제 개정이력 화장품중배합한도성분분석법가이드라인 제 개정번호승인일자주요내용 B B B 화장품중배합한도성분분석법가이드라인제정화장품중배합한도성

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1 화장품중배합한도성분분석법 가이드라인 의료제품연구부화장품연구팀

2 제 개정이력 화장품중배합한도성분분석법가이드라인 제 개정번호승인일자주요내용 B B B 화장품중배합한도성분분석법가이드라인제정화장품중배합한도성분분석법가이드라인개정화장품중배합한도성분분석법가이드라인개정화장품중배합한도성분분석법가이드라인개정

3 이가이드라인은화장품중배합한도성분분석법에대한식품의약품안전처의 입장을기술한것으로, 대외적으로법적효력을가지는것이아님. 가이드라인이란대외적으로특정한사안등에대하여식품의약품안전처의입장을 기술한것임 ( 식품의약품안전처지침등의관리에관한규정 ( 식약처예규 )) 본가이드라인에대하여의견이나문의사항이있는경우아래로문의하시기 바랍니다. 식품의약품안전평가원 의료제품연구부화장품연구팀 T F

4 화장품중배합한도성분분석법가이드라인 개정 1. 개정이유식품의약품안전평가원은화장품법제5조및제15조에따라부정 불량화장품의제조 판매방지및유통화장품의품질향상을위하여화장품중의살균 보존제, 자외선차단제및기타성분의분석법에대한연구사업을지속적으로수행하여왔으며, 이연구결과를토대로 화장품중배합한도성분분석법가이드라인 을개정하여국내유통화장품의품질및안전성확보에기여하고자함 2. 주요내용가. 살균 보존제성분인이미다졸리디닐우레아, 디아졸리디닐우레아및파라벤류의동시분석법삭제나. 살균 보존제성분인세트리모늄브로마이드및클로라이드분석법추가다. 살균 보존제성분인트리클로산분석법추가라. 기타성분인트리에탄올아민분석법추가

5 I. 서론 1. 화장품법제 5 조및제 15 조에따라화장품을제조 판매하고자하는 자는제품이변질 변패되거나오염되는등부정 불량화장품을 제조 판매하여서는안된다. 2. 화장품이미생물에의해오염 부패되는것을방지하는살균 보존제성분, 자외선으로부터피부를보호하는자외선차단제성분및 ph 조정등의목적으로사용되는기타성분은화장품에과도하게사용할경우안전성문제를야기할수있어그종류와배합한도가지정되어있다. 3. 화장품중배합한도성분에대한분석법을제시함으로써화장품 제조 수입 판매업자및관련검사기관의화장품품질관리에도움을 주고국내유통화장품의안전관리에만전을기하고자한다. 4. 이가이드라인의분석조건은분리에방해를주는성분을함유하고 있는제품에서는분석조건을재조정하여검증할필요가있다

6 II. 살균 보존제 1. 소듐라우로일사코시네이트 가. 성분개요 1) 소듐라우로일사코시네이트 (Sodium Lauroyl Sarcosinate) - 분자식 : C 15 H 29 NO 3 Na - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 사용후세척되는제품에만허용 ( 기타제품에는사용금지 ) 나. 시험방법시료약 5 g을정밀하게달아물을넣어 50 ml로한다음 5.0 ml를정확하게취하여내부표준액 5.0 ml를넣고물을넣어 100 ml로한액을검액으로하다. 따로라우로일사르코신나트륨표준품약 1.0 g을정밀하게달아물을넣어녹여 100 ml로하여표준원액으로한다. 표준원액 2.0 ml를정확하게취하여내부표준액 5.0 ml를넣고물을넣어 100 ml로하여표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 히드로코티손약 100 mg을정밀하게달아메탄올을소량넣어녹인다음물을넣어 100 ml로한다

7 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼이동상유속 자외부흡광광도계 (225 nm) Waters, μ-bondapak phenyl (10 μm, mm) 0.5mM Ammonium acetate in 40% MeOH 1.0 ml/min 온도 65 주입량 10 μl 다. 크로마토그램 라. 참고문헌 1. 화장품의특수성분에관한연구 (VII) - 샴푸중라우로일사르코신나트륨의분석법, 국립보건 원보제 31 권제 2 호, 424~430(1994) - 3 -

8 2. 클로페네신및클림바졸의동시분석 가. 성분개요 1) 클로페네신 (Chlorphenesin) - 분자식 : C 9 H 11 ClO 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.3% 2) 클림바졸 (Climbazole) - IUPAC 명 : 1-(4-클로로페녹시 )-1-( 이미다졸-1-일 )-3,3-디메칠부탄 -2-온 (1-(4-Chlorophenoxy)-1-(imidazol-1-yl)-3,3-dimethylbutan-2-one) - 분자식 : C 15 H 17 ClN 2 O 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.5% 나. 시험방법 시료약 0.5 ~ 1.0 g 을정밀하게달아내부표준액 1 ml 를넣고이동상을넣어초음파진탕 - 4 -

9 하여검체를충분히분산시킨다음이동상을넣어 50 ml로한액을여과하여검액으로한다. 따로클로페네신및클림바졸표준품을약 50 mg을각각정밀하게달아이동상을넣어녹여 100 ml로한액을표준원액으로한다. 표준원액 1.0 ml, 2.0 ml, 4.0 ml, 6.0 ml, 8.0 ml, 10.0 ml를각각정확하게취하여내부표준액 1.0 ml씩을넣고이동상을넣어 50 ml로하여각각의표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 아스피린약 100 mg을정밀하게달아메탄올을넣어 50 ml로한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 (275 nm) Waters, Xterra C18 (3.5 μm, mm) 이동상 MeOH:PIC B6(Waters, WATO85140) = 65:35 유속 주입량 1.0 ml/min 20 μl 다. 크로마토그램 라. 참고문헌 1. 화장품의특수성분의분석법개발 (Ⅱ) - 화장품중살균 보존제의분석법개발, 식품의약 품안전청연구보고서, 제 7 권, 175~180(2003) - 5 -

10 3. 벤질알콜, 페녹시에탄올, 소르빅애씨드, 벤조익애씨드, 클로페네신, 데하이 드로아세틱애씨드, 살리실릭애씨드, 메칠파라벤, 에칠파라벤, 프로필파라 벤, 부틸파라벤, 이소프로필파라벤, 이소부틸파라벤의동시분석 가. 성분개요 1) 벤질알콜 (Benzyl alcohol) - 분자식 : C 7 H 8 O - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 1%( 두발용제품은제외 ) 2) 페녹시에탄올 (Phenoxy ethanol) - 분자식 : C 8 H 10 O 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 1% 3) 소르빅애씨드 (Sorbic acid) - 분자식 : C 6 H 8 O 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.6% - 6 -

11 4) 벤조익애씨드 (Benzoic acid) - 분자식 : C 7 H 6 O 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.5% 5) 데하이드로아세틱애씨드 (Dehydroacetic Acid) - 분자식 : C 8 H 8 O 4 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.6% 6) 살리실릭애씨드 (Salicylic Acid) - 분자식 : C 7 H 6 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.5% 7) 메칠파라벤 (Methyl paraben) - 7 -

12 - 원료명 : p- 하이드록시벤조익애씨드, 그염류및에스텔류 ( 메칠 ) - 분자식 : C 8 H 8 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 8) 에칠파라벤 (Ethyl paraben) - 원료명 : p-하이드록시벤조익애씨드, 그염류및에스텔류 ( 에칠 ) - 분자식 : C 9 H 10 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 9) 프로필파라벤 (Propyl paraben) - 원료명 : p-하이드록시벤조익애씨드, 그염류및에스텔류 ( 프로필 ) - 분자식 : C 10 H 12 O 3 - 분자량 :

13 - CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 10) 부틸파라벤 (Butyl paraben) - 원료명 : p-하이드록시벤조익애씨드, 그염류및에스텔류 ( 부틸 ) - 분자식 : C 11 H 14 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 11) 이소프로필파라벤 (Isopropyl paraben) - 원료명 : p-하이드록시벤조익애씨드, 그염류및에스텔류 ( 이소프로필 ) - 분자식 : C 10 H 12 O 3 - 분자량 :

