J Korean Soc Food Sci Nutr 한국식품영양과학회지 (12), 1662~1667(11) http://dx.doi.org/1.3746/jkfn.11..12.1662 검정콩껍질유래안토시아닌의 RBL-2H3 세포에서탈과립화와사이토카인생성저해효과 정미자 1 하태정 2 최하나 1 이지선 1 박용일 1 1 가톨릭대학교생명공학과 2 농촌진흥청국립식량과학원기능성작물과 Inhibitory Effects of Anthocyanins Isolated from Black Soybean (Glycine max L.) Seed Coat on Degranulation and Cytokine Generation in RBL-2H3 Cells Mi Ja Chung 1, Tae Joung Ha 2, Ha Na Choi 1, Ji Sun Lee 1, and Yong Il Park 1 1 Dept. of Biotechnology, The Catholic University of Korea, Gyeonggi-do 4-743, Korea 2 Dept. of Functional Crop, National Institute of Crop Science (NCIS), Rural Development Administration (RDA), Gyeongnam 627-3, Korea Abstract Anthocyanins belong to a group of flavonoid compounds and are well known for their various health beneficial effects, which include antioxidative activities. Among them, the major anthocyanins isolated from seed coat of black soybean (Glycine max L.) were previously characterized as glycosides containing glucopyranose. Asthma is an allergic disease that is strongly associated with various immune cells, including basophils and mast cells. Eosinophils, basophils, and mast cells play important roles in allergic asthma through the release of inflammatory mediators such as asthma-specific T-helper 2 (Th2) cytokines and subsequent amplification of asthma symptoms via degranulation. Rat basophilic leukemia RBL-2H3 cells are the most common in vitro models for evaluating allergic reactions. In this study, we examined the effects of anthocyanin from seed coat of black soybean on antigen-stimulated degranulation and Th2 cytokine production in RBL-2H3 cells. Cell degranulation was evaluated by measuring the release of β-hexosaminidase. β-hexosaminidase release and Th2 cytokine production in RBL-2H3 cells was much higher upon stimulation with IgE-antigen complex than those in untreated control cells. Anthocyanins significantly suppressed IgE-antigen complex-induced degranulation of RBL-2H3 cells and inhibited IgE-antigen complex-mediated interleukin (IL)-4, IL-13, and tumor necrosis factor α (TNF-α) production in RBL-2H3 cells. These findings suggest that anthocyanins from seed coat of black soybean effectively inhibit allergic reactions and may have beneficial effects against allergic asthma. Key words: black soybean, anthocyanins, cytokines, RBL-2H3 cells, allergy 서론급속한산업발달에의한환경오염과바쁜현대인들은인공합성물질이함유되어있는다양한가공식품섭취로인해알레르기 (allergy) 를유발시키는알레르겐 (allergen) 이노출된환경에살아가고있다. 천식은면역글로불린 (immunoglobulin E, IgE) 관련 type I 알레르기반응으로 T helper 2(Th2) 세포에의해서조절되며비만세포, 호염기구그리고호산구가중요한역할을하는염증반응이다. 