(19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 10-2008-0043775 (43) 공개일자 2008년05월19일 (51) Int. Cl. C12N 15/81 (2006.01) (21) 출원번호 10-2008-7003088 (22) 출원일자 2008 년 02 월 05 일 심사청구일자 없음 번역문제출일자 2008 년 02 월 05 일 (86) 국제출원번호 PCT/US2006/026710 국제출원일자 2006 년 07 월 10 일 (87) 국제공개번호 WO 2007/008780 국제공개일자 (30) 우선권주장 2007 년 01 월 18 일 60/698,381 2005 년 07 월 11 일미국 (US) 전체청구항수 : 총 66 항 (71) 출원인 글로브이뮨 미국콜로라도 80027 루이스빌인피니트드라이브 1450 (72) 발명자 아펠리언, 데이비드 미국콜로라도 80209 덴버아파트먼트 1 사우스펄스트리트 850 프란주소프, 알렉스 미국콜로라도 80218 덴버오그덴스트리트 860 로델, 티모시, 씨. 미국콜로라도 81612 아스펜피. 오. 박스 8005 미드랜드애비뉴 201 (74) 대리인 (54) 표적치료용회피돌연변이체에대한면역반응의유발방법및조성물 (57) 요약 박종혁, 김정욱, 정삼영, 송봉식 본발명은치료제또는예방제에반응하여발생한변이폴리펩타이드와결합한세포, 벡터및바이러스 ; 이러한세포, 벡터및바이러스를포함하는조성물및변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키는용도로이들을사용하는방법을제공한다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. - 1 -
특허청구의범위청구항 1 하기의것들을하나이상포함하는조성물로서 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합하는효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것인조성물. 청구항 2 제1항에있어서, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획인것을특징으로하는조성물. 청구항 3 제1항또는제2항에있어서, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 스키조싸카로마이세스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택된효모로부터획득하는것을특징으로하는조성물. 청구항 4 제1항내지제3항중어느한항에있어서, 상기효모운반체는싸카로마이세스세레비시아로부터획득하는것을특징으로하는조성물. 청구항 5 제1항내지제4항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 2 이상의에피토프를포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 6 제1항내지제5항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는하나이상의돌연변이를포함하는 2 이상의에피토프를포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 7 제1항내지제6항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 RNA 또는 DNA바이러스를암호화하는것을특징으로하는조성물. 청구항 8 제1항내지제7항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는레트로바이러스, 플라비바이러스, 레오바이러스, 피코르나바이러스, 코로나바이러스, 필로바이러스, 라브도바이러스, 분야바이러스, 오르소마이옥스바이러스, 파라마이옥스바이러스, 아레나바이러스, 칼리씨바이러스, 헤파드나바이러스, 헤르페스바이러스, 폭스바이러스, 아데노바이러스, 파르보바이러스또는파포바바이러스 - 2 -
에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 9 제1항내지제8항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HIV, HBV 또는 HCV에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 10 제1항내지제9항중어느한항에있어서, 상기약제는알타자나비르, 사퀴나비르, 라미부딘, 디다노신, 엠브리시타빈, 지도부딘, 스타부딘, 잘시타빈, 아바카비르, 테노포비르, 네비라핀, 데라비르딘, 이파비르엔즈, 인디나비르, 리토나비르, 넬피나비르, 앰프레나비르, 로피나비르, 엔푸비르타이드, 엔테카비르, 아데포비르, 팜씨클로비르, 간씨클로비르, 인터페론, 리바비린, 티모신-α, 키나아제억제제, 뉴클레오사이드역전사효소억제제, 비뉴클레오사이드역전사효소억제제, 바이러스단백분해효소억제제, 바이러스침투 / 융합억제제, 바이러스단백분해효소억제제, 뉴클레오사이드유사체또는이들의조합인것을특징으로하는조성물. 청구항 11 제1항내지제10항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HIV에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 12 제1항내지제11항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HIV에의하여암호화되며, 하나이상의특이돌연변이는뉴클레오사이드역전사효소억제제, 비뉴클레오사이드역전사효소억제제, 뉴클레오사이드유사체, 단백분해효소억제제, 침투 / 융합억제제및이들의조합으로구성된군으로부터선택된약제의투여에반응하여발생하는것을특징으로하는조성물. 청구항 13 제1항내지제10항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HCV에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 14 제1항내지제10항또는제13항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HCV에의하여암호화되며, 하나이상의특이돌연변이는바이러스중합효소억제제, 비뉴클레오사이드바이러스중합효소억제제, 뉴클레오사이드유사체, 단백분해효소억제제, 인터페론, 및이들의조합으로구성된군으로부터선택된약제의투여에반응하여발생하는것을특징으로하는조성물. 청구항 15 제1항내지제10항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HBV에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 16 제1항내지제10항또는제15항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HBV에의하여암호화되며, 하나이상의특이돌연변이는뉴클레오사이드바이러스중합효소억제제, 비뉴클레오사이드바이러스중합효소억제제, 뉴클레오사이드유사체, 인터페론-α, 티모신-α 및이들의조합으로구성된군으로부터선택된약제의투여에반응하여발생하는것을특징으로하는조성물. 청구항 17 제1항내지제6항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는종양유전자에의하여암호화된미메토프는종양관련항원이거나또는암세포에서발현되는것을특징으로하는조성물. 청구항 18-3 -
제1항내지제6항또는제17항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 MAGE, MAGE3, MAGEA6, MAGEAlO, NY-ESO-I, gploo, 티로시나제, EGFR, FGFR, PSA, PSMA, VEGF, PDGFR, Kit, PMSA, CEA, Her2/neu, Muc-1, htert, Mart1, TRP-1, TRP-2, Bcr-Abl, p53, p73, Ras, PTENSrc, p38, BRAF, 아데노마토스폴리포시스콜리, myc, 본히펠린다우단백질, Rb-1, Rb-2, BRACl, BRAC2, 안드로겐수용체, Smad4, MDRl 또는 Flt3인것을특징으로하는조성물. 청구항 19 제1항내지제6항, 제17항또는제18항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 Bcr-Abl, Kit, PDGFR, EGFR, p38, Src, FGFR 또는 Flt3인것을특징으로하는조성물. 청구항 20 제1항내지제6항또는제17항내지제19항중어느한항에있어서, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는이마티닙, 게피티닙, 엘로티닙, 키나아제억제제, SB 203580, 티로신키나아제억제제, 또는이들의조합으로구성된군으로부터선택된약제의투여에반응하여발생하는하나이상의특이돌연변이를포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 21 제1항내지제20항중어느한항에있어서, 상기조성물은 2개의변이폴리펩타이드들, 돌연변이를포함하는이것의절편들, 또는미메토프들을포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 22 제1항내지제20항중어느한항에있어서, 상기조성물은 3개의변이폴리펩타이드들, 돌연변이를포함하는이것의절편들, 또는미메토프들을포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 23 제1항내지제22항중어느한항에있어서, 상기조성물은약학적으로허용가능한부형제를추가로포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 24 제1항내지제23항중어느한항에있어서, 상기조성물은하나이상의항원보강제를추가로포함하는것을특징으로하는조성물. 청구항 25 제24항에있어서, 상기항원보강제는톨-유사수용체의작용제, 디뉴클레오타이드 CpG 서열, 단일또는이중가닥 RNA, 프로인트항원보강제, 지질모이어티, 만노스중합체, 글루칸, 알루미늄계염, 칼슘계염, 실리카, 폴리뉴클레오타이드, 개량독소, 혈청단백질, 바이러스외피단백질, 감마인터페론, 공중합체, 리비항원보강제, 또는사포닌및이들의유도체인것을특징으로하는조성물. 청구항 26 제1항내지제25항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류에유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는용도로이들을사용하는것을특징으로하는조성물. 청구항 27 제26항에있어서, 상기조성물은포유류에표적치료제및 / 또는예방제와함께유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는용도로이들을사용하는것을특징으로하는조성물. 청구항 28-4 -
제26항또는제27항에있어서, 상기면역반응은세포성면역반응인것을특징으로하는조성물. 청구항 29 제26항또는제27항에있어서, 상기면역반응은체액성면역반응인것을특징으로하는조성물. 청구항 30 제26항또는제27항에있어서, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응인것을특징으로하는조성물. 청구항 31 제26항내지제30항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는용도로사용되며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드, 절편또는미메토프는종양유전자에의하여암호화되거나, 종양관련항원또는암세포에의해발현된폴리펩타이드인것을특징으로하는조성물. 청구항 32 제26항내지제30항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는용도로사용되며, 여기서상기변이폴리펩타이드, 절편또는미메토프는 HIV, HBV 또는 HCV에의하여암호화되는것을특징으로하는조성물. 청구항 33 제1항내지제25항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류에유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 포유류내의질병의증상을개선시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은표적치료제및 / 또는예방제에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된질병인것을특징으로하는조성물. 청구항 34 제33항에있어서, 상기조성물은포유류의질병의증상을개선시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은암인것을특징으로하는조성물. 청구항 35 제33항에있어서, 상기조성물은포유류의질병의증상을개선시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은 HIV, HBV 또는 HCV 감염인것을특징으로하는조성물. 청구항 36 제33항내지제35항에있어서, 상기조성물은포유류에상기표적치료제및 / 또는예방제와함께유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 포유류내의질병의증상을개선시키는용도로사용되는것을특징으로하는조성물. 청구항 37 제1항내지제25항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류에유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병또는감염은표적치료제및 / 또는예방제에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것임을특징으로하는조성물. 청구항 38 제37항에있어서, 상기조성물은질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은암인것을특징으로하는조성물. 청구항 39 제37항에있어서, 상기조성물은질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된 - 5 -
