대한생식의학회지 : 제 37 권제 1 호 2010 함춘여성크리닉 김현정 김충현 이중엽 권재희 황도영 김기철 * Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer Hyun Jung Kim, Chung Hyon Kim, Joong Yeup Lee, Jae Hee Kwon, Doyeong Hwang, Ki Chul Kim * Hamchoon Women's Clinic Objectives: Likewise fresh cycle, it is also important to select right blastocysts for transfer in purpose of improving the pregnancy and implantation rates in frozen-thawed embryo transfer (ET) cycles. To investigate the relationship between the developmental velocity at the time of cryopreservation and pregnancy rates, we compared pregnancy rates between the day 5 cryopreservation group and the day 6 cryopreservation group. Methods: Transfers of frozen-thawed blastocysts which had been cryopreserved by vitrification on day 5 or day 6 were performed between January 2006 and June 2007. Ethylene glycol, DMSO, and pull and cut straws were used for vitrification and artificial shrinkage was done in expanded blastocysts. Thawing was performed on the day before transfer and thawed blastocysts were cultured in for 15~18 hrs in Quinn's blastocyct media. Blastocyst survival was assessed before transfer and post-thaw survival was defined as >50% of cells remaining intact and blastocoele re-expansion by the time of transfer. Results: Transfers of thawed blastocyst had been cryopreserved on day 5 were 52 cycles and 41 transfer cycles were cryopreserved on day 6. Patient characteristics, the number of transferred embryos and the survival rate of thawed blastocysts were not different in each cryopreservation day. But the biochemical pregnancy, clinical pregnancy, ongoing pregnancy, and implantation rate were significantly high in transfer of frozen-thawed blastocyst which were cryopreserved on day 5. Conclusions: The clinical pregnancy and implantation rate of day-5 blastocyst showed significantly higher than those of day-6 blastocyst in frozen-et cycles. This result indicated that developmental rate of blastocyst at cryopreservation time in frozen-thawed cycle is discriminative marker of pregnancy outcome as like in fresh cycle. [Korean. J. Reprod. Med. 2010; 37(1): 57-64.] Key Words: Frozen-thawed blastocyst, Cryopreservation day, Vitrification, Blastocyst transfer 포배이식은양질의배아를선택할수있는장점뿐아니라자궁내막과배아의발달상태가자연임신과동일하여착상율이높은것으로알려져있으며, 수정후 3일의초기배아를이식할때보 주관책임자 : 김기철, 우 ) 137-878 서울특별시서초구서초 1 동 1621-7, 함춘여성크리닉 Tel: (02) 522-0123, Fax: (02) 522-2388 e-mail: kck57@hamchoon.com 다적은수의배아를이식할수있어다태임신의위험성또한줄일수있다. 1 최근에는배아의배양조건과동결기술의발달로동결-해동한포배의이식이크게증가하였는데, 초기발달배아보다동결-해동시생존율도높고, 임신율또한높은것으로보고되고있다. 2~5 포배의이식은포배의발달정도에따라임신 - 57 -