14 - CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 12) 이소부틸파라벤 (Isobutyl paraben) - 원료명 : p-하이드록시벤조익애씨드, 그에스텔류 ( 이소부틸 ) - 분자식 : C 11 H 14 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 파라옥시안식향산으로서 0.4% ( 파라벤류혼합사용시파라옥시안식향산으로서 0.8%) 나. 시험방법시료약 2.0 g을정밀하게달아 1% 인산함유 50% 아세토니트릴을넣어초음파진탕하여검체를충분히분산시킨다음내부표준액 1 ml 및 1% 인산함유 50% 아세토니트릴을넣어 50 ml로한액을여과하여검액으로한다. 따로벤질알콜, 페녹시에탄올, 메칠파라벤, 에칠파라벤, 이소프로필파라벤, 프로필파라벤, 이소부틸파라벤, 부틸파라벤표준품약 100 mg, 안식향산, 디히드로초산, 소르빈산, 클로페네신, 살리실산표준품약 50 mg을각각정밀하게달아 1% 인산함유 50% 아세토니트릴을넣어녹여 25 ml로한액을표준원액으로한다. 표준원액 0.63 ml, 1.25 ml, 2.5 ml, 5.0 ml, 10.0 ml를각각정확하게취하여내부표준액

15 1.0 ml 씩을넣고 1% 인산함유 50% 아세토니트릴을넣어 100 ml 로하여각각의표준액으 로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반 시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 아세트아미노펜약 100 mg을정밀하게달아 1% 인산함유 50% 아세토니트릴을넣어녹여 50 ml로한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 이동상 자외부흡광광도계 (220 nm) Shiseido, Capcellpak C18 UG 120 (5 μm, mm) A : 1% 인산함유 20% ACN B : 1% 인산함유 70% ACN 시간 A(%) B(%) 유속 주입량 1.0 ml/min 20 μl

16 다. 크로마토그램 아세트아미노펜 (3.86), 벤질알콜 (8.06), 페녹시에탄올 (10.02), 소르빈산 (10.66), 안식향산 (11.02), 메칠파라벤 (11.69), 클로페네신 (12.30), 디히드로초산 (12.76), 살리실산 (13.49), 에칠파라벤 (16.01), 이소프로필파라벤 (20.48), 프로필파라벤 (21.29), 이소부틸파라벤 (26.28), 부틸파라벤 (26.78) 라. 참고문헌 1. 유통크림류화장품중의살균보존제함량모니터링화장품안전성관리사업연구보고서, Vol. 2(2002)

17 4. 디엠디엠하이단토인 가. 성분개요 1) 디엠디엠하이단토인 (DMDM Hydantoin, 1,3-Dimethylol-5,5-Dimethyl Hydantoin) - 분자식 : C 7 H 12 N 2 O 4 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.6% 나. 시험방법시료약 0.5 g을정밀하게달아내부표준액 30 ml를넣어초음파진탕하여검체를충분히분산시킨후내부표준액을넣어정확하게 50 ml로한액을여과하여검액으로한다. 따로디엠디엠히단토인표준품약 50 mg을정밀하게달아내부표준액을넣어녹여 50mL로한액을표준원액 (1000 μg /ml) 으로한다. 표준원액 1.0 ml, 2.0 ml, 3.0 ml, 4.0 ml 및 5.0 ml를정확하게취하여내부표준액을넣어 50 ml로한액을검량선용표준액으로하였다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 카페인표준품약 20 mg을정밀하게달아메탄올을넣어녹여정확하게 1000 ml로한다

18 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 자외부흡광광도계 (214 nm) 칼럼 Waters, Xterra C 18 (5μm, mm) 이동상 MeOH : Water (10:90) 유속 주입량 1.0 ml/min 10 μl 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of DMDM hydantoin and internal standard(caffeine) 라. 참고문헌 1. 화장품에사용되는살균보존제중히단토인류및요도프로피닐부틸카바메이트기기분석 방법연구및시판화장품의사용현황모니터링식품의약품안전청연구보고서, 제 11 권 (2007)

19 5. 엠디엠하이단토인 가. 성분개요 1) 엠디엠하이단토인 (MDM Hydantoin, 1-(Hydroxymethyl)-5,5-Dimethyl Hydantoin) - 분자식 : C 6 H 10 N 2 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.2% 나. 시험방법시료약 0.5 g을정밀하게달아내부표준액 30 ml를넣어초음파진탕하여검체를충분히분산시킨후내부표준액을넣어정확하게 50 ml로한액을여과하여검액으로한다. 따로엠디엠히단토인표준품약 50 mg을정밀하게달아내부표준액을넣어녹여 50 ml로한액을표준원액 (1000 μg /ml) 으로한다. 표준원액 0.5 ml, 1.0 ml, 2.0 ml, 3.0 ml 및 5.0 ml 를정확하게취하여내부표준액을넣어 50mL로한액을검량선용표준액으로하였다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 히드로퀴논표준품약 20 mg을정밀하게달아메탄올을넣어녹여정확하게 1000 ml로한다

20 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 자외부흡광광도계 (214 nm) 칼럼 Waters, Xterra C 18 (5μm, mm) 이동상 0.01% phosphoric acid : ACN : THF (95:5:1) 유속 주입량 1.0 ml/min 10 μl 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of MDM hydantoin and internal standard (Hydroquinone) 라. 참고문헌 1. 화장품에사용되는살균보존제중히단토인류및요도프로피닐부틸카바메이트기기분석 방법연구및시판화장품의사용현황모니터링, 식품의약품안전청연구보고서, 제11권 (2007)

21 6. 아이오도프로피닐부틸카바메이트 ( 아이피비씨 ) 가. 성분개요 1) 아이오도프로피닐부틸카바메이트 (Iodopropynyl Butylcarbamate) - 분자식 : C 8 H 12 INO 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : - 사용후씻어내는제품에 0.02% - 사용후씻어내지않는제품에 0.01% - 데오드란트에배합할경우에는 % ( 입술에사용하는제품, 에어로졸제품, 바디로션및바디크림에는사용금지 ) 나. 시험방법시료약 2 g을정밀하게달아내부표준액 30 ml를넣어초음파진탕하여검체를충분히분산시킨후규조토약 2 g과혼합하여냉동실에서약 6시간동안가끔씩저어주면서방치한다음여과한액을검액으로한다. 따로요도프로피닐부틸카바메이트표준품약 50 mg을정밀하게달아내부표준액을넣어녹여 50 ml로한액을표준원액 (1000 μg /ml) 으로한다. 표준원액 0.15 ml, 0.25 ml, 0.5 ml, 1.25 ml 및 2.5 ml를정확하게취하여내부표준액을넣어 50mL로한액을검량선용표준액으로하였다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 부틸히드로퀴논표준품약 50 mg을정밀하게달아메탄올을넣어녹여정확하게 1000 ml로한액 50 ml를정확하게취하여아세토니트릴을넣어정확하게 500 ml로한다

22 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 자외부흡광광도계 (220 nm) 칼럼 Shiseido, Capcell Pak C 18 (5 μm, mm) 이동상 Water : ACN (40:60) 유속 주입량 1.0 ml/min 10 μl 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of Iodopropynyl Butylcarbamate and internal standard (Butyl Hydroquinone) 라. 참고문헌 1. 화장품에사용되는살균보존제중히단토인류및요도프로피닐부틸카바메이트기기분석 방법연구및시판화장품의사용현황모니터링, 식품의약품안전청연구보고서, 제11권 (2007)

23 7. 메칠이소치아졸리논 가. 성분개요 1) 메칠이소치아졸리논 (Methylisothiazolinone) - 분자식 : C 4 H 5 NOS - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 0.01% 나. 시험방법시료약 1.0 g을정밀하게달아메탄올을넣어 2시간동안초음파를이용하여균질혼합하고메탄올을넣어 10.0 ml로한것을여과하여검액으로한다. 따로메칠이소치아졸리논표준품약 20.0 mg을정밀하게달아메탄올에녹여 500 ppm(500 μg/ml) 으로만든다음표준액일정량을취하여 1, 5, 10, 20, 70, 100 ppm 농도로한것을표준액으로한다. 검액및표준액약 10 μl씩을가지고다음조작조건으로액체크로마토그래프절대검량선법에따라시험한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 280 nm Xterra RP 18(5 μm, 4.6 x 250 mm) 이동상메탄올 0.07 mol/l 암모니아수혼합액 (25:75) 유속 주입량 0.5 ml/min 10 μl