약제에대한내성을감소시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은 HIV, HBV 또는 HCV 감염인것을특징으로하는조성물. 청구항 40 제37항내지제39항중어느한항에있어서, 상기조성물은포유류에표적치료제및 / 또는예방제와함께유효량의상기조성물을투여하는것을포함하는, 질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는용도로사용되는것을특징으로하는조성물. 청구항 41 제26항내지제40항중어느한항에있어서, 상기포유류는인간인것을특징으로하는조성물. 청구항 42 포유류에제1항내지제25항중어느한항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는방법. 청구항 43 포유류에표적치료제및 / 또는예방제와함께제42항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는방법. 청구항 44 제42항또는제43항에있어서, 상기면역반응은세포성면역반응인것을특징으로하는방법. 청구항 45 제42항또는제43항에있어서, 상기면역반응은체액성면역반응인것을특징으로하는방법. 청구항 46 제42항또는제43항에있어서, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응인것을특징으로하는방법. 청구항 47 포유류에제1항내지제25항중어느한항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 포유류내의질병의증상을개선시키는방법으로서, 여기서상기질병은표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것인방법. 청구항 48 포유류에표적치료제및 / 또는예방제와함께제47항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 포유류의질병의증상을개선시키는방법. 청구항 49 포유류에제1항내지제25항중어느한항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는방법으로서, 여기서, 상기질병또는감염은표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것인방법. 청구항 50 포유류에표적치료제및 / 또는예방제와함께제49항의조성물의유효량을투여하는것을포함하는, 질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는방법. 청구항 51-6 -
제42항내지제50항중어느한항에있어서, 상기포유류는인간인것을특징으로하는방법. 청구항 52 약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도. 청구항 53 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도. 청구항 54 표적치료제및 / 또는예방제와함께포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도. 청구항 55 질병의치료용약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도로서, 여기서, 상기질병은표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것인용도. 청구항 56 질병의증상개선용약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도로서, 여기서, 상기질병은표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것인용도. 청구항 57 질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는약제의제조에사용하는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물의용도로서, 여기서, 상기질병또는감염은표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것인용도. 청구항 58 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키기위한키트로서, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 상기키트는제1항내지제25항중어느한항에의한조성물을포함하는것인키트. 청구항 59 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키기위한키트로서, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 상기키트는효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는것인키트. 청구항 60 제58항또는제59항에있어서, 상기키트는표적치료제및 / 또는예방제를추가로포함하는것을특징으로하는키트. 청구항 61 제58항내지제60항중어느한항에있어서, 상기키트는취급설명서를추가로포함하는것을특징으로하는키트. 청구항 62-7 -
변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체를제조하는방법으로서, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 상기핵산은확산, 능동수송, 초음파파쇄, 전기천공, 미세주입, 지질주입, 흡착및원형질체융합으로구성된군으로부터선택된기술에의하여상기효모운반체내로전달감염된것인방법. 청구항 63 변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체를제조하는방법으로서, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는확산, 능동수송, 리포좀융합, 초음파파쇄, 전기천공, 포식, 지질주입, 냉 / 해동주기법, 화학적가교결합, 생물학적결합또는혼합으로구성된군으로부터선택된기술에의하여상기효모운반체내로위치되거나또는상기효모운반체와결합된것인방법. 청구항 64 제62항또는제63항에있어서, 상기효모운반체는수지상세포또는대식세포내로세포내탑재된것을특징으로하는방법. 청구항 65 제62항내지제64항중어느한항에있어서, 상기효모운반체는수지상세포내로세포내탑재되는것을특징으로하는방법. 청구항 66 제1항내지제25항중어느한항의조성물을포함하는약제의제조방법으로서, 여기서, 상기약제는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관계된질병을치료하기위하여제공되는것인방법. 명세서 <1> 기술분야 관련출원의상호인용 <2> <3> 본출원은 2005. 7. 11자미국가명세서출원제60/698,381호에기하여우선권을주장하며, 그내용전체는인용문헌으로써본명세서에일체성을가지고포함되었다. 본발명은변이폴리펩타이드또는변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한면역반응을유발하기위하여사용되는방법및조성물에관한것이며, 여기서, 변이폴리펩타이드는표적치료제또는예방제 ( 들 ) 의투여에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 본명세서에서개시된조성물및방법은표적약제를함께투여하는경우변이폴리펩타이드를발현하는세포의결실및 / 또는정지를포함하는변이폴리펩타이드에대한면역반응, 특히, 세포성면역반응을유발시키는데유용하다. 상기조성물및방법은예방또는치료용으로사용될수있다. <4> 배경기술종양생물학의새로운연구결과에의하여표적특이성항암제를설계할기회가주어졌으며신약개발의진보가이루어졌다. 이러한연구에의하여암세포내의특이표적에대한선택성이높은분자를설계하는것이가능해졌다. Segota & Bukowski, Cleveland Clinic J. Med., 2004, 71(7):551-560. 예를들면, 만성골수성백혈병 (CML) 의치료에있어서 Bcr-Abl 티로신키나아제억제제인이마티닙 ( 글리벡 ) 의성공은이러한표적화접근법에대한기대를불러일으켰다. Capdeville et al., Nature Reviews, 2002, 1 :493-502. 암표적화치료법은치명적인문제를야기시켰다. 표적체는궁극적으로내약성을유발하는회피돌연변이를발달시킨다는점이다. 예를들면, 이러한돌연변이는글리벡의치료에대하여초기에반응하는환자들에게서나타나는데, 이러한돌연변이의결과로글리벡의추가적치료에내성이생긴다는사실이밝혀졌다. Gorre et al., Science 2001, - 8 -
293:876-880; Shah et al., Cancer Cell 2002, 2:117-125; Branford et al., Blood 2002, 99(9):3742-3745; Deininger et al., Blood 2005, 105(7):2640-263. 이와유사하게, 상피성장인자수용체 (EGFR) 내의돌연변이가비소세포폐암 (NSCLC) 환자에게서발견되었으며, EGFR를특이적으로표적화하는게피티닙 ( 이레싸 ) 또는엘로티닙 ( 타르세바 ) 등의치료제의활동을저항하게한다는사실이알려졌다. Kobayashi et al., N. Engl. J. Med, 2005, 352(8):786-792. 따라서, 항암제의효능은회피돌연변이체의발현에의하여상당부분제한된다. <5> <6> <7> 이와유사하게, 다양한종의항바이러스화합물이현재바이러스감염치료용으로승인되고있음에도, 이러한약제의대다수에서발견되는약제내성이증가한다는지속적이고도근본적인문제가존재한다. 예를들면, HIV 치료에사용되는뉴클레오사이드역전사효소억제제에대한내성이알려져있다. 예를들면, 스타부딘 (stavudine) 내성에관련되는 HIV RT에서단리되는돌연변이에는 M41L, K65R, D67N, K70R, Q151M, L210W, T215Y/F, 및 K219E를포함한다. 디다노신 (didanosine) 내성에관련되는 HIV RT에서분리되는돌연변이에는 K65R, L74V 및 Ml84V를포함한다. 라미부딘 ( 라미부딘 ) 내성에관련되는 HIV RT에서분리되는돌연변이에는 K65R 및 M184V/I을포함한다. 예를들면, Johnson et al. (2005, International AIDS Society-USA vol. 13:51-57) 및 Schmitt et al. (2000, AIDS vol.l4:653-658) 참조. 감수성저하또는특이항바이러스제에대한완전내성은다수의레트로바이러스, RNA바이러스및일부 DNA바이러스, 예컨대, B형간염바이러스에대한치료효능을제한하는주요인자이다. 이는바이러스역전사효소또는 RNA의존 RNA 중합효소의오류빈발 (errorprone) 특성에기인한다. 적어도치료제및 / 또는예방제투여에의하여발생하는돌연변이를최소화하는것이바람직하다. 면역반응유발방법들은, 예를들면, Thyphronitis et al. (2004, Anticancer Research, vol. 24:2443-2454) 및 Plate et al. (2005, Journal of Cell Biology, vol. 94:1069) 에개시되어있다. 효모시스템은, 예를들면, 미국등록특허제5,830,463호, Stubbs et al.(2001, Nature Med. 5:625-629); Lu et al.(2004, Cancer Research 64:5084-5088); 및 Franzusoff, et al. (2005, Expert Opin. Bio. Ther. Vol.5:565-575) 에개시되어있다. 본명세서에서인용한특허문헌, 특허출원서및단행본을포함하는인용문헌은본명세서내에서일체성을가지고참고자료로서포함되었다. <8> 발명의상세한설명 발명의요약 <9> <10> <11> <12> <13> <14> <15> <16> <17> 본명세서에서는효모운반체및변이폴리펩타이드, 돌연변이또는미메토프또는변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는조성물을개시하였다. 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모 (yeast spheroplast), 효모세포질체 (yeast cytoplast), 효모고스트 (yeast ghost), 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획이다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스 (Saccharomyces), 스키조싸카로마이세스 (Schizosaccharomyces), 클루 - 9 -
