별표 4

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1 식품의약품안전처고시제 호 식품의기준및규격일부개정고시 식품의약품안전처 -1-

2 식품의약품안전처고시제 호 식품의기준및규격일부개정고시 1. 개정이유사료, 환경오염등으로인해축 수산물에비의도적으로오염되어잔류되는농약성분의잔류관리를위한축 수산물의잔류물질잔류허용기준을신설하고닭고기및알의잔류물질 22종잔류허용기준및시험법을신설하고자함국내외에서사용되는농약에대한잔류허용기준과잔류농약시험법을개정하여국민에게안전한식품을공급하고자함 2. 주요내용가. 식품원료의분류개정 [ 제 )] 1) 식품원료분류의식물성원료의과일류중열대과일류, 채소류중결구엽채류와엽채류분류개정 나. 축 수산물의잔류물질잔류허용기준신설 [ 제 ) 9), 제 ), 별표 4 및 5] 1) 해당축 수산물에대해직접사용이허가되지않았으나비의도적오염에의한잔류관리를위해현행농약잔류허용기준에서축 수산물을분리 신설 2) [ 별표 4] 축산물의농약잔류허용기준 을 [ 별표 5] 축 수산물의잔류물질잔류허용기준 으로개정 -2-

3 3) 축 수산물에대한잔류물질안전관리기준마련으로국민건강보호 다. 일반시험법개정등 [ 제 , 제 , 제 , 제 ~28, 제 , 제 , 제 , 제 , 제 , 제 ~57, 제 , 제 , 제 , 제 , 제 , 제 ] 1) 국내 외에서사용되는농약및동물용의약품의안전관리를위한시험법마련필요 2) 닭고기및알의살충제시험법신설및시험법오기및누락된사항을정정 3) 식품의잔류물질에대한시험법신설및개정으로안전관리가능 라. 농산물중농약잔류허용기준신설및개정 [ 별표 3 중 (14) 디메토에이트, (61) 비펜트린, (114) 카보퓨란, (192) 프로피코나졸, (227) 아세타미프리드, (228) 아족시스트로빈, (234) 펜피록시메이트, (237) 피메트로진, (239) 플루아지남, (246) 스피노사드, (248) 아바멕틴, ( 249) 에마멕틴벤조에이트, (290) 인독사카브, (321) 디노테퓨란, (3 32) 클로티아니딘, (338) 티아클로프리드, (370) 벤티아발리카브아이소프로필, (373) 스피로메시펜, (386) 플로니카미드, (399) 사이플루메토펜, (422) 펜티오피라드, (424) 피리플루퀴나존, (427) 이미시아포스, (428) 플루오피람, (430) 설폭사플로르, (439) 스피로테트라맷, (441) 피리벤카브, (453) 만데스트로빈, (455) 옥사티아피프롤린, (456) 인다지플람, (458) 사이클라닐리프롤, (459) 피플루뷰마이드, (461) 벤조빈디플루피르 ] -3-

4 1) 농약관리법 에신규등록된농약의안전관리및수입농산물에농약잔류허용기준설정신청에따른관련기준신설및개정필요 2) 디메토에이트등 33종의농약잔류허용기준신설및개정 3) 농산물에농약잔류허용기준을합리적으로신설및개정하여국민에게안전한식품공급 마. 축 수산물의잔류물질잔류허용기준신설및개정 [ 종전별표 4 중 (13) 메타미도포스, (17) 모노크로토포스, (21) 사이퍼메트린, (35) 아이소펜포스, (50) 페니트로티온, (53) 펜설포티온, (56) 포레이트, (65) 피리미포스메틸, (85) 클로티아니딘, (86) 피프로닐, (87) 이미다클로프리드, (88) 스피노사드, (89) 이버멕틴, (90) 아미트라즈, (91) 아바멕틴, (92) 카탑, (93) 클로르페나피르, (94) 에톡사졸, (95) 플루페녹수론, (96) 피리다벤, (97) 스피로메시펜, (98) 티오사이클람, (99) 테트라코나졸 ] 1) 사료로부터비의도적으로이행되어축산물에잔류가능성이있는농약 22종잔류허용기준신설 2) 동물용의약품잔류허용기준신설에따른중복기준 1종 ( 사이퍼메트린 ) 삭제 3) 축산물의농약잔류허용기준을신설하여국민에게안전한식품공급 3. 기타참고사항 가. 관계법령 : 식품위생법 제 7 조제 1 항 나. 예산조치 : 별도조치필요없음 다. 합 라. 기 의 : 해당사항없음 타 -4-

5 1) 행정예고가 ) 공고제 호, ( ~ ) 2) 식품및축산물위생심의위원회가 ) 식품위생심의위원회잔류물질분과심의 : 나 ) 축산물위생심의위원회잔류물질분과심의 : (1차) , (2차) ( 서면 ) 3) 규제심사가 ) 국무조정실규제심사대상여부 : 규제심사비대상 ( 국조실접수번호제 호, ) -5-

6 식품의약품안전처고시제 호 식품위생법 제7조제1항에따른 식품의기준및규격 ( 식품의약품안전처고시제 호, ) 을다음과같이개정고시합니다. 2018년 5월 1일식품의약품안전처장 식품의기준및규격일부개정고시 식품의기준및규격일부를다음과같이개정한다. 제 ) 의과일류중열대과일류, 채소류중결구엽채류와엽채류를 다음과같이한다. 대분류소분류품목 과일류열대과일류 바나나, 파인애플, 키위 ( 참다래 ), 아보카도, 파파야, 대추야자, 망고, 구아바, 코코넛, 리치, 패션프루트, 두리안, 망고스틴, 용안, 용과등 결구엽채류배추, 양배추, 브로콜리 ( 콜리플라워포함 ) 등 채소류 엽채류 엇갈이배추 ( 쌈배추, 봄동등포함 ), 상추, 양상추, 시금치, 들깻잎, 쑥갓, 아욱, 근대, 머위, 무 ( 열무포함, 잎 ), 취나물 ( 곰취, 참취, 미역취 ), 고춧잎, 참나물, 케일, 청경채, 갓, 냉이, 치커리 ( 잎 ), 앤디브, 파슬리, 호박잎, 신선초, 고추냉이 ( 잎 ), 비름나물, 씀바귀, 우엉잎, 겨자채, 뉴그린, 다청채, 당귀잎, 쑥, 둥글레 ( 잎 ), 뽕잎, 유채 ( 동초 ), 춘채, 고들빼기, 왕고들빼기, 민들레, 갯기름나물 ( 방풍나물 ), 고려엉겅퀴 ( 곤드레나물 ), 섬쑥부쟁이 ( 부지깽이나물 ), 엉겅퀴, 산마늘잎 ( 명이나물 ), 다채 ( 비타민 ), 원추리, 파드득나물 ( 삼엽채 ), 돌나물, 비트잎등 -6-

7 제 ) 농약의잔류허용기준중 (4) 및 (5) 를삭제한다. 제 ) (1) 2 및제 ) (2) 중 [ 별표 5] 를각각 [ 별표 4] 로한다. 제 ) 17) 을각각 10) 18) 로하고제 ) 를다음과같이신 설한다. 9) 축 수산물의잔류물질잔류허용기준 (1) 해당축수산물에직접사용이허가되지않았으나비의도적오염 ( 사료, 환경오염등 ) 에의한살충제, 살균제등농약성분의잔류관리를위해설정된기준을말하며 [ 별표 5] 와같다. (2) 축산물의농약잔류허용기준적용범위 1 포유류고기 : 근육내지방및피하지방과같이부착된지방조직을포함하는동물의도체 ( 혹은이를자른덩어리 ) 의근육조직으로소, 돼지, 양, 염소, 토끼, 말, 사슴등의고기를말한다 ( 해양동물의고기는제외 ). 2 포유류지방 : 동물의지방조직에서얻어진가공되지않은지방으로소, 돼지, 양, 염소, 토끼, 말, 사슴등의지방을말하며, 유지방은포함하지않는다. 3 포유류부산물 : 도살된동물의고기및지방을제외한식용조직및기관으로소, 돼지, 양, 말, 염소, 토끼, 말, 사슴등의간, 폐, 심장, 위장, 췌장, 비장, 콩팥, 머리, 꼬리, 발, 껍질, 혈액, 뼈 ( 건, 조직이포 -7-

8 함된뼈 ) 등식용가능한부위를말한다. 4 가금류고기 : 부착된지방및표피를포함하는가금류도체의근육조직으로닭, 꿩, 오리, 거위, 칠면조, 메추리등의고기를말한다. 5 가금류지방 : 가금류의지방조직에서얻어진가공되지않은지방으로닭, 꿩, 오리, 거위, 칠면조, 메추리등의지방을말한다. 6 가금류부산물 : 고기및지방을제외한도살된가금류의식용조직및기관으로닭, 꿩, 오리, 거위, 칠면조, 메추리등의간, 심장, 모래주머니, 표피, 발등식용가능한부위를말한다. 7 유 : 포유류로부터생산된우유, 양유, 염소유등의원유를말한다. 8 유가공품 : 원유또는유가공품을주원료로하여제조 가공한우유류, 가공유류, 산양유, 발효유류, 버터유류, 농축유류, 유크림류, 버터류, 치즈류, 분유류, 유청류, 유당, 유단백가수분해식품등을말한다. 9 알 : 가금류로부터생산된계란, 오리알, 메추리알등으로껍질을제거한부위를말한다. 제 중인삼검체를다음과같이한다. 식품검체 인삼 수삼 ( 산양삼포함 ), 건삼, 홍삼또는 인삼 홍삼농축액 제 의바. 시험조작중 2) 를다음과같이한다. 2) 액체크로마토그래프의측정조건 -8-

9 가 ) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함 ) (1) 칼럼 :C 18 (3.9 mm 150 mm, 5 μm) 또는이와동등한것 (2) 검출기 :Excitation 340 nm, Emission 455 nm (3) 이동상 : 물및메탄올 - 메탄올 : 물 (3:7) 의혼합액에서메탄올 : 물 (7:3) 의혼합액으로 23분간농도균배한후 5분이상흘려보낸다. (4) 이동상유량 :0.8 ml/min (5) Post Reaction Pump 유량 :0.5 ml/min(naoh 0.25 ml/min, O PA 0.25 ml/min) 또는기타최적조건나 ) HPLC-UVD (1) 칼럼 :C 18 (4.6 mm 250 mm, 5 μm) 또는이와등등한것 (2) 검출기 : 자외부흡광검출기 (UV photometric detector)(254 nm) (3) 이동상 : 물및아세토니트릴 - 아세토니트릴 / 물혼합액 (20/80, v/v) 에서 (80/20, v/v) 의혼합액으로 40분간농도균배한후 10분이상흘려보낸다. - 메탄올 / 물 (35/65, v/v) 에서 (90/10, v/v) 의혼합액으로 40분간농도균배한후 10분이상흘려보낸다. 이동상의조건은상기두가지중선택하여사용함 (4) 이동상유량 :1.0 ml/min 다 ) LC-MS/MS(LC-MS 포함 ) (1) 칼럼 :C 18 (4.6 mm 250 mm, 5 μm) 또는이와등등한것 (2) 검출기 : 자외부흡광검출기 (UV photometric detector)(254 nm) (3) 이동상 : A(0.1% 포름산과 10 mm 아세트산암모늄함유한물용액 -9-

10 ), B(0.1% 포름산과 2 mm 아세트산암모늄함유한아세토니트릴용액 ) 또는이와동등한것 - A/B(95/5, v/v) 에서 (5/95, v/v) 의혼합액으로 20분간농도균배한후 10분이상흘려보낸다. (4) 이동상유량 :1.0 ml/min (5) 칼럼온도 : 40 (6) 주입량 : 2 μl (7) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode 제 의자. 이시험법의분석대상농약및검출기중 1) 의주 7) 을다음과같이한다. 주 7) GC-MS/MS 분석대상 (281 종 ) 및상세조건은아래와같다. 연번 물질명 (Compound) 2, 6 - 디이소프로필나프탈렌 (2,6-Diisopropylnap hthalene) 아크리나트린 (Acrinathrin) 알드린 (Aldrin) 알레트린 (Allethrin) 알리도클로르 (Allidochlor) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 아메트린 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -10-

11 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Ametryn) 아닐로포스 (Anilofos) 아스폰 (Aspon) 아트라진 (Atrazine) 아자코나졸 (Azaconazole) 아진포스에틸 (Azinphos-ethyl) 아진포스메틸 (Azinphos-methyl*) 베나락실 (Benalaxyl) α- 비에이치씨 (α-bhc) β- 비에이치씨 (β-bhc) δ- 비에이치씨 (δ-bhc) γ- 비에이치씨 (γ-bhc) 베노다닐 (Benodanil) 벤조일프로프에틸 (Benzoylprop-ethyl) 비페녹스 (Bifenox) 비펜트린 (Bifenthrin) 비나파크리 (Binapacry) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -11-

12 연번 물질명 (Compound) 브로마실 (Bromacil) 브로모부타이드 (Bromobutide) 브로모포스메틸 (Bromophos-methyl ) 브로모프로필레이트 (Bromopropylate) 뷰피리메이트 (Bupirimate) 뷰타페나실 (Butafenacil) 뷰트랄린 (Butralin) 뷰틸레이트 (Butylate) 카두사포스 (Cadusafos) 캡타폴 (Captafol*) 캡탄 (Captan*) 카보페노티온 (Carbophenothion) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 35 키노메티오네이트 (Chinomethionat) 클로르부팜 (Chlorbufam) 클로르단 (Chlordane)

13 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 클로르단트랜스 (Chlordane-trans) 클로르에톡시포스 (Chlorethoxyfos) 클로르페나피르 (Chlorfenapyr) 클로르펜손 (Chlorfenson) 클로르플루아주론 (Chlorfluazuron) 클로르플루레놀메틸 (Chlorflurenol-methy l) 클로리다존 (Chloridazon) 클로로벤질레이트 (Chlorobenzilate) 클로로넵 (Chloroneb) 클로로프로필레이트 (Chloropropylate) 클로로탈로닐 (Chlorothalonil*) 클로르피리포스 (Chlorpyrifos*) 클로르피리포스메틸 (Chlorpyrifos-methy l) 클로르탈디메틸 (Chlorthal-dimethyl ) 클로르틴

14 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Chlorthin) 클로르티오포스 (Chlorthiophos) 클로졸리네이트 (Chlozolinate) 신메틸린 (Cinmethylin) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 클로메프로프 (Clomeprop) 시아나진 (Cyanazine) 시아노포스 (Cyanophos) 사이클로에이트 (Cycloate) 사이플루페나미드 (Cyflufenamid*) 시플루트린 (Cyfluthrin*) 사이할로포프뷰틸 (Cyhalofop-butyl) 사이할로트린 (Cyhalothrin*) 사이퍼메트린 (Cypermethrin*) 사이프로코나졸 (Cyproconazole) 사이프로디닐

15 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Cyprodinil*) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 델타메트린 (Deltamethrin*) 디메톤 -O (Demeton-O) 디메톤 -S (Demeton-S) 디메톤 -S- 메틸 - 설폰 (Demeton-S-methyl -sulfone) 데스메트린 (Desmetryn) 다이알레이트 (Diallate) 다이아지논 (Diazinon) 디클로펜티온 (Dichlofenthion) 디클로플루아니드 (Dichlofluanid*) 디클로르미드 (Dichlormid) 디클로르보스 (Dichlorvos*) 디클로란 (Dicloran) 디코폴 (Dicofol) 디엘드린 (Dieldrin*) 디에타틸에틸 (Diethatyl-ethyl) 디에토펜카브 (Diethofencarb)

16 연번 물질명 (Compound) 디플루페니칸 (Diflufenican) 디메피페레이트 (Dimepiperate) 디메타클로르 (Dimethachlor) 디메테나마이드 (Dimethenamid) 디메토에이트 (Dimethoate) 디메틸비포스 (Dimethylvinphos) 디니코나졸 (Diniconazole) 디니트라민 (Dinitramine) 디옥사티온 (Dioxathion) 디페나마이드 (Diphenamid) 디페닐아민 (Diphenylamine) 디티오피르 (Dithiopyr) p,p- 디디디 (p,p-ddd) p,p- 디디이 (p,p-dde) o,p- 디디티 (o,p-ddt) p'p- 디디티 (p,p-ddt) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev)

17 연번 물질명 (Compound) 에디펜포스 (Edifenphos) α- 엔도설판 (α-endosulfan) β- 엔도설판 (β-endosulfan) 엔도설판설페이트 (Endosulfan-sulfate ) 엔드린 (Endrin) 이피엔 (EPN) 에톡시코나졸 (Epoxiconazole) 이피티씨 (EPTC) 에스프로카브 (Esprocarb) 에타코나졸 (Etaconazole) 에탈플루랄린 (Ethalfluralin) 에토펜프록스 (Etofenprox) 에티온 (Ethion) 에토퓨메세이트 (Ethofumesate) 에토프로포스 (Ethoprophos) 에톡사졸 (Etoxazole) 에트리디아졸 (Etridiazole) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -17-

18 연번 물질명 (Compound) 에트림포스 (Etrimfos) 페나미돈 (Fenamidone) 페나리몰 (Fenarimol*) 페나자퀸 (Fenazaquin*) 펜뷰코나졸 (Fenbuconazole*) 펜클로르포스 (Fenchlorphos) 펜퓨람 (Fenfuram) 페니트로티온 (Fenitrothion) 페노뷰카브 (Fenobucarb) 페노티오카브 (Fenothiocarb*) 페녹사닐 (Fenoxanil) 페녹시카브 (Fenoxycarb) 펜프로파트린 (Fenpropathrin*) 펜손 (Fenson) 펜티온 (Fenthion) 펜발러레이트 (Fenvalerate*) 피프로닐 (Fipronil) 플람프로프이소프로필 (Flamprop-isopropy l) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -18-

19 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 134 플로니카마이드 (Flonicamid*) 플루클로랄린 (Fluchloralin) 플루디옥솔닐 (Fludioxonil) 플루펜피르에틸 (Flufenpyr-ethyl) 플루메트랄린 (Flumetralin) 플루미클로락펜틸 (Flumiclorac-pentyl ) 플루미옥사진 (Flumioxazine) 플루오피람 (Fluopyram) 플루오로디펜 (Fluorodifen) 플루오클로리돈 (Flurochloridone) 플루르타몬 (Flurtamone) 플루실라졸 (Flusilazole) 플루티아셋메틸 (Fluthiacet-methyl) 플루토라닐 (Flutolanil) 플루트리아폴

20 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Flutriafol) 플루발리네이트 (Fluvalinate*) 폴펫 (Folpet*) 포노포스 (Fonofos) 포스티아제이트 (Fosthiazate) 프탈라이드 (Fthalide) 퓨라티오카브 (Furathiocarb) 할펜프록스 (Halfenprox) 헵타클로르 (Heptachlor) 헵타클로르에폭사이드 (Heptachlor-epoxid e) 헵테노포스 (Heptenophos) 헥사클로르벤젠 (Hexachlorbenzene) 헥사코나졸 (Hexaconazole) 이마자릴 (Imazalil*) 인다노판 (Indanofan) 인독사카브 (Indoxacarb) 이프로벤포스 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -20-

