J Koren Soc Food Sci Nutr 한국식품영양과학회지 43(8), 1139~1147(214) http://dx.doi.org/1.3746/jkfn.214.43.8.1139 오미자농축액이급성주정중독량및장기간주정을투여한흰쥐의혈중알코올분해율과간기능보호에미치는영향 한찬규 1 성기승 1 이경원 1 박성선 2 정지윤 1 김성수 1 1 한국식품연구원 2 종근당건강 ( 주 ) Effects of Omij (Schizndr chineis Billon) Concentrte on Blood Alcohol Clernce nd Heptoprotective Function in Rts Induced y Acute Ethnol Intoxiction nd Chronic Ethnol Tretment Chn-Kyu Hn 1, Ki-Seung Seong 1, Kyung-Won Lee 1, Sung-Sun Prk 2, Ji-Yun Jeong 1, nd Sung-Soo Kim 1 1 Kore Food Reserch Ititute 2 Reserch Center, Chong Kun Dng Helthcre Corportion ABSTRACT We investigted whether or not Schisndr chineis (SC), trditionl herl medicine, hs protective effects git lcohol-induced ftty liver nd lood lcohol clernce. Two tests focused on cute intoxiction nd chronic ethnol tretment were crried out. For the chronic ethnol tretment test, rts were fed ethnol y intrgstric dministrtion everydy for 8 weeks to induce lcoholic ftty liver. Ethnol tretment significntly incresed lood lcohol concentrtion t 9 min fter cute ethnol intoxiction. Compred with the two ethnol-treted groups, rts dministered ethnol long with SC extrcts showed n pproximtely 13% incresed lood lcohol clernce rte t 36 min. Chronic ethnol tretment significntly incresed serum nd heptic triglyceride (TG) levels, nd cused ftty degenertion of liver. Ethnol tretment lso elevted the serum totl-cholesterol (TC) level. However, fter feeding of ethnol plus SC extrcts, ethnol-induced elevtion of heptic TG levels reversed, wheres elevtion of serum TG nd TC levels ws not oserved fter tretment with SC extrcts. Ethnol tretment significntly incresed γ-gt, sprtte minotrferse, nd lnine minotrferse ctivities fter 8 weeks. Compred with the ethnol-fed group, rts dministered ethnol plus SC extrcts for 4 weeks showed ttenuted ftty degenertion s well s decresed heptic function test vlues. SC dministrtion lso significntly incresed intrcellulr lipid ccumultion in heptocytes nd reduced stetosis score nd heptic TG levels, s mesured y iochemicl nd histolopthologicl nlyses. Our results indicte tht the protective effects of SC re ccompnied y significnt decrese in heptic TG levels, therey suggesting SC hs the ility to prevent ethnol-induced ftty liver, y reducing heptic TG nd enzyme levels in lcoholic rts. Key words: Omij (Schizndr chineis), lood lcohol clernce, lipid profile, heptic function, ethnol intoxiction 서 211년우리나라사망원인통계를보면알코올관련사망자수는총 4,493명 (1일평균 12.3명 ) 으로전년대비.9% 감소하였으나여성사망률이남성보다 8배나높고 6 대를제외한모든연령층에서사망률이증가하는양상을보였다 (1). 알코올은위장과소장에서빠르게흡수된후에주로간에서대사되는데다량의알코올이나만성적인알코올섭취는간기능손상을유발할수있다 (2). 