(72) 발명자 김성연 전라북도익산시하나로 , 102 동 1002 호 ( 어양동, 동도미소드림 1 차 ) 전기용 전라북도전주시완산구맏내 3 길 22, 101 동 1204 호 ( 평화동 2 가, 동아현대아파트 ) 전창현 전라북도완주군삼례읍후정로 12-1, 30

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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2016년04월27일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/35 ( ) A61K 36/539 ( ) A61K 36/896 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2014 년 10 월 17 일 심사청구일자 전체청구항수 : 총 5 항 2014 년 10 월 17 일 (71) 출원인 유한회사한풍제약 전라북도전주시덕진구구렛들 3 길 11 ( 팔복동 1 가 ) 원광대학교산학협력단 전라북도익산시익산대로 460 ( 신동 ) (72) 발명자 조형권 전라북도전주시완산구맏내 3 길 22, 101 동 1204 호 ( 평화동 2 가, 동아현대아파트 ) 김혜수 경기도성남시분당구서현로 177 이매촌금강아파트 102 동 603 호 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 특허법인참좋은 (54) 발명의명칭인동등, 황금및맥문동혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물 (57) 요약 본발명은인동등, 황금및맥문동혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물에관한것이다. 더욱상세하게는, 인동등 1~5 중량부, 황금 0.5~1.5 중량부및맥문동 0.5~1.5 중량부로혼합되며, 에탄올또는초산이 3% 함유된에탄올을용매로사용하여추출되는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물에관한것이다. 본발명에따른조성물은객담배출능, 기침억제능및항산화효능을보유하고있다. 대표도 - 도 1-1 -

2 (72) 발명자 김성연 전라북도익산시하나로 , 102 동 1002 호 ( 어양동, 동도미소드림 1 차 ) 전기용 전라북도전주시완산구맏내 3 길 22, 101 동 1204 호 ( 평화동 2 가, 동아현대아파트 ) 전창현 전라북도완주군삼례읍후정로 12-1, 301 장보윤 전라북도익산시선화로 23 길 40, 나동 101 호 ( 모현동, 모현이화아파트 ) 김대성 전라북도익산시무왕로 9 길 60, 601 동 1108 호 ( 영등동, 제일 4 차아파트 ) 변에리사 전라북도전주시덕진구태진로 61, E 동 501 호 ( 진북동, 동양맨션아파트 ) 유진주 전라북도완주군봉동읍율소리봉담길 16 김효진 전라북도김제시백구면신모길 김정영 전라북도전주시완산구거마평로 139 삼성효자타운, 102 동 1213 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 농림축산식품부 연구관리전문기관 농림수산식품기술기회평가원 연구사업명 농생명산업기술개발사업 연구과제명 비임상 / 임상천연물원료민간위탁생산시스템구축 기여율 1/1 주관기관 ( 유 ) 한풍제약 연구기간 ~

3 명세서청구범위청구항 1 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용약학조성물. 청구항 2 청구항 1에있어서, 상기혼합추출물은인동등 1~5 중량부, 황금 0.5~1.5 중량부및맥문동 0.5~1.5 중량부로혼합되어추출되는것을특징으로하는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용약학조성물. 청구항 3 청구항 1에있어서, 상기혼합추출물은에탄올또는초산이 0.5~5 % 함유된에탄올을용매로사용하여추출되는것을특징으로하는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용약학조성물. 청구항 4 청구항 1에있어서, 상기혼합추출물은객담배출능, 기침억제능및항산화효능을보유하는것을특징으로하는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용약학조성물. 청구항 5 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용건강기능식품조성물. 발명의설명 [0001] [0002] [0003] 기술분야본발명은인동등, 황금및맥문동혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물에관한것이다. 더욱상세하게는, 인동등 1~5 중량부, 황금 0.5~1.5 중량부및맥문동 0.5~1.5 중량부로혼합되며, 에탄올또는초산이 0.5~5 % 함유된에탄올을용매로사용하여추출되는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물에관한것이다. 본발명에따른조성물은객담배출능, 기침억제능및항산화효능을보유하고있다. [0004] 배경기술 우리몸의호흡기는물리화학적인외부자극에대한방어기관의하나로써급속한산업화로인한대기오염및 환경변화로인해호흡기질환환자가급증하고있다

