200 김우호 두가지기계가시중에나와있는데, 먼저개발된것이 Beecher instrument ( 이다. 이기계는작은크기에비해정교하게제작되어있으며, 이를이용하는데는약간의숙달이필요하지만, 대부분의연구자가적응할수있도록제작되어있다

Size: px

Start display at page:

Download "200 김우호 두가지기계가시중에나와있는데, 먼저개발된것이 Beecher instrument (www.beecherinstruments.com) 이다. 이기계는작은크기에비해정교하게제작되어있으며, 이를이용하는데는약간의숙달이필요하지만, 대부분의연구자가적응할수있도록제작되어있다"

지혜 곽
7 years ago
Views:

1 대한병리학회지 : 제 36 권제 4 호 2002 The Korean Journal of Pathology. 2002; 36: 대규모병리학적분석연구를위한조직배열방법 김우호 서울대학교의과대학병리학교실 접수 : 2002년 5월 20일게재승인 : 2002년 7월 24일 책임저자 : 김우호우 서울시종로구연건동 28 서울대학교의과대학병리학교실전화 : Fax: woohokim@snu.ac.kr Tissue Array Method for Large Scale Clinicopathologic Study Woo Ho Kim Department of Pathology, Seoul National University College of Medicine, Seoul, Korea Tissue array consists of a slide containing hundreds or thousands of cases, making this method useful for rapid analysis of molecular markers in a large number of cases. The method significantly facilitates and accelerates the clinicopathologic analysis of cancer. To maximize the efficacy of the tissue array method in pathologic study, the pros and cons of this method should be understood. In this review, the history and a detailed method of tissue array production is described, emphasizing the advantage of the large core size (2.0 mm). Some methological points, including slide storage, microtoming, core size, reliability, and data analysis, are discussed. Key Words : Methods-Immunohistochemistry 조직배열은하나의슬라이드에여러환자의조직을함께넣어분석하는방법으로연구의효율성을크게높이기때문에 1 최근들어병리학적연구에활발히이용되기시작하였고, 국내에서도많은논문이발표되었다 그러나이방법으로만족할만한연구성과를얻기위해서는이방법의장점과단점을파악하고, 지켜야할점과피해야할점등을인식하고있어야할것이다. 이글은병리의사가직접연구재료 ( 파리핀블록 ) 를모아조직배열슬라이드를제작하고염색과판독과정을거쳐연구결과를얻는데필요한내용을기술하였다. 또한연구에필요한기자재및회사의홈페이지주소를본문에적어놓아쉽게찾아볼수있도록하였다. 조직배열방법의발달조직배열의창시는 1986년의 Dr. Battifora라고할수있다. 14 그는하나의슬라이드에백여개의조직을한꺼번에담는방법을발표하면서, 이방법이면역염색의정도관리에대단히유용할것이라고주장하였다. 이방법이몇몇실험실에서는유용하게사용되었으나, 조직이불규칙하게담겨져있어이를구별하려면많은노력이소요되기때문에병리의사들에게큰호응을얻지는못하였다. 4년후그는 checkerboard라는새로운방법을발표하였는데, 15 이방법은조직이가로-세로로줄맞추어배열되어있어서판독이쉽다는장점이있었으나, 조직의크기가너무작고 띄엄띄엄배열되므로호응을얻지못하였다. 그러나그는이에대한특허를획득하였고, 이것이조직배열의원형이라고볼수있다. 이방법은널리사용되지않았는데, 그이유는아마도기존의블록을완전히망가뜨려야만들수있으므로병리의사들이사용을주저하였기때문이라고생각된다. 현재사용되는조직배열방법은 1998년도 Kononen이발표한논문 16 에기록되어있는데, 그는 0.6 mm 크기의조직배열을제작할수있는기계를제작하여이를실험에사용하였다. 이방법은원래의블록에서직경 0.6 mm 원주를바늘을이용하여파낸다음, 이를새로운블록에같은크기의구멍을만들어옮기는것인데, 이러한작업을반복하여하나의새로운블록에수백개의증례가포함되게한후에이를박절하여동일한슬라이드를다량제작하였고, 이슬라이드를대상으로형광제자리부합화를수행하여논문을발표하였다. 그후부터동일한방법을사용한수십편의논문이발표되고있으며, 이로말미암아병리관련학술지에발표되는연구의증례와대상유전자 ( 또는항체 ) 의수가갑자기수배-수십배증가하는현상을보이고있다. 조직배열블록의제작조직배열블록을직접제작하려면기계를구입하면쉽다. 완전자동화된기계가있지만아직시판되지는않으며, 현재시중에서판매되는제품은수동으로모든작업을하도록되어있다. 199