24 다. 크로마토그램 크로마토그램 흡수스펙트럼 라. 참고문헌 1. 화장품중신규지정살균 보존제, 자외선차단성분분석법확립과소비자를위한화장품 컨텐츠개발연구, 화장품연구팀 (2009)

25 8. 메칠클로로이소치아졸리논과메칠이소치아졸리논혼합물 가. 성분개요 1) 메칠클로로이소치아졸리논 (Methylchloroisothiazolinone) - 분자식 : C 4 ClH 4 NOS - 분자량 : O H 3 C N S Cl - CAS 번호 : ) 메칠이소치아졸리논 (Methylisothiazolinone) - 분자식 : C 4 H 5 NOS - 분자량 : O H 3 C N S - CAS 번호 : ) 사용한도 % ( 메칠클로로이소치아졸리논 : 메칠이소치아졸리논 = 3 : 1 혼합물로서 ) 나. 시험방법 1) 확인시험함량시험법에따라시험할때검액과표준액의주피크유지시간은같고, 자외가시부흡광도측정법에따라시험할때자외가시부흡수스펙트럼의피크는아래그림과같다

26 메칠클로로이소치아졸리논의 자외부흡수스펙트럼 메칠이소치아졸리논의 자외부흡수스펙트럼 2) 함량시험시료약 1.0 g을정밀하게달아메탄올을적당량넣어 60분간초음파진탕하여추출하고상온에서식힌다음메탄올을넣어정확하게 10 ml로하여검액으로한다. 따로메칠클로로이소치아졸리논및메칠이소치아졸리논표준품약 10 mg을정밀하게달아메탄올을넣어정확하게 100 ml로하여표준원액 (100 mg/l) 으로한다. 표준원액 0.1 ml, 0.2 ml, 0.5 ml, 1.0 ml, 2.0 ml를정확하게취하여메탄올로정확하게 100 ml로한액을표준액으로한다. 검액및표준액 10 μl씩을가지고다음의조건으로액체크로마토그래프법 (HPLC 법 ) 에따라시험한다. 검량선의 y축에검액의피크면적을대입하여검액의농도를구한다. 검량선에서구한검액의농도에검액의최종부피를곱하고검체채취량으로나누어메칠클로로이소치아졸리논및메칠이소치아졸리논의함량을산출한다. 따로시료를제외하고검액과동일하게조작하여공시험액으로한다. 메칠클로로이소치아졸리논 (CMIT) 함량 (%) = (C-B) x V S x C : 검량선에서계산된검액중메칠클로로이소치아졸리논의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml) S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수

27 메칠이소치아졸리논 (MIT) 함량 (%) = (C-B) x V S x C : 검량선에서계산된검액중메칠이소치아졸리논의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml) S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 칼럼온도 자외부흡광광도계 (275 nm) 안지름약 4.6 mm, 길이약 25 cm인스테인레스강관에 5 µm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다. 30 부근의일정온도 A % 인산용액ㆍ아세토니트릴혼합액 (95 : 5) B % 인산용액ㆍ아세토니트릴혼합액 (5 : 95) 이동상 시간 ( 분 ) A(%) B(%) 유속 주입량 0.8 ml/ 분 10 μl < 시스템적합성 > 0.5 mg/l 표준액을가지고위의조건으로 6 회반복시험했을때메칠클로로이소치아졸리 논 메칠이소치아졸리논혼합물피크면적의상대표준편차는 1.0 % 이하이다

28 다. 크로마토그램 1) 표준액 (CMIT : 메칠클로로이소치아졸리논, MIT : 메칠이소치아졸리논 ) 2) 검액 (CMIT : 메칠클로로이소치아졸리논, MIT : 메칠이소치아졸리논 ) 라. 참고문헌 1. 화장품중배합한도성분분석법개발에관한연구 - 자외선차단성분및살균보존성분, 용역연구개발과제 (2012)

29 9. 알킬 (C 12 -C 22 ) 트리메칠암모늄브로마이드및클로라이드 가. 성분개요 1) 세트리모늄브로마이드 (Cetrimonium Bromide) - 이명 : 세틸 (C 16 ) 트리메칠암모늄브로마이드 - 분자식 : C 19 H 42 BrN - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 두발용제품류를제외한화장품에 0.1% 2) 세트리모늄클로라이드 (Cetrimonium Chloride) - 이명 : 세틸 (C 16 ) 트리메칠암모늄클로라이드 - 분자식 : C 19 H 42 ClN - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 두발용제품류를제외한화장품에 0.1% 나. 시험방법 1) 세트리모늄브로마이드시험 시료약 1.0 g 을정밀하게달아아세토니트릴에녹여정확하게 100 ml 로하고 0.2 μm 소

30 수성멤브레인필터로여과한액을검액으로한다. 따로세트리모늄브로마이드표준품약 100 mg을정밀하게달아아세토니트릴에녹여정확하게 100 ml(1000 mg/l) 로하고이액일정량을취하여아세토니트릴로희석한후 0.2 μm 소수성멤브레인필터로여과하여각각 1, 2, 5, 10, 20 mg/l로한것을표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조작조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서시료채취량또는희석배수를조정할수있다. 2) 세트리모늄클로라이드시험시료약 1.0 g을정밀하게달아아세토니트릴에녹여정확하게 100 ml로하고이액 1 ml를취하여아세토니트릴로희석하여 10 ml로한후 0.2 μm 소수성멤브레인필터로여과한액을검액으로한다. 따로세트리모늄클로라이드표준품약 100 mg을정밀하게달아아세토니트릴로녹여정확하게 100 ml(1000 mg/l) 로하고이액일정량을취하여아세토니트릴로희석한후 0.2 μm 소수성멤브레인필터로여과하여각각 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 mg/l로한것을표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조작조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서시료채취량또는희석배수를조정할수있다

31 < 조작조건 > 액체크로마토그래프조건 칼럼 안지름약 2.1 mm, 길이약 50 mm 인스테인레스강관에 1.7 μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴화실리카켈을충전한다 칼럼온도 35 이동상 (A) 0.1% 포름산수용액 (B) 아세토니트릴 시간 ( 분 ) A(%) B(%) 유속 주입량 0.5 ml/min 0.4 μl MRM 조건성분명세틸트리메칠암모늄 ExactMass [M+H]+ ion Cone Voltage Product ions Collision Energy

32 다. 크로마토그램 1) 세트리모늄브로마이드 2) 세트리모늄클로라이드 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인적용을위한해설서, 식품의약품안전처, 화장품중배합한도성분분석법연구 (II), 식품의약품안전처,

33 10. 트리클로산 가. 성분개요 1) 트리클로산 (Triclosan) - 분자식 : C 12 H 7 Cl 3 O 2 - 분자량 : CAS번호 : 사용한도 : 사용후씻어내는인체세정용제품류, 데오도런트 ( 스프레이제품제외 ), 페이스파우더, 피부결점을감추기위해국소적으로사용하는파운데이션 ( 예 : 블레미쉬컨실러 ) 에 0.3%, 기타제품에는사용금지 나. 시험방법 1) 함량시험시료약 1.0 g을정밀하게달아에탄올에녹여정확하게 100 ml로한것을여과하여검액으로한다. 따로트리클로산표준품약 10 mg을정밀하게달아에탄올에녹여정확하게 10 ml(1000 mg/l) 로하고, 이액일정량을취하여에탄올로희석하여각각 5, 10, 30, 50, 100 mg/l로한것을표준액으로한다. 검액및표준액약 10 μl 씩을가지고다음조작조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서시료채취량또는희석배수를조정할수있다