베로마이세스 (Kluveromyces), 한세뉴라 (Hansenula), 칸디다 (Candida) 및피치아 (Pichia) 로구성되는군으로부 터선택된효모로부터얻는다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아 (cerevisiae) 등의싸카로마이세 스로부터얻는다. <18> <19> <20> <21> <22> <23> <24> 예를들어, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프는 2 이상의에피토프를포함한다. 다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프는하나이상의돌연변이를포함하는 2 이상의에피토프를포함한다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 RNA 또는 DNA바이러스에의하여암호화되어있다. 예를들어, 상기바이러스는레트로바이러스 (retrovirus), 플라비바이러스 (flavivirus), 레오바이러스 (reovirus), 피코르나바이러스 (picornavirus), 코로나바이러스 (coronavirus), 필로바이러스 (filovirus), 라브도바이러스 (rhabdovirus), 분야바이러스 (bunyaviurs), 오르소마이옥스바이러스 (orthomyxovirus), 파라마이옥스바이러스 (paramyxovirus), 아레나바이러스 (arenavirus), 칼리씨바이러스 (calicivirus), 헤파드나바이러스 (hepadnavirus), 헤르페스바이러스 (herpesvirus), 폭스바이러스 (poxvirus), 아데노바이러스 (adenovirus), 파르보바이러스 (parvovirus) 또는파포바바이러스 (papovavirus) 이다. 다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 HIV, HBV 또는 HCV에의하여암호화되어있다. 본명세서에서는효모운반체및변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함한이것의절편또는미메토프또는변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함한이것의절편또는미메토프를암호화한핵산을포함하는조성물을제공하였으며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여발생하거나하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드는알타자나비르 (altazanavir), 사퀴나비르 (saquinavir), 라미부딘 (lamivudine), 디다노신 (didnosine), 엠브리시타빈 (embricitabine), 지도부딘 (zidovudine), 스타부딘 (stavudine), 잘시타빈 (zalcitabine), 아바카비르 (abacavir), 테노포비르 (tenofovir), 네비라핀 (nevirapine), 데라비르딘 (delavirdine), 이파비르엔즈 (efavirenz), 인디나비르 (indinavir), 리토나비르 (ritonavir), 넬피나비르 (nelfmavir), 앰프레나비르 (amprenavir), 로피나비르 (lopinavir), 엔푸비르타이드 (enfuvirtide), 엔테카비르 (entecavir), 아데포비르 (adefovir), 팜씨클로비르 (famciclovir), 간씨클로비르 (ganciclovir), 인터페론 (interferon), 리바비린 (ribavirin), 티모신 (thymosin)-α, 키나아제억제제, 뉴클레오사이드역전사효소억제제, 비뉴클레오사이드역전사효소억제제, 바이러스단백분해효소억제제, 바이러스침투 / 융합억제제, 바이러스단백분해효소억제제, 뉴클레오사이드유사체또는이들의조합으로부터선택되는표적치료제및 / 또는예방제에의한치료에반응하여발생한다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는종양유전자에의하여암호화된미메토프는종양관련항원이거나암세포에서발현된다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프는 MAGE, MAGE3, MAGEA6, MAGEAlO, NY-ESO-1, gploo, 티로시나제, EGFR, FGFR, PSA, PSMA, VEGF, PDGFR, Kit, PMSA, CEA, Her2/neu, Muc-1, htert, Mart1, TRP-1, TRP-2, Bcr-Abl, p53, p73, Ras, PTENSrc, p38, BRAF, 아데노마토스폴리포시스콜리, myc, 본히펠린다우단백질, Rb-1, Rb-2, BRACl, BRAC2, 안드로겐수용체, Smad4, MDRl 또는 Flt3이다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드는이마티닙, 게피티닙, 엘로티닙, 키나아제억제제, SB 203580, 티로신키나아제억제제, 또는이들의조합으로부터선택되는표적치료제및 / 또는예방제에의한치료에반응하여발생한다. 본명세서에서는효모운반체및변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함한이것의절편또는미메토프또는변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함한이것의절편또는미메토프를암호화한핵산을포함하는조성물을제공하며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기조성물은약학적으로허용가능한부형제를추가로포함할수있다. 예를들어, 상기조성물은하나이상의항원보강제를추가로포함할수있다. 다른예를들면, 상기항원보강제는톨 (Toll)-유사수용체의작용제, 디뉴클레오타이드 CpG 서열, 단일또는이중가닥 RNA, 프로인트항원보강제, 지질모이어티, 만노스중합체, 글루칸, 알루미늄계염, 칼슘계염, 실리카, 폴리뉴클레오타이드, 개량독소, 혈청단백질, 바이러스외피단백질, 감마인터페론, 공중합체, 리비항원보강제, 또는사포닌및이들의유도체로부터선택된다. - 10 -
<25> <26> <27> <28> <29> <30> <31> <32> <33> <34> <35> <36> <37> <38> <39> <40> <41> <42> <43> 본명세서에서는변이폴리펩타이드, 돌연변이또는미메토프를포함하는이것의절편, 또는변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함및 / 또는상기변이폴리펩타이드또는이것의절편을발현하는세포에대한면역반응을유발하는방법을제공하며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는하기하는조성물의유효량을함께투여하는것을포함하는치료약제및 / 또는예방약제 ( 들 ) 의투여에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서상기조성물은, a. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터또는바이러스 ; b. 상기변이폴리펩타이드에결합하는세포, 벡터또는바이러스 ; c. 상기변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발하는펩타이드 ( 미메토프 ); 또는 d. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 또는핵산에결합가능한핵산, 예를들면, sirna 또는안티센스 RNA를포함하며 ; 여기서, 유효량의상기조성물이상기약제와함께투여되었다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 추가적인예로써, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응을모두포함한다. 다른예를들면, 상기조성물은항원보강제를추가로포함할수있으며, 상기항원보강제는톨-유사수용체 (TLR) 의작용제 ; CpG 뉴클레오타이드서열 ; 단일또는이중가닥 RNA; 지질모이어티, 예컨대, 지질다당류 (LPS); 만노스중합체및글루칸을포함하나이에한정되지않는다. 예를들어, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 예를들어, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획이다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 스키조싸카로마이세스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택된효모로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 예컨대, S. 세레비시아로부터획득한다. 다른예를들면, 상기포유류는인간이다. 추가적인예로써, 상기변이폴리펩타이드는암세포에서발현되거나또는바이러스변이폴리펩타이드, 예를들면, HIV 변이폴리펩타이드, HCV 변이폴리펩타이드또는 HBV 변이폴리펩타이드등이다. 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제와함께유효량의조성물을포유류에투여하는것을포함하는포유류질병의증상을개선하는방법을제공하며, 여기서, 변이폴리펩타이드는상기약제의투여에반응하여특이돌연변이체와함께발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서상기조성물은, a. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터또는바이러스 ; b. 상기변이폴리펩타이드와결합된세포, 벡터또는바이러스 ; c. 상기변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키는펩타이드 ( 미메토프 ); 또는 - 11 -
<44> <45> <46> <47> <48> <49> <50> <51> <52> <53> <54> <55> <56> <57> <58> <59> <60> <61> d. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 또는상기핵산과결합할수있는핵산, 예를들면, sirna 또는안티센스 RNA를포함하며 ; 여기서유효량의상기조성물이상기약제와함께투여되었다. 예를들어, 상기질병은상기변이폴리펩타이드와관련이있다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 다른예를들면, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응을모두포함한다. 또한본명세서에서는하나이상의하기의것들을포함하는조성물을제공한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 다른예를들면, 상기조성물은항원보강제를추가적으로포함하며, 상기항원보강제에는톨-유사수용체 (TL R) 의작용제 ; CpG 뉴클레오타이드서열 ; 단일또는이중가닥 RNA; 지질모이어티, 예컨대, 지질다당류 (LPS); 만노스중합체및글루칸을포함하나이에한정되지않는다. 예를들어, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 예를들어, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획이다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 스키조싸카로마이세스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택된효모로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아등과같은싸카로마이세스로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아등과같은싸카로마이세스이다. 다른예를들면, 상기포유류는인간이다. 추가적인예로써, 상기변이폴리펩타이드는암세포로부터발현되거나또는바이러스변이폴리펩타이드로서, 예를들면, HIV 변이폴리펩타이드, HCV 변이폴리펩타이드또는 HBV 변이폴리펩타이드등이다. 본명세서에서는질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에게투여된약제에대한내성을경감시키는방법을제공하며, 상기약제는예방적및 / 또는치료적으로투여되며, 상기약제와함께상기포유류에유효량의조성물을투여하는것을포함하고, 여기서언급된조성물은, a. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터또는바이러스 ; b. 상기변이폴리펩타이드와결합된세포, 벡터또는바이러스 ; c. 상기변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키는펩타이드 ( 미메토프 ); 또는 d. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 또는핵산에결합하는 sirna 또는안티센스 RNA 등의핵산, 여기서, 유효량의상기조성물이상기약제와함께투여되었다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. 추가적인예로써, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응이다. 다른예를들면, 상기조성물은항원보강제를추가로포함하며, 상기항원보강제는톨-유사수용체 (TLR) 의작용제 ; CpG 뉴클레오타이드서열 ; 단일또는이중가닥 RNA; 지질모이어티, 예컨대, 지질다당류 (LPS); 만노스중합체및글루칸을포함하나이에한정되지않는다. 예를들어, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 예를들어, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획이다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 스키조싸카로마이세 - 12 -
