (8.2%), Aeromonas spp. (6.3%), Group A Rotavirus (5.1%), Salmonella spp. (3.9%), Astrovirus (3.9%), Norovirus GI (3.1%), Vibrio spp. (2.7%), enteric Adenovirus (1.6%), Shigella spp. (1.2%), VTEC (1.2%), Y. enterocolitica (0.4%) 이었고 E. coli O157:H7는연구기간내에관찰되지않았다. Rotavirus, Norovirus GII는겨울과봄에자주관찰되었고 Campylobacter, CDB, C. perfringens는계절적인변화는보이지않으며매월빈번히관찰되었다. 결론 : 제주도에사는성인에서세균성설사원인균이바이러스성원인체보다봄, 여름, 가을에빈번하였다. 세균성설사원인체는겨울에빈번하였다. Campylobacter, CDB 및 C. perfringens는계절적인변이를보이지않으며매월빈번히관찰되었다. 본연구의결과는제주의성인설사원인체에대한역학적인자료로사용되며조기진단, 치료및설사원인체의전파방지에도움이될것이다. [Ann Clin Microbiol 2018;21:1-7] 교신저자 : 정무상, 63092, 제주특별자치도제주시한라대학로 38 제주한라대학교임상병리과 Tel: 064-741-6732, Fax: 064-741-6729 E-mail: chong@chu.ac.kr