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Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 33(1): 41-47 (2018) http://dx.doi.org/10.7841/ksbbj.2018.33.1.41 ISSN 1225-7117 / eissn 2288-8268 Research Paper 국내산신이대잎추출물의 B16F10 흑색종세포내에서멜라닌생성억제 최문희, 양승화, 신현재 * Inhibition of Melanogenesis by Domestic Bamboo Leaves (Sasa coreana Nakai) Extract in B16F10 Melanoma Cells Moon-Hee Choi, Seung-Hwa Yang, and Hyun-Jae Shin* Received: 22 February 2018 / Revised: 15 March 2018 / Accepted: 21 March 2018 2018 The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Abstract: Bamboo trees have been used as construction material, fiber and food resources. Among many parts of the tree, especially, bamboo leaves are known to contain various bioactive compounds for food and medicinal application. Polyphenols, glycosides, amino acids and minerals such as silica in bamboo leaves have provided antioxidant, astringent, antiwrinkle properties. However, there is little study on the skin whitening effect of the extract. In this study, therefore, inhibition of in-vitro tyrosinase and melanin biosynthesis by the water, ethanol, and methanol extracts of domestic bamboo Sasa coreana Nakai were investigated in B16F10 melanoma cells. The methanol extract (SCM) showed in-vitro tyrosinase inhibition activity with IC 50 values of 168 µg/ml, and invivo cytotoxic concentration ranges > 100 µg/ml. Protein expression and transcription levels of TYR, TRP-1, TRP-2 were decreased in a dose-dependent manner by treatment with SCM. These results suggest that SCM could be used as a candidate for a potential whitening agent in cosmetics. Keywords: bamboo leaves, Sasa coreana Nakai, tyrosinase inhibition, melanogenesis, whitening agent 조선대학교대학원화학공학과 Department of Chemical Engineering, Graduate School of Chosun University, Gwangju 61452, Korea Tel: +82-62-230-7518, Fax: +82-62-230-7226 e-mail: shinhj@chosun.ac.kr 1. INTRODUCTION 최근경제성장에따른소득수준의향상과삶의질적수준의요구에맞춰화장품산업은보다기능적이고전문적인기술을요하는첨단산업으로발전하고있다. 이에따라화장품의새로운원료개발의요구가증대되고있으며, 특히천연물을활용한미백과노화방지등의기능성화장품소재개발의중요성이날로커지도있다 [1]. 화장품의소재로써고려되어야하는부분중가장중요한측면은원료의안정성과환경친화적인천연소재의발굴이다. 화장품에이용되는천연물은인체에대해서약리학적유효성을나타내는소재가대부분으로여러가지화학물질의혼합물이다 [2]. 따라서역사적으로오랜기간사용해온안전한식물로서다양한기능성을제공할수있는자원의발굴이중요하다. 대나무는아열대성화분과식물로써, 우리나라에서는호남, 영남지방을중심으로군락을이루어자생하고있으며, 대표적인죽종으로는왕대 (Phyllostachys bambusoides), 솜대 (Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf), 맹종죽 (Phyllostachys pubescens), 조릿대 (Sasa borealis), 신이대 (Sasa coreana Nakai) 등이있다 [3]. 대나무의용도는주로죽세공품, 농요재, 건축용재, 펄프용재등다양한자재로사용되고있으며, 최근에는자재로서의용도를넘어생리활성을기반으로식품, 화장품, 의약품의원료등으로그활용영역이넓어지고있다 [4]. 대나무를화장품소재로이용하기위해서주로이용하는부위는줄기와잎이며, 대나무줄기를이용한연구결과가최근들어발표되고있으며, 이는대나무줄기에포함된다양한폴리페놀성분에기인한것으로항산화및항비만효과가보고되었다 [5]. 또한대나무잎에는 phenolic acids, coumarin lactones, anthraquinones, amino acids 를비롯하여각종플라보노이드성분이다량으로