2 200 김우호 두가지기계가시중에나와있는데, 먼저개발된것이 Beecher instrument ( 이다. 이기계는작은크기에비해정교하게제작되어있으며, 이를이용하는데는약간의숙달이필요하지만, 대부분의연구자가적응할수있도록제작되어있다. 2002년도에기본가격은약 13,000,000원정도이며, 여러가지선택사항을포함시키면두배가량비싸진다. 이기계에는두가지의펀치가있는데, 하나는조직을파내는기능을, 다른하나는구멍을뚫는기능을가지고있으며두개의펀치가동일한위치에적중하도록고안되어있다. 제작방법은원래의블록에서조직을파낸후새로운블록에구멍을뚫고, 조직을심는 3단계의작업으로이루어진다. 2단계와 3단계사이의작업중에블록은이동하지말아야하며, 다만펀치만동일한위치에서교환되도록되어있어정확한위치에조직을심을수있다. 2002년도에여러가지선택사항이추가되어기능이더욱세련되었는데, 블록의위치를 1 m 단위로자동적으로이동시키는장치, 4개의블록을동시에제작하기위한블록회전장치, 0.6, 1, 1.5, 2 mm 직경의다양한크기의펀치, 펀치의이동을제한하여새로운블록의손상을보호하는장치등이추가되었다. 이기계는 0.6 또는 1.0 mm 크기의조직배열을제작하는데는유용하나, 2.0 mm 크기의조직배열을제작하는데는상당한어려움이있으며, 실제로사용설명서에서도 2.0 mm 크기의배열제작은권장하지않고있다. 2002년도에 Beecher instrument 보다기능이향상된 Advanced tissue arrayer ( 라는제품이출시되었는데, 기계에현미경이달려있어서병변을직접확인하면서블록을제작할수있는장점이있으며, 좀더사용이간편해진면이있으나, 가격이 Beecher Instrument에비해 3배이상비싸서대량으로제작하는곳이아니라면구입에부담이된다. 배열블록을제작할때슬라이드의번호가바뀌거나조직이 180도회전하여슬라이드에부착되어있어도이를쉽게적발하는방법을사용하는것이바람직하다. 이를위해특정한위치에조직대신검정색의탄소를넣어블록상태및염색되지않은슬라이드상태에서쉽게구별되도록하는방법이다. 동일한진단의배열블록이여러개인경우에는탄소의위치를서로다르게하여구별하거나, 최근외과병리에서사용되는다양한색의물감을사용하는방법도있다. 이렇게하면실수로슬라이드번호를바꾸어적거나, 조직이 180도회전되어도쉽게적발해낼수있다. 탄소는 4% 아가로오즈에 20% 먹물을섞어끓여서식힌후에고정, 탈수, 봉입등의과정을거쳐서제작한다. 이와동일한목적으로색소의침착이강한악성흑색종등의조직을사용할수도있다. 조직배열의구입조직배열이연구의효용을올리는것이알려진이후에병리의사이외의많은연구자들이이에대해관심을가지게되었고, 여러생명공학회사에서이를상품화하였다. 현재 Innogenex ( Research Genetics ( com), Novagen ( Zymed (www. zymed. com), Stratagene ( 등에서제품화된조직배열슬라이드를구입할수있으며, 한국에서는고마바이오텍 ( 진메딕 ( 등에서판매한다. 미국국립암연구소에서는연구자를대상으로 1인당 20장한도에서이를무료로 (1장당우송료 $20 별도 ) 제공하였다. 위의대부분의회사에서는배열블록을만드는용역도하고있으므로연구자는기계를구입하지않고도조직배열슬라이드를제작할수도있다. 블록의박절배열블록은제작한직후에는바닥면이고르게되어있지않은데, 제작된블록의면을고르게하기위해서는이를 cassette basin에담아 상태에서 30분간방치하면된다. 이렇게하면원래의파리핀과구멍을메운파라핀사이의간격도메워지고, 깎아야할바닥면도편평해지게되어조직의손실을줄일수있다. 배열블록의박절은그리쉽지않다. 서로다르게고정되고제작된조직이섞여있을뿐아니라, 여러조각의파라핀이찢어지면서개개의조직이낱개로흩어질가능성이있기때문이다. Beecher instrument 회사의지침서에는조직의박절을위해서는테이프전이법 ( 을권장하고있으며, 조직배열에대한처음의논문에서부터이방법이사용되었다. 16 이방법은파라핀블록에특수한양면테이프를부착한후에박절하고, 박절된조직이붙어있는테이프를슬라이드로옮겨슬라이드에부착시킨후에자외선조사에의한중합반응과유기용매를이용하여테이프를제거하는복잡한과정을거쳐야한다. 