간에서알코올은 Received 1 April 214; Accepted 3 June 214 Corresponding uthor: Sung-Soo Kim, Kore Food Reserch Ititute, Seongnm, Gyeonggi 463-746, Kore E-mil: sung@kfri.re.kr, Phone: +82-31-78-967 론 lcohol dehydrogense(adh) 와 cytochrome P-45에의해아세트알데하이드로전환되고만성적인섭취시엔 microsoml ethnol oxidizing system(meos) 에의해아세트알데하이드생성량이증가한다 (3). 정상적인대사경로에서는아세트알데하이드는 mitochondirl ldehyde dehydrogense(aldh) 에의해 cette로산화되고 TCA 회로를경유하여콜레스테롤과지방산합성등에이용한다. 동양인은서양인에비해 ALDH2 효소가적어아세트알데하이드가몸에더많이잔존하게되고이는 DNA를손상시켜암을더쉽게유발시킬수있다. 알코올의과도한섭취는간의알코올처리능력에한계를가져오게만들고 1차적으로대사된아세트알데하이드가알코올에비해반응성이높아
114 한찬규 성기승 이경원 박성선 정지윤 김성수 강한독성작용을하므로알코올성간손상및대사장애를초래하며, 알코올성간손상이일어나게되면간세포가파괴되고이때혈액중으로 AST(sprtte minotrferse) 와 ALT(lnine minotrferse) 효소가유리되어나오기때문에 AST와 ALT의활성이간세포손상의지표로사용되고있다. 오미자는오미자나무과에속하는오미자나무 (Schizndr chineis Billon) 의열매로서다섯가지의맛이다양하게조화를이룬다는뜻에서불린이름으로비타민 C와유기산뿐만아니라페놀화합물이나테르펜등의향기성분과안토시아닌색소에의한붉은색을지닌식물체로 (4) 간염, 두통, 신경쇠약등의치료및진해, 거담효과를나타내는한약제이다. 오미자의약리기능은중추억제작용과간보호 (5-8), 혈압강하 (9), 항산화작용 (1,11), 장내미생물개선 (12, 13), 위암세포사멸과면역력증강 (14), 당뇨병예방과치료효과 (15), 항균효과 (16) 가보고되었고, 특히 in vitro 실험에의한간보호효과가보고되었다 (17). 오미자나무속에는주로약용으로쓰는오미자와제주도에분포하며열매가흑색을띠는흑오미자 (S. nigr) 가있다 (18). 오미자의성분은 schizndrin, schizndrn, ethmigrenl, gomisin 등의리그난화합물이주를이룬다 (19,2). 에탄올을급성으로단회투여한쥐에게오미자추출물의경구투여로상승된혈중알코올농도를현저하게감소시킨결과가보고되었다 (21). 본연구에서는알코올성간손상을일으킨흰쥐에게오미자추출물이혈중알코올분해율과간기능보호에미치는영향을구명하기위한단회성급성주정중독시험과장기간주정투여시험을각각수행하였다. 재료및방법실험개요본실험에서는알코올성간손상을일으킨흰쥐에게오미자추출물이혈중알코올분해율과간기능보호에미치는영향을구명하기위하여단회성급성주정중독시험및장기간주정투여시험을각각수행하였다. 급성주정중독시험은주정단독투여군과주정 + 오미자추출물투여군및주정 + 물투여군으로배치하였고, 장기주정투여시험은주정 + 물투여군, 주정 + 오미자추출물투여군및주정무투여군으로하였다. 두시험에서주정단독투여군과주정무투여군의설정은단회성시험의경우 1회에급성적인주정중독을유발시키는 시험특성상주정단독투여군 ( 주정대조군 ) 과주정 + 오미자추출물투여군간비교를위해배치하였고, 장기간시험의경우 4주간주정투여후 4주간주정 + 오미자추출물투여군과시험전기간 (8주) 동안주정무투여군 ( 일반대조군 ) 간비교를위해배치하였다. 단회성급성주정중독시험단회성급성주정중독실험은흰쥐에게주정중독량 (4 g of ethnol/kg of ody wt.) 을투여하고오미자추출물을투여한후 6분, 9분, 15분, 24분, 3분, 36분의혈중에탄올농도를측정하여경시적인알코올분해율을측정하였다. 실험동물및처리군 : SD계통수컷흰쥐 ( 체중, 3 g) 를처리군당 1마리씩공시하여주정대조군 ( 주정 ), 오미자추출물군 ( 주정 + 오미자 ) 및대조군 ( 주정 + 물 ) 으로배치하였다. 주정투여량 : 시험주정은 Chivs Regl( 알코올농도 4%, 용량 7 ml) 로흰쥐체중기준으로투여하였다. 즉체중 3 g일때주정량은 1.2 g으로시험주정기준 (.4 g of ethnol/ml of Chivs Regl) 으로 3. ml를투여하였다. 시료투여량 : 주정투여후 3분에오미자추출물 (2 ml, 15 mg) 과물 (2 ml) 을경구투여하였다. 시료채취및분석항목 : 혈액은시료투여후 6분부터 36분까지안구채혈법으로 6회채취하여혈청분리관에넣어원심분리 (2,5 rpm, 1 min) 하여혈청시료를분리하였다. 혈중알코올농도는효소법 (enzyme kit) 으로분석하였다. 장기주정투여시험장기간주정투여실험은전반기 (4주) 는급성알코올성간손상지표 (22,23) 를참고하여 1/2 용량의시험주정 (Chivs Regl, 4% of ethnol) 을 2. ml 경구투여하였고, 후반기 (4주) 에는주정대조군은시험주정과함께물을, 오미자투여군은오미자추출물을인체시험용량 (15 mg) 기준으로 1. ml를경구투여하였다. 일반대조군은실험기간 (8주) 동안시험주정을투여하지않았다. 시험처리는주정대조군 (A), 오미자추출물군 (B) 및일반대조군 (C) 으로하였고, 실험동물은평균체중이 15 g된수컷흰쥐를실험군당 14마리씩배치하였다 (Tle 1). 오미자시료실험에사용한오미자농축액은종근당건강 ( 주 ) 연구소 Tle 1. Experimentl design for long-term ethnol dministrtion Group 1st phse (4 week) 2nd phse (4 week) Diet A B C Ethnol (4%) 1) Ethnol (4%) 1) 1) Chivs Regl (4% of lcohol). 2) Schisndr chineis (Turcz.) Bill. concentrte. 3) Tekld glol 18% protein rodent diet (hrln 218S). Ethnol (4%)+tp wter Ethnol (4%)+Omij concentrte (15 mg) 2) Control (no ethnol) Rt chow 3) Rt chow Rt chow