42 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 33(1): 41-48 (2018) 함유되어있어항산화, 항노화및항균활성이보고되었으며, 항비만, 항콜레스테롤, 대사증후군억제효과에관한연구및콜라겐합성에효과가있음이보고되었다 [6]. 대나무잎추출물의미백활성에관한연구는매우미미한실정이며, 특히신이대잎의미백활성은보고된바가없다. 기존미백제들은작용기전에따라아젤릭산 (azelaic acid), 아스코르빅산 (ascorbic acid), 코직산 (kojic acid), 알부틴 (arbutin) 과같은타이로시네이즈 (tyrosinase) 저해제및자외선차단효과가있는토코페롤 (tocopherol) 등으로분류할수있다 [7]. 그러나이러한합성미백소제는대부분피부알레르기반응, 일정농도이상에서는독성이유발되는문제점이있어화장품미백소재로써적합하지않다 [8]. 따라서세포독성문제, 피부홍반및예민반응등의한계점을극복하기위해보다안정적이며효과적인천연소재의개발이필요하다. 본연구에서는대나무잎추출물의미백활성기전규명을통해천연미백소재로써의적합성에대해서조사하였다. 2. MATERIALS AND METHOD 2.1. 대나무잎추출본연구에서는전라남도담양군담양읍에서채취한신이대잎 (Sasa coreana Nakai) 을 dry oven 을사용하여 60 o C 에서 5 시간동안건조하였으며, 각각다른 3 가지추출방법을사용하였다 (Fig. 1). 건조된대나무잎 10 g 을물 500 ml 에넣어 120 o C 에서 90 분동안 auto clave 를사용하여추출한뒤여과하였으며여과액을감압농축기로농축하여열수추출물을수득하였다. 대나무잎 10 g 을 70% ethanol 250 ml 에넣어 80 o C 에서 6 시간동안환류추출하고여과액을감압농축기로농축하여최종적으로주정추출물을수득하였다. 대나무잎 10 g 을 100% methanol 500 ml 에넣어상온에서 7 일간침지추출하 고추출된용액은여과하였으며여과액을감압농축기로농축하여유기용매추출물을얻었다. 수용액, ethanol, methanol 용매를사용하여제조된추출물은각각 SCW, SCE, SCM 으로명명하였다. 2.2. 대나무잎추출물의항산화활성 2.2.1. DPPH radical 소거능측정 DPPH free radical 은천연추출물의항산화활성측정하는방법으로널리사용되는방법이다. 본실험에서는항산화활성측정방법중 Blois 의방법을변형하여시료의 radical 소거능을측정하였다 [9]. Methanol 에용해시킨 0.1 mm DPPH (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl, Sigma, USA) 800 μl 와각샘플 200 μl 을 micro centrifuge tube 에넣고 voltexing 하여암실에서 15 분간반응시켰다. 남아있는 radical 의농도를 UV-Visible spectrophotometer (SCINCO, Seoul, Korea) 를사용하여 517 nm 에서측정하였다. 양성대조군으로는 ascorbic acid (Sigma, USA) 를사용하였고, 추출물의 DPPH 에대한소거능 (IC 50 ) 은용매만을사용한대조군의흡광도를 50% 감소시키는데필요한농도로나타내었다. Antioxidant activity (%) absorbance of control absorbance of 시료 = -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 100 absorbance of control 2.2.2. ABTS radical 소거능측정 ABTS radical scavenging 은친수성및소수성시료의 radical 소거활성을모두측정할수있어적용범위가넓다는장점을가지고있다. 본실험에서는 Jeong 등의방법을변형하여측정하였다 [10]. 증류수에용해한 7 mm 의 ABTS 용액과 2.45 mm potassium persulfate 를 1:1 로넣어 12 시간동안암소에방치하였다. Radical stock solution 을흡광도값이 0.70±0.02 이되도록 PBS (ph 7.4) 로희석하였다. 희석된용액 800 μl 에농도 Fig. 1. Schematic diagram of the extract preparation from Sasa coreana nakai.

