β - Glucan

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창엽 설
5 years ago
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1 Black Pitera CLNICAL TRIAL

2 목차 1. 피부의구성과노화 2. 블랙피테라 (Black Pitera) 란? 3. 흑효모배양액세포시험 4. 흑효모배양액동물시험 5. 흑효모배양액인체적용시험 6. 흑효모배양액안전성시험 7. 흑효모배양액논문및특허

피부의구성과노화 피부의구성 1. 표피 : Keratinocyte 로구성되며피부의가장바깥부분. 수분증발억제역할 2.

피부재생기전 : fibroblast, endothelial cell, keratinocyte, inflammatory cell,

elastin 과 collagen 의감소로피부는 더얇아지게되고, 탄력을잃음 외인성요인 : Stimulation (1) 자외선 :

3 피부의구성과노화 피부의구성 1. 표피 : Keratinocyte 로구성되며피부의가장바깥부분. 수분증발억제역할 2. 진피 : Fibroblast, mast cell, macrophage, elatin, collagen 으로구성 [ 피부의탄력과보습유지 ] 역할 * 피부재생기전 : fibroblast, endothelial cell, keratinocyte, inflammatory cell, 세포외기질사이의소통과상호작용을포함하는복잡한과정 피부노화원인 내인성요인 : Aging : 피부의노화는 20 대중반이후부터시작되고, 노화가진행되면서 elastin 과 collagen 의감소로피부는 더얇아지게되고, 탄력을잃음 외인성요인 : Stimulation (1) 자외선 : 주름을더욱깊이패이게하고, 피부를거칠게하고많은색소침착 (2) 건조 : 가을과겨울철의건조한바람과차가운기후의영향으로피부에서유분과땀의분비가줄어들어건조한피부상태가됨. 건조한피부는피부노화현상이가속돼, 피부가거칠어지거나잔주름이생김

4 블랙피테라 ( 흑효모배양액 ) 란? 건강한피부 블랙피테라 (blackpitera) 는섬유아세포의수와기능을촉진시키는흑효모배양액이건강한피부를유지 향상시킨다. 흑효모배양액은섬유아세포의증식, 이동등에유효한효과를나타내는섬유아세포기능촉진물질섬유아세포는 TGF (transforming growth factor)-β 라는성장인자를분비하여세포외기질 ( 콜라겐, 엘라스틴, 프로테오글리칸 ) 의구성과침착에영향을줌섬유아세포수의증가는피부구성에필수적인콜라겐의양을증가시킬수있는기반진피세포기능감소가개선, 건조하고거친피부개선, 손상된피부와주름이발생한피부의개선효과

5 흑효모배양액이란? ABPⅡ 특허균주 Aureobasidium pullulans SM-2001 발효 흑효모 (A. pullulans ) 균주발효를통해얻어지는수용성의복합다당체 흑효모배양액 흑효모배양액은 1,3/-1,6-Glucan중심의다당과유기산 ( 인산, 사과산 ), 비타민을포함하는천연생리활성성분의복합체이다. 흑효모배양액은섬유아세포수의증가뿐만아니라노화및자극받은피부로이동을활성화시켜피부재생을촉진한다. 흑효모배양액은피부의보습력을증가시키고탄력성을유지 향상시킨다. 흑효모배양액은알레르기성피부염 ( 아토피 ) 및소양증을완화 개선시켜피부의깨끗함을유지해준다. 이물질제거정제가공블랙피테라

6 흑효모배양액적용세포실험

7 Cell proliferation (OD) 피부세포 ( 케라틴세포 ) 증식효과 control 0.02 mg/ml glucan 0.05 mg/ml glucan 1 days 2 days 3 days 4 days 5 days Incubation day 흑효모배양액의 HaCa T 세포주증식에대한효과. 일반세포는배양상태에서 2 일째에가장높은증식을보이고그이후는차츰사멸해간다. 그러나흑효모배양액 첨가시 3 일째까지최고의증식을보이고있다.

x10^6 섬유아세포증식효과 세포주 : 인간태아표피섬유아세포주 측정 : 광학밀도와세포수 l 정량 : MTT assay 시료처리후배양 : 24시간, 48시간흑효모배양액첨가량의증가에 6.0 5.0 4.0 Number of fibroblast proliferation * 24hours 48hours 따라섬유아세포의수가용량의존적으로증가함 3.0 2.

