대한진단검사의학회지 : 제 24 권제 6 호 2004 Korean J Lab Med 2004; 24: 진단면역학 이종장기이식에서의이종항원의존성보체활성측정 김지연 1, 2 김영태 2 이정렬 2 위현초 2 이승희 2 김한성 1 강희정 1, 2 한림대학교성심병원

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애란 자
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1 대한진단검사의학회지 : 제 24 권제 6 호 2004 Korean J Lab Med 2004; 24: 진단면역학 이종장기이식에서의이종항원의존성보체활성측정 김지연 1, 2 김영태 2 이정렬 2 위현초 2 이승희 2 김한성 1 강희정 1, 2 한림대학교성심병원진단검사의학과 1, 서울대학교병원이종이식연구센터 2 A Xenoreactive Complement Hemolytic Assay in Xenotransplantation Ji Yeon Kim, M.S. 1,2, Young Tae Kim, M.D. 2, Jeong Ryul Lee, M.D. 2, Hyun Cho Wi, B.S. 2, Seung Hee Lee, B.S. 2, Han Sung Kim, M.D. 1, and Hee Jung Kang, M.D. 1,2 Department of Laboratory Medicine 1, Hallym University Sacred Heart Hospital, Anyang; The Xenotransplantation Research Center 2, Seoul National University Hospital, Seoul, Korea Background : Xenotrasplantation is a possible alternative for organ shortage in clinical transplantation, but hyperacute xenograft rejection has been a big huddle. Pre-existing natural xenoreactive antibodies and consequent activation of the complement system are thought to play major roles in hyperacute rejection. To set a monitorig test for the hyperacute rejection in xenotransplantation, we optimised a complement hemolytic assay and evaluated its in-vitro precisions and clinical implications. Methods : Complement hemolytic activities of normal human sera on rabbit or porcine red blood cells (RBCs) in each gelatin veronal buffer with or without dextrose were compared to retrieve optimal conditions for assay. The precision and activity range of normal human sera were evaluated at a given optimum condition. And we also assayed complement hemolytic activities of the sera obtained from various models of xenotransplantated animal, and assessed its association with other clinical parameters. Results : The assay with rabbit RBCs in gelatin veronal buffer containing dextrose showed linear hemolytic reactions in the broadest range of serum dilutions with the least background hemolysis. Its intra- and inter-assay coefficient variation was 1.3% and 8.1%, respectively. The complement hemolytic activity was dependent on the serum levels of C3 and IgM. Severe hyperacute rejection in lung xenotransplantation was accompanied with a rapid decline of serum complement hemolytic activities compared to the basal level. Conclusions : The complement hemolytic assay using rabbit red cells has a clinically acceptable range