대한생식의학회지 성공여부가결정되는데, 6 Khorram 등은수정후 5 일째포배로발달한배아의이식이 6일째포배로발달한배아의이식보다높은임신율및착상율을나타내었으며이는발달이빠른배아가착상력이더높을것이라는가능성을제시하였다. 7 또한 Shapiro 등도 5일째포배로발달한배아의이식에서 6일째포배로발달한배아이식보다두배가까이높은착상율과임신율을보고하였다. 8 하지만아직까지 6일째포배가 5일째포배보다생존력이떨어지고, 발달지연이생존력의저하를나타내는지에대해서는논란이있으며, 이러한발달속도의차이를임신결과를예측할수있는지표로활용할수있는지에대한연구또한부족한실정이다. 또한신선주기에서는수정후 5일과 6일의자궁내막의상태가동일하지않을수있으므로착상환경의변화또한고려하지않을수없다. 해동 -이식주기의경우배란후이식하는시기가동일하므로, 5일째포배로발달한배아와 6일째포배로발달한배아의해동-이식의임상적결과를좀더정확히비교할수있을것으로사료된다본연구에서는자궁내막의상태가배란후 5일로동일한해동-이식주기에있어서, 수정후 5일에포배로발달한배아를동결하여해동-이식한주기와, 6일에포배로발달한배아를동결하여해동-이식한주기의임신결과를비교하여동결시기가임신결과에미치는영향을확인하고, 이러한발달속도의차이를임신결과를예측할수있는지표로활용할수있는지확인하고자한다연구대상및방법 1. 연구대상본연구는 2006년 1월부터 12월까지본원에서시험관아기시술을받은환자중수정후 5일또는 6일에발달한잉여의포배를동결하여 2007년 6월까지해동-이식한환자 87명, 93주기를대상으로하였다. 이때 5일째포배와 6일째포배를한주기에같이융해하여이식한경우는제외하였다. 2. 과배란유도및난자채취과배란유도방법은 gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonist (Decapeptyl; Ferring, Germany) 를사용하여뇌하수체기능을억제하고 ( 장기요법또는초단기요법 ), recombinant FSH (Gonal F, Serono, Italy) 와 human menopausal gonadotropin (Menogon, Ferring, Germany) 을병합투여하여난소를과자극하였다. 초음파상으로 18 mm 이상의난포가최소한 3개이상일때, human chorionic gonadotropin (hcg; Pregnyl, Netherland) 10,000 IU를주사하였고, 36시간후에질식초음파를이용하여난자를채취하였다. 채취된난자는수정능력을획득할때까지 Quinn's advantage fertilization media (SAGE, CA, USA) 에서배양하였다. 3. 정자의분리및수정 80%, 40% PureCeption (SAGE, CA, USA) 으로농도구배를만든층에사정된정자를분주하여 450 g 에서 20분간원심분리하여모은하층액을 Quinn's sperm washing media (SAGE, CA, USA) 로 250 g에서 10분간세척한다음 37 배양기에서능동부유 (swim-up) 를시행하였다. 최종적으로수득한고활력정자를난자가있는배양액에첨가하여수정을유도하거나, 난구세포를제거한후직접주입하는난자세포질내정자주입술 (Intracytoplasmic sperm injection; ICSI) 을시행하였다. 4. 수정란의배양수정후 14~18시간에정상적인수정란을선별하여 2일까지는 Quinn's cleavage media (SAGE, CA, USA) 에서배양하였고, 3일부터 5일또는 6일까지는 Quinn's blastocyst media (SAGE, CA, USA) 에서배양하여포배발달을관찰하였다. 5. 동결및융해동결과융해는모두 20% human serum albumin (HSA) 이첨가된 PBS 용액을기본으로하여실온 - 58 -
제 37 권제 1 호, 2010 김현정 김충현 이중엽 권재희 황도영외 1 인 (25 ) 에서시행하였다. 1) 초자화동결 5일째또는 6일째관찰시초기포배 (early blastocyst) 이상으로발달한모든배아를초자화동결법으로동결하였으며, 팽창포배 (expanded blastocyst) 의경우에는 30 1/2 gauge 주사바늘로 artificial shrinkage를실시한다음동결하였다. 먼저 7.5% ethylene glycol과, 같은농도의 dimethylsurfoxide 혼합액에서 20분간전처리후, 15% ethylene glycol, 15% dimethylsurfoxide, 0.5 M sucrose 혼합액에서처리하고자체제작한 pull and cut (PNC) straw에점적후바로액체질소에침지하였다. 한 straw에는 3 개이하의배아를점적하도록하였고, 전처리과정후부터액체질소에침지하는과정까지는 1분내로이루어지도록하였다. 2) Pull and cut (PNC) straw 제작 0.25 ml straw 양끝을잡고알코올램프로가열하여가늘게뽑은뒤, 길이가 8~9.5 cm 되게면도날로가는부위를비스듬히잘라서 loading straw로사용한다. 새로운 0.25 ml straw를길이가 3~4 cm 되게자르고, 한쪽끝을열처리하여입구를막아서 cap으로사용한다. 3) 해동 Straw 를액체질소에서꺼내어손으로가볍게쥐어서따뜻하게한다음 straw cap을벗겨서포배를회수하고, 1 M sucrose 용액에서 1 분간, 0.5 M sucrose 용액에서 3분간, 마지막으로기본용액에서 5분간 2회처리하였다. 이때 1 M sucrose 용액과기본용액에서의처리과정은 37 에서시행하였고나머지과정은모두실온에서시행하였다. 