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25 이영경 강희정 김영민 원철연 조현찬 이소모되기때문에검사량이많고비정상검체의비율이높은경우검사실에큰부담이된다. 최근개발되고소개되는자동혈구분석기는빛의산란 (light scattering), 전기저항 (electrical impedance) 등의원리를복합적으로이용하고, 여기에유세포분석이나세포화학적염색등의원리를추가함으로써기존의백혈구감별계산외에여러가지비정상세포를검출하려는시도를하고있다 [1-3]. 자동혈구분석기가비정상세포의존재를보다정확하게보고하고, 비정상세포의특징을구분하고양적으로보고할수있다면수기법으로백혈구감별계산을하는비율을크게감소시킴으로써검사실의업무효율을증대시키고, 동시에보다정확한결과보고가가능할것이다. 최근 Horiba ABX 사에서개발한 ABX Pentra DX 12 (Pentra DX 12, Horiba ABX Diagnostics, Montpellier, France) 은백혈구감별계산에 double matrix 를이용하여기존의 5종백혈구감별계산에추가적으로비정형림프구를구분하고미성숙백혈구를미성숙과립구, 미성숙단구, 미성숙림프구로감별진단하여양적으로보고할수있는기능을가지고있으며, 형광법을이용하여유핵적혈구를양적으로측정하는기능을가지고있어, 수기법을이용한백혈구감별계산의비율을줄이고급성백혈병을비롯하여말초혈액에서비정상세포가출현하는질환의진단에도움을줄수있을것으로기대된다. 본연구에서는 Pentra DX 12 에대해기본적인 5종백혈구감별계산능력을평가하고, 새로도입된원리를이용한미성숙백혈구및유핵적혈구의감별계산의유용성을평가하고자하였다. 재료및방법 1. 대상한림대학교성심병원에내원하여일반혈액검사가의뢰된 검체중정상 1 검체와비정상 1 검체를대상으로하였다. 정상검체는건강검진을위해방문한성인으로정상일반혈액검사결과를보인 1 검체를대상으로하였다. 비정상검체는병원에입원하여일반혈액검사를의뢰한환자중 CLSI H2-A 에서권장안에따라 Table 1과같이다양한질환이포함되도록하였다. 비정상검체선정시절대값과비율을모두충족되도록하였으며, immature cell 분류에는급성백혈병이나만성림프구성백혈병검체가포함되었다. 검체는 K 2EDTA 진공채혈관 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) 에채혈한전혈을이용하였다. 정밀도평가에서는백혈구감별계산을위해서는고, 중, 저, 세가지농도의 ABX Difftrol 대조물질 (Horiba ABX Diagnostics) 을이용하였고, 유핵적혈구감별계산을위해서는역시세가지농도 (ERB1, ERB2, ERB3) 의 ABX Erythrol 대조물질 (Horiba ABX Diagnostics) 을이용하였다. 2. 장비 Pentra DX 12 은일반혈액검사와망상적혈구수측정을포함하여 45개의변수를제공하는자동혈구분석기로서시간당약 12 검체를처리할수있는능력을가지고있다. Pentra DX 12은 double matrix 를이용하여백혈구감별계산을시행한다. Double matrix 는이중유체역학통로시스템 (double hydrodynamic sleeving system, DHSS) 을이용하여세포화학적염색 (cytochemistry), 전기저항 (impedance), 광흡수력 (light absorbance) 세가지원리를이용하여백혈구감별계산을시행한다. 백혈구가 DHSS 를통과하면전기저항을이용하여세포의크기를측정하고광흡수력을이용하여세포의복잡성을측정하게된다. 그리고, 세포화학적염색방법으로 chlorazole black 가주성분인 LEUCODIFF 시약이 Table 1. Illustrative specimen types of abnormal samples Abnormal samples Absolute count Proportional count N Neutrophila >9 / ul >8% Monocytosis >8 / ul >1% 1 Eosinophilia >5 / ul >7% 5 Lymphocytosis >35 / ul >5% 1 Atypical lymphocytes >7 / ul >1% 1 Neutropenia < / ul <1% 5 Lymphopenia <1 / ul <7% 5 Immature cells >1 / ul >2% Erythroblasts >2 / ul >2/1WBCs 1 Immature granulocytes (CML, leukemoid reaction)