34 < 조작조건 > 검출기 칼럼 자외부흡광광도계 (280 nm) 안지름약 3 mm, 길이약 25 cm 의스테인레스강관에 5 um 의 액체크로마토그래프용옥타데실실릴화실리카켈을충전한다 이동상물 아세토니트릴혼합액 (4:6) 유속 주입량 1.0 ml/min 10 μl 2) 확인시험시료약 1.0 g을정밀하게달아에탄올에녹여정확하게 100 ml로한것을여과하여검액으로한다. 트리클로산표준품약 10 mg을정밀하게달아에탄올에녹여정확하게 10 ml(1000 mg/l) 로하고, 이액 10 ml을정확하게취하여에탄올을넣어정확하게 100 ml로한것을여과하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고아래조작조건으로가스크로마토그래프법 -질량분석기에따라시험할때검액의피크유지시간및질량분석스팩트럼은표준액의피크유지시간및질량분석스팩트럼과같다. < 조작조건 > 칼럼안지름약 0.25 mm, 길이약 30 m 인관에 5% 페닐 - 95% 메틸폴리실록산을 0.25 um 두께로피복한다. 칼럼온도 이동상 처음 2 분간 150 로유지하고 280 까지 1 분에 15 씩상승시킨다. 5 분간 280 로유지시킨다 헬륨 (1 ml/min) 스플리트비 20:1 인터페이스온도 250 이온소스온도 230 질량분석기모드 Scan ( m/z)

35 다. 크로마토그램 1) 함량시험 액체크로마토그래프크로마토그램 자외선흡수스펙트럼 2) 확인시험 가스크로마토그래프크로마토그램 질량분석스펙트럼 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인적용을위한해설서, 식품의약품안전처, 화장품중배합금지및배합한도성분의분석법확립및유해물질안전관리기준국제화, 식품의약품안전처, 화장품성분위해평가및리스크프로파일링연구, 식품의약품안전처,

36 III. 자외선차단제 1. 벤조페논 -3, 에칠헥실디메칠파바, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실메톡시 신나메이트, 에칠헥실살리실레이트의동시분석 가. 성분 1) 벤조페논-3 (Benzophenone-3) - 분자식 : C 14 H 12 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 2) 에칠헥실디메칠파바 (Ethylhexyl Dimethyl PABA) - 분자식 : C 17 H 27 NO 2 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 8% 3) 부틸메톡시디벤조일메탄 (Butyl Methoxydibenzoylmethane) - 분자식 : C 20 H 22 O

37 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 4) 에칠헥실메톡시신나메이트 (Ethylhexyl Methoxycinnamate) - 분자식 : C 18 H 26 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 7.5% 5) 에칠헥실살리실레이트 (Ethylhexyl Salicylate) - 분자식 : C 15 H 22 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 나. 시험방법 시료약 1.0~3.0 g 을정밀하게달아메탄올 50 ml 을넣고초음파진탕하여검체를충분히분

38 산시킨다음메탄올을넣어정확하게 100 ml로한액 10 ml를정확하게취하여내부표준액 5.0 ml 및메탄올을넣어 50 ml로한다. 이액에규조토 1 g을넣고잘혼합한다음냉동실에서 2시간동안가끔씩저어주면서방치한다음여과한액을검액으로한다. 따로벤조페논-3, 에칠헥실디메칠파바, 에칠헥실메톡시신나메이트표준품을약 25 mg씩, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실살리실레이트표준품을약 60 mg씩을정밀하게달아 THF를넣어녹여 50 ml로하여각각의표준원액으로한다. 따로벤조페논-3 표준원액 3.0 ml, 에칠헥실디메칠파바표준원액 5.0 ml, 부틸메톡시디벤조일메탄표준원액 1.0 ml, 에칠헥실메톡시신나메이트표준원액 6.0 ml 및에칠헥실살리실레이트표준원액 2.0 ml를정확하게취하고여기에내부표준액 5.0 ml를정확하게넣고메탄올을넣어정확하게 50 ml로한다. 이액에규조토 1 g을넣고잘혼합한다음냉동실에서 2시간동안가끔씩저어주면서방치한다음여과한액을표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 안트라센약 0.4 g을정밀하게달아 THF를넣어녹여내부표준액으로한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 자외부흡광광도계 (313 nm) 칼럼 Waters, Nova-Pak C 18 ( mm) 이동상 THF : MeOH : Water (7:5:8) 유속 주입량 1.0 ml/min 10 μl

39 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of standard solution Peak 1 : 벤조페논-3, Peak 2 : 내부표준액, Peak 3 : 에칠헥실디메칠파바, Peak 4 : 부틸메톡시디벤조일메탄, Peak 5 : 에칠헥실메톡시신나메이트, Peak 6 : 에칠헥실살리실레이트 라. 참고문헌 1. 화장품의특수성분에관한연구 (Ⅷ) - 화장품중자외선차단제의분석법, 국립보건원보제 32 권제 2 호 (1995)

40 2. 이소아밀 -p- 메톡시신나메이트, 4- 메칠벤질리덴캠퍼, 에칠헥실메톡시신나메 이트, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실살리실레이트, 에칠헥실디메칠파 바의동시분석 가. 성분 1) 이소아밀-p-메톡시신나메이트 (Isoamyl p-methoxycinnamate) - 분자식 : C 15 H 20 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 10% 2) 4- 메칠벤질리덴캠퍼 (4-Methylbenzylidene Camphor) - 분자식 : C 18 H 22 O - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 3) 에칠헥실메톡시신나메이트 (Ethylhexyl Methoxycinnamate) - 분자식 : C 18 H 26 O

41 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 7.5% 4) 부틸메톡시디벤조일메탄 (Butyl Methoxydibenzoylmethane) - 분자식 : C 20 H 22 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 5) 에칠헥실살리실레이트 (Ethylhexyl Salicylate) - 분자식 : C 15 H 22 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 6) 에칠헥실디메칠파바 (Ethylhexyl Dimethyl PABA) - 분자식 : C 17 H 27 NO

42 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 8% 나. 시험방법시료약 1.0 g을정밀하게달아메탄올 50 ml를넣어초음파진탕하여검체를충분히분산시킨다음메탄올을넣어녹여 100 ml로한다. 이액 10 ml를정확하게취하여메탄올을넣어 50 ml로한액을여과하여검액으로한다. 따로이소아밀-p-메톡시신나메이트, 3-(4-메칠벤질리덴 ) 캄파, 에칠헥실메톡시신나메이트, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실살리실레이트, 에칠헥실디메칠파바표준품을각각 100 mg 씩을정밀하게달아메탄올을넣어녹여 100 ml로한액을표준원액으로한다. 각각의표준원액 2.0 ml, 4.0 ml, 6.0 ml, 8.0 ml 및 10.0 ml를정확하게취하여메탄올을넣어 100 ml로한액을표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼이동상유속주입량 자외부흡광광도계 (310 nm) Discovery C8 column ( mm) MeOH:Water:Acetic acid(70:25:5) 1.3 ml/min 20 μl

43 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of standard solution IA : 이소아밀-p-메톡시신나메이트, MBC : 3-(4-메칠벤질리덴 ) 캄파, BMDM : 부틸메톡시디벤조일메탄, ODP : 에칠헥실디메칠파바, OMC : 에칠헥실살리실레이트, OS : 에칠헥실살리실레이트 라. 참고문헌 1. 의약품등의제제평가에관한연구 - 화장품중살균 보존제에관한연구, 식품의약품안전청 연구보고서, 제 5 권, 159~166(2001)

44 3. 벤조페논 -3, 벤조페논 -4, 벤조페논 -8 및에칠헥실메톡시신나메이트의동시분석 가. 성분 1) 벤조페논-3 (Benzophenone-3) - 분자식 : C 14 H 12 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 2) 벤조페논 -4 (Benzophenone-4) - 분자식 : C 14 H 12 O 6 S - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 5% 3) 벤조페논 -8 (Benzophenone-8) - 분자식 : C 14 H 12 O 4 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 3%