8 x10^6 섬유아세포증식효과 세포주 : 인간태아표피섬유아세포주 측정 : 광학밀도와세포수 l 정량 : MTT assay 시료처리후배양 : 24시간, 48시간흑효모배양액첨가량의증가에 Number of fibroblast proliferation * 24hours 48hours 따라섬유아세포의수가용량의존적으로증가함 Oncostatin 10ng/ml; 다면발현성사이토카인 콜라겐과글리코사민글리칸의생성활성물질 Control 흑효모배양액 ABPⅡ (mg/kg) (mg/kg) Oncostatin (ng/ml) n=10. * P<0.05, p<0.01 compared to that of vehicle control by MW test

0 Number of fibroblast proliferation w ith TGF-beta1 100 10 1 0.

9 x10^6 TGF-ß1 처리세포실험에서섬유아세포증식실험 세포유래 : 인간태아표피섬유아세포주 투여량 : 100, 10, 1, 0.1, 0.01 mg/ml 측정모델 : fibroblast-populated collagen lattice model Number of fibroblast proliferation w ith TGF-beta Control TGF-ß1 ABPⅡ (mg/kg) 흑효모배양액 (mg/kg) 24hours 48hours # 섬유아세포억제싸이토카인 TGF-B1 처리시에 흑효모배양액첨가시용량의존적으로섬유아세 포의증식이유의하게증가하였다 n=10. * P<0.05, p<0.01 compared to that of vehicle control by MW test. # P<0.05, P<0.01 compared to that of TGF-b1-treated group.

10 TGF-ß1 처리세포실험에서섬유아세포유주실험 세포유래 : 인간태아표피섬유아세포주 투여량 : 100, 10, 1, 0.1, 0.01 mg/ml 측정모델 : fibroblast-populated collagen lattice model Migrated cell numbers * Control TGF-ß1 흑효모 ABPⅡ 배양액 (mg/kg) (mg/kg) 섬유아세포억제사이토카인 TGF-B1 처리시에 흑효모배양액첨가시섬유아세포의이동이용량 의존적으로유의하게증가하였다 n=10. * P<0.05, p<0.01 compared to that of vehicle control by MW test. # P<0.05, P<0.01 compared to that of TGF-b1-treated group.

11 흑효모배양액적용동물실험

12 동물실험배경 알러지성피부질환 아토피피부염, 습진, 아토피습진으로알려져있음 분류 : 두드러기, 접촉성피부염, 아토피성피부염 두드러기 특징 : 부종이돌연발생하여심한가려움증수반 원인 : 음식물 > 약물 > 세균 > 꽃가루, 모기 접촉성피부염 특징 : 어떤물질과접촉하여급성으로발생되며홍반성구진, 수포, 가려움증을동반 원인 : 햇볕, 머리염색약, 옻, 화학물질, 세균 아토피성피부염 특징 : 아토피체질인사람에게생기는습진모양의병변, 소아기습진의 70-80%, 만성적이고가려움증동반 보통의습진이나피부염과는달리특이한증세와경과를나타낸다. 피부의피로도가심각한실험동물모델 누드마우스에서의피부재생 면역이떨어진피부는각종피부염이유발되고피부재생이늦어진다. 피부활성 재생 면역에문제가있는누드마우스는이러한문제를해결하기위한좋은실험모델이다 당뇨마우스에서의피부재생 당뇨병의합병증중피부재생이늦어 2차적인감염을일으키는것이문제인데, 이러한피부활성이떨어진마우스의피부활성 / 재생력회복을알아보기위한좋은실험모델이다

13 (mm) DNFB 로유발된부종에서흑효모배양액적용시의부종완화효과 - 실험동물 : ICR mouse - 유발물질 : 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) 아토피피부염유발물질 - 투여용량 : ABPⅡ 320, 160, 80mg/kg - 투여경로및빈도 : 단회경구투여 DEXA 는 dexamethasone 의약어 [ 부신피질호르몬 (Adrenal Corticosteroid hormone) 으로항염증약 ] ear swelling paw swelling * DNFB control DEXA MC-5 ABPⅡ 흑효모배양액 320 * 피부염군비하여 부종이감소하였다 * MC-5(milk ceramide) 는雪印乳業 (Japan) 에서개발한우유유래지질로서피부보습효과가뛰어난물질이다. ( 日本畜産學會第 108 回大會 ) N=5, (mean±sd), DNFB, 2,4-dinitrofluorobenzene; DEXA, dexamethasone; MC-5, milk ceramide 400mg/kg; Poly320, blackpitera 320mg/kg PO administration. * p<0.01 and p<0.05 compared to that of vehicle control by MW test.

