KOREAN J. FOOD COOKERY SCI. Vol. 26, No. 4, pp. 475~480 (2010) 인삼과팽화홍삼의 Ginsenoside 함량및항염효과비교 신용서 종근당건강 연구소 Comparisons of Ginsenosides and Anti-inflammatory Effects of White Ginseng and Puffed Red Ginseng Yong-Seo Shin Chong Kun Dang Healthcare Corp. Research Center Abstract In this study, the ginsenoside contents and anti-inflammatory effects of white ginseng (WG) and puffed red ginseng (PRG) were compared. The contents of Rb1, Rg5 and Rk1 were significantly higher in PRG than in WG, whereas the contents of Rg1 and Rb2 were decreased in PRG. The levels of NO production and inos expression were suppressed in LPS-stimulated cells by treatment with WG and PRG. Further, the production of cytokines (TNF-α and INF-γ) and inflammatory proteins (NF-κB and COX-2) was decreased in cells upon treatment with any of the ginsenosides. The high NO inhibitory activity and cytokine production of PRG is caused by differences in the composition of ginsenosides produced. Key words: cytokine, puffed red ginseng, white ginseng, inflammation I. 서론 인삼은오랜세월동안사용되어왔으며, 최근에는건강기능식품으로써각광을받고있는식품이다. 인삼의주요효능으로는면역력증강, 혈행개선, 기억력증진, 항염및항암효과등이보고되어지고있다 (Jang SK 등 1994, Cho JY 등 2002, Lee EJ 등 2004). 이러한효과들을나타내는것은인삼의특유한사포닌 (Saponin) 성분으로도라지, 마늘, 양파등다른식물체에존재하는사포닌과는다른화화구조적특징이있어진세노사이드 (ginsenoside) 라불리운다. 진세노사이드는배당체구조를이루고있어이들의구조적차이에따라각각의효능이다르게나타난다 (Cho JY 등 2002). 유용한진세노사이드에대한연구가본격적으로진행되면서가공학적측면에서의인삼성분에관한연구는처리온도및시간에따른진세노사이드의반응속도론적연구등가공방법에따른진세노사이드및유리당조성의변화에대한연구가이루어졌다 (Choi JH 등 1982, Shon HJ 등 1993, Shin Jy Corresponding author: Yong-Seo Shin, Chong Kun Dang Healthcare Corp. Research Center Tel: 041-357-6699 Fax: 041-357-9474 E-mail: freeminde@paran.com 등 2001, Yang SJ 등 2006). 오랜전통적방식인증숙과정을통해서얻어진홍삼은유용사포닌이백삼에비하여더많아효능을증대시킨다고알려져있다 (Jang SK 등 1994). 최근에는홍삼의증숙과건조과정이후에팽화공법 (puffeing) 이라는특수한기술이추가적용되어진세노사이드의양이증가된팽화홍삼이개발되었다. 팽화홍삼에대한기존의백삼과홍삼에비교하여진세노사이드의함량에대한비교분석보고는많이되어있으나 (Han CK 등 2007, Kim ST 2009, An YE 등 2010), 실질적인진세노사이드의함량차이에따른생리활성의효과에대한비교연구는미비한실정이다. 따라서본연구에서는팽화삼이인삼에비하여항염효과가뛰어난지확인하고자 LPS 를이용하여염증을유발한마우스대식세포를이용하여살펴보고자하였다. II. 재료및방법 1. 실험재료본실험에사용된인삼분말시료는 H&BT( 주 ) 로부터팽화홍삼분말시료는 ( 주 ) 그린바이오로부터공급받아사용하였다. 실험에사용한마우스대식세포주 RAW 264.7 세포는 ATCC(Rockville, MD, USA) 로부터분양받아사용 475
