http://www.patent.go.kr/jsp/kiponet/ir/receipt/online/applnooffcact.so 1 / 3 2015-07-17 2015.07.17 ( ) ( ) (001) 10-2015-0101359 ( 1-1-2015-0691664-24) (1-2012-068651-1) 2 (9-1999-000250-1) << >> 1.,. 2.,. : 0131( ) + 3.,, [ ( ), ]. (patent.go.kr) > > 5 4. ( ),. 5. PCT ( ) ( ).. : http://www.kipo.go.kr- -PCT/ : 12, 6,, 16 [ (PTO/SB/39). 6.,. 10-2010-0000000, 40-2010-0000000 7..

서지사항 서류명 특허출원서 참조번호 001 출원구분 특허출원 출원인 명칭 주식회사단정바이오 출원인코드 1-2012-068651-1 출원인 명칭 ( 주 ) 이엔비에스 출원인코드 1-2001-019890-8 출원인 성명 정용재 출원인코드 4-2015-042595-9 대리인 성명 김희소 대리인코드 9-1999-000250-1 포괄위임등록번호 2014-045492-9 포괄위임등록번호 2015-038686-3 포괄위임등록번호 2015-061714-5 발명의국문명칭 그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용 화장료조성물및그의제조방법 43-1

발명의영문명칭 Cosmetic composition containing fermented graviola for improving anti-wrinkle and method of preparing the same 발명자 성명 성명의영문표기 주민등록번호 정의수 CHOUNG EUI SU 681125-1XXXXXX 우편번호 220-110 주소 국적 강원도원주시개운로 30, 101 동 503 호 KR 발명자 성명 성명의영문표기 주민등록번호 윤재웅 YUN JAE UNG 780725-1XXXXXX 우편번호 220-773 주소 국적 강원도원주시남원로 526 한일아파트 105 동 203 호 KR 발명자 성명 성명의영문표기 주민등록번호 박민희 PARK MIN HEE 860107-2XXXXXX 우편번호 220-934 43-2

주소 강원도원주시강변로 27 국적 KR 발명자 성명 성명의영문표기 주민등록번호 김홍본 KIM Hongbon 660107-1XXXXXX 우편번호 437-831 주소 경기도의왕시새롬길 21 푸른마을 202-1102 국적 KR 발명자 성명 성명의영문표기 주민등록번호 정용재 JOUNG Yongjae 650927-1XXXXXX 우편번호 730-814 주소 경상북도구미시고아읍들성로 6 길 19-35 국적 출원언어 심사청구 KR 국어 청구 취지 위와같이특허청장에게제출합니다. 대리인김희소 ( 서명또는인 ) 수수료 43-3

출원료 0 면 46,000 원 가산출원료 37 면 0 원 우선권주장료 0 건 0 원 심사청구료 11 항 627,000 원 합계 673,000 원 감면사유 개인 (70% 감면 )[1], 중기업 (70% 감면 )[2] 감면후수수료 첨부서류 201,900 원 1. 중소기업기본법제 2 조의규정에따른중기업에해당함을 증명하는서류 _1 통 2. 중소기업기본법제 2 조의규정에따른 중기업에해당함을증명하는서류 _1 통 43-4

발명의설명 발명의명칭 그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물및 그의제조방법 {Cosmetic composition containing fermented graviola for improving anti-wrinkle and method of preparing the same} 기술분야 0001 본발명은그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선 용화장료조성물및그의제조방법에관한것으로, 상세하게는그라비올라를사카 로미세스로발효한발효액또는상기발효액을추출한추출액을수득하여, 피부주 름개선효과가우수하고피부자극에대한부작용이없는그라비올라발효액을유 효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물및그의제조방법에관한 것이다. 0002 또한, 본발명은그라비올라발효액을유효성분으로하는화장료조 성물을제공함으로써, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제하여피부의주름을개 선하는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물 및그의제조방법에관한것이다. 발명의배경이되는기술 43-5

0003 화장품의기능은청결과미적기능뿐만아니라, 수분, 공해물질과 스트레스, 자외선등의외적인요인과면역세포의기능저하, 세포활성의저하등 의내적요인에기인한자유라디칼 (Free Radical), 활성산소, 과산화물등에의한 단백질, 핵산, 세포막지질파괴등의피부노화의원인을제거하거나억제하는것 이다. 0004 또한, 소비자의고기능화장품에대한욕구를충족시키기위한 미백, 피부주름개선및억제, 그리고자외선차단기능을갖는화장품들이계속해 서개발되고있다. 그중에서도특히주름개선및억제제품은피부를젊게유지 하려는소비자의많은관심을받는대상이다. 0005 사람의피부는일반적으로나이가들어감에따라내, 외적인환경에 의하여수분, 탄력성, 색및윤기를잃고거칠어진다. 이것을피부노화라고하며, 기미, 주름, 주근깨등이많아지는과정이다. 0006 아이때는체내에콜라겐 (collagen) 이많아서온몸이매끌매끌하지 만, 나이가들면콜라겐이부족하거나질이저하되어피부는탄력을잃고주름이 생기게된다. 피부의주름은피부의수분함유량과콜라겐의함유량그리고면역 기능등의여러요인에영향을받으며, 이중에서도가장큰영향을미치는것이 콜라겐의함유량인것으로알려져있다. 0007 콜라겐은피부의진피층에존재하며전체피부건조중량의약 70 % 를차지한다. 피부의탄력은이콜라겐과엘라스틴 (elastin, 탄력섬유 ) 에의해서 43-6