오미자농축액의간기능보호효과 1141 (Chungnm, Kore) 에서제공받았다. 오미자농축액은문경산건조오미자 1 kg을추출기에넣고 4배의 7% 발효주정과증류수를가하여 7 9 C에서 8시간씩각각 2회추출하였다. 제조한오미자추출물은여과한후회전감압농축기로 63 Brix가되도록농축하였고, gomisin N과 schizndrin C의합이 4. 6. mg/g이되도록표준화하였다. 제조한오미자농축액은 4 C에서보관하면서실험에사용하였다. 동물실험윤리위원회승인한국식품연구원동물실험윤리위원회에연구계획서를제출하여승인받았다 (KFRI-M-1313). 실험동물의사양관리실험동물은각각평균체중 15 g과 27 28 g된 Sprgue-Dwley계수컷흰쥐를중앙실험동물 ( 주 )(Seoul, Kore) 에서분양받아서온도 (22±2 C), 습도 (5±5%), 명암주기 (7: 19:) 로설정된동물실험실에서사육하였다. 도착후처음 3 4일간고형사료로적응시킨후체중에따라난괴법 (rndomized lock design) 으로각각 1마리, 14마리씩세그룹으로나누어사육케이지에두마리씩수 용하였다. 실험식이는 Hrln 218S-diet로영양성분은 Tle 2와같다. 사육기간동안물과사료는자유급이하였고오미자추출물은매일 1회일정시간에경구투여하였다. 식이섭취량은매주 1회잔량을측정하였고증체량은매주 1회측정하여산출하였다. 8주간의사육기간최종일에실험동물에서안구채혈법으로혈액을채취한다음경추탈구법으로희생시킨후복부를절개하여간조직을적출하여생리식염수로혈액을씻고흡수지로물기제거후중량을측정한다음 -7 C에보관하면서실험에사용하였다. 혈청생화학치분석혈청알코올 (ethnol) 농도, 혈청과간조직중의중성지방 (TG) 과총콜레스테롤 (TC) 함량, 간기능치 (γ-gt, AST, ALT) 및혈액학치 (CBC) 는 Tle 3에제시된각각의측정용 kit를사용하여분석하였다. 간조직과혈청지질분석간조직 1 g에 chloroform : methnol 혼합액 (2:1, v/v) 을가하여 PoterElvehjem tissue grinder(wos11, Dihn, Gngwon, Kore) 로마쇄하여 3 ml로정용한다음 Tle 2. Mcronutrients of Tekld Glol 18% protein rodent diet (Unit: %) Crude protein Ft (EE) Crohydrte Crude fier NDF 1) Ash Energy deity 2) 18.6 6.2 44.2 3.5 14.7 5.3 3.1 1) Neutrl detergent fier. 2) kcl. Clorie from protein, ft, nd crohydrte ws 24%, 18%, nd 58%, respectively. Tle 3. Anlyticl methods of hemtochemicls Method Kit Mnufcturer Apprtus Model Alcohol (ethnol) Triglyceride Enzymtic ssy Lipse, GK, GPD, colorimetry Ethyl lcohol Triglycerides regents Roche, Bsel, Switzerlnd Byer, Roion Towhip, PA, USA Modulr nlytics ADVIA ADVIA 165 Cholesterol, totl Enzymtic, colorimetry Cholesterol regent Byer ADVIA ADVIA 165 γ-gt Enzymtic, colorimetry GGT Roche Modulr Anlytics PE AST (SGOT) IFCC AST regents Byer ADVIA ADVIA 165 ALT (SGPT) IFCC ALT regents Byer ADVIA ADVIA 165 RBC (B) WBC (B) Hemtocrit Hemogloin Pltelet Electroic impednce Flow cytometry Electroic impednce Cynic free hemogloin spectrometry Electroic impednce Sysmex, Koe, Jpn SYSMEX P XE 21D Sysmex SYSMEX XE 21D Sysmex SYSMEX XE 21D Sysmex SYSMEX XE 21D Sysmex SYSMEX XE 21D