476 신용서 하였다. 세포배양을위한 RPMI 1640 배지, 항생제, trypsin 및 fetal bovine serum(fbs) 는 Gibco BRL(Grand Island, NY, USA) 에서구입하였으며, 배양용기는 Falcon(Becton Dickinson, San Jose, CA) 제품을사용하였다. Lipopolysaccride(LPS) 는 Sigma 제품 (ST. Louis, MO, USA) 을구입하였으며, COX-2, inos, NF-κB, IκB, p-iκb 등의항체는 Santa Cruz(San Diego, CA), anti-rabbit IgG conjugated horse-radish peroxidase 와 enhanced chemiluminescence kit(ecl kit) 는 Amersham(Buckinghamshine, England) 에서구입하였다. TNF-α, IFN-γ 의측정을위한 kit 는 R&D systems(mn, U.S.A) 에서구입하여실험에이용하였다. 2. 사포닌분석 인삼및팽화홍삼분말시료 2 g 에 80% 메탄올 100 ml 을첨가하고환류냉각장치를이용하여 80 에서 2 회반복하여추출한다음추출물을모아감압농축한후농축물을 20 ml 의증류수에녹여사포닌추출에이용하였다. 얻어진사포닌추출물중의사포닌조성을알아보기위하여 HPLC 를이용하여분석하였다. 이때컬럼은 µbondapak TM C18 Column(10 µm, 3.9 300 mm, Waters) 을검출기는 Jasco UV detector(203 nm) 를사용하였다. 이동상으로는물 (A) 과 acetonitrile(b) 의 gradient system 을사용하였으며 B 를기준으로 20%(0 분 ), 20%(5 분 ), 33% (40 분 ), 80%(60 분 ), 80%(75 분 ), 20%(80 분 ), 20%(90 분 ) 이었다. 이동상유속은분당 1.0 ml 이었으며시료주입량은 20 µl, 분석온도는 35 이었다. 3. 세포배양 RAW 264.7 세포는 5% CO 2, 37 incubator 에서배양하였다. 세포배양을위한배지는 10% FBS 가포함된 RPMI 1640 배지를사용하였다. 4. 세포생존율검정 시험에사용한시료들에의한세포독성은 MTT assay 법을이용하여분석하였다. 24 well plate에 2 10 5 cells/ ml로세포를분주하고 24시간동안세포를안정시킨후각각의시료 (50 µg/ml) 와 LPS(10 µg/ml) 를동시처리하여 24시간배양한후상등액을제거하고 1/10 MTT 용액 (5 mg/ml) 이첨가된배지로교체하였다. 3시간후배양액을제거하고 DMSO(1 ml) 을첨가하여세포를용해시킨후 ELISA reader(molecular Devices Co., CA) 를이용하여 570 nm 파장에서흡광도를측정하여얻어진 OD 값을통해산출하였다. 5. Western blotting RAW 264.7 세포에각각의시료를처리하고일정시간 후수거하여, PBS 로 2 회세척한후각각의세포에세포용해완충용액 (50 mm HEPES ph 7.4, 150 mm NaCl, 1% deoxy-cholate, 1 mm EDTA, 1 mm PMSF, 1 µg/ml aprotinin) 을첨가하여, 4 에서 30 분간반응시키고 13,000 rpm 에서 20 분간원심분리하여얻은세포용해액은 Bradford 방법을이용하여단백질정량을하였다. 동량의세포용해액은 2 X sample buffer 와혼합하여 98 에서 5 분간끓인후에 SDS-PAGE 를시행하였다. 전기영동이끝난 gel 의단백질은 Nitrocellulose membrane 상에이동시켰다. Nitrocellulose membrane 은 blocking buffer(5% skim milk) 와상온에서 2 시간반응시켜비특이적항체결합을억제시켰다. COX-2, IκB, p-iκb inos, NF-κB(p50 subunit) 항체는 PBS 에 1:1,000 으로희석하여 4 에서 12 시간반응후 0.05%(v/v) 의 Tween-20 이포함된 PBS (PBST) 로 3 회세척후이차항체 anti-rabbit IgG conjugated horse-radish peroxidase 와 1 시간반응시켰다. Nitrocellulose membrane 은 PBST 로 3 회세척후 ECL kit(amersham, England) 를사용하여 ECL 필름에감광시켰다. 