유지되는것으로알려져있다. 0008 콜라겐분자는파이브로블라스트 (Fibroblast) 내에서만들어지며, 이들이세포밖으로분비된후에 3 중나선구조를형성한다. 콜라겐의주된기능으 로는, 피부의기계적인견고성유지, 결합조직의저항력및조직의결합력강화, 세포접착의지탱, 세포분할및분화의유도등이알려졌다 (Van der Rest 등, 1990). 0009 생체내에서콜라겐과같은세포외기질의합성과분해는적절하게 조절되나노화가진행되면서그합성이감소하며콜라겐을분해하는효소인기질 금속단백질분해효소 (MMP, matrix metalloproteinase) 의발현이촉진되어피부의 탄력이저하되고주름이형성된다. 0010 또한, 자연노화에의한세포활성의감소및콜라게나아제 (collagenase) 의활성으로인한내적요인및공해, 자외선, 스트레스등의외적 요인에의한활성산소및자유라디칼의증가로인해피부의탄력이감소하게된다 (Ingrid Emerit 등, Free radical and aging, 1992). 0011 기질금속단백질분해효소 (MMP) 는자연노화와자외선노출에의해 서생체내에서분비되는단백질분해제로세포외기질 (ECM, Extra Cellular Matrix) 내의결합조직 (Collagen, Elastin, Glycosamino-glycans 등 ) 을분해하는효 소 (Enzyme) 이다. 기질금속단백질분해효소 (MMP) 는다형핵성호중구 (Polymorphonuclearneutrophil), 대식세포 (Macrophage), 섬유아세포 (Fibroblast), 골세포 (Born cell) 와같은세포로부터분비되는칼슘및아연의존성엔도펩티다제 43-7

(Endopeptidase) 로중성 ph 에서작용하며기질로써여러가지세포외기질을이용한 다. 그종류는 MMP 1~16 까지존재한다. 이중 collagen 분해와관련하여집중적으로 연구되는기질금속단백질분해효소 (MMP) 는 MMP 1, MMP 9 이다. 0012 일반적으로 80 세에는 20 세에비해 65% 의콜라겐이감소하여피부의 두께가얇아지고, 이는피부의주름형성과밀접한관련이있다고알려져있다 (Arthur K. Balin 등, Aging and the skin, 1989). 0013 또한, 근래에는피부노화에대한광범위한연구가진행되면서피부 에서콜라겐의중요성이한층강조되고있다. 피부내콜라겐의합성촉진, MMP 1, MMP 9 등과같은기질금속단백질분해효소의활성억제를통하여진피기질의성 분이증가됨으로이로부터항산화, 주름개선, 탄력증진, 피부강화및상처치유와 같은항노화의효과를기대할수있는것으로알려져있다. 0014 이러한효과를얻기위하여, 종래에는콜라겐을화장품에배합하여 제품화하였다. 그러나이들화장품은콜라겐을피부표면에도포하는것으로서, 고분자인콜라겐의경피흡수가어려워그기능을기대할수없다. 0015 또한, 근래에는피부의진피에직접콜라겐을주입하지만, 이방법 역시부작용으로인해올바른피부주름의개선을기대하기는어렵다. 0016 최근에는이문제를해결하고자콜라겐합성을촉진하는물질에대 한관심이높아졌으며, 콜라겐합성촉진물질로는레티노익산 (Retinoic acid), 동 물태반유래의단백질 ( 일본특허특개평 8-231370) 등이알려졌다. 43-8

0017 그러나, 레티노익산은불안정하여제형기술이복잡하며, 피부에 자극과발적등의안전성문제로인해사용에한계가있고, 동물태반유래의단백 질은광우병에의한소적출물의사용이금지되고있으므로실질적인피부콜라겐 의합성촉진에의한피부주름개선효과를기대하기는어렵다. 0018 따라서, 생체에안전하고사용의간편성이있으며또한제형상안정 성이높고우수하며, 콜라겐생성촉진효과를갖는새로운콜라겐생성촉진, MMP 1, MMP 9 등의활성을억제하는물질의개발과이물질을함유하는사용이용이한 화장료개발이절실히요구되고있다. 0019 그라비올라 (graviola) 는가시여지 (Annona muricata L.) 라는학명으 로불리우며포포나무과 (Annonaceae) 의식물로그라비올라 (graviola) 또는샤워솝 (soursop) 라는명칭으로잘알려져있다. 가시여지는열대지방에분포하며식용으 로사용되는데 1), 특히가시여지의잎은전통적으로두통, 고혈압, 기침, 천식, 신 경진정제, 경련등에사용되었다 2,3). 가시여지의생리활성에대한연구로는잎, 껍 질, 뿌리, 줄기및열매씨앗에서항균활성 4,5), 항진균활성 6) 및항말라리아활성 7,8) 과 잎추출물에서항산화 9), 항염증효과 10) 를가지는것으로보고되었다. 0020 [ 비특허문헌 1] : De Feo V (1992). Medicinal and magical plants in the Northern Peruvian Andes. Fitoterapia, 63, 417-40. 43-9

0021 [ 비특허문헌 2] : Taylor L (2002). Technical data report for graviola, annona muricata. Sage Press. Austin, 10. 1-6. 0022 [ 비특허문헌 3] : Lans CA (2006). Ethnomedicines used in trinidad and Tobago for urinary problems and diabetes mellitus. J Ethnobiol Ethnomedicine, 2, 45-55. 0023 [ 비특허문헌 4] : Misas C, Hernandez N, Abraham A (1979). Contribution to the biological evaluation of cuban plants. Rev Cubana Med Trop, 31, 29-35. 0024 [ 비특허문헌 5] : Sundarrao K, Burrows I, Kuduk M, et al (1993). Preliminary screening of anti-bacterial and anti-tumor activities of Papuan new guinean active medicinal plants. Pharmaceutical Biol, 31, 3-6. 0025 [ 비특허문헌 6] : Heinrich M, Kuhnt M, Wright CW, et al (1992). Parasitological and microbiological evaluation of mixe Indian medicinal plants (Mexico). J Ethnopharmacol, 36, 81-5. 0026 [ 비특허문헌 7] : Arkcoll D (1990). New crops from Brazil In Janick J, Simon JE (eds.), Advances in new crops. timber press, Portland. 0027 [ 비특허문헌 8] : Antoun MD, Gerena L, Milhus WK (1993). Screening of the flora of puerto rico for potential antimalarial bioactives. Int J Pharmacol, 31, 255-8. 43-10

0028 [ 비특허문헌 9] : Baskar R, Rajeswari V, Kumar TS (2007). In vitro antioxidant studies in leaves of annona species. Indian J Exp Biol, 4, 480-5. 0029 [ 비특허문헌 10] : De Sousa OV, Vieira GDV, De Pinho JJRG, et al (2010). Antinociceptive and anti-inflammatory activities of the ethanol extract of annona muricata L. Leaves in animal models. Int J Mol Sci, 1, 2067-78. 0030 종래에사용되고있는항노화, 피부주름개선에효과있는물질은아 스코르브산, 레티놀및콜라게나제활성을단순히억제하는물질로화장료나의약품 에배합함으로써피부의주름개선및노화를방지하는방법으로이용되어왔는데, 가격이고가일뿐만아니라배합시안정성이좋지못하거나그효과가미미하여 실질적인효과를얻기가어려운문제점이있었다. 발명의내용 해결하고자하는과제 0031 본발명은상기와같은문제를해결하기위해안출된것으로, 그라 비올라를사카로미세스로발효한발효액또는상기발효액을추출한추출액을수득 하여, 피부주름개선효과가우수하고피부자극에대한부작용이없는그라비올 라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물및그의제조방법 을제공하는데목적이있다. 43-11