1142 한찬규 성기승 이경원 박성선 정지윤 김성수 4 C에서 24시간정치시켜지질을추출하여이를여과 (Whtmn No. 7, Whtmn, Midstone, UK) 한후일정량을취하여용매를모두제거한것을사용하였다. 혈청과간조직의중성지방과총콜레스테롤은각각 TG 및 TC 측정용 kit(asn Phrm. Co., Seoul, Kore) 를사용하여분석하였다. 간조직의병리학적분석간조직을적출하여 1% 의 formlin에고정하였다. 조직검사전 gum sucrose 용액에 24시간동안 4 C에서조직을침수시켰다. 침수가끝난조직은액체질소를이용하여급속동결하여냉동조직절편기 (Cryostt Cryocut Microtome, Reichert-Jung, Heidelerg, Germny) 를사용하여 8 1 μm 두께로박절한후 geltin으로표면처리된슬라이드에부착시켰다. 1% propylene glycol 용액에서 1분간처리하여완전탈수하였다. 6 C 오븐에있는 Oil Red O working solution에서 15분간염색을실시한다음 6% isopropnol로세척하였다. Alum hemtoxylin 용액으로핵염색을실시한후증류수로세척한다음 permount를이용하여봉입한후현미경 (ECLIPSE E6, Nikon, Tokyo, Jpn) 으로관찰하였다. 통계처리실험성적은 men±sd로표시하였고실험군간의통계적인유의성검정은 SPSS Pckge Progrm(Windows version 15., SPSS Inc., Chicgo, IL, USA) 을이용하여 one wy ANOVA( 분산분석 ) 의 Duncn's multiple test에의해유의확률 P<.5에서검증하였다. 결과및고찰급성주정중독시험흰쥐에게단회성급성주정중독량과오미자추출물시료를투여한후 6분부터 36분까지여섯번채혈한시점의혈중알코올농도는 Fig. 1과같다. 시료투여후 6분과 9분의혈중알코올농도는주정대조군 (A) 이각각.145% 와.222%, 오미자투여군 (B) 은각각.127% 와.193%, 주정과물투여군 (C) 은각각.116% 와.25% 로시료투여후 9분의혈중알코올농도가가장높았고실험군간통계적인차이는없었다. 주정투여후 15분과 24분의혈중알코올농도는 A군이각각.13% 와.96%, B군은각각.81% 와.59%, C군이각각.12% 와.71% 로감소하였는데, B군이다른두투여군 (A, C) 보다통계적으로유의하게낮았다 (P<.5). 주정투여후 3분의혈중알코올농도는각각.45%,.2%,.33% 로 B군이낮았고, 이후 36분의혈중알코올농도는오미자투여군 (B) 에서는.5% 로거의분해된반면 A군과 C군에서는각각.27 %,.17% 로나타났다. 본실험에서주정투여후 6분을 Blood lcohol (%)..3.25.2.15.1.5. 6 9 15 24 3 36 Time (min) A - Ethnol only B - Omij C - Ethnol+tp wter Fig. 1. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on serum lcohol concentrtion in rts dministered orlly y cute ethnol intoxicity. Me with different letters (,) in the sme time re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. NS: not significnt. 기준농도로했을때주정투여후 36분의혈중알코올분해율은주정대조군 (A) 81.4%, 오미자투여군 (B) 96.1%, 물투여군 (C) 85.3% 로나타나서 B군의알코올분해율이다른두주정군보다평균 13% 높았다. 한편본시험에서는주정과물투여군 (C) 도주정대조군 (A) 에비해경시적으로혈중알코올농도의감소경향을보여물의음용이혈중알코올의분해에일정한효과를보였는데시험초기 (6분, 9분 ) 이후 15분과 24분에서는오미자투여군 (B) 의알코올감소효과가유의적인것으로나타났고, 시험후기 (3분, 36 분 ) 에서는세처리군에서유의적인차이는나타나지않았다. 예로부터오미자 (Schizndr chineis) 는거담, 자양및강장제등으로이용되는한약재로서약리기능이다양하여진정, 진해, 해열등의중추억제작용, 간보호작용, 혈압강하작용및알코올해독작용이있다고알려졌다 (24). 이러한결과는에탄올 (25%, 4%) 을급성으로단회경구투여한쥐에게오미자열매의물추출물투여가에탄올로상승된알코올농도를평균 78% 정도감소시켰다는보고 (21) 와유사하였다. 본실험에사용된오미자추출물은 gomisin N과 schisndrin C의합이 4. 6. mg/g으로표준화된시료로오미자추출물의간보호작용을나타내는리그난화합물의분석치는 schisndrin 8.82±1.39 mg/g, schisndrin C 1.11±.23 mg/g, gomisin A.954±.191 mg/g, gomisin N 3.351±.829 mg/g으로총리그난함량은 14.118 mg/g으로나타났다 (25). 장기주정투여시험장기간 (8주) 주정투여에따른실험동물의증체량, 식이효율및간장무게는 Tle 4와같다. 시험개시시체중은실험군에서평균 163 g이었고, 종료시체중은각각 374.4 g, 368.3 g, 384. g으로차이가없었다. 식이섭취량은일반대조군 (C) 이다소높았고, 식이효율 (FER) 은주정대조군 (A) 이높았으나통계적인차이는없었다. 간장무게는일반대조군 (no ethnol) 이 2.68 g으로두주정투여군 (2.95 g, 2.84 g)