14 DNFB 로유발된소양증에서흑효모배양액적용시소양증완화효과 - 실험동물 : ICR mouse - 유발물질 : 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) - 투여용량 : 흑효모배양액 320, 160, 80mg/kg - 투여경로및빈도 : 단회경구투여 피부염군에비하여 소양증완화효과가 유의적으로나타났다 Scratch behavior control DNFB DEXA MC-5(mg/kg) 흑효모 ABPⅡ 배양액 (mg/kg) (mg/kg) N=5, (mean±sd), DNFB, 2,4-dinitrofluorobenzene; DEXA, dexamethasone; MC-5, milk ceramide400mg/kg; Poly320, 160, 80, blackpitera 320mg/kg, 160mg/kg, 80mg/kg PO administration. * p<0.01 and p<0.05 compared to that of vehicle control by MW test.

15 (N/20min) (N/20min) 염증인자로유발된소양증완화효과 실험동물 : ddy mouse 실험물질 : CMC, DEXA (1, 0.5, 0.1%), GLU (2, 1, 0.5, 0.2, 0.1%), AtopamTM 적용용량 : 1g/kg/day, 1일 1회 5일간 적용부위 : 등부위국소적용 *Atopalm 은세라마이드 (ceramide) 와 피토스테롤 (phytosterol) 로구성된 아토피예방용화장품 PAT scrathcing behavior PA scratching behavior # # % 0.5% 0.10% 2% 1% 0.50% 0.20% 0.10% sham control DEXA ABPII ATOPAM 흑효모배양액 0 1% 0.5% 0.10% 2% 1% 0.50% 0.20% 0.10% 흑효모배양액 sham control DEXA ABPII ATOPAM 염증시 Mast cell 에서분비되는물질인 platelet activating factor, proteinase 에의한 소양증을흑효모배양액의적용으로효과적으로감소시킴

micrometer (epidemic to dermis) increase percentage DNFB 로유발된조직학적변성에서흑효모배양액적용군의조직변성완화효과 Ear swelling 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 DNFB control DEXA MC-5 ABPⅡ 320 흑효모배양액 Thicknesses of anterior

16 micrometer (epidemic to dermis) increase percentage DNFB 로유발된조직학적변성에서흑효모배양액적용군의조직변성완화효과 Ear swelling DNFB control DEXA MC-5 ABPⅡ 320 흑효모배양액 Thicknesses of anterior induced ear skin * * DNFB control DEXA MC-5 ABPⅡ 320 흑효모배양액 Histopathological observation of ear in the DNFB control (A), Dexamethasone (B), MC-5; 400mg/kg (C), blackpitera 320mg/kg(D), 160mg/kg (E), 80mg/kg (F) treated group. CA, ear cartilage. DNFB control 군에비하여흑효모배양액 적용군에서부종의정도가확연히감소되었다.

누드마우스에서피부재생실험 160 250 140 120 200 동물종 : 유전적면역저하 nu/nu mice [NUDE MOUSE]

5% solution 투여기간및방법 : 1 일 2 회 12 일동안국소적피부도포 100 80 60 40 150 100 50 PMNs

of reepithelialization 20 0 10 50 100 100 Control ABPⅡ (mg/kg) MADE(mg/kg)

17 누드마우스에서피부재생실험 동물종 : 유전적면역저하 nu/nu mice [NUDE MOUSE] 투여량 : 흑효모배양액 2.5% solution 투여기간및방법 : 1 일 2 회 12 일동안국소적피부도포 PMNs macrophages lymphocytes fibroblast/fibocytes neo-microblood vessels rate of reepithelialization Control ABPⅡ (mg/kg) MADE(mg/kg) 흑효모배양액 0 대조군에비하여 ABPⅡ 적용군에서용량의존적으로유의한혈관신생, 재상피화, 진피의수복이관찰되었다. A; 대조군, c; 흑효모배양액 10mg/kg, e; polyure 50mg/kg, g; polyure 100mg/kg, I; 마데카솔