스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택된효모로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아등과같은싸카로마이세스로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아등과같은싸카로마이세스이다. 다른예를들면, 상기포유류는인간이다. 추가적인예로써, 상기변이폴리펩타이드는암세포로부터발현되거나또는바이러스변이폴리펩타이드로서, 예를들면, HIV 변이폴리펩타이드, HCV 변이폴리펩타이드또는 HBV 변이폴리펩타이드등이다. 상기방법및약제의예를본명세서의표 1, 2 및 3에서개시하였다. 다른예를들면, 약제란암세포를표적화한항체또는저분자, 암진행을유지시키는세포또는바이러스를발현하는세포, 또는바이러스이다. <62> <63> <64> <65> <66> <67> <68> <69> <70> 본명세서에서는변이폴리펩타이드와결합된벡터또는바이러스를포함하여세포성면역반응을유발시킬수있는조성물을개시하며, 여기서상기변이폴리펩타이드는치료제및 / 또는예방제에반응하여발생하거나발생된것으로알려져있다. 예를들어, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 예를들어, 상기효모운반체는전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획이다. 예를들어, 상기효모운반체는싸카로마이세스, 스키조싸카로마이세스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택된효모로부터획득한다. 예를들어, 상기효모운반체는 S. 세레비시아등과같은싸카로마이세스로부터획득한다. 다른예를들면, 상기조성물은변이폴리펩타이드를, 돌연변이를포함하는이것의절편또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체를포함한다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생되었거나발생된다고알려진것이다. 또다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드는암세포로부터발현된다. 또다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드는바이러스변이폴리펩타이드이다. 추가적인예로써, 상기조성물은항원보강제를추가로포함하며, 상기항원보강제는톨-유사수용체 (TLR) 의작용제 ; CpG 뉴클레오타이드서열 ; 단일또는이중가닥 RNA; 지질모이어티, 예컨대, 지질다당류 (LPS); 만노스중합체및글루칸을포함하나이에한정되지않는다. 본명세서에서는본명세서내에서기술한조성물을포함하는수지상세포등과같은세포를제공한다. 본명세서에서는변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체의제조방법을제공하며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드표적치료제및 / 또는예방제에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서상기핵산은확산, 능동수송, 초음파파쇄, 전기천공, 미세주입, 지질주입, 흡착및원형질체융합으로구성된군으로부터선택된기술에의하여상기효모운반체내로핵내주입된다. 본명세서에서는변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체를제조하는방법을제공하며, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서상기변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프는확산, 능동수송, 리포좀융합, 초음파파쇄, 전기천공, 포식, 지질주입, 냉 / 해동주기법, 화학적가교결합, 생물학적결합또는혼합으로구성된군으로부터선택된기술에의하여상기효모운반체에결합되거나편입된다. 상기방법들의하여상기효모운반체는수지상세포또는대식세포안으로탑재된다. 또다른방법에의하여상기효모운반체는수지상세포안으로탑재된다. 본명세서에서는약제의제조시에사용되는조성물의용도를제공한다. 이와함께, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대하여면역반응을유발시키기위한약제의제조시에사용되는조성물의용도를제공한다. 예를들어, 상기약제는포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변 - 13 -
이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키는용도로사용된다. 다른예를들면, 상기약제는질병을치료하는용도로사용되며, 여기서상기질병은표적치료제및 / 또는예방제에반응하여발생하는변이폴리펩타이드와관련된것이다. 그러나다른예를들면, 상기약제는질병의증상을개선시키는용도로사용되며, 여기서, 상기질병은표적치료제및 / 또는예방제에반응하여발생하는변이폴리펩타이드와관련된것이다. 예를들어, 상기약제는질병또는감염의위험이있거나또는발병또는감염이된포유류에투여된약제에대한내성을감소시키는용도로사용되며, 여기서상기질병또는감염은표적치료제및 / 또는예방제에반응하여발생된변이폴리펩타이드와관련된것이다. <71> <72> <73> <74> <75> <76> <77> <78> <79> <80> <81> <82> 또한본명세서에서는본명세서에서기술한조성물을포함하는키트를개시한다. 예를들어, 포유류내에서변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프에대한면역반응을유발시키기위한키트는효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함한다. 다른예를들면, 상기키트는하기의것들을하나이상포함하는조성물을포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서상기변이폴리펩타이드표적치료제및 / 또는예방제에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생하거나발생했다고알려진것이다. 예를들어, 상기키트는표적치료제및 / 또는예방제및 / 또는키트사용을위한취급설명서를추가로포함한다. 발명의상세한설명종양세포및바이러스에독특한경로를특이적으로표적화한예방및치료약제의수요가있다. 그러나, 종양세포및바이러스는상기약제 ( 들 ) 을회피하게하는돌연변이 ( 들 ) 을거치거나 / 또는내성이생긴다는단점이있다. 본명세서에서는표적화된약제에반응하여발생하거나발생되었다고알려진변이폴리펩타이드, 또는변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한면역반응을유발시키는데사용되는조성물및방법을제공한다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이며, 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이고, 다른예를들면, 상기면역반응은세포성및체액성모두이다. 예를들어, 상기세포성면역반응은, 예를들면, 암세포, 종양진행을지원하는세포또는바이러스를발현하는세포등과같이조절을회피하고상기약제에의하여표적화된돌연변이를포함하는세포를제거하려고한다. 그러나세포제거를반드시필요로하지않는다. 예를들어, 상기세포성및 / 또는체액성면역반응은세포증식또는바이러스복제를차단할것이다. 따라서, 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 의투여반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함및 / 또는상기변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한면역반응을유발시키는방법을제공한다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 다른예를들면, 상기면역반응세포성및체액성면역반응모두를포함한다. 예를들어, 변이폴리펩타이드는종양유전자에의하여암호화되거나및 / 또는암세포로부터발현된다. 예를들어, 변이폴리펩타이드는암세포와관련있거나암세포에의하여발현된다. 예를들어, 상기약제는암세포에표적화된다. 예를들어, 상기약제는저분자또는항체이다. 다른예를들면, 변이폴리펩타이드바이러스에의하여암호화되거나및 / 또는바이러스에감염된세포에의하여발현된다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드는병원성바이러스, 예컨대, HIV, HCV또는 HBV 등에의하여암호화되어있다. 예를들어, 상기약제는바이러스또는바이러스를발현하는세포에표적화된다. 본명세서에서는변이폴리펩타이드, 또는변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함및 / 또는상기변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한면역반응을유발시키는방법을제공하며, 여기서상기변이폴리펩타이드상 - 14 -
기약제와함께유효량의조성물을투여하는것을포함하는치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 의투여에반응하여특이 돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서, 상기조성물은, <83> <84> <85> <86> <87> <88> <89> <90> <91> <92> <93> <94> <95> <96> <97> <98> <99> <100> <101> <102> <103> <104> <105> a. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터또는바이러스 ; b. 상기변이폴리펩타이드와결합된세포, 벡터또는바이러스 ; c. 상기변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키는펩타이드 ( 미메토프 ); 또는 d. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 또는상기핵산과결합할수있는핵산, 예컨대, sirna 또는안티센스 RNA를포함한다 ; 여기서유효량의상기조성물이상기약제와함께투여되었다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기조성물은세포성면역반응을유발시킬수있는것이다. 예를들어, 상기조성물은체액성면역반응을유발시킬수있는것이다. 다른예를들면, 상기세포성면역반응은체액성면역반응을추가로포함한다. 상기방법의예에서, 상기조성물은항원보강제를포함한다. 그러나다른예를들면, 상기조성물은작용제또는톨-유사수용체의리간드를추가로포함한다. 다른예를들면, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 그러나또다른예를들면, 상기조성물은 CpG 서열을포함한다. 다른예를들면, 상기세포는수지상세포이다. 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제와함께상기유효량의조성물을포유류에투여하는것을포함하는포유류의질병의증상을개선하는방법을제공하며, 여기서변이폴리펩타이드는상기약제의투여에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이며, 여기서, 상기조성물은, a. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터또는바이러스 ; b. 상기변이폴리펩타이드와결합된세포, 벡터또는바이러스 ; c. 상기변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키는펩타이드 ( 미메토프 ); 또는 d. 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산, 또는상기핵산과결합할수있는핵산, 예컨대, sirna 또는안티센스 RNA를포함한다 ; 여기서, 유효량의상기조성물이상기약제와함께투여되었다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모 - 15 -