0032 또한, 본발명은그라비올라발효액을유효성분으로하는화장료조 성물을제공함으로써, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제하여피부의주름을개 선하는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물 및그의제조방법을제공하는데목적이있다. 과제의해결수단 0033 본발명은그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올 라발효액을함유하는피부주름개선용화장료조성물인것을특징으로한다. 0034 또한, 본발명은그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그 라비올라발효물의추출액을함유하는피부주름개선용화장료조성물인것을특 징으로한다. 0035 또한, 본발명에서상기그라비올라는물, 탄소수 1 내지 4 개의무 수또는함수저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트및 1,3- 부틸 렌글리콜로구성된군으로부터선택되는어느하나의추출용매를사용하여추출 되는것이바람직하다. 0036 아울러, 본발명은그라비올라추출액을얻는단계 (S10) 와, 상기그 라비올라추출액에균주사카로미세스를접종하여발효액을얻는단계 (S20) 와, 상 기단계 (S20) 의그라비올라발효액에서배양균을제거한후열수추출법을이용하 여그라비올라발효추출액을얻는단계 (S30) 및상기단계 (S20) 의그라비올라발 43-12

효액또는상기단계 (S30) 의그라비올라발효추출액에안정화제, 비타민, 안료, 색소및향료를포함하여화장료조성물을얻는단계 (S40) 로이루어지는것을특징 으로한다. 발명의효과 0037 상기와같이본발명에따른그라비올라발효액을유효성분으로하 는피부주름개선용화장료조성물및그의제조방법은그라비올라를사카로미세 스로발효한발효액또는상기발효액을추출한추출액으로수득하여피부주름개 선효과가우수하고피부자극에대한부작용이없는효과가있다. 0038 또한, 본발명에따른그라비올라발효액을유효성분으로하는피부 주름개선용화장료조성물및그의제조방법은그라비올라발효액을유효성분으로 하는화장료조성물을제공함으로써, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제하여피부주름 을개선하는효과가있다. 도면의간단한설명 0039 도 1 은본발명의일실시예를따른그라비올라발효액을유효성분 으로하는피부주름개선용화장료조성물의제조방법의플로우차트. 발명을실시하기위한구체적인내용 0040 본발명은산화, 염증반응및아토피증상에대한피부의방어기 작을항산화효과와유효성을극대화시키는발효기술을기초로하여연구하였다. 43-13

그결과, 그라비올라를사카로미세스로발효한발효액이현저하게분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제 하여피부개선효과를나타냄을확인하여본발명을완성하였다. 0042 본발명에따른그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름 개선용화장료조성물에대하여설명하면다음과같다. 0044 본발명은그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올 라발효액을함유하는피부주름개선용화장료조성물인것을특징으로한다. 0045 또한, 그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올라발 효액으로부터추출한추출액을함유하는피부주름개선용화장료조성물인것을 특징으로한다. 0046 상기그라비올라의바람직한건조중량비는그라비올라 10 내지 40 중량 % 가되는것이바람직하며, 상기그라비올라는물, 탄소수 1 내지 4 개의무수 또는함수저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트및 1,3- 부틸렌 글리콜로구성된군으로부터선택되는어느하나의추출용매를사용하여추출되는 것이바람직하다. 0047 상기그라비올라는당업계에공지된통상의방법에따라, 즉, 통상 적인온도와압력의조건하에서, 통상적인용매를사용하여그라비올라추출액이 43-14

제조될수있다. 0048 일예로, 본발명의조성물의유효성분인그라비올라는물, 탄소수 1 내지 4 개의무수또는함수저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이 트및 1,3- 부틸렌글리콜로구성된군으로부터선택되는용매를사용하여추출하거 나그라비올라를상기용매를이용하여추출한후, 이를혼합하여제조할수있다. 0049 상기용매는알코올이좋으며, 바람직하게는에탄올이좋은데, 에탄 올은더욱바람직하게 30% 에탄올인것이좋다. 상기추출용매의적합한첨가량은 그라비올라건조중량의 1 내지 30 배이며, 더욱바람직하게는 10 내지 30 배이며, 가장바람직하게는 20 배이다. 0050 한편, 본발명의그라비올라를사카로미세스로발효한발효액은상 술한추출법에의한추출물뿐만아니라, 통상적인정제과정을거친추출물도포함 한다. 0051 예컨대, 일정한분자량컷 - 오프값을갖는한외여과막을이용한분 리, 다양한크로마토그래피 ( 크기, 전하, 소수성또는친화성에따른분리를위해 제작된것 ) 에의한분리등, 추가적으로실시된다양한정제방법을통해얻어진 분획도본발명의그라비올라를사카로미세스로발효한발효액에포함된다고해석 한다. 0052 또한, 본발명의그라비올라를사카로미세스로발효한발효액은발 효액을감압증류및동결건조또는분무건조등과같은추가적인과정에의해 43-15

분말상태로제조된것을포함하기도한다. 0053 본발명의그라비올라발효액또는그라비올라발효추출액은상기 그라비올라를사카로미세스로발효한발효액또는상기발효액을추출한추출액으 로써, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자 발현과 MMP-1 의유전자발현을억제하여피부의주름개선효과가우수하고피부자 극에대한부작용이없는천연의안전제제에해당하며, 생산비용이저렴하다. 0054 본발명에서그라비올라를사카로미세스로발효한발효액은농축된 액상일수도있고, 건조된분말형태일수도있다. 0055 상기사카로미세스는자낭균류에속하는효모의 1 속으로, 난형또는 타원형이며다극출아로증식하는유포자효모로, 상기사카로미세스는사카로미세 스바이아누스 (Saccharomyces bayanus), 사카로미세스바울라디 (Saccharomyces boulardii), 사카로미세스세레비시아 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 케발리에리 (Saccharomyces chevalieri), 사카로미세스다이레넨시스 (Saccharomyces dairenensis), 사카로미세스엘립소이두스 (Saccharomyces ellipsoideus), 사카로미세스유바야누스 (Saccharomyces eubayanus), 사카로미세스 엑시구스 (Saccharomyces exiguus), 사카로미세스플로렌시노 (Saccharomyces florentinus), 사카로미세스우바룸 (Saccharomyces uvarum) 등으로구성된군으로 부터선택되는하나또는둘이상의균주일수있다. 43-16