21 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Iprobenfos) 이프로디온 (Iprodione) 이프로발리카브 (Iprovalicarb) 이사조포스 (Isazofos) 이사펜포스 (Isofenphos) 이소펜포스메틸 (Isofenphos-methyl *) 이소프로파린 (Isopropalin) 이소프로티오란 (Isoprothiolane) 이속산티온 (Isoxanthion) 크레속심메틸 (Kresoxim-methyl) 락토펜 (Lactofen) 렙토포스 (Leptophos) 말라티온 (Malathion) 메카밤 (Mecarbam) 메페나셋 (Mefenacet) 메펜피르디에틸 (Mefenpyr-diethyl) 메프로닐 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -21-

22 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Mepronil) 메트코나졸 (Metconazole) 메티다티온 (Methidathion) 메토프로트린 (Methoprotryne) 메톡시클로르 (Methoxychlor) 메틸펜타클로로페닐설파이드 (Methyl pentachlorophenyl sulfide) 메틸트리티온 (Methyl trithion) 메톨라클로르 (Metolachlor) 메트라페논 (Metrafenone) 메트리뷰진 (Metribuzin) 엠지케이 -264 (MGK-264) 몰리네이트 (Molinate) 마이클로뷰타닐 (Myclobutanil) 나프로파마이드 (Napropamide) 니트라피린 (Nitrapyrin) 니트로탈이소프로필 (Nitrothal-isopropyl ) cis- 노나클로르 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -22-

23 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (cis-nonachlor*) trans- 노나클로르 (trans-nonachlor*) 뉴아리몰 (Nuarimol) 오퓨레이스 (Ofurace) 옥사딕실 (Oxadixyl) 옥시데메톤메틸 (Oxydemeton-methy l) 파클로뷰트라졸 (Paclobutrazol) 파라티온에틸 (Parathion-ethyl) 파라티온메틸 (Parathion-methyl) 페뷰레이트 (Pebulate) 펜코나졸 (Penconazole) 펜디메탈린 (Pendimethalin*) 펜타클로로아닐린 (Pentachloroaniline) 퍼메트린 (Permethrin) 펜토에이트 (Phenthoate) 펜톡사존 (Pentoxazone) 포살론 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -23-

24 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Phosalone) 포스멧 (Phosmet) 포스파미돈 (Phosphamidone) 피콜리나펜 (Picolinafen) 피콕시스트로빈 (Picoxystrobin) 피페로포스 (Piperophos*) 피리미카브 (Pirimicarb*) 피리미포스에틸 (Pirimiphos-ethyl) 피리미포스메틸 (Pirimiphos-methyl) 프로베나졸 (Probenazole) 프로클로라즈 (Prochloraz*) 프로시미돈 (Procymidone) 프로페노포스 (Profenofos) 프로플루랄린 (Profluralin) 프로메톤 (Prometon) 프로나마이드 (Pronamide) 프로파클로르 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -24-

25 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) (Propachlor) 프로파진 (Propazine) 프로페탐포스 (Propetamphos) 프로팜 (Propham) 프로피소클로르 (Propisochlor) 프로티오포스 (Prothiofos) 피라카볼리드 (Pyracarbolid) 피라클로포스 (Pyraclofos) 피라졸포스 (Pyrazophos) 피리다벤 (Pyridaben) 피리달릴 (Pyridalyl*) 피리페녹스 (Pyrifenox) 피리미디펜 (Pyrimidifen) 피리미노박메틸 (Pyriminobac-methyl ) 퀴날포스 (Quinalphos) 퀴녹시펜 (Quinoxyfen) 퀸토젠 (Quintozene) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -25-

26 연번 물질명 (Compound) 세크뷰메톤 (Secbumeton) 시메코나졸 (Simeconazole) 스피록사민 (Spiroxamine) 설포텝 (Sulfotep) 설프로포스 (Sulprofos) 티씨엠티비 (TCMTB) 테뷰코나졸 (Tebuconazole*) 테뷰펜피라드 (Tebufenpyrad) 페뷰피림포스 (Tebupirimfos) 테플루트린 (Tefluthrin) 터바실 (Terbacil) 터뷰포스 (Terbufos) 터뷰메톤 (Terbumeton) 터뷰틸라진 (Terbuthylazine) 테트라클로르빈포스 (Tetrachlorvinphos) 테트라코나졸 (Tetraconazole) 테트라디폰 (Tetradifon) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -26-

27 연번 물질명 (Compound) 테트라메트린 (Tetramethrin) 테트라설 (Tetrasul) 티아조피르 (Thiazopyr) 티플루자마이드 (Thifluzamide) 디오메톤 (Thiometon) 톨클로포스메틸 (Tolclofos-methyl) 톨펜피라드 (Tolfenpyrad) 폴리플루아니드 (Tolyfluanid) 트랄로메트린 (Tralomethrin) (Deltamethrin 으로분석 ) 트리아디메폰 (Triadimefon) 트리아디메놀 (Triadimenol) 트리아조포스 (Triazophos) 트리뷰포스 (Tribufos) 트리플루미졸 (Triflumizole) 트리플루뮤론 (Triflumuron) 트리플루랄린 (Trifluralin) 유니코나졸 (Uniconazole) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) -27-

28 연번 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragmen tion, m/z) 충돌에너지 (Colllisio nenergy, ev) 버놀레이트 (Vernolate) 빈클로졸린 (Vinclozolin) 족사마이드 (Zoxamide) 각토막이온 (fragment ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의토막이온도적용이가능함. 위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및토막이온 ( fragment ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의토막이온 (fragment ion) 간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그비율이 ± 20 30% 이내에서일치하여야한다. 제 의자. 이시험법의분석대상농약및검출기중 2) 의주 8) 을다음과같이한다. 주 8) LC-MS/MS 분석대상 (114 종 ) 및상세조건은아래와같다. 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 1 아세타미프리드 (Acetamiprid*) positive 알디카브 (Aldicarb) positive

29 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 아미설브롬 (Amisulbrom) negativ e 아설람 (Asulam) positive 아자메티포스 (Azamethiphos ) positive 아족시스트로빈 (Azoxystrobin) positive 벤디오카브 (Bendiocarb) positive 벤설라이드 (Bensulide) positive 벤족시메이트 (Benzoximate* ) positive 빅사펜 (Bixafen) positive 보스칼리드 (Boscalid) positive 브로목시닐 (Bromoxynil) negativ e 뷰토카복심 (Butocarboxim ) positive 카바릴 (Carbaryl) positive

30 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 카베타마이드 (Carbetamide) positive 카보퓨란 (Carbofuran) positive 클로란트라닐리프롤 (Chlorantraniliprole ) positive 클로리뮤론에틸 (Chlorimuron-eth yl) positive 클로로벤쥬론 (Chlorobenzuro n) negativ e 클로로톨루론 (Chlorotoluron ) positive 크로마페노자이드 (Chromafenozide *) positive 시노설퓨론 (Cinosulfuron) positive 클로티아니딘 (Clothianidin*) positive 사이아조파미드 (Cyazofamid) 사이클로프로트린 (Cycloprothrin ) 사이목사닐 (Cymoxanil) positive positive positive 디크로토포스 positive

31 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) (Dicrotophos) 디메토모르프 (Dimethomorp h) 에타복삼 (Ethaboxam) 에타멧설퓨론메틸 (Ethametsulfuro n-methyl) 에티오펜카브 (Ethiofencarb) 펜헥사미드 (Fenhexamid) 펜피록시메이트 (Fenpyroximat e*) 페림존 (Ferimzone) 플루아크리피림 (Fluacrypyrim) 플루아지남 (Fluazinam) 플루벤디아마이드 (Flubendiamide ) 플루페나셋 (Flufenacet) positive positive positive positive positive positive positive positive negativ e positive positive 플루페녹수론 negativ 충돌에너지 (Collision energy, ev) -31-

32 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) (Flufenoxuron) e 플루오메투론 (Fluometuron) 플루퀸코나졸 (Fluquinconazole ) 플루리돈 (Fluridone) 플루설파마이드 (Flusulfamide) 포클로르페뉴론 (Forchlorfenuro n) 헥사플루뮤론 (Hexaflumuron ) 이마자목스 (Imazamox) 이마자픽 (Imazapic) 이마자퀸 (Imazaquin) 이마제타피르 (Imazethapyr) 이미벤코나졸 (Imibenconazol e) 이프코나졸 (Ipconazole) positive positive positive negativ e positive negativ e positive positive positive positive positive positive 이소프로카브 positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -32-

33 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) (Isoprocarb) 이소프로튜론 (Isoproturon) 이속사벤 (Isoxaben) 레나실 (Lenacil) 루페뉴론 (Lufenuron) 말라옥손 (Malaoxon) 메파니피림 (Mepanipyrim) 메소설퓨론메틸 (Mesosulfuron -methyl) 메타미포스 (Metamifop*) 메타미트론 (Metamitron) 메타벤즈티아주론 (Methabenzthi azuron) 메티오카브 (Methiocarb) 메토밀 (Methomyl*) positive positive positive negativ e positive positive positive positive positive positive positive positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -33-

34 연번 물질명 (compound) 메톡시페노자이드 (Methoxyfenozid e) 메톨카브 (Metolcarb) 메토미노스트로빈 (Metominostrob in) 메토설람 (Metosulam) 니텐피람 (Nitenpyram) 노발루론 (Novaluron) 옥사밀 (Oxamyl*) 옥사지클로메폰 (Oxaziclomefon ) 펜메디팜 (Phenmedipham ) 피녹사덴 (Pinoxaden) 프로메카브 (Promecarb) 프로파퀴자포프 (Propaquizafop ) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) positive positive positive positive positive negativ e 선구이온 (Precurso r ion, m/z) positive positive positive positive positive positive 토막이온 (Fragment ion, m/z) 프로폭수르 positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -34-

35 연번 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) (Propoxur) 프로피리설퓨론 (Propyrisulfuron ) 프로설포카브 (Prosulfocarb) 프로티오코나졸 (Prothioconazol e) 피라크로닐 (Pyraclonil) 피라클로스트로빈 (Pyraclostrobin ) 피라플루펜에틸 (Pyraflufen-eth yl) 피라졸레이트 (Pyrazolate) 피리벤족심 (Pyribenzoxim ) 피리뷰티카브 (Pyributicarb) 피리데이트 (Pyridate) 피리메타닐 (Pyrimethanil) 피리프록시펜 (Pyriproxyfen) positive positive negativ e positive positive positive positive positive positive positive positive positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -35-

36 연번 물질명 (compound) 피로퀼론 (Pyroquilon) 퀴노클라민 (Quinoclamine) 림설퓨론 (Rimsulfuron) 스피로디클로펜 (Spirodiclofen) 설펜트라존암모늄 (Sulfentrazone _NH4) 테부페노자이드 (Tebufenozide ) 테부티우론 (Tebuthiuron) 테플루벤주론 (Teflubenzuron ) 테프랄록시딤 (Tepraloxydim ) 테닐클로르 (Thenylchlor) 티아클로프리드 (Thiacloprid*) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) positive positive positive positive positive positive positive negativ e positive positive positive 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 티아메톡삼 positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -36-

37 연번 물질명 (compound) (Thiamethoxam* ) 티오디카브 (Thiodicarb) 티아디닐 (Tiadinil) 트랄콕시딤 (Tralkoxydim) 트리아설퓨론 (Triasulfuron) 트리벤주론메틸 (Tribenuron-meth yl) 트리사이클라졸 (Tricyclazole) 트리데모르프 (Tridemorph) 프리플록시스트로빈 (Trifloxystrobi n) 트리플록시설퓨론 (Trifloxysulfuro n) 2,3,5- 트리메타카브 (2,3,5-Trimethaca rb) 3,4,5- 트리메타카브 (3,4,5-Trimethaca rb) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) positive negativ e positive positive positive positive positive positive positive positive positive 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 트리디코나졸 positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) -37-

38 연번 114 물질명 (compound) 이온화 (Ionization mode) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) (Triticonazole) 엑스엠씨 (XMC) positive 충돌에너지 (Collision energy, ev) 각토막이온 (fragment ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의토막이온도적용이가능함. 위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간 (retention time) 과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precusor ion) 및토막이온 (fragment ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의토막이온 (fragment ion) 간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그비율이 ± 20 30% 이내에서일치하여야한다. 토막이온간반응세기의비율허용범위이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 (%) 50 ±20 20, 50 ±25 10, 20 ±30 제 을다음과같이신설한다 아바멕틴등 27종동시다성분시험법가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리 -38-

39 검체중대상성분을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하고, 원심분리하여상징액을취해 PSA(primary secondary amine), C 18 및 GCB( Graphitized carbon black) 를이용하여정제한후액체크로마토그래프- 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 표준품을메탄올에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로혼합희석한다 ( 무처리시료추출물 90% 이상포함 ) 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출검체 ( 닭의경우피부와뼈, 내장제거한근육부위 100 g, 알의경우계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개또는이와동등한양 ) 를균질화한후 5 g을정확히달아 50 ml 용량원심분리관에넣고 1% 아세트산이함유된아세토니트릴 15 ml를가하여 1분간격렬하게진탕한다. 원심분리관에무수황산마그네슘 6 g과무수아세트산나트륨 1.5 g을차례로가하고 10분간격렬하게진탕한후 4, 4,000 G에서 1 0분간원심분리한다. 2) 정제새로운 15 ml 용량원심분리관에무수황산마그네슘 1,200 mg, C

40 00 mg, PSA(primary-secondary amine) 400 mg과 GCB(graphitized c arbon black) 45 mg을넣고 1) 추출 로부터얻은용액중상징액 6 ml 를넣고 1분간격렬하게진탕한후 4, 4000 G에서 10분간원심분리한다. 상징액중 3 ml를취하여질소기류하에서농축, 건고한후잔류물에메탄올을 1 ml를가하여재용해한다. 추출액을멤브레인필터 (nylon 재질, 0.2 μm) 로여과하여시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 액체크로마토그래프분석조건 가 ) 칼럼 : C 18 (Imtakt, Cadenza CD, 2.0 mm i.d. 50 mm, 3 μm) 또 는이와동등한것 나 ) 칼럼온도 : 40 다 ) 이동상 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산함유메탄올 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산및 5 mm 아세트산암모늄함유물 시간 ( 분 ) A(%) B(%)

41 라 ) 이동상유량 : 0.2 ml/ 분마 ) 주입량 : 2 μl 2) 질량분석기분석조건가 ) 이온화방법 : ESI positive 및 negative ion mode 나 ) Capillary voltage : 5.5 kv 다 ) Collision gas : 질소 (N 2 ) 또는아르곤 (Ar) 표. 액체크로마토그래프 - 질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compound) RT (min) 2,4- 디메틸아닐린 3.5 (2,4- Dimethylaniline ***) 3 아바멕틴 (Abamectin * ) 아미트라즈 (Amitraz *** ) 비펜트린 (Bifenthrin **** ) 카바릴 (Carbaryl) 클로티아니딘 (Clothianidin) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurs or ion, m/z) 생성이온 (Produc t ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 사이퍼메트린 이온화 (Ioniz ation mode)

42 분석성분 (Compound) RT (min) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurs or ion, m/z) 생성이온 (Produc t ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) (Cypermethrin) 다이아지논 (Diazinon) 디클로르보스 (Dichlorvos *** ) 에톡사졸 (Etoxazole) 페니트로티온 (Fenitrothion) 페노뷰카브 (Fenobucarb) 펜설포티온 (Fensulfothion) 이온화 (Ioniz ation mode) 피프로닐 (Fipronil) 피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) 플루페녹수론 (Flufenoxuron) 아이소펜포스 (Isofenphos)

43 분석성분 (Compound) RT (min) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurs or ion, m/z) 생성이온 (Produc t ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 이온화 (Ioniz ation mode) 이버멕틴 (Ivermectin ** ) 메타미도포스 (Methamidophos) 메티다티온 (Methidathion) 모노크로토포스 (Monocrotophos) 포레이트 (Phorate) 포레이트옥손 (Phorate oxon) 포레이트옥손설폰 (Phorate oxon sulfone) 포레이트옥손설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide) 포레이트설폰 (Phorate sulfone) 포레이트설폭사이드 (Phorate sulfoxide)

44 분석성분 (Compound) RT (min) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurs or ion, m/z) 생성이온 (Produc t ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 이온화 (Ioniz ation mode) 피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl) 프로폭서 (Propoxur) 피리다벤 (Pyridaben) 스피로메시펜 (Spiromesifen) 설폭사플로르 (Sulfoxaflor) 테트라코나졸 (Tetraconazole) 트리클로르폰 (Trichlorfon) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함. Abamectin * 의분석대상물질은 Avermectin B1a 이고, Ivermectin ** 의분석대상물질은 22, 23-Dihydroavermectin B1a 임. 이시험법을이용하여위의분석대상성분중 *** 표시된성분이가금류고기또는알에서검출될경우정량분석은식품공전 8.3의정량시험법을따르고, **** 표시된성분은가금류고기의경우식품공전 계열별시험법을따른다. -44-

45 3) 검량선작성농도별표준용액을일정량취하여무처리시료추출용액과각각혼합한후액체크로마토그래프 -질량분석기에각각주입한다. 얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성한다. 4) 표준품의크로마토그램 그림. 액체크로마토그래프 - 질량분석기에서표준품의크로마토그램 5) 정량한계 표. 정량이가능한농약 구분 2,4- 디메틸아닐린 (2,4-Dimethylaniline) 아바멕틴 (Abamectin) 아미트라즈 (Amitraz) 비펜트린 (Bifenthrin) 카바릴 (Carbaryl) 클로티아니딘 (Clothianidin) 사이퍼메트린 (Cypermethrin) 정량한계 (mg/kg) 농약가금류고기알

46 다이아지논 (Diazinon) 구분 디클로르보스 (Dichlorvos) 에톡사졸 (Etoxazole) 페니트로티온 (Fenitrothion) 페노뷰카브 (Fenobucarb) 펜설포티온 (Fensulfothion) 피프로닐 (Fipronil) 피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) 플루페녹수론 (Flufenoxuron) 아이소펜포스 (Isofenphos) 이버멕틴 (Ivermectin) 메타미도포스 (Methamidophos) 메티다티온 (Methidathion) 모노크로토포스 (Monocrotophos) 포레이트 (Phorate) 포레이트옥손 (Phorate oxon) 정량한계 (mg/kg) 농약가금류고기알 포레이트옥손설폰 (Phorate oxon sulfone) 포레이트옥손설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide) 포레이트설폰 (Phorate sulfone)

47 구분 정량한계 (mg/kg) 농약가금류고기알 포레이트설폭사이드 (Phorate sulfoxide) 피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl) 프로폭서 (Propoxur) 피리다벤 (Pyridaben) 스피로메시펜 (Spiromesifen) 설폭사플로르 (Sulfoxaflor) 테트라코나졸 (Tetraconazole) 트리클로르폰 (Trichlorfon) 으로표시된농약은정성만가능하고검출시정량분석은식품공전 8.3 의정량시험법을 따르고, 으로표시된농약은식품공전 계열별시험법을따름 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량한다. 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과특성이온으로확인한다. 제 을다음과같이신설한다 이미다클로프리드 (Imidacloprid) -47-