그발생기전을알아보면, 먼저 IgE 항체생성과감작의단계이며, 외부로부터천식의원인물질인항원이들어오면이항원을제거하기위해대식세포가활성화되고, 이대식세포는항체를생산하도록 B 세포를자극하여항원 특이성 IgE를생산한다. 생성된 IgE 항체는비만세포나호염기구의세포막표면에있는 FcƐRI 수용체에항원과결합되면비만세포및호염기구가활성화되어, 탈과립이일어나초기천식반응을유발하게된다 (1). 이후항원에노출된 B 세포는 CD4 T 세포를자극하여 Th2 세포로분화되고, 분화된 Th2 세포는 Interleukin(IL)-4, 5, 6 그리고 13 등과같은사이토카인등여러가지화학적매개물질이유리하여호산구를자극하고후기알레르기성기도반응인천식을유발하게된다 (2,3). IL-4는 B 세포를자극하여 IgE 생산을촉진시키고, 염증세포들을자극하여염증매개물질들을분비시켜기관지과민성과기도폐쇄를일으켜천식증상을일으키며, IL-13은 IL-4와동등한생물학적역할을수행한다 (4). 전염증성사이 Corresponding author. E-mail: yongil382@catholic.ac.kr Phone: 82-2-2164-4512, Fax: 82-2-2164-4846
검정콩껍질유래안토시아닌의 RBL-2H3 세포에서탈과립화와사이토카인생성저해효과 1663 토카인 (proinflammatory cytokines) tumor necrosis factor α(tnf-α) 는천식유발모델마우스의폐조직, 기관지폐포세척액 (bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 및 rat basophilic leukemia RBL-2H3 세포를이용한알레르기모델에서증가하였다 (5,6). 따라서알레르기성천식을예방, 개선및치료효과를가진천연물탐색에 IL-13, IL-4 그리고 TNFα가중요한지표로사용되고있다. 알레르기성질환으로는천식외에비염, 아토피성피부염등이있으며이들질병들은해마다증가하고있어, 심각한사회문제로대두되고있으나이들질병들을완전하게치료할수있는치료제는아직개발되지않았고, 시판되고있는치료제들중일부는부작용들이알려져있다 (5). 따라서이들질병들을예방, 개선및치료할수있고부작용을최소화할수있는천연물유래항알레르기천연소재발굴에대한연구들이활발하게진행되고있다 (6,7). 안토시아닌 (anthocyanins) 은검정콩을비롯한식품의꽃, 과실, 줄기, 잎, 뿌리등에존재하는수용성색소배당체 (glucoside) 로안토시아닌과결합된당의종류와아실기의종류및결합위치에따라수백종으로구분되며그생리활성도차이가있다 (8). 안토시아닌은장관에서의흡수도매우용이하며노화억제작용, 항균작용, 돌연변이성억제작용, 강력한항산화력에의한폐에서급성염증개선작용등이알려져있다 (8,9). 안토시아닌의다양한생리활성은보고되었지만검정콩껍질에서분리된안토시아닌의항알레르기효과에대해서는불명확하다. 따라서본연구에서는검정콩껍질에서분리한안토시아닌의항알레르기효과및분자생물학적기전을밝히기위하여 IgE-항원복합체자극에의해활성화된 rat basophilic leukemia RBL-2H3 세포에서탈과립화및천식관련사이토카인 (IL-4, IL-13 그리고 TNF-α) 발현억제효과를측정하여항알레르기효과와관련건강기능식품, 의약품등에검정콩껍질에서분리한안토시아닌이이용될수있을지그가능성을살펴보고자한다. 재료및방법시료의추출및분석본실험에사용된안토시아닌은농촌진흥청국립식량과학원 [National Institute of Crop Science(NICS)] 에의해품종개량한검정콩 [Glycine max(l.) Merr., cv. Cheongja 3] 껍질로부터 Lee 등 (1) 에의해서술된방법을사용하여분리하였다. 분리된안토시아닌은 cyanidin-3-o-glucoside(68.3 %), delphinidin-3-o-glucoside(25.2%) 및 petunidin-3-oglucoside(6.5%) 가함유되어있는혼합물이고그들의순도와조성은 HPLC로분석하였다 (1). DPPH 라디칼소거활성측정 DPPH 라디칼소거능은 Chung 등 (11) 의방법에의하여일정농도의안토시아닌과 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 용액을가하여잘혼합한다음 37 o C에서 3분간반응시킨후 517 nm에서흡광도를측정하였다. DPPH 라디칼소거활성은대조구에대한시료첨가구의흡광도를비교하여 (1-시료의흡광도 / 대조구의흡광도 ) 에의하여 % 로나타내었다. 세포배양 RBL-2H3세포는 Korea Cell Line Bank(Seoul, Korea) 에서구입하여 1% fetal bovine serum(gibco-brl, Grand Island, NY, USA) 과 1% penicillin-streptomycin을넣은 Eagle s minimum essential medium(mem; Gibco-BRL) 배양액으로 5% CO 2 가공급되는배양기에서 37 o C 조건으로배양한다. 세포생존율측정 RBL-2H3 세포는 96-well plates에 1 1 4 cells/ml의밀도로깔아주고 24시간동안배양한후세포를무혈청배지로세척하고안토시아닌처리 12시간전에 FBS가무첨가된배지로교체하였다. 