동결포배의해동은이식하루전에시행하여 15~18시간정도 Quinn's blastocyst media (SAGE, CA, USA) 에서배양한후이식직전에생존여부를확인하였다. 6. 자궁내막의준비생리 2~3일째초음파검사를시행하여자궁내막이 5 mm 미만이고양측난소에별다른이상소견이없으면경구용에스트로겐 ( 프로기노바, 한국 쉐링 ) 6 mg을투여하였다. 다음초음파추적을생리 11~13일경에시행해서크고있는난포가없으면서자궁내막두께가 8 mm 이상이면 progesterone in oil ( 삼일제약 ) 1 cc를매일근육주사하도록하였다. 만일내막두께가기준에도달하지않은경우에는프로기노바의용량을 8 mg으로증량하고일주일뒤에초음파검사를재시행하였다. 프로게스테론투여 6일째배아이식을시행하였고, 이식후 9 일째혈액검사를통해서임신이확인되면경구용에스트로겐과프로게스트론투여를계속하였고태아심박동을확인한후임신 7주가되면별다른이상이없는한투여를중지하였다. 7. 이식및임신확인융해한포배는 50% 이상의세포가살아있고재팽창된경우에만생존한것으로판단하였다. 이식후 9일째혈청내 hcg 농도를측정하여양성수치일때를생화학적임신 (biochemical pregnancy) 으로, 4~5주후태낭 (gestational sac) 및심장박동태아 (fetal heart beat) 가관찰될때임상적임신 (clinical pregnancy), 임신이 24주이상진행되고있는환자를조사하여진행임신 (ongoing pregnancy) 으로판정하였으며, 동일환자가동결일이다른포배를같은주기에이식하는경우가있으므로, 위의임신율은융해주기에따른임신율과이식주기에따른임신율각각으로구분하였다. 그리고이식한포배의수중관찰된심장박동태아의수를착상율 (implantation rate) 로하였다. 8. 통계분석 Chi-square test와 Student t-test를이용하여통계분석하였고, p<0.05인경우를유의하다고판정하였다. 결과수정후 5일에포배로발달한배아의동결-해동이 52례, 6일에발달한포배의동결-해동이 41례였다. 이중이식까지진행된것이각각 48례와 35례 - 59 -
대한생식의학회지 Table 1. Patient demographic characteristics of each cryopreservation group D5 cryopreservation D6 cryopreservation p-value Thawing cycles 52 41 Transfer cycles 48 35 Maternal age (yr) 31.4±3.0 33.5±3.3 NS % ICSI 21.2 34.1 NS Infertility diagnosis % (n) Male factor 7.7% ( 4) 19.5% ( 8) NS Uterus 11.5% ( 6) 14.6% ( 6) NS Tubal 5.8% ( 3) 9.8% ( 4) NS Ovulatory 44.2% (23) 24.4% (10) <0.05 Unexplained 7.7% ( 4) 9.8% ( 4) NS Other * 28.8% (15) 22.0% ( 9) NS Mean no. of blastocysts transferred 3.3±1.4 2.2±1.1 NS Blastocysts expanded at the time of cryopreservation (%) 72.1 73.9 NS Survival rate (%) 80.8±29.4 65.2±35.8 NS NS: not significant Other: ovum donation, sperm donation, habitual abortion Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer. Korean J Reprod Med 2010. 였다. 환자의평균연령은 31.4±3.0세, 33.5±3.3세로유의한차이가없었다. 동결배아가유래한신선주기에서 ICSI를시행하였던비율은각각 21.2% 와 34.1% 로 6일째포배의동결-해동주기에서다소높았으나유의한차이는없었다. 불임원인중에서는배란장애가 5일째포배의동결-해동주기에서더많았다. 동결당시팽창포배의비율은각각 72.1% (145/201) 와 73.9% (82/111) 로유사하였다. 생존율은 5일째포배동결-해동주기에서 80.8± 29.4% 로 6일째포배동결해동주기의 65.2±35.8% 보다높았으나통계적으로유의한차이는없었다. 이식한포배의수는 5일째포배기동결-해동주기에서평균 3.3±1.4개로 6일째포배동결-해동주기의 2.2±1.1개보다다소많았으나유의한차이는없었다 (Table 1). 반면, 두그룹의해동주기에따른생화학적임 신율과이식주기에따른생화학적임신율은각각 38.5% 와 12.2%, 41.7% 와 14.3% 로 5일째포배동결 -해동주기에서유의하게높게나타났다 (Table 2, Figure 1). 임상적임신율도해동주기에따른임신율이각각 32.7% 와 12.2%, 이식주기에따른임신율이각각 35.4% 와 14.3% 로 5일째포배동결-해동주기에서 6일째포배동결-해동주기보다유의하게높은것으로나타났다 (Table 2, Figure 2). 진행임신율역시해동주기에따른임신율이각각 23.1% 와 7.3%, 이식주기에따른임신율이각각 25.0% 와 8.6% 로 5일째포배기동결-해동주기에서유의하게높은것으로나타났다. 착상율도각각 15.2% 와 6.3% 로 5일째포배동결-해동주기에서높게나타났다 (Table 2, Figure 3). - 60 -
