Journal of Life Science 2014 Vol. 24. No. 7. 777~783 ISSN (Print) 1225-9918 ISSN (Online) 2287-3406 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2014.24.7.777 세포는대사과정에서활성산소종 을생성한다 는세포의주요구성물질인단백질 지 질및 등에산화적손상을초래하여세포의손상 자살 또는괴사를유발한다 일상적인상태에서의정상세포는 의제거기전으로 및 등이세포내에작용하여산화와 항산화의균형을유지하는데관여한다 그러나이러한균 형을유지하기어려울정도의과도한 가발생하거나세포 가스트레스를받게되면세포의자살 괴사등이발생하면서 신체질병의발생원인이된다 연구에따르면산화적스트레스유도성질환에대하여항산 화의역할을하는유전자의조절물질을개발하여임상에적용 하는항산화제치료 라는개념의약리학 적치료가능성을제시하고있다 항산화제치료제의개념으 로개발되고있는약제들의주요성분으로 그리고 등이널리알려져있다 최근에는식물성플라보노이드 성분이항산화제로써탁월한효과를나타낸다고한다 플라보노이드는폴리페놀에속하는성분으로플라보노이드의 를기본골격으로하여노란색또는담황색을나타내는페놀계화합물의총칭으로자연계에널리분포하고있다 그리고채소류와식물의잎 꽃 과실 줄기및뿌리등거의모든부위와곡물 과실류등에도풍부하게함유되어있는것으로알려져있다 식물성플라보노이드의성분으로한약제로널리사용되고있는산조인 은낙엽관목인묏대추나무 의종으로대한약전에규정되어있으며양간 영심 안심 수렴의효과가있으며불면증 진정 심장질환 신경강장 최면약으로사용되고있는주요생약중의하나로사용되고있다 또한산조인은체중의증가 근육강화및지구력의향상그리고면역체계강화에효과가있는것으로알려져있다 그러나산조인의많은사용과연구에도불구하고신장에대한항산화효과에대한연구는아직까지부족한실정이다 암발생시치료제로사용되고있는 은 를생성시킴으로써 을자극하여암세포를사멸시킨다 이러한과정중에생성된
778 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 7 는신장독성을일으키는심각한부작용을초래하여사용이제한되고있다 이를이용하여 은손상된신장의모델을제시하기위한약제로사용되고있다 따라서이번연구에서는 가생성시키는 에의하여유발된급성신부전시산조인의항산화작용에의한치료효과를조사하였다 실험동물은체중 의 을 바이오에서구입하여고형사료 삼양사료 한국 와물을충분히공급하면서 주일이상실험실환경에적응시킨후실험에사용하였다 모든실험동물관리는경남과학기술대학교실험동물관리기준에의거하여동물실험을수행하였다 승인번호 대조군과실험군은각 마리의토끼를사용하였으며 실험으로신장을적출하여신피질절편을만든후지질과산화및 유출실험과 실험으로약물투여후혈액을채혈하여급성신부전의지표인 의혈중농도와항산화효과를조사하기위한지질과산화를측정하였다 또한 신장세포의병리조직을검사하였다 산조인 을증류수 와함께전기약탕기로 에서 시간전탕한후부직포를이용하여찌꺼기를제거하고동결건조기를이용하여 의건조추출물을얻었다 이를냉동실에신선하게보관하였다가실험직전에필요한농도로 차증류수에용해시켜서실험에사용하였다 실험동물을경추타격법으로희생시킨후즉시신장을분리하여 을신동맥에주입하여관류시켜혈액을제거한뒤 에보관하였다 그리고준비된장기를 을이용하여 두께로절단한후실험전까지 에다시보관하였다 이함유된 의 에 산소를지속적으로공급하면서산조인추출물 첨가한후신장의피질에서준비된 정도의신장절편을 에넣어 시간배양하였다 투여전 일동안산조인추출액 을투여 하였다 대조군은동량의생리식염수를투여하였다 을 에희석하여 회복강내주사하고 시간및 