세포생존율은 Huang 등 (12) 의방법과같이처리한후 MTT[3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide] 환원방법을이용하여측정하였다. Cellular antioxidant activity assay(caa assay) 세포내활성산소종 (reactive oxygen species, ROS) 의양을측정하는방법으로 ROS 수준은 2',7'-dichlorofluorescin diacetate(dcfh-da) probe를이용하여측정하였다. DCFH- DA는세포막을통과하여세포질에서세포내 esterase에의해비형광물질인 dichlorofluorescin(dcfh) 으로가수분해된다. DCFH는세포내활성산소종에의해형광을띄는 DCF로전환된다 (13). DNP-IgE(.5 μg/ml) 를함유한배지로 24시간배양하였고, Siraganian buffer(119 mm NaCl, 5 mm KCl, 25 mm PIPES, 5.6 mm glucose, 1 mm CaCl 2,.4 mm MgCl 2,.1% BSA, ph 7.2) 로 3회세척한후 Siraganian buffer를넣고 1분간배양한다음, 5, 1, 25 그리고 5 μg/ml의 anthocyanins이함유된 MEM로 2시간배양하였다. Siraganian buffer로세포를 3회세척한후 2시간동안 DNP-HSA(2 μg/ml) 를처리하였다. 배지를제거한후 1 μm DCFH-DA가함유된 PBS를넣어 37 C에서 45분동안인공배양시켰다. PBS로남아있는 DCFH-DA probe를제거한후 PBS를넣어 5분간 37 o C에서반응시킨후 DCF의형광은 fluorescence reader(biotek, Winooski, VT, USA) 로파장 495 nm(excitation) 와 525 nm(emission) 에서측정하였다. DCF 형광광도는안토시아닌과 DNP-BSA를처리하지않는대조군을 % 로하였을때상대적인양을계산하였다. β-hexosaminidase 측정및 RT-PCR 를위한시료준비 β-hexosaminidase 방출정도는 Huang 등 (12) 의방법을
1664 정미자 하태정 최하나 이지선 박용일 일부변경하여측정하였다. 즉, 24-well plates에 RBL-2H3 세포 (2 1 5 cells/ml) 를 24시간동안배양한후세포를무혈청배지로세척하고 FBS가무첨가된배지로교체하여 2시간배양하였다. DNP-IgE(.5 μg/ml) 를함유한배지로 24시간배양하였고, Siraganian buffer(119 mm NaCl, 5 mm KCl, 25 mm PIPES, 5.6 mm glucose, 1 mm CaCl 2,.4 mm MgCl 2,.1% BSA, ph 7.2) 로 3회세척한후 Siraganian buffer를넣고 1분간배양한다음, 5, 1, 25 및 5 μg/ml의안토시아닌이함유된 MEM로 2시간배양하였다. Siraganian buffer로세포를 3회세척한후 2시간동안 DNP-HSA(2 μg/ ml) 를처리하였다. 각 plate를 1분간 ice bath에서둠으로써반응을종결시켰고상층액은 β-hexosaminidase 방출정도를확인하기위해사용하였으며세포는 RT-PCR를위한시료로사용하였다. 96-well plate에상층액 μl와 substrate buffer[2 mm 4-p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide in.1 M sodium citrate buffer(ph 4.5)] μl를넣어섞은후 37 o C에서 1시간동안반응시켰다. 반응정지를위해.1 M Na 2CO 3/NaHCO 3(pH 1.) 용액 μl를더한후 microplate reader(versamax, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) 를이용하여 5 nm에서흡광도를측정하였다. Total RNA 추출및 RT-PCR 24-well plates에서배양한 RBL-2H3 세포에 TRIzol Reagent(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 를.5 ml씩가하여완전히마쇄시킨후 Invitrogen사에서제공한제품사용설명서에따라 RNA를추출하였다. 본연구에 First-stand cdna를생산하기위하여 Power cdna synthesis kits (Intron, Seongnam, Korea) 와 oligo(dt) 15 primer(5 μg/ ml) 를이용하여 Intron사에서제공한제품사용설명서에따라 cdna를합성하였다. PCR를합성한 cdna 1 μl와각 primer 2 μl(forword와 reverse, 1 pmol/μl) 를 Maxime PCR PreMix kit(intron) 에더한후 RNase-free water 17 μl를넣어최종부피 μl로맞춘후 PCR를수행하였다. 