운반체 ; <106> <107> <108> <109> <110> <111> <112> <113> <114> <115> <116> <117> <118> <119> iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 예를들어, 상기조성물은세포성면역반응을유발시킬수있는것이다. 예를들어, 상기조성물은체액성면역반응을유발시킨다. 다른예를들면, 상기세포성면역반응은체액성면역반응을추가로포함한다. 상기방법의예에서, 상기조성물은항원보강제를포함한다. 그러나다른예에서는, 상기조성물은톨-유사수용체의작용제또는리간드를추가로포함한다. 다른예를들면, 상기조성물은효모운반체를포함한다. 그러나다른예에서는, 상기조성물은 CpG 서열을포함한다. 다른예를들면, 상기세포는수지상세포이다. 예를들어, 상기포유류는상기질병에걸릴위험이있으며, 예방적으로상기약제가투여되었다 ; 다른예를들면, 상기포유류는상기질병에걸려있으며, 상기약제를치료적으로투여하였다. 예를들어, 상기질병은암이며, 다른예를들면상기질병은병원성바이러스, 예컨대 HIV, HCV 및 HBV에의한감염성질병이다. 또한, 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드, 또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는세포, 벡터, 바이러스, 면역원성조성물등과같은조성물, 및키트를개시한다. 예를들어, 상기조성물은포유류에투여하는경우면역반응을유발시킬수있다. 예를들어, 상기조성물은포유류에투여하는경우세포성면역반응을유발시킬수있는것이다. 예를들어, 상기조성물은포유류에투여하는경우체액성면역반응을유발시킬수있다. 다른예를들면, 상기조성물은포유류에투여하는경우세포성및체액성면역반응을유발시킬수있다. 본명세서에서는효모벡터를포함하는효모운반체 ; 효모계조성물 ; 및치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하거나및 / 또는상기변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한면역반응을유발시키기위한용도로이들을사용하는방법을제공한다. 예를들어, 상기효모운반체는변이폴리펩타이드를암호화한핵산 ( 들 ) 을포함한다. 예를들어, 상기효모운반체는변이폴리펩타이드 ( 들 ) 을발현하는핵산을포함한다. 다른예를들면, 상기효모운반체는상기변이폴리펩타이드와유관되어있다. 예를들어, 상기효모운반체는보균세포 (carrier cell), 예컨대수지상세포또는대식세포내로탑재된다. 또한본명세서에서는이들을포함한효모운반체및효모계조성물을제공한다. 일반적인기술별도의조건을적시하지않았다면, 본발명의실시에는당해기술분야의숙련자들의범위에서분자생물학 ( 재조합기술을포함 ), 면역학, 세포생물학및생화학분야의종래의기술을사용한다. 이러한기술은하기하는문헌에전부설명되어있다 : A Laboratory Manual, third edition (Sambrook et al., 2001); Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987 및연간증보판 ); Fundamental Virology, second edition (ed. Fields et al. Raven press) 및 Current Protocols in Immunology (John Wiley & Sons, Inc., NY). 본명세서에서사용된, 단수형태인 "a", "an" 및 "the" 는, 명백하게다른조건을적시하지않은경우, 복수의인용을포함한다. 본명세서에서사용된, " 암 " 이라는용어는악성흑색종, 편평세포암종, 유방암, 두부및경부암종, 갑상선암종, 연조직육종, 골육종, 고환암, 전립선암, 난소암, 방광암, 피부암, 뇌암, 혈관육종, 햄혈관육종, 비만세포종, 원발성간암, 폐암, 췌장암, 위장관암, 신장세포암종, 조혈신생물, 및전이암등을포함하나이에한정되지않는다. 본명세서에서사용된, " 감염성질병 " 이라는용어는, 예컨대, 레트로바이러스 ( 예컨대, HIV), 플라비바이러스 ( 예컨대, HCV), 레오바이러스, 피코르나바이러스, 코로나바이러스, 필로바이러스, 라브도바이러스, 분야바이러 - 16 -
스, 오르소마이옥스바이러스, 파라마이옥스바이러스, 아레나바이러스, 칼리씨바이러스등과같은 RNA바이러스를포함하나이에한정되지않으며 ; 및헤파드나바이러스 ( 예컨대, HBV), 헤르페스바이러스, 폭스바이러스, 아데노바이러스, 파르보바이러스, 및파포바바이러스과에속하는 DNA바이러스등의감염체에의하여유발된질병을의미한다. <120> <121> <122> <123> <124> <125> <126> 본명세서에서사용된, 세포또는바이러스에표적화된치료및 / 또는예방 " 제 " 또는 " 약제 " 라는것은상기약제가암의경우세포의형질전환을유발하거나또는암진행을지원하는기능성분자또는그유관분자, 또는바이러스감염또는바이러스복제를촉진또는유지시키는기능성분자또는그유관분자를지시하는것이라는의미이다. 치료제및 / 또는예방제들의예들은세포, 예컨대, 암세포또는바이러스를발현하는세포, 또는본명세서에기재된바이러스및당해업계에알려진바이러스등을표적화하도록설계되었다. 본명세서에서사용된, " 변이폴리펩타이드 " 는게놈내에암호화된전장폴리펩타이드뿐만아니라, 예방제및 / 또는치료제등의약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진돌연변이를포함하는한이것의절편까지를범주에포함한다. 이러한변이폴리펩타이드는세포, 예컨대, 암세포또는바이러스를발현하는세포, 또는바이러스를표적화한예방제및 / 또는치료제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것으로서, 당해기술분야에서는일반적으로 " 회피돌연변이체 " 로통칭된다. 돌연변이는전장폴리펩타이드의어떠한영역에서도발견될수있으며, 아미노산의치환, 삽입또는결손또는이들의조합, 또는전위하는경우등에나타나는무순서서열의융합을포함할수있다. 예를들어, 변이폴리펩타이드는약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것으로서, 항원보강제, 또는여타의벡터또는운반체, 예컨대, 효모운반체등과관련없이그자체로면역원성이다. 즉, 이들이요구되지않는다. 다른예를들면, 변이폴리펩타이드는약제에반응하여발생했거나발생한다고알려진것으로서항원성을증진시키는항원보강제와결합된면역원성이다. 본명세서에서사용된, " 항원보강제 " 는, 예를들면, 선천성면역반응을유발시키며, 항원제시세포 (APC) 의성숙과활성화에유관되었다고알려진톨-유사수용체 (TLR) 에대한리간드작용제 ; CpG 뉴클레오타이드서열 ; 단일또는이중가닥 RNA (TLR7 작용제 ); 지질모이어티, 예컨대, 지질다당체 (LPS); 만노스중합체및글루칸, 효모의구성성분 (TLR 2, 4 및 6와상호작용하는기능이알려진것 ); 및효모운반체, 예컨대, 본명세서에기재된것들을포함한다. 상기약제와 " 함께 " 변이폴리펩타이드또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을투여한다는것 ( 이는본명세서에기재된방법또는당해기술분야에알려진어떠한방법으로도가능하다 ) 은본명세서에기재된방법에의하여완수된다고하더라도, 상기변이폴리펩타이드및약제가동시에투여된다는의미로의도된것이다. 변이폴리펩타이드는상기약제의투여전에, 동시에또는상기약제의투여후에, 또는전술한것의조합으로투여될수있다. 변이폴리펩타이드또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산은상기약제의투여후몇시간, 몇일또는몇개월에투여될수있다. 예를들어, 특히, 상기약제가어떠한세포형의증식을직접적또는간접적으로간섭한다는사실이알려진경우라면, 변이폴리펩타이드또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산의투여 ( 이는본명세서에기재된방법또는당해기술분야에알려진어떠한방법으로도가능하다 ) 는상기약제의투여에선행하며, 상기약제의투여후에추가적으로투여될수있다. 본명세서에서사용된, " 미메토프 " 라는용어는면역반응, 예를들어, 상기변이폴리펩타이드또는상기변이폴리펩타이드를발현하는세포에대한세포성및 / 또는체액성면역반응을유발시키는변이폴리펩타이드의능력을모방할수있는폴리펩타이드를나타낸다. 본명세서에서사용된 " 미메토프 " 는, 치료제및 / 또는예방제의투여에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드의하나이상의에피토프를모방하는펩타이드 ; 변이폴리펩타이드의비단백성면역원성부위 ( 즉, 탄수화물구조 ); 및변이폴리펩타이드의하나이상의에피토프와유사한구조를지닌핵산을포함하는합성또는천연유기분자를포함하나이에한정되지않는다. 이러한미메토프는컴퓨터로합성된변이폴리펩타이드구조를사용하여설계할수있다. 미메토프는, 예컨대올리고뉴클레오타이드, 펩타이드또는여타의유기분자등의분자를무작위시편으로합성하고, 이러한시편을본명세서에기재되거나당해기술분야에알려진방법및측정법에의하여, 예컨대, 세포성면역반응등의면역반응을유발시키는능력에따라이들을선별함으로써획득할수도있다. 본명세서에서사용된, " 질병또는감염의증상을개선 " 시키는것이라는표현에는상기언급된질병의증상및 / 또는진행의완화, 안정화, 역전화, 감속또는지연을포함하며, 이는임상적및 / 또는준임상적기준에의하여측정할수있다. 예를들어, 변이폴리펩타이드 ( 또는이들의미메토프 ), 또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산의 " 유효 - 17 -
량 " 이란포유류에투여하는경우면역반응을유발시킬수있는양을나타낸다. 예를들어, 상기면역반응은 세포성면역반응이다. 다른예를들면, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 예를들어, 상기면역반응 은세포성및체액성면역반응이다. <127> <128> <129> <130> <131> <132> 본명세서에서사용된, " 포유류 ", " 포유류의 " 또는 " 포유류숙주 " 라는용어는인간및인간을제외한영장류, 예컨대, 침팬지및그밖의유인원및원숭이종 ; 가축, 예컨대, 축우, 양, 돼지, 염소및말 ; 애완용포유류, 예컨대, 개및고양이 ; 설치류, 예컨대, 마우스, 레트및기니아피그를포함하는실험동물 ; 예컨대, 닭, 칠면조및그밖의가금, 오리, 거위등의가금류, 야생조류및엽조류를포함하는조류를포함한다. 상기용어는특정연령을나타내는것이아니다. 따라서, 성체기, 소아기및유년기의개체뿐만아니라태아기의포유류를포괄하는의미이다. " 항원 " 은, 숙주의면역체계, 예컨대, 포유류의면역체계를자극하여항원특이성체액성및 / 또는세포성면역반응을유발시키는하나이상의에피토프 ( 선형, 입체형또는이들모두 ) 또는면역원성결정인자를포함하는분자를나타낸다. 항원은그자체로또는항원성을증진시키는약품과함께 " 면역원 " 이될수있다. " 항원 " 이라는용어는전단백질, 절단단백질, 단백질및펩타이드의절편을포함한다. 항원은자연발생된것이거나유전적으로조작한단백질의변형일수있다. 항원이라는용어는, 아단위항원 ( 즉, 원래부터항원과결합되어있는개체전체로부터분리및식별된항원 ) 을포함한다. 항체예컨대, 항개별특이형항체, 또는이것의절편, 및합성펩타이드미메토프는항원또는항원성결정인자를모방할수있는합성펩타이드로서, 본명세서에서사용된항원의정의범주에포함된다. 예를들어, 항원은변이폴리펩타이드를포괄하거나, 또는예방제및 / 또는치료제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드로부터획득하거나, 자연발생한것또는합성에의한것이될수있다. 항원은단일에피토프만큼작거나그보다더클수도있으며다중에피토프를포함할수도있다. 이로써, 항원의크기는아미노산약 5-12개의크기 ( 즉, 펩타이드 ) 만큼작을수있으며, 전장단백질만큼클수도있으며, 중합체및융합단백질, 키메라단백질, 전세포, 전체미생물, 또는이들의부분 ( 즉, 미생물의추출물또는전세포의용해질 ) 을포함한다. 일부예에서, ( 즉, 상기항원이효모벡터등의벡터, 또는재조합핵산분자로부터유래한바이러스에의하여발현되는경우 ), 상기항원은세포또는미생물의전체보다는단백질, 또는이것의절편, 융합단백질, 키메라단백질, 중합체를포함하나이에한정되지않는다는것을인식하여야한다. 본명세서에서사용된, " 에피토프 " 라는용어는면역반응을유발시키기에충분한단일항원결합부위로정의된다. 여기서상기면역반응은세포성및 / 또는체액성면역반응이될수있다. 당해기술업계의숙련자라면 T-세포에피토프가크기및구조에있어서 B-세포에피토프와다르다는사실, 및클래스 I 주조직적합복합체 (MHC) 경로를통해제시된에피토프가클래스 II MHC 경로를통해제시된에피토프와다르다는사실을인식할것이다. 일반적으로, B-세포에피토프는적어도약 5개의아미노산을포함하나, 3-4개의아미노산만큼작을수있다. T-세포에피토프, 예컨대, 세포독성 T- 림프구 (CTL) 에피토프는적어도약 7-9개의아미노산을포함하며, 헬퍼 T-세포에피토프는적어도약 12-20개의아미노산을포함한다. 정상상태로는, 에피토프에는약 7 내지 15개의사이의아미노산, 예컨대, 8, 9, 10, 12 또는 15개의아미노산이포함된다. 본명세서에서사용된변이폴리펩타이드 ( 또는이들의미메토프 ) 또는폴리펩타이드를암호화한핵산 ( 또는상기변이폴리펩타이드에결합할수있는핵산, 예컨대, sirna 또는안티센스 RNA), 또는폴리펩타이드또는핵산을포함하는조성물에대한 " 면역학적반응 " 또는 " 면역반응 " 에는포유류내에서상기폴리펩타이드를인식하는세포성면역반응을발달시키는것을포함한다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 예를들어, 상기세포성면역반응은체액성면역반응을추가적으로포함할수있다. 상기면역반응은상기변이폴리펩타이드에특이적일수있으나, 반드시이를필요로하지않는다. 상기면역반응은변이폴리펩타이드또는폴리펩타이드를암호화한핵산의투여에의하여유발되어, 상기폴리펩타이드또는핵산의투여가없는경우에서의상기면역반응에비하여, 상기면역반응의어느한측면 ( 즉, 세포성반응, 체액성반응, 사이토카인생성 ) 이계측가능한정도로증가될수있다. 면역반응은변이폴리펩타이드특이반응이될수있으나, 이것이요구되지않는다. 본발명은상기면역반응을유발하는변이폴리펩타이드 ( 또는이들의미메토프 ), 또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산에결합된조성물의범위를포괄한다. 본명세서에서사용된 " 체액성면역반응 " 은항체분자또는면역글로블린에의하여매개된면역반응을나타낸다. 본발명의항체분자는 IgG ( 뿐만아니라, 아형 IgGl, IgG2a, 및 IgG2b), IgM, IgA, IgD, 및 IgE 클래스를포함한다 - 18 -