4 [0005] 외부자극물질이호흡기로유입되면일차적으로코털에의해걸러지며, 이를통과한미세자극물질은점액에포 획되어섬모운동을통해밖으로배출되어진다. [0006] [0007] 기침은점막자극에의한반사적방어기전으로지나친자극이나지속적인자극에의한지나친기침은환자의삶의질을낮추고기관지의손상을가속시킨다. 또한객담의경우외부유입물질이타액또는점액물질과함께외부로배출되는데기관지염증에의해화농성객담이발생하게된다. [0008] [0009] [0010] 이러한증상에사용되는의약품중진해제로사용되고있는성분은디하이드로코데인, 메틸에페드린, 클로로페닐라민, 덱스트로메트로판으로중추신경에작용하는것들이다. 이러한성분들은심혈관계혈전반응으로인한심근경색, 호흡억제, 위또는장출혈과같은부작용을나타낸다. 검담제의경우아세틸시스테인, 엘도스테인, 카르보시스테인과같은치올계와암브록솔과같은비치올계거담제가무분별하게사용되고있다. [0011] 따라서보다안전성이확보된천연물을활용하여진해거담제를개발하고자많은연구가진행되고있으며, 본발 명에서는인동, 황금및맥문동의진해 / 거담활성을확인한결과, 증상을개선시키는효능을확인하여본발명 을완성하였다. [0012] 인동 ( 忍冬 ) 은인동과 (Caprifoliaceae) 에속하는인동덩굴 (Lonicera Japonica Thunberg) 의잎및덩굴성줄기를 말하며, 인동등 ( 忍冬藤, Lonicera leaf and stem) 이라고도하고, 해열, 해독, 이뇨약으로서임질, 소변불리, 근 골동통등의치료약으로사용되었다. [0013] 황금 ( 黃芩 ) 은꿀풀과에속한다년생초본인황금 (Scutellaria baicalensis Georgi) 의뿌리로써청열조습 ( 淸熱燥濕 ), 사화해독 ( 瀉火解毒 ) 등의효능이있다. [0014] [0015] [0016] 맥문동 (Liriopis Tuber) 은백합과 (Liliaceae) 에속한다년생초본인맥문동 (Liriope platyphylla Wang et Tang) 또는소엽맥문동 (Ophiopogon japonicus Ker-Gawler) 의뿌리의팽대부이다. 성분으로는 steroid계 saponin, isoflavonoid, oligosaccharides 및 polysaccharide 등이함유되어있다. 맥문동은혈당강하작용, 항염작용, IgM 항체생산억제작용등이보고되어있다. [0017] 한편, 본발명과관련된선행기술로는등록특허공보제 호에기관지염치료를위하여마황을포함하는 제약조성물및이를만드는제조방법에대하여기재되어있다. [0018] 상기선행기술은마황, 석고, 연교, 황금, 상백피, 행인, 전호, 반하, 청피, 절패모, 우방자, 금은화, 대황, 길 경근및감초등을포함하고있으며, 상기제약조성물은기침을완화시키고, 가래를없애며, 천식을 가라앉히고, 염증을방지하는데유용한효과가있다. [0019] 그러나상기선행기술은소재를각각추출한후, 혼합하여사용하므로소재의혼합추출에따른효과를알수 없는문제점이있다