오미자농축액의간기능보호효과 1143 Tle 4. Body weight, diet intke nd orgn weight in long-term ethnol dministered rts A 1) B C Initil ody weight (g) Finl ody weight (g) Weight gin (g/dy) Diet intke (g/dy) Food efficiency rtio Liver weight (g/1 g w) 163.±7.31 374.4±29.6 2) 3.82±1.25 19.27±1.15.21±.7 2.95±.16 3) 163.3±6.61 368.3±28.6 3.67±1.26 18.61±1.34.2±.7 2.84±.15 164.5±8.24 384.±36.4 3.89±1.51 2.17±.69.19±.8 2.68±.14 Vlues re men±sd (n=14). 1) A: ethnol control, B: Omij (Schisndr chineis), C: control (no ethnol). 2) : not significnt. 3) Me with different superscripts in the sme row re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. 보다유의하게낮았다 (P<.5). 본실험에서종료시체중과간무게를측정한결과주정대조군 (A) 과오미자추출물군 (B) 간에유의적인차이는없었다 (Tle 4). 이러한결과는주정대조군의경우매일주정을투여함으로써과량의알코올이정상적으로배출되지못하고체내에지속적으로축적된반면오미자군에서는오미자추출물의급여가간조직에서의지질침착을완화시킴으로써체중과간장무게가다소감소된것으로사료되었다 (26). 장기간 (8주) 주정투여에따른흰쥐의혈청과간조직중의지질함량은 Fig. 2 및 Fig. 3과같다. 혈청과간조직의중성지방 (TG) 함량은일반대조군 (no ethnol) 이각각 76.79 mg/dl, 3.32 mg/g of liver tissue로두주정투여군 (A, B) 보다통계적으로유의하게낮았다 (P<.5). 간조직의 TG 함량은두주정투여군에서는오미자추출물군 (B) 과주정대조군 (A) 간에차이는없었고 B군이 A군에비해 26.5% 낮았다 (Fig. 2). 혈청중총콜레스테롤 (TC) 함량은실험군간에유의적인차이가없었고, 간조직의 TC 함량은두주정투여군간에는오미자추출물군 (B) 이주정대조군 (A) 보다 18.8% 낮은것으로나타났다 (Fig. 3). 이러한결과는알코올성지방간을유도한흰쥐에서 Schisndr chineis(sc) 가주정투여로인해상승된혈청과간조직의지질 (TG, TC) 농도를 Serum TG (mg/dl). 16 14 12 1 8 6 4 2 A B C Serum Liver Fig. 2. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on triglyceride content of serum nd liver in long-term ethnol dministered rts. A: ethnol control, B: Omij (Schisndr chineis), C: control (no ethnol). Me with different letters (,) mong group re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. 7 6 5 4 3 2 1 Liver TG (mg/g of liver tissue). 통계적으로유의하게감소시켰다고보고한 Prk 등 (26) 의결과와비교할때 TG 농도는잘일치되었으나 TC 농도는통계적인차이없이 18.8% 감소한것으로나타났는데, 이는선행연구의주정투여량 (1 g/kg ody wt.) 과 SC추출물의투여기간 (5주) 과본연구의주정투여량과투여기간등의차이에기인된것으로사료된다. 선행연구에의하면오미자추출물에의한중성지방과콜레스테롤수준의감소는간조직내지단백분해효소의활성증가로혈중 TG의분해촉진, 간조직내 TG의합성감소, 장내콜레스테롤흡수억제와관련이있는것으로보고되었고 (27), 또한 SC추출물이알코올성쥐의간조직에서 phospho-ampk와 PPARα의발현을유의하게증가시킴으로써알코올로인한지방간의억제를시사하며 (26), Fructus Schisndr chineis(fsc) 의 dietry pulp의상징액과침전물의투여가 high cholesterol+ile slt diet를급여한마우스의혈청 TG 농도와간의지질과혈당치및혈청중 ALT 활성을저하시킨것으로보고했다 (28). 장기간 (8주) 주정투여에따른흰쥐의간기능치는 Fig. 4~6과같다. 실험개시전 () γ-glutmyltrferse(γ- GT) 활성은 A, B, C군에서각각 2.67 mu/ml, 2.87 mu/ ml, 2.28 mu/ml로나타났다. 실험전기 (4주) 주정투여후측정한 γ-gt 활성은실험군 (A, B, C) 에서각각 4.59 mu/ Serum TC (mg/dl). 16 14 12 1 8 6 4 2 A B C Serum Liver Fig. 3. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on totl-cholesterol content of serum nd liver in long-term ethnol dministered rts. A: ethnol control, B: Omij (Schisndr chineis), C: control (no ethnol). NS: not significnt. 3. 2.5 2. 1.5 1..5. Liver TC (mg/g of liver tissue).