제 37 권제 1 호, 2010 김현정 김충현 이중엽 권재희 황도영외 1 인 Table 2. Pregnancy outcomes of each cryopreservation group D5 cryopreservation (n=52) Thawing cycle D6 cryopreservation (n=41) p D5 cryopreservation (n=48) ET cycle D6 cryopreservation (n=35) Biochemical pregnancy rate (%) 38.5 12.2 <0.01 41.7 14.3 <0.01 Clinical pregnancy rate (%) 32.7 12.2 <0.05 35.4 14.3 <0.05 Ongoing pregnancy rate (%) 23.1 7.3 <0.05 25.6 8.6 <0.05 Implantation rate (%) ND ND ND 15.2 6.3 <0.05 ND: not detected Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer. Korean J Reprod Med 2010. p Figure 2. Clinical pregnancy rate of each cryopreservation group. Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst. Korean J Reprod Med 2009. Figure 1. Biohemical pregnancy rate of each cryopreservation group. (D5 group: Transfer of thawing blastocyst cryopreserved on Day 5, D6: group: Transfer of thawing blastocyst cryopreserved on Day 6). *p<0.01 Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer. Korean J Reprod Med 2010. 고 찰 본연구에서는신선주기에서와마찬가지로 8 해 Figure 2. Clinical pregnancy rate of each cryopreservation group. *p<0.05 Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer. Korean J Reprod Med 2010. 동-이식주기에서도수정후 5일째포배로발달한배아가 6일째포배로발달한배아보다임신율이 2배이상높았다. 해동-포배이식주기에서는자궁내막의상태가배란후 5일째로모두동일하기때문에, 이러한임신율의차이는자궁내막의착상환경의변화보다는배아의발달속도가임신율에영향을준다고할수있다. 즉수정후 6일째가되 - 61 -
대한생식의학회지 난자내재배열되는위치와세포막의파열양상이배아의발달률에영향을미칠수있다는보고 11 와같이 ICSI 자체가배아발달에영향을줄가능성이있으므로, 향후 ICSI에서유래한 5일째와 6일째포배의해동-이식주기의임신결과를비교연구하는것도필요하리라사료된다. 인간포배에서임신성공을예측할수있는지표로는형태적인지표들이보편적으로사용되지만, 12~17 그외에배양액내포도당의흡수량을비침습 Figure 3. Ongoing pregnancy and implantation rate of each cryopreservation group. *p<0.05 Hyun Jung Kim. Effect of Cryopreservation Day on Pregnancy Outcomes in Frozen-thawed Blastocyst Transfer. Korean J Reprod Med 2010. 서야포배로발달하는것은지연된배아발달을하고있으며이것은배아의질이낮음을의미한다. 이와같은결과는포배이식시, 하루늦게포배로발달한배아의임신율이정상발달을한배아의임신율의 1/2 밖에되지않는다는 Shapiro 등의보고 9 와일치한다. 또한 5일째 1개또는 2개의최상급배아를이식했을때와최상급배아없이이식했을때임신율의차이는신선주기에서 5일째또는 6일째포배기배아를이식했을때의임신율차이와유사하였다. 9,10 이는포배의발달속도의차이와질의차이와의상관관계를뒷받침하는결과로서, 배아의발달속도가임신율을예측할수있는중요한지표임을시사한다. 두그룹의환자특성을비교해보면대부분차이가없으나, 불임의원인중 5일째포배의해동주기에서배란장애가차지하는비율이 44.2% 로 6일째포배의해동주기의 24.4% 보다높았다. 그리고 6일째동결배아가 5일째동결배아보다 ICSI를시행한비율이통계적으로유의하지는않지만다소높았다 (34.1% vs. 21.2%). ICSI 시술시정자가 적으로측정하는등생화학적인지표도있다. 18,19 Balaban 등은인간포배내일부내세포괴퇴화의징후가착상율감소를예측한다고보고하였고, 12 Scott 등은발달초기접합자의전핵모양에따라높은착상능력을가진포배를선별할수있다고하였다. 13 또한 Lane 등은생쥐배아에서, 세포의수 ( 특히내세포괴의세포수 ) 가생존력의중요한지표가된다고보고하였다. 14 Dokras와 Gardner 등이각각제시한포배의등급화체계는높은착상능력을가진포배를선별하는보다구체적인방법으로이용되고있다. 15~17 Gardner의포배의등급화체계에서는, 우선포배의크기로 1부터 6까지등급화하고, 이를다시내세포괴및영양배엽의발달에따라서각각 A에서 C까지등급화였다. Gardner의등급화에따르면 3AA 이상등급은임신성공의좋은지표가되며, 3AA 이상의포배를하나이상포함해서이식한경우, 그렇지않은경우에비해서 2배이상의높은임신율을나타내었다. 16,17 신선주기와비교하여해동-이식주기에서의포배선별에대한연구는많이부족한실정이다. 해동후 2~4시간내에포배강의 50% 이상이재팽창되는포배가그렇지않은포배보다임신율및착상율이 2배이상높았다는보고와, 20 Desai의단일해동배아이식보고등에서는 21 해동포배의 " 빠른재팽창 " 이포배선별의중요한형태적지표가됨을제시하고있다. 본연구에서는 5일째포배로발달한배아가 6일째포배로발달한배아보다동결후해동-이식했을때임신율및착상율이 2배이상높은것을확인함으로써, Shapiro 등이신 - 62 -