이방법을사용하면경험이적은병리조직기사도박절을할수있는장점이있으므로박절경험이없는실험실에권장되는방법이다. 그러나이방법을이용하면박절속도가현저히저하될뿐만아니라조직과슬라이드사이에남아있는중합된접착제성분이면역염색과정을방해하기때문에절대적으로불리하다. 또한카세트에테이프를부착함으로써매번카세트가미세하게흔들리면서조직의두께가일정하지않게되기도한다. 경험이많은병리기사는테이프없이도배열조직슬라이드의박절을큰어려움이없이성공적으로수행할수있으며, 조직의크기가크고파라핀이여러조각으로이루어진점을감안해서박절후띄울수조의온도를평소에비해낮게유지하는것이유리하다. Silane 코팅슬라이드조직배열블록을일반슬라이드를이용하여제작하면면역염

3 병리학적연구와조직배열방법 201 색과정에서많은조직이탈락되어쓸모가없게된다. 특히항원의노출을위하여극초단파, 고압멸균기등의과정을거치면조직의탈락은더욱심해지며, 조직의크기가작은경우에더욱심하므로 0.6 mm 크기의조직은세심한주의가필요하다. 앞에서기술한방법을사용하면염색과정중의조직의탈락을방지할수있지만, 전술한바와같은여러가지단점때문에권장되지않는다. 최근에는양질의 silane 코팅슬라이드가싼값에공급되므로, 이를이용하면조직의탈락은거의일어나지않는다. 비교해본중에서일본 Muto 회사의제품 (Cat No. 5116) 이가장우수하였으며, 2.0 mm 크기의조직은염색도중탈락되는경우는없었다. 다만이제품은모서리에돌출부가없어모세관형의염색방법에는사용할수없다. 필요에따라모서리에돌출부가있는제품 (Fischer, Cat. No 또는 VWR, Cat No ) 을사용해도되며, 탈락은거의일어나지않는다. 면역염색면역염색시조직의가장자리또는시약의가장자리는염색이진하게되거나염색이잘안되는현상이발생한다. 배열슬라이드는조직을포함하는부위가슬라이드의대부분을차지하고있으므로이런현상이일어난다면가장자리의증례는중심부의증례에비해염색정도가다르게될우려가있다. 이러한현상을방지하기위해서는면역염색의과정에서항체의농도를일정하게유지할필요가있다. 자동면역염색기를사용하면이러한문제점이대부분해결되나, 최근의자동면역염색기는병원병리에서사용되는항체에대해적정화되어있어연구용항체의사용에는번거로움이있다. 면역염색의비균일성을쉽게해결하는방법은슬라이드위에항체를올려놓은후에크기를잘맞춘커버를올려놓아항체가골고루퍼지고동일한농도를유지하도록하는방법이며, 이때는슬라이드를습윤실안에넣어가장자리가마르지않도록유지해야한다. 커버는파라필름 (parafilm) 을잘라서사용하면되며, 유리로된커버슬라이드를사용하면무게때문에항체의양이너무적게남아있어염색이부적절하게될우려가있다. 더바람직한방법은 Shandon 회사의 Cadenza 염색기구를사용하는것이며, 이는반자동식염색을가능하게한것으로슬라이드와 cover plate 사이의작은공간을통해항체와반응시킨다. 이기계는다른모세관방식의기계와는달리항체및완충액을위쪽에서공급하며, 슬라이드를동일한위치에고정시킨상태에서항체반응과수세를반복적으로수행할수있으므로염색에드는노력을현저히저하시키고염색의일관성을유지할수있을뿐아니라다른자동염색기계에비해 50 분의 1의비용이면구입이가능하다는장점이있으며, 자동화기계와는달리연구용항체를이용하더라도다양한항체의농도를시험할수있으므로조직배열에는적합한염색방법이다. 박절한슬라이드의보관슬라이드의보관기간에따라면역염색의강도가저하된다는현상이알려진것은 1996년도이다. 17 그이후몇개의후속논문이이를증명하였고이제는슬라이드의 ( 박절후 ) 나이를면역염색에서고려하는것이필수적이되었다. 진단을위해매일매일진행되는면역염색은대부분박절즉시염색되나, 연구를위한면역염색은여러장을한꺼번에박절하게되므로슬라이드의나이가다양하게될기회가많다. 슬라이드의나이에따라염색이약화되는현상은항체에따라다르기때문에일률적으로말할수없으며, 박절 2주일후부터염색이약해지는항체가있는반면, 1년후에도염색의정도가유지되는항체도있으며, 그차이가무엇인지는알려져있지않다. 단클론항체와다클론항체사이에차이는없으며, 이러한염색상의저하는일반적인항체의 unmasking 방법으로회복되지않는다. 18 슬라이드의시간경과에따른염색정도의저하가공기중의산소에의해항원이산화되는것이라는가정에의거해서슬라이드를파라핀으로코팅하면보관기간을연장할수있을것이라는시도가논문에발표되었다. 그러나, 본실험실에서 6개월간슬라이드를보관하면서관찰한바에의하면슬라이드를파라핀으로코팅하면염색정도는코팅하지않은것보다더욱일찍저하된다는현상을관찰할수있었고, 이는공기중의산소와의접촉이염색의저하와관련이있다는기존의주장에배치되는현상이었다. 슬라이드를냉장고또는냉동실에보관하면보관기간은연장할수있으나, 그효과는제한되어있기때문에, 슬라이드를필요한때에새로제작하여염색하는것이가장바람직한방법이며, 불가피한경우에는냉장고에보관하는것이바람직하다. 