ABX Pentra DX 12 for the Detection of Immature Cells 251 세포의세포질, 과립, 핵을염색하여세포를구분할수있게된다. BASOLYSE 시약은호염기구를제외한모든백혈구의세포막을파괴하는특수시약으로이시약으로백혈구를처리한후전기저항한계치를이용하여용적을측정하여호염기구를측정한다. 이두가지방법을이용하여백혈구감별계산이이루어진다. 유핵적혈구는형광법으로측정하는데, thiazole orange [4] 로세포내핵산성분을염색하고아르곤이온레이저광원을이용하여형광정도와세포의크기를이용하여백혈구와감별하여유핵적혈구를검출한다. 이때백혈구수는자동으로교정되게된다. 3. 방법 1) 정밀도정밀도평가는 CLSI EP5-A2[5] 에따라시행하였다. 대조물질은각각하루에 2번씩 1일간측정하였으며, 한번측정할때 2회연속측정하였다. 2) 5 종백혈구감별계산의정확성평가 Pentra DX 12 의 5종백혈구감별계산의정확성을평가하기위해 CLSI H2-A2[6] 에따라 Pentra DX 12 의백혈구감별계산결과를참고방법인수기법과비교하였다. 대상검체는비정상검체중급성백혈병및만성림프구성백혈병세포가 5% 이상관찰되는검체 1개를제외한 9 개의비정상검체와 1 개의정상검체를대상으로하였으며, 정상군과비정상군을포함한전체군으로나누어평가하였다수기법은검체마다 2개의슬라이드를제작하여두명의검사자가각각서로다른슬라이드에대해각각 2 개의백혈구를검사하여백혈구감별계산을시행하였다. 백혈구감별계산은전체백혈구수에대한 % 로표현하였다. 3) 미성숙백혈구및비정형림프구감별계산능력평가 Pentra DX 12 은 double matrix 를이용하여미성숙백혈구와비정형림프구등을감별할수있도록되어있으며, 미성숙백혈구가과립구계인지, 단구계인지, 림프구계인지감별하여보고할수있는기능을가지고있다. 미성숙백혈구는전체적으로 LIC 라고보고되며, LIC 는다시과립구계, 단구계, 림프구계로나누어 IMG, IMM, IML 로분류하여비율과절대값을보고하고있으며, 비정형림프구는 ALY 로보고하고있다. 이러한 Pentra DX 12 의미성숙백혈구및비정형림프구감별계산의정확성을평가하기위하여급성백혈병및만성림프구성백혈병세포가 5% 이상관찰되는검체 1개를포함한 1 개의비정상검체에대해미성숙백혈구및비정형림프구감별계산결과를수기법과비교하였다. 백혈병으로진단받은검체의경우추가적검사로세포화학적검사나유세포분석법결과를확인하고백혈병세포의계열을분류하였다. Table 2. The coefficients of variation (CVs, %) of within run and total precisions of leukocyte differential count Low Normal High Parameter Mean WR Total Mean WR Total Mean WR High WBC ( 1 9 /L) 2.6 1.9 1.8 7.9 1.4 1.4 18.9.9 1.1 Neutrophil (%) 58.6 2.6 2.5 63.8 1.2 1.2 78..6.7 Lymphocyte (%) 31.8 4. 4.1 3.7 2.4 2.7 14.8 2.4 2.4 Monocyte (%).1 48.8 72.1.2 45. 47.5.5 22.6 21.8 Eosinophil (%) 6.7 11.3 11.9 3.2 9.5. 5.6 3.5 4.1 Basophil (%) 2.8 3.8 5. 2.1 5.6 6. 1.2 1.3 13.9 Table 3. The coefficients of variation (CVs, %) of within run and total precisions of erythroblasts ERB1 ERB2 ERB3 Parameter Mean WR Total Mean WR Total Mean WR Total WBC ( 1 9 /L) 7.3 1. 1.2.14 1. 1.1 1.26 3.1 4.7 Erythroblasts (/1WBCs) Erythroblasts ( 1 9 /L) 1.25 12.7 19.8 12.37 4.6 5.2 81.56 5.8 8.9.1.. 1.87 4.2 5.7 1.2 3.8 6.6