48 가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중이미다클로프리드및대사산물을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하여원심분리한후 C 18 을이용하여정제하여액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 이미다클로프리드 (imidacloprid) 및대사산물이미다클로프리드우레아 (imidacloprid urea), 이미다클로프리드올레핀 (imidaclopr id olefin), 5-하이드록시이미다클로프리드 (5-hydroxy imidacloprid), 6-클로로니코티닉엑시드 (6-chloronicotinic acid) 표준품을각각아세토니트릴에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로혼합, 희석한다 ( 무처리시료추출물 90% 이상포함 ). 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출검체 ( 닭의경우피부와뼈, 내장제거한근육부위 100 g, 알의경우계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개또는이와동등한양 ) 를균질화한후 5 g을 50 ml 용량의원심분리관에정확히달아넣고 1% 아세트산이함유된아세토니트릴 15 ml를가하여 10분간격렬하게 -48-

49 진탕한후 4, 4,000 G에서 10분간원심분리한다. 2) 정제새로운 15 ml 용량원심분리관에 C mg을넣고 1) 추출 로부터얻은원심분리상징액중 6 ml를첨가하여 1분간격렬하게진탕한후 4, 4,000 G에서 10분간원심분리한다. 상징액중 3 ml를취하여질소기류하에서농축, 건고한후잔류물에 1% 포름산함유 50% 아세토니트릴 1 ml를가하여재용해한다. 추출액을멤브레인필터 (nylon 재질, 0.2 μm) 로여과하여시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 액체크로마토그래프분석조건가 ) 칼럼 : C 18 (Waters XBridge, 2.1 mm i.d. 100 mm, 3.5 μm) 또는이와동등한것나 ) 칼럼온도 : 40 다 ) 이동상 (1) 이동상 A: 0.1% 포름산함유아세토니트릴 (2) 이동상 B: 0.1% 포름산및 5 mm 아세트산암모늄함유물 시간 ( 분 ) A(%) B(%)

50 라 ) 이동상유속 : 0.2 ml/ 분마 ) 주입량 : 5 μl 2) 질량분석기분석조건가 ) 이온화방법 : ESI positive-ion mode 나 ) Capillary voltage: 3.2 kv 다 ) Collision gas: 아르곤 (Ar) 라 ) Cone voltage: 54 V(imidacloprid), 44 V(imidacloprid urea), 38 V(imida cloprid olefin), 58 V(5-hydroxy imidacloprid), 60 V(6-chloronicotinic acid) 표. 액체크로마토그래프 - 질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compound) 이미다클로프리드 (Imidacloprid) 이미다클로프리드우레아 (Imidacloprid urea) 이미다클로프리드올레핀 (Imidacloprid olefin) 5- 히드록시이미다클로프리드 (5-Hydroxy 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, [M+H] +, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev)

51 imidacloprid) 6- 클로로니코틴산 (6-Chloronicotinic acid) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함. 3) 검량선작성표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프-질량분석기에각각주입하여얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적값으로검량선을작성한다. 4) 표준품의크로마토그램 -51-

52 그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서표준품의크로마토그램 Imidacloprid(A: 4.6분 ), imidacloprid urea(b: 4.4분 ), imidacloprid olefi n (C: 4.3분 ), 5-hydroxy imidacloprid(d: 4.4분 ), 6-chloronicotinic acid( E:4.5분 ) 5) 정량한계 0.01 mg/kg 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름 -52-

53 시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량한다. 아. 확인시험액체크로마토그래프 -질량분석기상의머무름시간과특성이온으로이미다클로프리드및각대사산물을확인한다 스피노사드 (Spinosad) 가. 시험법적용범위가금류고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중스피노사드를아세토니트릴로추출하고, 황산마그네슘, 아세트산나트륨을가하여원심분리한상층액을취해정제한후액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 스피노신 A 및스피노신 D 표준품을각각아세토니트릴에녹여 100 mg/l가되게하여갈색병에보관한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로희석한다.(Matrix matched calibration) 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출균질화한닭고기에서추출한지방 1 g( 알은 10 g) 을정밀히달아 50 ml -53-

54 원심분리관에취하여지방 ( 닭고기 ) 은증류수 5 ml와 1% 아세트산함유아세토니트릴 10 ml, 알은아세토니트릴 10 ml를가한뒤 1분간균질화한후, 황산마그네슘 6 g과아세트산나트륨 1.5 g을차례로가하고 1분간진탕한다. 진탕후추출물을 1,700 G으로 5분간원심분리한다. 상층액 1.5 ml을 2.0 ml 원심분리관에옮긴후불순물제거를위한다중벽탄소나노튜브 (multi-wall carbon nano tubes, 직경 nm, 길이 5 15 μm ) 6 mg과황산마그네슘 225 mg을가하고 10초간진탕한후 1,400 G로 5분간원심분리한다. 원심분리후상층액 1 ml를멤브레인필터 (PTFE, 0.2 μm) 로여과한후갈색바이알에옮겨시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 액체크로마토그래프분석조건가 ) 칼럼 : C 18 (Agilent Eclipse Plus, 3.0 mm i.d. 150 mm, 3.5 μm) 또는이와동등한것나 ) 칼럼온도 : 30 다 ) 이동상 (1) 이동상 A: 아세토니트릴 (2) 이동상 B: 0.1% 포름산함유물시간 ( 분 ) A(%) B(%)

55 라 ) 이동상유속 : 0.3 ml/ 분마 ) 주입량 : 5 μl 2) 질량분석기분석조건가 ) 이온화방법 : ESI positive-ion mode 나 ) Capillary Voltage: 3.5 kv 다 ) Collision gas: 아르곤 (Ar) 라 ) Cone voltage: 42 V 표. 액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compound) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor io n, [M+H] +, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 스피노신 A (Spinosyn A) 스피노신 D (Spinosyn D) ) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각생성이온에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함. 3) 검량선작성표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프 -질량분석기에각각주입하여얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적값으로검량선을작성한다. 4) 표준품의크로마토그램 -55-

56 그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서표준품의크로마토그램스피노신 A(A: 4.95분 ), 스피노신 D(B: 5.01분 ) 5) 정량한계가 ) mg/kg( 알 ) 나 ) 0.01 mg/kg( 가금류고기 ( 지방 )) 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름시간과일치할때피크높이또는면적을각각의검량선에대입하여스피노신 A와스피노신 D의합으로써스피노사드함량을정량한다. 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과특성이온으로스피노신 A와스피노신 D를확인한다 클로르페나피르 (Chlorfenapyr) 가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중대상성분을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하고, 원심 -56-

57 분리하여상징액을취해 PSA(primary secondary amine), C 18 및 GCB( Graphitized carbon black) 를이용하여정제한후기체크로마토그래프- 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 기체크로마토그래프 -질량분석기(GC-MS/MS) 또는기체크로마토그래프-전자포획검출기 (GC-ECD) GC-ECD는 GC-MS/MS가없는경우에한하여정성분석을위해사용이가능하나, GC-ECD 로정성분석시검출이되면반드시 GC-MS/MS 를이용하여정량분석을실시하여야함 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 표준품을아세톤에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로혼합희석한다 ( 무처리시료추출물 90% 이상포함 ) 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출검체 ( 닭의경우피부와뼈, 내장제거한근육부위 100 g, 알의경우계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개또는이와동등한양 ) 를균질화한후 5 g을정확히달아 50 ml 용량원심분리관에넣고 1% 아세트산이함유된아세토니트릴 15 ml를가하여 1분간격렬하게진탕한다. 원심분리관에무수황산마그네슘 6 g과무수아세트산나트륨 1.5 g을차례로가하고 10분간격렬하게진탕한후 4, 4,000 G에서 1 0분간원심분리한다. -57-

58 2) 정제새로운 15 ml 용량원심분리관에무수황산마그네슘 1,200 mg, C mg, PSA(primary-secondary amine) 400 mg과 GCB(graphitized c arbon black) 45 mg을넣고 1) 추출 로부터얻은용액중상징액 6 ml 를넣고 1분간격렬하게진탕한후 4, 4,000 G에서 10분간원심분리한다. 상징액중 3 ml를취하여질소기류하에서농축, 건고한후잔류물에메탄올을 1 ml를가하여재용해한다. 추출액을멤브레인필터 (nylon 재질, 0.2 μm) 로여과하여시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 기체크로마토그래프-질량분석기의분석조건가 ) 칼럼 : HP-5MSUI(Agilent, 0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는이와동등한것나 ) 이동상가스및유속 : 헬륨 (He), 1.0 ml/ 분다 ) 주입부온도 : 300 라 ) 칼럼온도 온도 ( ) 비율 ( / 분 ) 시간 ( 분 ) 마 ) 검출기온도 : 310 바 ) 주입모드 : splitless 사 ) 주입량 : 1 μl -58-

59 표. 기체크로마토그래프 - 질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compound) 클로르페나피르 (Chlorfenapyr) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 토막이온 (Fragment ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각토막이온 (Fragment ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하 여사용할수있으며, 제시된이외의토막이온도적용이가능함. 2) 기체크로마토그래프-전자포획검출기의분석조건가 ) 칼럼 : DB-5MS(Agilent, 0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm) 또는이와동등한것나 ) 이동상가스및유속 : 질소 (N 2 ), 1.0 ml/ 분다 ) 주입부온도 : 260 라 ) 칼럼온도 온도 ( ) 비율 ( / 분 ) 시간 ( 분 ) 마 ) 검출기온도 : 300 바 ) 주입모드 : splitless 사 ) 주입량 : 1 μl -59-

60 3) 검량선작성농도별표준용액을일정량취하여무처리시료추출용액과각각혼합한후기체크로마토그래프 -질량분석기에각각주입한다. 얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성한다. 4) 표준품의크로마토그램 그림. 기체크로마토그래프-질량분석기에서표준품의크로마토그램 Chlorfenapyr (13.4분) 5) 정량한계 0.01 mg/kg 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량한다. 아. 확인시험기체크로마토그래프 -질량분석기상의머무름시간과특성이온으로확인한다 카탑 (Cartap), 티오사이클람 (Thiocyclam) -60-

61 가. 시험법적용범위가금류고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중카탑, 티오사이클람을 2% 시스테인염산용액, 3% 염화니켈용액및암모니아수를사용하여네레이스톡신 (nereistoxin) 으로전환시켜헥산및아세토니트릴로추출한후액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 옥살산수소네레이스톡신 (nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을아세토니트릴에녹여네레이스톡신 (nereistoxin) 으로써 100 mg/l 가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로희석한다.(Matrix matched calibration) 5) 2% 시스테인 (cysteine) 용액 : 무수염산시스테인 (L-cysteine-HCl, anhydrous ) 20 g을 0.02 N 염산용액 950 ml에녹인후 10 N 수산화나트륨용액을첨가하여 ph 3로맞춘다음 0.02 N 염산용액을첨가하여 1,000 ml가되게한다. 6) 3% 염화니켈 (nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을물에녹여 100 m L가되게한다. 7) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 -61-

62 1) 추출균질화한시료 10 g을정밀히달아 50 ml 원심분리관에취하여 2% 시스테인용액 40 ml( 알의경우 30 ml) 를가하고 30분간진탕추출한다 ( 단, 추출액의 ph가 4 5 범위를벗어날경우, 2 N 염산용액으로조절한후 30분간다시진탕추출한다 ). 이를 3,500 G, 4 에서 10분간원심분리한후상층액 20 ml를별도의 50 ml 원심분리관에취한다 ( 알의경우상층액을별도의 50 ml 원심분리관에옮긴후추출용액으로전체부피를 40 ml로한다음그중 20 ml를취한다 ). 여기에 3% 염화니켈용액과진한암모니아수를각각 1.5 ml씩첨가한다음 5분간진탕한후 70 수욕상에서 1시간동안진탕반응시킨다. 반응이끝난추출액을냉각시킨다음 10 N 황산용액을첨가하면서 ph 5로맞춘후헥산 10 ml를가하여진탕한다. 이를 3,5 00 G, 4 에서 10분간원심분리한후상층액을버린다음 10 N 수산화나트륨용액을첨가하면서 ph 9로맞춘다. 여기에염화나트륨 6 g 과아세토니트릴 20 ml을가한후진탕하고, 다시 3,500 G, 4 에서 10분간원심분리한다음상층액 ( 아세토니트릴층 ) 을멤브레인필터 (PTFE, 0.45 μm) 로여과한후시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 액체크로마토그래프분석조건가 ) 칼럼 : HILIC(Waters XBridge, 2.1 mm i.d. 100 mm, 3 μm) 또는이와동등한것나 ) 칼럼온도 :

63 다 ) 이동상 : 0.1% 포름산함유아세토니트릴 /0.1% 포름산함유물 (90/10, v/ v) 라 ) 이동상유속 : 0.4 ml/ 분마 ) 주입량 : 5 μl 2) 질량분석기분석조건가 ) 이온화방법 : ESI positive-ion mode 나 ) Capillary voltage: 4.0 kv 다 ) Collision gas: 아르곤 (Ar) 라 ) Cone voltage: 12 V 표. 액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compound) 네레이스톡신 (Nereistoxin) 평균분자량 (MW) 선구이온관측질량 (Precursor ion, 생성이온 (Exact m [M+H] +, m/ (Product ion, m/z) ass) z)) 충돌에너지 (Collision energy, ev) ) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각생성이온에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함. 3) 검량선작성표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프- 질량분석기에각각주입하여얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적값으로검량선을작성한다. 4) 표준품의크로마토그램 -63-

64 그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서표준품의크로마토그램네레이스톡신 : 1.6분 5) 정량한계 mg/kg 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량한다. 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과특성이온으로네레이스톡신을확인한다. 제 을다음과같이한다. 1) 시험법적용범위축산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중의분석대상물질을아세토니트릴 ( 알은 EDTA와아세토니트릴 ) 로추출한후아세토니트릴포화헥산으로정제하여액체크로마토그래프- 질량분석기로분석한다. 3) 장치 -64-

65 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 각동물용의약품표준품을 100 ml 용량플라스크에정밀히달아표 1의용매 ( 메탄올, 50% 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, DMSO) 에녹여조제하여표준원액으로한다. 조제한표준원액은냉동보관한다. 라 ) 혼합표준용액 : 100 ml 용량플라스크에각표준원액을잔류허용기준의 10배농도가되도록취하여혼합한후 50% 아세토니트릴로표시선까지채워조제한다. 혼합표준용액은 0.1% 개미산과메탄올 ( 1:1, v/v) 혼합용액으로희석하여사용한다. 마 ) 0.1% 개미산함유아세토니트릴 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml을넣고아세토니트릴로표시선까지채운다. 바 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 함유물 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml을넣고물로표시선까지채운다. 사 ) C 18 분말 : 잔여실란올기가제거된 C 18 분말 (55~105 μm, 125 A ) 또는이와동등한것아 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 표 1. 표준원액조제에사용되는용매 용매 대상동물용의약품표준품 -65-

66 메탄올 날리딕스산, 노르플록사신, 노보비오신, 다노플록사신, 답손, 모노아세틸답손, 독시싸이클린, 디플록사신, 락토파민, 록시스로마이신, 리팍시민, 린코마이신, 마보플록사신, 발네물린, 버지니아마이신, 사라플록사신, 설파구아니딘, 설파독신, 설파디메톡신, 설파디아진, 설파메라진, 설파메타진, 설파메톡사졸, 설파메톡시피리다진, 설파모노메톡신, 설파퀴녹살린, 설파클로르피리다진, 설파클로진, 설파티아졸, 설파페나졸, 설피속사졸, 스피라마이신, 시프로플로사신, 아목시실린, 암피실린, 에리스로마이신, 엔로플록사신, 오르메토프림, 오비플록사신, 오플록사신, 옥솔린산, 옥시테트라싸이클린, 올레안도마이신, 조사마이신, 클렌부테롤, 클로람페니콜, 클로르테트라싸이클린, 클린다마이신, 타일로신, 테트라싸이클린, 툴라스로마이신, 트리메토프림, 티아물린, 티암페니콜, 틸디피로신, 프탈설파티아졸, 틸미코신, 페플록사신, 플로르페니콜, 플로르페니콜아민, 플루메퀸, 올라퀸독스 (MQCA, 3-m ethyl quinoxaline-2-carboxylic acid), 카바독스 (QCA, quinoxaline-2-ca rboxylic acid), 데스후로일세프티오퍼, DL- 메틸에페드린, 안티피린, 아크리플라빈, 트리페레나민, 디펜하이드라민, 설파에톡시피리다진, 메토클로프라미드, 스코폴라민, 날록손, 베르베린, 요힘빈, 프라지콴텔 물 나프실린, 디클록사실린, 벤질페니실린, 세파졸린, 세파피린, 데스아세틸세파피린, 세팔로니움, 세포페라존, 세프퀴놈, 옥사실린, 클록사실린 에틸아세테이트로니다졸, 메트로니다졸 DMSO 아세토니트릴 세프티오퍼 아세트아닐라이드, 페나세틴, 디에틸카바마진 50% 메탄올세팔렉신 밑줄표시되어있는것은대사물질임. 5) 시험용액의조제가 ) 알을제외한식품균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취하여 a 100% 아세토니트릴 ( 소고기는 80% 아세토니트릴 ) 10 ml를가한뒤, 10분간진탕하여균 -66-

67 질화하고 2,700 G에서 10분간원심분리한후, 상층액을취한다. b 잔류물에 100% 아세토니트릴 ( 소고기는 80% 아세토니트릴 ) 10 ml를가한뒤 10분간진탕하여균질화하고 2,700 G에서 10분간원심분리한다. C 18 분말 1 g을미리넣어둔 50 ml 원심분리관에 a와 b의상층액을합한다. 아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 1분간진탕하고 2,7 00 G에서 10분간원심분리한다. 상층액 ( 헥산층 ) 을제거하고하층 ( 아세토니트릴층 ) 을새로운원심분리관으로옮긴다. 이를 50 C 이하에서질소농축하여건고한후메탄올 2 ml와 0.1% 개미산 2 ml로재분산하고 5분간초음파추출한다. 이용액을 0.2 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여시험용액으로한다. 나 ) 알균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취하여 0.2 g EDTA(Ethylen e Diamine Tetraacetate) 를첨가한후 1분간균질화한다. c 100% 아세토니트릴 10 ml를가한뒤, 10분간진탕하여균질화하고 2,700 G에서 10분간원심분리한후, 상층액을취한다. d 잔류물에 100% 아세토니트릴 10 ml를가한뒤 10분간진탕하여균질화하고 2,700 G에서 10 분간원심분리한다. C 18 분말 1 g을미리넣어둔 50 ml 원심분리관에 c와 d의상층액을합한다. 아세토니트릴포화헥산 10 ml를가한후 1분간진탕하고 2,700 G에서 10분간원심분리한다. 상층액 ( 헥산층 ) 을제거하고하층 ( 아세토니트릴층 ) 을새로운원심분리관으로옮긴다. 이를 50 C 이하에서질소농축하여건고한후메탄올 2 ml와 0.1% 개미산 2 ml로재분산하고 5분간초음파추출한다. 이용액을 0.2 μm 막 -67-

68 여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여시험용액으로한다. 6) 시험조작 가 ) 액체크로마토그래프분석조건 (1) 칼럼 : C 18 (Xbridge 2.1 mm i.d. 150 mm, 3.5 μm) 또는이와 동등한것 (2) 칼럼온도 : 40 (3) 이동상 ( 가 ) 이동상 A: 0.1% 개미산함유물 ( 나 ) 이동상 B: 0.1% 개미산함유아세토니트릴 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (4) 이동상유속 : 0.2 ml/ 분 (5) 주입량 : 5 μl 나 ) 질량분석기분석조건 (1) 이온화방법 : ESI(positive-ion, negative-ion mode) (2) Capillary temperature: 350 (3) Capillary voltage: 3.4 kv (4) Collision gas: 아르곤 (Ar) (5) 분석대상및개별조건 (MRM 조건 ) -68-