of precision, and seems to be useful for the evaluation of hyperacute rejection in clinical xenotransplantation. (Korean J Lab Med 2004; 24: ) Key Words : Complement hemolytic activity, Rabbit red cells, Xenotransplantation, Precision 접수 : 2004년 7월 22일접수번호 : KJLM1777 수정본접수 : 2004년 9월 21일교신저자 : 강희정우 경기도안양시동안구평촌동 896 한림대학교성심병원진단검사의학과전화 : , Fax: kangheejung@hallym.or.kr * 본연구는보건복지부보건의료기술진흥사업의지원에의하여이루어진것임 ( 과제고유번호 : 0405-BO ). 서론장기이식은말기장기부전환자의유일한치료방법으로현재선진국을비롯하여전세계적으로많이시술되고있다. 그러나최근들어각국가마다공여장기의심각한부족으로인해이식대기상태에서사망하는환자의수가크게증가함에따라대체장기에대한필요성이크게부각되고있다. 동물의장기를사람에게이식 415

2 416 김지연 김영태 이정렬외 4 인 하는이종이식 (xenotransplantation) 은이러한장기부족문제의궁극적인해결책으로제시되고있으며, 특히돼지의장기는그크기와생리학적구조가사람의장기와유사하다는점과번식효율이나인체감염가능성등을고려할때이상적인이종장기로평가되고있다. 그러나이종장기의이식은동물조직에대한사람의강력한면역거부반응과동물과사람조직사이의해부및생리학적부조화로인하여아직까지성공하지못하고있는실정이다 [1-5]. 이종장기이식후거부반응은동종장기이식에서의거부반응과달리이식후수분또는수시간이내에이식된조직의괴사를초래하는초급성거부반응의형태로나타난다. 이는고등영장류 ( 사람, 유인원, 구세계원숭이 ) 를제외한모든포유류의세포에존재하는 galactose- 1,3-galactose ( Gal) 라는당쇄세포표면분자에모든사람이자연적으로가지고있는항 Gal 항체의결합으로인한보체계 (complement system) 의활성화로기인한것이다 [6-9]. 보체계는혈청또는세포막에존재하는 30여가지의단백질로구성되어있으며크게 classical pathway, alternative pathway, lectin pathway의세가지기전에의해서활성화된다 [10]. 이중이종반응성항체에의해유도되어지는 classical pathway는혈관성이종이식거부반응을일으키는주요경로로알려져있다. 돼지의장기가사람에게이식되었을경우돼지의내피세포에존재하는 Gal에사람의혈청내에존재하는항 Gal 항체가결합하여보체의 classical pathway의활성을유도하고보체활성화마지막단계산물인 membrane attack complex의형성으로내피세포가파괴되어결국단시간내에조직이괴사하게된다. 초급성거부반응을극복하는일은이종장기이식을성공적으로수행하기위한가장큰과제이다 [11]. 이를해결하기위해서는효과적인보체활성조절이필요하며 [12], 이에앞서장기이식시보체의활성도를정확히측정하여모니터링할수있는시스템의확립이필수적이다. 본연구에서는혈청내에존재하는보체의용혈능을정확하고효과적으로측정할수있는방법을모색하여이종반응성보체계의기능평가를위한신뢰성있는시스템을마련하고자하였다. 본연구에서는보체활성능을모니터링하는용혈능검사를마련하고그정밀도를평가하였으며개에서의선택적혈장치환술을시행한경우, cobra venom factor (CVF) 를투여한경우, 돼지에서개로의폐이식을시행한경우등다양한실험모델등에적용하여보체용혈능을측정하고각기다른소견들과비교함으로써이종이식초급성거부반응모니터에이평가법이유용함을확인하고자하였다. 대상및방법 토끼또는돼지의전혈 ml 를채취즉시동량의 modified Alserver's solution에섞은후냉장상태로보관하며 4주이내에사용하였다. 사용직전에보관하였던토끼또는돼지의전혈 5 ml을 25 ml의 GVB-EDTA (0.1% gelatin, 142 mm NaCl, 0.1% sodium diethyl barbiturate, 0.01 M Na 2 EDTA, ph 7.4) 에부유하여 37 에서 1시간항온후 1,000 g에서 10분간원침하여상층액을제거하였다. 혈구를 GVB ++ (0.1% gelatin, 142 mm NaCl, 0.1% sodium diethyl barbiturate, 0.4 mm MgCl 2, 0.06 mm CaCl 2, ph 7.4) 또는 DGVB ++ (0.1% gelatin, 57 mm NaCl, 0.1% sodium diethyl barbiturate, 3% dextrose, 0.06 mm CaCl 2, 0.4 mm MgCl 2, ph 7.4) 로붉은색이사라질때까지반복하여세척하고세포농도가 cells/ml이되도록 GVB ++ 또는 DGVB ++ 에재부유하였다. DGVB ++ 는 GVB ++ 의조성에서 NaCl 양을줄이고대신 dextrose를첨가하여삼투압농도를맞춘 GVB ++ 의저이온강도완충액에해당한다. 세포농도는적혈구부유액 0.2 ml를증류수 2.8 ml에섞어완전히용혈시킨후파장 541 nm에서측정한흡광도가 0.7일때 cells/ml 임을기준으로하여조절하였다 [13]. 