252 이영경 강희정 김영민 원철연 조현찬 9 Neutrophil (Normal) 1 Neutrophil (All) 75 6 y=.8647x+3.9523 45 r=.9531 3 3 45 6 75 9 75 5 25 y=.8927x+2.5637 r=.9414 2 4 6 8 1 5 Lymphocyte (Normal) 1 Lymphocyte (All) 4 3 y=.836x+7.83 2 r=.949 1 1 2 3 4 5 75 5 25 y=.8581x+4.574 r=.9635 25 5 75 1 16 12 8 4 Monocyte (Normal) y=.6595x+3.1328 r=.772 4 8 12 16 8 6 4 2 Monocyte (All) y=1.64x+3.14 r=.784 2 4 6 8 Fig. 1. Comparison of leukocyte differential count among normal control group and normal control and patient group (n=1, n=19, except leukemic patients).

ABX Pentra DX 12 for the Detection of Immature Cells 253 8 Eosinophil (Normal) 6 Eosinophil (All) 6 4 2 y=.726x+.9941 r=.866 2 4 6 8 45 3 y=.864x+.6551 r=.979 3 45 6 4 3 2 1 Basophil (Normal) y=.33x+1.43 r=.4665 1 2 3 4 1 5 Basophil (All) y=.7449x+1.64 r=.2269 P =.16 1 2 3 4 5 Fig. 1. (Continued) 4) 유핵적혈구계산의정확성평가 Pentra DX 12 에서유핵적혈구를검출하고정량적으로보고할수있는데, 비정상검체 1 개를대상으로유핵적혈구감별계산력을수기법과비교하였다. 유핵적혈구의계산은백혈구 1 개에대해관찰되는수로표시하였다. 5) Fl ag 의유용성평가자동혈구분석기에서는비정상적인결과를보이는경우경고메시지를보고함으로써, 검사자로하여금추가검사를결정하도록하고있는데, 이러한 flag 가수기법을이용한슬라이드재검의기준이된다. 따라서백혈구감별계산에있어 flag 의유용성을검증하고자하였다. Pentra DX 12 에서는미성숙백혈구존재시 LIC flag 가발생하고비정형림프구가존재하는경우 ALY flag가발생하게되는데, LIC flag 와 ALY flag 가각각미성숙백혈구와비정형림프구의존재를진단하는데있어유용성을평가하고자하였다. 이와더불어 ERB 가 >2/1WBCs 이상으로보고되는경우의유핵적혈구존재에대한경고로서의유용성을평가하고자하였다. Flag 의유용성은 1 개의비정상검체에대해미성숙백혈구감별계산결과를수기법과비교 하고, 각 flag 의민감도, 특이도, 양성및음성예측도와효율성을구하였다. 3. 통계분석통계분석은 MedCalc, version 9.4.2. (MedCalc Software, Mariakerke, Belgium) 을이용하였다. 상관성검증을위해서는 Pearson 상관계수 (r) 을구하였으며, P값이.5 미만인경우통계적으로유효한것으로간주하였다. 결과 1. 정밀도백혈구감별계산의검사내변이계수와전체변이계수는 Table 2와같다. 호중구와림프구는변이계수가.6~ 4.1% 로양호한값을보였으며, 호산구, 호염기구의경우 3.5~.% 범위였는데, 대조물질내비율이높을수록변이계수가낮은경향을보였다. 단구의변이계수가높게관