45 4) 에칠헥실메톡시신나메이트 (Ethylhexyl Methoxycinnamate) - 분자식 : C 18 H 26 O 3 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 7.5% 나. 시험방법시료약 5 g을정밀하게달아 83% 메탄올 50 ml을넣고초음파진탕하여검체를충분히분산시킨다음 83% 메탄올을넣어정확하게 100 ml로한다. 이액에규조토 5 g을넣고잘혼합한다음냉동실에서약 3시간동안가끔씩저어주면서방치한다음여과한액을검액으로한다. 따로벤조페논-3, 벤조페논-4, 벤조페논-8 및에칠헥실메톡시신나메이트표준품약 100 mg씩을각각정밀하게달아 83% 메탄올을넣어 100 ml로한액을표준원액으로한다. 벤조페논-4, 벤조페논-8 및에칠헥실메톡시신나메이트표준원액각 2 ml씩, 벤조페논-3 표준원액 4 ml를각각정확하게취하여 83% 메탄올을넣어정확하게 100 ml로한액에규조토 5 g을넣고잘혼합한다음냉동실에서약 3시간동안가끔씩저어주면서방치한다음여과한액을표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법에따라시험한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다

46 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 (313 nm) Zorbax C8 이동상 MeOH : Water (83:17) 유속 주입량 1.2 ml/min 20 μl 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of standard solution Peak 1 : 벤조페논 -4, Peak 2 : 벤조페논 -8, Peak 3 : 벤조페논 -3, Peak 4 : 에칠헥실메톡시신나메이트 라. 참고문헌 1. 화장품의특수성분에관한연구 (Ⅱ) - 일소방지제중자외선차단제의분석법, 국립보건원보 제 26 권제 26 호 (1989)

47 4. 드로메트리졸, 4-메칠벤질리덴캠퍼, 멘틸안트라닐레이트, 벤조페논-3, 벤조페논-8, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실트리아존, 옥토크릴렌, 에칠헥실디메칠파바, 에칠헥실메톡시신나메이트, 파라아미노벤조익애씨드, 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드, 이소아밀p-메톡시신나메이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 메칠렌비스-벤조트리아졸일테트라메칠부틸페놀, 테레프탈릴리덴디캄퍼설포닉애씨드분석 가. 성분개요 성분명 / 화학명분자식 MW CAS 구조 드로메트리졸 / 2-(2-hydroxy-5-methylpheny l) benzotriazol C 13 H 11 N 3 O 메칠벤질리덴캠퍼 / 3-(4-Methylbenzylidene) camphor C 18H 22N 멘틸안트라닐레이트 / Menthyl anthranilate C 17H 25NO 벤조페논 -3/ 2-Hydroxy-4-methoxybenzop henone C 14H 12O 벤조페논 -8/ 2,2'-Dihydroxy-4-methoxy benzophenone C 14 H 12 O

48 성분명 / 화학명분자식 MW CAS 구조 부틸메톡시디벤조일메탄 / 1-(p-t-Butylphenyl)-3-(p-met hoxyphenyl)-1,3-propanedione C 20H 22O 에칠헥실트리아존 / Ethylhexyltriazone C 48H 66N 6O 옥토크릴렌 / 2-Ethylhexyl 2-cyano-3,3-diphenylacrylate C24H27NO 에칠헥실디메칠파바 / 2-Ethylhexyl 4-(dimethylamino)benzoate C 17 H 27 NO 에칠헥실메톡시신나메이트 / 2-Ethylhexyl trans-4-methoxycinnamate C 18 H 26 O 파라아미노벤조익애씨드 / 4-Aminobenzoic acid C 7 H 7 NO

49 성분명 / 화학명분자식 MW CAS 구조 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 / 2-Phenylbenzimidazole-5-sulf onic acid C 13 H 10 N 2 O 3 S 이소아밀 p- 메톡시신나메이트 / isoamyl p-methoxycinnamate C 15H 20O 디에칠헥실부타미도트리아존 / Diethylhexyl butamidotriazone C 44H 59N 7O 메칠렌비스 - 벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀 / Methylene bis-benzotriazolyl tetramethylbutyl phenol C 41H 50N 6O 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드 / Terephthalylidene dicamphor sulfonic acid C 28 H 34 O 8 S ( )

50 나. 시험방법시료약 1.0 g을정밀하게달아메탄올에희석하여검액으로한다. 따로 4-메칠벤질리덴캠퍼, 멘틸안트라닐레이트, 벤조페논-3, 벤조페논-8, 부틸메톡시디벤조일메탄, 옥토크릴렌, 에칠헥실디메칠파바, 에칠헥실메톡시신나메이트, 파라아미노벤조익애씨드, 이소아밀p-메톡시신나메이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드의표준품각 100 mg을정밀하게달아메탄올에녹여 ppm으로만들고, 에칠헥실트리아존표준품약 100 mg 을정밀하게달아 THF에녹여 ppm로만든후각각 1 ml를취하고메탄올을넣어 20 ml가되게하여 500 ppm 표준액으로만들었다. 드로메트리졸표준품약 10 mg을정밀히달아메탄올에, 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드표준품약 10 mg은정밀히달아메탄올 물 초산혼합액 (50:44:6) 에, 메칠렌비스-벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀표준품약 10 mg 은정밀하게달아 THF에녹여각 1000 ppm으로만들었다. 각표준액일정량을취해메탄올로희석하여 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50 ppm 농도로표준액으로한다. 검액및표준액각 10 μ L씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법의절대검량선법에따라시험한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 ( 측정파장 300, 320, 360 nm) C18 (4.6 mm 250 mm, 4.6 μm) 칼럼온도 40 A : 메탄올 * B : 0.01M 인산이수소나트륨 이동상 시간 ( 분 ) A (%) B(%) 유속 (ml/min) * 제품에함유된자외선차단성분의종류에따라메탄올함량을 조절하여분석할수있다 유속 주입량 ml/min 20 μl

51 다. 크로마토그램 * 상 : 300 nm, 중 : 320 nm, 하 : 360 nm * 1: 드로메트리졸, 2:4-메칠벤질리덴캠퍼, 3: 멘틸안트라닐레이트, 4: 벤조페논-3, 5: 벤조페논-8, 6: 부틸메톡시디벤조일메탄, 7: 에칠헥실트리아존, 8: 옥토크릴렌, 9: 에칠헥실디메칠파바, 10: 에칠헥실메톡시신나메이트, 11: 파라아미노벤조익애씨드, 12: 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드, 13: 이소아밀p-메톡시신나메이트, 14: 디에칠헥실부타미도트리아존, 15: 메칠렌비스-벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀, 16: 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드 라. 참고문헌 1. A. Chisvert and A. Salvador: Determination of water-soluble UV-filters in sunscreen sprays by liquid chromatography, J. Chromatogr. A, 977(2): , D. J. Schakel, D. Kalsbeek and K. Boer: Determination of sixteen UV filters in suncare formulations by high-performance liquid chromatography, J. Chromatogr. A, 1049(1-2): , E. R. Kedor-Hackmann, M. L. De Lourdes Perez Gonzalez, A. K. Singh and M. I

52 Santoro: Validation of a HPLC method for simultaneous determination of five sunscreens in lotion preparation, Int. J. Cosmet. Sci., 28(3): , L. Dencausse, A. Galland, J. L. Clamou and J. Basso: Validation of HPLC method for quantitative determination of Tinosorb S and three other sunscreens in a high protection cosmetic product, Int. J. Cosmet. Sci., 30(5): , 의약품등의제제평가에관한연구 (II): 화장품중살균 보존제에관한연구 (2001년연구사업 ) 6. 화장품배합한도지정성분의분석 - 자외선차단용화장품중자외선차단제함유량분석 (2003년연구사업 ) 7. 자외선차단제의동시분석법개발 (2007년연구사업 )

53 5. 폴리실리콘 -15 분석 가. 성분개요 1) 폴리실리콘-15 (Polysilicone-15, Dimethicodiethylbenzal malonate) - 분자량 : 평균 사용한도 : 10 % 나. 시험방법시료약 1.0 g을정밀하게달아검액중폴리실리콘-15 해당량으로 100 ppm 이되도록 THF 에녹여검액으로한다. 따로폴리실리콘표준품을달아 THF에녹여 100 ppm 이되도록 THF 로녹여표준액으로한다. 검액및표준액각 10 μl씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. < 조작조건 > 검출기 칼럼 자외부흡광광도계 ( 측정파장 310 nm) PLgel (7.5 mm 300 mm, 5 μm) 칼럼온도 40 이동상 주입량 THF 20 μl