제 37 권제 1 호, 2010 김현정 김충현 이중엽 권재희 황도영외 1 인 선주기에서밝힌바와같이해동-이식주기에서도포배의발달속도가임신성공을예측할수있는중요한지표가될수있음을재확인하였다. 동결시기에더하여향후동결당시포배의등급에따른임신율을함께조사한다면보다정확한지표를얻을수있을것으로사료된다. 최근에는이식하는배아의수를제한하는등이식배아의수를최소화하는추세이다. 따라서잉여배아의동결이많아져서해동-이식주기또한증가할것으로예상된다. 신선주기뿐만아니라해동-이식주기에서도질좋은배아를선별하는것은임신성공여부를결정하는아주중요한과제이며, 본연구와같이동결시기가 6일째보다는 5 일째인포배로의발달이빠른것을우선으로해동 -이식할때더좋은임신결과를기대할수있을것이다. 이와함께, 포배를구성하는내세포괴, 영양배엽및그외다른필요한요소들을종합화하여보다구체적인해동-이식주기의포배선별방법을제시하는연구가필요할것이다. 결론적으로포배의해동-이식주기에서동결시기는임신결과를예측할수있는중요한지표로활용될수있다. 즉동결당시신선주기에서의배아의발달속도가동결-해동이식성공의중요한열쇠가되므로좋은포배를동결할수있는배양조건및기술의개발에도끊임없는노력이필요할것이라사료된다. 참고문헌 1. Gardner DK, Vella P, Lane M, Wagley L, Schlenker T, Schoolcraft WB. Culture and transfer of human blastocysts increases implantation rates and reduces the need for multiple embryo transfers. Fertil Steril 1998; 69: 84-8. 2. Yokota Y, Sato S, Yokota M, Ishikawa Y, Makita M, Asada T, Araki Y. Successful pregnancy following blastocyst vitrification. Hum Reprod 2000; 15: 1802-3. 3. Mukaida T, Nakamura S, Tomiyama T, Wada S, Kasai M, Takahashi K. Successful birth after transfer of vitrified human blastocyst with use of a cryo-loop containerless technique. Fertil Steril 2001; 76: 618-20. 4. Cho HJ, Son WY, Yoon SH, Lee SW, Lim JH. An improved protocol for dilution of cryoprotectant from vitrified human blastosyst. Hum Reprod 2002; 17: 2419-22. 5. Son WY, Yoon SH, Lee SM, Lim JH. Pregnancy outcome following transfer of human blastocysts vitrified on electron microscopy grids after induced collapse of the blastocele. Hum Reprod 2003; 18: 137-9. 6. Alves da Motta EL, Alergretti JR, Baracat EC, Olive D, Serafini PC. High implantation and pregnancy rates with transfer of human blastocysts developed in preimplantation stage one and blastocyst media. Fetil Steril 1998; 70: 659-63. 7. Khorram O, Shapiro SS, Jones JM. Transfer of nonassisted hatched and hatching human blastocysts after in vitro fertilization. Fertil Steril 2000; 74: 163-5. 8. Shapiro BS, Richter KS, Harris DC, Daneshmand ST. A comparison of day 5 and day 6 blastocyst transfers. Fertili Steril 2001; 75: 1126-30. 9. Shapiro BS, Harris DC, Richter KS. Predictive value of 72-hour blastomere cell number on blastocyst development and success of subsequent transfer based on the degree of blastocyst development. Fertili Steril 2000; 73: 582-6. 