6. Nitric oxide(no) 생성및정량 RAW 264.7 세포를 24 well plate에 2 10 5 cells/ml로세포를분주하고 24시간동안세포를안정시킨후시료 (10, 50, 100 µg/ml) 와 LPS(10 µg/ml) 를동시처리하여 24시간배양한후배양액을수집하여배양배지를원심분리 (12,000 rpm, 3 mim) 하고, 상층액 500 µl를취해정량전까지 -20 이하에서보관하였다. NO의정량은 Griess reagent법을이용하여정량하였다. 96 well plate에배양액 100 µl와 Griess reagent(1% sulphanilamide와 0.1% naphthylethylendiamide를포함한 5%(v/v) phosphoric acid) 100 µl를분주하여실온에서 10분간반응시킨후 550 nm에서흡광도를측정하였다. Standard NO(sodium nitrite) 에대한표준곡선의 r 2 값은 0.99 이상이었다. 7. TNF-α 와 IFN-γ 의생성평가 RAW 264.7 세포를 24 well plate에 2 10 5 cells/ml로세포를분주하고 24시간동안세포를안정시킨후시료 (10, 50, 100 µg/ml) 와 LPS(10 µg/ml) 를동시처리하여 24시간배양한후 TNF-α, IL-10, IFN-γ를측정하기위해배양배지를원심분리 (12,000 rpm, 3 min) 하여상층액을얻었다. TNF-α, IFN-γ의측정은 TNF-α, IFN-γ 각각의 ELISA kit(r&d Systems INC., Minneapolis, MN, U.S.A) 를이용하여정량하였으며 standard에대한표준곡선의 r 2 값은 0.99 이상이었다. 8. 통계적분석방법 모든실험의표시된결과는 3 번수행하였으며, 통계분 한국식품조리과학회지제 26 권제 4 호 (2010)
인삼과팽화홍삼의 Ginsenoside 함량및항염효과비교 477 Fig. 1. HPLC chromatogram of the ginsenoside standards. Table 1. The change of content ginsenoside in white ginseng and puffed red ginseng Compound R-T(min) WG PRG Area(uV.min) Content(mg/g) Area(uV.min) Content(mg/g) Rg1 24.32 5739.6 4.5 3782.5 3 Re 25.41 ND ND ND ND Rh1(S) 37.47 674.5 0.4 957.2 0.6 Rh1(R) - 2698.1 ND 3424.2 ND Rb1 38.27 1648.2 1.8 2685.1 3 Rb2 40.07 1022.6 1.1 324.7 0.4 Rg3(S) 54.53 912.6 0.7 395.8 0.3 Rg3(R) 55.28 ND ND 802.3 0.5 PPT 56.18 ND ND ND ND Rk1 64.06 ND 678.5 3.9 Rg5 65.07 3532.6 4474.4 4.9 C-K 64.54 ND ND ND ND Rh2(S) 66.48 ND ND ND ND Rh2(R) 67.15 ND ND ND ND PPD 77.47 16807.4 2 1680.3 0.2 PPD: protopanaxadiol, PPT: protopanaxatriol, WG: white ginseng, PRG: puffed red ginseng, ND: not detected. 석 (STASTICA) 은 mean±s.d 로표시하였고, ANOVA 에의해분석하였다. 통계적유의성은 p 0.05 로판정하였다. 1. 사포닌조성분석 III. 결과및고찰 Fig. 1 은 HPLC 로확인한사포닌표준품 11 종의크로마토그램프로파일이다. 인삼, 및팽화홍삼분말추출물의사포닌조정을 HPLC 로분석한결과는 Table 1 과같다. 결과에서알수있듯이백삼에비해팽화홍삼에서 Rg 1 과 Rb 2 같은진세노사이드들은감소하였고, Rb 1, Rg 5 + Rk 1 등이증가함을확인하였다. 이는김등 (2009) 이보고한홍삼과인삼에팽화를할경우조사포닌함량이증대되고일부진세노사이드에서 2 배이상의증가량을보인다는보고와유사한경향을보였다. Hyun 등 (2009) 의보고에서인삼을열에의한증숙과정과미생물의발효에의해서고분자사포닌이저분자사포닌 (Rg 3 및 Rg 5 ) 으로조성이변화된다는보고와달리팽화삼은고분자인 Rg 1 의함량이유의적으로증가했으며저분자사포닌인 Rg 5 + Rk 1 등이증가되어열이나미생물에의한사포닌의변화와는경향성이상이한것으로나타났다. Korean J. Food Cookery Sci. Vol. 26, No. 4 (2010)