다만이경우에는슬라이드를연속절편하는것보다파리핀블록의손실이많기때문에처음부터충분한양의조직배열블록을제작할필요가있다. 슬라이드의보관기간이대단히중요한반면에파라핀블록의보관기간에는거의영향을받지않아서, 40년이지난조직을대상으로염색하여도별로차이가없다. 19 실제로조직의고정에대해큰영향을받으며, 아직까지는 10% 중성포르말린이가장우수한고정액으로인정받고있다. 이고정액에 2주동안고정한조직은 24시간고정한조직과비교해서염색정도의차이는없었다 (unpublished data). 그러므로병원에서처리되고블록으로제작된대부분의조직은조직배열방법을통한면역염색방법에적합하다고볼수있다. 조직의크기현재 Beecher instrument로제작이가능한한계는 0.6 mm 크기의조직 1,000개를하나의슬라이드에담는것인데, 이는대단히숙련된경우에만가능하고, 일반적인실험실에서는약 300 개의증례를담을수있다. 0.6 mm 크기는 400배로관찰시한시야를채우는크기이며, 내시경생검보다작은크기이다. 종양

4 202 김우호 을대상으로연구를하는경우에 0.6 mm 크기의조직은너무작기때문에면역염색결과의분석이어렵고, 또한부정확한면이있다. 이는내시경생검조직을대상으로면역염색한경우에결과의판독에흔히어려움을겪는사실에비추어볼때자명하다. 또한 300 증례의면역염색결과를일관적으로판독해야하기때문에 HE 염색슬라이드와대조하면서판독하기가곤란한데, 작은조직에서는염색된조직이종양인지정상조직인지가불분명한증례가많이발생하게된다. 그러므로판독시간은오히려개개의슬라이드를판독하는것만큼또는그이상으로소요되어조직배열슬라이드의장점이상당부분소실된다. 실제로조직배열을이용한연구는판독과정이연구진행의병목이되는데, 이는종양의형태가다양하기때문에병리의사이외의연구자가판독하거나, 자동화할수없기때문이다. 게다가조직의가장자리가진하게염색되는항체의경우에는적절하게염색된부위를찾을수없고, 조직의탈락이자주발생해서 15-20% 의증례는판독이불가능하게된다. 이상의문제점을극복하기위해 2.0 mm 크기의조직배열이권장되는데, 이크기는하나의슬라이드에 60개의증례만담을수있기때문에작은크기의조직배열에비해서는슬라이드의수를많이제작해야하고, 조직의소요도많다는단점이있다. 그러나판독을훨씬빨리할수있는장점이있는데, 2.0 mm 크기는 100배시야에꽉차는크기이기때문에조직의개관을한눈에파악할수있고, 현미경하에서각각의조직의번호를쉽게인식할수있다. 더구나가장자리가진하게염색되더라도중앙부에서는적절한염색을볼수있으며, 탈락되는조직이거의없어판독불가능증례가 5% 내외에불과하다. 그러므로병리판독의입장에서는 300개의작은조직이담겨있는조직배열보다는 60개의큰조직이담겨있는슬라이드를더쉽게판독할수있어연구의진행이가속화된다. 시중의기계를이용해서는 2.0 mm 크기의배열제작이어렵기때문에, 본실험실에서는내부직경 2.0 mm 크기의바늘을제작하여사용하고있으며, 3.0 또는 4.0 mm 크기의조직배열제작에는피부생검용펀치를사용하고있다 (Fig. 1). 염색의비균질성및신뢰도종양은부위에따라형태가다르고단백질발현양상도다른데극히작은조직을대상으로판독한결과가각각의얼마나증례를잘반영하고있는지에대한점이조직배열의가장큰문제점으로지적받고있다. 이문제점을정확히이해하기위해초창기의조직배열연구논문은이러한연구에치중되었고, 이제는제법많은결과가축적되어있다. Nocita 등 20 은 2,317예의방광암을대상으로 Ki-67 염색정도를전체슬라이드와조직배열슬라이드를비교한결과, 예후및임상적연관성은동일한결과를나타내었다고하였다. Camp 등 21 은판독결과의일치율이채취조직의수 (core의수 ) 가증가함에따라증가하는데, 전체 4.0 mm 24 specimens 2.0 mm 60 specimens 1.0 mm 140 specimens 0.6 mm 240 specimens Fig. 1. Various sized tissue array slides. Among them, 2.0 mmdiametered core is the most useful for large scale clinicopathologic analysis. 조직과비교하였을경우에 1개를판독하면 92%, 2개는 96%, 3 개는 98%, 5개는 99.5%, 9개는 99.97% 의일치율을보인다고하였다. 이등 7 은 4개의 core를채취하여서로비교하였을경우에그결과의일치도가 kappa 값이 0.74 (MUC1) 또는 0.89 (MUC2) 로서거의완벽하게일치한다는결과를발표하였다. 특히이러한일치율은결과를두단계 ( 예를들면음성과양성 ) 로나눈경우에서 3단계나그이상으로나눈경우에비해더욱높다. 종양내에서염색의비균질성은존재하지만, 많은수의증례를대상으로연구를진행하면이러한현상은희석되는경향이있기때문에조직배열슬라이드는연구의수단으로는매우적합하다고생각된다. 