2. 토끼또는돼지혈구용혈성보체활성 (rabbit erythrocyte hemolytic complement activity, RECH50; pig erythrocyte hemolytic complement activity, PECH50) 측정 사람혈청에서의이종반응성보체활성을측정하기위한효과적인조건을알아보기위하여적혈구의종류와완충액의종류를달리하여보체용혈능을비교하였다. 혈청은정상성인 12명의혈청을혼주한후소량분주하여 -70 에동결보관하였다가사용하였으며, 적혈구로는토끼또는돼지의것을, 적혈구와혈청희석을위한완충액으로는 GVB ++ 또는 DGVB ++ 를사용하여각조건에서의용혈도를비교하였다. -70 에서냉동보관된혈청은사용직전꺼내어즉시녹인후차가운 GVB ++ 또는 DGVB ++ 로계단희석하였다. 각각의희석된혈청을얼음수조내의시험관에 100 L씩분주한후, cells/ml의토끼또는돼지혈구를 100 L씩첨가하여잘섞었다. 영점대조시험관에는혈청대신 GVB ++ 또는 DGVB ++ 를첨가하고완전용혈대조시험관에는혈청이나완충액대신증류수 200 L를첨가하였다. 37 항온조에서 1시간반응시키고차가운생리식염수를 2 ml씩분주하여반응을정지시키고원심분리하여상층액의흡광도를파장 412 nm에서측정하였다. 보체활성은토끼또는돼지의혈구를 50% 용혈시키는혈청희석배수의역수 (RECH50 또는 PECH50) 로나타내었으며. Krogh 공식을이용하여기존의문헌대로산출하였다 [7, 13]. 검사일간의변이를최소화하기위하여 30명의정상인혼합냉동혈청을분주하여매실험시 calibrator로이용하였다. 1. 보체용혈능측정을위한적혈구준비 3. RECH50 의정밀도분석 이종항원에의한보체용혈도평가에적절하다고여겨진 RECH-

3 이종장기이식에서의이종항원의존성보체활성측정 검사의검사내, 검사간정밀도를측정하였다. 냉동보존한정상인혈청으로검사내 3번의반복측정과 3일간의반복측정으로검사내, 검사간변이계수를산출하였다. 정상인에서의이종항원에대한보체활성도를보기위하여 50명의정상인혈청을이용하여 RECH50를측정하여그분포를분석하였다. 4. 혈청 IgM과 C3 농도에따른 RECH50의변화이종항원에대한항체반응및보체활성을관찰하는데 RECH50 검사가적합한지확인하기위하여혈청 IgM 과 C3에따른 RECH50 의변화를관찰하였다. 실험모델은 25 kg 체중의잡종견에 COBE 혈장여과장치 (COBE spectra, Lakewood, USA) 에 Evalflux 2A membrane (Kawasumi laboratories, Tokyo, Japan) 를설치하여선택적혈장치환술을시행하였으며이에따른 IgM, C3의변화와 RECH50 변화를모니터하였다. 이선택적혈장치환술은 membrane 여과를통하여 100 kd 이상인단백을여과하고나머지혈장은돌려주는방식으로효율의차이는있으나 IgM과 IgG 를동시제거할수있고 C3 또한일부제거할수있다 [14]. 선택적혈장치환술은 1회에 2 plasma volume을시행하였고 2일후다시 2 plasma volume을시행하였으며혈장이식전과이식후 6일까지 2일간격으로혈액을채취하였다. IgM의측정은기존에보고된 ELISA법을사용하였다 [14]. 96 well plate에도포한 goat anti-dog IgM antibody (ICN Pharmaceuticals, Inc., Aurora, OH) 에여러배수로희석한검체혈청과이미농도가알려진표준혈청을반응시키고 goat anti-dog IgM-peroxidase conjugate antibody와 3,3,5,5 -tetramethyl- benzidine 용액을사용하여 IgM을검출하였다. 같이검사한표준혈청을이용하여흡광도와농도의표준검량곡선을작성하고검체의 IgM 농도를산출하였다. C3의측정은 radial immunodiffusion법을이용하였다. 2% goat anti-dog C3 antibody (ICN Pharmaceuticals, Inc., Aurora, OH) 가함유된 1% 아가로스젤에 well을만들어각각의희석된혈청을 well에약 7 L씩분주하고다시습윤상자에넣어 48시간이상냉장보관하였다. 젤을생리식염수와증류수에담가두어비침강단백을제거하고말린후 1% Amido black 용액으로 3-4분간염색하였다. 젤에각시료의항원-항체침전이원형모양으로형성된것을확인할수있었으며원형의침전면적은 C3 농도와비례함을이용하여혈청내상대적인 C3 양을계산하였다. 혈장치환하기전개의혈청을계단희석하여 calibrator로사용하였고이를통하여농도와침전면적간의표준곡선을산출하였다 [15, 16]. 5. 이종이식동물실험모델에서 RECH50를이용한보체활성도평가이종이식에대한초급성거부반응에서보체활성도평가를위한 RECH50의유용성을확인하기위하여돼지-개간의이종폐장이식전후의혈청을이용하여 RECH50를측정하였다. 이종폐장이식은아무처리하지않은대조수혜개 (control, n=2) 와하루전에 CVF를투여하여보체를고갈시킨수혜개 (CVF, n=2) 두군에서돼지의편측폐를개에정소성이종이식하여 3시간동안관찰하였다. 