254 이영경 강희정 김영민 원철연 조현찬 Table 4. Comparison of differential count on the Pentra DX 12 with manual count in the cases diagnosed as AML, M4 or M5 according to FAB classification Manual count (%) Pentra DX 12 (%) Monoblast Monocyte Imm G IMM Monocyte IMG IML Case 1 9. 31.8.3 8.5 41.2 2.3.4 Case 2 68.8 6.5 2.1 39. 24.2 11. 1.1 Case 3 4.8 69.8.3 3.2 42.2 1.3 2.6 Case 4 12.8 49.8. 8. 48.3 1.4.3 Case 5 1.8 61.8. 1. 51.7 1.6.4 Case 6 67.8 1.8 11.5 22.6 25.1 13.7 1.1 Abbreviation: Imm G, immature granulocyte. Table 5. Comparison of differential count on the Pentra DX 12 with manual count in the cases diagnosed as acute lymphoblastic leukemia or chronic lymphocytic leukemia Manual count (%) Pentra DX 12 (%) Lymphoblast A Lym IML ALY Lymphocyte Monocyte Case 1 95.8. 1.4 11.4 14.2 46.8 Case 2 22.3 7.5 1.6 27.3 18.3 43. Case 3 97.8 *.3 3.3 19.4 14.2 5.2 * Abnormal lymphocytes of chronic lymphocytic leukemia. Abbreviation: A Lym, atypical lymphocyte. 찰되었는데, 대조물질의단구비율이.1~.5% 로매우낮은값을보인것이원인일것으로판단되었다. 유핵적혈구의경우검사내및전체변이계수가 4.6~19.8% 범위였는데역시백혈구수및유핵적혈구의비율이높을수록변이계수가낮게관찰되는경향을보였다 (Table 3). 2. 5종백혈구감별계산의정확성평가 (Fig. 1) Pentra DX 12 으로시행한 5종백혈구감별계산의정확성참고방법인수기법을이용한백혈구감별계산법과비교한결과상관계수가호중구는.9414, 림프구는.9635, 단구는.784, 호산구는.979 으로매우양호한값을보였으며 (P<.1), 호염기구는상관계수가.2269였다 (P=.16). 정상검체만을대상으로하여 Pentra DX 12 과수기법의백혈구감별계산을비교하였을때는호중구는.9531, 림프구는.949, 단구는.772, 호산구는.866, 호염기구는.4665였다. 3. 미성숙백혈구및비정형림프구감별계산능력평가 Pentra DX 12 에서미성숙과립구는 IMG 로보고되는데, IMG 값과수기법으로산정한미성숙과립구의값을비교해보았다. 미성숙과립구에골수아구, 전골수구, 골수구, 후골수구, 간상호중구를포함하여계산하였을때상관계수는.83 였고, 간상호중구를제외하고계산하였을때는상관계수가.8419 로간상호중구를제외한경우 Pentra DX 12 결과와수기법결과가더잘일치하는경향을보였다 (Fig. 2). 단구나림프구의경우미성숙세포가관찰되는증례수도작고, 미성숙단계의세포를수기법으로감별하는것이어려워상관관계를분석하는것이어려웠다. 비정상검체중 6 례는 French-American-British criteria (FAB) 분류상급성골수구성백혈병 (Acute myelogenous leukemia, AML), M4나 AML, M5 로진단받은환자들의검체였는데, 이경우 Pentra DX 12 에서 IMM이증가되어있었지만, 결과값은수기법과차이를보였다 (Table 4). 급성림프구성백혈병으로진단받은 2 례와만성림프구성백혈병으로진단받은 1 례의경우 Pentra DX 12 에서 IML 의증가되지않고, 비정형림프구로계산되는경향을보였다 (Table 5).