54 다. 크로마토그램 HPLC Chromatogram of standard solution, RT min 라. 참고문헌 1. D. J. Schakel, D. Kalsbeek and K. Boer: Determination of sixteen UV filters in suncare formulations by high-performance liquid chromatography, J. Chromatogr. A, 1049(1-2): , E. R. Kedor-Hackmann, M. L. De Lourdes Perez Gonzalez, A. K. Singh and M. I. Santoro: Validation of a HPLC method for simultaneous determination of five sunscreens in lotion preparation, Int. J. Cosmet. Sci., 28(3): , L. Dencausse, A. Galland, J. L. Clamou and J. Basso: Validation of HPLC method for quantitative determination of Tinosorb S and three other sunscreens in a high protection cosmetic product, Int. J. Cosmet. Sci., 30(5): , 자외선차단제의동시분석법개발 (2007년연구사업 )

55 6. 티타늄디옥사이드및징크옥사이드의동시분석 가. 성분개요 1) 티타늄디옥사이드 (Titanium Dioxide) - 분자식 : TiO 2 - 분자량 : CAS번호 : 사용한도 : 25 % 2) 징크옥사이드 (Zinc Oxide) - 분자식 : ZnO - 분자량 : CAS번호 : 사용한도 : 25 % 나. 시험방법시료약 0.1 g을정밀하게달아테플론재질의극초단파분해용용기의기벽에닿지않도록조심하여넣는다. 시료를분해하기위하여질산 7 ml, 황산 2 ml 및불화수소산 1 ml를넣고뚜껑을닫은다음용기를극초단파분해장치에장착하고조작조건에따라무색 엷은황색이될때까지분해한다. 분해가완료되면상온에서 1시간동안방치한후마개를열고극초단파분해용용기를가열판 (hot plate) 에서가열하여불화수소산을제거한다. 상온으로식힌다음내용물을넣고물을넣어정확하게 500 ml로하여검액으로한다. 따로질산 7 ml, 황산 2 ml 및불화수소산 1 ml를가지고검액과동일하게조작하여공시험액으로한다. 필요하면검체를분해하기위하여사용하는산의종류와양, 극초단파분해조건은변경할수있다

56 < 조작조건 > 최대파워 1000 W 최고온도 220 분해조건 (15분) 120 (5분) 220 (10분) 분해시간 45 분 티타늄 (Ti) 및아연 (Zn) 표준원액 (1000 μg/ml) 을희석시킨질산 (3 100) 으로희석하여농도가다른 3가지이상의검량선용표준액을만든다. 이표준액은 1 ml 당티타늄 (Ti) 및아연 (Zn) 이 5 μg 100 μg 농도범위에포함되게한다. 표준액및검액을유도결합플라즈마분광기 (ICP-AES) 에주입하고티타늄및아연의검량선으로부터검액중의티타늄및아연의양을산출한다. < 조작조건 > 파장 티타늄 nm ( 간섭현상이없는범위에서선택 ) 아연 nm ( 간섭현상이없는범위에서선택 ) 플라즈마기체아르곤 (99.99 v/v% 이상 ) 다. TiO 2 및 ZnO 함량계산 위의조건에서얻어진시험결과를피크면적법에따라정량한다. 검량선에서얻어진표준물질의피크면적을 y축으로, 표준물질의농도를 x축으로검량선을작성하고검액의피크면적을 y축에대입하여검액의농도를구한다. 검량선에서구한검액의농도에검액의최종부피를곱하고검체채취량으로나눈다음환산계수 (TiO 2 와 Ti 질량비율 ) 을곱하여티타늄디옥사이드의함량을산출하며환산계수 (ZnO와 Zn 질량비율 ) 을곱하여징크옥사이드의함량을산출한다. TiO 2 함량 (%) = (C-B) x x V S x C : 검량선에서계산된검액중티타늄의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml)

57 S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수 ZnO 함량 (%) = (C-B) x x V S x C : 검량선에서계산된검액중아연의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml) S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수 < 주의사항 > 1) 극초단파분해법은습식산분해법에비해전처리시간단축, 외부오염차단, 난분해성시료의분해용이및재현성있는결과등의이유로일반적으로많이사용되는전처리법이지만시료양의한계, 산종류의선택등에대해유의해야한다. 2) 시료에산을가하고바로극초단파분해를할경우유기물이분해되면서발생한가스로인해용액이새어나올수있으므로산을가하고최소 15분이상극초단파분해용용기 (vessel) 의뚜껑을덮지않고방치한다음분해한다. 3) 극초단파분해시분해가완료되면상온으로충분히식힌다음여과한다. 4) 만약시료가완전히분해되지않으면산의종류및극초단파분해조건을변경한다. 5) 분해에사용된불화수소산은유리재질의초자류및 ICP 부품에영향을줄수있으므로불화수소산을제거한후여과등의과정을진행한다. 6) ICP-AES의 Ti 및 Zn의측정파장은각제조사별사용장비에따라방해물질의간섭이없는파장영역을선택해서측정하도록한다. < 측정피크의단일성여부확인 > 방해물질의영향을확인하기위해표준액과검액의 ICP-AES 측정피크의스펙트럼대해비교 확인하는것이필요하다. 만약방해물질이있을경우용매추출법등을이용하여방해물질을제거하여야한다.( 스펙트럼예시 )

58 Ti 표준액의스펙트럼 크림제형시료의 Ti 스펙트럼 Zn 표준액의스펙트럼 크림제형시료의 Zn 스펙트럼 라. 참고문헌 1. 화장품중배합한도성분분석법개발에관한연구 - 자외선차단제성분및살균보 존제성분, 용역연구개발과제 (2012)

59 7. 드로메트리졸트리실록산 가. 성분개요 1) 드로메트리졸트리실록산 (Drometrizole Trisiloxane) - 분자식 : C 24 H 39 N 3 O 3 Si 3 - 분자량 : HO N N N CH 2 Si Si(CH 3 ) 3 O O Si(CH 3 ) 3 CH 2 CH H 3 C CH 3 CH 3 - CAS 번호 : 사용한도 : 15 % 나. 시험방법 1) 확인시험함량시험법에따라시험할때검액과표준액의주피크유지시간은같고, 자외가시부흡광도측정법에따라시험할때자외가시부흡수스펙트럼의피크는아래그림과같다. 2) 함량시험 시료약 0.1 g 을정밀하게달아메탄올을적당량넣어 60 분간초음파진탕하여추출하고상온 에서식힌다음메탄올을넣어정확하게 100 ml 로하여검액으로한다

60 따로표준품약 100 mg을정밀하게달아메탄올을넣어정확하게 100 ml로한액을표준원액 (1 mg/ml) 으로한다. 표준원액 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml를정확하게취하여메탄올로정확하게 100 ml로한액을검량선용표준액으로한다. 검액및표준액 10 μl씩을가지고다음의조건으로액체크로마토그래프법 (HPLC법) 에따라시험한다. 검량선의 y축에검액의피크면적을대입하여검액의농도를구한다. 검량선에서구한검액의농도에검액의최종부피를곱하고검체채취량으로나누어드로메트리졸트리실록산의함량을산출한다. 따로시료를제외하고검액과동일하게조작하여공시험액으로한다. 드로메트리졸트리실록산함량 (%) = (C-B) x V S x C : 검량선에서계산된검액중드로메트리졸트리실록산의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml) S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수 < 조작조건 > 검출기칼럼유속이동상칼럼온도 자외부흡광광도계 (305 nm) 안지름약 4.6 mm, 길이약 25 cm인스테인레스강관에 5 µm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다 1.0 ml/ 분메탄올 30 부근의일정온도 < 시스템적합성 > 50 mg/l 표준액을가지고위의조건으로 6 회반복시험했을때드로메트리졸트리실록산의 피크면적의상대표준편차는 0.5 % 이하이다

61 다. 크로마토그램 1) 표준액 HPLC Chromatogram of standard solution, RT min 2) 검액 라. 참고문헌 1. 화장품중배합한도성분분석법개발에관한연구 - 자외선차단성분및살균보존성분, 용역연구개발과제 (2012)