69 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 1 올라퀸독스 (Olaquindox: 3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid, MQCA) 5.7 Positive 카바독스 (Carbadox: Quinoxaline - 2-carboxylic acid, QCA) 5.3 Positive 나프실린 (Nafcillin) 9.4 Positive 날록손 (Naloxone) 3.7 Positive 날리딕스산 (Nalidixic acid) 8.5 Positive 노르플록사신 (Norfloxacin) 4.7 Positive 노보비오신 (Novobiocin) 10.5 Positive 다노플록사신 (Danofloxacin) 5.0 Positive 답손 (Dapsone) 6.1 Positive

70 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 모노아세틸답손 (Monoacetyl dapson) 6.7 Positive 독시싸이클린 (Doxycycline) 6.5 Positive 디에틸카바마진 (Diethylcarbamazine) 3.1 Positive 디클록사실린 (Dicloxacillin) 9.6 Positive 디펜하이드라민 (Diphenhydramine) 7.8 Positive 디플록사신 (Difloxacin) 5.8 Positive 락토파민 (Ractopamine) 5.1 Positive 로니다졸 (Ronidazole) 4.2 Positive 록시스로마이신 (Roxithromycin) 8.7 Positive 리팍시민 9.9 Positive

71 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) (Rifaximin) 린코마이신 (Lincomycin) 4.2 Positive 마보플록사신 (Marbofloxacin) 4.6 Positive 메토크로프라미드 (Metoclopramide) 5.4 Positive 메트로니다졸 (Metronidazole) 3.4 Positive DL- 메틸에페드린 (DL-methylephedrine) 4.2 Positive 발네물린 (Valnemulin) 8.7 Positive 버지니아마이신 (Virginiamycin M1) 9.0 Positive 베르베린 (Berberine) 7.4 Positive 벤질페니실린 (Benzylpenicillin) 8.3 Positive

72 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 사라플록사신 (Sarafloxacin) 5.7 Positive 설파구아니딘 (Sulfaguanidine) 2.2 Positive 설파독신 (Sulfadoxine) 6.7 Positive 설파디메톡신 (Sulfadimethoxine) 7.7 Positive 설파디아진 (Sulfadiazine) 4.2 Positive 설파메라진 (Sulfamerazine) 4.9 Positive 설파메타진 (Sulfamethazine) 5.5 Positive 설파메톡사졸 (Sulfamethoxazole) 6.8 Positive 설파메톡시피리다진 (Sulfamethoxypyridazine) 6.1 Positive

73 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 설파모노메톡신 (Sulfamonomethoxine) 5.6 Positive 설파에톡시피리다진 (Sulfaethoxypyridazine) 6.8 Positive 설파퀴녹살린 (Sulfaquinoxaline) 7.7 Positive 설파클로르피리다진 (Sulfachlorpyridazine) 7.6 Positive 설파클로진 (Sulfaclozine) 6.4 Positive 설파티아졸 (Sulfathiazole) 4.4 Positive 설파페나졸 (Sulfaphenazole) 7.8 Positive 설피속사졸 (Sulfisoxazole) 7.0 Positive 세파졸린 (Cefazolin) 5.4 Positive 세파피린 3.4 Positive

74 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) (Cephapirin) 데스아세틸세파피린 (Desacetyl cephapirin) 2.2 Positive 세팔렉신 (Cephalexin) 4.7 Positive 세팔로니움 (Cefalonium) 4.7 Positive 세포페라존 (Cefoperazone) 6.2 Positive 세프퀴놈 (Cefquinome) 1.8 Positive 세프티오퍼 (Ceftiofur) 7.1 Positive 데스후로일세프티오퍼 (Desfuroylceftiofur) 5.4 Positive 스코폴라민 (Scopolamine) 4.4 Positive 스피라마이신 (Spiramycin) 6.0 Positive

75 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 시프로플록사신 (Ciprofloxacin) 4.9 Positive 아목시실린 (Amoxicillin) 2.6 Positive 아세트아닐라이드 (Acetanilide) 6.1 Positive 아크리플라빈 (Acriflavine) 5.3 Positive 안티피린 (Antipyrine) 5.6 Positive 암피실린 (Ampicillin) 4.6 Positive 에리스로마이신 (Erythromycin) 7.7 Positive 엔로플록사신 (Enrofloxacin) 5.2 Positive 오르메토프림 (Ormetoprim) 5.1 Positive

76 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 오비플록사신 (Orbifloxacin) 5.4 Positive 오플록사신 (Ofloxacin) 4.8 Positive 옥사실린 (Oxacillin) 8.9 Positive 옥솔린산 (Oxolinic acid) 8.6 Positive 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline) 4.9 Positive 올레안도마이신 (Oleandomycin) 7.4 Positive 요힘빈 (Yohimbine) 6.2 Positive 조사마이신 (Josamycin) 8.9 Positive 클렌부테롤 (Clenbuterol) 5.9 Positive 클로람페니콜 7.3 Negativ

77 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) (Chloramphenicol) e 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline) 6.4 Positive 클록사실린 (Cloxacillin) 9.2 Positive 클린다마이신 (Clindamycin) 6.5 Positive 타일로신 (Tylosin) 7.9 Positive 테트라싸이클린 (Tetracycline) 5.3 Positive 툴라스로마이신 (Tulathromycin) 5.0 Positive 트리메토프림 (Trimethoprim) 4.7 Positive 트리페레나민 (Tripelennamine) 6.3 Positive 티아물린 (Tiamulin) 8.4 Positive

78 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 티암페니콜 (Thiamphenicol) 5.3 Negativ e 틸디피로신 (Tildipirosin) 4.0 Positive 틸미코신 (Tilmicosin) 6.9 Positive 페나세틴 (Phenacetin) 7.3 Positive 페플록사신 (Pefloxacin) 4.8 Positive 프라지콴텔 (Praziquantel) 9.5 Positive 프탈설파티아졸 (Phthalsulfathiazole) 6.5 Positive 플로르페니콜 (Florfenicol) 플로르페니콜아민 (Florfenicol amine) 6.8 Negativ e Positive

79 연번 분석성분 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) (Retention time, min) 이온화방법 (Ionization mode) 평균분자량 (M.W.) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precursor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 플루메퀸 (Flumequine) 8.6 Positive 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외는정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값 으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 정성위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그상대비율이표2와같이 20~50% 이내에서일치하여야한다. 단, 우유에서세프티오퍼 ( 데스후로일세프티오퍼포함 ) 는정성확인이불가하다. 표2. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % ± 20 % > 20 %, 50 % ± 25 % -79-

80 > 10 %, 20 % ± 30 % 나 ) 표준품크로마토그램 -80-

81 -81-

82 8) 정량시험가 ) 정성시험에서검출된잔류동물용의약품은식품공전 8.3의정량시험법을따른다. 나 ) 표3의정량이가능한동물용의약품 ( 정량한계표시 ) 의경우, 정성시험과똑같은조건에서음성검체 (blank sample) 에혼합표준용액을일정농도 -82-

83 로첨가하여얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하 여검량선을작성하고, 시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (qua ntitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 표 3. 정량이가능한동물용의약품목록 ( 단위 : mg/kg) 구분 정량한계 계열동물용의약품소돼지닭계란유 설파계 세팔로스포린계 설파구아니딘 설파독신 설파디메톡신 설파디아진 설파메라진 설파메타진 설파메톡사졸 설파메톡시피리다진 설파모노메톡신 설파퀴녹살린 설파클로르피리다진 설파클로진 설파티아졸 설파페나졸 설피속사졸 프탈설파티아졸 설파에톡시피리다진 세파졸린 세파피린 데스아세틸세파피린 * 세팔렉신 세팔로니움 세포페라존 세프퀴놈 세프티오퍼

84 구분 정량한계 계열동물용의약품소돼지닭계란유 퀴놀론계 페니실린 테트라싸이클린 페니콜계 마크로라이드계 데스후로일세프티오퍼 * 날리딕스산 노르플록사신 다노플록사신 디플록사신 마보플록사신 사라플록사신 시프로플록사신 엔로플록사신 오비플록사신 오플록사신 옥솔린산 페플록사신 플루메퀸 나프실린 벤질페니실린 디클록사실린 아목시실린 암피실린 옥사실린 클록사실린 독시싸이클린 옥시테트라싸이클린 클로르테트라싸이클린 테트라싸이클린 플로르페니콜 플로프페니콜아민 * 티암페니콜 클로람페니콜 록시스로마이신 스피라마이신 에리스로마이신 올레안도마이신 조사마이신 타일로신

85 구분 정량한계 계열 동물용의약품 소 돼지 닭 계란 유 틸미코신 툴라스로마이신 펩타이드계 버지니아마이신 노보비오신 답손 모노아세틸답손 * 락토파민 로니다졸 리팍시민 린코마이신 메트로니다졸 발네물린 오르메토프림 올라퀸독스 카바독스 클렌부테롤 클린다마이신 트리메토프림 기타 티아물린 틸디피로신 아세트아닐라이드 페나세틴 DL-메틸에페드린 안티피린 디에틸카바마진 아크리플라빈 트리페레나민 디펜하이드라민 메토클로프라미드 스코폴라민 날록손 베르베린 요힘빈 프라지콴텔 정성만가능한물질은 - 로표시 -85-

86 * 대사물질 제 를다음과같이한다 수산물중동물용의약품동시다성분시험법 1) 시험법적용범위수산물 ( 어류, 갑각류 ) 등에적용한다. 2) 분석원리균질화한검체에 0.1 M EDTA in 50 mm 아세트산암모늄완충용액 (ph 4.0) 으로산처리후, 80% 아세토니트릴로추출하고 C 18, PSA(Primary Secondary Amine) 를이용하여정제한후액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 3) 장치액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에각표준품을정밀히달아메탄올또는 50% 메탄올에녹여 100 mg/l로조제하여표준원액으로한다. 조제한표준원액은냉동보관한다. 주1) 참조라 ) 혼합표준용액 : 50 ml 용량플라스크에각표준원액을각동물용의약품잔류허용기준의 10배농도가되도록취하여혼합한후물로표시선까지채워냉동실에보관한다. 혼합표준용액은물로희석하여사용한다. 마 ) 0.1 M Na 2 -EDTA가함유된 50 mm 아세트산암모늄완충용액 : 1 L 용량플라스크에아세트산암모늄 3.85 g을넣고물 0.9 L로녹인 -86-

87 후초산으로 ph 4.0을맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 (Na 2 -EDTA di hydrate) 37.1 g을넣고용해시킨후물로표시선까지채운다. 바 ) 0.1% 개미산수용액 : 1 L 용량플라스크에개미산 1 ml를넣고물로표시선까지채운다. 사 ) 2 mm 개미산암모늄용액 : 1 L 용량플라스크에개미산암모늄 g을넣고아세토니트릴 / 물 (80/20, v/v) 혼합용매로용해하여표시선까지채운다. 아 ) 이동상 B 용액 (2 mm 개미산암모늄, 0.1% 개미산함유아세토니트릴 ): 1 L 용량플라스크에개미산암모늄 g를개미산 1 m L에먼저녹인후아세토니트릴로표시선까지채운다. 자 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것차 ) 기구 : 사용하는모든용기는폴리프로필렌재질또는이와동등한것 5) 시험용액의조제균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취하고, 0.1 M Na 2 EDTA i n 50 mm 아세트산암모늄완충용액 1 ml를넣어산처리후, 2 mm 개미산암모늄 9 ml를가하여 5분간진탕한후 4 에서 10,000 G로 1 0분간원심분리한다. 상층액을 250 mg PSA, 250 mg C 18 가담겨진 5 0 ml 원심분리관에취하여 1분간진탕하고, 4 에서 10,000 G로 5분간원심분리한다. 상층액중절반을취하여잔류물이 1 ml가되도록 4 0 C에서질소농축한다. 농축후 1 ml를취하여 0.2 μm 막여과지 (PV DF membrane fileter) 로여과하여시험용액으로한다. -87-

88 6) 시험조작 가 ) 액체크로마토그래프측정조건 (1) 칼럼 : C 18 (Xselect, mm, 3.5 μm) 또는이와동등한 것 (2) 칼럼온도 : 40 (3) 이동상 ( 가 ) 이동상 A : 0.1% 개미산수용액 ( 나 ) 이동상 B : 2 mm 개미산암모늄, 0.1% 개미산을함유한 아세토니트릴용액 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (4) 유속 : 0.4 ml/ 분 (5) 주입량 : 5 μl 나 ) 질량분석기조건 (1) 이온화방법 : ESI (Positive, Negative) (2) Capillary temperature : 500 (3) Capillary voltage : 3.8 kv (Positive), 2.6 kv (Negative) (4) Collision gas : 아르곤 (Ar) -88-

89 (5) 분석대상물질 (50 종 ) 및개별조건 (MRM) 연번 분석성분 (Compound) 이온화 (Ioniza tion mode) 머무름시간 (retention time)( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [ M+H] +,m/z) 생성이온 1 (Product ion, m/ z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 1 날리딕스산 (Nalidixic acid) positive 노르플록사신 (Norfloxacin) positive 데하이드로콜산 (Dehydrocholic acid) negative 독시싸이클린 (Doxycycline) positive 디플록사신 (Difloxacin) positive 린코마이신 (Lincomycin) positive 비치오놀 (Bithionol) negative 설파구아니딘 (Sulfaguanidine) positive 설파독신 (Sulfadoxine) positive 설파디메톡신 (Sulfadimethoxine) positive 설파디아진 (Sulfadiazine) positive 설파메라진 (Sulfamerazine) positive 설파메타진 (Sulfamethazine) positive

90 연번 분석성분 (Compound) 14 설파메톡사졸 (Sulfamethoxazole) 15 설파메톡시피리다진 (Sulfamethoxypyridazine) 16 설파모노메톡신 (Sulfamonomethoxine) 17 설파퀴녹살린 (Sulfaquinoxaline) 18 설파클로르피라진 (Sulfachlorpyrazine) 19 설파클로르피리다진 (Sulfachlorpyridazine) 20 설파티아졸 (Sulfathiazole) 21 설파페나졸 (Sulfaphenazole) 22 설피속사졸 (Sulfisoxazole) 23 세파드록실 (Cefadroxil) 이온화 (Ioniza tion mode) 머무름시간 (retention time)( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [ M+H] +,m/z) positive positive positive positive positive positive positive positive positive positive 세팔렉신 (Cefalexin) positive 세프티오퍼 (Ceftiofur) 25 데스후로일세프티오퍼 (Desfuroylceftiofur) positive positive 생성이온 1 (Product ion, m/ z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 스피라마이신 (Spiramycin) positive

91 연번 분석성분 (Compound) 27 시프로플록사신 (Ciprofloxacin) 28 아목시실린 (Amoxicillin) 29 암피실린 (Ampicillin) 30 에리스로마이신 (Erythomycin) 31 엔로플록사신 (Enrofloxacin) 32 오르메토프림 (Ormethoprim) 33 오플록사신 (Ofloxacin) 34 옥소린산 (Oxolinic acid) 35 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline) 36 조사마이신 (Josamycin) 37 클로람페니콜 (Chloramphenicol) 38 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline) 39 클린다마이신 (Clindamycin) 40 키타사마이신 (Kitasamycin) 이온화 (Ioniza tion mode) 머무름시간 (retention time)( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [ M+H] +,m/z) positive positive positive positive positive positive positive positive positive positive negative positive positive positive 생성이온 1 (Product ion, m/ z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev)

92 연번 분석성분 (Compound) 41 테트라싸이클린 (Tetracycline) 42 트리메토프림 (Trimethoprim) 43 티아물린 (Tiamulin) 44 티암페니콜 (Thiamphenicol) 45 페노뷰카브 (Fenobucarb) 46 페플록사신 (Pefloxacin) 47 푸마길린 (Fumagillin) 48 프라지콴텔 (Praziquantel) 이온화 (Ioniza tion mode) 머무름시간 (retention time)( 분 ) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [ M+H] +,m/z) positive positive positive negative positive positive positive positive 플로르페니콜 (Florfenicol) negative 플로르페니콜아민 (Florfenicol amine) positive 플루메퀸 (Flumequine) positive 생성이온 1 (Product ion, m/ z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로 변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 -92-

93 7) 정성시험위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그상대비율이 20~50% 이내에서일치하여야한다. 주2) 참조 8) 정량시험 정성시험에서검출된잔류동물용의약품은식품공전 8.3 의정량시험법을 따른다. 주 1) 표준원액조제에사용되는용매 용매메탄올 50% 메탄올아세토니트릴 대상동물용의약품클로르테트라싸이클린, 옥시테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린, 설파클로르피라진, 설파클로르피리다진, 설파디아진, 설파디메톡신, 설파독신, 설파구아니딘, 설파메라진, 설파메타진, 설파메톡사졸, 설파메톡시피리다진, 설파모노메톡신, 설파페나졸, 설파퀴놀살린, 설파티아졸, 설피속사졸, 오르메토프림, 트리메토프림, 엔로플록사신, 시프로플록사신, 디플록사신, 날리딕스산, 플루메퀸, 노르플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 에리스로마이신, 스피라마이신, 조사마이신, 키타사마이신, 티아물린, 린코마이신, 클린다마이신, 플로르페니콜아민, 옥소린산세팔렉신, 클로람페니콜, 플로르페니콜, 티암페니콜, 프라지콴텔, 세프티오퍼, 데스후로일세프티오퍼, 비치오놀, 페노뷰카브, 데하이드로콜산, 세파드록실, 아목시실린, 암피실린푸마길린 -93-

94 주 2) 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % 20 % > 20 %, 50 % 25 % > 10 %, 20 % 30 % 9) 표준품크로마토그램 -94-

95 -95-

96 -96-

97 -97-

98 그림 1. 수산물중 50 종동물용의약품의크로마토그램 제 를다음과같이한다. -98-

99 노보비오신 (Novobiocin), 티아물린 (Tiamulin) 1) 시험법적용범위축 수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체를아세토니트릴로추출하여아세토니트릴포화헥산 ( 알은실리카카트리지 ) 으로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에표준품을각각정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/l가되게한다. 조제된표준원액은냉동보관한다. 라 ) 혼합표준용액 : 100 ml 용량플라스크에각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml를넣고물로표시선까지채운다. 바 ) 20 mm 개미산암모늄 (ammonium formate) 함유 0.1% 개미산용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml와 1.26 g의개미산암모늄을넣고녹인후물로표시선까지채운다. 사 ) 0.2% 개미산함유메탄올용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 2 ml를넣고메탄올로표시선까지채운다. -99-

100 아 ) 실리카카트리지 : 실리카 (500 mg) 고정상이충전되어있는일회용카트리지 (3 ml) 또는이와동등한것자 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제가 ) 알을제외한식품균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 아세토니트릴용액 10 ml를가하여 15분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을취하여 50 ml 원심분리관에옮기고아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 10분간진탕하고상온에서 4,700 G로 1 0분간원심분리한다. 하층액을취하여 40 에서질소농축하여건고한후 0.1% 개미산용액 2 ml과메탄올 2 ml을가하여재분산하고 10 분간초음파처리한후 4 에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여시험용액으로한다. 나 ) 알균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 아세토니트릴용액 10 ml를가하여 15분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을취하여 50 ml 원심분리관에옮기고아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 10분간진탕하고상온에서 4,700 G로 1 0분간원심분리한다. 하층액을취하여 40 에서질소농축한후아세톤 : 디클로르메탄혼압액 (10 : 90, v/v) 10 ml에녹인다. 미리아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, v/v) 5 ml로활성화시킨실리카카트리지에추출액을흡착시킨다. 아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, -100-