ABX Pentra DX 12 for the Detection of Immature Cells 255 2 IMG (DX) vs. Immature granulocytes with band form (Manual) 2 IMG (DX) vs. Immature granulocytes without band form (Manual) Pentra DX 12 (%) 1 5 y=.2486x+.62 r=.83 3 45 6 Pentra DX 12 (%) 1 5 y=.3545x+1.2265 r=.849 3 45 6 ALY (DX) vs. Atypical lymphocytes (Manual) Pentra DX 12 (%) 3 23 8 y=.5362x+1.7219 r=.562 8 23 3 Fig. 2. Comparison of IMG and atypical lymphocytes on the Pentra DX 12 double matrix with manual count in patient group (n=1). ERB (DX) vs. Erythroblasts (Manual) 비정형림프구의계산에있어서 Pentra DX 12 과수기법의상관관계는상관계수가.562 로비교적양호한값을 보였다 (Fig. 2). Pentra DX 12 (%) 2 1 5 y=.486x+1.2218 r=.8144 4. 유핵적혈구계산의정확성평가유핵적혈구계산에있어 Pentra DX 12 를이용하여측정된값과수기법으로계산된값의상관계수는.8144 로양호한결과를보였다 (Fig. 3). 5. Flag 의유용성평가 1 2 3 4 Fig. 3. Comparison of erythroblasts on the Pentra DX 12 with manual count in patient group (n=1). Pentra DX 12 에서보고되는 LIC, ALY flag 와 ERB>2/1WBCs 로보고되는경우의유용성을평가한결과는 Table 6과같았다. LIC flag 의경우간상호중구를포함한미성숙백혈구의존재를진단하는데있어양성예측율은 89.6%, 음성예

256 이영경 강희정 김영민 원철연 조현찬 Table 6. The efficiency of the Pentra DX 12 flagging system for finding abnormal samples Pentra Dx 12 Flag LIC LIC ALY ERB >2/1WBCs Manual count Immature cells (with band form) > 2% Immature cells (without band form) > 2% Atypical lymphocytes + lymphoblasts >2% Erythroblasts >2/1WBCs True positive 6 42 12 True negative 24 32 65 67 False positive 7 25 2 17 False negative 9 1 4 PPV 89.6% 62.7% 42.9% 41.4% NPV 72.7% 97.% 1.% 94.4% Sensitivity 87.% 97.7% 1.% 75.% Specificity 77.4% 56.1% 76.5% 79.8% Efficiency 84.% 74.% 8.% 79.% Abbreviations: PPV, positive predictive value; NPV, negative predictive value. 측율은 72.7% 였으며효율성은 84.% 였고, 간상호중구를제외할경우양성예측율은 62.7% 로감소하였으나, 음성예측율은 97.% 로증가하였고, 이때효율성은 74.% 였다. LIC flag 는간상호중구가증가된경우를대개양성으로보고하는경향을보였는데, 간상호중구가 2% 이상증가된경우 26례중 18례에서 LIC flag 가양성을보였다. ALY flag 의경우비정형림프구과림프아구의존재를진단하는데있어효율성은 8% 로음성예측율이 1% 였으며, 양성예측율은 42.9% 로낮았는데, 주로림프구나단구가증가된경우위양성의빈도가높았다. 그외에유핵적혈구가증가된경우나, LIC flag 와함께관찰된경우가있었다. 호중구감소증이있는경우에도 ALY flag 가위양성으로보고되는경우가많았는데, 호중구감소증이있는 5례모두 ALY flag 나 LIC flag 가양성으로나왔고, 이중 LIC flag 가있는 1례만이일치하는소견이었다. 그리고, ERB>2/1WBCs 로보고된경우수기법에서유핵적혈구가 >2/1WBCs 존재하는것을진단하는데있어양성예측율은 41.4% 였으며음성예측율은 94.4% 였고, 효율성은 79.