478 신용서 Fig. 3. The effects of WG and PRG on inos and COX-2 expression in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. RAW 264.7 cells (1 10 6 cells/ml) were treated with LPS (10 µg/ml) and combined with WG and PRG (50 µg/ ml) for 24 h. The protein levels of inos and COX-2 were determined using immunoblotting method. WG: white ginseng, PRG: puffed red ginseng. Fig. 2. The effect of WG and PRG on LPS-induced NO production and cell viability in RAW 246.7 cells. RAW 264.7 cells (2 10 5 cells/ml) were treated with LPS (10 µg/ml) and combined with WG or PRG for 24 h. Nitrite was measured by Griess reagent. The values are the mean±s.d. of three independent experiments. #p 0.01 compared with LPS treated group, *p 0.05 compared with the combination of LPS and WG-treated group. WG: white ginseng, PRG: puffed red ginseng. 2. NO 생성억제 Nitric oxide(no) 의생성은면역반응에있어중요한역할하며, 과도한 NO의생성에의해염증을유발시키는매개체가되는인자이다 (Yun HY 등 1996, Mu MM 등 2001, Stokes KY 등 2001). 마우스대식세포에 LPS로염증을유발시 NO의생성이급격히증가되는것을확인하였으며, 인삼과팽화홍삼을처리한군에서 LPS에의한 NO의생성을농도의존적으로감소시키는것을확인할수있었다 (Fig. 2). 인삼처리군에비해팽화홍삼을처리한군에서 NO의생성을더욱효과적으로저해하였다. 인삼의진세노사이드중 PPD구조를이루는사포닌이염증억제효과를나타내며, 특히염증을매개시키는 NO의생성을억제를통하여효과를나타낸다는보고를통하여 (Lee WM 등 2006), 팽화가공을통하여인삼의특정진세노사이드의증가를통하여항염효과가증대되는것으로추정된다. 또한홍삼과발효홍삼에서도인삼에비해효과적인 NO의생성을억제 (Hyun MS 등 2009) 하는것으로나타나, 인삼의사포닌의조성변화와항염효과는밀접한관계가있는것으로추정된다. 3. inos 및 COX-2 발현억제효과 각시료에의한염증인자 (NO) 의억제와 inos 단백질 발현과상관성을알아보기위해 RAW 264.7 세포에 LPS (10 µg/ml) 를사용하여 inos 의발현을유도한후팽화홍삼과인삼을 50 µg/ml 농도로처리하여 inos 발현에대한억제정도를 western blot 을통해알아보았다. 그결과, LPS 에의해 inos 단백질은뚜렷하게증가하였으으며, 인삼과팽화홍삼모두에서 LPS 에의한 inos 발현을억제시키는것을확인하였다 (Fig. 3). COX-2 는 arachidonic acid 을 Prostaglandins(PGs) 으로전환시키는효소로써정상적인상태에서는발현되지않고염증자극, cytokine(il-1), Growth factors 등의자극에의하여염증매개물질인 PGE2 생성을통하여통증과발열을매개한다 (Posadas I 등 2000; Seybold VS 등 2003). 본연구에서, RAW 264.7 세포에 LPS(10 µg/ml) 를사용하여 COX-2 의발현을유도한후팽화홍삼및인삼을 50 µg/ml 농도로처리하여 COX-2 발현에대한억제정도를 western blot 을통해알아보았다. 그결과, inos 의발현양상과마찬가지로 LPS 에의한 COX-2 의발현은팽화홍삼을처리한군에서인삼을처리한군보다강한억제효과를나타내었다 (Fig. 3). 이러한경향은홍삼과발효홍삼이가공과정을통해유효사포닌의증가에의해염증시발현되는단백질인 inos 와 COX-2 의발현을백삼에비해더욱효과적으로억제하였다는보고 (Hyun MS 등 2009) 와도일치한다. 4. NF-κB 활성억제효과 COX-2, inos 그리고염증유도사이토카인들의발현에있어서 NF-κB가 promoter에작용하여중요한조절인자로작용한다 (Karin M 등 2000, Surh YJ 등 2001). 세포질내의 NF-κB 는세포막으로부터의면역활성화신호에의해핵내로이동하여면역활성화에관여하는여러유전자를촉진하는데이에는세포질내 NF-κB의억제인자인 IκB 단백질의분해가요구된다 (Baeuerle PA 1998). 따라서, 팽화홍삼과인삼이염증유발유전자들을조절하는 NF-κB의활성을억제하는지알아보기위해 western 한국식품조리과학회지제 26 권제 4 호 (2010)