0056 상기사카로미세스는사카로미세스세레비시아 (Saccharomyces cerevisiae) 가바람직하며, 상기사카로미세스세레비시아는자낭균류에속하는대 표적인효모로, 빵효모 (baker's yeast), 맥주효모 (brewery yeast), 및양조에사 용하는효모이다. 0058 본발명의그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선 용화장료조성물은매우우수한주름개선효능을나타내며, 적용제품들에서우 수한안정성을나타낸다. 0059 또한, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제등의효과를가진다. 0061 본발명의바람직한실시예에따르면, 그라비올라를사카로미세스로 발효한발효액또는발효액을추출한추출액은화장료조성물중총중량대비 0.01 내지 20.0 중량 % 이며, 바람직하게는 0.1 내지 15.0 중량 % 이며, 보다바람직하게는 1 내지 10.0 중량 % 이다. 0062 상기그라비올라발효액또는발효액을추출한추출액은화장료조 성물총중량대비 0.01 중량 % 미만인경우섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제 효과가나타나지않는문제가있으며, 20 중량 % 초과인경우건조피부를가진사 43-17

람에게피부가려움과따끔거림이발생되는문제가발생할수있다. 0063 본발명의그라비올라발효액또는발효액을추출한추출액은피부 주름개선의효과를가지며, 건조피부를가진사람을제외하고는피부자극에대 한부작용이없기때문에, 100 중량 % 그라비올라발효액또는 100 중량 % 그라비올 라발효추출액을화장료조성물로사용할수있다. 0065 본발명의화장료조성물에포함되는성분은유효성분으로서의그 라비올라를사카로미세스로발효한발효액이외에화장료조성물에통상적으로이 용되는성분들을포함하며, 예컨대항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소및향료와같은통상적인보조제, 그리고담체를포함한다. 0066 본발명의화장료조성물은당업계에서통상적으로제조되는어떠 한제형으로도제조될수있으며, 예를들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 - 함유클린싱, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션및스프레이등으로제형화될수있으나, 이 에한정되는것은아니다. 보다상세하게는, 유연화장수, 영양화장수, 영양 크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징포옴, 클렌징워 터, 팩, 스프레이또는파우더의제형으로제조될수있다. 0067 본발명의제형이페이스트, 크림또는겔인경우에는담체성분으 로서동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스유도체, 폴 43-18

리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크또는산화아연중어느하나 이상을선택하여이용될수있다. 0068 본발명의제형이파우더또는스프레이인경우에는담체성분으로 서락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘실리케이트또는폴리아미드 파우더가이용될수있고, 특히스프레이인경우에는추가적으로클로로플루오로히 드로카본, 프로판 / 부탄또는디메틸에테르와같은추진체를포함할수있다. 0069 본발명의제형이용액또는유탁액인경우에는담체성분으로서용 매, 용해화제또는유탁화제가이용되고, 예컨대물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 부 틸렌글리콜, 1,3- 부틸글리콜오일, 폴리옥시에칠렌경화피마자유, 글리세롤, 글리 세린, 지방족에스테르, 페녹시에탄올, 트리에탄올아민, 폴리에틸렌글리콜, 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴오레이드, 파라핀, 소르비탄스테아레이트, 친유형 모노스테아린산글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트 / 피이지 -400 스테아레 이트, 카르복시폴리머, 시토스테롤, 폴리글리세릴 2- 올레이트, 세라마이드, 콜레스 테롤, 스테아레스 -4, 디세틸포스페이트, 마카다미아오일, 카르복시비닐폴리머, 산 탄검또는소르비탄의지방산에스테르중어느하나이상을선택하여이용될수 있다. 0070 본발명의제형이현탁액인경우에는담체성분으로서물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜또는프로필렌글리콜과같은액상의희석제, 에톡실화이 소스테아릴알코올, 폴리옥시에틸렌소르비톨에스테르및폴리옥시에틸렌소르비 43-19

탄에스테르와같은현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오즈, 소디움히아루로네이트, 페녹시에탄올, 알루미늄메타히드록시드, 벤토나이트, 스테 아린산, 세틸알코올, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테 아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트 / 글리세릴스테아레이트 / 폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 파리핀, 스쿠알란, 카프릴릭 / 카프릭트리글리 세라이드, 카르복시비닐폴리머, 트리에탄올아민, 아가또는트라칸트중어느하나 이상을선택하여이용될수있다. 0071 본발명의제형이계면 - 활성제함유클린징인경우에는담체성분으 로서지방족알코올설페이트, 지방족알코올에테르설페이트, 설포숙신산모노에 스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산아미드에테르설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산글리세 리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체또는에톡실화글리세롤 지방산에스테르중어느하나이상을선택하여이용될수있다. 0073 본발명에따른그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름 개선용화장료조성물의제조방법은첨부도면을참조하여설명하면다음과같다. 0075 도 1 은본발명에따른그라비올라발효액을유효성분으로하는피 부주름개선용화장료조성물의제조방법을보여주는플로우차트이다. 43-20

0077 이하, 본발명에대한바람직한실시내용은첨부한도면을참조하 여설명하며, 본발명의그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용 화장료조성물의제조방법은하기단계를포함하는것이바람직하나이에한정되지 않는다. 0079 본발명은그라비올라추출액을얻는단계 (S10) 와, 상기그라비올라 추출액에균주사카로미세스를접종하여발효액을얻는단계 (S20) 와, 상기단계 (S20) 의그라비올라발효액에서배양균을제거한후열수추출법을이용하여그라 비올라발효추출액을얻는단계 (S30) 및상기단계 (S20) 의그라비올라발효액또 는상기단계 (S30) 의그라비올라발효추출액에안정화제, 비타민, 안료, 색소및 향료를포함하여화장료조성물을얻는단계 (S40) 로이루어지는것을특징으로한 다. 0081 본발명의제조방법을각단계별로나누어서설명하면다음과같다. 0083 상기그라비올라추출액을얻는단계 (S10) 를수행한다. 0084 상기그라비올라를정제수로세척하고건조한다음모두분쇄한후 50 내지 200 메시 (mesh) 의체를이용하여미세한분쇄물을얻는다. 상기그라비올 43-21