% 였다. 수기법에서유핵적혈구가 >2/ 1WBCs 인 16례중에서 4례에서 ERB 위음성을보였는데, 수기법에서유핵적혈구 2~3/1WBCs 범위에있는 5례중 4례가위음성을보인경우에해당하며수기법에서 >3/1WBCs 의값을보인경우는모두 Pentra DX 12 에서 >2/1WBCs 로보고되어위음성이없었다. 고찰 Pentra DX 12 은기존의백혈구감별계산에있어정 밀도와수기법과의상관성모두우수한결과를보였다. 제조사에서제안하는정밀도의 CV 값은호중구가 <3%, 림프구가 5%, 단구가 <1%, 호산구가 <%, 호염기구가 <2% 였는데, 단구를제외하고모두제조사에서제안하는기준치이하의 CV 값을보였으며, 현재흔히사용되고있는다른자동혈구계산기와비슷한수준이었다 [1,7]. 대조물질의농도가높을수록 CV 값은낮아지는경향을보였으며, 단구의경우 CV 값이높게나왔으나, 이는대조물질의단구농도가지나치게낮은것이원인으로여겨진다. 수기법과의비교에서도호중구, 림프구, 호산구에서는상관계수가.85 이상으로우수한결과를보였고, 단구의경우에도양호한결과를보였다. 최근들어자동혈구분석기는기존의일반혈액검사항목외에여러가지변수들을추가적으로보고함으로써검사실에서슬라이드재검율을낮추고, 혈액질환의진단에보조적인역할을하고있다 [3,8,9]. Pentra DX 12 는기존의백혈구감별계산과더불어미성숙백혈구를검출하고, 이를아형에따라과립구계 (IMG), 림프구계 (IML), 및단구계 (IMM) 로구분하여감별계산하고그결과를정량적으로보고함으로써백혈병등의진단에보조적으로도이용될수있는가능성을제시하고있다. 지금까지는백혈구감별계산결과가이상하거나, flag 가보여말초혈액에서미성숙백혈구의존재가의심되는경우말초혈액도말슬라이드를이용해서일일이확인을해야하였는데, 자동혈구계산기가미성숙백혈구의존재를알려주고, 감별계산까지보고한다면슬라이드재검율도낮추고, 보다정확한검사결과를보고할수있을것이다. 본연구에서는미성숙백혈구에해당하는각변수의정확도를수기법과비교해본결과 IMG 의경우수기법으로

ABX Pentra DX 12 for the Detection of Immature Cells 257 관찰되는미성숙과립구의비율과비교적잘일치하는소견을보였는데, 수기법에서간상호중구를포함한경우보다간상호중구를제외한경우더잘일치하는경향을보였다. 제조사에서도 IMG 검출범위를간상호중구를제외한후골수구이전단계로제시하고있어이와일치하는소견으로생각되었다. IMM 이나 IML 의경우각각해당계열의아구와전단구및전림프구를검출한다고제시하고있는데, 실제로감염등의질환에서반응성으로단구나림프구가증가한경우상당수의전단구, 전림프구가말초혈액에출현할것이나수기법으로도이런단계의세포를감별하는것이쉽지않아 IMM이나 IML 의정확도를평가하는것은어려웠다. 본연구에서백혈병으로확진받은증례에서 Pentra DX 12 의결과를분석한결과에서는 FAB 분류상 AML, M4 나 AML, M5 로진단받은증례에서 IMM 이증가되어있어, 아구의계열을짐작하는데도움이될것으로생각되었으며, 급성림프아구성백혈병이나만성림프구성백혈병의경우 IML 보다는 ALY 로계산되는경향을보였다. 이러한결과를종합할때 Pentra DX 12 의미성숙세포와비정형림프구에대한감별계산값은말초혈액에존재하는미성숙세포의계열을추정하는데보조적인방법으로사용될수있을것으로기대되며, 향후 IMM 이나 IML 의정확도에관해서는추가적인연구가필요할것으로판단된다. 유핵적혈구검출에있어수기법의상관계수는.8144 였는데, 본연구에대상이된환자군 1 명에서유핵적혈구의분포는수기법으로 ~39.3/1WBCs 로말초혈액에존재하는호중구나림프구에비해낮은범위임을고려할때양호한값으로생각된다. 다른연구들에서백혈구와마찬가지로유핵적혈구의감별계산에있어서도말초혈액내비율이높을수록상관계수가높게관찰되는데, 말초혈액내의비율이낮을수록다른변수의영향이크게작용해평가분석을어렵게할가능성이있을것으로지적되고있다 [1, 11]. 자동혈구분석기는비정상세포의출현시 flag 를표시하게되는데정확한 flag 시스템은말초혈액도말의재검율을감소시킬수있다. Pentra DX 12 는미성숙백혈구출현시 LIC flag 를, 비정형림프구출현시 ALY flag 를보고하고, 유핵적혈구의경우 flag 로나타내지않고, 직접측정하고비율이보고되기때문에 >2/1WBCs 를슬라이드재검기준으로이용할수있어이들에대한유용성을평가해본결과, 세가지 flag 모두민감도면에서는양호한결과를보였으며, 더욱이 LIC 가간상호중구를제외한미성숙과립구의존재를예측하는경우나, ALY flag 의경우거의 1% 에가까운민감도를보여비정상검체를간과할확률은낮을것으로판단되었다. 