5 [0020] 또한상기선행기술은마황, 연교, 황금, 행인, 반하, 우방자및대황은에탄올추출하고있으며, 석고, 상백피, 전호, 청피, 금은화, 길경근및감초는물로만추출하고있으므로, 추출용매의종류에따른추출물의 기관지염에대한효능은알수없는문제점이있다. [0021] [0022] 본발명과관련된또다른선행기술로등록특허공보제 호에알레르기성비염과감기의예방및치료용건강식품조성물및그제조방법이기재되어있다. 상기선행기술은유효성분으로유근피, 진피, 감초, 오미자, 황기, 의이인, 어성초, 삼백초, 계지, 맥문동, 박하, 황금및백출을함유하고있으며, 재채기, 비즙, 비폐색등을포함하는알레르기비염의증상개선에있어서, 탁월한치료효과가있는것을특징으로하고있다. [0023] 그러나상기선행기술은알레르기환자를대상으로한임상증상만을관찰하였을뿐, 입증된방법을통하여실 험을수행하지않았기때문에, 조성물의거담활성또는진해활성등에대한효능을객관적으로평가할수없 는문제점이있다. [0024] 또한상기선행기술은열수추출방법만을이용하여추출하고있기때문에, 추출용매의종류에따른추출물의효 능은알수없는문제점이있다. 선행기술문헌 [0025] 특허문헌 ( 특허문헌 0001) 대한민국등록특허공보제 호 ( ) ( 특허문헌 0002) 대한민국등록특허공보제 호 ( ) 발명의내용 [0026] [0027] [0028] 해결하려는과제본발명에서해결하고자하는과제는인동등, 황금및맥문동혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물을제공하는데에있다. 본발명에서해결하고자하는과제는인동등 1~5 중량부, 황금 0.5~1.5 중량부및맥문동 0.5~1.5 중량부로혼합되며, 에탄올또는초산이 0.5~5 % 함유된에탄올을용매로사용하여추출되는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물을제공하는데에있다. 본발명에서해결하고자하는과제는객담배출능, 기침억제능및항산화효능을보유하는진해또는거담용조성물을제공하는데에있다. [0029] [0030] [0031] 과제의해결수단본발명에서해결하고자하는과제는인동등, 황금및맥문동혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물을제공하는데에있다. 본발명에서해결하고자하는과제는인동등 1~5 중량부, 황금 0.5~1.5 중량부및맥문동 0.5~1.5 중량부로혼합되며, 에탄올또는초산이 0.5~5 % 함유된에탄올을용매로사용하여추출되는, 인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물을제공하는데에있다. 본발명에서해결하고자하는과제는객담배출능, 기침억제능및항산화효능을보유하는진해또는거담용 - 5 -

6 조성물을제공하는데에있다. [0032] [0033] [0034] 발명의효과본발명에따른인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물은객담배출능이뛰어난효능을보유하고있다. 본발명에따른인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물은기침억제능이뛰어난효능을보유하고있다. 본발명에따른인동등, 황금및맥문동의혼합추출물을유효성분으로함유하는진해또는거담용조성물은항산화활성이뛰어난효능을보유하고있다. [0035] 도면의간단한설명 도 1 은혼합추출물의객담배출능을나타낸것으로, 배출된페놀의농도를측정한그래프이다. 도 2 는혼합추출물의기침억제능을나타낸것으로, 5 초동안발생한기침횟수를측정한그래프이다. 도 3 은혼합추출물들의항산화효과를나타낸그래프로서, 흡광도를 % 로환산하여나타낸그래프이다. [0036] 발명을실시하기위한구체적인내용본명세서및청구범위에사용된용어나단어는통상적이거나사전적인의미로한정해서해석되어서는안되며, 발명자는그자신의발명을가장최선의방법으로설명하기위해용어의개념을적절하게정의할수있다는원칙에입각하여본발명의기술적사상에부합하는의미와개념으로해석되어야만한다. [0037] 따라서본명세서에기재된실험예와참고예는본발명의가장바람직한일실시예에불과한뿐이고본발명의 기술적사상을모두대변하는것은아니므로, 본출원시점에있어서이들을대체할수있는다양한균등물과변 형예들이있을수있음을이해하여야한다. [0038] 실시예 1. 인동등, 황금및맥문동혼합추출물 (HAE-03) 의제조 [0039] 인동등, 황금및맥문동은 1~5 : 0.5~1.5 : 0.5~1.5 중량부로혼합되어추출될수있다. 바람직하게는 2.5~3.5 : 1 : 1 의중량부로혼합하여사용할수있다. [0040] 추출방법은이산화탄소초임계추출법, 수증기증류법, 진공추출법, 감압추출법, 마이크로웨이브공정 추출법, 퍼콜레이션추출법등의다양한추출방법이사용될수있으나, 바람직하게는용매추출법이사용될수 있다. [0041] 추출에사용되는용매는물, 에탄올, 메탄올, 지방유, 글리세린, 마유, 플로필렌글리콜, 에테르, 클로르포름, 석유에테르, 헥산, 벤젠, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 아세톤, 부탄올, 이소프로판올, 액체암모니아, 삼 염화안티몬및불화수소등에서선택될수있다. [0042] 바람직한추출방법으로는소재를혼합한후, 30%(v/v) 에탄올수용액을 10 배수넣고 80~90 로 3 시간환류냉각 추출한후여과하여 1 차추출액을얻을수있다