라분쇄물에 100 내지 300 g/l 의증류수를가하고중탕조건에서 3 내지 7 시간씩 3 회환류추출하고냉침을한다. 그후, 3 내지 8 μm여과지로여과하여추출액을제 조하여발효과정의추출액으로사용한다. 0086 상기그라비올라추출액에균주사카로미세스를접종하여발효액을 얻는단계 (S20) 를수행한다. 0087 상기단계 (S10) 에서얻은그라비올라추출액에균주사카로미세스와 YM Broth 배지를넣어 20 내지 25 호기적조건에서 80 내지 150 시간발효를진 행한다. 배양후배양액을원심분리하여배양균을 1 차제거한후, 더이상배양되 지않도록멸균처리를한다. 0088 상기단계 (S20) 에서수득한그라비올라발효액은화장료조성물총 중량에대해 0.01 내지 20.0 중량 % 이포함될수있다. 0089 상기그라비올라발효액은화장료조성물총중량대비 0.01 중량 % 미만인경우리폭시게나아제, 히아루로니다아제의활성억제및자유라디칼의소거 효과가나타나지않는문제가있으며, 20 중량 % 초과인경우건조피부를가진사 람에게피부가려움과따끔거림이발생되는문제가있다. 0091 상기단계 (S20) 의그라비올라발효액에서배양균을제거한후열수 추출법을이용하여그라비올라발효추출액을얻는단계 (S30) 를수행한다. 43-22

0092 상기단계 (S20) 에서수득한그라비올라발효액에멸균및방부제를 투여한후, 열수추출법으로그라비올라발효추출액을얻는다. 상기배양균을제 거한그라비올라발효액을최종 70 %(V/V) 에탄올수용액이되도록에탄올을첨가 하고, 3 내지 7 시간씩 3 회환류추출하고냉침한후, 3 내지 8 μm여과지로여과한 다. 여과가완료후그라비올라발효추출액을얻는다. 0093 상기단계 (S30) 에서수득한그라비올라발효추출액은화장료조성 물총중량에대해 0.01 내지 20.0 중량 % 이포함될수있다. 0094 상기그라비올라발효추출액은화장료조성물총중량대비 0.01 중 량 % 미만인경우리폭시게나아제, 히아루로니다아제의활성억제및자유라디칼의 소거효과가나타나지않는문제가있으며, 20 중량 % 초과인경우건조피부를가 진사람에게피부가려움과따끔거림이발생되는문제가있을수도있다. 0096 상기단계 (S20) 의그라비올라발효액또는상기단계 (S30) 의그라비 올라발효추출액에안정화제, 비타민, 안료, 색소및향료를포함하여화장료조 성물을얻는단계 (S40) 로이루어지는것을특징으로한다. 0098 이하, 본발명의제조예, 실시예, 비교예, 시험예및제형예에의해 상세히설명한다. 43-23

0099 하기제조예, 실시예, 비교예, 시험예및제형예는본발명을예시 하는것일뿐, 본발명이하기제조예, 실시예, 비교예, 시험예및제형예에한정되 는것이아니다. 0101 [ 제조예 ] 그라비올라추출액제조방법 0102 그라비올라를정제수로세척하고건조한다음모두분쇄한후 100 메시 (mesh) 의체를이용하여미세한분쇄물을얻었다. 그라비올라분쇄물을 100 g/l 가되도록 10%(V/V) 에탄올수용액을가하고중탕조건에서 5 시간씩 3 회환류 추출하고냉침하였다. 그후, 6 μm의여과지 ( 와트만 (whatman) #3) 로여과하여추출 액을제조하여발효과정의추출액으로사용하였다. 0103 또한, 상기의발효액을 50 이하에서감압농축및동결건조하여 효능평가시에사용하였다. 0105 [ 실시예 ] 그라비올라발효액및그라비올라발효추출액의제조방법 0106 상기제조예에서제조된그라비올라추출액에균주 Saccharomyces cerevisiae (KCTC 7917) 와 YM Broth 배지를넣어 24 호기적조건에서 120 시간 발효를진행한다. 배양후배양액을원심분리하여배양균을 1 차제거한후, 더이 상배양되지않도록멸균 (121, 15 분, 1.5 기압 ) 하였다. 43-24

0107 발효후, 배양균을제거한그라비올라발효물을최종 30%(V/V) 에탄 올수용액이되도록에탄올을첨가하여 5 시간씩 3 회환류추출하고냉침한후, 6 μm의여과지 ( 와트만 (whatman) #3) 로여과하였다. 여과가한후얻어진추출액을농 축조로이송하여 50 이하에서감압농축및동결건조하였다. 0109 [ 비교예 1] 송이버섯균사체를함유한그라비올라송이버섯발효액 제조방법의비교예 1 0110 본비교예 1 에서는제조예 1 에서수득된그라비올라추출액을송이 버섯균사체로그라비올라송이버섯발효액을제조하였다. 송이버섯을제외한나머 지실험방법은실시예 1 과동일하였다. 0112 [ 비교예 2] 능이버섯균사체를함유한그라비올라송이버섯발효액 제조방법의비교예 2 0113 본비교예 2 에서는제조예 1 에서수득된그라비올라추출액을능이 버섯균사체로발효시켜그라비올라능이버섯발효액을제조하였다. 능이버섯을제 외한나머지실험방법은실시예 1 과동일하였다. 0115 [ 시험예 1] 본발명의그라비올라발효액에의한세포증식및독성 확인 43-25