국내산신이대잎추출물의 B16F10 흑색종세포내에서멜라닌생성억제 43 별로제조된시료 200 μl 씩을가하여암실에서 15 분동안반응후흡광도를측정하였다. 양성대조군으로는 ascorbic acid (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 를사용하였고, 추출물의 ABTS 에대한소거능 (IC 50 ) 은용매만을사용한대조군의흡광도를 50% 감소시키는데필요한농도로나타내었다. Antioxidant activity (%) absorbance of control absorbance of 시료 = -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 100 absorbance of control 2.3. Total polyphenol 함량측정 Folin-Ciocalteu 시약을증류수로 10 배희석한용액과 2% Na 2 CO 3 (w/v) 와 1:1:1 의비율로혼합하였다. 실온에서 30 분간반응시킨후, 반응혼합물의흡광도는 UV-Visible spectrophotometer (SCINCO, Seoul, Korea) 를사용하여 750 nm 에서측정하였다 [11]. 2.4. HPLC 분석항산화활성이가장높은 SCM 을대상으로 high-performance liquid chromatography (HPLC) 를사용하여추출물속에함유된 polyphenol (catechin, chlorogenic acid, caffeic acid, p-coumaric acid, ferulic acid, rutin) 을정량분석하였다. Shimadzu HPLC 의 LC-20AD 펌프, diode array detector (SPD-20A) 및 XBridge C18 column (4.6 150 mm, 5 μm) 을사용하였다. HPLC 의이동상은 A: water (0.2% (v/v) TFA) 와 B: methanol (0.2% (v/v) TFA) 를사용하였다. HPLC 분석조건은 0~50 분, 25~55% B, 유속은 0.6 ml/min 이었다. Column 온도는 40 o C 이고, 흡수파장은 330 nm 에서측정되었으며, 시료주입은 20 μl 로주사하고표준물질의머무름시간을비교하여화합물을확인하였다. 2.5. Mushroom tyrosinase 저해활성측정 SCM의 tyrosinase 저해활성을확인하기위해 Macrini 방법 [12] 에따라진행하였다. 실험방법은시험관에 0.1 M sodium phosphate buffer (ph 6.5) 220 μl와 25~100 μg/ml 농도로제조된신이대추출물 20 μl, L-tyrosine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 1.5 mm 40 μl, 1500 단위 (unit) 로제조한 mushroom tyrosinase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 20 μl을넣고 37 o C에서 15분간반응시켰다. 반응이끝난후 tyrosinase에의해 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) 로부터형성되는 DOPAchrome의양을 490 nm에서측정하였다. 2.6. 세포배양 B16F10 cell은한국세포주은행에서분양받았으며, 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL, USA), 0.2% sodium bicarbonate를첨가한 Dulbecco s modified Eagle s medium (DMEM; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 를배지로사용하였고, 37 o C에서 5% CO 2 상태로배양하였으며, 세포가바닥면적의 90% 정도까지자란상태에서계대배양하여실험을진행하 였다. 2.7. 세포독성평가 B16F10 cell suspension 을 6 well 에 1 10 4 cells/ml 농도로 200 µl 씩분주하여배양기에서 24 시간동안안정화를시킨후시료를농도별로처리한후 24 시간동안배양하였다. Choi 의방법 [13] 에따라 2.5 mg/ml MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액을 well 당 100 µl 씩넣어 1 시간동안배양기에방치한다. 이후상등액을제거하고 DMSO 를 well 당 200 µl 씩가하고 1 분간 shaking 하여 formazan 을완전히용해시킨후 ELISA Bio-Tek instrument Inc. (Winooski, VT, USA) 을사용하여 540 nm 에서흡광도를측정하였다. 본실험에사용한 MTT, DMSO 는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 에서구입하였다. 2.8. Melanin 함량측정 Melanin 함량측정은 Hosoi 의방법 [14] 에따라 B16F10 세포를 96 well 에 1 10 4 cells/ml 농도로분주하고 24 시간후에 1000 µg/ml 농도의 α-msh 와 SCM 을각농도별 (25~100 µg/ ml) 로각각처리하였으며, 48 시간경과후멜라닌생성을확인하고세포를 PBS 로세척하였다. 세포를수확하고 12,000 rpm 에서 5 분동안원심분리하고생성된 pellet 에 1N NaOH 를넣고 80 o C 에서 1 시간동안방치하여용해시킨후 405 nm 에서흡광도를측정하였다. 멜라닌함량은무처리군의흡광도와비교하였으며, 양성대조군으로는 arbutin 을사용하였다. 2.9. Melanogenesis 관련단백질발현분석 Melanogenesis의각단계에관여하는효소인 tyrosinase와 TRP-1, TRP-2의단백질발현의변화양상을 westernblot 방법으로분석하였다 [15]. Tyrosinase, TRP-1, TRP2, actin의일차항체와 anti-goat, anti-rabbit, antimouse등의이차항체는 Santa Cruz Biotechnology (CA, USA) 로부터구입하여사용하였다. 시료처리가끝난배양세포에서 cell lysate를추출하여 Bradford assay로단백질농도를결정한후 50 µg의단백질을 10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis (SDS- PAGE) 로전기영동하고 nitrocellulose membrane에 blotting한후 1:1000으로희석한일차항체와 hybridization하였다. Membrane 수세후 horse radish peroxidase가부착된이차항체 (1: 1000) 로 1시간동안반응시키고 chemiluminescence detection system (FluoChem FC2, AlphaInnotech, USA) 을이용하여단백질발현을분석하였다. 2.10. 통계처리모든결과값은세번반복실험후통계처리하였으며, 실험에의해얻어진값들의평균 ± 표준편차로나타내었다. 대조군과실험군사이의통계학적유의성검증은 SPSS 23 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 를이용하여 t-test 를실시하였으며, p<0.05 이하경우통계적으로유의하다고판정하였다.