<133> <134> <135> <136> <137> <138> 항체는기능적으로 1차면역반응및기억항체반응의항체또는혈청중화항체를포함한다. 감염성질병에관한, 본발명의항체는상기변이폴리펩타이드를암호화한바이러스의감염성을중화하거나또는감소시키며, 및 / 또는항체-보체, 또는항체의존세포의세포독성 (ADCC) 과상기변이폴리펩타이드를매개하는데사용될수있으나그것이반드시요구되는것은아니다. 본명세서에서사용된 " 세포성면역반응 " 은 T- 림프구및 / 또는다른백혈구세포에의하여매개되는것이며, 자연사 (NK) 세포및대식세포를제한없이포함한다. 본발명의 T-림프구는알파 / 베타 T-세포수용체아단위를발현하는 T-세포또는 T-세포를발현하는감마 / 델타수용체를포함하며, 효과인자또는억제인자 T-세포가모두될수도있다. 본명세서에서사용된 "T-림프구" 또는 "T-세포" 는림프구를생성하는비항체로서면역체계내에서세포매개경로의일부를구성한다. T-세포는미성숙림프구로부터발생하여골수로부터흉선까지이동하며, 여기서이들은흉선호르몬의조절하에성숙과정을거친다. 성숙한 T 세포는특이항원을인식하고결합하는능력에기초하여면역적격성을가지게된다. 면역적격 T 세포의활성화는항원과림프구의표면수용체의결합에의하여촉발된다. T 세포반응을발생시키려면, 항원이세포내에서합성되거나세포내로도입되어야만하며, 그다음프로테아좀복합체에의하여작은펩타이드로가공되고, 경우에따라, 주조직적합복합체 (MHC) 클래스 I 단백질과결합하기위하여세포질세망 / 골지복합체분비경로로전위된다는사실이알려졌다. 다른경우에는, 펩타이드항원은세포외에서도입되어기존에 MHC-I 또는 MHC-II 수용체와결합한펩타이드를분리시킨다. 기능적으로세포성면역은항원-특이세포독성 T- 림프구세포 (CTL) 를포함한다. 본명세서에서사용된 " 항원-특이성킬러 T 세포 ", "CTL", 또는 " 세포독성 T-세포 " 는본명세서에서상기 MHC 또는인간백혈구항원 (HLA) 의단백질과결합하여제시된펩타이드항원에특이성을가진세포를나타낸다. 상기단백질은인간에속하는것이기때문이다. 본발명의 CTL은 MHC 내의특이항원에의하여촉발되는활성화 CTL; 및항원에재노출되어재활성화되는 T 세포에적용되는면역기억 CTL 또는회상 CTL 뿐만아니라상호활성화또는크로스분기군 (cross clade) CTL을포함한다. 본발명의 CTL은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를포함한다. 본발명의활성화항원-특이 CTL은대식세포염증단백질 1a(MIP-1a), MIP-1B, 및 RANTES을제한없이포함하는케모카인및사이토카인의분비 ; 및감염을억제하는가용성인자의분비를통하여병원체의침입을막으므로써상기 CTL에특이성을지닌병원체에감염된개체의세포를파괴및 / 또는용해하는과정을촉진한다. 본발명의세포성면역은또한 T 세포의 T 헬퍼아집단에의하여발생되는항원-특이면역반응이다. 헬퍼 T 세포는상기기능을자극하는것을도우며, 표면상의 HMC 분자와결합하는펩타이드를제시하는 T 세포에대한비특이성효과기세포의활동에집중한다. 세포성면역반응은사이토카인, 케모카인및그밖에활성화 T-세포및 / 또는 CD4 및 CD8 T 세포및 NK 세포로부터유도된것들을포함하는다른백혈구세포에의하여생성된이러한분자의생성을나타낸다. 세포성면역반응을유발하는조성물은세포표면에서 MHC 분자와결합한폴리펩타이드를제시함으로서포유류를민감하게하는작용을한다. 상기세포매개면역반응은자신의표면에항원을제시하는세포에관한것이다. 더욱이, 항원-특이 T- 림프구는면역된숙주의향후보호를가능하게하기위하여생성될수있다. 세포-매개면역학적반응을자극하는특정폴리펩타이드또는항원의능력은당해기술분야에알려진다수의측정방법에의하여예컨대, 림프구증식 ( 림프구활성 ) 측정법, CTL 킬링측정법에의하여, 또는민감한개체내의 T-림프구항원특이성을측정함으로써측정될수있다. 이러한측정법은당해기술분야에잘알려진것들이다. 하기의예시문헌을참조하라. Erickson et al., J. Immunol. (1993) 151:4189-4199; Doe et al., Eur. J. Immunol. (1994) 24:2369-2376. 세포-매개면역반응을측정하는다른방법에는 T-세포집단에의한세포내사이토카인또는사이토카인분비의측정, 또는에피토프-특이성 T-세포의측정 ( 즉, 테트라머기법에의함 ) 을포함한다 (McMichael, A. J., 및 O'Callaghan, C. A., J. Exp. Med. 187(9)1367-1371, 1998; Mcheyzer- Williams, M. G., et al, Immunol. Rev. 150:5-21, 1996; Lalvani, A., et al, J. Exp. Med. 186:859-865, 1997에의하여연구됨 ). 본명세서에서사용된, " 면역학적반응 ", 또는 " 면역반응 " 의범주에는 CTL의생성을자극하거나, 및 / 또는헬퍼 T-세포및 / 또는항체-매개면역반응의생성또는활성화시키는것을포함한다. "T 림프구 " 또는 "T 세포 " 는림프구를생성하는비항체로서면역체계의세포-매개경로의일부를구성한다. T 세포는미성숙림프구에서발생하여골수로부터흉선까지이동이고, 여기서흉선호르몬의지시에의하여성숙과정을거친다. 여기서, 성숙림프구는많은수로증가하면서빠르게분할된다. 상기성숙한 T 세포는특이항원을인식하고결합하는능력에기초하여면역적격성을가지게된다. 면역적격 T 세포의활성화는 MHC/HLA 수용체및보조수용체가제시된 - 19 -
상황하에서항원과림프구의표면수용체의결합에의하여촉발된다. <139> <140> <141> <142> <143> <144> <145> 본명세서에서사용된 " 면역원성조성물 " 은치료제및 / 또는예방제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드 ( 또는이들의미메토프 ) 또는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는조성물이며, 변이폴리펩타이드의항원성을증진시키는항원보강제를포함할수도, 포함안할수도있고, 여기서, 포유류에상기조성물을투여함으로써세포성면역반응, 체액성면역반응또는세포성및체액성면역반응을발달시키게된다. 면역원성조성물은세포성방어면역반응을유발시킬수있는조성물을포함하나, 반드시필요로하는것은아니다. 본명세서에서사용된 " 예방조성물 " 은포유류환자또는숙주에투여되는조성물을나타내며, 상기환자또는숙주는 " 면역학적으로미경험 " 인것또는이전에예컨대, 암및감염또는재감염등의질병을예방하는병원체에대한효과적인면역반응을생성시키지못하는것에노출된적이없는것을나타낸다 ( 그러나, 본발명은상기감염또는재감염이완전히예방될것을요구하는것은아니다 ). 본발명의예방조성물이반드시이들이이미투여된숙주또는환자내의면역멸균상태를생성하는것은아니다. 본명세서에서사용된 " 치료조성물 " 은암에걸려있거나, 감염성질병의경우에바이러스에감염되어있거나또는감염되어서, 일부의경우에는질병상태로진행되는환자또는숙주에투여하는조성물을나타낸다. 본명세서에서사용된 " 접종 " " 접종하다 " 또는 " 접종된 " 이라는용어는면역원성조성물을살아있는포유류환자또는숙주에게상기조성물에대한면역반응을유도할수있는유효량을투여하는과정을나타낸다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응, 즉, 세포독성 T 세포면역반응을포함한다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응, 즉항체생성을포함한다. 예를들어, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응을포함한다. 벡터및조성물본명세서에서는약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는벡터, 예컨대, 박테리아성, 바이러스성, 곤충및효모벡터를제공한다. 본명세서에서는상기변이폴리펩타이드와결합된벡터및바이러스를포함하는조성물을제공한다. 이러한벡터및바이러스는박테리아벡터, 나체플라스미드 DNA, 효모벡터및운반체, raav, 아데노바이러스, 카나리폭스바이러스, 폭스바이러스, 바씨니바이러스, 변형바씨니아앙카라 (MVA), 알파바이러스, 라브도바이러스, 베네주엘라에퀴네엔세팔리티스바이러스, 및바쿨로바이러스를포함하나이에한정되지는않으며, 당해기술분야의숙련자들에게일상적으로간주되는방법에의하여생산될수있다. 수많은바이러스기반시스템이포유류세포내로유전자전달하는방식으로개발되었다. 예를들면, AAV의생활환및유전기전은 Muzyczka, Current Topics in Microbiology and Immunology, 158: 97-129 (1992) 에서연구되었다. AAV 시스템에관한추가적인문헌은, 예를들면, RO Snyder, et al., Human Gene Therapy 8:1891-1900, 1997; D Duan, et al., J.Virol. 8568-8577, 1998; Duan D, et al., J Virol. 73:161-169, 1999; N Vincent-Lacaze, et al., J Virol. 73:1949-1955, 1999; C McKeon, et al., NIDDK Workshop on AAV Vector: Gene transfer into quiescent cells. Human Gene Therapy 7:1615-1619, 1996; HNakai, et al., J Virol. 75:6969-6976, 및 2001; BC Schnepp, et al., J. Virol. 2003 77: 3495-350이다. 본명세서에기재한 AAV 시스템은, 예를들면, 미국등록특허제5,786,211호 ; 미국등록특허제5,871,982호 ; 및미국등록특허제6,258,595호이다. 다수의아데노바이러스벡터및발현시스템이기재되었다. 하기의문헌을참조하라, 예를들면, Haj-Ahmad and Graham, J. Virol. (1986) 57:267-274; Bett et al., J. Virol. (1993) 67:5911-5921; Mittereder et al., Human Gene Therapy (1994) 5:717-729; Seth et al., J. Virol. (1994) 68:933-940; Barr et al., Gene Therapy (1994) 1:51-58; Berkner, K. L. BioTechniques (1988) 6:616-629; 및 Rich et al., Human Gene Therapy (1993) 4:461-476 이다. 본명세서에기재된폭스바이러스백신은, 예를들면, Small, Jr., P. A., et al. ( 미국등록특허제5,676,950호 1997. 10. 14. 공개 ) 이다. 추가적인바이러스벡터는바씨니바이러스및아비안폭스바이러스를포함하는폭스과바이러스로부터유도된것들을포함한다. 본명세서에기재된바쿨로바이러스는, 예를들면, 미국등록특허제5,731,182호이다. 본명세서에서는변이폴리펩타이드, 또는폴리펩타이드를암호화한핵산에대한면역반응, 예를들어, 세포성면역반응을유발하는방법을제공한다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이며, 다른예를들면, 상기면역반응은세포성및체액성면역반응모두를포함한다. 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진종양유전자및바이러스를암호화한변이폴리펩타이드의구체적인실시예를기재하였으며, 그밖의것은당해기술업계에알려진것이다. 이러한약제 ( 들 ) - 20 -
에반응하는변이폴리펩타이드의발생은, 예를들면, 감소된감수성및 / 또는상기약제 ( 들 ) 에대한내성및 / 또는상기질병의임상적및 / 또는준임상적증상의증가, 예컨대, HIV의경우 CD4 수감소의발생등과관련있는것으로알려졌다. 포유류에게투여되었거나, 되는중이거나, 투여될, 세포또는바이러스를표적화한약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드에대한면역반응, 예컨대세포성면역반응을유발시키는것의이점은약효지속시간의확장 ; 상기약제에대한내성의최소화또는역전화 ; 특이성변이폴리펩타이드의발생의지연또는최소화 ; ( 이점을얻기위하여필수적인것을아니나 ) 특이변이폴리펩타이드의제거 ; 및상기질병증상의최소화, 감소또는역전화, 및 / 또는상기질병진행의감속이다. <146> <147> <148> <149> <150> 본명세서에서는치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 및이들을포함하는조성물에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는예를들면, 박테리아성, 바이러스성, 곤충및효모벡터를포함하나이에한정되지않는벡터를제공한다. 예를들어, 상기벡터는효모벡터이다. 다른예를들면, 벡터는상기변이폴리펩타이드에결합할수있는핵산, 예컨대, sirna 또는안티센스 RNA를포함하므로써, 상기변이폴리펩타이드의발현을억제한다. 본명세서에서는벡터, 예를들면, 치료제및 / 또는예방제 ( 들 ) 에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는이들의미메토프와결합한박테리아성, 바이러스성, 곤충및효모벡터를포함하는조성물을제공한다. 예를들어, 상기벡터는효모벡터또는운반체이다. 다른예를들면, 변이폴리펩타이드를포함하는조성물은항원보강제를추가로포함한다. 항원보강제의예는본명세서에기재한것이거나당해기술분야에잘알려진것이다. 본명세서에서는예를들면, 수지상세포등을포함하나이에한정되지않는세포를제공하며, 상기세포에는전술한변이폴리펩타이드를암호화한핵산및 / 또는상기변이폴리펩타이드를발현하는벡터또는바이러스를포함한다. 예를들어, 상기수지상세포는전술한변이폴리펩타이드를포함한다. 또한본명세서에서는상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산을포함하는조성물을제공한다. 또한본명세서에서는이러한세포, 벡터, 바이러스및조성물을제조하는방법을제공한다. 돌연변이또는폴리펩타이드를암호화한핵산또는절편을포함하는변이폴리펩타이드또는이것의절편, 및 / 또는이들을포함하는조성물또는벡터는예방및 / 또는치료제와함께투여되며, 암또는감염의위험이있는포유류또는암또는감염에걸린포유류에투여될수있다. 