인삼과 팽화홍삼의 Ginsenoside 함량 및 항염효과 비교 479 Fig. 4. The effects of WG and PRG on the inhibition of NF-κB expression in RAW 264.7 cells. RAW 264.7 cells (1 106 cells/ml) were treated with LPS (10 µg/ml) and combined with WG and PRG (50 µg/ml) for 24 h. NFκB protein levels were determined using immunoblotting method. IκB and p-iκb protein levels were determined using immunoblotting method. WG: white ginseng, PRG: puffed red ginseng. blot을 통해 알아보았다. 그 결과, NF-κB(p50 subunit)는 LPS 처리군에서 발현이 증가하였으며 각각의 시료를 처 리한 두 군 모두에서 LPS 처리군에 비하여 NF-κB의 발 현이 유의하게 감소하였다(Fig. 4). NF-κB 활성과 관련이 있는 IkB protein의 인산화를 Western blot을 통해 알아보았다. 그 결과 두 군 모두 IkB 의 인산화를 억제시키는 것을 확인 하였다(Fig. 4). Hyun 등이(2009) 보고한 홍삼과 발효홍삼이 IκB의 인산화억제 로 인한 NF-κB의 활성화를 억제시키고 또한 COX-2와 inos를 억제하여 항염효과를 나타내는 것과 유사한 결 과를 보였다. 5. TNF-α와 IFN-γ의 생성억제 효과 LPS에 의해 유도되는 염증사이토카인인 TNF-α와 IFN-γ 의 생성을 억제 시키는지 조사하기 위해서 시료와 LPS 를 RAW 264.7 세포에 각각 처리한 다음 24시간 배양 후 LPS에 의해 활성화된 세포로부터 분비되는 cytokine의 양을 측정하였다. 그 결과, LPS 단독처리군에서의 TNF-α 는 5.8 ng/ml로 높은 증가를 보였으며, 팽화홍삼 및 인 삼 처리군에서는 농도의존적으로 TNF-α의 생성을 억제 하였다(Fig. 5(a)). 또한 IFN-γ는 LPS를 단독 처리하였을 때 651.25 pg/ml로 높은 증가를 보였으나 인삼과 팽화 홍삼을 처리한 군에서는 농도의존적으로 IFN-γ의 생성 을 억제하였다(Fig. 5(b)). 팽화홍삼 및 인삼 모두 TNF-α와 IFN-γ의 생성을 억제 하는 경향을 나타냈지만 인삼에 비해 팽화홍삼의 cytokines 의 억제 효과가 더욱 높았다. 이상의 결과들을 통하여 인 삼 및 팽화홍삼 모두 염증의 주체가 되는 대식세포계열 인 RAW 264.7 세포에서 NF-κB의 전사 작용을 억제함 으로써 LPS에 의해 유도되는 TNF-α와 IFN-γ와 같은 proinflammatory cytokine 생성 억제 및 NO의 생성억제와 Fig. 5. The Effect of WG and PRG on LPS-induced TNF-α and IFN-γ in RAW 264.7 cells. Cells (2 105 cells/ ml) treated with LPS (10 µg/ml) and combined with WG and PRG for 24h. And then supernatants were harvested and assayed by ELISA for TNF-α and IFNγ kit, respectively. The velues are the mean ± S.D. of three independent experiments. #p 0.01 compared with LPS treated group, *p 0.05 compared with the combination of LPS and WG-treated group. WG: white ginseng, PRG: puffed red ginseng. inos, COX-2 유전자 발현을 효과적으로 저해하였다. 특 히 일반 인삼에 비하여 팽화홍삼은 같은 농도에서 더 높 은 항염효과를 보이는 것을 확인하였다. 이와 같은 결과 들은 본 실험과 같은 조건으로 실험하여 보고되어진 인 삼과 홍삼, 발효홍삼의 항염효과 비교에 대한 보고(Hyun MS 등 2009)와 유사한 결과를 나타내어, 이러한 결과는 가공법에 의한 사포닌의 조성 변화에 따른 것으로 보여 지며, 유효사포닌의 증가로 인해 염증억제에 있어서 가 공을 하지 않은 인삼에 비해서 더욱 좋은 결과를 나타내 는 것으로 사료된다. Korean J. Food Cookery Sci. Vol. 26, No. 4 (2010)