다만진단의목적으로각각의증례에대해양성, 음성을판단해야한다면조직배열방법이권장되지않는다. 실제로염색의결과에영향을미치는인자는종양의이질성만은아니며, 박절두께, 슬라이드의나이, 염색시간이나수세시간, 완충액의조성, 항체의농도, 염색온도등여러가지가영향을미친다. 전체슬라이드를대상으로연구를하는경우에는실험과정의차이를최소화하는데한계가있지만, 조직배열을이용하면위에언급한인자들이대부분일정하게되기때문에그결과가전체슬라이드에비해오히려더믿을만할수도있으리라고예상된다. 실제로전체슬라이드를사용한경우에는드러나지않던상관관계가조직배열을사용하면뚜렷하게나타나서조직배열슬라이드가더믿을만하다는논문도있는데, 22 그근거는동일한실험과정을거치기때문에증례간의차이를최소화할수있었기때문이라고해석된다. 초기의논문중에는한증례에서여러개의조직을채취하면정확한결과를얻을수있으며, 이러한이유로한증례당 3개의조직을권장하였고홀수를채택한이유는서로결과가다른경우에도결과를판정하기쉽기때문이었다. 최근의논문은대부분하나의조직으로도동일한결과를얻을수있다고보고하고있다. 23 예외적으로 Rubin 등 24 은전립선암의분석을위해 3-5

5 병리학적연구와조직배열방법 203 개의조직이권장된다는결과를보고하였으나, 대부분의조직배열연구가수백내지천예를대상으로 19 하는반면, Rubin 등의연구에서는 100개미만의증례를대상으로했기때문에한두개의슬라이드로는만족할만한결과를얻지못했기때문이라고판단되며, 증례가충분한경우에는증례당여러군데를판독하지않아도만족할만한결과를얻을수있다. 조직배열의능률향상조직배열방법이발표된이후, 발표되는논문연구의규모가대규모화하였으며, 고집적 cdna microarray 방법의개발과인간유전체사업의성과에발맞추어이들의결과를확인하는연구가수행되고있다. Schraml 등 25 은 17가지종양이포함된 397 예의조직배열을대상으로 HER-2, myc, cyclin D1 유전자의증폭을조사하였는데, 기존의발표된결과와거의같은결과를얻을수있었으며, 연구의효율성이증가한정도를다음과같이기술하였다. 기존의방법으로 100개의연구과제, 8,000번의실험, 2년간의실험에의해발표되었던결과가단 2주만에재현되었다." 모든병리연구가위의경우와같이극단적으로고효율화되지는않더라도, 병리학적분석을수행하는연구에서는상당한효율의증가를기대할수있다. 그러나염색결과의판독, 판독결과의분석은배열방법을이용하여도효율이크게올라갈것을기대하기어렵고, 연구의병목이되고있는판독과정은병리의사이외에는할수없기때문에종양연구에서병리의사의역할이더욱중요해지고있다. 조직배열결과의분석조직배열판독결과는기존의전체슬라이드를사용하여수행되었던연구와다를것이없다, 다만기존의방법에비해훨씬많은결과가발생하기때문에다양한분석기법의응용이가능해졌으며, 특히응용프로그램의획기적인발달에따라여러가지시뮬레이션이연구자의책상에서가능하게되었다. 예를들면개개의단백질이예후와관련이있는지를비교하던연구에서더욱발전하여여러개의유전자발현의조합이예후와관련이있는지를알아보는것이다. 이등 26 의결과에의하면위암에서발현이상이있는종양억제유전자의개수가종양의예후와관련이있으며, 이는다변량분석에의해서임상병기와독립적으로예후와상관관계가있음을증명하였다. 또한김등 27 에결과에의하면위장관계간질종양을 c-kit, S-100 단백, smooth muscle actin 등을포함한 9개의항체로염색한결과를 hierachical clustering 방법으로분석하였을때, Cajal 세포기원, 신경기원, 그리고평활근기원의종양이분명하게나뉘어짐을보여주었으며, 이는아직까지분류체계가모호한종양에서분류의원칙을정립하는데유용하게사용될수있으리라고기대된다. 조직배열슬라이드의응용조직배열슬라이드는주로면역염색방법에의해단백질의발현을조사하는데사용되지만, 세포내 mrna의발현을관찰하는제자리부합화법, 또는핵내의 DNA를검출하는형광제자리법도적용할수있다. 그러나이방법들은모두조직의질에크게영향을받기때문에보관된조직의처음고정상태가중요하고, 고정상태가서로많이다르다면함께염색하여비교하기는곤란하다. 고집적배열방법을세포주에도사용할수있는데, 28 본실험실에서는배양세포를아가로오즈에함입시켜조직과동일한상태로만들고이를배열로만들어면역염색에사용할수있다. 이방법은많은종류의세포주를대상으로많은항체를검사할경우에도움이될것으로생각된다. 실험동물을이용한연구에서 29 활용된논문이발표되었으며, 조직배열방법의응용은생물학연구의전반에더욱그범위가넓어질것으로예상된다. 