상기변이폴리펩타이드가상기약제에반응하여발생했는지여부및상기약제에대한내성이검출되었는지여부와무관하게돌연변이또는상기폴리펩타이드를암호화한핵산또는절편을포함하는변이폴리펩타이드또는이것의절편, 및 / 또는이들을포함하는조성물또는벡터는상기약제의투여후에투여될수있다. 약제에반응하는변이폴리펩타이드의발생을검출하는것은당해기술업계에잘알려진방법에의하여결정된다. 만일변이폴리펩타이드, 또는이들을암호화한핵산, 및 / 또는이들을포함한조성물또는벡터는약제와함께포유류에투여되는경우, 변이폴리펩타이드가약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생한다는것, 본명세서에기술한방법에는포유류투여에따른이익을얻기위하여상기변이폴리펩타이드의제거하는것이불필요하다는사실이알려졌다. 따라서, 변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프, 또는이들을암호화한핵산및 / 또는이들을포함한조성물또는벡터는면역반응, 예컨대, 세포성면역반응, 체액성면역반응또는양자모두를유발시키는방법 ; 포유류의암또는감염증상을개선시키는방법 ; 상기약제의내성을감소시키는방법 ; 약제의효능을증대시키는방법 ; 상기약제에대한감수성을증가시키는방법 ; 변이폴리펩타이드의발생을지연또는최소화시키는방법 ; 및암또는감염의임상적및 / 또는준임상적증상을감소시키는방법을포함하는본명세서에기재된방법으로약제와함께투여될수있다. 예를들어, 변이폴리펩타이드, 또는이들을암호화한핵산, 및 / 또는이들을포함한조성물또는벡터를약제와함께투여하면상기약제만을투여한경우즉, 상기변이폴리펩타이드, 또는이들을암호화한핵산, 및 / 또는이들을포함한조성물또는벡터의투여가없는경우보다상당한정도로변이폴리펩타이드의발생을지연또는최소화및 / 또는상기약제의효능을증대및 / 또는암또는감염의임상적및 / 또는준임상적증상을감소시킨다. 효모계조성물및방법본명세서에서는약제에반응하여특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드를포함한효모벡터, 효모운반체및효모계조성물을제공한다. 본명세서에서사용된 " 효모벡터 " 및 " 효모운반체 " 라는용어는혼용이가능하며, 전효모, 세포벽불완전제거효모, 효모세포질체, 효모고스트, 및하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획을포함하나이에한정하지않는다. 예를들어, 효모세포또는세포벽불완전제거효모가상기효모운반체의제조시사용되며, 이들은, 예를들어, 상기변이폴리펩타이드를암호화한핵산분자를포함하여, 상기폴리펩타이드가효모세포또는세포벽불완전제거효모에의하여발현된다. - 21 -
예를들어, 상기효모운반체는비병원성효모로부터얻을수있다. 또다른예로써, 상기효모운반체는싸카 로마이세스, 스키조싸카로마이세스, 클루베로마이세스, 한세뉴라, 칸디다및피치아로구성된군으로부터선택 된효모로부터얻을수있다. 예를들어, 상기싸카로마이세스는 S. 세레비시아이다. <151> <152> <153> <154> <155> 일반적인경우, 상기효모운반체와변이폴리펩타이드는본명세서에서전술한기술에의하여결합될수있다. 예를들어, 상기효모운반체는변이폴리펩타이드와함께세포내로탑재된다. 다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드는상기효모운반체에공유또는비공유결합된다. 추가적인예로써, 상기효모운반체와상기변이폴리펩타이드는혼합에의하여결합된다. 다른예를들면, 상기변이폴리펩타이드는상기효모운반체가유도된상기효모운반체또는상기효모세포또는세포벽불완전제거효모에의하여재조합되어발현된다. 따라서, 본명세서에서는모든효모세포 ( 즉, 전세포또는무손상세포 ) 또는조성물내의변이폴리펩타이드와함께사용되는이들의유도체, 또는항원보강제로서사용되는것을포괄하는효모운반체를제공한다. 상기효모운반체는, 따라서, 생무손상효모미생물 ( 즉, 세포벽을포함한모든구성성분을가진효모세포 ), 사멸 ( 사 ) 무손상효모미생물, 또는다음을포함하는이들의유도체 : 세포벽불완전제거효모 ( 즉, 세포벽부재효모세포 ), 효모세포질체 ( 즉, 세포벽및핵부재효모세포 ), 효모고스트 ( 즉, 세포벽, 핵및세포질부재효모세포 ), 또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획 ( 또한세포하효모입자로서전술한것들 ) 을포함하나이에한정되지않는다. 세포벽불완전제거효모는전형적으로효모세포벽의효소소화에의하여생산한다. 이러한방법은, 예를들면, Franzusoff et al., 1991, Meth. Enzymol. 194, 662-674에기재되어있으며인용문헌으로써일체성을가지고본명세서에포함되었다. 효모세포질체는전형적으로효모세포의적출에의하여제조된다. 이러한방법은, 예를들면, Coon, 1978, Natl. Cancer Inst. Monogr. 48, 45-55에기재되어있으며인용문헌으로써일체성을가지고본명세서에포함되었다. 효모고스트는전형적으로투과세포또는용해세포를재봉입하여제조되며, 당해세포의소기관이남아있을수도있으나, 반드시필요한것은아니다. 이러한방법은, 예를들면, Franzusoff et al., 1983, J Biol. Chem. 258, 3608-3614 및 Bussey et al., 1979, Biochim. Biophys. Acta 553, 185-196에기재되어있으며, 인용문헌으로써일체성을가지고본명세서에포함되었다. 하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획은천연핵또는세포질이부재한효모멤브레인을나타낸다. 상기입자는천연효모멤브레인에서초음파파쇄또는당해기술업계에알려진여타의멤브레인파괴방법에의하여제조되어이후의재봉입된미립자의크기까지의범위를포함하는어떠한크기도될수있다. 하위세포효모멤브레인추출물을제조하는방법은, 예를들면, Franzusoff et al., 1991, Meth. Enzymol. 194, 662-674에기재되어있다. 효모멤브레인부분을함유한효모멤브레인추출물의분획이사용되기도하며, 상기항원이효모멤브레인추출물의제조전에효모에의하여재조합되어발현되는경우, 중요한항원은추출물의일부이다. 효모는전기천공될수있으며, 또는다른상태에서는표적항원, 예컨대, 펩타이드와함께탑재된다. 모든효모균주는본발명의효모운반체를생산하는데사용할수있다. 효모는단세포성미생물로서하기의세클래스중하나에속한다 : 자낭균류, 담자균류및불완전균류. 병원성효모균주, 또는이들의비병원성돌연변이체가사용될수있으며, 예를들어, 비병원성효모균주가사용된다. 본명세서에기재된조성물및방법에사용된효모균주속은싸카로마이세스, 칸디다 ( 병원성이될수있음 ), 크립토코커스, 한세뉴라, 클루이베로마이세스, 피치아, 로도토루라, 스키조싸카로마이세스및야로위아를포함한다. 예를들어, 효모균주는싸카로마이세스, 칸디다, 한세뉴라, 피치아및스키조싸카로마이세스를포함한다. 예를들어, 효모균주는싸카로마이세스이다. 효모균주종은싸카로마이세스세레비시아, 싸카로마이세스칼스베르겐시스, 칸디다알비칸스, 칸디다케피르, 칸디다트로피칼리스, 크립토코쿤스라우렌티, 크립토코커스네오포르만스, 한세뉴라아노말라, 한세뉴라폴리모르파, 클루이베로마이세스프라질리스, 클루이베로마이세스락티스, 클루이베로마이세스마르시아누스변종. 락티스, 피치아파스트로리스, 로도토루라루브라, 스키조싸카로마이세스폼베, 및야로위아리폴리티카를포함한다. 다수의이러한종들은다양한아종, 형, 아형등을포함하며이들은모두전술한종의범위에포함된다는것을이해하여야한다. 예를들어, 효모종은 S. 세레비시아, C. 알비칸스, H. 폴리모르파, P. 파스트로리스및 S. 폼베이다. 예를들어, S. 세레비시아는상대적으로조작하기쉽고 " 일반적으로안전하다고알려짐 " 또는 "GRAS" 이기때문에식품첨가제용으로사용된다 (GRAS, FDA 제안규칙 62FR18938, 1997. 4. 17). 예를들어, 특히많은복제수로플라스미드를복제할수있는효모균주, 예컨대, S. 세레비시아 cir 균주가사용된다. 그밖의유용한균주가당해기술업계에알려져있다. 예를들어, 본발명의효모운반체는상기효모운반체및변이폴리펩타이드가운반되는, 예컨대, 수지상세포또는대식세포등의세포형에융합될수있으므로, 상기효모운반체및많은예에서상기항원이상기세포형으로더효율적으로운반되는효과가있다. 본명세서에서사용된, 효모운반체와표적화된세포형간의융합은 - 22 -
효모세포멤브레인, 또는이들의입자가표적화된세포형 ( 즉, 수지상세포또는대식세포 ) 의멤브레인과융합하여융합체를형성하는능력을나타낸다. 본명세서에서사용된융합체는세포융합에의하여생성된원형질의다핵집합물이다. 바이러스표면단백질 ( 일부 HIV 단백질포함 ) 및그밖의융합제 ( 예컨대, 난자와정자간의융합에관여하는것들 ) 의수는두멤브레인 ( 즉, 바이러스와포유류세포멤브레인또는포유류세포멤브레인 ) 간의융합을달성할수있는지를보여준다. 예를들면, 표면상에 HIV gpl20/gp41 이종항원을생성하는효모운반체는 CD4+ T-림프구와융합할수있다. 그러나, 바람직한일부환경하에서는, 상기효모운반체내로표적또는융합제모이어티가결합되는것을필요로하지않는다는것을염두해두어야한다. 효모운반체는수지상세포 ( 및그밖의세포, 예컨대, 대식세포 ) 에의해쉽게포섭된다는사실이알려졌다. <156> <157> <158> <159> <160> <161> <162> <163> <164> <165> <166> 효모운반체는효모계조성물내로제형화되며, 암또는감염이된또는그위험이있는개체에직접투여되거나또는당해기술분야의숙련자에게알려진다양한기법을사용한여먼저담체예컨대, 수지상세포내로체외탑재되어투여되는것을포함한다. 본명세서에서는포유류에투여하기위한하나이상의변이폴리펩타이드를포함하는효모운반체, 및이들을포함한조성물을제공한다. 예를들어, 상기조성물은하기의것들을하나이상포함한다 : i) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; ii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프를포함하는효모운반체 ; iii) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는미메토프와결합된효모운반체 ; iv) 하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프를암호화한핵산을포함하는효모운반체 ; 또는 v) 효모운반체및하나이상의변이폴리펩타이드, 돌연변이를포함하는이것의절편, 또는수지상세포에세포내탑재되는미메토프, 여기서, 상기변이폴리펩타이드는표적치료제및 / 또는예방제에반응하여하나이상의특이돌연변이를지닌채발생했거나발생한다고알려진것이다. 이러한조성물은하나, 전술한하나이상의변이폴리펩타이드의하나이상의면역원성도메인을포함하는둘, 소수, 다수, 또는복수의변이폴리펩타이드 ( 예컨대, 표 2에 HIV로표시된것들 ). 본명세서에서, 폴리펩타이드는 " 항원 " 을포함한다. 본명세서에서항원은, 단백질의일부분 ( 펩타이드, 단백질절편, 전장단백질 ) 을포함하며, 여기서상기단백질은자연발생되거나또는합성에의하여유도된, 세포성조성물 ( 전세포, 세포용해질또는분쇄된세포 ), 유기체 ( 전유기체, 용해질또는분쇄된세포 ), 탄수화물, 지질, 또는그밖의분자, 또는그들의일부분이며, 여기서상기항원은항원-특이면역반응 ( 체액성및 / 또는세포성면역반응 ) 을유발시킨다. 효모는자연적으로항원보강제-유사특성을지니며, 항원을포함하는다수의폴리펩타이드를발현하도록쉽게조작이가능하다는이점과함께, 많은면역자극복합체의미립자적특징을나타낸다. Lu et al., (2004) Cancer Research 64, 5084-5088에서는단일아미노산돌연변이가잠복된 Ras 종양단백질을발현하는종양에세포-매개면역반응을유발시킬수있는효모계면역치료법을개시하였다. 그결과로서단일아미노산돌연변이를보유한폴리펩타이드에대한면역치료를표적화한효모운반체및효모계시스템의능력을증명하였다. 따라서, 본명세서에서는약제에반응하여발생했거나발생한다고알려진변이폴리펩타이드 ( 들 ) 포함하는효모운반체및효모계조성물, 및상기변이폴리펩타이드에대한면역반응을유발시키기위한용도로이들을사용하는방법을제공한다. 예를들어, 상기면역반응은세포성면역반응이다. 예를들어, 상기면역반응은체액성면역반응이다. 다른예를들면, 상기면역반응은세포성및체액성모두이다. 추가적인예에서는, 상기효모운반체는원하는세포형에상기항원을선택적으로전달하도록조작되어있다. 또한, 본명세서에서는이염기성아미노산처리부위를지닌이종전구체단백질을생성할수있는효모균주를포함하는효모운반체를제공한다. 이러한효모균주는상기전구체단백질을하나이상의분할생성물단백질로정확하게처리할수있다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드는예컨대, ras 등의종양유전자에의하여암호화되거나, 또는예컨대, HIV, HCV 또는 HBV 등의바이러스에의하여암호화된다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드는종양관련항원또는 - 23 -