시간뒤에채혈후희생하여조직을채취하고변화를관찰하였다 실험으로지질과산화는 의함량을측정하여분석하였다 및산조인추출물이함유된배양액에신장절편을 시간배양한후 가함유된 시험관에넣고 의 의 를첨가하였다 상온에서 분간방치한후 에서 분간가열하고 에서 분간방치하였다 의 를혼합및진탕하여 에서 분간원심한후상층액을취하여 를이용하여 와 에서측정하였다 지질과산화분석은 에의한급성신부전을유발시킨후신장을적출하여신장절편을만든다음 와같은방법으로지질과산화를측정하였다 약물로처리된신장조직절편을증류수에넣고갈아서만든조직액과배양용액을각각 를취하여 활성을 측정 아산제약 한국 로측정하였다 토끼의귀동맥에서혈액을채취한뒤원심분리하여혈청을획득하였으며 를이용하여혈청에함유된 을측정하였다 조직학적소견을위하여적출한신장의동맥에 를관류하여고정하고파라핀에포맷한후에 μ 두께로조직절편으로만들어염색하여광학현미경으로세포의손상정도를검사하였다 통계처리는 를이용하였다 실험성적은 로나타내었으며 실험군평균치차에대한검증은 로실시하여유의수준을 이하로하였다
Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No. 7 779 산조인추출액이신피질절편에서지질과산화를효과적으로감소시키는지를확인하기위하여산조인추출액을각각 농도가되게한다음 을첨가하여신피질절편에서유리되는지질과산화정도를조사하였다 실험의결과는대조군을 로환산하였을때 의 처리군은 를나타내었으나산조인추출액 와 를처리하였을때각각 및 로나타나산조인추출액이 의 에의한지질과산화를효과적으로감소시켰으며 모두대조군과유의한차이를보였다 산조인추출액이신피질절편에서 에의한세포의손상을억제하는지를확인하기위하여산조인추출액을각각 농도가되게한다음 을첨가하여신피질절편에서유리되는 의정도를조사하였다 실험의결과로아무런처리를하지않은대조군의 유출은 였으며 을처리한대조군은 를나타내었다 이는 처리군이아무런처리를하지않은대조군에비하여 유출이 배가까이증가한것이다 산조인추출액을 와 를처리하였을때각각 및 로나타나산조인추출액 농도에의존하여 에의한 유출이감소하였으며 모두대조배양군과유의한차이를보였다 이러한결과는 에의해유발된신피질절편의세포손상에대해산조인추출액이효과적인감소를나타내는것으로보였다 산조인추출액이 에의한급성신부전치료에효과가있는지를조사하기위하여급성급성신부전증세의지표인혈중 의농도를측정하였다 약물을처리하지않은대조군의혈청 은 로나타난반면 을복강으로단독처리하여 시간경과한군은 로대조군에비하여약 배높게신장의손상을유발하는것으로나타났다 그러나산조인추출액 을 일간전처리한군에서 을복강투여한군은 로 단독처리군에비하여약 정도신장의손상을감소시키는것으로나타났으며 특히 시간경과시 로써대조군과비슷한결과를나타내었다 산조인추출액 를 일간처리한후 을 회복강투여하여 시간후희생시켜신장에서신피질절편을만들어지질과산화를측정한결과대조군을 로환산하였을때 단독처리군에서는 로나타났으나 산조인추출액을 일간처리한
780 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 7 후 을처리하여 시간경과한군은 로 대조군과비슷한결과를보였다 신장에약물처리를하지않은대조군의조직은육안적으로 근위곱슬세관에 으로세포질이붉게염색되었다 내강에 는융모세포들이관찰되었으며 원위곱슬세관은세포질이밝 고내강이정상적인소견을나타내었다 반면 투여 시간경과군에서는근위곱슬세관이대조군보 다더붉게염색되었으며 세포의경계가불분명하였다 원위 곱슬세관의내강은융모세포의탈락으로공포를형성하였다 시간경과군에서는근위곱슬세관과원위곱슬세관이 에더욱진하게염색되었다 근위곱슬세관의내강은완전히 소실되어큰공포를형성하였다 산조인추출액을전처리하고 을투여한군에서는근위곱슬세관이대조군과비슷 하게세포질이 에붉게염색되며 원위곱슬세관의세포 질은밝게나타났다 단독처리군에서는근위곱슬세 뇨관의융모세포가탈락하였으나산조인추출액을전처리한 군에서는융모세포의탈락이거의없이대조군과비슷한결과 를나타내었다 B D Cisplatin A C E Cisplatin + Zizyphus Extract Control 24 hr 48 hr μ
Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No. 7 781 세포의대사과정결과로활성산소가체내에축적되면세포와조직은손상을받아세포기능의저하로여러가지질병의원인을제공하게된다 산화적스트레스는신장질환 당뇨병 치매 동맥경화 관절염 심장병 비만 혈압상승등성인병의원인이되며 현대의학에서는이러한스트레스를억제하기위한연구가수행되고있다 신장질환의치료를위해항산화제처리 약물요법 신장이식등의다양한치료방법이수행되고있지만부작용및치료의한계성으로인하여적절한치료제가개발되어있지못한상태이다 최근대체의학의치료법에대한관심이증가하면서항산화효과가우수한식품의처방으로인체에서생성되는지질과산화와스트레스를억제하는방법으로질병을예방하거나치료하는방법이제시되고있다 산조인은동양의전통의학에서심신의안정 심장질환 간질환 허약체질 스트레스억제등에효과가있는치료제로알려져있다 산조인추출물이아질산과활성산소의생성을억제하여세포의손상방지와기억력을증진시키고치매예방에도효과가있을것이라고 등 은보고하였고 산조인은닭에서환절기에송과체의자극으로 의분비를증가시키며동시에임파조직에직접작용하여면역기능을상승시키는효과가있다고하였다 최근연구에따르면산조인은간에서 의결합을증가시켜당의합성을증가시킨다고하였다 그러나산조인이신장에미치는항산화효과에대한연구는거의없는실정이다 현대인들은직장에서의과도한스트레스와음주문화 성인질병유발음식의과다섭취등으로신장질환으로사망하는비율이높아져가고있는반면치료제의개발은미비한상태이다 이러한관점에서본연구는산조인추출물을제작하여신장에대한항산화효과에대해알아보고자하였다 은항암제로널리사용되는약제이지만신장독성효과로인해사용이일부제한되고있는데 오히려이러한독성효과가신장질환의실험과관련된질환의척도약제로널리사용되고있다 이러한독성효과는 의 생성에의하여일어나며 는항산화효과를측정할수있는실험에서신장의손상척도지표로사용되는약제이다 이번연구의결과신피질절편실험에서세포의손상정도를나타내는지질과산화생성은 단독처리군에비하여산조인추출액 를동시처리했을때 의세포손상억제효과를나타내었으며 세포사멸의정도를나타내는 유출은 단독처리군 에비하여산조인추출액 동시처리했을때 로 의감소를나타내어대조군과유사한결과를보였다 이는산조인이 를제거하는항산화효과로산화적스트레스를감소시킨다는사실을나타낸것이다 급성신부전시혈청 농도에미치는영향은 대조군 에비하여 을단독으로복강처리하였을때 로약 배의높은신장손상을보였지만 산조인추출액 을 일간전처리하고 을복강투여후 시간경과한군은 로서대조군과유사한결과를나타내었다 그리고신장절편조직의지질과산화검사에서도 투여군은대조군보다 배높았으나 일동안산조인추출액전처리군은 배로대조군과유사한수준으로나타났다 병리조직학적검사소견에서 투여군은근위곱슬세관의내강이탈락하여공포를형성하였으나산조인추출액전처리군에서는융모세포의탈락이거의없는대조군과유사한결과를보였다 이러한결과로 과 에의해손상된신장의세포들이산조인추출액에의하여세포가회복되거나손상이억제되는것을알수있었다 등 은 이특이적으로신장세포에 를증가시켜독성효과를유발하고 산조인은신장세포에서지질과산화와 의생성을억제하는기전에의하여 에의해생성된 를감소시켜세포의기능을정상화함으로혈중노폐물인 