7 [0043] 잔사를 1 차추출방법과동일하게반복추출한다음추출액을 60 이하에서감압농축하고진공건조하여건조 엑스를얻음으로써, 인동등, 황금및맥문동혼합추출물을제조할수있다. [0044] 실시예 2. 인동등, 황금및맥문동혼합추출물 (HAE-04) 의제조 [0045] 실시예 1 에따른방법과동일하게수행하되, 추출용매를 30%(v/v) 에탄올수용액에서, 3%(v/v) 초산이포함된 30%(v/v) 에탄올수용액으로변경하여추출한다. [0046] 실시예 1 및 2 에따른인동등, 황금및맥문동혼합추출물의효능을평가하기위해, 인동등, 황금및길경혼 합추출물을제조하여함께비교하였다. [0047] 비교예 1. 인동등, 황금및길경혼합추출물 (HAE-01) 의제조 [0048] [0049] 인동등 120 g, 황금 40 g, 길경 40 g을넣고 30%(v/v) 에탄올수용액을 10배수넣고 80~90 로 3시간환류냉각추출한후여과하여 1차추출액을얻는다. 잔사를 1차추출방법과동일하게반복추출한다음추출액을 60 이하에서감압농축하고진공건조하여건조엑스약 57.6 g( 수율 28.80%) 을얻는다. [0050] 비교예 2. 인동등, 황금및길경혼합추출물 (HAE-02) 의제조 [0051] [0052] 인동등 120 g, 황금 40 g, 길경 40 g을넣고 3%(v/v) 초산이포함된 30%(v/v) 에탄올수용액을 10배수넣고 80~90 로 3시간환류냉각추출한후여과하여 1차추출액을얻는다. 잔사를 1차추출방법과동일하게반복추출한다음추출액을 60 이하에서감압농축하고진공건조하여건조엑스약 53.5 g( 수율 26.75%) 을얻는다. [0053] 실험예 1. 거담활성평가 [0054] [0055] 1-1. 실험과정제조된혼합추출물의거담활성을평가하기위하여, Engler 등의방법을이용하여 (Engler H, Szelenyi I, J.Pharmacol. Moth.11,151~157,1984., Bao-quin Lin et., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics 21, 259~263, 2008.) 평가실험을수행하였다. 실험과정은다음과같다. [0056] [0057] [0058] 1 양성대조약물 ( 암브록솔, ambroxol, Sigma), 시험약물을수컷랫트 (6주령, 샘타코바이오코리아 ) 에경구투여하고 30분후, 페놀레드를복강주사하였다 (200 mg/kg 용량으로투여하며, 페놀레드는생리식염수에녹여서사용함 ). 2 30분후디에틸에테르를이용해마취시키고복부대동맥을절단하여방혈시킨후, 기관 (trachea) 전체를절제하였다. 3 분리된기관을 1 ml의생리식염수에넣어 30 분동안세척하였고, 10,000 rpm으로 5분간상온에서원심분리하여얻은상등액에 1 N 가성소다 (NaOH) 를첨가 ( 상등액 1 ml당 1N NaOH 0.1 ml 첨가 ) 하였다

8 [0059] 4 이들에대한 546 nm 에서의흡광도를측정하여배출된페놀레드의농도로서거담활성을평가하였다. [0060] [0061] 1-2. 실험결과 아래 [ 표 1] 은양성대조약물로사용된암브록솔과제조된혼합추출물의투여용량에따른객담배출능을나타 낸표이다. [0062] 구분 투여용량 (mg/kg) 객담배출능 (%) HAE HAE HAE HAE 암브록솔 (Ambroxol) 표 1 [0063] 실험결과, 인동등, 황금및길경에탄올추출물 (HAE-01) 에비해인동등, 황금및맥문동에탄올추출물 (HAE- 03) 의객담배출능이높은것을알수있으며, 인동등, 황금및길경의초산 3% 함유에탄올추출물 (HAE-02) 에 비해, 인동등, 황금및맥문동의초산 3% 에탄올추출물 (HAE-04) 의객담배출능이높은것을알수있다. [0064] [0065] 따라서동일한방법과용매로추출하였지만, 인동등, 황금및길경조합보다는인동등, 황금및맥문동조합의 추출물이객담배출능이더욱뛰어난것을알수있다. 또한에탄올추출물보다는초산 3% 가함유된에탄올추출물의객담배출능이더뛰어난것을확인하였다. [0066] 도 1 은혼합추출물의객담배출능을나타낸것으로, 배출된페놀의농도를측정한그래프이다. [0067] [0068] 실험결과, 대조군에비해양성대조군인암브록솔의페놀농도가약 2배가량증가한것을확인할수있다. HAE-01 내지 HAE-04 실험군에서는대조군에비해페놀농도가증가한것을보여, 객담배출능을보유하고있음을알수있고, 특히 HAE-04 실험군 ( 인동등, 황금및맥문동의초산 3% 에탄올추출물 ) 의경우유의한객담배출능을보이는것을확인하였다. [0069] 실험예 2. 진해활성평가 [0070] [0071] 2-1. 실험과정혼합추출물에대하여진해활성을측정하기위해, Tanaka 등의방법을이용하여 (Motomu Tanaka and Kei Maruyama., J. Pharmacol.Sci. 93, 465~470, 2003., Daoui, Cognon, Naline et., Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 158, 42~48, 1998.) 평가하였다. 실험과정은다음과같다. [0072] [0073] 1 수컷 ICR 마우스 (6주령, 오리엔트바이오 ) 에약물을경구투여하고 30분후마우스를플레티시스모그래프챔버 (Buxco, U.S.A.) 에넣은후, 기침유발제 ( 시트르산 ) 를분무하여기침을유발시켰다. 2 양성대조군으로는진해제로사용되고있는테오브로민 (50 mg/kg) 을사용하였으며, 0.4 M의시트르산에마우스를 10분간노출시키고이때발생하는기침수를 5초간격으로 10분간측정하였다