62 8. 벤조페논 -3, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실 살리실레이트, 4- 메칠벤질리덴캠퍼, 옥토크릴렌, 이소아밀 -p- 메톡시신나메 이트, 호모살레이트동시분석 가. 성분개요 성분명 / 화학명분자식 MW CAS 구조사용한도 벤조페논 -3/ (2-hydroxy-4-methoxypheny l)-phenylmethanone C 14 H 12 O % 부틸메톡시디벤조일메탄 / 1-(4-methoxyphenyl)-3-(4-t ert-butylphenyl)propane-1,3 -dione C 20 H 22 O % 에칠헥실메톡시신나메이트 / (RS)-2-Ethylhexyl (2E)-3-(4-Methoxylphenyl)p rop-2-enoate C 18H 26O % 에칠헥실살리실레이트 / 2-Ethylhexyl 2-hydroxybenzoate C 15 H 22 O % 4- 메칠벤질리덴캠퍼 / 3-(4-Methylbenzylidene) camphor C 18 H 22 O % 옥토크릴렌 / 2-Ethylhexyl 2-cyano-3,3- diphenylacrylate C 24H 27NO % 이소아밀 -p- 메톡시신나메이트 / 3-methylbutyl(2E)-3-(4-met hoxyphenyl)arcylate C 15 H 20 O % 호모살레이트 3,3,5-Trimethylcyclohexyl 2-hydroxybenzoate C 16 H 22 O %

63 나. 시험방법시료약 0.5 g을정밀하게달아 50 ml 용량플라스크에넣고메탄올 30 ml를넣어초음파추출한후메탄올을넣어정확하게 50 ml로하고공경 0.2 μm 멤브레인필터로여과하여검액으로한다. 따로벤조페논-3, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실살리실레이트, 4-메칠벤질리덴캠퍼, 옥토크릴렌, 이소아밀-p-메톡시신나메이트및호모살레이트표준품을정확하게취해메탄올에녹여표준원액 (1000 μg/ml) 으로하고, 이액 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 및 20.0 ml를정확하게취하여 100 ml 용량플라스크에넣고메탄올을넣어정확하게 100 ml로한후공경 0.2 μm 멤브레인필터로여과하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고아래조작조건으로액체크로마토그래프법에따라시험한다. 표준액의농도별피크면적으로검량선을작성하고이로부터검액중벤조페논-3, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실살리실레이트, 4-메칠벤질리덴캠퍼, 옥토크릴렌, 이소아밀-p-메톡시신나메이트및호모살레이트의양을계산한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 (300, 360 nm) 안지름 4.6 mm, 길이 25 cm 의스테인레스강관에 5 μm 의액 체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다. 칼럼온도 25 C 이동상메탄올 인산이수소나트륨 (90 : 10) 유량 주입량 1 ml/min 10 μl

64 다. 크로마토그램 벤조페논 -3, 부틸메톡시디벤조일메탄, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실살리실레이트, 4- 메칠벤질리덴캠퍼, 옥토크릴렌, 이소아밀 -p- 메톡시신나메이트및호모살레이트표준액의 크로마토그램 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션가이드라인적용을위한해설서 ( ) 2. 기능성화장품품질평가에관한연구 (14171 화장품 305)(2014 년식품의약품안전처 )

65 Ⅳ. 기타 1. 징크피리치온 가. 성분개요 1) 징크피리치온 (Zinc Pyrithione) - 분자식 : C 10 H 8 N 2 O 2 S 2 Zn - 분자량 : N + O- S - S - 2+ Zn O - N + - CAS 번호 : 사용한도 : 0.5 % ( 사용후씻어내는제품 ) 총징크피리치온으로 1.0 % ( 비듬및가려움을덜어주고씻어내는제품 ) 나. 시험방법 1) 확인시험함량시험법에따라시험할때검액과표준액의주피크유지시간은같고, 자외가시부흡광도측정법에따라시험할때자외가시부흡수스펙트럼의피크는아래그림과같다

66 2) 함량시험시료약 0.1 g을정밀하게달아디메틸설폭시드 (DMSO) 를적당량을넣어 60분간초음파진탕추출하고 DMSO를넣어정확하게 10 ml로한다. 이용액 1 ml, 0.3 M EDTA 용액 1) 1 ml와 0.1 % DPDS 용액 2) 1 ml를각각넣은다음물을넣어정확하게 10 ml로한다. 상온에서 1시간동안반응시킨액을검액으로한다. 따로표준품약 100 mg을정밀하게달아 DMSO를넣어정확하게 100 ml로한액을표준원액 (1000 mg/l) 으로한다. 표준원액 0.5 ml, 1 ml, 5 ml, 10 ml 및 20 ml를정확하게취하여 DMSO로정확하게 100 ml로한액을 1차표준액으로한다. 1차표준액을각각 1 ml, 0.3 M EDTA 용액 1 ml 및 0.1 % DPDS 용액 1 ml를넣은다음물을넣어정확하게 10 ml로한다. 상온에서 1시간동안반응시킨액을검액으로한다. 검액및표준액 10 μl씩을가지고다음의조건으로액체크로마토그래프법 (HPLC법 ) 에따라시험한다. 검량선의 y축에검액의피크면적을대입하여검액의농도를구한다. 검량선에서구한검액의농도에검액의최종부피를곱하고검체채취량으로나누어징크피리치온의함량을산출한다. 따로시료를제외하고검액과동일하게조작하여공시험액으로한다. 징크피리치온함량 (%) = (C-B) x V S x C : 검량선에서계산된검액중징크피리치온의농도 (μg/ml) B : 공시험액의농도 (μg/ml) V : 검액의최종부피 (ml) S : 검체채취량 (g) : 단위환산계수 < 주의사항 > 징크피리치온의검량선작성시표준액의농도는반응의희석배수를고려하여제조농도의 1/10 로계산한다. 1) 0.3 M EDTA 용액 : 2Na-EDTA 2H 2O g 을취해 100 ml 용량플라스크에넣고증류수로표선을맞추고투명해질때까지완전히용해시킨다. 2) 0.1 % DPDS(2,2 -Dipyridyl disulfide) 용액 : DPDS 0.1 g 을취해 100 ml 용량플라스크에넣고아세토니트릴 (25 ml) 및증류수 (75 ml) 를넣은후초음파진탕하여완전히용해시킨다

67 < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 자외부흡광광도계 (235 nm) 안지름약 4.6 mm, 길이약 25 cm인스테인레스강관에 5 µm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다 칼럼온도 25 C 이동상아세토니트릴ㆍ물혼합액 (40 : 60) 유량 주입량 1 ml/min 10 μl < 시스템적합성 > 5.0 mg/l 표준액을가지고위의시험조건에따라 6 회반복시험할때징크피리치온피크면적 의상대표준편차는 0.3% 이하이다. 다. 크로마토그램 1) 표준액 Zinc Pyrithione, RT min

68 2) 공시험액 3) 검액 라. 참고문헌 1. 화장품중배합한도성분분석법개발에관한연구 - 자외선차단성분및살균보존성분, 용역연구개발과제 (2012)

69 2. 비타민 E ( 토코페롤 ) 가. 성분개요 1) 비타민 E (Tocopherol-α, β, γ, δ) - 분자식 : C 29 H 50 O 2 - CAS 번호 : 사용한도 : 20 % 나. 시험방법시료약 1 g을정밀하게달아헥산 50 ml와내부표준액 1.0 ml를넣어 60 ~ 90 에서 2 시간동안초음파진탕하여검체를충분히분산시킨후헥산을넣어정확히 100 ml로한다. 이액 1 ml를취하여헥산으로정확히 200 ml로맞춘후 0.2 μm 멤브레인필터로여과한 것을검액으로한다. 따로토코페롤표준품을정밀히달아헥산으로희석하여표준원액 (1000 μg/ml) 으로하고, 이액각각 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 ml를정확하게취하여내부표준액 1.0 ml씩과헥산을넣어 100 ml로하고 0.2 μm 멤브레인필터로여과하여표준액으로한다. 검액및표준액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법으로시험한다. 표준액의농도별피크면적으로검량선을작성하고이로부터검액중토코페롤의양을계산한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다

70 내부표준액 : 토콜약 5 mg 을정밀하게달아헥산을넣어녹여 50 ml 로한다. < 조작조건 > 검출기 ( 파장 ) 칼럼 형광광도검출기 ( 여기파장 298 nm, 측정파장 325 nm) SunFire Slica ( mm, 5 μm) 이동상헥산 : 이소프로판올 (99 : 1) 유속 주입량 0.7 ml/min 10 μl 다. 크로마토그램 토코페롤표준액의크로마토그램 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인 ( , 식품의약품안전처 ) 2. 화장품중배합한도성분분석법연구 ( , 식품의약품안전처.)