을정상적으로체외로배출하여혈중 을감소시킨다고하였는데 이러한내용은 을대조군수준으로감소시킨본실험의결과와유사하였다 이는산조인추출액의효능에관한실험적연구로 등 은 을쥐에투여하여산조인의신장에대한항산화효과실험으로총단백질함량을조사한결과대조군에비하여 단독처리군은 감소한반면산조인추출액을동시투여한군은대조군에비하여 감소하여산조인추출액이총단백질함량을 증가시키는탁월한치료효과를나타내었다고하였다고보고한내용과 등 이사람의신장유래세포주인 와 에 를처리하였을때산조인추출액을전처리한군에서바이러스부착력이 감소되는효능을나타내었다고보고한내용과유사하다 또한 등 이보고한내용에서 에의해유발된신장의융모세포탈락시산조인추출액이융모세포의탈락을억제하였다는내용은이번실험의조직관찰결과와일치하였다 이번실험에서 와 에의한신장의급성신부전시산조인추출액이세포의손상을초래하는지질과산화의생성및세포의사멸의척도를나타내는 유출을효과적으로억제하였으며 신장기능의척도인 검사에서도신장기능보호효과를나타내었다 그리고신장의조직소견에서융모세포의탈락을억제하여신장을보호하는효능을입증하였다 이러한결과로볼때산조인은신장의질환에대하여치료의효능을가질수있는대체의약품으로사용가능할것으로생각된다
782 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 7 산조인의성분을살펴보면 산조인은식물성기름을다량 함유하고있으며 주성분으로알려진 을다 량함유하고있다 등 은동양에서불면증치료제 로사용되는 을산조인에서분리하여 의 양을쥐에게구강투여했을때 의쥐혈청에서검출하여 치료약제로서의효능이가능함을보고하였다 또한산조인은 혈압강하작용 자궁수축작용 지방유 단백질 와 종류의 와 등의 및 으로구성하고있으며 산조인추출액을신경세포주에처 리하여실험한결과 β 혹은 에의한세포독성에대하여 정상세포에근접하게회복시켰을뿐만아니라 를효 과적으로억제시켰다고보고하였다 이상의결과로산조인추출액은 와 의 에의한독성작용에의해유도된급성신부전시항산화작용 및세포보호작용을가지는효과가있음을확인하였으며 에의한급성신부전시신장의세포조직을탈락시키는 손상유발시에도세포를보호하여탈락을억제하는효과를 나타냄을알수있었다 이러한산조인의효과를입증할수 있는더많은연구가이루어져산조인이인체의신장질환치 료에유용한대체요법으로활용될수있기를기대한다 이논문은 년도경남과학기술대학교기성회연구비지 원으로수행된연구입니다 α β
Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No. 7 783 경남과학기술대학교대학중점연구소양돈과학기술센터 경남과학기술대학교동물생물과학과 항암제로알려진 과 를토끼에투여하여유도된급성신부전시산조인추출액을처리하였을때신장세포의보호에미치는항산화효과를조사하였다 신장을분리한후신피질절편실험에서세포의손상을유발하는지질과산화및 실험에서 단독처리시대조군에비하여각각 배 배이상증가하였으나산조인추출액 를동시처리하였을때는대조군수준으로감소하였다 측정과지질과산화실험에서 을복강투여한군의 농도가 로나타났으나산조인추출액 을 일간전처리후 투여 시간경과한군은 로 의농도가약 감소되는신장보호효과를나타내었고 지질과산화검사는 단독투여시대조군에비하여 배높게나타났으나산조인추출액전처리시 배로대조군과유사하였다 병리조직검사는 단독처리군에서근위곱슬세관이대조군에대하여더붉게염색되었으며근위곱슬세관은내강의융모세포가탈락하여공포를형성하였다 그러나산조인추출액을 일간전처리한군에서는근위곱슬세관이대조군과유사한염색소견을보였고근위곱습세관도내강의융모세포탈락이거의나타나지않았다 따라서 과 에의해유발된신장세포손상에대하여산조인추출액이항산화효과를보였다