본실험에사용한 primers는아래와같다. TNF-α, F, 5'- CGGAATTCGGCTCCCTCTCATCAGTTC 그리고 R, 5'- GCTCTAGACCCTTGAAGAGAACCTGGG; IL-4, F, 5'- ACCTTGCTGTCACCCTGTTC and R, 5'-TTGTGAGC- GTGGACTCATTC; and IL-13, F, 5'-GCTCTCGCTT- GCCTTGGTGGTC 그리고 R, 5'-CATCCGAGGCCTT- TTGGTTAGAG, GAPDH(F, 5'-ACCACAGTCCATGC- CATCAC 그리고 R, 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA) 였다. TNF-α, IL-4 그리고 IL-13의 PCR 조건을보면, 94 o C 에서 2분, 94 o C에서 초, o C에서 3초, 72 o C에서 초, 72 o C에서 5분이었고, 내부표준유전자로사용한 GAPDH의 annealing 온도는 55 o C였다. PCR 산물은.2% ethidium bromide가첨가된 2% agarose gel에 V에서 3시간전기영동한후자외선광으로유전자발현정도를알아보았다. Cell viability (%). 5 1 25 5 Anthocyanins (µg/ml) Fig. 1. Cytotoxic effect of anthocyanins on RBL-2H3 cells. The data are the means±sd (n=4). 그밴드의강도를 SigmaGel(Jandel Scientific, San Rafael, CA, USA) 소프트웨어에의해분석정량하였다. 통계처리 실험에서얻어진결과의통계적유의성은 GraphPad InStat Version 3.5(GraphPad, San Diego, CA, USA) 통계 package를이용하여평균 ± 표준오차로표시하였고, 각농도평균차의통계적유의성을 Tukey-Kramer multiple comparisons test에의해검정하였다. 결과및고찰 세포독성및세포내 ROS 생성에안토시아닌이미치는영향세포내세포독성을측정한결과, 5, 1, 25, 5 및 μg/ml 안토시아닌을처리했을때세포독성이나타나지않았다 (Fig. 1). 따라서, 5, 1, 25 및 5 μg/ml를계속되는실험에사용하였다. RBL-2H3 세포내에항원 (DNP-HSA) 처리시 ROS 생산이유도되었고, 안토시아닌처리시 ROS 생성이억제되었다 (Fig. 2A). 한편, 검정콩껍질에서분리된안토시아닌이 DPPH 라디칼소거작용이있는지확인한결과안토시아닌은농도의존적으로 DPPH 라디칼을소거하였다 (Fig. 2B). RBL-2H3 세포내에서 IgE+DNP-HSA와같은다양한자극에반응하여 ROS가발생할수있다 (13). Han 등 (13) 은구아바에틸아세테이트분획물이 DNP-HSA에의해유도된 ROS 생성을현저하게줄였다고보고하였다 (13). 카마로사 (Camarosa) 종의딸기로부터분리한안토시아닌은항산화효과가있고 (14), 검정콩껍질에서분리된안토시아닌역시 DPPH radical 소거작용, LDL 산화억제, thiobarbituric acid reactive substances(tbars) 생성억제효과가있는것으로알려져있으나 (15), 세포내 ROS를감소할수있는지에대한연구는전무하다. 본연구에서안토시아닌처리는항원에의해증가된세포내 ROS를감소시켰고, 이는검정콩껍
. 검정콩껍질유래안토시아닌의 RBL-2H3 세포에서탈과립화와사이토카인생성저해효과 1665 DCF fluoresence (% of control). DPPH radical scavenging ability (%) 1 1 1 A Antho Antho + Antho 5 + Antho 1 + Antho 25 + Antho 5 + DNP-HSA DNP-HAS DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HSA DNP-HAS Antocyanins (Antho) (µg/ml) B 25 5 25 5 Anthocyanins (µg/ml) Fig. 2. Effects of anthocyanins on antigen-induced intracellular ROS production (A) in RBL-2H3 cells and DPPH radical scavenger activity (B). The data are the means±sd (n=4). p<.5 vs. positive control (DNP-HSA); p<.1 vs. positive control (IgE+DNP-HSA); p<.1 vs. control. 질에서분리한안토시아닌의강한항산화효과에기인된것으로생각되며이와같은항산화력은알레르기질환개선에유익한영향력을미칠것으로생각된다. 안토시아닌이 β-hexosaminidase 방출에미치는영향 검정콩껍질에서분리한안토시아닌이 RBL-2H2 세포내 β-hexosaminidase 방출에미치는영향력을 Fig. 3에나타내었다. IgE 감작후 DNP-HSA 처리는현저하게 β-hexosaminidase 방출을증가시켰고, 이들증가는안토시아닌처리에의해농도의존적으로 β-hexosaminidase 방출을억제하였으며 5 μg/ml 안토시아닌처리에의해 43.8% 감소하였다 (Fig. 3). 항천식효과를알아보기위하여 IgE로부터감작된비만세포에항원을처리하여활성화된비만세포에서유리된히스타민의양을측정하였으나이방법은비만세포에서히스타민농도가매우낮으므로세포내많이함유되어있고히스타민과함께분비되는 hexosaminidase 활성을측정함으로써탈과립정도를알수있다 (16). 