0116 < 세포배양 > 0117 상기실시예 1, 비교예 1~2 에서제조된그라비올라발효액건조분말 및제조예 1 에서제조한건조분말의항노화에작용하는유전자발현을확인하기위 하여콜라게나제 (Collagenase) 와 Timp-1 는 HaCaT(Human keratinocyte cell line) 을 사용하고, MMP-1 와트로포엘라스틴 (Tropoelastin) 은 CCD-986Sk(Human fibroblast cell line) 을사용하였다. HaCaT, CCD-986Sk 세포는 10 %(v/v) 의 FBS(fetal bovine serum, Gibco, USA), 100 U/mL 의 streptomycin, 100 U/mL 의 penicillin 항생제 (Gibco, USA) 가포함된 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium, Gibco, USA) 배 지를사용하여 5 % CO 2 및 37 조건의인큐베이터에서배양하였다. 0119 < 세포생존율측정실험 (MTT assay) > 0120 상기실시예 1, 비교예 1~2 에서제조된그라비올라발효액건조분말 및제조예 1 에서제조한건조분말에대하여세포증식에미치는영향을 확인하였다. 0121 세포증식및독성확인을위하여하기와같은방법으로실험을진 행하였다. 0122 배양하고있는세포 3T3(fibroblast cell line) 을 96 웰마이크로플 레이트에 5,000 세포 / 웰로분주 ( 分株 ) 하여 30 분간항온조에서배양하고, 시료를농 도별각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5(%,W/V)) 로투여하여 72 시간동안배양하였다. 72 43-26

시간배양후, 티아졸린블루 (Thiazoline blue) 를투여하고 4 시간동안추가배양 을하였다. 배양액을모두버리고마이크로플레이트의각웰에반응정지액을가하 고 5 분간교반한후, 570 nm에서흡광도를측정하였다. 대조군은시료주입량만큼 10 % 우태아혈청 (Fetal Bovine Ser μm, FBS) 배지를투여하여세포성장의최적조 건으로동시배양을하였으며, 대조군의세포증식을 100 % 로하고시료투입실험군 의세포증식율을계산하였다. 0123 세포증식효과는계산식 1 에의해산출되었고, 그결과는하기표 1 에나타내었다. 0124 0125 [ 계산식 1] 0126 0128 표 1 그라비올라발효액에의한세포증식및독성완화효과 증식율 (%) 구분 그라비올라추출물및발효물농도 ( μg / ml ) 대조군 0 10 50 100 1,000 실시예 100 0.00 107.82 116.57 124.68 131.25 비교예1 100 0.00 101.25 106.57 113.27 116.33 비교예2 100 0.00 102.15 107.61 111.83 115.27 제조예 100 0.00 106.81 113.15 118.32 121.66 43-27

0130 표 1 에나타낸바와같이, 세포성장최적조건에서의세포증식을 100 % 로하였을때, 실시예와비교예 1~2 에서제조된그라비올라발효액및제조예 1 에서제조된그라비올라추출액은세포독성이없으며, 실시예, 비교예 1~2, 제조 예모두에서세포증식효과가있음을확인하였다. 0131 특히, 실시예는비교예 1~2 보다월등한세포증식효과를나타내었으 며, 실시예의그라비올라발효액이가장우수한세포증식효과를나타내었다. 0133 [ 시험예 2] 세포내 collagenase, Timp-1 및 Tropoelastin 의유전자 발현과 MMP-1 의유전자발현억제효과 0134 HaCaT 와 CCD-986Sk 세포는세포의수를 5X105 cells/ ml로조제한후 에페트리디쉬에처리하여 24 시간동안 5% CO 2 및 37 의조건에서배양하였다. 세 포가페트리디쉬에서 80% 이상자란다음, 추출물세포생존률 100% 이상으로나타 난농도로첨가하였다. 0135 실시예 1, 비교예 1~2 에서제조된그라비올라발효액건조분말및 제조예 1 에서제조한건조분말을처리한후 DMED/10 FBS 에서 24 시간동안 5% CO 2 및 37 의조건에서배양하였다. 24 시간후세포에서 RNA 분리, cdna 합성및 RT-PCR 은 Komoroski 등 (Drug Metab. Dispos. 32:512-518, 2004) 이기술한방법에따라수 행하였다. RT-PCR 에서측정한유전자는 COL1A1, TIMP-1 및 Tropoelastin 의발현과 MMP-1 의발현억제를확인하였다. 유전자발현의차이를확인하기위해 house 43-28

keeping gene 으로 GAPDH 을사용하였다. 0136 각각의유전자의프라이머서열은표 2 에나타냈다. 추출된 RNA 를 주형으로올리고 dt- 어댑터프라이머 (Oligo dt-adaptor primer) 와 DEPC water 를이 용하여총량 15 μl로하고 70 5 분변성후, M-MLV(Moloney murine leukemia virus) RNA 의역전사를수행하여 42 60 분, 94 5 분 cdna 를합성하였다. 합성 된 cdna 는 PCR 반응을통해증폭하였으며, 총반응액은 25 μl로하였다. 각반응물 의최종농도는프라이머 100 p mol, 1.0 μm, dntp 혼합액 0.2 mm, 5x green or colorless GoTaq Reaction buffer 1 1.5 mm, MgCl2(PCR 완충액 ) 및 GoTaq DNA 폴 리머라제 1.25 units 이었다. 0137 변성 (Denaturation), 어닐링 (annealing) 및익스텐션 (extension) 에 대한 PCR 반응조건은다음과같으며, 95 2 분, 95 30 초, 60 30 초, 72 1 분, 72 5 분, 30~40 사이클로수행하였다. PCR 반응후생성물의 10 μl를 2% 아 가로즈겔 (agarose gel) 에서전기영동하였다. Gel Documentation system( 코리아랩 텍, Cat. No DGS-200D) 을이용하여발현양을확인했다. 0139 표 2 유전자의프라이머염기서열 프라이머이름 GAPDH MITF Tyrosinase 염기서열 Forward : GGCATTGCTCTCAATGACAA Reverse : TGTGAGGGAGATGCTCAGTG Forward : AACCGACAGAAGAAGCTGGA Reverse : ACAAGTTCCTGGCTGCAGTT Forward : TTATGCGATGGAACACCTGA Reverse : ACTGGCAAATCCTTCCAGTG 43-29