44 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 33(1): 41-48 (2018) Table 1. Antioxidant activity and total polyphenol content results of Sasa coreana Nakai extracts Sample a DPPH IC 50 (µg/ml) ABTS IC 50 (µg/ml) TPC (GAE µg/mg) b c SCW 608 166 24 SCE 797 138 25 SCM 604 117 42 Ascorbic acid 25 56 - a IC50 Inhibitory concentration, b TPC Total polyphenol content, c GAE Garlic acid equivalent 3. RESULTS AND DISCUSSION 3.1. DPPH radical 및 ABTS radical 소거능측정국내산신이대잎 (Sasa creana Nakai) 을 3 가지방법 (autoclave, 70% ethanol, 100% methanol) 으로추출하였다. SCW, SCE, SCM 의추출수율은각각고형분기준으로 13%, 16%, 17% 로확인되었으며, 100% methanol 을사용하여추출한 SCM 의수율이가장높게확인되었다. 신이대잎추출물들의항산화특성을 DPPH, ABTS radical 을사용하여 radical 소거활성에대해분석하였다. 각시료의 DPPH IC 50 범위는 604~ 797 μg/ml 로확인되었으며, ABTS 의 IC 50 범위는 117~166 μg/ ml 로확인되었다 (Table 1). 특히신이대잎추출물중 100% methanol 로추출된 SCM 의 DPPH 와 ABTS IC 50 는각각 604 μg/ml, 117 μg/ml 로 3 가지추출물중가장높은항산화활성이확인되었다. 기존의연구에서왕대, 솜대, 맹종죽, 조릿대및오죽추출물의항산화활성을조사하였는데 IC 50 범위는 200~1600 μg/ml 로보고되었다 [16-18]. 본실험결과가기존의항산화활성보다높은항산화활성을나타내는이유는대나무잎의종류와추출방법이다르기때문으로판단되며, 자생지및채취시기에따라대나무잎의폴리페놀성분및생리활성을나타내는성분들의함량도달라질수있을것으로생각된다. 3.2. Total polyphenol 함량측정각각다른방법으로추출된국내산신이대잎 (SCW, SCE, SCM) 의총 polyphenol 의함량을확인한결과 SCM 의 polyphenol 함량이 gallic acid 기준으로보았을때, 42 μg/mg 로가장높은 polyphenol 함량이확인되었다 (Table 1). 기존의연구에서조릿대열수추출물과 80% methanol 추출물의총 polyphenol 함량은각각 15 μg/ml, 12 μg/ml 로확인되었는데총 polyphenol 함량이높을수록높은항산화활성이높다고보고되었다 [19-21]. 본연구의실험결과와비교해보았을때 SCM 의총 polyphenol 함량이기존의연구결과보다더높은것으로확인되었다. 3.3. HPLC 분석기존연구결과에따르면대나무잎추출물에는 caffeic acid, isoorientin, orientin, p-coumaric acid, ferulic acid, hesperidin 등의 phenolic acid가함유되어있는것으로알려져있다 [22]. SCM을 HPLC 분석을통하여추출물속에함유되어있는 polyphenol을정량하였다. HPLC 분석결과 catechin 409 μg/g, chlorogenic acid 178 μg/g, caffeic acid 109 μg/g, p-coumaric acid 54 μg/g, ferulic acid 4 μg/g, rutin 39 μg/g이함유된것을확인하였다 (Fig. 2). SCM에다량으로함유되어있는 catechin, chlorogenic acid, caffeic acid, p-coumaric acid는천연항산화 Fig. 2. High-performance liquid chromatography (HPLC) chromatograms of (A) SCM and (B) standard.