1144 한찬규 성기승 이경원 박성선 정지윤 김성수 γ-gt (mu/ml). 12 1 8 6 4 A - Ethnol only B - Omij C - No Ethnol ALT (U/L). 12 1 8 6 4 A - Ethnol only B - Omij C - No Ethnol 2 2 4 8 Time (week) Fig. 4. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on serum γ-gt ctivity in long-term ethnol dministered rts. : not significnt. Me with different letters (,) ove the rs in the sme week re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. 4 8 Time (week) Fig. 6. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on serum ALT ctivity in long-term ethnol dministered rts. : not significnt. Me with different letters (,) ove the rs in the sme week re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. AST (U/L). 2 18 16 14 12 1 8 6 4 2 A - Ethnol only B - Omij C - No Ethnol 4 8 Time (week) Fig. 5. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on serum AST ctivity in long-term ethnol dministered rts. : not significnt. Me with different letters (,) ove the rs in the sme week re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. ml, 4.78 mu/ml, 2.46 mu/ml로나타났다. 즉 28일동안매일급성주정중독량 (4 g ethnol/kg of ody wt.) 의 1/2 용량의주정 (Chivs Regl, 4%) 을경구투여했을때 γ- GT 활성은 A군과 B군에서각각 72%, 4% 증가하였고일반대조군 (no ethnol) 은 7% 증가하는데그쳤다. 실험후기 (4주) 종료시측정한 γ-gt 활성은 B군이 26% 감소한반면주정대조군 (A) 은다소증가하였으나통계적인차이는없었다. 알코올섭취로인한간손상이일어나면간세포가파괴되고이때혈중으로 AST와 ALT가유리되어나오기때문에 AST와 ALT의활성은간세포손상의지표로사용되고있다. 본연구에서 AST 활성은실험개시전 () 은 95.7 13.3 U/L이었고실험전기 (4주) 후 89.2 11.6 U/L로실험개시전에비해오히려다소감소하였으며, 실험후기 (4주) 종료시에는 98.2 124.2 U/L로실험전기보다활성이높았는데, 오미자추출물군 (19.4 U/L) 이주정대조군 (124.2 U/L) 보다약 12% 감소하였다. ALT 활성은실험개시전 () 72. 88. U/L, 실험전기 (4주) 후 6.25 71.31 U/L, 실험후기 (4주) 종료시에는오미자추출물군 (6.7 U/L) 이주정대조군 (74.2 U/L) 에비해약 19% 활성이감소하였다. 이러한결과는알코올투여로지방간을유도한흰쥐에게 SC 추출물이혈청중 AST와 ALT 활성을주정대조군보다유의적으로감소시킨선행연구 (26) 와증숙오미자의열수추출물에는 schisndrin, gomisin과총폴리페놀및총플라보노이드함량이증가되므로이러한이화학적성분변화가알코올성간손상을유발시킨쥐의혈청중 γ-gt, AST, ALT 활성을감소시켰다는보고와도비교되는결과로사료되었다 (29). 또한에탄올 (25%) 을급성으로단회경구투여한쥐에게오미자열매의물추출물투여가에탄올로상승된 AST, ALT 활성을다소감소시켰다는 Lee와 Lee(21) 의보고와도유사한결과로사료되었다. 장기간 (8주) 주정투여에따른혈액학치 (CBC) 는 Tle 5 와같이혈소판을제외한다른혈구세포에서는실험군간통계적으로유의한차이가있었다 (P<.5). 즉적혈구수 (RBC) 와헤마토크릿치 (Hct) 는일반대조군 (C) 보다두주정투여군 (A, B) 에서통계적으로유의하게감소하였고, 백혈구수 (WBC) 는일반대조군 (C) 보다주정대조군 (A) 에서유의하게감소한것으로나타났다. 혈색소 (hemogloin) 함량은두주정투여군 (A, B) 에서주정대조군 (13.61 g/dl) 과오미자추출물군 (12.58 g/dl) 간에통계적인차이가있었다 (P<.5). 혈소판수는차이가없었다. 혈액은산소와영양소를체내에운반하는역할을하고, 산소는적혈구의헤모글로빈이그역할을주로담당한다. 적혈구와헤모글로빈수치가정상보다낮아지면산소공급부족으로빈혈 (nemi) 이발생한다. 세균, 바이러스, 박테리아등외부침입물질에대항하는백혈구와혈소판수는본실험에서는대체로정상범위안에있는것으로나타났다. 적혈구와헤마토크릿치는두주정투여군 (A, B) 이일반대조군 (C) 보다유의적으로낮았는데이는장기간동안주정을투여한데에기인된결과로사료되었다. 인체는항산화계가존재하여산화촉진물질과산화억제