유핵적혈구의존재를예측하는데있어서도, 민감도가 75% 였으나, 위음성이모두수기법에서유핵적혈구의수가 2~3/1WBCs 로낮은값을보이는경우여서유핵적혈구의존재를예측하는데있어서도 위음성이크게문제가되지는않을것으로생각된다. 그러나, 위양성의경우검사실에서는불필요하게많은슬라이드를재검해야하기때문에업무의부담이많아질수있다. ALY flag 의경우양성예측도가 42.9% 로림프구나단구가증가된경우에위양성이자주관찰되었는데, 림프구가증가되는경우광학현미경상에서관찰되지않는정도의세포변화가 ALY 로검출되었거나, 단구가증가된경우단구중일부가 ALY 로혼동되었을가능성이있을것으로생각된다. ERB>2/1WBCs 의경우역시양성예측도는 41.4% 로낮았는데, 림프구증가증이있거나비정형림프구가증가된경우에위양성이많았다. 기기에서유핵적혈구를측정할때유핵적혈구와백혈구가크기에따라구분이되는데이때작은림프구일부가유핵적혈구로오인되었을가능성이있어보였다. 따라서 flag 에따라슬라이드재검여부를결정할때이들위양성요인들을고려하는것이도움이될것으로판단된다. 그리고, flag 의효율성이나양성및음성예측도는자동혈구분석기자체의검출력외에도기기의 flag 설정기준, 그리고, 조사대상이되는환자군의분포에따라차이를보이고있어슬라이드재검기준을설정할때검사실마다각 flag 의특성을고려함으로써보다효율적으로이용할수있을것이다 [12, 13]. 본연구결과를고려할때, LIC flag 는민감도나양성예측도가높고, ALY flag 의경우에도위양성의대부분이림프구증가증이나, 다른이상소견을동반하고있는예가많아 LIC 나 ALY flag 가관찰되는경우슬라이드재검을시행하는것이적절할것으로판단된다. ERB>2/ 1WBCs 의경우에는림프구수를고려하여슬라이드재검여부를결정함으로써불필요한슬라이드재검을줄이는데도움이될것이다. Pentra DX 12 의 double matrix 를이용한백혈구감별계산은기존의 5종백혈구감별계산에있어정밀도나수기법과의상관성에있어양호한결과를보였다. 미성숙세포의감별계산에서미성숙과립구를검출하는데있어 IMG 는수기법과양호한상관성을보여유용한지표로사용될수있는가능성을시사하였다. 미성숙세포에대한 flag 역시양호한결과를보였으며, 유핵적혈구의경우 ERB>3/1 WBCs 으로증가한경우의검출에있어상당히민감한것으로평가되었다. 요약배경 : ABX Pentra DX 12 (Pentra DX 12, ABX Diagnostics, Montpellier, France) 은백혈구감별계산과유핵적혈구측정을위해새로운기법을도입하였다. Double matrix 는기존의 5종백혈구감별계산에추가적으로미성숙세포 (LIC), 미성숙과립구 (IMG), 미성숙단구 (IMM), 미성숙림프구 (IML), 비정형림프구 (ALY) 를구

258 이영경 강희정 김영민 원철연 조현찬 분하여측정할수있으며, 형광법을이용하여유핵적혈구 (ERB) 의측정이가능케하였다. 본연구에서저자들은백혈구감별계산과유핵적혈구측정에있어 Pentra DX 12 의유용성을평가하고자하였다. 방법 : 세가지농도의대조물질을이용하여민감도를측정하였다. 상관성분석은 1 개의정상검체와 1 개의비정상검체를포함한 2 검체를대상으로하였다. 5종백혈구감별계산과, LIC, IMG, IMM, IML, ALY, ERB 항목을평가하고자하였으며, 각각의변수는참고방법인수기감별계산의결과와비교하여분석하였다. 결과 : 정밀도분석에서변이계수 (CV) 는호중구와림프구에서는 <5% 였고, 호산구와호염기구에서는 <% 였으며, 유핵적혈구에서는 <7% 였다. 상관계수 (r) 는단구와호염기구를제외하고는모두 >.9 였다. IMG, ALY, ERB 도수기계산과양호한상관관계를보였다 ( 각각 r=.83,.562,.8144). 각 flag의효율성은 LIC 가 84%, ALY 가 8%, ERB 의증가 (>2/1WBCs) 가 78.% 였다. 결론 : Pentra DX 12 의백혈구감별계산은신뢰할만한결과를보였으며, IMG나 ALY, ERB 결과도수기법과양호한상관관계를보였다. 그리고, 각 flag 는비정상세포를검출하는데유용한결과를보였다. Pentra DX 12 의 double matrix 와유핵적혈구계산은슬라이드재검율을낮추고일상검사실의효율성을높이는데도움이될것으로기대된다. 참고문헌 1. 박윤희, 송재우, 송성욱, 송경순, 안미숙, 양미숙등. 자동혈구분석기 Cell-Dyn Sapphire의평가. 대한진단검사의학회지 27;27:162-8. 