101 v/v) 5 ml 로씻어준후고정상상단이노출되기직전에메탄올 : 아세 톤혼합액 (10 : 90, v/v) 10 ml 로용출시켜시험관에받는다. 이를 4 0 이하에서질소농축하여건고시킨후 0.1% 개미산용액 2 ml 와 메탄올 2 ml 를가한다. 10 분간초음파처리한후 4 에서 10 분간원 심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여 과하여시험용액으로한다. 6) 시험조작 가 ) 액체크로마토그래프의측정조건 (1) 칼럼 : C 18 (Xselect, 2.1 mm x 150 mm, 3.5 μm) 또는이와동 등한것 (2) 이동상 ( 가 ) 이동상 A: 0.2% 개미산함유메탄올용액 ( 나 ) 이동상 B: 20 mm 개미산암모늄함유 0.1% 개미산용액 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (3) 유속 : 0.25 ml/ 분 (4) 칼럼온도 : 40 (5) 주입량 : 5 μl 나 ) 질량분석기조건 -101-

102 (1) 이온화방법 : ESI(Positive) (2) Capillary temperature: 350 (3) Capillary voltage: 3.5 kv (4) Collision gas: Ar( 아르곤 ) (5) 분석대상및개별조건 (MRM 조건 ) 물질명 (Compound) 노보비오신 (Novobiocin ) 티아물린 (Tiamulin) 머무름시간 ( 분 ) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값 으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 정성위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response rat io) 을비교하여그비율은주 1) 과일치하여야한다

103 주 1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % 20 % > 20 %, 50 % 25 % > 10 %, 20 % 30 % 나 ) 표준품크로마토그램 노보비오신 (5.76 분 ) 티아물린 (5.20 분 ) 그림 1. 노보비오신, 티아물린표준품의크로마토그램 ( 각 0.01 mg/l) 8) 정량시험가 ) 정량정성시험과똑같은조건에서음성검체 (blank sample) 에혼합표준용액을일정농도로제조한후얻어진크로마토그램상의각피크높이또는 -103-

104 면적을구하여검량선을작성하고, 시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (quantitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 나 ) 정량한계노보비오신 : mg/kg 티아물린 : mg/kg 제 을신설하고그내용을다음과같이한다 제3법 1) 시험법적용범위수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중세프티오퍼와세프티오퍼의체내대사물질인데스후로릴세프티오퍼 (desfuroylceftiofur) 를디티오에리쓰리톨 (DTE, dithioerythritol) 용액으로추출한후요오드아세트아미드 (iodoacetamide) 로유도체화하여최종형성된데스후로일세프티오퍼아세트아미드 (desfuroylceftiof ur acetamide) 를 HLB 카트리지로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에세프티오퍼표준품을정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/l가되게한다

105 라 ) 표준용액 : 표준원액을 M 인산완충용액 (ph 7.0) 으로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.05 M 붕산완충용액 (ph 9.0) : 1,000 ml 용량플라스크에붕산나트륨 19 g과염화칼륨 3.7 g을넣고물로녹여표시선까지채운다. 바 ) M 인산완충용액 (ph 7.0) : 1,000 ml 용량플라스크에인산이수소칼륨 3.4 g을넣고물로녹이고수산화칼륨용액으로 ph 7.0 으로조정한후표시선까지물로채운다. 사 ) 14% 요오드아세트아미드 (Iodoacetamide) 용액 : 요오드아세트아미드 7 g을 M 인산완충용액 50 ml에용해한다. 아 ) 0.4% 디에리쓰리톨 (DTE, dithioerythritol) 용액 : DTE 1 g을 M 붕산완충용액 250 ml에용해한다. 자 ) SPE 카트리지 : HLB(Divinylbenzne-N-vinylpyrolidone Co-Poly mer) 카트리지 (200 mg, 6 ml) 또는이와동등한것차 ) 0.1% 개미산 (Formic acid) : 개미산 1 ml와물 999 ml를혼합하여사용한다. 카 ) 0.1% 개미산 (Formic acid) 이함유된아세토니트릴 : 개미산 1 ml 와아세토니트릴 999 ml를혼합하여사용한다. 타 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제균질화한검체 1 g을 50 ml의원심분리관에취하고 0.4% DTE 용액 7 ml를가하여 50 진탕항온수조에서 15분간진탕한다. 방냉한후 1 4% 요오드아세트아미드용액을가하여 10 ml로정용하고 15분간균질화한후실온에서 30분간정치하여유도체화한다. 유도체화한후인 -105-

106 산용액으로 ph가 2.5±0.1이되도록조정하고, 9,000 G에서 10분간원심분리한후상징액을추출액으로한다. 미리메탄올 5 ml와물 5 ml로활성화시킨 HLB 카트리지에추출액 5 ml를흡착시키고, 물 5 ml로세척한후 50% 아세토니트릴 5 ml로용출시킨다. 용출액은 50 에서감압농축후이동상 A 0.5 ml로재용해하고, 0.2 μm 멤브레인필터 (PVDF, Polyvinylidenedifluoride) 로여과하여시험용액으로한다. 6) 시험조작가 ) 액체크로마토그래프측정조건 (1) 칼럼 : C 18 ( mm, 3 µm) 또는이와동등한것 (2) 칼럼온도 : 40 (3) 이동상 ( 가 ) 이동상 A : 0.1% 개미산 ( 나 ) 이동상 B : 0.1% 개미산이함유된아세토니트릴 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (4) 유속 : 0.3 ml/ 분 (5) 주입량 : 10 μl -106-

107 나 ) 질량분석기조건 (1) Ionization : ESI(positive) (2) Capillary temperature : 350 (3) Spray voltage : 5,000 V (4) Collision gas : Ar( 아르곤 ) (5) Collision energy 물질명 (Compound) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 선구이온 (Precusor ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 데스후로일세프티오퍼아세트아미드 (Desfuroylceftiofur acetamide) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험위의기기조건으로얻어진시험용액의크로마토그램상피크는음성검체 1 g에적당한농도의표준용액을 100 μl 첨가하여 5) 의시험용액조제과정을따른후얻어진크로마토그램상피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한, 표준용액과시험용액의선구이온 (precu rsor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그비율이 ± 20~30% 이내에서일치하여야한다 주1 참조 -107-

108 주 1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50% ± 20% > 20%, 50% ± 25% > 10%, 20% ± 30% 가 ) 유도체화된표준품의크로마토그램 그림 1. 데스후로일세프티오퍼아세트아미드 (6.9 분, 세프티오퍼로서 0.2 μg ) 의 크로마토그램 8) 정량시험가 ) 검량선음성검체 1 g에적당한농도의표준용액을각각 100 μl씩첨가하여 5) 의시험용액조제과정을따른후얻어진크로마토그램상의정량이온 (quantitative ion) 에대한피크의면적으로검량선을작성하여검체중의세프티오퍼함량을구한다. 나 ) 정량한계 : 0.01 mg/kg -108-

109 제 을다음과같이한다 시미아졸 (cymiazole), 아미트라즈 (amitraz), 코마포스 (coumaphos), 플루발리네이트 (fluvalinate) 1) 시험법적용범위벌꿀등에적용한다. 2) 분석원리검체중분석대상물질을물과아세토니트릴로추출한후원심분리하여상층액을취해 PSA(primary secondary amine), C 18 및황산나트륨을이용하여정제한후액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 각표준품을정밀히달아메탄올에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 라 ) 혼합표준용액 : 각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게하여사용한다. 마 ) 0.1% 개미산용액 : 1 L 용량플라스크에개미산 1 ml를넣고물로표시선까지채운다. 바 ) 0.2 M 인산수소이나트륨 (Na 2 HPO 4 ) 용액 : 1 L 용량플라스크에 -109-

110 인산수소이나트륨 (Na 2 HPO 4 ) 28.4 g을넣고물로표시선까지채운다. 사 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제균질화된검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 0.2 M의인산수소이나트륨을함유한수용액을 5 ml 가하여 1 분간진탕혼합한다. 12 ml의아세토니트릴과 MgSO 4 6 g, NaCl 1.5 g을가하여 10분간진탕혼합한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. PSA 150 mg, C mg, MgSO mg가담긴 50 ml 원심분리관에상층액 15 ml를넣고 10분간진탕혼합하여 4, 15,000 G에서 10분간원심분리한다. 상층액을전량취하여 45 에서질소농축한후아세토니트릴용액 1 ml로가한뒤 5분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 (PTFE membrane f ilter) 로여과한후시험용액으로한다. 6) 시험조작가 ) 액체크로마토그래프측정조건 (1) 칼럼 : C 18 (Phenomenex Kinetex EVO C 18, mm, 2.6 μ m) 또는이와동등한것 (2) 이동상 ( 가 ) 이동상 A: 0.1% 개미산용액 ( 나 ) 이동상 B: 아세토니트릴 -110-

111 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (3) 이동상유속 : 0.2 ml/ 분 (4) 칼럼온도 : 30 (5) 주입량 : 2 μl 나 ) 질량분석기분석조건 (1) 이온화방법 : ESI (positive) (2) Capillary temperature: 350 (3) Capillary voltage: 3.8 kv (4) Collision gas: 질소 (N 2 ) (5) 분석대상물질의조건 분석성분 (Compound) 시미아졸 (Cymiazole) 아미트라즈 (Amitraz) 2,4- 디메틸아닐린 * (2,4-dimethylaniline) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [M+H] +, m/z) 코마포스 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev)

112 분석성분 (Compound) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precusor ion, [M+H] +, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) (Coumaphos) 플루발리네이트 (Fluvalinate) * 2,4- 디메틸아닐린 (2,4-dimethylaniline) : 아미트라즈 (Amitraz) 의대사산물임 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 정성위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response rat io) 을비교하여그비율은주 1) 과일치하여야한다. 주1 참조 주 1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 -112-

113 > 50% ± 20% > 20%, 50% ± 25% > 10%, 20% ± 30% 나 ) 표준품크로마토그램 시미아졸 (1.31 분 ) 아미트라즈 (4.32 분 ) 2,4- 디메틸아닐린 (1.73 분 ) -113-

114 코마포스 (2.77 분 ) 플루발리네이트 (6.99 분 ) 그림 1. 시미아졸, 아미트라즈, 2,4- 디메틸아닐린, 코마포스, 플루발리네이 트, 표준품의크로마토그램 ( 각 0.2 mg/kg) 8) 정량시험가 ) 정량정성시험과같은조건에서얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성하고시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (quantitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 나 ) 정량한계시미아졸 (Cymiazole): mg/kg 아미트라즈 (Amitraz) : mg/kg 2,4-디메틸아닐린 (2,4-dimethylaniline): mg/kg 코마포스 (Coumaphos): mg/kg -114-

115 플루발리네이트 (Fluvalinate): mg/kg 제 엔로플록사신 (Enrofloxacin), 시프로플록사신 (Ciprofloxaci n) 을삭제한다. 제 을각각 로하고 독시싸이클린 (Doxycycline), 미노싸이클린 (Minocycline), 옥시테트라싸이클린 (Ox ytetracycline), 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline), 테트라싸이클린 (Tetracycline) 중 제1법 의제목및 제2법을삭제한다. 제 플루발리네이트 (Fluvalinate) 를삭제한다. 제 를각각 로한다. 제 를 으로하고그내용을다음과같이한다 모란텔 (Morantel), 에마멕틴벤조에이트 (Emamectin benzoate), 프라지콴텔 (Praziquantel), 피란텔 (Pyrantel) 1) 시험법적용범위축 수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중분석대상물질을아세토니트릴로추출하고아세토니트릴포화헥산으로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다

116 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에표준품 ( 모란텔, 에마멕틴 B1a, 프라지콴텔, 피란텔 ) 을각각정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/ L가되게한다. 조제된표준원액은냉동보관한다. 라 ) 혼합표준용액 : 100 ml 용량플라스크에각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml을넣고물로표시선까지채운다. 바 ) 20 mm 개미산암모늄 (ammonium formate) 함유 0.1% 개미산용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml와 1.26 g의개미산암모늄을넣고녹인후물로표시선까지채운다. 사 ) 0.2% 개미산함유메탄올용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 2 ml을넣고메탄올로표시선까지채운다. 아 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 아세토니트릴 10 ml를가하여 15분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을취하여 50 ml 원심분리관에옮기고아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 10분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10 분간원심분리한다. 하층액을취한뒤, 40 수용액상에서질소농축하 -116-

117 여건고한후 0.1% 개미산용액 2 ml과메탄올 2 ml을가하여재분 산하고 10분간초음파처리한후 4 에서 4,700 G로 10분간원심분리 한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여 시험용액으로한다. 6) 시험조작 가 ) 액체크로마토그래프분석조건 (1) 칼럼 : C 18 (Xselect, 2.1 mm x 150 mm, 3.5 μm) 또는이와동 등한것 (2) 칼럼온도 : 40 (3) 이동상 ( 가 ) 이동상 A: 0.2% 개미산함유메탄올용액 ( 나 ) 이동상 B: 20 mm 개미산암모늄함유 0.1% 개미산용액 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (4) 이동상유속 : 0.25 ml/ 분 (5) 주입량 : 5 μl 나 ) 질량분석기조건 (1) 이온화방법 : ESI(positive) -117-

118 (2) Capillary voltage: 0.5 kv (3) Collision gas: 아르곤 (Ar) (4) Capillary temperature: 350 (5) 분석대상및개별조건 (MRM 조건 ) 분석성분 (Compound) 모란텔 (Morantel) 에마멕틴 B1a (Emamectin B1a) 프라지콴텔 (Praziquantel ) 피란텔 (Pyrantel) 머무름시간 (Retentio n time, min) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision energy, ev) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각생성이온에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할 수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 정성위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의 -118-

119 선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (product ion) 이일치하여야하 고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response rat io) 을비교하여그비율은주 1) 과일치하여야한다. 주 1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % 20 % > 20 %, 50 % 25 % > 10 %, 20 % 30 % 나 ) 표준품크로마토그램 모란텔 (4.67 분 ) 에마멕틴 B1a(5.73 분 ) -119-

120 프라지콴텔 (5.59 분 ) 피란텔 (4.48 분 ) 그림 1. 프라지콴텔, 모란텔, 피란텔, 에마멕틴 B1a 표준품의크로마토그램 ( 각 0.01 mg/l) 8) 정량시험가 ) 정량정성시험과똑같은조건에서음성검체에 (blank sample) 에혼합표준용액을일정농도로제조한후얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성하고, 시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (quantitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 나 ) 정량한계모란텔 : mg/kg 에마멕틴 B1a : mg/kg 프라지콴텔 : mg/kg 피란텔 : mg/kg 제 을각각 로하고 시미아졸 -120-

121 (Cymiazole) 을삭제한다. 제 을각각 으로하고 푸마길린 (Fumagillin) 중 5) 의가 ) 및나 ) 를각각다음과같이한다. 5) 시험용액의조제가 ) 꿀균질화된검체 5 g을 50 ml 원심분리관에취하고증류수를 10 ml 가하여 10분간진탕한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 미리메탄올 5 ml과물 5 ml로 Strata-X 카트리지를활성화시킨후추출액을흡착시키고 40% 메탄올수용액 5 ml로 2회세척한다. 새로운원심분리관에 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 6 ml로용출한후, 40 이하의수욕중에서질소농축한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mm 개미산암모늄을함유한메탄올 1 ml로재분산하여 1분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하고 0.2 μm 필터 (Polytetrafluoroethylene, PTFE) 로여과한것을시험용액으로한다. 나 ) 어류균질화된검체 5 g을 50 ml 원심분리관에취하고 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴을 20 ml 가한후 5분간진탕한다. 여기에 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한후상층액을취하여 40 이하의수욕중에서질소농축하여 0.5 ml이되게하고증류수 5 ml로재분산한다. 미리메탄올 5 ml과물 5 ml로 Strata-X 카트리지를활성화시킨후추출액을흡착시키고 40% 메탄올수용액 5 ml로세 -121-

122 척한다. 새로운원심분리관에 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 10 ml로용출한후, 40 이하의수욕중에서질소농축한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mm 개미산암모늄을함유한메탄올 1 ml 로재분산하여 1분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하고 0.2 μm 필터 (Polytetrafluoroethylene, PTFE) 로여과한것을시험용액으로한다. 제 을각각 으로하고 데하이드로콜산 (Dehydrocholic acid), 안트라닐산 (Anthranilic acid) 중 5) 를다음과같이한다. 5) 시험용액의조제균질화된검체 5 g을 50 ml 원심분리관에취하고 10 mm 개미산암모늄이함유된아세토니트릴 20 ml을가하여 15분간진탕혼합한후, 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 상층액을 50 ml 원심분리관에취하고 20 ml 헥산을넣어 10분간진탕혼합한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 하층액을 15 ml 원심분리관에취하고 40 에서 0.5 ml이될때까지질소농축한다. 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 1.5 ml을가한뒤재분산하고 4, 15,000 G 에서 10분간원심분리하여상층액을 0.45 μm 필터 (Polytetrafluoro ethylene, PTFE) 로여과시킨것을시험용액으로한다. 제 을각각 로한다

123 제 를다음과같이신설한다 독시싸이클린 (Doxycycline), 린코마이신 (Lincomycin), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 에리스로마이신 (Erythromycin), 엔로플록사신 (enrofloxacin), 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline), 타일로신 (Tylosin), 테트라사싸이클린 (Tetracycline), 트리메토프림 (Trimethoprim) 1) 시험법적용범위벌꿀, 로얄젤리등에적용한다. 2) 분석원리시료중의분석대상물질을 EDTA-NA 2 와구연산이함유된물로추출하고 HLB 카트리지를이용하여정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 장치액체크로마토그래프 / 질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 각표준품 ( 타일로신의경우타일로신 A 표준품을사용한다 ) 을용량플라스크에정밀히달아메탄올 ( 엔로플록사신, 시프로플록사신은 0.2% 개미산을함유한메탄올 ) 에녹여 100 mg/l이되게한다. 라 ) 혼합표준용액 : 각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 을함유한물 : 1,000 ml 용량플라스크에 -123-

124 개미산 (formic acid) 1 ml을넣고물로표시선까지채운다. 바 ) 0.5 M EDTA-Na 2 (Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate) 을함유한물 : 500 ml 용량플라스크에 EDTA-Na 2 di hydrate 93.1 g을넣고물로표시선까지채운다. 사 ) 0.1 M 구연산 (citric acid) 을함유한물 : 1,000 ml 용량플라스크에구연산 19.2 g을넣고물로표시선까지채운다. 아 ) 추출용액 : 0.5 M EDTA-Na 2 을함유한물과 0.1 M 구연산 (citric a cid) 을함유한물을 2 : 8(v/v) 로혼합한다. 자 ) 0.04% 암모니아수를함유한메탄올 : 1,000 ml 용량플라스크에암모니아수용액 (28%) 0.4 ml을넣고물로표시선까지채운다. 차 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제가 ) 아카시아꿀, 잡화꿀, 밤꿀균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 추출용액 10 ml를가하여 10분간진탕한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 상층액을 0.45 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여 15 ml 원심분리관에서담는다. 미리메탄올 2 ml와아세토니트릴 2 ml, 물 2 ml로 HLB 카트리지를활성화시킨후추출액을흡착시키고물 4 ml로 2회세척한다. 새로운원심분리관에메탄올 3 ml, 아세토니트릴 3 ml, 0.04% 암모니아수를함유한메탄올 3 ml로용출한후, 4 5 이하의수욕중에서질소농축한다. 잔류물은메탄올 1 ml로재용해하여 5분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하고