검체는수혜개로부터이식전, 이식후 10분, 20분, 30분, 그후 30분간격으로 3시간까지채취하였으며 CVF 투여군에서는 CVF 투여전, 투여후 1시간, 6시간, 12시간검체를추가로채취하고이식후채취간격은동일하게시행하였다. 모든검체는 30분간냉장에두었다가원심분리후혈청을소분하여 -70 에보관하였다가사용하였다. 이종이식거부반응정도를평가하기위하여이식후 30분에이식편에서생검을시행하여포르말린에고정후 hematoxylin and eosin 염색을시행하였다. OD at 412 nm % hemolysis PE (GVB ++ ) PE (DGVB ++ ) RE (GVB ++ ) RE (DGVB ++ ) PE in GVB PE in DGVB ++ RE in GVB ++ RE in DGVB ++ Expected serum HER-2/neu (ng/ml) A Dilution of NHS B Fig. 1. Comparison of hemolytic activities according to type of red blood cells and buffers. Rabbit red cells in DGVB ++ showed the least background hemolysis (A) and linear hemolytic reactions, in the broadest range of serum dilutions (B). PE, pig erythrocyte; RE, rabbit erythrocyte; NHS, normal human serum; DGVB ++, dextrose gelatin veronal buffer; GVB ++, gelatin veronal buffer.

418 김지연 김영태 이정렬외 4 인 Number 14 12 10 8 6 4 2 Std. Dev=2.82 Mean=15.1 N=50.00 % Level of C3, IgM and RECH50 160 120 80 40 C3 IgM RECH50 0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 11.0 13.0 15.0 17.0 19.

0 pre post pre post porst post post 1st PP 2nd PP 48 hr 96 hr 150 hr Fig. 3.

4 418 김지연 김영태 이정렬외 4 인 Number Std. Dev=2.82 Mean=15.1 N=50.00 % Level of C3, IgM and RECH C3 IgM RECH RECH50 (RECH50 units/ml) Fig. 2. Distribution of level of complement hemolytic activities on rabbit cells in the serum of normal subjects (RECH50). 0 pre post pre post porst post post 1st PP 2nd PP 48 hr 96 hr 150 hr Fig. 3. Serial changes of levels of C3, IgM and RECH50 in the serum of a dog which was given plasmapheresis (PP) twice with 48 hr interval. % Level of RECH Control 1 CVF1 Control 2 CVF2 Fig. 4. (A) Change of complement hemolytic acitivities (RECH50) in the 20.0 sera of dogs which were transplanted with porcine lungs. Hemolytic activity was expressed as % level compared to basal level. Control 0.0 represents recipient dogs without any pretreatment and CVF represents dogs preinfused with cobra venom factor 24 hr prior to xeno Elapsed time after transplantation (min) A transplantation. (B) Representative histologic findings of two xenografts from control dogs at 30 min after reperfusion. The xenograft of control 1 (left) which showed rapid decline of serum RECH50 after transplantation revealed more extensive intravascular thrombosis and severe congestion than that of control 2 (right). H&E, 40. 결 과 Control 1 Control 2 2. RECH50 의정밀도와정상인에서의분포 B 1. 보체활성측정을위한조건확립과평가사람혈청에서이종반응성보체활성을측정하기위한효과적인조건을알아보기위하여적혈구의종류와혈청희석을위한완충액의종류를달리하여보체용혈능을비교하였다. 정상성인의혼주혈청에대하여토끼와돼지의적혈구그리고 GVB ++ 와 DGVB ++ 를사용하였을때각용혈도의변화를비교하였다. 