10. Huisman GJ, Fauser BC, Eijkemans MJ, Pieters MH. Implantation rates after in vitro fertilization and transfer of a maximum of two embryos that have undergone three to five days of culture. Fertili Steril 2000; 73: 117-22. 11. Nagy ZP, Liu J, Joris G, Bocken G, Desmet B, Vankelecom A, et al. The influence of the site of sperm deposition and mode of oolemma breakage at intracytoplasmic sperm injection on fertilization and embryo development rates. Hum Reprod 1995; 10: 3171-777. 12. Balaban B, Urman B, Sertac A, Alatas C, Alsoy S, Mercan R. Blastocyst quality affects the success of blastocyst-stage embryo transfer. Fertili Steril 2000; 74: 282-7. 13. Scott L, Alvero R, Leondires M, Miller B. The morphology of human pronuclear embryos is positively related to blastocyst development and implantation. Hum Reprod 2000; 15: 2394-403. 14. Lane M, Gardner D. Differential regulation of mouse embryo development and viability by amino acids. J Reprod Fertil 1997; 109: 153-64. 15. Dokras A, Sargent IL, Barlow DH. Human blastocyst grading: an indicator of developmental potential? Hum Reprod 1993; - 63 -
대한생식의학회지 8: 2119-27. 16. Gardner DK, Lane M, Stevens J, Schlenker T, Schoolcraft WB. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer. Fertil Steril 2000; 73: 1155-8. 17. Balaban B, Yakin K, Urman B. Randomized comparison of two different blastocyst grading systems. Fertil Steril 2006; 85: 559-63. 18. Renard J, Philippon A, Menezo Y. In-vitro uptake of glucose by bovine blastocysts. J Reprod Fertil 1980; 58: 161-4. 19. Gardner DK, Leese HJ, Assessment of embryo viability prior to transfer by the noninvasive measurement of glucose uptake. J Exp Zool 1987; 242: 103-5. 20. Shu Y, Watt J, Gebhardt J, Dasig J, Appling J, Behr B. The value of fast blastocoele re-expansion in the selection of a viable thawed blastocyst for transfer. Fertil Steril 2009; 91: 401-6. 21. Desai N, Goldfarb J. Examination of frozen cycles with replacement of a single thawed blastocyst. Reprod Biomed Online 2005; 11: 349-54. = 국문초록 = 목적 : 배양환경과동결기술이발달함에따라동결포배의해동-이식의빈도가증가하고있으며, 신선주기와마찬가지로해동-이식주기에서도질좋은배아를선별하는것은임신성공여부를결정하는아주중요한과제이다. 본연구는동결당시포배로의발달속도가임신결과에미치는영향을알아보기위하여, 수정후 5일및 6일째동결한포배의해동-이식후임신율을비교분석하였다. 연구방법 : 2006년 1월부터 12월까지 5일째또는 6일째동결한포배를해동하여 2007년 6월까지융해이식한 87명, 93 주기를대상으로하였다. 동결법은 ethylene glycol과 DMSO를이용한유리화동결법을이용하였으며, 팽창포배는인위적인수축을시행후동결하였다. 해동과정은이식전날시행하여 15~18시간배양액에서배양후재팽창여부를확인하였다. 결과 : 5일째동결한포배를해동-이식한 52주기와 6일째동결한포배를해동-이식한 41주기에서환자의나이, 이식한배아의수, 해동배아의생존율등임신결과에영향을미칠만한요인들의차이는없었다. 그러나생화학적임신율, 임상적임신율, 진행임신율, 착상율등은 5일째동결한포배를해동-이식한주기에서높게나타났다. 결론 : 5일째동결한포배를해동-이식했을때의임신율은 6일째동결한포배를해동-이식했을때의임신율보다 2배이상높았으며, 이는신선주기와마찬가지로해동-이식주기에서도동결전배아의발달속도의차이를임신성공예측의중요한지표로사용할수있음을시사한다. 중심단어 : 해동-이식, 동결일, 유리화동결법 - 64 -