125 μm 막여과지 (PTFE membrane filter) 로여과한것을시험용액으로한다. 나 ) 마누카꿀, 로얄젤리균질화된검체 1 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 추출용액 7 ml를가하여 10분간진탕혼합한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 상층액을새로운원심분리관에담고추출용액 8 ml를가하여 1 0분간진탕혼합한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다 μm 막여과지 (PVDF membrane filter) 로여과하여 15 ml 원심분리관에서담는다. 미리메탄올 2 ml와아세토니트릴 2 ml, 물 2 ml로 HLB 카트리지를활성화시킨후추출액을흡착시키고물 4 ml로 3 회세척한다. 새로운원심분리관에메탄올 3 ml, 아세토니트릴 3 ml, 0.04% 암모니아수를함유한메탄올 3 ml로용출한후, 45 이하의수욕중에서질소농축한다. 잔류물은메탄올 1 ml로재분산하여 5 분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하고 0.2 μm 막여과지 (PTFE membrane filter) 로여과한것을시험용액으로한다. 6) 시험조작가 ) 액체크로마토그래프측정조건 (1) 칼럼 :C 18 (Phenomenex Kinetex EVO, mm, 2.6 μm) 또는이와동등한것 (2) 이동상 ( 가 ) 이동상 A : 0.1% 개미산을함유한물 -125-

126 ( 나 ) 이동상 B : 아세토니트릴 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) (3) 유속 : 0.2 ml/ 분 (4) 칼럼온도 : 30 (5) 주입량 : 2 μl 나 ) 질량분석기조건 (1) Ionization : ESI(positive) (2) Capillary Temperature : 350 (3) Collision gas : N 2 ( 질소 ) (4) 분석대상물질의개별조건 연번 물질명 (Compounds) 독시사이클린 (doxycycline) 린코마이신 (lincomycin) 시프로플록사신 (ciprofloxacin) 에리스로마이신 (erythromycin) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 선구이온 (P recursor i on, m/z) 생성이온 (P roduct ion m/z) 충돌에너지 ( Collision E nergy, ev) 엔로플록사신

127 연번 6 물질명 (Compounds) 머무름시간 ( 분 ) 분자량 (MW) 선구이온 (P recursor i on, m/z) 생성이온 (P roduct ion m/z) 충돌에너지 ( Collision E nergy, ev) (enrofloxacin) 옥시테트라사이클린 (oxytetracycline) 7 클로르테트라사이클린 (chlortetracycline) 타일로신 A (tylosin A) 테트라사이클린 (tetracycline) 트리메토프림 (trimethoprim) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적 값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precursor ion) 및생성이온 (Product ion) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (res ponse ratio) 을비교하여그비율이 ± 20~30 % 이내에서일치하여야한다. 주1 참조 -127-

128 주 1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % ± 20 % > 20 %, 50 % ± 25 % > 10 %, 20 % ± 30 % 나 ) 표준품크로마토그램 독시싸이클린 (doxycycline) -128-

129 린코마이신 (lincomycin) 시프로플록사신 (ciprofloxacin) 에리스로마이신 (erythromycin) -129-

130 엔로플록사신 (enrofloxacin) 옥시테트라싸이클린 (oxytetracycline) 클로르테트라싸이클린 (chlortetracycline) -130-

131 타일로신 A (tylosin A) 테트라싸이클린 (tetracycline) 트리메토프림 (trimethoprim) -131-

132 그림 1. 독시싸이클린 (1.33분), 린코마이신 (1.26분), 시프로플록사신 (1.28분), 에리스로마이신 (1.29분), 엔로플록사신 (1.29분), 옥시테트라싸이클린 (1.33분), 클로르테트라싸이클린 (1.34분), 타일로신 A(1.29분 ), 테트라싸이클린 (1.33분), 트리메토프림 (1.28분) 표준품의크로마토그램 ( 각각 0.2 mg/l) 8) 정량시험가 ) 정량정성시험과똑같은조건에서표준용액을일정농도로제조한후얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성하고, 시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (quantitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 나 ) 정량한계독시싸이클린 (doxycycline) : mg/kg 린코마이신 (lincomycin) : mg/kg 시프로플록사신 (ciprofloxacin) : mg/kg 에리스로마이신 (erythromycin) : mg/kg 엔로플록사신 (enrofloxacin) : mg/kg 옥시테트라싸이클린 (oxytetracycline) : 0.01 mg/kg 클로르테트라싸이클린 (chlortetracycline) : mg/kg 타일로신 A(tylosin A) : mg/kg 테트라싸이클린 (tetracycline) : mg/kg 트리메토프림 (trimethoprim) : mg/kg -132-

133 [ 별표 3], (14) 디메토에이트 (Dimethoate) 중 양파 0.2 T 를 양파 0.2 로하고, 다음항목을신설한다. 파 0.05 [ 별표 3], (61) 비펜트린 (Bifenthrin) 중다음항목을신설한다. 용과 0.1 [ 별표 3], (114) 카보퓨란 (Carbofuran) 중다음항목을각각신설한다. 고구마 0.02 망고스틴 2.0 [ 별표 3], (192) 프로피코나졸 (Propiconazole) 중 복숭아 1.0 T 를 복숭아 1.0 으로한다. [ 별표 3], (227) 아세타미프리드 (Acetamiprid) 중다음항목을각각신설한다. 갯기름나물 7.0 아스파라거스 0.3 용과 0.5 [ 별표 3], (228) 아족시스트로빈 (Azoxystrobin) 중 참외 0.2 를 참외 0.5 로한다

134 [ 별표 3], (234) 펜피록시메이트 (Fenpyroximate) 중다음항목을각각신설한다. 마늘 0.05 풋마늘 0.05 [ 별표 3], (237) 피메트로진 (Pymetrozine) 중다음항목을각각신설한다. 복숭아 0.2 용과 0.5 [ 별표 3], (239) 플루아지남 (Fluazinam) 중다음항목을신설한다. 브로콜리 0.05 [ 별표 3], (246) 스피노사드 (Spinosad) 중다음항목을각각신설한다. 구기자 0.2 구기자 ( 건조 ) 0.7 아보카도 0.3 [ 별표 3], (248) 아바멕틴 (Abamectin) 중다음항목을각각신설한다. 건삼 0.05 수삼 0.05 [ 별표 3], (249) 에마멕틴벤조에이트 (Emamectin benzoate) 중 딸기 0.05 를 딸기 0.2 로하고, 다음항목을신설한다

135 포도 0.03 [ 별표 3], (290) 인독사카브 (Indoxacarb) 중다음항목을각각신설한다. 셀러리 8.0 호박 0.15 [ 별표 3], (321) 디노테퓨란 (Dinotefuran) 중다음항목을신설한다. 망고 0.5 [ 별표 3], (332) 클로티아니딘 (Clothianidin) 중다음항목을신설한다. 브로콜리 0.2 [ 별표 3], (338) 티아클로프리드 (Thiacloprid) 중다음항목을신설한다. 갯기름나물 20 [ 별표 3], (370) 벤티아발리카브아이소프로필 (Benthiavalicarb-isopropyl) 중다음항목을각각신설한다. 상추 5.0 양상추 5.0 [ 별표 3], (373) 스피로메시펜 (Spiromesifen) 중 복숭아 0.2 를 복숭아 2.0 으 로한다

136 [ 별표 3], (386) 플로니카미드 (Flonicamid) 중다음항목을각각신설한다. 무 ( 뿌리 ) 0.05 무 ( 잎 ) 2.0 [ 별표 3], (399) 사이플루메토펜 (Cyflumetofen) 중다음항목을신설한다. 멜론 0.2 [ 별표 3], (422) 펜티오피라드 (Penthiopyrad) 중 사과 0.2, 배 0.5 를삭제하고, 다음항목을각각신설한다. 복분자 0.5 인과류 0.5 [ 별표 3], (424) 피리플루퀴나존 (Pyrifluquinazon) 중다음항목을각각신설한다. 갯기름나물 15 포도 0.7 [ 별표 3], (427) 이미시아포스 (Imicyafos) 중다음항목을각각신설한다. 마늘 0.05 풋마늘

137 [ 별표 3], (428) 플루오피람 (Fluopyram) 중다음항목을각각신설한다. 감 0.5 상추 0.5 양상추 0.5 [ 별표 3], (430) 설폭사플로르 (Sulfoxaflor) 중 참깨 0.05 를 참깨 0.7 로하고, 다음항목을각각신설한다. 갯기름나물 10 대추 0.7 대추 ( 건조 ) 2.0 무 ( 뿌리 ) 0.05 무 ( 잎 ) 1.0 [ 별표 3], (439) 스피로테트라맷 (Spirotetramat) 중다음항목을각각신설한다. 복분자 3.0 용과 0.5 [ 별표 3], (441) 피리벤카브 (Pyribencarb) 중 토마토 1.0 을 토마토 2.0 으로하고, 다음항목을각각신설한다. 배추 1.0 양파 0.05 엇갈이배추

138 [ 별표 3], (453) 만데스트로빈 (Mandestrobin) 중다음항목을각각신설한다. 마늘 0.05 양파 0.05 풋마늘 0.05 [ 별표 3], (455) 옥사티아피프롤린 (Oxathiapiprolin) 중 오이 0.1 을 삭제하고, 다음항목을각각신설한다. 건삼 0.15 결구엽채류 0.9 라즈베리 0.5 바질 10 바질 ( 건조 ) 80 박과과채류 0.2 아스파라거스 2.0 풋콩 1.0 [ 별표 3], (456) 인다지플람 (Indaziflam) 중다음항목을각각신설한다. 감 0.05 복숭아 0.05 [ 별표 3], (458) 사이클라닐리프롤 (Cyclaniliprole) 중다음항목을각 -138-

139 각신설한다. 대두 0.05 들깻잎 10 자두 0.2 참외 0.1 풋콩 0.3 [ 별표 3], (459) 피플루뷰마이드 (Pyflubumide) 중다음항목을각각신설한다. 멜론 0.3 피망 1.0 [ 별표 3], (461) 벤조빈디플루피르 (Benzovindiflupyr) 중다음항목을신 설한다. 감자 0.02 [ 별표 3] 중주9. 를다음과같이한다. 주 9. 상기각각의기준중 표시된농산물은수출국의요청으로잔류허용기준이설정된농산물을의미하며, 기준적용시에는국내및수입농산물에동일하게적용한다. [ 별표 4] 축산물의농약잔류허용기준 을 [ 별표 5] 축 수산물의잔류물 질잔류허용기준 으로하고, [ 별표 5] 식품중동물용의약품의잔류허 -139-

140 용기준 을 [ 별표 4] 식품중동물용의약품의잔류허용기준 으로한다. 종전의 [ 별표 4], (13) 메타미도포스 (Methamidophos) 중다음항목을각각신설한다. 가금류고기 0.01 가금류부산물 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (17) 모노크로토포스 (Monocrotophos) 중다음항목을 신설한다. 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (21) 사이퍼메트린 (Cypermethrin) 중 가금류고기 0.05 및 알 0.05 를삭제한다. 종전의 [ 별표 4], (35) 아이소펜포스 (Isofenphos) 중다음항목을신설한 다. 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (50) 페니트로티온 (Fenitrothion : MEP) 중다음항목을각각신설한다. 가금류고기 0.05 알

141 종전의 [ 별표 4], (53) 펜설포티온 (Fensulfothion) 중다음항목을각각신설한다. 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (56) 포레이트 (Phorate) 중다음항목을각각신설한다. 가금류고기 0.05 알 0.05 종전의 [ 별표 4], (65) 피리미포스메틸 (Pirimiphos-methyl) 중다음항목을각각신설한다. 가금류고기 0.01 가금류부산물 0.01 종전의 [ 별표 4], (85) (99) 를다음과같이신설한다. 종전의 [ 별표 4], (85) 클로티아니딘 (Clothianidin) 잔류물의정의 : Clothianidin 가금류고기 0.01 가금류지방 0.01 가금류부산물 0.1 알

142 종전의 [ 별표 4], (86) 피프로닐 (Fipronil) 잔류물의정의 : Fipronil과 fipronil sulfone의합을 fipronil로함가금류고기 0.01 가금류부산물 0.02 알 0.02 종전의 [ 별표 4], (87) 이미다클로프리드 (Imidacloprid) 잔류물의정의 : Imidacloprid와 6-chloropyridinyl을포함하는대사산물의합을 imidacloprid로함가금류고기 0.02 가금류부산물 0.05 알 0.02 종전의 [ 별표 4], (88) 스피노사드 (Spinosad) 잔류물의정의 : Spinosyn A 와 spinosyn D 의합 가금류고기 0.3(f) 알 0.03 종전의 [ 별표 4], (89) 이버멕틴 (Ivermectin) 잔류물의정의 : 22,23-Dihydroavermectin B1a 가금류고기 0.01 알

143 종전의 [ 별표 4], (90) 아미트라즈 (Amitraz) 잔류물의정의 : Amitraz와 2,4-dimethylaniline 의합을 amitraz로함가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (91) 아바멕틴 (Abamectin) 잔류물의정의 : Avermectin B1a 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (92) 카탑 (Cartap) 잔류물의정의 : Nereistoxin 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (93) 클로르페나피르 (Chlorfenapyr) 잔류물의정의 : Chlorfenapyr 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (94) 에톡사졸 (Ethoxazole) 잔류물의정의 : Ethoxazole 가금류고기

144 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (95) 플루페녹수론 (Flufenoxuron) 잔류물의정의 : Flufenoxuron 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (96) 피리다벤 (Pyridaben) 잔류물의정의 : Pyridaben 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (97) 스피로메시펜 (Spiromesifen) 잔류물의정의 : Spiromesifen 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], (98) 티오사이클람 (Thiocyclam) 잔류물의정의 : Nereistoxin (92) 카탑 (Cartap) 잔류허용기준에따른다. 종전의 [ 별표 4], (99) 테트라코나졸 (Tetraconazole) 잔류물의정의 : Tetraconazole -144-

145 가금류고기 0.01 알 0.01 종전의 [ 별표 4], * 주 3을다음과같이신설한다. 주 3. : 상기 표시된기준은수출국의요청으로설정된잔류허용기준을의미하며, 기준적용시에는국내및수입축산물에동일하게적용한다. 부칙제1조 ( 시행일 ) 이고시는 2018년 5월 1일부터시행한다. 제2조 ( 적용례 ) 이고시는이고시시행이후최초로제조 가공또는수입한식품 ( 선적일기준 ) 부터적용한다. 제3조 ( 경과조치 ) 이고시는이고시시행당시제조 가공 판매또는수입되어검사가진행중인사항에대하여는종전의규정에따른다

146 신 구조문대비표 현행개정 ( 안 ) -146-

147 현행개정 ( 안 ) 제1. 총칙 ( 생략 ) 4. 식품원료분류 ( 생략 ) 1) 식물성원료 제1. 총칙 ( 현행과같음 ) 4. 식품원료분류 ( 현행과같음 ) 1) 식물성원료 대분류소분류 품 목 곡류 - ( 생 략 ) 서류 - ( 생 략 ) 두류 - ( 생 략 ) 대분류소분류 품 목 곡류 - ( 현행과같음 ) 서류 - ( 현행과같음 ) 두류 - ( 현행과같음 ) 견과 종실류 땅콩또는견과류 유지종실류 음료및감미종실류 ( 생략 ) ( 생략 ) ( 생략 ) 견과 종실류 땅콩또는견과류 유지종실류 음료및감미종실류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 과일류 채소류 인과류 ( 생략 ) 감귤류 ( 생략 ) 핵과류 ( 생략 ) 장과류 ( 생략 ) 열대과일류 결구엽채류 엽채류 바나나, 파인애플, 키위 ( 참다래 ), 아보카도, 파파야, 대추야자, 망고, 구아바, 코코넛, 리치, 패션프루트, 두리안, 망고스틴, 용안등 배추, 양배추, 브로콜리등 과일류 엇갈이배추 ( 쌈배추, 봄동등포함 ), 상추, 양상추, 시금치, 들깻잎, 쑥갓, 아욱, 근대, 머위, 무 ( 열무포함, 잎 ), 취나물 ( 곰취, 참취, 미역취 ), 고춧잎, 참나물, 케일, 청경채, 갓, 냉이, 치커리 ( 잎 ), 앤디브, 파슬리, 호박잎, 신선초, 고추냉이 ( 잎 ), 비름나물, 씀바귀, 우엉잎, 겨자채, 뉴그린, 다청채, 당귀잎, 쑥, 둥글레 ( 잎 ), 뽕잎, 유채 ( 동초 ), 춘채, 고들빼기, 왕고들빼기, 민들레, 방풍나 물, 고려엉겅퀴 ( 곤드레나물 ), 섬채소류쑥부쟁이 ( 부지깽이나물 ), 엉겅퀴, 산마늘잎 ( 명이나물 ), 다채 ( 비타 인과류 ( 현행과같음 ) 감귤류 ( 현행과같음 ) 핵과류 ( 현행과같음 ) 장과류 ( 현행과같음 ) 열대과일류 결구엽채류 엽채류 바나나, 파인애플, 키위 ( 참다래 ), 아보카도, 파파야, 대추야자, 망고, 구아바, 코코넛, 리치, 패션프루트, 두리안, 망고스틴, 용안, 용과등 배추, 양배추, 브로콜리 ( 콜리플라워포함 ) 등 엇갈이배추 ( 쌈배추, 봄동등포함 ), 상추, 양상추, 시금치, 들깻잎, 쑥갓, 아욱, 근대, 머위, 무 ( 열무포함, 잎 ), 취나물 ( 곰취, 참취, 미역취 ), 고춧잎, 참나물, 케일, 청경채, 갓, 냉이, 치커리 ( 잎 ), 앤디브, 파슬리, 호박잎, 신선초, 고추냉이 ( 잎 ), 비름나물, 씀바귀, 우엉잎, 겨자채, 뉴그린, 다청채, 당귀잎, 쑥, 둥글레 ( 잎 ), 뽕잎, 유채 ( 동초 ), 춘채, 고들빼기, 왕고들빼기, 민들레, 갯기름나물 ( 방풍나물 ), 고려엉겅퀴 ( 곤드레나물 ), 섬쑥부쟁이 ( 부지깽이나

148 현행개정 ( 안 ) 제2. 식품일반에대한공통기준및규격 ( 생략 ) 3. 식품일반의기준및규격 1) 6) ( 생략 ) 제2. 식품일반에대한공통기준및규격 ( 현행과같음 ) 3. 식품일반의기준및규격 1) 6) ( 현행과같음 ) -148-