국내산신이대잎추출물의 B16F10 흑색종세포내에서멜라닌생성억제 45 제로알려져있는성분이다. 기존의연구에서신이대잎 methanol 추출물의 ethyl acetate fraction 에서 hesperidin, naringin, isoorientin, ferulic acid, vitexin 등의순으로 phenolic compound 의함량이높은것으로보고되었다 [23]. 이와같은결과는대나무잎의추출용매에따라 phenolic compound 의종류가달라지는것을나타내며, 추출방법에따라다른항산화활성이확인되는것을의미한다. 3.4. Tyrosinase 저해활성 Tyrosinase 는구리를함유한효소이며, 멜라닌생성에있어서결정적인역할을하는효소이다. Melanosome 내에서 tyrosine 을산화시켜 DOPA 를만드는 tyrosine hydroxylase 로 DOPA 를산화시켜 DOPA quinone 을만드는 DOPA oxidase 로써작용하여멜라닌중합체를합성한다 [24]. 본연구에서는신이대잎추출물 (SCM) 의 tyrosinase 저해활성을측정하기위해 SCM 을각농도별 (25, 50, 100 µg/ml) 로처리하여실험을진행하였다. 대조군으로 tyrosinase 저해제로알려져있는 ascorbic acid 와 catechin 을사용하였으며, SCM 의저해활성을측정한결과는 Fig. 3 에나타내었다. 본실험에서 SCM 의 tyrosinase 저해결과 IC 50 값은 164 µg/ml 으로측정되었으며, 양성대조군으로사용한 ascorbic acid 과 catechin 의 IC 50 값은각각 38 µg/ml 과 97 µg/ml 로나타났다. 이와같은결과는양성대조군으로사용한 ascorbic acid 와 catechin 보다는낮은저해활성을나타내지만천연물수준에서는매우높은저해활성이라할수있다. 일반적으로페놀류화합물을다량으로함유하는식물체와그추출물은높은항산화능을갖기때문에, tyrosinase 에의한가역적산화반응을억제시키는특성을나타낸다 [25]. 또한페놀류화합물은 tyrosinase 의기질인 tyrosine 과구조적으로유사하여 tyrosinase 의활성을저해한다고알려져있다 [26]. 효소반응에서 inhibitor 는기질과구조및모양이유사하며효소의활성부위에기질과경쟁적으로결합한다 [27]. 기존의연구에서 catechin 은강력한 tyrosinase 저해제로써, 100 µm 이하의저농도에서효과가있음이밝혀졌으며, 또다른연구에서는대나무맹종죽추출물및발효추출물의 tyrosinase 저해활성을조사하였는데 625~1550 µg/ml 의농도범위에서 50% 이상저해능이있다고보고하였다 [28]. 이와같은결과로보았을때대나무의종류와추출방법에따라 tyrosinase 저해활성이다른것을확인할수있으며, 본연구에서기존의실험에비해높은 tyrosinase 저해활성이확인된이유는 SCM 에포함되어있는 catechin, chlorogenic acid 등다양한 polyphenol 성분들이 tyrosinase 활성을강력하게저해한것으로생각된다. 3.5. 세포독성평가 (MTT assay) 국내산신이대잎 (SCM) 의세포독성을측정하기위해각각 25, 50, 100 μg/ml 농도범위에서세포독성을측정하였다. 실험한농도전체에서 24 시간이지난후세포독성은나타나지않았다 (Fig. 4). 이와같은결과는기존의연구에서대나무맹종죽수액을처리했을때, 200 μg/ml 이하의농도에서세포 Fig. 3. The inhibitory effect of mushroom tyrosinase from SCM, ascorbic acid, and catechin using a cell-free system. Fig. 4. Cytotoxicity of SCM in B16F10 melanoma cells (1 10 4 cells/ ml) by MTT assay. MTT assay was performed in B16F10 melanoma cells treated with different concentrations of SCM for 24 h at 37 o C in 5% CO 2 condition. The data represent the mean±s.d of triplicate experiments. *p<0.05. 독성을나타내지않았던연구결과와유사하다 [29]. 화장품성분은화학물질, 합성유래또는천연물유래등이있으며, 경우에따라단독또는혼합물의형태로사용되는데최종제품의안전성을확보하기위해서는먼저원료성분의안전성이확보되어야한다. 본실험의결과로보았을때 SCM 은화장품원료로써비교적안전한성분으로판단되며, 추후인간유래세포및추가적인임상실험을통해안전성을확인할필요가있다. 3.6. Melanin contents 측정및 morphology 변화외부자극에의해유발된 B16F10 melnoma 세포에서 SCM 을각농도별로처리하고 α-msh (1 µg/ml) 병용처리하여 48 시간배양한후 melanin 생성량을측정하였다. Melanin 생성량실험결과 α-msh (1 μg/ml) 처리군은 control 실험군에비해서 melanin 함량이 95.69% 로증가되었으며, SCM 처리군은 α-msh (1 μg/ml) 처리군에비해 25, 50, 100 µg/ml 농도에서 30.8%, 69.6%, 86.4% 로 melanin 생성이감소되었고, 각각 arbutin 은 100 μg/ml 농도에서 59.2% 정도 melanin 생성량이감소