당뇨마우스에서의피부재생실험 140 180 120 160 140 동물종 : 유전적당뇨유발 C57BL/KsJ-db/db mice 투여량 :

5% solution 100 80 60 120 100 80 PMNs macrophages lymphocytes

1 일 2 회 20 일간국소적피부도포 40 60 40 20 20 0 10 50 100 100 흑효모배양액 Control ABPⅡ

18 당뇨마우스에서의피부재생실험 동물종 : 유전적당뇨유발 C57BL/KsJ-db/db mice 투여량 : 흑효모배양액 2.5% solution PMNs macrophages lymphocytes fibroblast/fibrocytes neo-microblood vessels reepithelialization 투여기간및방법 : 1 일 2 회 20 일간국소적피부도포 흑효모배양액 Control ABPⅡ (mg/kg) MADE(mg/kg) 0 대조군에비하여 ABPⅡ 적용군에서용량의존적으로유의한혈관신생, 재상피화, 진피의수복이관찰되었다. A; 대조군, c; 흑효모배양액 10mg/kg, e; blackpitera 50mg/kg, g; blackpitera 100mg/kg, I; 마데카솔

19 흑효모배양액안전성시험 1. 시험제목 : 흑효모배양액분말의랫드를이용한 4 주반복경구투여독성시험 (GLP) 2. 시험개요 (1) 시험시료 : 흑효모배양액분말 (2) 시험목적 : 시료물질을암수 6주령 SD 랫드를이용하여 4주간반복투여하여나타나는독성반응과그안전성을평가하기위한시험임. (3) 시험기관 : ( 주 ) 바이오톡스텍 < 시험번호 : B07319> (4) 시험기준 : 의약품등의독성시험기준 ( 식약청고시제 호 ) 준수 3. 시험결과및결론 부검결과암수시험물질투여군모두에서특이한소견은관찰되지않았음. < 결론 > 흑효모배양액분말에대한 4 주경구반복투여독성시험결과시험물질에의한영향이인정되지않아, 본시험에서의무독성량은암수모두 1,000mg/kg 이상으로사료된다.

20 제품규격 제품규격 Specification 시험항목규격비고 1. 성상및물성 미황색의액상으로약한특이취를가지고이미, 이물이없어야함 2. 주요성분 흑효모배양액 100%, ( 베타 -1-3,1-6 글루칸 1%) 3. ph 점도 (30 ) 총생균수 100CFU/ml 이하 6. 대장균군음성 7. 중금속 ( 납 ) 10ppm 이하 8. 포장 20kg

21 흑효모배양액관련특허 특허 Title Kor patent No. applicant Composition containing water-soluble acidic beta-glucan for prevention and treatment of inflammation Pharmaceutical composition for anti-cancer and immunomodulating activity containing ß-glucan Pharmaceutical composition for treatment of wound and dermatitis comprising glucan as active ingredient 제 호 제 호 제 호 글루칸 글루칸 글루칸 논문 Title Author Year Journal Single oral dose toxicity studies of polycan, ß-glucan originated from Aureobasidium in mice Single subcutaneous dose toxicity of polycan, a ß-glucan originated from Aureobasidium in mice Effect of exopolymers from Aureobasidium pullulans on formalininduced chronic paw inflammation in mice Local irritation test of 3 types of ß -glucan after subcutaneous injection in rats Effects of ß-glucan from Aureobasidium pullulans on acute inflammation in mice Micronucleus test of polycan, ß-glucan originated from Aureobasidium in bone marrow cells of male ICR mice 이형식외 8명 2005 이재현외 8명 2005 김형동외 9명 2006 이형식외 8명 2006 김형동외 9명 2007 이형식외 8명 2008 J Toxicol Pub Health 21(4): Lab Anim Res 21(4): J Microbiol Biotechnol. 16(12): Lab Anim Res 22(4): Arch Pharm Res 30(3): Toxicological Research 24(1): 11-15

22 김수범해외영업부 / 이사 M : E : seveneh777@naver.com 주식회사아리바이오 Tel / Fax

Jksvs019(8-15).hwp

Jksvs019(8-15).hwp Grade I Grade II Grade III 12 대한혈관외과학회지 : 제 20 권 제 1 호 2004 Control Group A Group B Fig. 4. Microscopic findings of vein wall in control, group A and group B on the day of 7 after venous occlusion. The