비만세포 (mast cells) 와호염기세포 (basophils) 는고친화성 (high-affinity) IgE 수용체인 FcεRI를가지고있고히스타민 (histamine) 과여러가지사이토카인 (cytokines) 과같은염증매개체 (inflammatory Sescetion of β-hexosaminidase. (% of control). Antho Antho + Antho 5 + Antho 1 + Antho 25 + Antho 5 + DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA Fig. 3. Effect of anthocyanins on β-hexosaminidase release in IgE-antigen complex-stimulated RBL-2H3 cells. The data are the means±sd (n=4). p<.1 vs. positive control (DNP- HSA); p<.1 vs. positive control (IgE+DNP-HSA). mediators) 를방출하여알레르기질환발병에중요한역할을한다 (17). 따라서항알레르기기전연구에서비만세포와유사한기전을가진 rat basophilic leukemia RBL-2H3 세포를모델로많이사용하고있으며, Vo 등 (6) 과 Kato 등 (18) 은 RBL-2H2 세포내탈과립및사이토카인생성량을측정하여알레르기염증반응억제에의한항알레르기효과를가진천연물질을탐색하였다. RBL-2H2 세포에쑥으로부터분리된 eupatilin과 jaceosidin 처리는 IgE-DNA-HSA 복합체에의해유도된 β-hexosaminidase 분비를현저하게억제하였고 (7), RBL-2H3 세포에키토올리고당 (chitoologosaccharides) 을처리했을때 calcium ionophore A23187에의해증가된 β-hexosaminidase 과 histamin 분비를현저하게감소하였다 (6). 본연구결과안토시아닌도이들연구과유사한경향을나타내었다. 세포의탈과립정도를알수있는 histamin과 β-hexosaminidase 방출저해효과를가진천연소재발굴은항알레르기신약개발및건강기능식품개발을가능하게할수있을것이다 (6,16). 본연구결과검정콩껍질에서분리된안토시아닌은탈과립화를억제함으로써항알레기기효과를나타나는신소재임을알수있었다. 안토시아닌이사이토카인발현에미치는영향 IgE-항원 (DNA-HSA) 에의해활성화된 RBL-2H3 세포내안토시아닌처리가 IL-4, IL-13 그리고 TNF-α 발현에미치는영향은 Fig. 4와같다. IgE에의해감작된 RBL-2H3세포에 DNA-HSA를처리했을때 IL-4, IL-13 그리고 TNF-α mrna 발현이현저하게증가하였고, 안토시아닌처리는이들사이토사인발현을현저하게감소시켰다. 5 μg/ml 안토시아닌을처리했을때 IL-4, IL-13 그리고 TNF-α mrna 수준이 IgE-DNA-HSA 복합체만처리한군 (1배) 과비교하여각각.7,.7,.2배를나타내었다. Vo 등 (6) 과 Matsuda 등 (17) 은 DNP-HSA 또는 calcium
1666 정미자 하태정 최하나 이지선 박용일 Fold-induction of IL-4 mrna. Fold-induction of IL-3 mrna. Fold-induction of TNF-α mrna. 1.2 1.8.6.4.2 1.4 1.2 1.8.6.4.2 1.4 1.2 1.8.6.4.2 A Antho Antho + Antho 5 + Antho 1 + Antho 25 + Antho 5 + DNP-HAS DNP-HSA DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS B Antho Antho + Antho 5 + Antho 1 + Antho 25 + Antho 5 + DNP-HAS DNP-HSA DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS C Antho Antho + Antho 5 + Antho 1 + Antho 25 + Antho 5 + DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS DNP-HAS DNP-HSA DNP-HSA DNP-HAS DNP-HSA DNP-HAS Fig. 4. Effect of anthocyanins on mrna expression of the IL-4, IL-13 and TNF-α. The data are the means±sd (n=3). p<.5; p<.1; p<.1 vs. positive control (IgE+DNP- HSA). The amount of IL-4, IL-13 and TNF-α mrna in each sample was normalized to the amount of GAPDH. The fold-induction of each mrna species was calculated as the ratio of the level of mrna in treated cells to that of the corresponding mean value in control cells. ionophore A23187에의해활성화된 RBL-2H3 세포에서 TNF-α, IL-4 그리고 IL-13 mrna가현저히증가하였다고하였는데본연구결과와같은경향을나타내었다. 쑥에서분리된 eupatilin과 jaceosidin 처리가탈과립및알레르기관련사이토카인 (TNF-α 그리고 IL-4) 의발현감소를나타내어항알레르기효과를증명함으로써, eupatilin과 jaceosidin이천식과같은알레르기질병에활용될가능성을제시하였다 (7). 