각혈구와완충액조합별로완충액대조시험관에서의기저용혈도를비교하였을때토끼적혈구와 DGVB ++ 완충액을사용하였을때가장낮은기저용혈을보였다 (Fig. 1A). 또한토끼의적혈구와 DGVB ++ 로검사하였을경우혈청희석배수와용혈도사이의용량-효과곡선이가장넓은범위에서나타났으며이때의보체용혈능 (RECH50) 은 16.2 RECH50 unit/ml로다른검사조건들에비하여가장높게측정되었다 (Fig. 1B). 혼주냉동혈청으로 3회 RECH50를측정한결과 50% 용혈을보이는평균혈청희석배수가 15여서그값을 15 RECH50 unit/ ml라고임의로정하고매시험시 calibrator로사용하였다. 시험한혈청의 RECH50 값은같이시행한 calibrator 값으로보정하여보정된 RECH50 값으로산출하였다. 정상인혈청을이용하여검사내, 검사간각 3회씩반복측정을하였을때검사내의경우평균 12.0 RECH50 units/ml로변이계수는 1.3% 였으며검사간의경우평균 11.8 RECH50 units/ml, 변이계수 8.1% 로측정방법의안정성을확인할수있었다. 정상인 50명에서의이종항원에대한보체활성도는 15.1±2.82 RECH50 units/ml로그분포는 Fig. 2와같다. 3. 혈청 IgM과 C3 농도에따른 RECH50의변화혈장치환으로 IgM과 C3를제거하면이에따라 RECH50치도

5 이종장기이식에서의이종항원의존성보체활성측정 419 저하되고 IgM이나 C3의양이회복되면같이증가되는의존적관계를보여주었다. 특히 IgM 보다는 C3치에더밀접하게연관되어변화하였다 (Fig. 3). 4. 이종이식모델에서 RECH50의이용이종이식전 CVF를투여한군에서는투여후 1시간째부터급속히 RECH50치가감소하여약 6시간부터는거의용혈능이검출되지않았으며이종폐이식후에도별다른변화를보이지않았다. CVF 투여없이이종이식을시행한군에서는이식후 RECH50 가이식전에비하여급속히감소한경우 (control 1) 와감소가더디게나타나는경우 (control 2) 가있었다 (Fig. 4A). 두경우의이식후 30분에서의조직소견을비교하였더니 RECH50가급속히감소한경우에서감소가덜한경우보다초급성거부반응소견인혈관내혈전형성과부종소견이현저하였다 (Fig. 4B). 고찰이종세포에대한보체용혈능측정은이종이식후거부반응의원인및정도를분석하기위하여많은연구에서사용되어왔다. 대개의경우돼지혈구나토끼혈구를이용하여연구자마다각기다른방법으로이종세포에대한보체용혈능을분석하였는데 [7, 17] 단순히이식전후의거부반응의정도를보기위한목적으로사용되었지이를하나의검사로서평가한적은없었으며각방법간의장단점을비교하거나검사간정밀도분석등의평가가이루어지지못하였다. 본연구에서는보체용혈능검사를이식전위험도평가나이식후모니터검사로이용하기위하여방법간의비교를통하여최적의검사방법을설정하고그최적방법에서검사간정밀도를평가하여앞으로검사로서의이용이타당한지알아보고자하였다. 사용혈구로는이종이식시공여장기가돼지의장기이므로돼지혈구를이용하는것이이론적으로적합하나실제실험결과돼지혈구보다토끼혈구가더높은희석배수에서잘용혈되어 50% 용혈시키는혈청희석배수를민감하게결정할수있었다. 토끼혈구는돼지혈구와마찬가지로이종항원-항체반응에가장중요한항원인 Gal 항원을가지고있으며돼지혈구와달리사람보체의 alternative pathway를활성화시킬수있기때문에용혈능이한층증폭된것으로보인다 [7]. 이에비하여돼지혈구는완충액대조시험관에서의높은기저용혈로혈청희석배수에따른용혈도변화가크지않아평가에불편하였다. 또한돼지혈구의경우 osmotic fragility가높아서이러한시험관적환경에서쉽게용혈될수있어대조시험관에서의기저용혈을높인것으로여겨진다 [18]. 이러한결과를바탕으로본연구에서토끼혈구를이용하여이종항원에대한보체용혈능검사 (RECH50) 를확립하였고정상인혈청을이용하여그정밀도를확인하였다. RECH50는검사내 변이계수가 1.3% 이었으며검사간의경우 8.1% 로기능검사임에도불구하고매우안정된정밀도를보여주었다. 혈장 IgM와보체양의변화에따른 RECH50의변화를확인하기위하여개에서의선택적혈장치환술모델을사용하였다. 개의경우사람과달리항 Gal 항체는없지만돼지의비 Gal 항원에대한 IgM 자연항체가존재하여사람에서와유사하게돼지혈구또는토끼의혈구를용혈시킬수있어실험모델로선택하였다 [19]. 개에서선택적혈장치환술을시행하여 IgM과 C3를제거하면이에따라 RECH50치도감소하였고이들의혈중치가회복되면 RECH50도같이증가되었다. RECH50는 IgM 변화보다 C3 변화에보다예민하게반응하였는데이는 IgM 측정이이종항원에대한특이 IgM 양이아니고총 IgM을측정한것이라관련성이덜한것일수도있고보체용혈도검사에서 C3 및그밖의보체성분의농도가반응의강도를결정하는속도조절단계 (ratelimiting step) 이기때문일수도있다. 보체용혈도가혈구에반응하는 IgM과보체단백에의존적으로변한다는사실은이미시험관조건에서규명되어있으나실제임상적생체조건에서는 IgM, C3 중어느것이더주요한보체용혈도의결정요인인지정확히설명하기어렵다. 이들의정확한관계는 IgM만특이적으로제거하거나 C3만특이적으로제거할수있는실험모델에서규명될수있겠지만실제생체실험에서이를시행하기는쉽지않다. CVF를투여한개에서투여한지 6시간내에보체용혈도가거의측정할수없는범위로떨어졌는데이는 CVF에의하여보체계가계속활성화되어결국은 C3를모두소모한결과라하겠다 [20]. 