71 3. 톨루엔 가. 성분개요 1) 톨루엔 (Toluene) - 분자식 : C 7 H 8 - 분자량 : CAS 번호 : 사용한도 : 손발톱용제품류에 25% 나. 시험방법시료약 1.0 g을정밀하게달아아세톤을넣어 100 ml로맞추고 30분동안초음파진탕하여검체를충분히분산시킨다. 이액 1.0 ml를취하여내부표준액 1.0 ml를넣고아세톤으로 100 ml를맞춘액을 0.2 μm 멤브레인필터로여과한것을검액으로한다. 따로톨루엔표준품을정밀히달아아세톤으로희석하여표준원액 (1000 μg/ml) 으로한다. 표준원액각각 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 및 4.0 ml를정확하게취하여내부표준액 1.0 ml씩을넣고아세톤을넣어 100 ml로하고 0.2 μm 멤브레인필터로여과하여표준액으로한다. 검액및표준액 1 μl씩을가지고아래조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의기체크로마토그래프법-질량분석계의내부표준법에따라시험한다. 표준액의농도별피크면적으로검량선을작성하고이로부터검액중클로로아세타마이드의양을계산한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서시료채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 염화벤질약 5 mg을정밀하게달아아세톤을넣어녹여 50 ml로한다

72 < 조작조건 > 사용기기 GC-MS 칼럼 Rix-5MS (30 m 0.25 mm ID 0.25 μm) 오븐온도 (2 min) 8 /min 200 (5 min) 주입구온도 250 주입량 1 μl 주입모드 스플릿 (20:1) 운반기체 헬륨 검출기 질량분석기 (Quadrupole, 150 ) 인터페이스온도 250 이온소스온도 230 이온화모드 Electron Impact(EI) 전자에너지 70 ev 질량분석기모드 선택이온 (SIM) 모드 (65, 91, 92, 126, 128 m/z), solvent delay : 2분 다. 크로마토그램 톨루엔표준액의크로마토그램, Toluene 2.8 min, Benzyl chloride 6.8 min 톨루엔표준액의질량스팩트럼

73 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인 ( , 식품의약품안전처 ) 2. 화장품중배합한도성분분석법연구 ( , 식품의약품안전처 )

74 4. 폴리아크릴아마이드 가. 성분개요 1) 폴리아크릴아마이드 (Polyacrylamide) - 분자식 : (C 3 H 5 NO) n - CAS 번호 : 사용한도 : 잔류아크릴아마이드로서 % ( 사용후씻어내지않는바디화장품 ) 잔류아크릴아마이드로서 % ( 기타제품 ) 나. 시험방법 시료약 1 g 을정밀하게달아내부표준액 80 μl 와물 20 ml 를넣어 30 분동안초음파진탕 하여검체를충분히분산시킨후 10 분간원심분리 (4000 rpm, 15 ) 하여상등액을 0.2 μm 멤브레인필터로여과한것을검액으로한다. 따로폴리아크릴아마이드표준품을정밀히 달아물로희석하여표준원액 (1000 mg/ml) 으로하고, 이액각각 0.2, 0.5, 1.0, 5.0, 10.0, 20.0 및 50.0 μl를정확하게취하여내부표준액 80 μl씩과물을넣어 100 ml로하고 0.2 μ m 멤브레인필터로여과하여표준액으로한다. 검액및표준액 5 μl씩을가지고아래조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법 -질량분석계의내부표준법에따라시험한다. 표준액의농도별피크면적으로검량선을작성하고이로부터검액중클로로아세타마이드의양을계산한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서시료채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 탄소 13 동위원소로치환된아크릴아마이드 ( 13 C 3 -acrylamide) 약 1 mg 을정 밀하게달아물을넣어녹여 100 ml 로한다

75 < 조작조건 > 액체크로마토그래프조작조건 사용기기 UPLC-MS/MS(Triple Q) 칼럼 ACQURITY UPLC BEH C18 ( mm, 1.7 μm) 칼럼온도 25 주입량유속이동상이동상의농도구배 5 μl 0.2 ml/min A : 0.1 % 아세트산 in 물 B : 0.1 % 아세트산 in 90 % 메탄올 시간 ( 분 ) A(%) B(%) MRM 조작조건 성분명 Exact Mass [M+H]+ ion Cone Voltage Product ions Collision Energy Acrylamide C 3 -Acrylamide 다. 크로마토그램 Acrylamide 13 C 3-Acrylamide 아크릴아마이드표준액의크로마토그램

76 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인 ( , 식품의약품안전처 ) 2. 화장품중배합한도성분분석법연구 ( , 식품의약품안전처 )

77 5. 트리알킬아민, 트리알칸올아민 가. 성분개요 1) 트리에탄올아민 (Triethanolamine) - 분자식 : N(CH 2 CH 2 OH) 3 - CAS 번호 : 사용한도 : 사용후씻어내지않는제품에 2.5 % 나. 시험방법시료약 1 g을정밀하게달아메탄올을넣어 1시간동안초음파진탕하여충분히분산시킨다음내부표준액 12.5 ml 및메탄올을넣어 100 ml에맞춘다. 이액 1 ml를취하여메탄올을넣어 250 ml에맞춘후 0.2 μm 멤브레인필터로여과한것을검액으로한다. 따로트리에탄올아민표준품 100 mg을정밀히달아메탄올을넣어 100 ml에맞추어표준원액 (1000 μg/ml) 으로한다. 이액각각 0.01, 0.02, 0.04, 0.1, 0.2 및 0.4 ml를정확하게취하여내부표준액 0.1 ml와메탄올을넣어 200 ml로맞춘후 0.2 μm 멤브레인필터로여과하여표준액으로한다. 표준액과검액을가지고다음조작조건으로기능성화장품기준및시험방법일반시험법의액체크로마토그래프법의내부표준법으로시험한다. 표준액및검액의피크면적을측정하고, 표준물질의농도별피크면적으로검량선을작성한다. 이로부터검액중트리에탄올아민의양을계산한다. 필요한경우표준액의검량선범위내에서검체채취량또는희석배수를조정할수있다. 내부표준액 : 트리에탄올아민중수소 -15 치환체 (Triethanolamine- ) 약 20 mg 을정밀 하게달아메탄올을넣어녹여 10 ml 로한다

78 < 조작조건 > 액체크로마토그래프조작조건사용기기 UPLC-MS/MS(Triple Q) 안지름약 2.1 mm, 길이약 50 mm인스테인레스강관에 1.7 μm의칼럼액체크로마토그래프용옥타데실실릴화실리카켈을충전한다칼럼온도 35 주입량 유속 0.4 μl 0.2 ml/min 이동상 2 mm 암모늄아세테이트 : 메탄올 = 35 : 65 MRM 조작조건성분명 Triethanolamine Triethanolamine d15(istd) Exact Mass [M+H]+ ion Cone Voltage Product ions Collision Energy 다. 크로마토그램 트리에탄올아민내부표준물질및트리에탄올아민표준품의크로마토그램

79 라. 참고문헌 1. 의약품등시험방법밸리데이션에대한가이드라인적용을위한해설서, 식품의약품안전처, Determination of triethanolamine in air samples by gas chromatography-mass spectrometry, Chromatographia, Simultaneous detection of monoethanolamine, diethanolamine, and triethanolamine by HPLC with a chemiluminescence reaction and online derivatizaion to tertiary amine, Analytical Sciences,