0141 표 3 그라비올라발효액에의한 Collagenase expression 구분 글라비올라추출물및발효물농도 ( μg / ml ) 0 10 50 100 1,000 실시예 100.00 109.21 118.15 127.13 142.65 Collagenase 비교예1 100.00 103.15 105.33 118.12 125.33 expression 비교예2 100.00 104.22 108.15 115.86 123.21 (%) 제조예 100.00 106.33 109.28 120.67 128.91 아데노신 139.51 0143 표 4 그라비올라발효액에의한 TIMP-1expression 구분 글라비올라추출물및발효물농도 ( μg / ml ) 0 10 50 100 1,000 실시예 100.00 106.27 113.18 119.36 128.10 TIMP-1 비교예1 100.00 102.81 103.15 108.66 113.28 expression 비교예2 100.00 105.19 106.21 110.21 116.59 (%) 제조예 100.00 101.18 107.99 113.51 119.17 아데노신 122.84 0145 표 5 그라비올라발효액에의한 Tropoelastin expression 구분글라비올라추출물및발효물농도 ( μg / ml ) 0 10 50 100 1,000 43-30

Tropoelastin expression (%) 실시예 100.00 119.27 129.28 132.87 138.65 비교예1 100.00 101.52 108.19 116.88 120.15 비교예2 100.00 103.81 107.66 114.71 119.49 제조예 100.00 109.22 113.58 121.58 127.41 아데노신 135.48 0147 표 6 그라비올라발효액에의한 MMP-1 expression 구분 글라비올라추출물및발효물농도 ( μg / ml ) 0 10 50 100 1,000 실시예 100.00 95.27 91.19 83.65 78.22 MMP-1 비교예1 100.00 98.22 95.52 93.18 88.45 expression 비교예2 100.00 99.15 97.16 93.87 90.17 (%) 제조예 100.00 97.20 95.33 91.05 89.27 아데노신 79.38 0149 상기표 3 내지 6 에서보는바와같이, PT-PCR 수행후관찰결과, 본발명실시예 1 은비교예 1~2 에서제조된그라비올라발효액건조분말및제조예 1 에서제조한건조분말보다 collagen 및 TIMP-1 의발현이증가하였고, MMP-1 의발 현은농도의존적으로감소하는경향을확인할수있었다. 대조군인아데노신 (Adenosine) 과비교했을때우수하거나비슷한결과를확인할수있었다. 0150 또한, 트로포엘라스틴 (Tropoelastin) 은피부탄력을나타내는탄력 섬유중심의엘라스틴을형성하고있는인자로실시예 1 에서대조군 Adenosine 과 비슷한결과를확인할수있었다. 43-31

0152 [ 제형예 1] 본발명의그라비올라발효액을함유하는화장수의제조 0153 실시예의그라비올라발효액건조분말을함유한화장료중화장수 ( 스킨로션 ) 의제형예는표 7 과같다. 0155 표 7 그라비올라발효액을함유하는화장수의구성 번호 원료 함량 ( 중량 %) 1 그라비올라발효액건조분말 ( 실시예 ) 1.0 2 글리세린 3.0 3 부틸렌글리콜 2.0 4 프로필렌글리콜 2.0 5 폴리올시에틸렌경화피마자유 1.0 6 에탄올 10.0 7 트리에탄올아민 0.1 8 방부제 미량 9 색소 미량 10 향료 미량 11 정제수 잔량 0157 상기화장수를제조하기위하여, 표 7 에기재된 11 번에 2,3,4 및 8 번을순서대로투입하고교반하여용해시킨후, 5 번을 60 정도가열하여용해시 킨후, 10 번을투입하여용해한후 11 번에투입하였다. 마지막으로 1,6,7 및 9 번을 투입하여충분히교반한뒤숙성시켰다. 43-32

0159 [ 제형예 1] 본발명의그라비올라발효액을함유하는영양로션의제 조 0160 실시예의그라비올라발효액건조분말을함유한화장료중영양로 션의제형예는표 8 과같다. 0162 표 8 그라비올라발효액을함유하는영양로션의구성 번호 원료 함량 ( 중량 %) 1 그라비올라발효액건조분말 ( 실시예 ) 2.0 2 밀납 1.0 3 폴리솔베이트 60 1.5 4 솔비탄세스퀴올레이트 0.5 5 유동파라핀 10.0 6 소르비탄스테아레이트 1.0 7 친유형모노스테아린산글리세린 0.5 8 스테아린산 1.5 9 글리세릴스테아레이트 / 피이지-400 스테아레이트 1.0 10 프로필렌글리콜 3.0 11 카르복시폴리머 0.1 12 트리에탄올아민 0.2 13 방부제 미량 14 색소 미량 15 향료 미량 16 정제수 잔량 0164 상기영양로션을제조하기위하여, 표 8 에기재된 10, 11, 13 및 16 번을혼합교반하면서 80 ~ 85 사이로가열하여제조부에투입한후유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 12 번을 80 ~ 85 사이로가열용해한후 유화하였다. 유화가끝나면교반기를이용하여교반하면서 50 까지냉각한뒤 15 43-33

번을투입하고 45 까지냉각한뒤 14 번을투입하고 35 에 1 번을투입하여 25 까지냉각한뒤숙성시켰다. 0166 [ 제형예 3] 본발명의그라비올라발효액을함유하는영양크림의제 조 0167 실시예의그라비올라발효액건조분말을함유한화장료중영양크 림의제형예는표 9 와같다. 0169 표 9 그라비올라발효액을함유하는영양크림의구성 번호 원료 함량 ( 중량 %) 1 그라비올라발효액건조분말 ( 실시예 ) 3.0 2 스테아린산 2.0 3 세틸알콜 2.0 4 글리세릴모노스테아레이트 2.0 5 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트 0.5 6 솔비탄세스퀴올레이트 0.5 7 글리세릴모노스테아레이트 / 글리세릴스테아레이트 / 폴리옥시 1.0 에틸렌스테아레트 8 왁스 1.0 9 유동파라핀 4.0 10 스쿠알란 4.0 11 카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드 4.0 12 카르복시비닐폴리머 0.2 13 부틸렌글리콜 5.0 14 글리세린 3.0 15 트리에탄올아민 0.5 16 정제수 잔량 43-34