9 [0074] [0075] 2-2. 실험결과 아래 [ 표 2] 는양성대조약물로사용된테오브로민과제조된혼합추출물의투여용량에따른기침억제능을나 타낸표이다. [0076] 구분 두여용량 (mg/kg) 기침횟수 /5초 대조군 ± 0.24 HAE ± 0.33 HAE ± 0.34 HAE ± 0.28 HAE ± 0.34 테오브로민 (Theobromine) ± 0.17 표 2 [0077] 실험결과, HAE-01, HAE-02 실험군에비해, HAE-03 및 HAE-04 실험군의기침횟수가감소한것을확인하였다. [0078] 도 2 는혼합추출물의기침억제능을나타낸것으로, 5 초동안발생한기침횟수를측정한그래프이다. [0079] [0080] 도 2 에서보는바와같이, 대조군에비해테오브로민처리군에서기침횟수가감소하는것을확인하였다. 또한인동등, 황금및길경의혼합추출물에비해인동등, 황금및맥문동의혼합추출물이기침횟수가더욱감 소한것을확인하여, 기침억제능이더뛰어난것을확인하였다. [0081] 실험예 3. 항산화활성평가 [0082] [0083] [0084] 3-1. 실험과정 DPPH assay는항산화효능을측정하는실험중가장보편적인실험중하나이다. DPPH assay의원리는진한보라색을띠는 Diphenylpicrylhydrazyl이항산화제에의해 Diphenylpicrylhydrazine으로환원되어옅은노란색으로변하는것으로, 항산화제의항산화력이강할수록옅은노란색에가까워진다. 또한흡광도측정시짙은보라색은감지되나옅은노란색은감지되지못한다. 따라서흡광도의수치가작게나올수록항산화력이높은것이라고할수있다. 실험과정은다음과같다. [0085] [0086] [0087] [0088] [0089] mm DPPH 용액 (Diphenylpicrylhydrazyl) 을 8그룹준비하였다. 2 1 그룹은음성대조군으로설정하여어떤조작도하지않았으며, 2그룹은양성대조군으로설정하여 ascorbic acid(vitamin C) 50 M을처리하였다. 3 실험그룹에는추출물을각각 10 g/ml, 30g/mL, 100 g/ml씩처리하였다 nm의파장에서흡광계를이용하여시료들의색이어떻게변하는지관찰하였다. 5 측정된흡광도를다음의식으로 % 환산하였다

10 수학식 1 [0090] [0091] [0092] 3-2. 실험결과 다음 [ 표 3] 은혼합추출물의항산화효능을나타낸것으로, 처리용량에따른항산화효과를나타낸표이며, 도 3 은혼합추출물들의항산화효과를나타낸그래프로서, 흡광도를 % 로환산하여나타낸그래프이다. [0093] 구분 처리용량 ( μg / ml ) 항산화효과 (%) HAE-01 HAE-02 HAE-03 표 HAE Vitamin C 50 μm 76.3 [0094] 실험결과, 모든혼합추출물에서음성대조군과비교했을때농도의존적인항산화효과를나타내었다

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Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,