46 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 33(1): 41-48 (2018) Fig. 5. SCM inhibits α-msh-induced melanogenesis in B16F10 melanoma cells. B16F10 melanoma cells (1 104 cells/ml) were preincubated for 24 h, melanin content were measured in the cells treated with α-msh (1μg/mL) and SCM after 72 h incubation at 37oC in a 5% CO2 atmosphere. The bar graph represents mean±sem (n= 3). #p<0.05 vs. vehicle control; *p<0.05 vs. a-msh alone. Fig. 7. Effect of the SCM on the protein expression levels of tyrosinase, TRP-1, TRP-2 in B16F10 melanoma cells. B16F10 melanoma cells were treated with the indicated concentration (25, 50, 100 µg/ ml) of the SCM extract or with arbutin prior to α-msh treatment for 48 h. 의존적으로 발현이 억제됨을 확인할 수 있었다 (Fig. 7). 이와 같은 결과는 기존의 연구에서 제주 조릿대 추출물을 1~100 μg/ml 농도 범위에서 처리하고 단백질 발현감소를 확인하였 던 결과와 매우 유사하다 [30]. 4. CONCLUSION 본 연구에서는 국내산 신이대 잎 추출물이 mouse 흑색종인 B16F10 melanoma 세포 내에서 tyrosinase 저해활성 및 melanin 생성억제 효과가 있음이 확인되었다. 100 µg/ml 이하의 농도에서 멜라닌 합성 관련 단백질인 tyrosinase 및 TRP-1, TRP-2의 발현을 억제하였다. 이와 같은 결과로 보았을 때 국 내산 신이대 잎 추출물은 매우 높은 항산화 활성 및 미백 활 성을 가지고 있어 인체에 유해한 화학소재를 대체할 수 있는 천연 미백 소재로써 가능성이 있다고 판단된다. Fig. 6. Morphology changes of SCM on melanogenesis in B16F10 melanoma cells. B16F10 melanoma cells were cultured for 48 h in the presence of SCM 25~50 μg/ml. SCM were inhibits of α-mshinduced melanogenesis in B16F10 melanoma cells. morphology를 관찰하였을 때 48시간 이후 melanin 형성이 저 해되는 것을 확인하였다 (Figs. 5, 6). 3.7. 단백질발현 측정결과 (western blot assay) B16F10 melanoma 세포에 α-msh를 유도하고 SCM 추출물 각 농도별로 처리하여 melanin합성에 관여하는 tyrosinase, TRP-1, TRP-2의 단백질 발현에 미치는 영향을 조사하였다. α-msh로 색소침착을 유도시킨 세포주에 SCM을 25, 50, 100 μg/ml 농도로 48시간 동안 처리한 결과 tyrosinase, TRP-1, TRP-2에서 높은 단백질 발현억제 효과를 나타냈으며 농도 Acknowledgements 이 논문은 2017-18년도 교육부와 한국연구재단의 지역혁신 창의인력양성사업의 지원을 받아 수행된 연구입니다 (NRF2015H 1C1A1035883). REFERENCES 1. Lee, Y. G., J. H. Lee, N. Y. Lee, N. K. Kim, D. W. Jung, W. Wang, Y. S. Kim, H. G. Kim. T. N. Nguyen, H. S. Park, and N. I. Baek (2017) Evaluation for the flowers of compositae plants as whitening cosmetics functionality. J. Appl. Biol. Chem. 60: 5-11. 2. Jang, Y. A. and J. T. Lee (2015) The evaluation of antioxidant, antiinflammatory, and anti-aging of extract solvent and Poria cocos by parts. Kor. J. Aesthet. Cosmetol. 13: 377-383.

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