480 신용서 IV. 요약 인삼과팽화홍삼은인삼의가공방법에따라구분되어지며, 가공처리과정중인삼의효능을나타내는사포닌함량의변화가생긴다. 본연구에서는인삼과팽화홍삼을이용하여마우스대식세포인 RAW 264.7 세포에서 LPS 에의한염증에대한항염효과와그기전을규명하고자하였다. 본연구를통해서인삼과팽화홍삼모두 LPS 에의한 NO 의생성을억제시키는것을확인하였으며, TNF-α 및 INF-γ 의생성또한억제시키는것을알수있었다. 인삼과팽화홍삼모두 COX-2 의발현및 LPS 에의한 IκB 의인산화를억제시킴으로써 NF-κB 의활성을억제시키는것임을알수있었으나인삼에비하여팽화홍삼의항염효과가더욱높았다. 그러므로팽화홍삼이인삼에비하여 NO 의생성을더효과적으로억제시키는것은팽화가공을통하여특정진세노사이드 (Rb 1, Rg 5 + Rk 1 ) 의증가에의한것으로추정된다. 참고문헌 An YE, Cho JG, Baik NI, Choi SW, Hur NY, Park SJ, Kim BY, Baik MY. 2010. Isolation of 20(S)-Ginsenoside Rg 3 and Rg 5 from the puffed red ginseng. Food Enginerring progress 14(2):159-165 Baeuerle PA. 1998. IkappaB-NF-kappaB structures: at the interface of inflammation control. Cell 95:729-731 Cho JY, Kim AR, Yoo ES, Baik KU, Park MH. 2002. Ginsenosides from Panax ginseng differentially regulate lymphocyte proliferation. Planta Med 68:497-500 Choi JH, Kim DH, Sung HS, Kim WJ, Oh SK. 1982. Kinetic studies on the thermal degradation of ginsenosided in ginseng extract. Korea J Food Sci Technol 14(3):197-202 Han CK, Hong HD, Kim YC, Kim SS, Sim GS. 2007. Effect of puffing on quality characteristics of red gginseng tail root. J. Ginseng Res. 31(3):147-153 Hyun MS, Hur JM, Shin YS, Song BJ, Mun YJ, Woo WH. 2009. Comparison study of white ginseng, red ginseng, and fermented red ginseng on the protective effect of LPSinduced inflammation in RAW 264.7 cells. J. Appl. Chem. 52(1):21-27 Jang SK, Kim JH, Chung YS, Ahn DC, Kang MJ, Lee DG, Kim SH. 1994. An Experimental Study on the Effect of Immunopotential and the Anticancer Effect of Red Ginseng Extract. J Ginseng Res 18:151-159 Karin M, Ben-Neriah Y. 2000. Phosphorylation meets ubiquitination: the control of NF-[kappa]B activity. Annu Rev Immunol 18:621-663 Kim ST, Jang JH, Kyun JH, Moon KD. 2009. Changes in the chemical components of red and white ginseng after pugging. The Korean Society of Food Preservation 16(3):355-361 Lee