오미자농축액의간기능보호효과 1145 Tle 5. Effect of Omij (Schisndr chineis) concentrte on the complete lood count in long-term ethnol dministered rts Group 1) RBC 2) ( 1 6 /μl) WBC ( 1³/μL) Hct (%) H (g/dl) Pltelet ( 1 3 /μl) A B C 6.14±.32 3) 6.57±.64 7.17±.42 7.85±2.61 7.3±1.65 6.87±1.49 33.37±1.86 35.2±2.36 38.97±2.41 13.61±1.5 12.58±.91 13.25±.71 929.7±22.38 4) 941.8±163.4 15.4±68.28 Vlues re men±sd (n=14). 1) A: ethnol control, B: Omij (Schisndr chineis), C: control (no ethnol). 2) RBC: red lood cell, WBC: white lood cell, Hct: hemtocrit, H: hemogloin. 3) Me with different superscripts in the sme column re significntly different t P<.5 y Duncn's multiple rnge test. 4) : not significnt. 물질이균형을유지하고있으나환경오염, 흡연, 알코올및방사선등에지속적으로노출이되면두인자가불균형을이루어 oxidtive stress를유발하는것으로보고되었다 (3). 본연구에서장기간 (8주) 주정투여에따른흰쥐간조직의 Oil Red O stining에서지방변성증 (ftty degenertion) 의정도, 위치및지방구크기를광학현미경을이용하여 4배, 1배, 2배, 4배율로관찰한후조직병리학적으로판독하여수치화하였다. 본실험에서 Stetosis score는주정 대조군 (A) 에서 3점인반면오미자추출물군 (B) 과일반대조군 (C) 에서는각각 1점으로나타났다 (Tle 6). 조직사진중에서오미자추출물군의슬라이드번호 B-1과 B-3, 일반대조군의슬라이드번호 C-4와 C-5는붉게염색된지방미세과립이세포질에경도로침윤 (infiltrtion) 되어있는반면주정대조군의슬라이드번호 A-1은고도로, 슬라이드번호 A-4는중등도로침윤해있음을확인할수있었고, 오미자추출물군 (B) 과일반대조군 (C) 간에차이는관찰되지않았다 (Tle 6). 따라서간의병리조직학적관찰결과오미자추출 Tle 6. Description of lipid visuliztion y Oil Red O stining nd stetosis score in long-term ethnol dministered rts Group Slide No. Oil Red O stining Stetosis score 1) Tretment -1 3 Ethnol (+) control A -4 3 Ethnol (+) control -1 1 Omij (15 mg) concentrte B -3 1 Omij (15 mg) concentrte -4 1 Negtive (-) control C -5 1 Negtive (-) control 1) Reding criteri. Score : oserved the stetosis under the 5% of liver tissue, Score 1: oserved the stetosis in the 5 33% of liver tissue, Score 2: oserved the stetosis in the 34 66% of liver tissue, Score 3: oserved the stetosis over the 67% of liver tissue.
1146 한찬규 성기승 이경원 박성선 정지윤 김성수 물의급여가간실질조직에서의지질침착을약화시키고간세포의소포성지방세포들을감소시킴으로써지방변성증의개선효과가있는것으로판단되었다. 이러한결과는지방간을개선시키는오미자시료중의안토시아닌, 리그난및페놀화합물에의한영향일것으로사료되었다. 간은항상성과건강유지를위해필수적인중요한기관으로지방산의합성과산화에불균형이초래될경우간조직내지방축적이불가피하다. 그중에서생체에대해유해한이물질을무해한것으로대사하는주된역할을담당한다. 이러한해독작용의근본은주로인체내외에서생성되거나유입된산물들을수용성형태로바꾸어주로소변을통해서체외로배출시킨다 (31). 한편저자들이수행한알코올유도성산화적세포손상실험에서오미자추출물 1 4 μg/ml를 HepG2 cell에처리했을때농도의존적으로산화스트레스에대한저항성이증가된것으로나타났다 (25). 요약본연구는알코올성간손상을일으킨흰쥐에게오미자추출물이혈중알코올분해율과간기능보호에미치는영향을구명하기위하여단회성급성주정중독시험과장기주정투여시험을각각수행하였다. 급성주정중독시험은흰쥐에게급성주정중독량과오미자추출물을투여한후 6분, 9분, 15분, 24분, 3분, 36분의혈중에탄올농도를측정하여경시적인알코올분해율을측정하였다. 장기주정투여시험은전반기 (4주) 는급성주정중독량 (22,23) 을참고하여 1/2 용량의시험주정 (Chivs Regl, 4%) 을투여하였고, 후반기 (4주) 는시험주정과함께물과오미자추출물 (15 mg, 1. ml) 을각각투여하였다. 급성주정중독량시험에서주정투여후 9분의혈중알코올농도가가장높았고, 주정투여후알코올의기준농도대비 36분의혈중알코올분해율은주정단독투여군 (A) 81.4%, 오미자투여군 (B) 96.1%, 주정 + 물투여군 (C) 85.3% 로오미자투여군이다른두주정투여군보다평균 13% 더높았다. 장기주정투여시험에서간장무게는두주정투여군 (A, B) 이일반대조군 (C) 보다통계적으로무거웠다 (P<.5). 