0171 상기영양크림을제조하기위하여표 9 에기재된 12, 13, 14 및 16 번을혼합교반하면서 80 ~ 85 사이로가열하여제조부에투입한후유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11 번을 80 ~ 85 사이로가열하여용 해한후 15 번을투입교반하여제조부에투입하고유화하였다. 유화가끝나면교반 기를이용하여교반하면서 35 까지냉각하고 1 번을투입하여 25 까지냉각한 뒤숙성시켰다. 0173 [ 제형예 4 ] 본발명의그라비올라발효액을함유하는에센스의제 조 0174 실시예의그라비올라발효액건조분말을함유한화장료중에센스 의제형예는표 10 과같다. 0176 표 10 그라비올라 3 차발효액을함유하는에센스의구성 번호 함량 ( 중량 %) 1 그라비올라발효액건조분말 ( 실시예 ) 3.0 2 시토스테롤 1.7 3 폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 4 세라마이드 0.7 5 스테아레스-4 1.2 6 콜레스테롤 1.5 7 디세틸포스페이트 0.4 8 농글리세린 5.0 9 마카다미아오일 15.0 10 카르복시비닐폴리머 0.2 11 산탄검 0.2 12 방부제 미량 13 향료 미량 43-35

14 정제수잔량 0178 상기에센스를제조하기위하여표 10 에기재된 2, 3, 4, 5 및 6 번 을일정한온도에서균질화하여제조되는것을비이온계양친매성지질이라 칭한다. 상기비이온계양친매성지질과 1, 7, 8 및 14 번을혼합하고일정한온도 에서균질화하여마이크로플루이다이져를통과하고이어 9 번을일정한온도에서서 서히접종하여균질화한후다시마이크로플루이다이져에재차통과시켰다그리고 10, 11, 12 및 13 번을투입하여분산시켜안정화하고숙성시켰다. 0180 본발명에서설명한것은그라비올라발효액을유효성분으로하는 피부주름개선용화장료조성물및그의제조방법을위한실시예에불과한것으로, 본발명은상기실시예에한정되는것이아니라서로다른다양한형태로구현될 수있으며, 단지본실시예는본발명의개시가완전하도록하고, 본발명이속하 는기술분야에서통상의지식을가진자에게발명의범주를완전하게알려주기위 해제공되는것이며, 본발명은청구항의범주에의해정의될뿐이다. 43-36

특허청구범위 청구항 1 그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올라발효액을함유하 는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용 화장료조성물. 청구항 2 그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올라발효액으로부터 추출한추출액을함유하는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성분으로 하는피부주름개선용화장료조성물. 청구항 3 제 1 항또는제 2 항에있어서, 상기그라비올라는물, 탄소수 1 내지 4 개의무수또는함수저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트및 1,3- 부틸렌글리콜로구성된군으로부 터선택되는어느하나의추출용매를사용하여추출되는것을특징으로하는그라 비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물. 43-37

청구항 4 제 1 항에있어서, 상기그라비올라발효액은화장료조성물총중량에대해 0.01 내지 20.0 중 량 % 이포함되는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부 주름개선용화장료조성물. 청구항 5 제 2 항에있어서, 상기그라비올라발효추출액은화장료조성물총중량에대해 0.01 내지 20.0 중량 % 이포함되는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성분으로하 는피부주름개선용화장료조성물. 청구항 6 제 1 항에있어서, 상기그라비올라발효액은피부주름개선으로선택되는효과를가지며, 피 부자극에대한부작용이없는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름 개선용화장료조성물. 43-38

청구항 7 제 2 항에있어서, 상기그라비올라발효추출액은피부주름개선으로선택되는효과를 가지며, 피부자극에대한부작용이없는그라비올라발효액을유효성분으로하는 피부주름개선용화장료조성물. 청구항 8 그라비올라추출액을얻는단계 (S10); 상기그라비올라추출액에균주사카로미세스를접종하여발효액을얻는단 계 (S20) 로이루어지는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성분으로하는 피부주름개선용화장료조성물의제조방법. 청구항 9 제 8 항에있어서, 상기단계 (S20) 의그라비올라발효액에서배양균을제거한후열수추출법을 이용하여그라비올라발효추출액을얻는단계 (S30); 및 상기단계 (S20) 의그라비올라발효액또는상기단계 (S30) 의그라비올라발 효추출액에안정화제, 비타민, 안료, 색소및향료를더포함하여화장료조성물 을얻는단계 (S40) 로이루어지는것을특징으로하는그라비올라발효액을유효성 43-39

분으로하는항산화, 항염증, 아토피개선용화장료조성물의제조방법. 청구항 10 제 8 항에있어서, 상기단계 (S20) 에서수득한그라비올라발효액은화장료조성물총중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량 % 이포함되는것을특징으로하는그라비올라발효액을 유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물의제조방법. 청구항 11 제 9 항에있어서, 상기단계 (S30) 에서수득한그라비올라발효추출액은화장료조성물총중 량에대해 0.01 내지 20.0 중량 % 이포함되는것을특징으로하는그라비올라발효 액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료조성물의제조방법. 43-40

요약서 요약 본발명은그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름개선용화장료 조성물및그의제조방법에관한것으로, 상세하게는그라비올라를사카로미세스로 발효한발효액또는상기발효액을추출한추출액을수득하여, 피부주름개선효과 가우수하고피부자극에대한부작용이없으며, 그라비올라발효액을유효성분으 로하는화장료조성물을제공함으로써, 섬유아세포증식촉진, 분자내 Collagenase, TIMP-1, Tropoelastin 의유전자발현과 MMP-1 의유전자발현을억제 하여피부의주름을개선하는그라비올라발효액을유효성분으로하는피부주름 개선용화장료조성물및그의제조방법에관한것이다. 또한, 본발명은그라비올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올라 발효액을함유하는피부주름개선용화장료조성물인것을특징으로하고, 그라비 올라를사카로미세스로발효시켜수득한그라비올라발효물의추출액을함유하는 피부주름개선용화장료조성물인것을특징으로하며, 상기그라비올라는물, 탄 소수 1 내지 4 개의무수또는함수저급알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아 세테이트및 1,3- 부틸렌글리콜로구성된군으로부터선택되는어느하나의추출 용매를사용하여추출되는것이바람직하다. 아울러, 본발명은그라비올라추출액을얻는단계 (S10) 와, 상기그라비올라 추출액에균주사카로미세스를접종하여발효액을얻는단계 (S20) 와, 상기단계 43-41

(S20) 의그라비올라발효액에서배양균을제거한후열수추출법을이용하여그라 비올라발효추출액을얻는단계 (S30) 및상기단계 (S20) 의그라비올라발효액또 는상기단계 (S30) 의그라비올라발효추출액에안정화제, 비타민, 안료, 색소및 향료를더포함하여화장료조성물을얻는단계 (S40) 로이루어지는것을특징으로 한다. 대표도 도 1 43-42

도면 도 1 43-43