149 현행 개정 ( 안 ) 7) 농약의잔류허용기준 7) 농약의잔류허용기준 (1) (3) ( 생 략 ) (1) (3) ( 현행과같음 ) (4) 축산물의농약잔류허용기준적용범위 1 포유류고기 : 근육내지방및피하지방과같이부착된지방조직을포함하는동물의도체 ( 혹은이를자른덩어리 ) 의근육조직으로소, 돼지, 양, 염소, 토끼, 말, 사슴등의고기를말한다 ( 해양동물의고기는제외 ). 2 포유류지방 : 동물의지방조직에서얻어진가공되지않은지방으로소, 돼지, 양, 염소, 토끼, 말, 사슴등의지방을말하며, 유지방은포함하지않는다. 3 포유류부산물 : 도살된동물의고기및지방을제외한식용조직및기관으로소, 돼지, 양, 말, 염소, 토끼, 말, 사슴등의간, 폐, 심장, 위장, 췌장, 비장, 콩팥, 머리, 꼬리, 발, 껍질, 혈액, 뼈 ( 건, 조직이포함된뼈 ) 등식용가능한부위를말한다. 4 가금류고기 : 부착된지방및표피를포함하는가금류도체의근육조직으로닭, 꿩, < 삭 제 > 오리, 거위, 칠면조, 메추리 등의고기를말한다

150 현행개정 ( 안 ) 4. 보존및유통기준 ( 생략 ) 제 3. 제 6. ( 생략 ) 4. 보존및유통기준 ( 현행과같음 ) 제 3. 제 6. ( 현행과같음 ) -150-

151 현행 개정 ( 안 ) 제7. 일반시험법 7. 식품중잔류농약분석법 7.1 식품일반 검체 제7. 일반시험법 7. 식품중잔류농약분석법 7.1 식품일반 검체 ( 생 략 ) ( 현행과같음 ) 식품검체 곡류 ( 생 략 ) ( 생 략 ) 서류 ( 생 략 ) ( 생 략 ) 콩류 ( 생 략 ) ( 생 략 ) 채소류 ( 생략 ) ( 생략 ) 과실류 ( 생략 ) ( 생략 ) 버섯류 ( 생략 ) ( 생략 ) 종실류 ( 생략 ) ( 생략 ) 견과류 ( 생략 ) ( 생략 ) 호프 ( 생략 ) 건포도 ( 생략 ) 건조채소류 ( 생략 ) 차 ( 생략 ) 식품검체 곡류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 서류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 콩류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 채소류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 과실류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 버섯류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 종실류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 견과류 ( 현행과같음 ) ( 현행과같음 ) 호프 ( 현행과같음 ) 건포도 ( 현행과같음 ) 건조채소류 ( 현행과같음 ) 차 ( 현행과같음 ) 인삼 수삼, 건조삼또는인삼농축액 ( 장뇌삼포함 ) 인삼수삼 ( 산양삼포함 ), 건삼, 홍삼또는인삼 홍삼 농축액 다종농약다성분분석법 (Multi class pesiticide multiresidue metho ds) 다종농약다성분분석법 (Multi class pesiticide multiresidue metho ds) ( 생략 ) ( 현행과같음 )

152 현행개정 ( 안 ) 7.3 축산물의잔류농약 다성분분석법 (multiresidue methods) ( 생략 ) < 신설 > 7.3 축산물의잔류농약 다성분분석법 (multiresidue methods) ( 현행과같음 ) 아바멕틴등 27종다성분시험법가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중대상성분을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하고, 원심분리하여상징액을취해 PSA(primary secondary amin e), C 18 및 GCB(Graphitized car bon black) 를이용하여정제한후액체크로마토그래프 - 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1 ) 액체크로마토그래프 - 질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 표준품을메탄올에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여 -152-

153 현행개정 ( 안 ) 적당한농도로혼합희석한다 ( 무처리시료추출물 90% 이상포함 ) 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출검체 ( 닭의경우피부와뼈, 내장제거한근육부위 100 g, 알의경우계란, 오리알은 10 개, 메추리알 20개또는이와동등한양 ) 를균질화한후 5 g을정확히달아 50 ml 용량원심분리관에넣고 1% 아세트산이함유된아세토니트릴 15 ml를가하여 1분간격렬하게진탕한다. 원심분리관에무수황산마그네슘 6 g과무수아세트산나트륨 1.5 g을차례로가하고 10분간격렬하게진탕한후 4, 4,000 G에서 10분간원심분리한다. 2) 정제새로운 15 ml 용량원심분리관에무수황산마그네슘 1,200 m g, C mg, PSA (primarysecondary amine) 400 mg과 G CB(graphitized carbon black) 45 mg을넣고 1) 추출 로부터 -153-

154 현행개정 ( 안 ) 얻은용액중상징액 6 ml를넣고 1분간격렬하게진탕한후 4, 4000 G에서 10분간원심분리한다. 상징액중 3 ml를취하여질소기류하에서농축, 건고한후잔류물에메탄올을 1 ml를가하여재용해한다. 추출액을멤브레인필터 (nylon 재질, 0.2 μm) 로여과하여시험용액으로한다. 바. 시험조작 1) 액체크로마토그래프분석조건가 ) 칼럼 : C 18 (Imtakt, Cadenza CD, 2.0 mm i.d. 50 mm, 3 μm) 또는이와동등한것나 ) 칼럼온도 : 40 다 ) 이동상 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산함유메탄올 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산및 5 mm 아세트산암모늄함유물 시간 ( 분 ) A(%) B(%)

155 현행개정 ( 안 ) 라 ) 이동상유량 : 0.2 ml/ 분마 ) 주입량 : 2 μl 2) 질량분석기분석조건가 ) 이온화방법 : ESI positiv e 및 negative ion mode 나 ) Capillary voltage : 5.5 k V 다 ) Collision gas : 질소 (N 2 ) 또는아르곤 (Ar) 표. 액체크로마토그래프 - 질량분석기분석을위한특성이온 분석성분 (Compoun d) RT (min) 분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 2,4- 디메틸아닐린 (2,4-8 Dimethyla niline ***) 아바멕틴 (Abamect in * 9 ) 아미트라즈 (Amitraz * ** ) 비펜트린 (Bifenthri n **** 2 ) 선구이온 (Precu rsor ion, m/z) 생성이온 (Produc t ion, m/z) 충돌에이온화너지 (Ioniza (Colision energy, ev) tion mode)

156 현행개정 ( 안 ) 카바릴 (Carbaryl ) 클로티아니딘 (Clothian 0 idin) 사이퍼메트린 (Cyperm ethrin) 다이아지논 (Diazinon 0 ) 디클로르보스 (Dichlorv 4 os *** ) 에톡사졸 (Etoxazol e) 페니트로티온 (Fenitrot 1 hion) 페노뷰카브 (Fenobuc 2 arb) 펜설포티온 (Fensulfo 3 thion) 피프로닐 (Fipronil) 3 피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) 플루페녹수론 (Flufeno xuron)

157 현행개정 ( 안 ) 아이소펜포스 (Isofenph 1 os) 이버멕틴 (Ivermec tin ** 0 ) 메타미도포스 (Methami 0 dophos) 메티다티온 (Methidat 6 hion) 모노크로토포스 (Monocr 6 otophos) 포레이트 (Phorate) 1 포레이트옥손 (Phorate oxon) 포레이트옥손설폰 (Phorate oxon sulfone) 포레이트옥손설폭사이드 (Phorate 3 oxon sulfoxide ) 포레이트설폰 (Phorate sulfone) 포레이트설폭사이드

158 현행개정 ( 안 ) (Phorate sulfoxide ) 피리미포스메틸 (Pirimiph os methyl) 프로폭서 (Propoxu r) 피리다벤 (Pyridab en) 스피로메시펜 (Spirome 1 sifen) 설폭사플로르 (Sulfoxaf 4 lor) 테트라코나졸 (Tetraco 2 nazole) 트리클로르폰 (Trichlor 2 fon) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며, 그외는정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함. Abamectin* 의분석대상물질은 Avermect in B1a 이고, Ivermectin** 의분석대상물질은 22,23-Dihydroavermectin -158-

159 현행개정 ( 안 ) B1a 임. 이시험법을이용하여위의분석대상성분중 *** 표시된농약이가금류고기또는알에서검출될경우정량분석은식품공전 8.3의정량시험법을따르고, **** 표시된성분은가금류고기의경우식품공전 계열별시험법을따른다. 4) 검량선작성농도별표준용액을일정량취하여무처리시료추출용액과각각혼합한후액체크로마토그래프-질량분석기에각각주입한다. 얻은크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성한다. 5) 표준품의크로마토그램 그림. 액체크로마토그래프 - 질량분석 기에서표준품의크로마토그램 6) 정량한계 표. 정량이가능한농약 구분 정량한계 (mg/kg) 농약닭고기알 -159-

160 현행개정 ( 안 ) 2,4- 디메틸아닐린 (2,4-Dimethylaniline) 아바멕틴 (Abamectin) 아미트라즈 (Amitraz) 비펜트린 (Bifenthrin) 카바릴 (Carbaryl) 클로티아니딘 (Clothianidin) 사이퍼메트린 (Cypermethrin) 다이아지논 (Diazinon) 디클로르보스 (Dichlorvos) 에톡사졸 (Etoxazole) 페니트로티온 (Fenitrothion) 페노뷰카브 (Fenobucarb) 펜설포티온 (Fensulfothion) 피프로닐 (Fipronil) 피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) 플루페녹수론 (Flufenoxuron) 아이소펜포스 (Isofenphos) 이버멕틴 (Ivermectin) 메타미도포스 (Methamidophos) 메티다티온 (Methidathion) 모노크로토포스 (Monocrotophos) 포레이트 (Phorate) 포레이트옥손 (Phorate oxon) 포레이트옥손설폰 (Phorate oxon sulfon e)

161 현행개정 ( 안 ) 포레이트옥손설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxid e) 포레이트설폰 (Phorate sulfone) 포레이트설폭사이드 (Phorate sulfoxide) 피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl) 프로폭서 (Propoxur) 피리다벤 (Pyridaben) 스피로메시펜 (Spiromesifen) 설폭사플로르 (Sulfoxaflor) 테트라코나졸 (Tetraconazole) 트리클로르폰 (Trichlorfon) 으로표시된농약은정성만가능하고검출시정량분석은식품공전 8.3의정량시험법을따르고, 으로표시된농약은식품공전 계열별시험법을따름. 사. 정량시험위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량한다. 아. 확인시험액체크로마토그래프 - 질량분석기상의머무름시간과특성이온으로확인한다

162 현행개정 ( 안 ) 단성분분석법 ( 생략 ) 단성분분석법 ( 현행과같음 ) < 신설 > 이미다클로프리드 (Imidacloprid ) 가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중이미다클로프리드및대사산물을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하여원심분리한후 C 18 을이용하여정제하여액체크로마토그래프 - 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프 -질량분석기 ( LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 이미다클로프리드 (i midacloprid) 및대사산물이미다클로프리드우레아 (imida cloprid urea), 이미다클로프리드올레핀 (imidacloprid ol efin), 5-하이드록시이미다클로프리드 (5-hydroxy imid acloprid), 6-클로로니코티닉엑시드 (6-chloronicotinic a cid) 표준품을각각아세토니트릴에녹여 1,000 mg/l가되게한다.

163 현행개정 ( 안 ) < 신설 > 스피노사드 (Spinosad) 가. 시험법적용범위가금류고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중스피노사드를아세토니트릴로추출하고, 황산마그네슘, 아세트산나트륨을가하여원심분리한상층액을취해정제한후액체크로마토그래프 - 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 액체크로마토그래프-질량분석기 (LC-MS/MS) 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 스피노신 A 및스피노신 D 표준품을각각아세토니트릴에녹여 100 mg/l가되게하여갈색병에보관한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로희석한다.(Matrix m atched calibration) 5) 기타시약 : 잔류농약시험용또는특급마. 시험용액의조제 1) 추출 균질화한닭고기에서추출한지방 1 g( 알은 10 g) 을정밀히달아 50 ml 원심분리관에취하여지

164 현행개정 ( 안 ) < 신설 > 클로르페나피르시험법가. 시험법적용범위닭고기및알에적용한다. 나. 분석원리검체중대상성분을 1% 아세트산포함아세토니트릴로추출하고, 원심분리하여상징액을취해 PSA(primary secondary amine), C 18 및 GCB(Graphitized carbon black) 를이용하여정제한후기체크로마토그래프 - 질량분석기로분석한다. 다. 장치 1) 기체크로마토그래프-질량분석기 (GC-MS/MS) 또는기체크로마토그래프-전자포획검출기 (GC-ECD) GC-ECD는 GC-MS/MS가없는경우에한하여정성분석을위해사용이가능하나, GC-ECD로정성분석시검출이되면반드시 GC-MS/MS 를이용하여정량분석을실시하여야함 라. 시약및시액 1) 용매 : 잔류농약시험용또는특급 2) 물 : 3차증류수또는이와동등한것 3) 표준원액 : 표준품을아세톤에녹여 1,000 mg/l가되게한다. 4) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로혼합희석한다 ( 무처리시료추출물 90% 이상

165 현행개정 ( 안 ) < 신설 > 카탑 (Cartap), 티오사이클람 (Thiocyclam) 1) 시험법적용범위가금류고기및알에적용한다. 2) 분석원리검체중카탑, 티오사이클람을 2 % 시스테인염산용액, 3% 염화니켈용액및암모니아수를사용하여네레이스톡신 (nereistoxin) 으로전환시켜헥산및아세토니트릴로추출한후액체크로마토그래프 -질량분석기로분석한다. 3) 장치가 ) 액체크로마토그래프 - 질량분석기 (LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 잔류농약시험용또는특급나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 옥살산수소네레이스톡신 (nereistoxin hydrogen o xalate) 표준품을아세토니트릴에녹여네레이스톡신 (nereis toxin) 으로써 100 mg/l 가되게한다. 라 ) 표준용액 : 표준원액을무처리시료추출물을이용하여적당한농도로희석한다.(Matrix matched calibration) 마 ) 2% 시스테인 (cysteine) 용액 : 무수염산시스테인 (L-cysteine- HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산용액 950 ml에녹인

166 현행개정 ( 안 ) 8. 식품중잔류동물용의약품시험법 8.1 ( 생략 ) 8.2. 정성시험법 ( 생략 ) 물리 화학적시험법 축산물중동물용의약품동시다성분시험법 축산물중항균제동시다성분시험법 1) 시험법적용범위축산물 ( 벌꿀은제외 ) 등에적용한다. 2) 3) ( 생략 ) 4) 시약가 ) 나 ) ( 생략 ) 다 ) 표준원액 : 각동물용의약품표준품을 100 ml 용량플라스크에정밀히달아표 1의용매 ( 메탄올, 50% 메탄올, 물, 에틸아세테이트, DMSO) 에녹여 100 mg/l 로조제하여표준원액으로한다. 조제한표준원액은냉동보관한다. 8. 식품중잔류동물용의약품시험법 8.1 ( 현행과같음 ) 8.2. 정성시험법 ( 현행과같음 ) 물리 화학적시험법 축산물중동물용의약품동시다성분시험법 축산물중항균제동시다성분시험법 1) 시험법적용범위축산물등에적용한다. 2) 3) ( 현행과같음 ) 4) 시약가 ) 나 ) ( 현행과같음 ) 다 ) 에틸아세테이트, 라 ) 마 ) ( 생략 ) 바 ) 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml을넣고아세토니트릴로표시선까지채운다. 사 ) 아 ) ( 생략 ) 표 1. 표준원액조제용매 아세토니트릴, DMSO) 조제하여 라 ) 마 ) ( 현행과같음 ) 바 ) 0.1% 개미산 (formic acid)

167 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) -167-

168 현행개정 ( 안 ) 수산물중동물용의약품동시다성분시험법 1) ( 생략 ) 2) 분석원리균질화한검체에개미산암모늄 (am monium formate) 용액과 80% 아세토니트릴을넣어분석대상물질을추출하고, C 18 분말을분산시켜헥산으로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) ( 생략 ) 4) 시약및시액가 ) 나 ) ( 생략 ) 다 ) 표준원액 : 각동물용의약품표준품을정밀히달아용매 ( 메탄올, 물또는 50% 메탄올 ) 에녹여 50~100 mg/l로조제하여표준원액으로한다. 주 1) 참조 수산물중동물용의약품동시다성분시험법 1) ( 현행과같음 ) 2) 분석원리균질화한검체에 0.1 M EDTA in 50 mm 아세트산암모늄완충용액 (ph 4. 0) 으로산처리후, 80% 아세토니트릴로추출하고 C 18, PSA (Primary Sec ondary Amine) 를이용하여정제한후액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다. 3) ( 현행과같음 ) 4) 시약및시액가 ) 나 ) ( 현행과같음 ) 다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에각표준품을정밀히달아메탄올또는 50% 메탄올에녹여 100 mg/l로조제하여표준원액으로한다. 조제한표준원액은냉동보관한다. 주1) 라 ) ( 생략 ) < 신설 > < 신설 > 참조라 ) ( 현행과같음 ) 마 ) 0.1 M Na 2 -EDTA가함유된 5 0 mm 아세트산암모늄완충용액 : 1 L 용량플라스크에아세트산암모늄 3.85 g을넣고물 0.9 L로녹인후초산으로 ph 4.0을맞춘다. 여기에 E DTA-나트륨 (Na 2 -EDTA dihy drate) 37.1 g을넣고용해시킨후물로표시선까지채운 다. 바 ) 0.1% 개미산수용액 : 1 L 용량플라스크에개미산 1 ml를

169 현행개정 ( 안 ) 8.3 정량시험법 ( 생략 ) 노보비오신 (Novobiocin) 1) 시험법적용범위축산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중노보비오신 (novobiocin) 을메탄올로추출하고헥산 / 메탄올분배로지방을제거한후실리카로정제하여액체크로마토그래프로분석한다. 3) 장치액체크로마토그래프 / 자외선흡광검출기 (UV photometric detector) 4) 시약및시액가 ) 나 ) ( 생략 ) 다 ) 표준원액 : 노보비오신 (novobi ocin) 표준품을정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/l가되게한다. 라 ) 표준용액 : 표준원액을아세토니트릴 : 물 : 포름산혼합액 (6 0 : 40 : 0.1, v/v/v) 으로적당한농도로희석한다. 8.3 정량시험법 ( 현행과같음 ) 노보비오신 (Novobiocin), 티아물린 (Tiamulin) 1) 시험법적용범위축 수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체를아세토니트릴로추출하여아세토니트릴포화헥산 ( 알은실리카카트리지 ) 으로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 ( LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 나 ) ( 현행과같음 ) 다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에표준품을각각정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/ L가되게한다. 조제된표준원액은냉동보관한다. 라 ) 혼합표준용액 : 100 ml 용량플라스크에각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 ml를넣고물 -169-

170 현행개정 ( 안 ) 마 ) 실리카카트리지 (1 g, 6 cc) 또는이와동등한것바 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제검체 5 g( 유 ( 乳 ) 의경우에는 5 m L) 을정밀히달아균질기용기에넣고, 무수황산나트륨 30 g과메탄올 30 ml를넣은후 3분간균질화한다. 균질화한시료를 50 ml 원심분리관에옮기고 8,000 G, 4 에서 10분간원심분리한다. 상등액 15 ml를정확히취하여 40 이하수욕상에서건고한다. 잔류물에메탄올포화헥산 10 ml 로표시선까지채운다. 바 ) 20 mm 개미산암모늄 (ammo nium formate) 함유 0.1% 개미산용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 1 m L 와 1.26 g의개미산암모늄을넣고녹인후물로표시선까지채운다. 사 ) 0.2% 개미산함유메탄올용액 : 1,000 ml 용량플라스크에개미산 2 ml를넣고메탄올로표시선까지채운다. 아 ) 실리카카트리지 : 실리카 (50 0 mg) 고정상이충전되어있는일회용카트리지 (3 ml) 또는이와동등한것자 ) 기타시약 : 특급또는이와동등한것 5) 시험용액의조제가 ) 알을제외한식품균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 아세토니트릴용액 10 ml를가하여 15분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을취하여 50 m L 원심분리관에옮기고아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 10분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원 -170-