플라보노이드의일종인 sulfuretin은천식모델마우스의 BALF에서 TNF-α와 IL-13을감소시켰고알레르기기도염증감소효과를나타내었다고보고하였으며 (19), 도라지물추출물은천식동물모델의 BALF내 IL-4, IL-13 그리고 TNF-α 생성을억제시켰고항염증효과가있었다 (). 따라서본연구결과검정콩껍질에서분리한안토시아닌처리에의한 IL-4, IL-13 그리고 TNF-α의발현억제는염증반응관련알레르기성천식을개선및예방할수있을것을시사하고있다. 본연구결과검정콩껍질에서분리된안토시아닌은 β- hexodaminidase 방출및사이토카인생성을현저하게억제하였으므로항알레르기효과를나타내는건강기능식품개발등다양한산업적용도로사용가능할것으로생각된다. 요약안토시아닌 (anthocyanins) 은플라보노이드에속하고항산화활성들을포함한그들의다양한건강유익성에대해알려져있다. 그들중검정콩껍질에서분리한주요안토시아닌은 glycopyranose를함유하고있는배당체이다. 천식은호염기성세포 (basophils) 와비만세포 (mast cells) 를포함한다양한면역세포와관련된알레르기관련질병이다. 호산구 (eosinophils), 호염기성세포, 비만세포는탈과립화에의한천식-특이적보조 2(T-helper 2) 사이토카인분비그리고계속해서일어나는증폭과같은염증을일으키는매개체의증가를통해알레르기천식 (allergic asthma) 에서중요한역할을한다. 흰쥐호염기성백혈병 (rat basophilic leukemia) RBL-2H3 세포는알레르기반응을측정하기위해가장일반적으로사용되는 in vitro 모델이다. 본연구에서는검정콩껍질안토시아닌이항원으로자극한 RBL-2H3 세포에서탈과립그리고 Th2 사이토카인생산에미치는효과를조사하였다. 세포탈과립은 β-hexosaminidase의방출을검출함으로써평가하였다. IgE-항원복합체로자극한 RBL-2H3 세포내 β-hexosaminidase 방출과 Th2 사이토카인생산이무처리군의그것과비교하여더높았다. 안토시아닌은 RBL- 2H3 세포의 IgE-항원복합체유도탈과립을현저하게억제시켰고 RBL-2H3 세포내 IgE-항원복합체-매개체 interleukin(il)-4, IL-13 그리고 TNF-α 생산을저해하였다. 이러한결과는검정콩껍질유래안토시아닌이알레르기반응
검정콩껍질유래안토시아닌의 RBL-2H3 세포에서탈과립화와사이토카인생성저해효과 1667 (allergic reaction) 을현저히저해하는효과가있음을보였고, 이들안토시아닌이향후알레르기천식을억제하거나개선하는데유용한물질로사용될가능성이있을것으로판단되었다. 감사의글 이논문은농촌진흥청의공동연구사업 (Project No. PJ718611) 과차세대바이오그린 21사업 ( 과제번호 : PJ718611), 11 가톨릭대학교교비연구비의지원으로이루어졌으며이에감사드립니다. 문 1. Fels AO, Cohn ZA. 1986. The alveolar macrophages. J Appl Physiol : 355-369. 2. Larche M, Robinson DS, Kay AB. 3. The role of T lymphocytes in the pathogenesis of asthma. J Allergy Clin Immunol 111: 45-463. 3. Romagnami S. 1. T-cell responses in allergy and asthma. Curr Opin Allergy Clin Immunol 1: 73-78. 4. Oshita A, Hamelmann E, Haczku A, Takeda K, Conrad DH, Kikutani H, Gelfand W. 1997. Modulation of antigen-induced B and T cell responses by antigen-specific IgE antibodies. J Immunol 159: 56-63. 5. Lee MY, Seo CS, Lee JA, Lee NH, Kim JH, Ha HK, Zheng MS, Son JK, Shin HK. 11. Anti-asthmatic effects of Angelica dahurica against ovalbumin-induced airway inflammation via upregulation of heme oxygenase-1. Food Chem Toxicol 49: 829-837. 6. Vo TS, Kong CS, Kim SK. 11. Inhibitory effects of chitooligosaccharides on degranulation and cytokine generation in rat basophilic leukemia RBL-2H3 cells. Carbohyd Polym 84: 649-655. 7. Lee SH, Bae EA, Park EK, Shin YW, Baek NI, Han EJ, Chung HG, Kim DH. 7. Inhibitory effect of eupatilin and jaceosidin isolated from Artemisia princepsin IgE-induced hypersensitivity. Int Immunopharmacol 7: 1678-1684. 