혈청과간조직의중성지방 (TG) 함량은일반대조군이두주정투여군보다통계적으로유의하게낮았다 (P<.5). 간조직의 TG 함량은오미자투여군 (B) 이주정대조군 (A) 에비해 26.5% 낮았다. 혈청중총콜레스테롤 (TC) 함량은실험군간에차이가없었고, 간조직의 TC 함량은 B군이 A군보다 18.8% 낮았다. 주정과오미자추출물을투여한후측정한 γ-gt, AST 및 ALT 활성은오미자추출물군 (B) 이주정대조군 (A) 보다각각 26%, 12%, 19% 감소하였다. 혈액학치 (CBC) 는혈소판을제외하고는실험군간에통계적인차이가있었다 (P<.5). 간세포조직의 Stetosis score는주정대조군이 3점인반면오미자추출물군과일반대조군에서는각각 1점이었고, 붉게염색된지방미세과립이주정대조군에서는고도내지중등도로세포질 내에침윤 (infiltrtion) 된반면오미자추출물군에서는경도로침윤되었다. 본연구에서오미자추출물은경시적으로혈중알코올분해율을높여주고, 간조직의중성지방량과간기능치 (γ-gt, ALT) 를감소시키는동시에알코올성지방변성을완화시킨것으로나타났다. 본연구결과는향후오미자가공식품의개발과관련한기초및홍보자료로활용가능성이높을것으로기대되는한편인체적용시험을통해알코올성간기능보효효과와관련된보다정밀한후속연구가필요할것으로사료된다. 감사의글 본연구는문경시농업기술센터의지원에의한결과로이에감사드립니다. REFERENCES 1. Sttistics Kore. 213. 212 Annul report on the cuse of deth sttistics. http://kostt.go.kr/portl/kore/kor_nw/3/index.ord?mode=red&seq=&seq=3856&pgeno =2&rowNum=1&nvCount=1&currPg=&sTrget=title&sTxt=212. p 22. 2. Lieer CS. 1993. Aetiology nd pthogenesis of lcoholic liver disese. Billière's Clin Gstroenterol 7: 581-68. 3. Kim MJ, Lee JS, H OM, Jng JY, Cho SY. 22. Effects of Puerri thunergin Benthm wter extrcts on heptic lcohol metolic enzyme system in rts. J Koren Soc Food Sci Nutr 31: 92-97. 4. Sung KC. 211. A study on the phrmceuticl nd chemicl chrcteristics nd nlysis of nturl omij extrct. J Koren Oil Chemists' Soc 28: 29-298. 5. Zhu M, Lin KF, Yeung RY, Li RC. 1999. Evlution of the protective effects of Schisndr chineis on phse Ⅰ drug metolism using CCl 4 intoxiction model. J Ethnophrmcol 67: 61-68. 6. Xing J, Guo Y, Hu H, Qu XL, Sun XZ, Liu SH, Wng H. 212. A herl composition of Semen Hovenie, Rdix Puerrie, nd Fructus Schisndre shows potent protective effects on cute lcoholic intoxiction in rodent models. Evid Bsed Complement Alternt Med doi:1.1155/212/ 638197. 7. Cheng N, Ren N, Go H, Lei X, Zheng J, Co W. 213. Antioxident nd heptoprotective effects of Schisndr chineis pollen extrct on CCl 4 induced cute liver dmge in mice. Food Chem Toxicol 55: 234-24. 8. Hikino H, Kiso Y, Tguchi H, Ikey Y. 1984. Antiheptotoxic ctio of lignoids from Schizndr chineis fruits. Plnt Med 5: 213-218. 9. Yeo SG, Ahn CW, Lee YW, Lee TG, Prk YH, Kim SB. 1995. Antioxidtive effect of te extrcts from green te, oolong te nd lck te. J Koren Soc Food Nutr 24: 299-34. 1. Tod S, Kimur M, Ohnish M, Nkshim K, Ikey Y, Tguchi H, Mitsuhshi H. 1988. Nturl ntioxidnts (Ⅳ). Antioxidtive components isolted from Schisndr fruit. Shoykugku Zsshi 42: 156-159. 11. Hung YS, He Y, Zhng JT. 199. Antioxidtive effects of three components isolted from fruit of schisndre. Chinese J Phrmcol Toxicol 4: 275-277.
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