171 현행개정 ( 안 ) 를가하여녹이고 100 ml 분액여두로옮긴다. 분액여두에헥산포화메탄올 10 ml을가하고 1분간진탕한후메탄올층을여분의농축플라스크로옮기고분액여두에다시헥산포화메탄올 10 ml을가하여위의과정을반복한다. 메탄올층을앞서의용액과합하여 40 수욕상에서감압농축한후아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 9 0, v/v) 10 ml에녹인다. 미리아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, v/v) 5 ml로활성화시킨실리카카트리지에추출액을흡착시키고추가의아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, v/v) 5 m L를유출시키고, 고정상상단이노출되기직전에메탄올 : 아세톤혼합액 (10 : 90, v/v) 10 ml를용출시켜시험관에받는다. 이를 40 이하의수욕상에서질소농축하고잔류물에아세토니트릴 : 물 : 포름산혼합액 (60 : 40 : 0. 1, v/v/v) 2 ml에녹여시험용액으로한다. 심분리한다. 하층액을취하여 40 에서질소농축하여건고한후 0.1% 개미산용액 2 ml과메탄올 2 ml을가하여재분산하고 10분간초음파처리한후 4 에서 4,700 G 로 10분간원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 (PV DF membrane filter) 로여과하여시험용액으로한다. 나 ) 알균질화한검체 2 g을 50 ml 원심분리관에취한다. 아세토니트릴용액 10 ml를가하여 15분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 상층액을취하여 50 m L 원심분리관에옮기고아세토니트릴포화헥산 10 ml을가한후 10분간진탕하고상온에서 4,700 G로 10분간원심분리한다. 하층액을취하여 40 에서질소농축한후아세톤 : 디클로르메탄혼압액 ( 10 : 90, v/v) 10 ml에녹인다. 미리아세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, v/v) 5 ml 로활성화시킨실리카카트리지에추출액을흡착시킨다. 아 -171-

172 현행개정 ( 안 ) 세톤 : 디클로로메탄혼합액 (10 : 90, v/v) 5 ml로씻어준후고정상상단이노출되기직전에메탄올 : 아세톤혼합액 (10 : 90, v/v) 10 ml로용출시켜시험관에받는다. 이를 40 이하에서질소농축하여건고시킨후 0.1% 개미산용액 2 m L와메탄올 2 ml를가한다. 10분간초음파처리한후 4 에서 10분간원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지 ( 6) 시험조작가 ) 측정조건 (1) 액체크로마토그래프조건 ( 가 ) 칼럼 : C 18 (4.6 mm 250 m m, 5 μm) 또는이와동등한것 ( 나 ) 칼럼온도 : 40 ( 다 ) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v) ( 라 ) 유속 : 1.0 ml/ 분 ( 마 ) 시료주입량 : 20 μl PVDF membrane filter) 로여과하여시험용액으로한다. 6) 시험조작가 ) 액체크로마토그래프의측정조건 (1) 칼럼 : C 18 (Xselect, 2.1 mm x 150 mm, 3.5 μm) 또는이와동등한것 (2) 이동상 ( 가 ) 이동상 A: 0.2% 개미산함유메탄올용액 ( 나 ) 이동상 B: 20 mm 개미산암모늄함유 0.1% 개미산용액 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%)

173 현행개정 ( 안 ) ( 바 ) 검출기파장 : UV 340 nm 나 ) 검량선의작성 표준용액을농도별로일정량취하 여액체크로마토그래프에주입한다. 얻어진크로마토그램상의각피크 높이또는면적을구하여검량선 을작성한다. 다 ) 정량한계 : 축산물 0.02 mg/k g, 유 0.02 mg/l 그림 1. 노보비오신 (novobiocin)(10. 5 분 ) 의크로마토그램 (3) 유속 : 0.25 ml/ 분 (4) 칼럼온도 : 40 (5) 주입량 : 5 μl 나 ) 질량분석기조건 (1) 이온화방법 : ESI(Positive) (2) Capillary temperature: 350 (3) Capillary voltage: 3.5 kv (4) Collision gas: Ar( 아르곤 ) (5) 분석대상및개별조건 (MR 머무름물질명시간 (Compound) ( 분 ) M 조건 ) 평균분자량 (MW) 관측질량 (Exact mass) 선구이온 (Precurso r ion, m/z) 생성이온 (Product ion, m/z) 충돌에너지 (Collision Energy, ev) 노보비오신 (Novobiocin ) 티아물린 (Tiamulin) 밑줄표시되어있는것은정량이온이며그외이온들은정성이온임 각생성이온 (Product ion) 에대한질량분석기의기기조건은사 -173-

174 현행개정 ( 안 ) 7) 정성시험위의조건에서얻어진크로마토그램상의피크는어느측정조건에서도표준피크의머무름시간과일치하여야한다. 용기기의최적값으로변경하여사용할수있으며, 제시된이외의생성이온도적용이가능함 7) 정성시험가 ) 정성위의조건으로얻어진크로마토그램상의피크는표준용액피크의머무름시간과비교하여일치하여야한다. 또한표준용액과시험용액의선구이온 (precurso r ion) 및생성이온 (product ion ) 이일치하여야하고, 표준용액과시험용액의생성이온간반응세기의비율 (response ratio) 을비교하여그비율은주 1) 과일치하여야한다. 주1. 생성이온간반응세기의비율허용범위 이온간반응세기의비율 (%) 허용범위 > 50 % 20 % > 20 %, 50 % 25 % > 10 %, 20 % 30 % 나 ) 표준품크로마토그램 -174-

175 현행개정 ( 안 ) 8) 정량시험정성시험과똑같은조건에서얻어진시험결과에의해피크높이법또는피크면적법에따라정량한다. 9) 확인시험액체크로마토그래프 / 질량분석기 (L C-MS) 로분석하였을때시험용액중표준물질의 m/z 값은표준용액중표준물질의 m/z 값과일치하여야한다. 가 ) 액체크로마토그래프 / 질량분석기의측정조건 (1) 칼럼 : C 18 (2.0 mm 100 m m, 3 μm) 또는이와동등한것 (2) 칼럼온도 : 40 (3) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산혼합액 (50 : 50 : 0.1, v/v/v) (4) 유속 : 0.2 ml/ 분 (5) Ionization : ESI(positive) (6) Capillary temperature : 350 노보비오신 (5.76분) 티아물린 (5.20분) 그림 1. 노보비오신, 티아물린표준품의크로마토그램 ( 각 0.01 mg/l) 8) 정량시험가 ) 정량정성시험과똑같은조건에서음성검체 (blank sample) 에혼합표준용액을일정농도로제조한후얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구하여검량선을작성하고, 시험용액의크로마토그램으로부터정량이온 (quantitative ion) 의각피크높이또는피크면적에따라각각정량한다. 나 ) 정량한계노보비오신 : mg/kg 티아물린 : mg/kg (7) Cone voltage : 50 V -175-

176 현행개정 ( 안 ) 표 1. 액체크로마토그래프 질량분석기분석을위한이온 머무름시간 ( 분 ) 분자량 Ion monitored (m/z)

177 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) 세프티오퍼 (Ceftiofur) ( 생략 ) < 신설 > ( 현행과같음 ) 세프티오퍼 (Ceftiofur) ( 현행과같음 ) 제3법 1) 시험법적용범위수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중세프티오퍼와세프티오퍼의체내대사물질인데스후로릴세프티오퍼 (desfuroylceftiofur) 를디티오에리쓰리톨 (DTE, dithioerythritol) 용액으로추출한후요오드아세트아미드 (iodoacetamide) 로유도체화하여최종형성된데스후로일세프티오퍼아세트아미드 (desfuroylceftiofur acetamide) 를 HLB 카트리지로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 (LC -MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에세프티오퍼표준품을정밀히달아메탄올에녹여 100 mg /L가되게한다. 라 ) 표준용액 : 표준원액을 M 인산완충용액 (ph 7.0) 으로희석하여적당한농도가되게한다.

178 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 아미트라즈 (Amitraz), 코마포 시미아졸 (cymiazole), 아스 (Coumaphos) 미트라즈 (amitraz), 코마포스 (c oumaphos), 플루발리네이트 (fluvalinate) 1) 시험법적용범위 1) 시험법적용범위벌꿀에적용한다. 벌꿀등에적용한다. 2) 분석원리 2) 분석원리검체중아미트라즈 (amitraz), 아검체중분석대상물질을물과미트라즈 (amitraz) 의대사물질인아세토니트릴로추출한후원심 2,4-디메틸아닐린 (2,4-dimethyla 분리하여상층액을취해 PSA(pr niline), 및코마포스 (coumaphos) imary secondary amine), C 18 를알칼리조건에서균질화하고및황산나트륨을이용하여정제한아세톤 : 헥산 (1:49) 혼합용액으로후액체크로마토그래프 -질량분석추출하고액-액분배법으로전처기로분석한다. 리하여액체크로마토그래프 /PDA 검출기로분석한다. 아미트라즈 (a mitraz) 는대사물질인 2,4-디메틸아닐린 (2,4-dimethylaniline) 과합으로정량한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 /PDA검출기 3) 측정기기액체크로마토그래프 - 질량분석기 4) 시약및시액 (LC-MS/MS) 가 ) 용매 : 고속액체크로마토그래 4) 시약및시액프용또는이와동등한것가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와나 ) 표준원액 : 아미트라즈 (amitra 동등한것 z), 2,4-디메틸아닐린 (2,4-dime 다 ) 표준원액 : 각표준품을정밀 thylaniline), 및코마포스 (coum 히달아메탄올에녹여 1,00 aphos) 표준품을각각정밀히 달아아세토니트릴에녹여 100 mg/l로한다. 조제된표준원 mg/l 가되게한다.

179 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 엔로플록사신 (Enrofloxacin), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin ) ( 생략 ) 독시싸이클린 (Doxycycline), 미노싸이클린 (Minocycline), 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracyclin e), 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycli ne), 테트라싸이클린 (Tetracyclin e) 제1법 1) 8) ( 생략 ) 제2법 ( 생략 ) 플루발리네이트 (Fluvalinate) ( 생략 ) < 삭제 > ( 현행과같음 ) 독시싸이클린 (Doxycycline), 미노싸이클린 (Minocycline), 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracyclin e), 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycli ne), 테트라싸이클린 (Tetracyclin e) < 삭제 > 1) 8) ( 현행과같음 ) < 삭제 > ( 현행과같음 ) < 삭제 > ( 현행과같음 ) -179-

180 현행개정 ( 안 ) 프라지콴텔 (Praziquantel), 티아물린 (Tiamulin) 모란텔 (Morantel), 에마멕틴벤조에이트 (Emamectin benzoate), 프라지콴텔 (Praz iquantel), 피란텔 (Pyrantel ) 1) 시험법적용범위수산물에적용한다. 2) 분석원리검체중프라지콴텔과티아물린을 2% 수산화암모늄으로추출하고 HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance) 카트리지로정제하여액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 장치액체크로마토그래프 - 질량분석기 ( LC/MS) 를사용한다. 4) 시약및시액가 ) ( 생략 ) 나 ) 물 : 3차증류수다 ) 표준원액 : 프라지콴텔과티아물린표준품을각각정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/l로한다. 라 ) 표준용액 : 표준원액을이동상으로희석하여프라지콴텔은 , 0.01, 0.02, 0.03 및 0.04 mg/l, 티아물린은 0.025, 0.0 5, 0.1, 0.15, 0.2 mg/l 가되게 ) 시험법적용범위축 수산물등에적용한다. 2) 분석원리검체중분석대상물질을아세토니트릴로추출하고아세토니트릴포화헥산으로정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 측정기기액체크로마토그래프 / 질량분석기 ( LC-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) ( 현행과같음 ) 나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 100 ml 용량플라스크에표준품 ( 모란텔, 에마멕틴 B1a, 프라지콴텔, 피란텔 ) 을각각정밀히달아메탄올에녹여 100 mg/l가되게한다. 조제된표준원액은냉동보관한다. 라 ) 혼합표준용액 : 100 ml 용량플라스크에각표준원액을메탄올로희석하여적당한농도가되게한다. 마 ) 0.1% 개미산 (formic acid) 용

181 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 시미아졸 (Cymiazole) < 삭제 > ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 푸마길린 (Fumagillin) 1) 4) ( 생략 ) 푸마길린 (Fumagillin) 1) 4) ( 생략 ) 5) 시험용액의조제가 ) 꿀균질화된검체 5 g을 50 ml 원심분리관에취하고증류수를 10 ml 가하여 10분간진탕한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 미리메탄올 5 ml과물 5 ml로 Strata-X 카트리지를활성화시킨후추출액을흡착시키고 40% 메탄올수용액 5 ml 로 2회세척한다. 새로운원심분리관에 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 6 ml로용출한후, 40 이하의수욕중에서질소농축한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mm 개미산암모늄을함유한메탄올로재분산하여 1분간진탕한후 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하고 0.2 μm 필터 (Polytetrafluoroethylene, PTFE) 로여과한것을시험용액 으로한다. 나 ) 어류 균질화된검체 5 g 을 50 ml ) 시험용액의조제가 ) 꿀

182 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) 데하이드로콜산 (Dehydrocholi c acid), 안트라닐산 (Anthranil ic acid) 1) 4) ( 생략 ) 5) 시험용액의조제균질화된검체 5 g을 50 ml 원심분리관에취하고 10 mm 개미산암모늄이함유된아세토니트릴 20 ml을가하여 15분간진탕혼합한후, 4, 2,600 G에서 15 분간원심분리한다. 상층액을 50 ml 원심분리관에취하고 20 ml 헥산을넣어 10분간진탕혼합한후 4, 2,600 G에서 15분간원심분리한다. 상층액을 15 m L 원심분리관에취하고 40 에서 0.5 ml이될때까지질소농축한다. 0.1% 개미산을함유한아세토니트릴 1.5 ml을가한뒤재분산하고 4, 15,000 G에서 10분간원심분리하여상층액을 0.45 μm 필터 (Polytetrafluoroethyle ne, PTFE) 로여과시킨것을시험용액으로한다. 6) 8) ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 데하이드로콜산 (Dehydrocholi c acid), 안트라닐산 (Anthranil ic acid) 1) 4) ( 생략 ) 5) 시험용액의조제 하층액을

183 현행개정 ( 안 ) ) 8) ( 현행과같음 ) -183-

184 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) < 신설 > ( 현행과같음 ) 독시싸이클린 (Doxycycline), 린코마이신 (Lincomycin), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 에리스로마이신 (Erythromycin), 엔로플록사신 (enrofloxaci n), 옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycli ne), 클로르테트라싸이클린 (Chlortetracyc line), 타일로신 (Tylosin), 테트라사싸이클린 (Tetracycline), 트리메토프림 (Trimethop rim) ) 시험법적용범위벌꿀, 로얄젤리등에적용한다. 2) 분석원리시료중의분석대상물질을 EDTA -NA 2 와구연산이함유된물로추출하고 HLB 카트리지를이용하여정제한후액체크로마토그래프 / 질량분석기로분석한다. 3) 장치액체크로마토그래프 / 질량분석기 (L C-MS/MS) 4) 시약및시액가 ) 용매 : 액체크로마토그래프용또는이와동등한것나 ) 물 : 3차증류수또는이와동등한것다 ) 표준원액 : 각표준품 ( 타일로신의경우타일로신 A 표준품을사용한다 ) 을용량플라스크에정밀히달아메탄올 ( 엔로플록사신, 시프로플록사신은 0.2% 개미산을함유한메탄올 ) 에녹여 1 00 mg/l이되게한다.

185 현행개정 ( 안 ) ( 생략 ) 9. ~ 12. ( 생략 ) [ 별표 1] [ 별표 2] ( 생략 ) ( 현행과같음 ) 9. ~ 12. ( 현행과같음 ) [ 별표 1] [ 별표 2] ( 현행과같음 ) -185-

186 현행개정 ( 안 ) [ 별표 3] 농산물의농약잔류허용기준 [ 별표 3] 농산물의농약잔류허용기준 (1) (13) ( 생략 ) (1) (13) ( 현행과같음 ) (14) 디메토에이트 (Dimethoate) ( 생략 ) 양파 0.2 T < 신설 > (14) 디메토에이트 (Dimethoate) ( 현행과같음 ) 양파 0.2 파 0.05 (15) (60) ( 생략 ) (15) (60) ( 현행과같음 ) (61) 비펜트린 (Bifenthrin) ( 생략 ) < 신설 > (61) 비펜트린 (Bifenthrin) ( 현행과같음 ) 용과 0.1 (62) (113) ( 생략 ) (62) (113) ( 현행과같음 ) (114) 카보퓨란 (Carbofuran) ( 생 략 ) < 신 설 > < 신 설 > (114) 카보퓨란 (Carbofuran) ( 현행과같음 ) 고구마 0.02 망고스틴 2.0 (115) (191) ( 생략 ) (192) 프로피코나졸 (Propiconazole) ( 생략 ) 복숭아 1.0 T (193) (226) ( 생략 ) (115) (191) ( 현행과같음 ) (192) 프로피코나졸 (Propiconazole) ( 현행과같음 ) 복숭아 1.0 (193) (226) ( 현행과같음 ) (227) 아세타미프리드 (Acetamiprid) ( 생략 ) (227) 아세타미프리드 (Acetamiprid) ( 현행과같음 )

187 현행개정 ( 안 ) [ 별표 4] 축산물의농약잔류허용기준 [ 별표 5] 축 수산물의잔류물질잔류허용기준 (1) (12) ( 생 략 ) (13) 메타미도포스 (Methamidophos) ( 생 략 ) < 신 설 > < 신 설 > < 신 설 > (14) (16) ( 생 략 ) (17) 모노크로토포스 (Monocrotophos ) ( 생 략 ) < 신 설 > (18) (20) ( 생 략 ) (21) 사이퍼메트린 (Cypermethrin) ( 생 략 ) 가금류고기 0.05 알 0.05 (22) (34) ( 생 략 ) (35) 아이소펜포스 (Isofenphos) ( 생 략 ) < 신 설 > (1) (12) ( 현행과같음 ) (13) 메타미도포스 (Methamidophos) ( 현행과같음 ) 가금류고기 0.01 가금류부산물 0.01 알 0.01 (14) (16) ( 현행과같음 ) (17) 모노크로토포스 (Monocrotophos ) ( 현행과같음 ) 알 0.01 (18) (20) ( 현행과같음 ) (21) 사이퍼메트린 (Cypermethrin) ( 현행과같음 ) < 삭제 > < 삭제 > (22) (34) ( 현행과같음 ) (35) 아이소펜포스 (Isofenphos) ( 현행과같음 ) 알 0.01 (36) (49) ( 생략 ) (36) (49) ( 현행과같음 )

188 현행개정 ( 안 ) [ 별표 5] 식품중동물용의약품의잔 류허용기준 ( 생략 ) [ 별표 4] 식품중동물용의약품의잔 류허용기준 ( 현행과같음 ) [ 별표 6] ( 생략 ) [ 별표 6] ( 현행과같음 ) -188-