8. Lila MA. 4. Anthocyanins and human health: an in vitro investigative approach. J Biomed Biotechnol 4: 36-313. 9. Amorini AM, Lazzarino G, Galvano F, Fazzina G, Tavazzi B, Galvano G. 3. Cyanidin-3-O-beta-glucopyranoside 헌 protects myocardium and erythrocytes from oxygen radical-mediated damages. Free Radic Res 37: 453-4. 1. Lee JH, Kang NS, Shin SO, Shin SH, Lim SG, Suh DY, Baek IY, Park KY, Ha TJ. 9. Characterization of anthocyanins in the black soybean (Glycine max L.) by HPLC- DAD-ESI/MS analysis. Food Chem 112: 226-231. 11. Chung MJ, Sung NJ, Park CS, Kweon DK, Mantovani A, Moon TW, Lee SJ, Park KH. 8. Antioxidant and hypocholesterolemic activities of water-soluble puerarin glycosides in HepG2 cells and in C57 BL/6J mice. Eur J Pharmacol 578: 159-17. 12. Huang F, Yamaki K, Tong X, Fu L, Zhang R, Cai Y, Yanagisawa R, Inoue KI, Takano H, Yoshino S. 8. Inhibition of the antigen-induced activation of RBL-2H3 cells by sinomenine. Int Immunopharmacol 8: 52-57. 13. Han EH, Hwang YP, Kim HG, Park JH, Choi JH, Im JH, Khanal T, Park BH, Yang JH, Choi JM, Chun SS, Seo JK, Chung YC, Jeong HG. 11. Ethyl acetate extract of Psidium guajava inhibits IgE-mediated allergic responses by blocking FcεRI signaling. Food Chem Toxicol 49: -18. 14. Cerezo AB, Cuevas E, Winterhalter P, Garcia-Parrilla MC, Troncoso AM. 1. Isolation, identification, and antioxidant activity of anthocyanin compounds in Camarosa strawberry. Food Chem 123: 574-582. 15. Astadi IR, Astuti M, Santoso U, Nugraheni PS. 9. In vitro antioxidant activity of anthocyanins of black soybean seed coat in human low density lipoprotein (LDL). Food Chem 112: 659-663. 16. Wendeler M, Sandhoff K. 9. Hexosaminidase assays. Glycoconjugate J 26: 945-952. 17. Matsuda H, Wang Q, Matsuhira K, Nakamura S, Yuan D, Yoshikawa M. 8. Inhibitory effects of thunberginols A and B isolated from Hydrangeae Dulcis Folium on mrna expression of cytokines and on activation of activator protein-1 in RBL-2H3 cells. Phytomedicine 15: 177-184. 18. Kato N, Motohashi S, Okada T, Ozawa T, Mashima K. 8. PICOT, protein kinase C θ-interacting protein, is a novel regulator of FcεRI-mediated mast cell activation. Cell Immunol 251: 62-67. 19. Song MY, Jeong GS, Lee HS, Kwon KS, Lee SM, Park JW, Kim YC, Park BH. 1. Sulfuretin attenuates allergic airway inflammation in mice. Biochem Biophys Res Commun : 83-88.. Choi JH, Hwang YP, Lee HS, Jeong HG. 9. Inhibitory effect of Platycodi Radix on ovalbumin-induced airway inflammation in a murine model of asthma. Food Chem Toxicol 47: 1272-1279. (11 년 1 월 4 일접수 ; 11 년 1 월 12 일채택 )