2. Ward PC. The CBC at the turn of the millennium: an overview. Clin Chem 2;46:12-2. 3. Field D, Taube E, Heumann S. Performance evaluation of the immature granulocyte parameter on the Sysmex XE-21 automated hematology analyzer. Lab Hematol 26;12:11-4. 4. Lee LG, Chen CH, Chiu LA. Thiazole orange: a new dye for reticulocyte analysis. Cytometry 1986;7:58-17. 5. Clinical and laboratory standards institute. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement methods; Approved guideline. 2nd ed. CLSI document EP5-A2. Pennsylvania: Clinical and laboratory standards institute, 24;24:1-39. 6. Clinical and laboratory standards institute. Reference leukocyte (WBC) differential count (proportional) and evaluation of instrumental methods; Approved standard. 2nd ed. CLSI document H2-A2. Pennsylvania: Clinical and laboratory standards institute, 27;27:1-63. 7. Johnson M, Samuels C, Jozsa N, Gorney K. Three-Way Evaluation of High-Throughput Hematology Analyzers Beckman Coulter LH 75, Abbott Cell-Dyn 4, and Sysmex XE-21. Lab Hematol 22;8:23-38. 8. Ervasti M, Kotisaari S, Heinonen S, Punnonen K. Use of advanced red blood cell and reticulocyte indices improves the accuracy in diagnosing iron deficiency in pregnant women at term. Eur J Haematol 27;79:539-45. 9. Lee JL, Kim SB, Lee GW, Ryu MH, Kim EK, Kim S, et al. Clinical usefulness of the hematopoietic progenitor cell counts in predicting the optimal timing of peripheral blood stem cell harvest. J Korean Med Sci 23;18:27-35. 1. Swaim WR. Laboratory and clinical evaluation of white blood cell differential counts. Comparison of the Coulter VCS, Technicon H-1, and 8-cell manual method. Am J Clin Pathol 1991;95:381-8. 11. Gulati G, Behling E, Kocher W, Schwarting R. An evaluation of the performance of Sysmex XE-21 in enumerating nucleated red cells in peripheral blood. Arch Pathol Lab Med 27;131:177-83. 12. 송선미, 이성규, 박규은, 김선희, 오원일. 자동혈구분석기 Beckman Coulter GEN-S의평가. 대한진단검사의학회지 22;22:67-74. 13. Ruzicka K, Veitl M, Thalhammer-Scherrer R, Schwarzinger I. The new hematology analyzer Sysmex XE-21: performance evaluation of a novel white blood cell differential technology. Arch Pathol Lab Med 21;125:391-6.