암세포에서발현된단백질이다. <167> <168> <169> <170> <171> <172> <173> <174> <175> 벡터의제조본명세서에서는변이폴리펩타이드와결합한예컨대, 효모운반체등의벡터를포함하는조성물을제공한다. 이러한결합은예컨대, 상기벡터, 예컨대, 재조합효모에의한상기폴리펩타이드의발현, 변이폴리펩타이드를벡터에도입, 상기변이폴리펩타이드에상기벡터의물리적부착, 및제형화를위한버퍼또는그밖의용액내에서상기벡터와변이폴리펩타이드의혼합을포함한다. 이러한방법들은당해기술분야의숙련자에게일상적인것이라고간주되는것들이다. 실례로써, 이하효모벡터를설명한다. 예를들어, 상기효모운반체제조에사용되는효모세포는변이폴리펩타이드를암호화한이종핵산분자에의하여형질전환되며, 상기폴리펩타이드는상기효모세포에의하여발현된다. 이러한효모는본명세서에서재조합효모또는재조합효모운반체로서나타내었다. 상기효모세포가이후무손상세포로서수지상세포내에탑재될수있으며, 상기효모세포는사멸되거나, 또는세포벽불완전제거효모, 세포질체, 고스트, 또는세포하입자의형성에의하여유도될수있으며, 그다음, 이들상기유도체는수지상세포내로탑재된다. 세포벽불완전제거효모는또한항원을발현하는재조합세포벽불완전제거균을제조하기위하여재조합핵산분자에의하여직접전달감염될수도있다 ( 즉, 상기세포벽불완전제거균은전효모로부터생산되고, 그이후전달감염된다 ). 본발명에따르면, 단리된핵산분자, 또는핵산서열은자연적으로결합된하나이상의성분이제거된핵산분자또는서열이다. 따라서, " 단리된 " 이라는용어는반드시핵산분자가정제된정도를반영한것은아니다. 예컨대, 효모운반체등의벡터를전달감염시키기에유용한단리된핵산분자는 DNA, RNA, 또는 DNA 또는 RNA 각각의유도체를포함한다. 분리된핵산분자는이중가닥또는단일가닥일수있다. 본발명에유용한단리된핵산분자는단백질또는본발명의조성물에유용한하나이상의에피토프를포함하는이것의절편을암호화한핵산분자를포함한다. 핵산분자는확산, 능동수송, 리포좀융합, 전기천공, 수조초음파파쇄, 및유전공학을포함하나이에한정되지않는당해기술분야에알려진방법에의하여예컨대, 효모운반체등의벡터내로형질전환될수있다. 효모운반체내로형질전환된핵산분자는하나이상의변이폴리펩타이드를암호화한핵산서열을포함할수있다. 이러한핵산분자는부분적또는전체적인암호화영역, 조절영역, 또는이들의조합을포함할수있다. 효모균주의이점은다수의핵산분자를담지하거나및다수의이종단백질을생산할수있는이들의능력에있다. 예를들어, 효모운반체에의하여생산되는다수의항원은일반적으로효모운반체로부터제조될수있는무수한항원, 및전형적으로는적어도 1 내지적어도약 5 또는그이상의범위, 약 2 내지약 5개의범위의항원이다. 효모운반체내에서핵산분자를암호화하는변이폴리펩타이드는전장단백질이되거나, 또는아미노산이결실 ( 즉, 절단형태의단백질 ), 삽입, 역위, 치환및 / 또는유도된 ( 즉, 글리세로포스파티딜이노시톨 (GPI) 앵커에의한아세틸화, 당화, 인함유, 구속화 ) 기능적으로동등한단백질이될수있으며, 따라서, 상기변형단백질은상기천연단백질의생물학적기능과유사한기능을보유한다 ( 또는필요하다면, 이들이천연단백질에비하여기능이증진되거나억제된다 ). 변형은, 예를들면, 무작위또는표적화된돌연변이발생에효과적인고전적또는재조합 DNA 기술을사용하여, 단백질을직접변형하거나또는상기단백질을암호화한핵산서열을변형하는것을포함하나이에한정되지않는기술에의하여달성될수있다. 벡터내의변이폴리펩타이드발현은당해기술분야에알려진기술을사용하여달성된다. 간략히언급하면, 숙주효모세포내로형질전환되는경우, 하나이상의소정의변이폴리펩타이드를암호화한핵산분자가발현벡터내로삽입되고, 이러한방법에의하여, 핵산분자의발현을구성하거나조절할수있도록하기위하여상기핵산분자가전사조절서열에효과적으로결합된다. 하나이상의변이폴리펩타이드를암호화한핵산분자는하나이상의전사조절서열에효과적으로결합한하나이상의발현벡터가될수있다. 본발명에의한재조합분자에있어서, 핵산분자상기벡터에호환되며, 및핵산분자의발현을조절하는예컨대, 전사조절서열, 번역조절서열, 복제원점, 및그밖의조절서열조절서열을포함하는발현벡터에효과적으로결합된다. 특히, 본발명에의한재조합분자는하나이상의전사조절서열에효과적으로결합하는핵산분자를포함한다. " 효과적으로결합된 " 이라는표현은핵산분자가전사조절서열에결합함으로써, 숙주세포내로전달감염 ( 즉, 형질전환, 형질도입또는전달감염 ) 되는경우, 상기분자가발현될수있다는것을의미한다. - 24 -
<176> <177> <178> <179> <180> <181> <182> <183> 생산되는단백질의양을조절가능한전사조절서열은전사의개시, 신장, 및종결을조절하는서열을포함한다. 특히중요한전사조절서열은예컨대, 프로모터및상방활성화서열등의전사개시를조절하는것들이다. 인헨서로나타내는다수의상방활성화서열 (UAS) 이알려져있으며, 벡터에사용될수있다. 벡터내로의핵산분자의전달감염은확산, 능동수송, 수조초음파파쇄, 전기천공, 미세주입, 지질주입, 흡착, 및원형질융합을포함하나이에한정되지않는세포내로핵산분자를투여하는방법에의하여수행될수있다. 전달감염된핵산분자는당해기술분야의숙련자에게알려진기술을사용하여크로모좀내로결합되거나또는염색체외벡터상에유지될수있다. 효모의경우, 효모세포질체, 효모고스트, 및하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획은또한무손상효모미생물또는세포벽불완전제거효모를소망하는핵산분자로전달감염시키고, 그내부에서항원을생산하도록하며, 그다음추가적으로당해기술분야의숙련자에게알려진기술을사용하여미생물또는세포벽불완전제거균을조작하여소망하는항원을포함하는세포질체, 고스트또는하위세포효모멤브레인추출물또는이것의분획을생산함으로써재조합하여생산할수있다. 재조합벡터의생산및상기벡터에의한상기변이폴리펩타이드의발현의효과적인조건은상기벡터가배양되는효과적인배지를포함한다. 효과적인배지는전형적으로동화성탄수화물, 질소및인산염원, 및적절한염분, 미네랄, 금속및기타양분, 예컨대, 비타민및성장인자등을포함하는수성배지이다. 상기배지는상기배지는복합양분이포함될수있으며또는최소배지로정의될수있다. 본발명의벡터는생물반응기, 엘렌메이어플라스크, 시험관, 마이크로티터판, 및페트리플레이트를포함하나이에한정되지않는다양한용기에서배양될수도있다. 배양은효모균주에적절한온도 ph 및산소함유량하에서수행된다. 이러한배양조건은당해기술분야의전문지식의범위내에있다 ( 예를들면, Guthrie et al. (eds.), 1991, Methods in Enzymology, vol. 194, Academic Press, San Diego를참조 ). 본발명의예에서는, 벡터내의변이폴리펩타이드의발현의또다른태양으로써, 예컨대, 효모운반체등의벡터는상기변이폴리펩타이드와함께세포내로탑재된다. 결과적으로, 현재상기변이폴리펩타이드를세포내에포함한상기벡터는환자에게투여될수있거나또는담체 ( 예컨대, 수지상세포 ( 하기한바와같다 ) 내로탑재된다. 효모운반체에관하여살펴보면, 변이폴리펩타이드는당해기술분야에알려진기술, 예컨대, 확산, 능동수송, 리포좀융합, 전기천공, 포식, 냉 / 해동주기법및수조초음파파쇄에의하여본발명의효모운반체내로직접적으로삽입될수있다. 변이폴리펩타이드와함께직접적으로탑재되는효모운반체는생산된뒤, 그러나수지상세포내로탑재되기전에항원과함께탑재될수있는무손상효모, 및세포벽불완전제거균, 고스트또는세포질체를포함한다. 다른실시태양에서는, 무손상효모는항원과함께탑재되고, 그다음, 세포벽불완전제거균, 고스트, 세포질체, 또는세포하입자는이들로부터제조될수있다. 적어도 1, 2, 3, 4에서부터수백수천의정수전체까지의어떠한수의항원도효모운반체에탑재할수있는데, 이러한것들은미생물의탑재, 예를들면포유류종양세포, 또는이들의부분의탑재에의하여제공된다. 다른예에서, 변이항원은예컨대, 효모운반체등의상기벡터에물리적으로결합된다. 상기변이폴리펩타이드를상기벡터에물리적으로부착시키는것은당해기술분야의적합한방법에의하여수행되는데, 여기에는항체또는다른결합파트너를이용하여상기변이폴리펩타이드를상기벡터의외부표면에화학적가교결합, 또는상기변이폴리펩타이드를상기벡터의외부표면에생물학적결합을포함하나이에한정되지않는공유및비공유결합을포함한다. 화학적가교결합은, 예를들면, 글루타르알데히드결합, 광친화표지, 카르보디이미드의처리, 이황화결합을형성할수있는화학약품처리및당해기술분야에표준인그밖의가교결합화학약품처리를포함하는방법에의하여달성된다. 다른실시태양에서는, 효모의경우, 화학약품은상기효모운반체와접촉하여효모멤브레인의지질이중층또는세포벽의조성의전하를변화시키므로써효모의외부표면이용해되거나또는특정전하특성을지닌항원과결합하기쉽게한다. 표적화제예컨대, 항체, 결합펩타이드, 수용성수용체, 및그밖의리간드등은융합단백질로서변이항원에결합할수도있고, 또는그렇지않은경우항원을상기벡터에결합하기위하여항원에결합할수도있다. 또다른예에서는, 상기벡터와변이폴리펩타이드는더수동적이면서비특이또는비공유결합기전, 예컨대, 버퍼또는다른적절한제형내에서상기벡터및상기항원을함께서서히혼합시키는것에의하여서로결합된다. 본발명의예를들어보면, 벡터및변이항원은양자모두예컨대, 수지상세포또는대식세포등의담체내로세포내탑재되어면역원성조성물을형성한다. 수지상세포는당해기술분야에알려진모든수지상세포가될수있다. 수지상세포는단핵구및림프구계통의세포이며, 가장강력한항원제시세포 (APC) 가되고항원-특 - 25 -
이 T 세포면역반응을자극하는것으로알려졌다. 성숙한수지상세포는전형적으로다음의세포표면마커표현형을지님으로써식별된다 : MAC3 -, CD80 +, CD86 +, CD401 w, CD54 +, MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 II, 및 FITC-덱스트란포획이가능하다. 본발명의상기조성물에사용된상기수지상세포은예를들어, 상기조성물을투여하는환자로부터분리된것 ( 즉, 자가세포 ) 이다. 수지상세포는골수또는말초혈액으로부터분리될수있다. 이러한세포는, 예를들면, 말초혈액단핵구로부터, 과립구대식세포콜로니-자극인자, 예컨대, IL-4, 및 TNF-α의존재하에배양하여생성할수있다. 수지상세포를분리하거나생성하는다른방법은당해기술분야에알려져있다 ( 예를들면, Wilson et al., 1999, Immunol 162 : 3070-8 ; Romani et al, 1994, J. Exp Med 180 : 83-93; Cauxetal., 1996, J. Exp Med 184 : 695-706; 및 Kiertscher et al., 1996, J Leukoc. Biol 59: 208-18를참조 ). <184> <185> <186> <187> 수지상세포가항원을효과적으로토착 (native) T 세포에제시하기위하여, 미성숙수지상세포는 MHC 및보조자극분자의상향조절에의하여정의된바와같이활성화되어성숙되어야한다. 효모는톨-유사수용체 (TLR), 만노스중합체, 글루칸및덱틴수용체를통하여수지상세포에대한강력한활성화자극을제공 ( 예를들면, Takeda K. 및 Akira S., 2005, International Immunology, vol. 17: 1-14를참조 ) 하여보조자극면역수용체, MHC 분자를상향조절하고, 면역제어사이토카인을분비시킨다. 이와함께, 상기효모가상기수지상세포에탑재되기전에, 항원과함께사전탑재되는경우, 흡수되길바라는분리되고집중된패키지내에서항원을수지상세포에제공하고, 이로써, 처리과정에사용할수있는항원의양이효과적으로증가한다. 당해기술업계의숙련자들은추가적인벡터를수지상세포의탑재에사용할수있다. 두성분을탑재하는다양한형태는이하에서좀더상세히기술된것에의하여수행될수있다. 본명세서에서사용된 " 탑재된 " 이라는용어및이의활용형태는성분 ( 즉, 상기효모운반체및 / 또는항원 ) 이세포 ( 즉, 수지상세포 ) 내로삽입, 도입, 또는출입되는것을나타낸다. 성분을세포내로탑재한다는것은상기성분을세포의세포내분획 ( 즉, 형질막을통하여및최소한상기세포질, 파고좀, 라이소좀, 또는세포안의세포내공간 ) 으로삽입또는도입하는것을나타낸다. 성분을세포내로탑재하는것은상기성분이세포내로강제주입되거나 ( 즉, 전기천공에의함 ) 또는상기성분이실질적으로어떠한처리 ( 즉, 포식 ) 에의하여세포내로들어갈수있는환경 ( 즉, 세포와접촉하거나또는근접한 ) 에놓이게되는어떠한기술도참고할수있다. 탑재기술은확산, 능동수송, 리포좀융합, 전기천공, 포식, 및수조초음파파쇄를포함하나이에한정되지않는다. 예를들어, 수지상세포에상기효모운반체및 / 또는항원을탑재하는수동적기전이사용되었다. 이러한수동적기전은상기효모운반체및 / 또는항원을상기수지상세포를포식하는것을포함한다. 효모의경우, 상기효모운반체및상기변이폴리펩타이드는상기수지상세포내로거의같은시간에또는동시에탑재될수도있으며, 일성분이세포내로탑재되고그다음에소정시간의경과후다른성분이탑재되는것도가능하다. 예를들어, 상기효모운반체및상기변이폴리펩타이드는상기수지상세포에탑재되기전에서로결합된다. 예를들면, 변이폴리펩타이드또는여타의효모운반체및변이폴리펩타이드의복합체또는혼합물을발현하는재조합효모운반체는수지상세포내로탑재될수있다. 상기수지상세포내로도입 ( 탑재 ) 될경우상기수지상세포는추가적으로유리된변이폴리펩타이드, 즉, 효모운반체와직접결합하지않는폴리펩타이드를탑재할수있다. 유리폴리펩타이드에효모운반체-항원복합체를부가하는것에의하여상기폴리펩타이드에대한상기면역반응을추가적으로증진시킬수있다. 상기수지상세포내로탑재된상기유리폴리펩타이드 ( 들 ) 이상기효모운반체에의하여발현된것, 상기효모운반체내로탑재된것, 또는상기효모운반체와결합된것과동일할필요는없다. 이러한방법으로, 표적세포또는바이러스에대한상기면역반응이증진될수있다. 예를들어, 상기변이폴리펩타이드또는이들을암호화한핵산을포함하는조성물은본명세서에기재된것들을포함하는, 하나이상의항원보강제및 / 또는담체를포함하나, 이들이반드시필요한것은아니다. 항원보강제는전형적으로특이항원에대한동물의상기면역반응을일반적으로증진시키는물질이다. 적합한항원보강제는, 본명세서에기재된 TLR 작용제, CpG 서열 ( 예를들면, Krieg et al. WO 96/02555를참조할것 ), 단일가닥 RNA, 이중가닥 RNA, 프로인트항원보강제, 그밖의박테리아세포벽성분 (LPS, 플라젤린을포함 ) 알루미늄계염, 칼슘계염, 실리카, 폴리뉴클레오타이드, 개량독소, 혈청단백질, 바이러스외피단백질, 그밖의박테리아-유도제제, 감마인터페론, 블럭공중합체항원보강제, 예컨대, 헌터스티터맥스항원보강제 (CytRx.TM., Inc. Norcross, Ga.), 리비항원보강제 (Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont. 로부터구득 ), 및사포닌및이들의유도체, 예컨대, Quil A (Superfos Biosector A/S, Denmark로부터구득 ) 를포함하나이에한정되지않는다. - 26 -