EJ, Ko E, Lee J, Rho S, Ko S, Shin MK, Min BI, Hong MC, Kim SY, Bae H. 2004. Ginsenoside Rg1 enhances CD4(+) T-cell activities and modulates Th1/Th2 differentiation. Int Immunopharmacol 4:235-244 Lee WM, Kim SD, Kim, KS, Song YB, Kwak YS, Cho JY, Park HJ, Oh JW, Rhee MH. 2006. Protopanaxadiol modulates LPS-induced inflammatory activity in murine macrophage RAW264.7 cells. J Ginseng Res 30:181-187 Mu MM, Chakravortty D, Sugiyama T, Koide N, Takahashi K, Mori I, Yoshida T, Yokochi T. 2001. The inhibitory action of quercetin on lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in RAW 264.7 macrophage cells. J Endotoxin Res 7:431-438 Posadas I, Terencio MC, Guillén I, Ferrándiz ML, Coloma J, Payá M, Alcaraz MJ. 2000. Co-regulation between cyclo-oxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase expression in the time-course of murine inflammation. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 361:98-106 Seybold VS, Jia YP, Abrahams LG. 2003. Cyclo-oxygenase-2 contributes to central sensitization in rats with peripheral inflammation. Pain 105:47-55 Shin JY, Choi EH, Wee JJ. 2001. New methods for separation of crude ginseng saponins. Korean J Food Sci Technol 33(2): 166-172 Sohn HJ, Jang JG, Lee SK, Kim JG, Lee YW. 1993. Study on extraction methods of saponin in ginseng products. Korean J Ginseng Sci 8(1):32-37 Stokes KY, Cooper D, Tailor A, Granger DN. 2002. Hypercholesterolemia promotes inflammation and microvascular dysfunction: role of nitric oxide and superoxide. Free Radic Biol Med 33:1026-1036 Surh YJ, Chun KS, Cha HH, Han SS, Keum YS, Park KK, Lee SS. 2001. Molecular mechanisms underlying chemopreventive activities of anti-inflammatory phytochemicals: downregulation of COX-2 and inos through suppression of NF-kappa B activation. Mutat Res 480-481:243-268 Yang SJ, Woo KS, Yoo JS, Kang TS, Noh YH, Lee J, Jeong HS. 2006. Changes of Korean ginseng components with high temperature and preassure treatment. Korean J Food Sci Technol 38(4):521-525 Yun HY, Dawson VL, Dawson TM. 1996. Neurobiology of nitric oxide. Crit Rev Neurobiol 10:291-316 2010 년 7 월 16 일접수 ; 2010 년 8 월 13 일심사 ( 수정 ); 2010 년 8 월 13 일채택 한국식품조리과학회지제 26 권제 4 호 (2010)