참고문헌 1. Bubendorf L, Nocito A, Moch H, Sauter G. Tissue microarray (TMA) technology: miniaturized pathology archives for highthroughput in situ studies. J Pathol 2001; 195: Woo DK, Kim HS, Lee HS, Kang YH, Yang HK, Kim WH. Altered expression and mutation of beta-catenin gene in gastric carcinomas and cell lines. Int J Cancer 2001; 95: Cho YJ, Chang MS, Park SH, Kim HS, Kim WH. In situ hybridization of Epstein-Barr virus in tumor cells and tumor-infiltrating lymphocytes of the gastrointestinal tract. Hum Pathol 2001; 32: Kim WH. Tissue array technology for translational research. From gene discovery to application. Exp Mol Med 2001; 33: Chang MS, Lee HS, Kim CW, Kim YI, Kim WH. Clinicopathologic characteristics of Epstein-Barr virus-incorporated gastric cancers in Korea. Pathol Res Pract 2001; 197: Yang HJ, Cho YJ, Kim HS, Chang MS, Sung MW, Kim WH. Association of p53 and BCL-2 expression with Epstein-Barr virus infection in the cancers of head and neck. Head Neck 2001; 23: Lee HS, Lee HK, Kim HS, Yang H-K, Kim YI, Kim WH. MUC1, MUC2, MUC5AC, and MUC6 expressions in gastric carcinomas. Cancer 2001; 92: Kang YH, Bae SI, Kim WH. Comprehensive analysis of promoter methylation and altered expression of hmlh1 gene in gastric cancer cell lines with microsatellite instability. J Cancer Res Clin Oncol 2002; 128: Kang YH, Lee HS, Kim WH. Promoter methylation and silencing of PTEN in gastric carcinoma. Lab Invest 2002; 82:

6 204 김우호 10. Lee HS, Choi SI, Lee HK, et al. Distinct clinical features and outcomes of gastric cancers with microsatellite instability. Mod Pathol (In Press). 11. Chang MS, Kim HS, Kim CW, Kim YI, Kim WH. Epstein-Barr Virus infection in gastric adenoma coexisting with gastric carcinoma. Hum Pathol (In Press). 12. Chang HJ, Jee CD, Kim WH. Mutation and altered expression of beta-catenin during gallbladder carcinogenesis Am J Surg Pathol (In Press). 13. Bae SI, Lee HS, Kim SH, Kim WH. Silencing of the O 6 -methylguanine-dna methyltransferase by CpG methylation in gastric cancers. Br J Cancer (In Press). 14. Battifora H. The multitumor (sausage) tissue block: novel method for immunohistochemical antibody testing. Lab Invest 1986; 55: Battifora H. The checkerboard tissue block. An improved multitissue control block. Lab Invest 1990; 63: Kononen J, Bubendorf L, Kallioniemi A, et al. Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens. Nat Med 1998; 4: Jacobs TW, Prioleau JE, Stillman IE, Schnitt SJ. Loss of tumor marker-immunostaining intensity on stored paraffin slides of breast cancer. J Natl Cancer Inst 1996; 88: Van den Broek LJ, Van de Vijver MJ. Assessment of problems in diagnostic and research immunohistochemistry associated with epitope instability in stored paraffin sections. AIMM 2000; 8: Xie W, Mertens JC, Reiss DJ, et al. Alterations of Smad signaling in human breast carcinoma are associated with poor outcome: a tissue microarray study. Cancer Res 2002; 62: Nocito A, Bubendorf L, Maria Tinner E, et al. Microarrays of bladder cancer tissue are highly representative of proliferation index and histological grade. J Pathol 2001; 194: Camp RL, Charette LA, Rimm DL. Validation of tissue microarray technology in breast carcinoma. Lab Invest 2000; 80: Torhorst J, Bucher C, Kononen J, et al. Tissue microarrays for rapid linking of molecular changes to clinical endpoints. Am J Pathol 2001; 159: Gancberg D, Di Leo A, Rouas G, et al. Reliability of the tissue microarray based FISH for evaluation of the HER-2 oncogene in breast carcinoma. J Clin Pathol 2002; 55: Rubin MA, Dunn R, Strawderman M, Pienta KJ. Tissue microarray sampling strategy for prostate cancer biomarker analysis. Am J Surg Pathol 2002; 26: Schraml P, Kononen J, Bubendorf L, et al. Tissue microarrays for gene amplification surveys in many different tumor types. Clin Cancer Res 1999; 5: Lee HS, Lee HK, Kim HS, Yang HK, Kim WH. Tumor supperessor gene expressions in gastric carcinoma. Korean J Pathol 2001; 35 Suppl: Kim EJ, Shin HS, Kim WH. Immunohistochemical study of gastrointestinal stromal tumors. Korean J Pathol 2001; 35 Suppl: Hoos A, Cordon-Cardo C. Tissue microarray profiling of cancer specimens and cell lines: opportunities and limitations. Lab Invest 2001; 81: Suh Y, Lee KA, Kim WH, Han BG, Vijg J, Park SC. Aging alters the apoptotic response to genotoxic stress. Nat Med 2002; 8: 3-4.

Jkbcs016(92-97).hwp

Jkbcs016(92-97).hwp Expression of bcl-2 and Apoptosis and Its Relationship to Clinicopathological Prognostic Factors in Breast Cancer - A Study with Long Term Follow-up correlated with the survival rate.(journal of Korean