즉 RECH50 측정으로보체계활성도의변화를효과적으로판정할수있음을보여주었다. 돼지의폐를개에이식한후이식후 RECH50 변화를모니터하였더니실험동물에따라 RECH50의감소정도가다양하였다. 통계적으로검증할만한충분한수의이식실험을시행하지못하였으나두마리이식개에서이종이식편의조직학적소견을검토한결과이식전에비하여 RECH50가더심하게감소하였던경우에서더심한혈관내혈전형성과충혈소견을볼수있었다. 아마도 RECH50의감소는이종항체결합과보체계의활성에의하여보체소모로인하여발생하며따라서그감소정도가초급성거부반응의정도를반영하는것으로생각되었다. CVF 투여군은약제의투여자체가이식편의조직학적소견에영향을줄수있으므로같이비교하지않았다. 이종장기이식은부족한공여장기의해결책으로많은연구와노력이이루어지고있는분야이다. 이종장기이식이현실적으로고려되기이전에그에따른안전성뿐아니라이식후거부반응을모니터할수있는비침습적검사방법의확립이매우중요하다. 본연구자들이확립한 RECH50는이종항원에반응하는보체용혈능을측정할수있는재현성있는검사이며실험동물모델에서공여자의항체제거효과판정및이종이식후이식거부반응모니터링에도유용하였다. 이검사는이종이식동물실험이나앞으로만일이종이식의임상적용이가능할경우효과적인모니터링검사

6 420 김지연 김영태 이정렬외 4 인 로이용될수있으리라사료된다. 요약배경 : 장기부족을겪고있는임상이식분야에서이종이식은하나의가능한대안으로여겨지고있으나이종이식시의초급성거부반응이큰장애이다. 이미형성되어있는자연항체가이종항원에결합하여이에따라발생하는보체의활성화가초급성거부반응의주요기전이다. 본연구에서는이종이식의초급성거부반응을모니터하기위한보체용혈도검사를마련하고이의정밀도와임상적중요성을알아보았다. 방법 : 사람혈청에대한보체용혈도검사를토끼와돼지의혈구로 dextrose 함유또는함유하지않는 gelatin veronal buffer 에서비교하여가장검사에적합한조건을조사하였다. 얻어진최적조건하에서검사의정밀도와정상성인혈청의보체용혈도범위를조사하였다. 또한여러가지이종이식동물실험에서얻은혈청에서보체용혈도를측정하여보체용혈도와다른임상소견과의연관성을살펴보았다. 결과 : 토끼혈구와저이온강도의 dextrose 함유 gelatin veronal buffer를사용한경우에서가장낮은기저용혈을보였고가장넓은혈청희석범위에서용혈도의직선성을보였다. 이방법의검사내, 검사간정밀도는 1.3% 와 8.1% 이었다. 보체용혈도는혈중 C3와 IgM치에의존적으로변화하였으며, 이식전에비하여이종이식후에보체용혈도의감소가큰경우더심한초급성거부반응을보였다. 결론 : 토끼혈구를이용한이종항원에대한보체용혈도검사는임상적으로적합한정밀도를보였으며추후이종이식의초급성거부반응의모니터에유용하리라사료된다. 참고문헌 1. Brenner P, Reichenspurner H, Schmoeckel M, Wimmer C, Rucker A, Eder V, et al. Prevention of hyperacute xenograft rejection in orthotopic xenotransplantation of pig hearts into baboons using immunoadsorption of antibodies and complement factors. Transpl Int 2000; 13 (Suppl 1): S Anja R and Mohamed RD. Antibody-mediated activation of the cassical pathway in xenograft rejection. Transplant Immunol 2002; 9: Beschorner WE, Sudan DL, Radio SJ, Yang T, Franco KL, Hill AC, et al. Heart xenograft survival with chimeric pig dornors and modest immune suppression. Ann Surg 2003; 237: Cooper DK. Clinical xenotransplantation-how close are we? Lancet 2003; 362: Lawxon J and Platt JL. Molecular barriers to xenotransplantation. Transplantion 1996; 62: Dalmasso AP, Vercellotti GM, Fischel RJ, Bolman RM, Bach FH, Platt JL. Mechanism of complement activation in the hyperacute rejection of porcine organs transplanted into primate recipient. Am J Pathol 1992; 140: Alexander JW, Paul M, Caroline F, Anja R, Mohamed RD, Robert R. Activation of complement pathways in xenotransplantation: an in vitro study. Transplant Immunol 2002; 9: Oriol R, Ye Y, Koran E, Cooper DK. Carbohydrate antigens of pig tissues reacting with human natural antibodies as potential targets for hyperacute vascular rejection in pig-to-man organ xenotransplantation. Transplantation 1993; 56: Sandrin MS, Vaughan HA, Dabkowski PL, McKenzie IFC. Antipig IgM antibodies in human serum react predominantly with Gal ( 1-3)Gal epitopes. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90: Volanakis JE. Overview of the complement system. In: Volanakis JE, Frank MM, eds. The human complement system in health and disease. New York: Marcel Dekker, 1998: Fiane AE, Mollnes TE, Videm V, Hovig T, Hogasen K, Mellbye OJ, et al. Compstatin, a peptide inhibitor of C3, prolongs survival of ex vivo perfused pig xenografts. Xenotransplatation 1999; 6: Platt JL and Saadi S. The role of complement in transplantation. Mol Immunol 1999; 36: 강희정및이은희. 자가제조시약을이용한 CH50 검사의평가. 임상병리와정도관리 2000; 22: 이정렬, 김희경, 김지연, 최대영, 이재형, 위현초등. 돼지- 개이소심장이식모델에서생존에미치는항체역가의영향- 이종이식시대의개막-. 대한흉부외과학회지 2004; 37: Mancini G, Carbonara AO, Heremans FJ. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion. Immunochemistry 1965; 2: Giclas PC. Complement tests. In: Rose NR, Conway de Macario E, Folds JD, Lane HC, Nakamura RM, eds. Manual of clinical laboratory immunology. 5th ed. Washington DC: ASM Press, 1997: Xu H, Yin D, Naziruddin B, Chen L, Stark A, Wei Y, et al. The in vitro and in vivo effects of anti-galactose antibodies on endothelial cell activation and xenograft rejection. J Immunol 2003; 170: Johnstone JE, MacLaren LA, Doucet J, McAlister VC. In vitro studies regarding the feasibility of bovine erythrocyte xenotransfusion. Xenotransplantation 2004; 11: Nakajima R, Nakajima S, Nakata T, Miura T, Hirano T, Konaka K, et al. Analysis of hyperacute rejection in newborn pig to dog lung xenotransplantation. Transplant Proc 2000; 32: Saadi S, Takahashi T, Holzknecht RA, Platt JL. Pathways to acute humoral rejection. Am J Pathol 2004; 164:

Pharmacotherapeutics Application of New Pathogenesis on the Drug Treatment of Diabetes Young Seol Kim, M.D. Department of Endocrinology Kyung Hee Univ

Pharmacotherapeutics Application of New Pathogenesis on the Drug Treatment of Diabetes Young Seol Kim, M.D. Department of Endocrinology Kyung Hee Univ Application of New Pathogenesis on the Drug Treatment of Diabetes Young Seol Kim, M.D. Department of Endocrinology Kyung Hee University College of Medicine & Hospital E mail : ycell2@yahoo.co.kr Abstract